MODUL PRAKTIKUM

HEMATOLOGI

PROGRAM STUDI TEKNOLOGI

LABORATORIUM MEDIK

INSTITUT KESEHATAN MEDISTRA LUBUK PAKAM

 VISI dan MISI

INSTITUT KESEHATAN MEDISTRA LUBUK PAKAM

Visi
Menjadi Institut yang unggul dan profesional dalam bidang kesehatan di
tingkat Nasional dan Asia tahun 2028.

Misi
1. Menyelenggarakan pendidikan dan pengajaran yang unggul, berkarakter,

dan kompeten yang adaptif terhadap perkembangan ilmu pengetahuan,

teknologi, seni dan globalisasi;

2. Menyelenggarakan penelitian yang inovatif, produktif dan responsif

terhadap ilmu pengetahuan, teknologi dan kebutuhan masyarakat;

3. Menyelenggarakan kegiatan pengabdian kepada masyarakat berlandaskan

nilai dan tanggung jawab sosial; dan

4. Menjalin kerjasama yang baik dengan stakeholder mulai dari pemerintah,

dunia usaha dan masyarakat sebagai pengguna lulusan.

 VISI dan MISI

FAKULTAS FARMASI

Visi
Menghasilkan lulusan yang unggul dan professional dalam mutu pendidikan di
bidang Farmasi Klinis dan Komunitas serta Mikrobiologi Molekuler Klinis yang
Mampu Bersaing di tingkat Nasional dan Asia Tahun 2022.

Misi
1) Menyelenggarakan proses belajar mengajar yang kondusif dengan sistem

yang mendukung pada FF sehingga pembelajaran tersebut menghasilkan

prodi yang dapat menghasilkan alumni berkarakter unggul, kompeten, dan

excellent service;

2) Menyelenggarakan proses praktik laboratorium yang kondusif dan handal

di berbagai fasilitas pelayanan kesehatan masyarakat;

3) Mengoptimalkan dan mengimplementasikan penelitian bidang Farmasi

Klinis dan Komunitas dan Mikrobiologi Molekuler Klinis dengan

menggunakan pendekatan riset dalam bidang Farmasi dan Teknologi

Laboratorium Medik;

4) Mengimplementasikan program pengabdian kepada masyarakat berbasis

riset untuk menyelesaikan berbagai permasalahan di bidang Farmasi dan

Teknologi Laboratorium Medik; dan

5) Mengembangkan kerjasama dengan institusi pendidikan, pelayanan,

organisasi, dan stakeholders baik dalam maupun luar negeri.

 KATA PENGANTAR

Puji syukur kami panjatkan kepada kehadirat Allah SWT, karena atas izin-

Nya Modul Praktikum dari Mata Kuliah hematologi ini dapat diselesaikan. Modul

ini disusun untuk menambah bahan bacaan mahasiswa dalam mengikuti

perkuliahan praktikum hematologi

Modul praktikum hematologi ini disusun untuk memenuhi kebutuhan

mahasiswa Program Studi Teknologi Laboratorium Medik Fakultas Farmasi

Institut Kesehatan Medistra Lubuk Pakam dalam menempuh matakuliah

praktikum hematologi Modul ini disusun dengan kualifikasi merangkum semua

materi teoritis.

Penyusun mengucapkan terima kasih kepada berbagai pihak yang tidak bisa

disebutkan satu per satu atas selesainya modul ini. Penyusun menyadari masih

banyak kekurangan dalam penyusunan modul ini. Oleh karena itu segala masukan

dari berbagai pihak sangat diharapkan guna penyempurnaan modul ini.

Lubuk Pakam, Juli 2020

 DAFTAR PUSTAKA

VISI dan MISI .................................................................................................................. 2

INSTITUT KESEHATAN MEDISTRA LUBUK PAKAM ........................................................... 2
VISI dan MISI .................................................................................................................. 3
FAKULTAS FARMASI ....................................................................................................... 3
KATA PENGANTAR.......................................................................................................... 4
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................................... 5
BAB 1 ................................................................................. Error! Bookmark not defined.
HEMATOLOGI ................................................................................................................. 8
Pengertian Hematologi............................................................................................... 8
Pengenalan Alat Praktikum Hematologi...................................................................... 8
BAB II ............................................................................................................................10
MENGANALISA KOMPONEN DARAH ..............................................................................12
Komponen-Komponen Darah ....................................................................................12
Trombosit .................................................................................................................12
Sitoplasma ................................................................................................................15
Lisosom .....................................................................................................................15
Faktor – Faktor Yang Mempengaruhi Jumlah Trombosit ............................................15
Faktor Yang Dapat Menurunkan Hasil Pemeriksaan Trombosit Berdasarkan Teknik
Pemeriksaannya : ......................................................................................................17
BAB III ...........................................................................................................................31
MENGANALISA KOMPONEN DARAH ..............................................................................32
A. Darah Lengkap (Whole Blood) Whole Blood atau Darah Lengkap ..........................32
B. Fasilitas penyimpanan dan Stabilitas darah lengkap...............................................34
BAB IV ................................................................................ Error! Bookmark not defined.
MENGIDENTIFIKASI PROSES TERBENTUKNYA DARAH ....................................................41
Eritropoiesis ..............................................................................................................41
Leukopoiesis .............................................................................................................42
Zat Untuk Pembentukan Darah .................................................................................42
BAB V ............................................................................................................................42
MENGIDENTIFIKASI PROSES TERBENTUKNYA DARAH ....................................................43
Hitung Retikulosit ......................................................................................................43
Metode Hitung Retikulosit.........................................................................................44
BAB VI ...........................................................................................................................50
PEMERIKSAAN DARAH ..................................................................................................51
Definisi Pemeriksaan Darah .......................................................................................51
Darah Vena ...............................................................................................................51
Langkah – Langkah Pada Prosedur Venipuncture .......................................................52
BAB VII ............................................................................... Error! Bookmark not defined.
PEMERIKSAAN DARAH ..................................................................................................54
Antikoagulan EDTA (Etylendiamine Tetraacetic Acid) .................................................54
Pemeriksaan Hitung Jumlah Trombosit......................................................................55
c. Pengukuran Jumlah Trombosit dengan Hematology Analyzer ................................57
BAB VIII .........................................................................................................................58
MENGIDENTIFIKASI HEMATOPOESIS .............................................................................59
Hematopoiesis ..........................................................................................................59
BAB IX ................................................................................ Error! Bookmark not defined.
PEMERIKSAAN HEMOGLOBIN ........................................................................................65
Definisi Hemoglobin ..................................................................................................65
Struktur Hemoglobin .................................................................................................66
Dampak Kekurangan Hemoglobin .............................................................................70
BAB X ................................................................................. Error! Bookmark not defined.
PEMERIKSAAN HEMOGLOBIN ........................................................................................71
Pemeriksaan Kadar Hemoglobin ................................................................................71
B. Pemeriksaan Kadar Hemoglobin Metode Sahli ......................................................71
BAB XI ................................................................................ Error! Bookmark not defined.
PEMERIKSAAN LEUKOSIT...............................................................................................75
Pengertian Leukosit...................................................................................................75
Jenis-Jenis Leukosit ...................................................................................................75
Hemopoisis Sel Darah Putih / Lekosit.........................................................................79
BAB XII ............................................................................... Error! Bookmark not defined.
PEMERIKSAAN LEUKOSIT...............................................................................................82
Pemeriksaan Hitung Jumlah Lekosit...........................................................................82
BAB XIII .............................................................................. Error! Bookmark not defined.
PEMERIKSAAN TROMBOSIT ...........................................................................................85
Trombosit .................................................................................................................85
BAB XIV .............................................................................. Error! Bookmark not defined.
PEMERIKSAAN ERITROSIT ..............................................................................................87
Eritrosit .....................................................................................................................87
Pemeriksaan Hitung Jumlah Eritrosit .........................................................................87
 BAB
HEMATOLOGI
I

A. Pengertian Hematologi

Cabang kedokteran internal, fisiologi, patologi, pekerjaan laboratorium klinis,

dan pediatri yang berkaitan dengan studi tentang darah, organ pembentuk darah,

dan penyakit darah. Hematologi meliputi studi tentang etiologi, diagnosis,

pengobatan, prognosis, dan pencegahan penyakit darah.

