Mempercepat penelitian dunia.

Transplantasi sel induk: Penghalang paru-

paru
Marc Pelletier

Ahli Bedah Toraks dan Kardiovaskular

Mengutip tulisan ini Diunduh dari Akademi.ed a

r
a
Dapatkan kutipan dalam gaya MLA APA atau Chicago
s b

Makalah terkait Unduh PDF Pac 

k dari makalah terkait terbaik

r..
Bagian Diterbitkan adalah Hambatan Utama untuk Pengiriman Garam Induk Intravena: Ada Diterbitkan
.
Fernando Jimenez

Terapi garam induk mesenkimal intravena untuk cedera Otak d

traumatis
a
Fernando Jimenez n

MSCs: Rute Pengiriman dan Engraftment, Strategi Penargetan Sel, dan Modulatio nKekebalan Tubuh
Thomas Kean
Transplantasi Sel Induk: Penghalang Paru-paru
S. Schrepfer, T. Deuse, H. Reichenspurner, M.P. Fischbein, R.C. Robbins, dan M.P. Pelletier

ABSTRAK
Latar. Sel induk mesenkimal (MSCs) menunjukkan kapasitas diferensiasi sepanjang garis
keturunan mesenkimal dan memiliki potensi untuk membantu regenerasi jaringan. Oleh
karena itu strategi transplantasi MSC saat ini sedang dinilai setelah cedera pada berbagai
organ. Namun, migrasi MSC potensial ke organ-organ ini setelah injeksi MSC intravena (IV)
terus terhambat oleh sel yang terperangkap di dalam paru-paru.
Metode. MSCs mouse diisolasi, dimurnikan, terinfeksi dengan kunang-kunang luciferase, dan
diberi label dengan CSFE. Ukuran mereka dinilai secara in vitro. Untuk memperkirakan
diameter kapiler paru tikus, mikrosfer berlabel fluoresensi dengan ukuran berbeda disuntikkan
dengan atau tanpa pretreatment natrium nitroprusside (SN). Paru-paru dipanen setelah 30
detik dan jumlah rata-rata mikrosfer yang terperangkap per medan daya tinggi (HPF) dihitung.
Setelah injeksi IV suspensi MSC (dengan atau tanpa SN), distribusi dinamis mereka dipantau
oleh pencitraan luciferine in vivo serta oleh histopatologi.
Hasil. Diameter MSC suspended in vitro adalah 15 hingga 19 m. Sedangkan hampir tidak ada
mikrosfer 4 m yang dapat dideteksi di bagian paru-paru, jumlah mikrosfer 10 dan 15 m yang
terperangkap dapat menurun secara signifikan dengan injeksi SN sebelumnya dari 19,3 11,1
hingga 6,0 1,6 sel / HPF (P .004) dan dari 34,9 11,9 menjadi 25,6 8,1 sel / HPF (P.004) dan
dari 34,9 11,9 menjadi 25,6 8,1 sel / HPF ( P 0,028), masing-masing. Dalam hitungan detik
setelah injeksi MSC IV, sebagian besar sel ditemukan di paru-paru. Namun, perangkap sel
dalam mikrovaskuler paru berkurang secara signifikan dengan pra-treatment dengan SN.
Kesimpulan. Kami menunjukkan bahwa perangkap sel di paru-paru dapat dikurangi dengan
pretreatment IV SN, meningkatkan bagian MSC melalui kapiler paru-paru, dan berpotensi
memfasilitasi akses sel ke organ yang terluka.

