JURNAL PRAKTIKUM KIMIA ANALISIS

KROMATOGRAFI

Disusun Oleh :

Nama : Salsabila Amania Ramadhani

NIM : 201910401060
Hari/Tanggal Praktikum : Selasa/27 April 2021
Asisten : Muhammad Rizalluddin

PROGRAM STUDI S1 TEKNIK KIMIA

JURUSAN TEKNIK MESIN
FAKULTAS TEKNIK
UNIVERSITAS JEMBER
 BAB I. PENDAHULUAN

1.1 Tujuan
Mempelajari metode pemisahan menggunakan Kromatografi Kertas dan Lapis Tipis
Penetapan nilai Rf

1.1 Dasar Teori

1.2.1 Material Safety Data Sheet (MSDS)
a. Asam amino standar
Asam amino standar yang sering disebut dengan Glycine mempunyai nama
lain Aminoethanoic acid, Aminoaceatic acid, glucocoll. Glycine mempunyai
rumus molekul C2H2NO2 dengan berat 75.07 g/mol. Glycine memiliki bentuk
padat, berwarna putih, tidak memiliki bau, dan memiliki pH 5,9 – 6,4 pada 50 g/l
20℃ . Densitas dari Glycine bernilai 1,61 g/cm 3 pada suhu 20℃ dan tekanan
uapnya 0,0000171 Pa.
Pertolongan pertama yang dapat dilakukan apabila Glycine terhirup adalah
hidup udara segar, jika nafas berhenti beri nafas buatan melalui mulut ke mulut.
Jika terjadi kontak kulit, basuhlah menggunakan air yang mengalir. Jika terjadi
kontak mata, segera bilas menggunakan air, lepas lensa kontak, dan hubungi
dokter. Apabila tertelan, berilah minum air putih (jangan lebih dari dua gelas) dan
segera hubungi dokter (Smartlab, 2019)

b. Asam asetat
Asam asetat dengan rumus molekul CH3COOH dengan berat 60.05 g/mol.
Asam asetat berbentuk cair, tidak berwarna, berbau menyengat seperti cuka, dan
memiliki pH 2,5 pada 50 g/l 20℃ . Asam asetat memiliki titik lebur 17℃ , titik
didih atau rentang didih 116-118℃ pada 1.1013 hPa, titik nyala 39℃ , dan
tekakan uap 15,4 hPa pada 20℃ . Asam asetat memiliki viskositas bernilai 1,22
mPa.s pada 20℃ dan densitas 1,05 g/cm3 pada 20℃ (Merck, 2018)

c. Aquadest
Aquadest dengan rumus molekul H2O memiliki berat 18.02 g/mol. Aquadest
berbentuk cair, tidak berwarna, tidak memiliki bau, dan memiliki pH yang netral
pada 20℃ . Titik lebur Aquadest 0℃ , titik didih atau rentang didihnya 100℃
pada 1.1013 hPa, serta tekanan uap 23 hPa pada 20℃ . Aquadest memiliki
densitas 1,00 g/cm3 pada 20℃ dan viskositas 0,952 mPa.s pada 20℃ . Aquadest
tidak memerlukan tindakan pertolongan pertama secara khusus (Smartlab, 2017)

d. Butil alkohol
Butil alkohol memiliki rumus molekul CH 3(CH2)3OH mempunyai berat
molekul 74.12 g/mol. Butil alkohol berbentuk cair, tidak berwarna, mempunyai
pH 7, serta berbau etanol. Titik lebur butil alkohol -89℃ , titik didih atau rentang
didihnya 116-118℃ , titik nyala 34℃ , dan tekanan uap 6,7 hPa. Densitas dari
butil alkohol bernilai 0,81 g/cm3.
 Pertolongan pertama yang dapat dilakukan apabila Butil alkohol terhirup
adalah segeralah menghirup udara segar. Jika terkena kulit, lepaskan segera semua
pakaian yang terkontaminasi atau terkena Butil alkohol, bilaslah kulit yang
terkena dengan air atau pada pancuran air mengalir. Jika terjadi kontak mata,
bilaslah menggunakan air yang banyak, lepaskan lensa kontak, dan segera
hubungi dokter mata. Apabila Butil alkohol tertelan lalu muntah, jagalah agar
aliran udara korban agar tetap bebas. Setelah muntah, mungkin akan terjadi
kerusakan paru-paru, maka segeralah memanggil dokter (Smartlab, 2017)