Pekerjaan laboratology yang masuk ke studi tentang darah sering dilakukan

oleh teknolog medis. Dokter ahli darah juga sangat sering melakukan studi lebih

lanjut dionkologi pengobatan medis kanker. Darah penyakit mempengaruhi

produksi darah dan komponen-komponennya, seperti sel-sel darah,

hemoglobin, protein darah, mekanisme koagulasi, dll.

B. Pengenalan Alat Praktikum Hematologi

1. Tujuan : Mengenal dan mengetahui fungsi dari peralatan yang digunakan

di laboratorium Hematologi

2. Gambar dan Fungsinya

 BAB
MENGANALISA KOMPONEN DARAH
II

A. Komponen-Komponen Darah

Darah merupakan jaringan yang terdiri dari dua komponen, plasma dan sel

darah. Plasma merupakan komponen intra seluler yang berbentuk cair dan

berjumlah sekitar 55 % dari volume darah, sedangkan sel darah merupakan

komponen padat yang terdapat didalam plasma dengan jumlah 45% dari volume

darah(Bani,2004).

Komponen padat atau sering disebut korpuskula ini terdiri dari: 1. Sel darah

merah atau eritrosit ( 99 % ) Eritrosit mengandung hemoglobin dan berperan

dalam mengedarkan oksigen. 2. Keping darah atau trombosit ( 0,6 - 1,0 % )

Trombosit bertanggung jawab dalam proses pembekuan darah 3. Sel darah putih

atau lekosit ( 0,2 % ) Lekosit berperan penting dalam sistem imun dan mempunyai

tugas untuk memusnahkan benda asing yang dianggap berbahaya.

Fungsi Darah Dalam sirkulasi darah berfungsi sebagai media transportasi,

pengaturan suhu dan memelihara keseimbangan cairan. Warna darah berasal dari

hemoglobin, protein pernapasan yang mengandung heme yang merupakan tempat

melekatnya oksigen

1. Trombosit

Trombosit adalah bagian dari beberapa sel-sel besar dalam sumsum tulang

belakang yang berbentuk cakram bulat, oval, bikonveks tidak berinti dan hidup

sekitar 10 hari. Jumlah trombosit antara 150.000 – 400.000 mililiter, sekitar 30 –

40 % terkonsentrasi dalam limpa dan sisinya bersirkulasi dalam aliran darah

perifer. Trombosit berperan penting dalam pembekuan darah. Trombosit berasal

dari fragmentasi sitoplasma megakariosit, suatu megakarioblas dalam sumsum

tulang.

Megakariosit matang ditandai proses replikasi endometotik dan makin

besarnya jumlah sitoplasma. Sehingga pada akhirnya sitoplasma menjadi granula

dan terjadi pelepasan trombosit. Setiap megakariosit mampu menghasilkan 3.000

- 4.000 sel trombosit. Waktu diferensiasi dari sel asal (stem cell) sampai

dihasilkan trombosit memerlukan waktu sekitar 10 hari. Umur trombosit pada

sirkulasi darah perifer 7 - 10 hari.

Fungsi Trombosit Trombosit Berperan penting dalam pembentukan

pembekuan darah. Trombosit dalam keadaan normal bersikulasi ke seluruh tubuh

melalui aliran darah. Namun dalam beberapa detik setelah kerusakan suatu

pembuluh, trombosit tertarik ke daerah tersebut sebagai respon terhadap kolagen

yang terpajan di lapisan sub endotel pembuluh. Trombosit melekat ke permukaan

yang rusak dan mengeluarkan beberapa zat (serotonin dan histamin) yang

menyebabkan terjadinya vasokontriksi pembuluh. Fungsi lain dari trombosit yaitu

untuk mengubah bentuk dan kualitas setelah berikatan dengan pembuluh yang

cedera.

Trombosit akan menjadi lengket dan menggumpal bersama membentuk

sumbat trombosit yang secara efektif akan menutupi daerah yang luka.

1. Sebagai sumbatan dalam proses hemostasis

2. Menghasilkan zat kimia tertentu yang menyebabkan vasokontriksi

pembuluh darah
 3. Mempertahankan integritas pembuluh darah (daya tahan kapiler, kontraksi

kapiler)

4. Sebagai fagositosis (pertahanan non spesifik)

5. Sebagai alat transport di substansi tertentu.

6. Melindungi dinding pembuluh darah bagian dalam.

7. Sebagai sumber pembentukan protrombin.

8. Pembekuan darah dan retraksi bekuan

Sifat Fisis Trombosit

1. Adhesi yaitu sifat trombosit yang mudah melekat pada permukaan asing.

2. Agregasi yaitu sifat trombosit yang saling melekat satu sama lain.

3. Aglutinasi yaitu sifat trombosit yang mudah menggumpal

4. Disentrigasi yaitu sifat trombosit yang mudah pecah / mati

Struktur Trombosit Struktur trombosit dibagi menjadi 3 komponen, yaitu :

(Membran trombosit Terbentuk dari lapisan fosfolipid dua lapis (bilayer) dengan

distribusi fosfollipid yang asimetris. Membran trombosit menggandung

glikoprotein yang berfungsi sebagai reseptor. Melalui reseptor tersebut, trombosit

berinteaksi dengan zat yang menyebabkan agregasi, zat inhibtor, faktor koagulasi

seperti fibrinogen, faktor von Willebrand (VWF) dan thrombin, serta dengan

dinding pembuluh darah dan dengan trombosit lain.

B. Sitoplasma

Sitoplasma dalam tombosit terdapat beberapa organel : mitokondria, cadangan

glikogen, serta granula penyimpanan : granula padat (dense bodies), granula dan

lisosom Isigranula : 2 kelompok a. Protein spesifik untuk trombosit : β-

trombogobulin (βTG), platelet faktor 4 (PF4) b. Potein yang berasal dari plasma,

misalnya fibrinogen, fibronektin dan factor V Isi granula padat: 1) Kandungan

kalsium tinggi 2) Serotonin 3) Adenosine difosfat (ADP) 4) Adenosine trifosfat

(ATP). ADP dalam granula padat lebih banyak dibandingkan dengan ATP (3 : 2).

C. Lisosom

Mengandung hidrolase asam : β-glukuronidase, katepsin, β-galaktosidase,

elasta dan kolagenase. Sekresi trombosit, lisosom lebih lambat melepaskan isinya

disbanding granula dan granula padat, dan diperlukan inhibitor yang lebih kuat

dan menginduksi penglepasan isi lisosom.

D. Faktor – Faktor Yang Mempengaruhi Jumlah Trombosit

Trombosit sequestrasi Sepertiga dari total trombosit secara fisiologis

didestruksi oleh limpa. Pada kondisi splenomegali, lebih dari 90% trombosit

terdestruksi oleh limpa, sehingga menyebabkan trombositopenia. Penyakit seperti

sirosis hepatis dengan hipertensi portal atau infiltrate tumor pada limpa dapat

menyebabkan destruksi trombosit oleh limpa secara signifikan. Meskipun nilai

trombosit dapat rendah, fungsi trombosit biasanya normal pada destruksi akibat

spenomegali kecuali kelainan hematologik atau penyakit keganansan

Gangguan produksi trombosit Kondisi ini terdapat pada leukemia, kelainan

hematologik lainnya, metastasis kanker, mielosupresi agen kemoterapi. Kondisi

lain juga dapat ditemukan pada penggunaan obat tertentu, terutama pada golongan

thiazide diuretic, ethanol, gold, dan obat golongan sulfa dapat secara selektif

menghambat produksi platelet.

Percepatan destruksi trombosit Percepatan destruksi trombosit adalah kasus

yang disebabkan oleh non imunologi atau imunologi. Penyebab non immunologi

seperti DIC, vaskulitis dan prostetik katup jantung. Penyebab immunologi

dihubungkan pada antibodi trombosit dari obat, infeksi, tranfusi trombosit

sebelumnya, atau auto antibodi seperti pada SLE, Immunologi Trombositopenia

Purpura (ITP), atau evans sindrom (ITP dan anemia hemolotik).