B ONE MARROW-DERIVED stromal mesenchymal c-kit, sca-1, dan CD105. Sel yang dibuat untuk mengekspresikan sel induk kunang-
kunang (MSCs) memiliki potensi untuk membedakan luciferase di bawah kontrol promotor cytomegalovirus (CMV) oleh
9

sepanjang garis keturunan mesenkimal yang berbeda,
termasuk yang membentuk tulang, tulang rawan, tendon,
lemak, otot, dan sumsum stroma yang mendukung
hematopoiesis. 1-4 Potensi diferensiasi ini membuat kandidat
MSCs untuk strategi regeneratif berbasis sel untuk cedera
jaringan mesenchymal dan untuk gangguan hematopoietik
oleh aplikasi lokal dan sistemik. Tujuan dari penelitian ini adalah
untuk menyelidiki distribusi organ msc intravena (IV) suntikan
karena cara pengiriman ini dapat dengan mudah direproduksi
dalam pengaturan clinical.
BAHAN DAN METODE Isolasi dan
Pelabelan Sel
Transfecting sel Phoenix dengan 10 g DNA pRluc seperti yang
dijelaskan sebelumnya10 dan menginfeksi MSC tipe liar dengan
supernatants virus yang dihasilkan. Transfectants stabil diperkaya
oleh seleksi puromycin pada 0,5 g / mL, yang merupakan konsentrasi
yang ditentukan untuk
Dari Departemen Bedah Kardiotoraks, Fakultas Kedokteran
Universitas Stanford (S.S., M.P.F., R.C.M., M.P.P.), Stanford, California
dan Departemen Bedah Kardiovaskular, Pusat Jantung Universitas
Hamburg (H.R.), Hamburg, Jerman.
Didukung oleh hibah penelitian dari Deutsche
Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992/2-1) kepada S.S.
Alamat permintaan cetak ulang ke Sonja Schrepfer, MD,
Departemen Bedah Kardiotoraks, Fakultas Kedokteran Universitas
Stanford, 300 Pasteur Drive, Pusat Penelitian Kardiovaskular Falk,
MSCs diisolasi dari tulang panjang tikus Balb / c, dimurnikan, dan ditandai Stanford CA 94305-5407. E-mail: schrepfer@stanford.edu
sebagai CD34, CD45 CD90, CD44, CD14,
© 2007 oleh Elsevier Inc. Semua hak dilindungi undang-undang. 0041-1345/07/$-lihat materi depan
360 Park Avenue Selatan, New York, NY 10010-1710 doi:10.1016/j.transproceed.2006.12.019