e. Ninhydrin
Ninhydrin mempunyai rumus molekul C9H6O4 dengan berat 178.15 g/mol.
Ninhydrin berbentuk padat, berwarna kuning muda, berbau khas yang lemah, dan
memiliki pH 4,5-5,0 pada 10 g/l 20℃ . Ninhydrin mempunyai titik lebur 250-258
℃.
Pemberi pertolongan pertama apabila terjadi kontak dengan Ninhydrin harus
melindungi dirinya sendiri. Pertolongan pertama yang dapat dilakukan apabila
Ninhydrin terhirup, segeralah menghirup udara segar, jika napas tiba-tiba
berhenti, segeralah memberikan napas buatan berupa mulut ke mulut serta berikan
masker oksigen jika memungkinkan, serta segera hubungi dokter. Jika terjadi
kontak kulit, bilaslah dengan air yang banyak. Jika terjadi kontak mata, segera
bilaslah dengan air dan lepaskan lensa kontak, serta segera hubungi dokter. Jika
tertelan, maka berilah air minum (dua gelas saja sudah cukup), serta cari anjuran
pengobatan. Hanya didalam kasus khusus atau tertentu, apabila pertolongan
pertama belum juga dilakukan selama satu jam, paksa untuk muntah namun hanya
apabila korban dalam keadaan tidak sadarkan diri, telan karbon aktif dan beri tahu
kepada dokter segera (Smartlab, 2019)