Pasien pada trombositopenia yang disebabkan oleh immunologi biasanya tidak

dijumpai splenomegali dan sumsum tulang yang normal dengan peningkatan

produksi megakariosit. Usia trombosit pada kelainan immunologi trombositopenia

lebih rendah dari 1 hari. Faktor penyebab trombositopenia adalah Alergi, Infeksi

virus, Penggunaan obat, seperti obat anti radang non-steroid (ibuprofen, aspirin,

indomethacin, phenyl butazone; tricyclic, anti depresan; anti histamin; phenol

thiazines), Gangguan kolagen, seperti lupus eriternatosus, Tranfusi darah dan

pembedahan, Keracunan darah, Penyakit hati, Perawatan radiasi untuk kanker,

Limpa yang membesar karena sebab apa saja, Uremia, Anemia, Leukemia.

Kemoterapi dan sinar X dapat menurunkan hitung trombosit. Faktor penyebab

trombositosis adalah Setelah pemberian epinefrin, Pemulihan sumsum tulang,

Kemoterapi sitotoksik (Pengobatan defisiensi vitamin B12 atau folat), Keganasan,

Defisiensi besi, Penyakit peradangan kronis (Penyakit kolagen vaskular, Penyakit

usus meradang), Infeksi kronis (Tuberkulosis, Osteomielitis), Pengeluaran darah

(termasuk pembedahan), Sindrom mieloproliferatif, Pasca splenektomi.

E. Faktor Yang Dapat Menurunkan Hasil Pemeriksaan Trombosit

Berdasarkan Teknik Pemeriksaannya :

1. Perbandingan volume darah dengan antikoagulan tidak sesuai dapat

menyebabkan kesalahan pada hasil :

a. Jika volume terlalu sedikit (1-1,5 mg Na2EDTA /ml darah untuk

Na2EDTA kering dan 10 ul/1ml darah untuk EDTA cair), sel-sel

eritrosit mengalami krenasi, sedangkan trombosit membesar dan

mengalami disintegrasi. Dapat diartikan jumlah trombosit akan

menurun.

b. Jika volume terlalu banyak ( 1-1,5 mg Na2EDTA / ml darah untuk

Na2EDTA kering dan 10 ul/1ml darah untuk EDTA cair) dapat

menyebabkan terbentuknya jendalan yang berakibat menurunnya

jumlah trombosit.

2. Pemeriksaan hitung jumlah trombosit yaitu penundaan pemeriksaan lebih

dari 1 jam menyebabkan penurunan jumlah trombosit.

3. Penggunaan darah kapiler menyebabkan hitung trombosit cenderung lebih

rendah,

4. Pengambilan sampel darah yang lamban menyebabkan trombosit saling

melekat (agregasi) sehingga jumlahnya menurun palsu

5. Tidak segera mencampur darah dengan antikoagulan atau pencampuran

yang kurang kuat juga dapat menyebabkan agregasi trombosit, bahkan

dapat terjadi bekuan.

 6. Kesalahan pada saat pengambilan darah vena

a. menggunakan spuit yang basah.

b. menggunakan ikatan pembendung terlalu lama atau terlalu keras,

akibatnya ialah hemokosentrasi.

c. terjadinya bekuan dalam spuit karena lambatnya bekerja

d. terjadinya bekuan dalam botol kerena tidak dicampur semestinya

dengan antikoagulan yang digunakan.

Faktor Laboratoris

1. Faktor Pra analitik Merupakan tahap penentuan kualitas sampel yang akan

diguunakan pada tahap - tahap selanjutnya. Pada tahap ini meliputi : ketata

usahaan, Persiapan penderita, Pengumpulan spsimen, Penanganan specimen.

Keselahan pada proses pra analitik dalam pemeriksaan laboratorium dapat

memberikan kontribusi sekitar 62% dari total keseluruhan pemeriksaan

Laboratorium.

a. Persiapan Pasien Ada beberapa sumber kesalahan yang kurang terkontrol

dari proses praanalitik yang dapat mempengaruhi pemeriksaan

laboratorium seperti aktivitas fisik, puasa, diet, stres, efek posisi,

menstruasi, kehamilan, gaya hidup (konsumsi alkohol, rokok, kopi, obat),

usia, jenis kelamin, pasca transfusi, pasca donasi,pasca operasi dan

lainnya. Karena hal-hal tersebut memiliki pengaruh yang kuat terhadap

beberapa pemeriksaan hematologi, maka pasien harus selalu

dipertimbangkan sebelum pengambilan sampel.

 b. Persiapan Pengumpulan Sampel Spesimen yang akan diperiksa

laboratorium harus memenuhi persyaratan sesuai jenis pemeriksaan,

volume mencukupi, kondisi baik (tidak lisis, segar / tidak kadaluwarsa),

pemakaian antikoagulan atau pengawet yang tepat, ditampung dalam

wadah yang memenuhi syarat, identitas benar sesuai dengan data pasien.

c. Pengambilan Spesimen Hal-hal yang harus diperhatikan pada pengambilan

spesimen adalah : 1. Tehnik atau cara pengambilan. Pengambilan

specimen harus dilakukan dengan benar sesuai dengan standard operating

procedure (SOP) yang ada.

2. Cara menampung specimen dalam wadah / penampung yang harus

diperhatikan meliputi :

a. Seluruh sampel harus masukke dalam wadah (sesuai kapasitas), jangan ada

yang menempel pada bagian luar tabung untuk menghindari bahaya

infeksi.

b. Wadah harus dapat ditutup rapat dan diletakkan dalam posisi berdiri untuk

mencegah spesimen tumpah.

c. Darah harus segera dimasukkan dalam tabung setelah sampling.

d. Pasca operasi dan lainnya. Karena hal-hal tersebut memiliki pengaruh

yang kuat terhadap beberapa pemeriksaan hematologi, maka pasien harus

selalu dipertimbangkan sebelum pengambilan sampel.

e. Persiapan Pengumpulan Sampel Spesimen yang akan diperiksa

laboratorium harus memenuhi persyaratan sesuai jenis pemeriksaan,

 volume mencukupi, kondisi baik (tidak lisis, segar / tidak kadaluwarsa),

pemakaian antikoagulan atau pengawet yang tepat, ditampung dalam

wadah yang memenuhi syarat, identitas benar sesuai dengan data pasien.

f. Pengambilan Spesimen Hal-hal yang harus diperhatikan pada pengambilan

spesimen adalah :Tehnik atau cara pengambilan. Pengambilan specimen

harus dilakukan dengan benar sesuai dengan standard operating procedure

(SOP) yang ada.

3. Cara menampung specimen dalam wadah / penampung yang harus

diperhatikan meliputi :

a. Seluruh sampel harus masukke dalam wadah (sesuai kapasitas), jangan ada

yang menempel pada bagian luar tabung untuk menghindari bahaya

infeksi.

b. Wadah harus dapat ditutup rapat dan diletakkan dalam posisi berdiri untuk

mencegah spesimen tumpah.

c. Darah harus segera dimasukkan dalam tabung setelah sampling.

Faktor Analitik Proses analitik adalah tahap pengerjaan sampel sehingga

diperoleh hasil pemeriksaan.

a. Pemeriksaan Laboratorium Pemeriksaan jumlah eritrosit, leukosit dan

trombosit dapat menggunakan darah vena maupun darah kapiler.

Pemeriksaan dengan darah kapiler memberikan hasil lebih rendah

dibandingkan darah vena.

 b. Pemeliharaan dan Kalibrasi

Alat Alat pemeriksaan bila tidak dilakukan perawatan secara rutin maupun

kalibrasi maka akan mempengaruhi hasil pemeriksaan jumlah eritrosit,

leukosit dan trombosit menjadi lebih tinggi atau menjadi rendah. Upaya

untuk mengkoreksi alat hematology analyzer merupakan sebuah upaya

yang baik karena kita tahu bahwa tidak semua alat luput dari kesalahan

dan ketidak telitian. Perlu adanya pemahaman untuk menilai dan memilah

kesalahan yang mungkin terjadi saat pengerjaan dengan metode

hematology analyzer.

Setiap laboratorium mengklaim bahwa hasilnya lebih akurat bahkan pakai

darah kontrol dibandingkan laboratorium lain. Alasan ini bias dipatahkan bila pra

analitiknya buruk, missal darah tidak segera dicampur dengan antikoagulan,

kelebihan anti koagulan, tidak segera di periksa (dalam waktu 1 jam lebih bagus),

tidak dikocok sebelum diperiksa dan botol yang digunakan dari plastic / polietilen.