Proses Transplantasi, 39, 573–576 (2007) 573

574SCHREPFER, DEUSE, REICHENSPURNER ET AL
membunuh 99% dari fase log, MSCs tipe liar. Sel diberi label lebih diperbaiki dalam larutan paraformaldehida 4%, tertanam dalam
lanjut dengan pewarna fluorescent hijau CSFE (CellTrace; Probe parafin, dan bagian serial dari seluruh organ (5 m) dilakukan. Setiap
Molekuler, Eugene Ore). Mikroskop konvensional digunakan untuk bagian kelima diwarnai dengan hematoksilin dan eosin (H&E) dan
mengukur ukuran sel MSC tersuspensi (pembesaran 150).
bagian serial diselidiki untuk sel CSFEpositive menggunakan
mikroskop konvensional (pembesaran 200). Jumlah sel untuk MSCs
Perangkap Mikrosfer di Mikrovaskuler Paru-paru
diserang dengan mengukur emisi fluoresensi per HPF (Leica
Untuk memperkirakan diameter rata-rata kapiler paru tikus, mikrosfer
Microscope, Jerman).
berlabel fluoresensi (Invitrogen, Ore) dengan ukuran berbeda (4, 10,
dan 15 m) disuntikkan ke dalam vena cava inferior (IVC) dengan atau
tanpa pretreatment natrium nitroprusside (SN) (n 4 per kelompok).
Analisis Data
Paru-paru dipanen setelah 30 detik dan jumlah rata-rata mikrosfer
yang terperangkap per medan daya tinggi (HPF) dihitung dengan Sebanyak 44 tikus Balb / c digunakan untuk penelitian ini.
morfometri komputer (Leica, Jerman; pembesaran 200). Perbandingan antara kelompok dengan atau tanpa pretreatment SN
dilakukan dengan menggunakan tes-t Siswa yang tidak
Injeksi Sel berpasangan pada ambang P .05 untuk menunjukkan
Confluent monolayers dari MSCs yang dimurnikan dan diberi label signifikansi statistik.
dicoba (Trypsin-EDTA; Gibco, Grand Island, NY) dan 0,5 106 MSC
dikeluarkan kembali dalam 250 L saline per hewan. Tikus menjalani
laparotomi perut garis tengah untuk injeksi IV MSC ke IVC HASIL
menggunakan jarum suntik Micro-Fine (30 G; BS Biosains, NJ). Pada Injeksi Sel
beberapa hewan, 25 L vasodilator SN (1 mg / mL; Schwarz Pharma,
Jerman) diencerkan dalam 200 L saline diberikan 5 menit sebelum
Setelah pemberian 0,5 106 MSC, kami melihat episode
infus sel dan diperiksa untuk efeknya pada kululasi MSC. tachypnea, apnea, dan perubahan hemodinamik karakteristik
emboli paru dalam kelompok tanpa pretreatment SN. Gejala-
In Vivo Imaging dan Histopatologi gejala ini dapat dikurangi secara nyata dengan pengobatan
vasodilator sebelumnya.
Untuk pencitraan bioluminescence, MSCs disuntikkan ke 10 tikus (5
dengan dan 5 tanpa pretretment SN) dan disribution organ in vivo
dipantau . Setelah injeksi intraperitoneal dari probe reporter D- In Vivo Imaging, Microsphere Trapping, dan
luciferin (375 mg / kg), hewan dicitrakan menggunakan sistem IVIS Histopathology
200 (Xenogen, California). Bioluminescence diukur dalam satuan
foton maksimum per detik per sentimeter persegi per steridian (p / s / Setelah infus MSC IV tanpa pretreatment, sinyal
bioluminiscensce yang terkait dengan MSCs terdeteksi
cm2 / sr). Selain itu, organ dipanen setelah 5 menit dan measured ex
vivo untuk memverifikasi hasil in vivo. terutama di paru-paru (Gambar 1A). Ex vivo penilaian
Untuk histopatologi, paru-paru dari 10 tikus (5 dengan dan 5 tanpa terisolasi
pretretment SN) dipanen 5 menit setelah injeksi MSC IV. Paru-paru
 Gambar 1. In vivo pencitraan IVIS 5 menit setelah infus IV LCC labeled (A), dan pencitraan ex vivo organ terisolasi (B).
PENGHALANG PARU-PARU DALAM TRANSPLANTASI SEL INDUK575
 Gambar 2. Ukuran mikrosfer yang digunakan dibandingkan dengan MSC yang ditangguhkan.
Organ dikonfirmasi sinyal paru-paru tinggi berbeda dengan
hanya melacak sinyal dari organ lain (Gambar 1B).
Diameter MSC yang dikeluarkan kembali segera sebelum
injeksi adalah 15 hingga 19 m. Gambar 2 menggambarkan
ukuran MSC dibandingkan dengan ukuran neon yellowgreen
yang digunakan 4 hingga 15 m microsheres.
Hampir tidak ada mikrosfer 4 m yang dapat dideteksi di
bagian paru-paru histologis, terlepas dari administrasi SN
(Gambar 3A). Namun, jumlah mikrosfer 10 dan 15 m yang
terperangkap per HPF dapat menurun secara signifikan
dengan injeksi SN sebelumnya dari 19,3 11,1 menjadi 6,0 1,6
(P .004) dan dari 34,9 11,9 menjadi 25,6 8,1 (P .028), masing-
masing (Gbr 3B dan C).
Bagian histologis jaringan paru-paru mengungkapkan MSC
fluorescent hijau terperangkap di kapiler paru-paru (Fig 3D).
Emisi fluoresensi dapat dikurangi dari 74,5 11,4 menjadi 32,3
unit 9,8 (P .001) dengan pengobatan vasodilator.
DISKUSI

