BIOTEK

NOLOGI
Produksi Mesenchymal Stem Cell
(MSC) dari Sumsum Tulang
Belakang Mencit
KELOMPOK 7
FADILLAH AZZAHRA(1930106013)
GUSMILA SANTI(1930106017)

DOSEN PEMBIMBING:
AIDHYA IRHASH
PUTRA,S.Si,MP
Isolasi MSC dari mencit dapat diperoleh dari tulang tibia dan femu
r. Metode isolasi MSC dari sumsum tulang hewan model seperti me
ncit sangat beragam. Pengembangan metode isolasi MSC dimodifik
asi sesuai dengan fasilitas yang dimiliki oleh laboratorium. Metode
isolasi MSC dari sumsum tulang tibia dan femur mencit dapat dilak
ukan dengan metode flushing dan sentrifugasi atau penggabungan d
ari kedua metode tersebut dan metode eksplan dari potongan tulan
g. Namun beberapa metode tersebut memiliki kekurangan dan kele
bihan masing-masing,
A.Mesenchymal stem cell (MSC) atau sel punca mesenkim
Merupakan sel punca dewasa yang bersifat multipoten. Kemampuan MSC b
erdiferensiasi menjadi berbagai tipe sel membuka peluang dalam pemanfaata
nnya sebagai sel terapi. MSC dapat diperoleh dari beberapa sumber seperti d
ari darah tepi, darah plasenta, gel warthon, jaringan lemak, pulpa, dan sumsu
m tulang. Mesenchymal stem cell (MSC) dapat diperoleh dari sumsum tulan
g hewan model khususnya mencit dalam jumlah yang sangat terbatas, sehing
ga penggunaan metode produksi MSC secara in vitro yang tepat perlu dilaku
kan. Produksi MSC meliputi proses isolasi, kultur atau ekpansi sel secara in
vitro dan melakukan karakterisasi terhadap pontensi dari MSC.
B. Isolasi dan Kultur Sumsum tulang mencit dengan flushing

Metode flushing merupakan metode konvensional yang cukup mudah d

an semua sumsum tulang di dalam tulang mencit dapat diperoleh, sehi
ngga MSC bisa didapat secara maksimal. Hal yang perlu diperhatikan a
dalah meminimalisasi kontaminasi dengan memastikan keluarnya medi
um dari arah jarum saat melakukan flushing. Metode lain yang dapat di
lakukan untuk mengeluarkan susmsum tulang mencit adalah dengan m
eretakkan tulang tibia atau femur kemudian menanam fragmen tulang t
ersebut dan metode sentrifugasi.
HASIL FLUSHING TULANG MENCIT

Hasil flushing tulang tibia dan femur

ditampung dalam flask 25cm2
dengan tutup berfilter kemudian
dikultur dalam inkubator dengan
aliran 5% CO2, suhu 370C dengan
menggunakan medium kultur.
C. Diferensiasi MSC dari sumsum tulang mencit menjadi osteosit secara in
vitro

Penanaman MSC dilakukan di 4- well plate dengan jumlah sel 3x10 4 per s
umur. Hari ke 4 kultur setelah mencapai konfulensi 100%, MSC dikultur d
engan medium diferensiasi osteosit (Gibco, Stempro A10069) dan medium
diferensiasi lemak (Gibco) selama 10-14 hari. Selanjutnya dilakukan pew
arnaan menggunakan Alizarin untuk mengetahui kalifikasi pada sel-sel ost
eosit dan droplet lemak.
D.Pewarnaan MSC pasca diferensiasi

Fiksasi dilakukan dengan menggunakan 4% paraformaldehide (S

igma, P6148) selama 30 menit. Setelah dilakukan fiksasi, pewarn
aan dengan Alizarin Red S (Sigma, A5533) dan Oil Red O (Sigm
a) selama 5 menit. Pengamatan dilakukan secara mikroskopis den
gan inverted mikroskop.
TERIMA KASIH