Pemeriksaan darah lengkap umumnya telah menggunakan mesin penghitung

otomatis (hematology analyzer).

Pemeriksaan ini dapat memberikan hasil yang cepat. Namun alat hitung

otomatis / analyzer memiliki keterbatasan ketika terdapat sel yang abnormal,

misalnya banyak dijumpainya sel - sel yang belum matang pada leukemia, infeksi

bakterial, sepsis, dan sebagainya. Dalam kasus jumlah sel yang sangat tinggi

dimana alat tidak mampu menghitungnya, maka pemeriksaan manual menjadi

pilihan untuk dilakukan. Pada pemeriksaan secara manual ini darah diencerkan

dulu dengan tingkat pengenceran yang lebih tinggi.

Penyebab kesalahan pada hasil alat hitung otomatis (hematology analyzer):

a. Salah cara sampling dan pemilihan spesimen

b. Salah penyimpanan specimen dan waktu pemeriksaan ditunda terlalu lama

sehingga terjadi perubahan morfologi sel darah.

c. Kesalahan tidak mengocok sampel secara homogen, terutama bila tidak

memiliki alat pengocok otomatis (nutator) maka dikhawatirkan tidak

sehomogen saat sampel darah di ambil dari tubuh pasien. Inilah kesalahan

fatal yang sering terjadi pada pemeriksaan ini.

d. Kehabisan reagent lyse sehingga seluruh sel tidak dihancurkan saat

pengukuran sel tertentu. e. Kalibrasi dan kontrol tidak benar. Tidak

melakukan kalibrasi secara berkala dan darah control yang digunakan sudah

mengalami expired date tapi tetap di pakai karena menghemat biaya

operasional.

e. Carryover, homogenisasi, volume kurang.

Untuk alat jenis open tube maka, penyebabnya salah saat pada memasukkan

sampel pada jarum sampling alat, missal jarum tidak masuk penuh ujungnya

pada darah atau darah terlalu sedikit dalam tabung atau botol lebar sehingga

saat dimasukkan jarum tidak terendam seluruhnya. Untuk jenis close tube

kesalahan hampir sama juga, yaitu tidak memenuhi volume minimum yang

diminta oleh alat. Untuk tipe close tube menggunakan cara predilute, perlu

dikocok dahulu saat pengenceran darah dengan diluent

f. Alat atau reagen rusak.

Alat dapat saja rusak bila suhu yang tidak sesuai (warning : temperature

ambient abnormal) dan kondisi meja yang tidak baik. Reagensia yang

digunakan jelek dan mungkin terkontaminasi oleh udara luar karena packing

yang jelek.

g. Memang sampel tersebut ada kelainan khusus.

Dengan demikian perlu dilakukan perawatan alat secara rutin dengan

melakukan perawatan harian yaitu EZ cleanser yaitu untuk menghancurkan

sisa bekuan atau sisa pembuangan darah yang tidak sempurna dan melakukan

kalibrasi dengan menggunakan kalibrator komersial atau sampel darah segar.

Kalibrasi hendaknya diperiksa secara teratur dengan menggunakan program

pemantapan mutu yang biasa dilakukan setiap laboratorium, sesuai dengan

persyaratan laboratorium yang baik, verifikasi yang mencakup quality control

harian pada setiap shift dan juga pada setiap perubahan nomor lotreagen. Alat

yang digunakan untuk penelitian ini sudah dilakukan pemeliharaan alat secara

rutin dan kalibrasi.

4. Kualitas Reagent Reagen harus diperlakukan sesuai aturan yang diberikan

pabrik pembuatnya termasuk cara penyimpanan, penggunaan dan expirednya.

Pemakaian reagen yang sudah rusak oleh karena sudah expired maupun salah

dalam suhu penyimpanan akan menyebabkan penurunan jumlah eritrosit,

leukosit dan trombosit. Hal ini dapat diatasi dengan pemakain reagen yang

tidak expired dan penyimpanan reagen pada suhu yang sudah ditentukan

pabrik pembuatnya yaitu pada suhu 15-30 0C

5. Pemeriksa Faktor pemeriksa juga dapat berpengaruh terhadap hasil

pemeriksaan jumlah eritrosit, leukosit dan trombosit, bila sampel tidak

dicampur / dikocok dengan benar sebelum sampel diperiksa atau pada saat

sampel dihisap oleh penghisap sampel tidak sampai dasar tabung sampel atau

hanya pada permukaan tabung sampel, maka hasil pemeriksaan jumlah

trombosit menjadi rendah. Hal ini memerlukan pemeriksa yang

berpengalaman dan terlatih.

6. Faktor Pasca Analitik

Proses pasca analitik adalah tahap akhir pemeriksaan yang dikeluarkan untuk

meyakinkan bahwa hasil pemeriksaan yang dikeluarkan benar - benar valid

atau dapat dipertanggung jawabkan. Kegiatan pencatatan dan pelaporan hasil

di laboratorium harus dilaksanakan dengan cermat dan teliti karena dapat

mempengaruhi hasil peeriksaan dapat mengakibatkan kesalahan dalam

penyampaian hasil pemeriksaan

Metode pemeriksaan hitung jumlah trombosit

Trombosit sulit dihitung karena mudah sekali pecah dan sulit dibedakan

dengan kotoran, selain itu karena sifatnya yang mudah sekali melekat pada

permukaan asing dan membentuk gumpalan. Cara yang sering dipakai untuk

menghitung jumlah trombosit adalah dengan cara langsung dan tak langsung.

Pada cara langsung jumlah trombosit dihitung dengan cara manual atau otomatis

(automatic cell counter). Cara manual dapat dilakukan dengan metode Rees Ecker

atau Brecher Cronkite sedangkan cara tak langsung dengan metode Fonio.
a. Metode Rees Ecker Darah diencerkan dengan larutan Rees Ecker dan

jumlah trombosit dihitung dalam kamar hitung. Larutan Rees Ecker :

natriumsitrat 3,8 g; larutan formal dehide 40 % 2 ml; briliant cresyl blue

30 mg; aquadest ad 100 ml. Larutan harus disaring sebelum dipakai. 1.

Mengisap cairan Rees Ecker kedalam pipet eritrosit sampai garis tanda “1”

dan buanglah lagi cairan itu.

b. Mengisap darah sampai garis tanda “0,5” dan cairan Rees Ecker sampai

“101”. Segeralah kocok selama 3 menit.

c. Meletakkan kamar hitung yang telah benar-benar bersih dengan kaca

penutup yang terpasang mendatar di atas meja.

d. Membuang cairan yang ada pada batang kapiler pipet (3-4 tetes) dan

kemudian sentuhkan ujung pipet (sudut 30 derajat) dengan menyinggung

pinggir kaca penutup pada kamar hitung. Biarkan kamar hitung tersebut

terisi cairan perlahan - lahan dengan gaya kapilaritasnya sendiri.

e. Membiarkan kamar hitung yang sudah terisi tersebut dengan sikap datar

dalam cawan petri tertutup yang berisi kapas basah selama 10 menit agar

trombosit mengendap.

f. Menghitung semua trombosit dalam seluruh bidang besar di tengah -

tengah (1 mm 2 ) dengan perbesaran 40x.

g. Menghitung hasil hitung jumlah trombosit dikalikan 2.000 menghasilkan

jumlah trombosit per µl darah

7. Metode Brecher - Cronkite Darah diencerkan dengan Ammonium oksalat 1%

yang berfungsi untuk melisiskan eritrosit, jumlah trombosit dihitung dengan

bilik hitung dibawah mikroskop (Koeswardani, 2001). Dengan metode Rees

Ecker, kemungkinan kesalahan yang terjadi sebesar 16 – 25 %, sedangkan

Brecher Cronkite 8 – 10%. Kesalahan yang terjadi biasanya berasal dari

pengenceran dan penghitungan.

8. Metode Fonio Cara tak langsung jumlah trombosit dibandingkan dengan

jumlah eritrosit sedangkan jumlah eritrosit itulah yang sebenarnya di hitung.

1. Mebersihkan ujung jari dengan alkohol dan biarkan kering lagi.

2. Menaruh diatas ujung jari tersebut setetes besar larutan magnesium sulfat

14%.