Dengan menggunakan mikrosfer, kami menunjukkan bahwa

ukuran rata-rata MSC tersuspensi lebih besar dari ukuran
kapiler paru. Dengan demikian, karena ukurannya yang besar,
sejumlah besar MSC yang disuntikkan IV terperangkap di
dalam kapiler paru, menyebabkan perubahan paru dan
hemodinamik, dan mencegah akses yang dimaksudkan ke
organs lain. Karena MSCs secara alami terletak di dalam
sumsum tulang dan hanya sesekali dibebaskan ke dalam
sirkulasi, ukurannya biasanya bukan penghalang untuk peran
fisiologis mereka. Namun, strategi untuk mengurangi
ketidakcocokan antara MSCs dan diameter ambang batas
diperlukan ketika infus IV adalah rute pengiriman MSC untuk
terapi berbasis sel. Kami menunjukkan bahwa, ketika SN
digunakan, MSC berlabel memiliki kesempatan yang lebih baik
untuk lewat meskipun pembuluh darah paru-paru dan gejala
emboli paru berkurang. Oleh karena itu kami percaya bahwa
injeksi IV MSCs

Gambar 3. Bagian paru-paru hewan yang memiliki 4 m (A), 10 m (B), atau 15 m microspheses (C), atau 0,5 106 MSC disuntikkan ke IVC
dengan atau tanpa pretreatment SN (pembesaran asli, 200).
menampilkan prosedur yang aman hanya bila dikombinasikan
dengan infus SN sebelumnya.
PENGAKUAN
S.S. dan T.D. sama-sama berkontribusi pada pekerjaan ini.
REFERENSI
1. Bruder SP, Jaiswal N, Haynesworth SE: Growth kinetics,
self-renewal, dan potensi osteogenic dari sel induk mesenkimal
manusia yang dimurnikan selama subcultivation yang luas dan
setelah cryopreservation. Biochem Sel J 64:278, 1997
2. Johnstone B, Hering TH, Goldberg VM, et al: In
vitrochondrogenesis sel progenitor mesenchymal yang diturunkan
sumsum tulang. Exp Cell Res 238:265, 1998
3. Muda RG, Butler DL, Weber W, et al: Penggunaan sel
mesenchymalstem dalam matriks kolagen untuk perbaikan tendon
Achilles. J Orthop Res 16:406, 1998
4. Pittenger MF, Mackay AM, Beck SC, dkk: Potensi
multilineage dari sel induk mesenkimal manusia dewasa. Sains
248:143, 1999
5. Dexter TM, Allen TD, Lajtha LG: Kondisi mengendalikan
produksi sel induk hemopoietic secara in vitro. J Cell Physiol
91:335, 1977
6. Gordon MY, Clarke D, Atkinson J, et al: Sel
Hemopoieticprogenitor yang mengikat lingkungan mikro stroma
secara in vitro. Exp Hematol 18:837, 1990
576SCHREPFER, DEUSE, REICHENSPURNER ET AL
7. Haynesworth SE, Baber MA, Caplan AI: Sitokin ekspresi
oleh sel progenitor mesenchymal yang diturunkan sumsum manusia
secara in vitro: efek deksametason dan IL-1 alpha. J Cell Physiol
166:585, 1996
8. Weimar IS, Miranda N, Muller EJ, et al: Faktor
growthfactor / scatter hepatosit (HGF / SF) diproduksi oleh sel stroma
sumsum tulang manusia dan mempromosikan proliferasi, adhesi dan
kelangsungan hidup sel progenitor hematopoietik manusia (CD34).
Exp Hematol 26:885, 1998
9. Karimi M, Cao TM, Baker JA, dkk: Membungkam
HumnNKG2D, DAP10 dan DAP12 mengurangi sitotoksisitas sel T CD8
aktif dan sel NK. J Immunol 175:7819, 2005
10. Pear W, Scott M, Nolan GP: Dalam: Robbins, P (ed):
Metode pengobatan inmolekul: Protokol terapi gen, Totowa, NJ:
Humana Press, hlm 41
11. Wu JC, Chen IY, Sundaresan G, et al: Pencitraan molekuler
transplantasi sel jantung pada hewan hidup menggunakan
bioluminescence optik dan tomografi emisi positron. Sirkulasi
108:1302,
2003