1.2.2 Tinjauan Pustaka

Seperti banyak penemuan besar lainnya, asal usul kromatografi sulit untuk dilihat.
Namun, sudah dipastikan bahwa penemuan populer jatuh kepada M. S. Tswett, Tswett
jelas memberikan bukti yang meyakinkan tentang kekuatan dan keserbagunaan metode ini,
dan sampai taraf tertentu berperan penting dalam memperkenalkannya ke dalam praktik
kimia umum. Kromatografi termasuk sebagai proses pemisahan berdasarkan distribusi
diferensial antara dua fase yang bercampur, salah satunya bergerak relatif terhadap yang
lain. Elemen gerakan dapat diberikan bukan oleh gerakan fase tetapi oleh gerakan dalam
fase, seperti di elektromigrasi. Kromatografi berdasarkan partisi diferensial antara dua
pelarut tak bercampur dijelaskan oleh A. J. P. Martin dan R. L. M. Synge pada tahun 1941.
Dalam hal ini, air difiksasi dalam silika gel, dibuat dalam bentuk bubuk, dan fase geraknya
adalah kloroform atau pelarut lainnya yang tidak bercampur. Kromatografi dengan
pemisahan di atas kertas (PC) serta kromatografi dengan lapisan tipis (TLC) adalah teknik
kromatografi yang paling mudah dilakukan dan memerlukan peralatan sederhana. Mereka
siap memberikan informasi kualitatif dan, dengan perhatian yang cermat terhadap detail,
seringkali mungkin untuk mendapatkan data kuantitatif. Dalam bentuk teknik yang paling
sederhana, setetes larutan yang mengandung campuran senyawa yang akan dipisahkan
ditempatkan di dekat salah satu ujung kertas atau lapisan tipis dan dibiarkan mengering.
Strip tersebut kemudian ditempatkan sehingga ujung tempat aplikasi mencelupkan ke
dalam cairan (biasanya campuran pelarut). Titik kering tidak boleh direndam karena akan
larut dalam pelarut dan hilang. Sebagai pelarut yang berjalan menuju ujung strip, campuran
uji dan dipisahkan menjadi berbagai komponen. Ketika pelarut mencapai ujung strip atau
waktu yang ditentukan tepat telah berlalu, lembaran dilepas. Akhirnya, di antara
perkembangan utama dalam kromatografi, hal tersebut disebut kromatografi fase gas. Fase
padat bisa berupa padat, atau lebih umum cairan tertahan pada semacam penyangga padat.
Pelopor yang efektif dalam penemuan ini adalah A. T. James dan A. J. P. Martin
meskipun eksperimen sebelumnya dilakukan oleh G. Hesse dan oleh S. Claesson yang
awalnya tertarik pada pemisahan asam lemak. Dengan sangat cepat, tentu saja, metode itu
diperluas untuk mencakup berbagai macam zat, dan saat ini kromatografi gas mungkin
digabungkan dengan spektrometri massa yang merupakan teknik standar di sebagian besar
laboratorium kimia. (Smith, Ivor & Seakins, J.W.T (Eds). 1976. Chromatographic and
Electrophoretic Techniques. Chicago : Year Book Medical Publishers, Inc)
Kromatografi lapis tipis (KLT) dapat dianggap sebagai bentuk kromatografi cair-
padat, kromatografi lapis tipis ini merupakan kromatografi dimana fase diam merupakan
lapisan tipis pada permukaan yang sesuai piring atau pelat. Fase gerak ditarik ke atas
permukaan oleh aksi kapiler. Kromatografi lapis tipis yang cair ini sangat mirip dalam hal
teori, stasioner, dan fase bergerak. Faktanya, pelat lapis tipis dapat digunakan secara
menguntungkan untuk mengembangkan kondisi yang optimal untuk pemisahan dengan
kromatografi cair kolom. Keuntungan mengikuti ini prosedur adalah kecepatan dan biaya
rendah dari eksperimen lapisan tipis eksplorasi. Peralatan KLT jauh lebih sederhana
daripada sistem HPLC dan jauh lebih murah untuk mengoperasikannya. Pada suatu waktu,
metode KLT banyak digunakan dalam industri farmasi untuk menentukan kemurnian
produk. Saat ini, teknik HPLC telah menggantikan banyak metode. KLT telah digunakan
secara luas di laboratorium klinis dan merupakan tulang punggung banyak studi biokimia
dan biologi. Ini juga merupakan penemuan penggunaan ekstensif di industri uji
laboratorium. Karena banyak area penerapan ini, KLT tetap menjadi teknik yang sangat
penting. Pemisahan lapisan tipis yang khas dilakukan pada pelat kaca yang dilapisi dengan
fase diam, yang terdiri dari lapisan tipis dan melekat dari partikel yang terbagi halus.
Partikelnya mirip dengan yang dijelaskan dalam pembahasan adsorpsi, partisi fase normal
dan fase terbalik, pertukaran ion, dan kromatografi kolom pengecualian ukuran. Fase
seluler juga mirip dengan yang digunakan dalam cairan berkinerja tinggi pada
kromatografi. Pemisahan dengan kromatografi kertas dilakukan dengan cara yang sama
seperti pada kromatografi kertas pelat lapis tipis. Kertas dibuat dari selulosa yang sangat
dimurnikan dengan kontrol ketat terhadap porositas dan ketebalan. Kertas semacam itu
mengandung cukup teradsorpsi air untuk membuat fase diam berair. Cairan lain dapat
dipindahkan air, bagaimanapun dengan memberikan jenis fase diam yang berbeda. Sebagai
contoh, kertas yang diolah dengan silikon atau minyak parafin memungkinkan
kromatografi kertas fase terbalik di mana fase gerak adalah pelarut polar. Juga tersedia
secara komersial kertas khusus yang mengandung adsorben atau resin penukar ion,
sehingga memungkinkan adsorpsi dan kromatografi kertas pertukaran ion. (A. Skoog,
Douglas, Holler, F. James & R. Crouch, Stanley. 2014. Fundamentals Of Analytical
Chemistry 9th. USA : Brooks/Cole Cengage Learning)
Fase diam pada kromatografi lapis tipis adalah berupa lapisan tipis yang berupa atau
terdiri dari bahan padat yang dilapiskan kepada permukaan penyangga datar yang
umumnya terbuat dari kaca, plat polimer , atau logam. Penyerap yang sering dipakai pada
kromatografi lapis tipis adalah silika, kieselgeur, alumina, dan selulosa. Sedangkan pada
kromatografi kertas, fase diamnya adalah kertas yang memiliki serap yang beragam
nilainya. (Gitter dkk., 1991).
Fase gerak pada kromatografi adalah medium angkut yang berupa atau terdiri dari
satu atau lebih (beberapa) pelarut, apabila memerlukan suatu sistem pelarut multi
komponen, maka hal tersebut harus berupa campuran yang paling sederhana dan terdiri
dari maksimum tiga komponen. (Stahl, 1985).
Identifikasi senyawa yang dipisahkan biasanya didasarkan pada reaksinya dengan
reagen lokasi yang sesuai, dan posisinya pada kromatogram. Pengukuran mendasar dalam
kromatografi adalah Rf. Apakah itu dari Rf? Rf yang didefinisikan sebagai berikut:
Jarak yang digerakkanoleh senyawa dari titik awal
Rf =
Jarak yang digerakkan oleh pelarut dari titik awal
Namun, untuk kenyamanan, banyak penulis menggunakan 100 X Rf sehingga Rf dapat
dinyatakan sebagai 54 dan bukan 0-54, sistem ini digunakan di seluruh buku. Oleh karena
itu, nilai ini merupakan konstanta fisik dengan zat yang bersangkutan, harus dapat
direproduksi. Namun, hal itu lumrah karena nilai R f yang dipublikasikan bervariasi, pada
tingkat yang lebih besar atau lebih kecil. Deskripsi seperti itu harus mencakup dimensi
alat, grade kertas atau sifat dan ketebalan media lapisan tipis, aliran pelarut naik atau turun
dan panjang aliran, volume yang digunakan dan komposisi pelarut yang bergerak di
sepanjang kromatogram, Cairan atau uap lainnya yang digabungkan untuk tujuan khusus,
waktu ekuilibrasi (jika ada)., suhu, serta sifat campuran yang akan dikromatografi dan
sebelumnya. (Smith, Ivor & Seakins, J.W.T (Eds). 1976. Chromatographic and
Electrophoretic Techniques. Chicago : Year Book Medical Publishers, Inc)
Faktor kapasitas k ' adalah perbandingan jumlah zat terlarut yang didistribusikan
antara benda bergerak dan fase diam, atau rasio waktu masing-masing zat menghabiskan
dalam dua fase :
t waktu retensi dalam fase stasioner
k '= s =
tm waktu retensi dalam fase gerak
Faktor kapasitas dan Rf terkait dengan persamaan :
1−R f
k '=
Rf
(Sherma, Joseph & Fried, Bernard (Eds). 1996. Handbook Of Thin-Layer
Chromatography. New York : Marcel Dekker, Inc)
 BAB II. METODOLOGI PERCOBAAN