3. Menusuk ujung jari dengan lanset melalui tetesan larutan magnesium

sulfat tersebut.

4. Setelah jumlah darah keluar kurang lebih 1/4 jumlah larutan magnesium

sulfat, mencampur darah dengan magnesium sulfat tersebut.

5. Membuat sedian hapus (dengan pewarnaan Wrigth atau Giemsa)

6. Menghitung jumlah trombosit yang dilihat bersama dengan 1.000 eritrosit.

7. Melakukan tindakan menghitung jumlah eritrosit per µl darah.

8. Menghitung jumlah trombosit per µl darah berdasarkan kedua angka itu.

(Ganda Soebrata, 2010) Perhitungan : N x ∑eritrosit/ 1000 pemeriksaan

kimia darah, imunologi, serologi dan bank darah (crossmatching test)

9. Tabung tutup kuning, berisi gel separator (serum separator tube / SST)

yang fungsinya memisahkan serum dan sel darah. Umumnya digunakan

untuk pemeriksaan kimia darah, imunologi dan serologi

10. Tabung tutup hijau terang, berisi gel separator (plasma separator tube /

PST) dengan antikoagulan lithium heparin. Umumnya digunakan untuk

pemeriksaan kimia darah.

11. Tabung tutup ungu atau lavender, berisi EDTA. Umumnya digunakan

untuk pemeriksaan darah lengkap dan bank darah (crossmatch)

12. Tabung tutup biru, berisi natrium sitrat. Umumnya digunakan untuk

pemeriksaan koagulasi( mis. PPT, APTT)

13. Tabung tutup hijau, berisi natrium atau lithium heparin, umumnya

digunakan untuk pemeriksaan fragilitas osmotik eritrosit, kimia darah.

14. Tabung tutup biru gelap, berisi EDTA yang bebas logam, umumnya

digunakan untuk pemeriksaan trace element (zink, copper, mercury) dan

toksikologi.

15. Tabung tutup abu-abu terang, berisi natrium fluoride dan kalium oksalat,

digunakan untuk pemeriksaan glukosa.

16. Tabung tutup hitam, berisi bufer sodium sitrat, digunakan untuk

pemeriksaan LED (ESR).

17. Tabung tutup pink, berisi potassium EDTA, digunakan untuk pemeriksaan

imunohematologi
 18. Tabung tutup putih, berisi potassium EDTA, digunakan untuk

pemeriksaan molekuler / PCR dan bDNA.

19. Tabung tutup kuning dengan warna hitam dibagian atas, berisi media

biakan, digunakan untuk pemeriksaan mikrobiologi-aerob, anaerob dan

jamur. Penggunaan vacutainer lebih menguntungkan karena tidak perlu

membagi sampel darah kedalam beberapa tabung, cukup dengan sekali

penusukan dapat digunakan untuk beberapa tabung secara bergantian

sesuai jenis pemeriksaan yang akan dilakukan. Untuk uji biakan kuman,

cara ini lebih baik untuk mencegah kontaminasi karena darah langsung

mengalir kemedia biakan.

Vacutainer EDTA digunakan untuk pengujian parameter dalam hematologi.

Permukaan Tabung bagian dalam tabung dilapisi Spray Dried K2EDTA

(dipotassium ethylene diamine tetra acetic acid) atau K3EDTA (tripotassium

ethylene diamine tetra acetic acid). Tabung vacutainer K3EDTA menunjukkan

secara substansial setara dengan kinerja tabung vacutainer K2EDTA dan tidak ada

perbedaan yang signifikan secara klinis antara keduanya.

Semua garam EDTA adalah hiperosmolar, yang menyebabkan air

meninggalkan sel dan menyebabkan penyusutan sel. Semakin tinggi konsentrasi

EDTA, semakin besar penarikan osmotik air dari sel. Oleh karena itu harus di

pastikan bahwa tabung diisi sepenuhnya. Selain itu, pengisian tabung yang

kurang, juga menyebabkan rasio darah dan bahan aditif menurun, mengakibatkan

penyusutan sel, pengurangan Mean Corpuscular Volume (MCV) dan

meningkatkan Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration (MCHC). Pada

Tabung K3EDTA mungkin sedikit lebih terpengaruh, karena konsentrasi ion

kalium yang lebih tinggi

merupakan automatic cell counter yang bekerja dengan metode flowcytometri

yang prinsip dasarnya adalah impedansi elektrik (electrical impedance) dan

pendar cahaya (light scattering).

1. Impedansi Elektrik

Prinsip yang digunakan adalah sebelum pemeriksaan, sampel diencerkan

dengan larutan yang mempunyai konduktivitas tertentu dan merupakan

konduktor listrik yang kurang baik, kemudian sel darah dialirkan melalui

lubang kecil yang disebut orifice yang mempunyai ukuran tertentu. Pada

saat yang sama, suatu arus listrik dialirkan melalui elektroda yang

dipasang pada sisi luar dan sisi dalam orifice, karena sel darah adalah

penghantar listrik yang buruk, maka jika sel darah masuk melalui orifice

tadi, arus listrik yang mengalir juga akan terganggu. Gangguan ini

menimbulkan suatu pulsa elektrik. Jumlah pulsa listrik yang terukur

persatuan waktu (frekuensi pulsa) dideteksi sebagai jumlah sel yang

melalui celah tersebut. Sedangkan besarnya perubahan tegangan listrik

(amplitudo) yang terjadi, merupakan ukuran volume dari masing – masing

sel darah. Besarnya pulsa akan sesuai dengan besarnya jumlah dan

besarnya sel darah yang lewat. Jika sel darah besar, maka pulsa yang

ditimbulkan besar, sebaliknya jika sel darah kecil maka pulsa pun kecil.

Dengan demikian dapat mengenali jenis – jenis sel menurut ukuran dan

menghitung jumlahnya.
2. Pendar Cahaya

Prinsip yang digunakan adalah pendaran cahaya yang terjadi ketika sel

mengalir melewati celah dan berkas cahaya yang difokuskan ke sensi area

yang ada pada aperture tersebut. Apabila cahaya mengenai sel, maka

cahaya akan dihamburkan, dipantulkan, atau dibiaskan kesemua arah.

Kemudian hamburan cahaya yang mengenai sel akan ditangkap oleh

detektor yang ada pada sudut – sudut tertentu sehingga menimbulkan

pulsa. Pulsa cahaya yang berasal dari hamburan cahaya, intensitas warna,

atau fluoresensi, akan diubah menjadi pulsa listrik. Pulsa ini dipakai untuk

menghitung jumlah, ukuran, maupun inti sel yang merupakan ciri dari

masing – masing sel. Hamburan cahaya dengan arah lurus (forward

scettered light) mendeteksi volume dan ukuran sel. Sedangkan cahaya

yang dihamburkan dengan sudut 90º menunjukkan informasi dari isi

granula sitoplasma. Pada metode ini juga dapat dilakukan pewarnaan

dengan cara menambahkan pewarna pada reagen. Sel yang telah diberi

pewarna akan memberikan pendaran cahaya yang berbeda – beda,

sehingga akan lebih banyak informasi untuk mendeteksi atau mendeteksi

berbagai jenis sel. Alat ini cocok digunakan untuk laboratorium dengan

pemeriksaan darah 15 – 25 tes / hari. Parameter pemeriksaan yang dapat

dilakukan yaitu WBC, RBC, PLT, HGB, HCT, MCV, MCH, MCHC,

RDW – SD, RDW – CV, PDW, MPV, P – LCR, LYM, MXD, NEUT.

Volume darah yang diperlukan sebanyak 1 ml dan volume darah yang

dihisap oleh alat sebanyak 15µl. Prinsip kerja alat ini dalam menghitung

jumlah trombosit adalah sampel didilusi dengan larutan konduktifitas

 tertentu. Sel dialirkan melalui lubang dengan ukuran tertentu – orifice.