2.1 Alat dan Bahan

2.1.1 Alat
1. Breaker glass dan penutup
2. Spray
3. Hair dryer
4. Pelat kromatogram
2.1.2 Bahan
1. Butil alkohol (CH3(CH2)3OH)–asam asetat (CH3COOH)–air (H2O) (80:20:20 v/v)
2. Asam amino standar (C2H2NO2)
3. Larutan ninhidrin 0,3% (dalam butil alkohol dengan 35 asam asetat glasial)
2.2 Cara kerja

1 μL larutan standar dan sampel.

Disuntikkan pada pelat kromatografi ± 1 cm

dari dasar. Tandai komposisinya.

Dicelupkan pada larutan pengembang.

Ditutup dan biarkan sampai mencapai

0,5-1cm dibawah tepi atas pelat.

Dikeringkan selama 15-20 menit.

Disemprotkan larutan pewarna.

Tunggu hingga kering.

Data Hasil Pengamatan

Noda terlihat.
 TUGAS PENDAHULUAN

1. Sebutkan fasa diam dan fasa gerak pada kromatografi cair, kromatografi gas, kromatografi
lapis tipis, dan kromatografi kertas!
2. Tuliskan contoh-contoh fasa diam yang sering digunakan pada kromatografi selain silika!

Jawab :
1. Kromatografi lapis tipis : fase gerak = eluen
fase diam = adsorben
Kromatografi kertas : fase gerak = campuran dari pelarut organik dan air
fase diam = lembaran kertas
Kromatografi gas : fase gerak = gas semacam hidrogen, nitrogen, atau argon
fase diam = padatan (kromatografi gas-padat) atau cairan (kromatografi
gas-cair)
Kromatografi cair : fase gerak = cairan (biasanya pelarut atau campuran biner sederhana
pelarut)
fase diam = cairan (yang harus larut dan tidak larut dalam cairan fasa
gerak)

2. Contoh fasa diam lainnya adalah alumunium oksida, selulosa, sephadex, kiesulguhr, dan
magnesium silikat.