Pada saat yang sama, arus listrik dialirkan melalui elektroda yang dipasang

pada sisiluar (external electrode) dan sisi dalam (internal electrode) dari

orifice. Sel darah ad

Alat penghantar listrik yang buruk sehingga setiap sel darah yang masuk

melalui orifice akan menimbulkan gangguan pada orifice. Gangguan tersebut akan

menimbulkan pulsa, dimana besarnya pulsa sebanding dengan ukuran sel darah

yang melewatinya. Setiap pulsa listrik yang tejadi sesuai dengan satu trombosit

yang melalui aperture sehingga jumlah pulsa sama dengan jumlah trombosit dan

tingginya pulsa menunjukkan ukuran trombosit.

Distribusi ukuran partikel trombosit dianalisa dengan Procan PE – 6800

menggunakan 3 diskriminator yaitu batas bawah 2 – 6 fL, batas tengah12 fL, dan

batas atas 12 – 30 fL. Kesalahan yang terjadi dalam hitung trombosit disebabkan

oleh darah yang menjendal (sample clotting), trombosit bergerombol yang

dihitung sebagai leukosit, trombosit bentuk besar dan giant platelet yang dihitung

sebagai eritrosit, serta platelets satellitism (formasi rosette) yang terbentuk dari

trombosit – leukosit). Keadaan tersebut menyebkan jumlah trombosit rendah

palsu. Sebaliknya, adanya non platelet particles seperti debu, pecahan eritrosit,

leukosit dan trombosit dapat dihitung sebagai trombosit, sehingga hasilnya

menjadi tinggi palsu

 BAB
MENGANALISA KOMPONEN DARAH
III

A. Darah Lengkap (Whole Blood) Whole Blood atau Darah Lengkap

Adalah darah yang diambil dari donor dengan menggunakan kantong darah

dengan antikoagulan steril dan bebas pyrogen( Desmawati,2013)) Darah lengkap

ini berisi sel darah merah, leukosit, trombosit, dan plasma. Satu unit kantong

darah lengkap berisi 450 mL darah dan 63 mL antikoagulan. Di Indonesia, 1

kantong darah lengkap berisi 250 mL darah dengan 37 mL antikoagulan, ada juga

yang 1 unit kantong berisi 350 mL darah dengan 49 mL antikoagulan. Suhu

simpan antara 10 - 6 0 Celcius. Satu unit darah (250-450 ml) dengan antikoagulan

sebanyak 15 ml/100ml darah.

Dilihat dari masa penyimpanannya, maka whole blood dapat dibagi menjadi 2,

yaitu darah segar (fresh blood), yaitu darah yang disimpan kurang dari 6 jam,

masih lengkap menngandung trombosit dan factor pembeku, serta darah yang

disimpan (stored blood), yaitu darah yang sudah disimpan lebih dari 6 jam sampai

6 hari , faktor pembeku sudah hampir habis dan juga dapat terjadi peningkatan

kadar kalium, amonia, dan asam laktat.

Darah lengkap berguna untuk meningkatkan jumlah sel darah merah dan

volume plasma dalam waktu yang bersamaan, misalnya pada pendarahan aktif

dengan kehilangan darah lebih dari 25-30 % volume darah total. Namun

demikian, pemberian darah lengkap pada keadaan tersebut hendaklah tidak

menjadi pilihan utama karena pemulihan segera volume darah pasien lebih

penting daripada penggantian sel darah merah atau transfusi yang masih
memerlukan waktu. Eritrosit dibuat dari darah keseluruhan (whole blood) dengan

sentrifugasi dan menghilangkan plasma.

Larutan yang paling umum digunakan sebagai antikoagulan aadalah

CPDA1.Antikoagulan ini dilengkapi dengan dekstrosa dan adenine untuk

mengawetkan pada tingkat adenosine trifosfat pada eritrosit.Eritrosit dengan

CPDA-1 dapat disimpan sampai 35 hari pada suhu 1-6 0 C. eritrosit juga dapat

ditambah larutan yang mengandung glukosa dan substrat lainnya selama

pembuatan. Larutan aditif tersebut memungkinkan periode penyimpanan yang

lebih lama (42 hari) dan memiliki nilai hematokrit (Ht) rendah. Selama

penyimpanan, eritrosit mengalami penuaan perubahan serupa yang terjadi dalam

tubuh (in vivo), sehingga sebagian sel darah merah yang ditransfusikan dengan

cepat akan dimusnahkan oleh limpa resipen. Kebocoran kalium intraselular akan

terjadi selama penyimpanan eritrosit.

B. Fasilitas penyimpanan dan Stabilitas darah lengkap

Komponen darah harus disimpan pada kondisi suhu yang optimal untuk setiap

jenis komponen. Fasilitas atau peralatan yang digunakan untuk menyimpan

komponen darah harus dikualifikasi dan divalidasi agar memenuhi system

manajemen mutu untuk unit penyedia darah.

Fasilitas atau peralatan harus dapat diamankan, didesain agar sirkulasi udara

sekitar komponen darah terjaga dan dibersihkan secara teratur. Suhu dan alarm

harus diperiksa secara teratur untuk menjamin kondisi yang telah ditentukan

terjaga. Whole blood harus selalu terpelihara suhunya antara2°-6°C. Pada suhu

ini, terjadi pengurangan reaksi biokimia dan akumulasi produk limbah,

memungkinkan pengawetan secara invitro selama beberapa minggu. Coldbox

harus digunakan setiap kali darah selesai diambil dari donor untuk menjaga agar

darah tetap baik selama transportasi. Sekarang telah tersedia coldbox untuk

transportasi darah yang dioperasikan dengan baterai sehingga dapat menjaga

suhunya tetap optimal selama waktu transportasi.

Darah sebaiknya disimpan pada lemari es khusus yang mampu menjaga suhu

antara 2°-6°C, apabila tidak memiliki lemari es khusus dapat digunakan lemari es

biasa dengan memperhatikan hal-hal berikut :

1. Darah dapat disimpan dalam satu lemari es bersama reagen dan sampel,

namun tidak boleh dicampuradukkan penempatannya.

2. Pintu lemari es hanya boleh dibuka saat menyimpan atau mengeluarkan

darah.

3. Penempatan darah harus sedemikian rupa sehingga terjadi sirkulasi udara

diantara kantong-kantongnya, dapat diposisikan berdiri dalam keranjang,

 atau mendatar diatas rak lemari es. d)Tidak menyimpan darah pada pintu

lemaries.

4. Tidak menyimpan darah didekat lemari pembeku (freezer). Suhu didalam

lemari es tempat penyimpanan darah harus tetap diperiksa dan dicatat

secara berkala, paling tidak dua kali sehari.

C. Teknik Pengambilan Darah (Flebotomi)

Flebotomi berasal dari Bahasa Yunani yaitu Phlebos : vena, dan Tome:

memotong. Flebotomi Masa Kini, terdiri dari: 1. Tusukan Vena

(Venipuncture) 2. Tusukan Kulit (Skin Puncture)(Departemen,2008).

TUSUKAN VENA (VENIPUNCTURE)

a. Pra Analitik

Alat dan bahan:

- Antiseptik & desinfektan :

alkohol 70 %

- Kapas steril

- Plester

- Tourniquet

- Metode semprit: Jarum semprit (21-23 gauge) Penampung (barrel) Penghisap

(plunger) Tabung yang telah diisi antikoagulan

- Metode tabung vakum: Jarum khusus (20-22gauge) holder/adapter tabung

vakum (dengan antikoagulan)

- Antikoagulan: EDTA, heparin, Na. Sitrat, NH4-oksalat

b. Analitik

1. Metode Tabung Vakum

a. pilih bagian yang akan dilakukan tusukan vena (venipuncture), yaitu:

antecubitus lengan, pilih vena yang besar dan tidak mudah bergerak

b. desinfektan area venipuncture dengan kapas alkohol dengan gerakan

memutar dari tengah ke tepi, biarkan 30 detik untuk pengeringan

alkohol.

c. pasang tourniquet 7.5 – 10 cm di atas bagian venipuncture disertai

pengepalan tangan pasien membantu penampakan vena.

d. tusuk jarum ke dalam vena, posisi lubang jarum menghadap ke atas

dengan sudut 15 – 300 .

e. lepas tourniquet setelah darah mengalir (jangan biarkan tourniquet

terpasang lebih 1 menit).

f. isi tabung sampai kevakumannya habis

g. lepaskan tabung dari jarum

h. bolak balik isi tabung 5 – 10 kali

i. lepaskan jarum perlahan-lahan j.

j. segera tekan dengan kapas selama 3 – 5 menit

k. plester bagian veni puncture dan lepas setelah 15 menit.

l. beri label pada tabung (nama, no.lab, jarum & tgl.pengambilan)

 2. Metode Semprit

a. keluarkan semprit dari plastiknya, pasang jarum, tarik penghisap untuk

memeriksa kelancarannya

b. penusukan vena dilakukan seperti metode vakum

c. lepaskan tourniquet setelah darah mengalir

d. tarik perlahan-lahan pengisap (plunger) dan biarkan semprit terisi

darah

e. masukkan darah ke dalam tabung yang telah diisi antikoagulan.

TUSUKAN KULIT (SKIN PUNCTURE)

A. Pra Analitik

Alat dan bahan:

- Antiseptik & desinfektan : alkohol 70 % - Kapas steril - Lancet steril atau

hemolet - Penampung darah (tabung/ pipa kapiler)

B. Analitik

1. Tangan diletakkan di atas meja dengan posisi telapak menghadap ke atas

2. Pilih bagian yang akan ditusuk dan dibersihkan

3. Pegang jari pasien dengan ibu jari dan telunjuk kita

4. Bagian kulit dibersihkan dengan kapas alkohol 70%

5. Tusukkan lancet pada kulit

6. Buang lancet pada tempat khusus.

7. Tekan bagian yang darahnya keluar (jangan terlalu keras)

8. Seka tetesan darah pertama dengan kapas steril

9. Tampung darah yang keluar ke dalam tabung/pipa kapiler sesuai permintaan

pemeriksaan dengan menempelkan tabung/pipa kapiler langsung pada bagian

kulit dimana darah keluar.

10. Pipa kapiler ditutup dengan clay

11. Bila diperlukan sediaan apus, ambil porsi pertama sebelum tabung

antikoagulan: 1 – 2,5 cm pada ujung kaca obyek, diameter tetesan 1 – 2 mm.

 MENGIDENTIFIKASI PROSES BAB

TERBENTUKNYA DARAH IV

A. Eritropoiesis

Eritropoiesis merupakan proses pembentukan sel darah merah. Sel darah

merah berfungsi sebagai pengangkut oksigen ke jaringan dan mengikat CO2 dari

jaringan. Dalam keadaan normal eritropoiesis memerlukan 3 faktor yaitu

(1) stem sel hematopoetik,

(2) sitokin spesifik, growth factor dan hormonal regulator, serta

(3) hematopoietik yang mempengaruhi microenvirontment yang merupakan

stroma pendukung dan interaksi sel dengan sel yang diikuti proliferasi dan

diferensiasi hematopoetik sel stem dan mempengaruhi erythroid progenitor yang

akhirnya menghasilkan sel darah merah yang matur.

Proliferasi dan maturasi ini diatur oleh sitokin termasuk eritropoietin

sebagai faktor yang terpenting dalam mekanisme ini. Bila terjadi hipoksia, nefron

ginjal akan merespons dengan memproduksi eritropoietin. Eritropoietin (EPO)

merupakan suatu glikoprotein hormon dengan berat molekul 30 – 39 kD yang

akan terikat pada reseptor spesifik progenitor sel darah merah yang selanjutnya

memberi sinyal merangsang proliferasi dan diferensiasi.6 Sebaliknya bila terjadi

peningkatan volume sel darah merah di atas normal misalnya oleh karena

transfusi, aktivitas eritropoietin di sumsum tulang akan berkurang.1,2,7

Eritropoietin terutama dihasilkan oleh peritubular interstitial (endothelial) ginjal

(± 90%)dan sisanya (10- 15%) dihasilkan di hati.1,2,4,7,8 Produksi EPO akan

meningkat pada keadaan anemiaa ataupun hipoksia jaringan.

B. Leukopoiesis

Leukopoiesis adalah proses pembentukan leukosit, yang dirangsang oleh

adanya colonystimulating factors atau faktor perangsang koloni. Penstimulasi

(perangsang) koloni inidihasilkan oleh sel darah putih (leukosit) dewasa.

Perkembangan dari setiap sel darah putihdimulai dengan terjadinya pembelahan

sel batang temopoitik menjadi sel “blas”

C. Zat Untuk Pembentukan Darah

Dalam proses pembentukan sel darah merah membutuhkan bahan zat besi,

vitamin B12, asam folat, vitamin B6 ( piridoksin ), protein dan faktor lain.

Kekurangan salah satu unsur diatas akan mengakibatkan penurunan produksi sel

darah sehingga mengakibatkan Anemia yang ditandai dengan Kadar hemoglobin

yang rendah/kurang dari normal.

 MENGIDENTIFIKASI PROSES BAB

TERBENTUKNYA DARAH V

A. Hitung Retikulosit

Retikulosit adalah eritrosit muda yang kehilangan intinya, dimana

sitoplasmanya masih mengandung sejumlah besar sisa-sisa ribosome dan RNA

yang berasal dari sisa inti dari bentuk penuh pendahulunya. Ribosome mempunyai

kemampuan untuk bereaksi dengan pewarna tertentu seperti brilliant cresyl atau

new methylene blue untuk membentuk endapan granula atau filament yang

berwarna biru. Reaksi ini hanya terjadi pada pewarnaan terhadap sel yang masih

hidup dan tidak difiksasi. Oleh karena itu disebut pewarnaan supravital.

Retikulosit paling muda (imatur) adalah yang mengandung ribosome

terbanyak, sebaliknya retikulosit tertua hanya mempunyai beberapa titik

ribosome. (Noble NA, Xu QP, Hege LL, 1990 ; Koury MJ, Koury ST, Kopsombut

P, Bondurant MC, 2005) Retikulosit pada pewarnaan Wright tampak sebagai

eritrosit yang berukuran lebih besar dan berwarna lebih biru daripada eritrosit

matang. Reticulum terlihat sebagai bintik-bintik abnormal. Polikromatofilia yang

menunjukkan warna kebiru-biruan dan bintik-bintik basofil pada eritrosit,

sebenarnya disebabkan oleh bahan ribosome tersebut.

Hitung retikulosit merupakan indicator aktivitas sumsum tulang dan

digunakan untuk mendiagnosis anemia. Banyaknya retikulosit dalam darah tepi

menggambarkan eritropoesis yang hamper akurat. Peningkatan jumlah retikulosit

di darah tepi menggambarkan akselerasi produksi eritrosit dalam sumsum tulang.

Sebaliknya, hitung retikulosit yang rendah terus-menerus dapat mengindikasikan

keadaan hipofungsi sumsum tulang atau anemia aplastik.

B. Metode Hitung Retikulosit

Umumnya menggunakan metode pewarnaan supravital. Sampel darah

dicampur dengan larutan brilliant cresyl blue (BBC) atau new methylene blue

maka ribosome akan terlihat sebagai filament berwarna biru. Jumlah retikulosit

dihitung per 1000 eritrosit dan dinyatakan dalam jadi hasilnya dibagi 10. Pewarna

yang digunakan memiliki formula sebagai berikut :

1. brilliantCresylBlue (BCB) : brilliantcresylblue 1.0gr; NaCl 0.85% 99.0ml.

saring larutan sebelum dipergunakan(Raja et all,2013).

2. Newmethyleneblue : NaCl 0.8gr; kalium oksalat 1.4gr; new methylene

blue N 0.5gr; aquadest 100ml. saring larutan sebelum dipergunakan.

Dianjurkan menggunakan new methylene blue, kesalahan metode ini pada

nilai normal 25%. Sampel darah yang digunakan untuk hitung retikulosit

adalah darah kapiler atau vena, dengan antikoagulan (EDTA) atau tanpa

antikoagulan (segar).

Prosedur

1. Masukkan 0,5 sampai 1 ml larutan pewarna kedalam tabung kecil.

2. Campur 5 tetes darah dengan larutan tadi dan biarkan selama 5 menit. Dari

campuran tersebut diambil satu tetes untuk membuat sediaan apus darah

tipis, biarkan kering di udara.

3. Periksa dibawah dengan perbesaran 100x. eritrosit Nampak biru muda dan

retikulosit akan tampak sebagai sel yang mengandung granula/filament

yang berwarna biru. Bila kurang jelas waktu pewarnaannya diperpanjang

atau dicounterstain (dicat lagi) dengan cat Giemsa.

 4. Kemudian hitung jumlah retikulosit dalam 1000 sel eritrosit. Hitung

retikulosit = (jumlah retikulosit per 1000 eritrosit : 10%.

Nilai Rujukan Dewasa : 0.5 – 1.5%, Bayi baru lahir : 2.5 – 6.5%, Bayi : 0.5 –

3.5% dan Anak : 0.5 – 2.0% Faktor-faktor yang mempengaruhi temuan hasil

laboratorium :

a. Bila hematokritnya rendah maka perlu ditambahkan darah

b. Cat yang tidak disaring menyebabkan pengendapan cat pada sel-sel

eritrosit sehingga terlihat seperti retikulosit

c. Menghitung di daerah yang terlalu padat

C. Crossmatch (Reaksi Silang Serasi)

Reaksi silang perlu dilakukan sebelum melakukan transfusi darah untuk

melihat apakah darah penderita sesuai dengan darah donor. Mayor Crossmatch

adalah serum penerima dicampur dengan sel donor dan Minor Crossmatch adalah

serum donor dicampur dengan sel penerima. Jika golongan darah ABO penerima

dan donor sama, baik mayor maupun minor test tidak bereaksi. Jika berlainan

umpamanya donor golongan darah O dan penerima golongan darah A maka pada

test minor akan terjadi aglutinasi. Mayor Crossmatch merupakan tindakan terakhir

untuk melindungi keselamatan penerima darah sebaiknya dilakukan demikian

sehingga Complete Antibodies maupun incomplete Antibodies dapat ditemukan.

Reaksi silang yang dilakukan hanya pada suhu kamar saja tidak dapat

mengesampingkan aglutinin Rh yang hanya bereaksi pada suhu 37°C. Ada

beberapa cara untuk menentukan reaksi silang yaitu reaksi silang dalam larutan

garam faal dan reaksi silang metode gell (Notoatmodjo, 2012).

1. Reaksi Silang dalam Tabung

Prinsip : Sel donor dicampur dengan serum penerima (Mayor Crossmatch) dan

sel penerima dicampur dengan serum donor dalam bovine albumin 20% akan

terjadi aglutinasi atau gumpalan dan hemolisis bila golongan darah tidak

cocok.

2. Tujuan

Untuk menentukan cocok tidaknya darah donor dengan darah penerima untuk

persiapan transfusi darah.

Alat, reagensia dan bahan pemeriksaan : Tabung reaksi, pipet tetes, sentrifuge,

tabung sentrifuge, bovine albumin 20%, mikroskop, NaCl 0,9%, serum Coombs,

serum eryhtrosit 5 %. Teknik kerja :

a. Pembuatan suspense Eryhtrosit 5 %

1. Kedalam tabung diisi dengan larutan NaCl 0,9 % sebanyak 5 ml.

2. Tambahkan 5 tetes darah EDTA dan campur.

3. Putar pada sentrifuge pada 1500 rpm selama 5 menit

4. Cairan dibuang dan pada endapan ditambahkan larutan NaCl 0,9 %

sebanyak 5 ml. campur dan putar lagi, ulangi langkah tadi sebanyak 3

kali.

5. Terakhir pada penambahan NaCl 0,9 % yang ke-4 kalinya sebanyak 5

ml merupakan suspensi eryhtrosit 5 %.

b. Pemeriksaan reaksi silang fase I

 1. Dua buah tabung reaksi kecil dalam rak, yang sebelah kiri untuk mayor

test dan sebelah kanan untuk minor test.

2. Tabung kiri diisi dengan 2 tetes serum penerima dan 2 tetes suspense

erythrosit donor 5 % dalam larutan NaCl 0,9 % dan 2 tetes bovine

albumin 20%.

3. Tabung kanan diisi dengan 2 tetes serum donor dan 2 tetes suspense

erythrosit penerima 5 % dalam larutan NaCl 0,9 % 2 tetes bovine

albumin 20%.

4. Masing-masing tabung dicampur dan diputar disentrifuge pada 1000

rpm selama 1 menit.

5. Goyang dengan hati-hati dan periksa adanya aglutinasi dan hemolisis.

6. Bila hasil Mayor dan minor negatif, dilanjutkan ke fase II

7. Bila hasil Mayor dan minor positif, pemeriksaan tidak dilanjutkan

(tidak cocok)

c. Crossmatch Fase II

1. Tabung tadi diinkubasi pada suhu 37°C selama 15 menit

2. Putar selama 1 menit pada 1000 rpm disentrifuge.

3. Baca adanya aglutinasi dan hemolisis dengan menggoyang

perlahanlahan sama dengan fase I, bila negatif dilanjutkan ke fase III.

d. Crossmatch Fase III

1. Sel darah merah dicuci dengan NaCl 0,9% 3-4 kali

 2. Tambahkan 2 tetes serum Coombs pada kedua tabung mayor dan Minor

test.

3. Putar pada sentrifuge 1000 rpm selama 1 menit.

4. Baca adanya aglutinasi dan hemolisis dengan menggoyang

perlahanlahan sama dengan fase I secara makroskopis.

Penafsiran :

1. Bila aglutinasi dan hemolisis negatif (-) maka darah dapat

ditransfusikan.

2. Bila aglutinasi dan hemolisis positif (+) maka darah tidak dapat

ditransfusikan (tidak cocok).

3. Pemeriksaan Crossmatch

Metode Gell Prinsip : Anti body yang terdapat dalam serum, plasma bila

direaksikan dengan antigen pada sel darah merah, melalui inkubasi pada suhu

37°C dan dalam waktu tertentu dengan penambahan anti imunoglobin terjadi

reaksi aglutinasi.

Alat dan bahan : Tabung reaksi, mikropipet 50 ml, 25 ml, centrifuge,

incubator, kartu cross match (card liss/coombs card), serum donor, serum

pasien, sel donor, sel pasien, reagen Diluent 2 Prosedur :

1. Buat suspense sel pasien dan donor 0,8 – 1 % cara : ambil ditabung 500 ml

Dluent 2 dengan dispenser.

2. Ambil 5 ml sel darah merah atau darah lengkap → masukkan ke tabung

yang ada Diluent 2-nya

3. Campur dalam homogenkan

4. Ambil liss/Coombs card, tandai dengan identitas pasien/donor, buka

penutup aluminium.

a. Mayor : 50 ul suspensi sel donor ± 25 ul serum pasien

b. Minor : 50 ul suspensi sel pasien ± 25 ul serum donor

c. Auto control : 50 ul suspensi sel pasien ± 25 ul serum pasien

5. Masukkan coombs card ke incubator. Inkubasi 37°C, 15 menit (tekan

tombol timer 1/2/3) 6. Pindahkan coombs card ke centrifuge. Tekan

tombol start (centrifuge selama 10 menit). Baca reaksi. Keterangan :

a. Hasil positif pada crossmatch mayor.

1. Periksa sekali lagi golongan darah pasien apakah sudah sama dengan

donor.

2. Artinya ada regular antibodi pada serum pasien.

3. Harus dilakukan screering dan identifikasi antibod pada serum pasien,

dalam hal ini sampel darah dikirim ke UDD pembina.

b. Hasil positif pada crossmatch minor, autocontrol = negative. Artinya

ada irregular antibodi pada serum donor. Solusi : ganti dengan darah

donor yang lain

 c. Hasil positif pada crossmatch minor, autocontrol = positif. Artinya ada

autobodi pada serum pasien. Bandingkan positif pada minor dan

autocontrol

Serum antiglobulin meningkatkan sensitivitas pengujian in vitro. Antibodi

kelas IgM yang kuat biasanya menggumpalkan eritrosit yang mengandung antigen

yang relevan secara nyata, tetapi antibodi yang lemah sulit dideteksi.

Banyak antibodi kelas IgG yang tak mampu menggumpalkan eritrosit

walaupun antibodi itu kuat. Semua pengujian antibodi termasuk uji silang tahap

pertama menggunakan cara sentrifugasi serum dengan eritrosit. Sel dan serum

kemudian diinkubasi selama 15-30 menit untuk member kesempatan antibody

melekat pada permukaan sel, alalu ditambahkan serum antiglobulin dan bila

penderita mengandung antibodi dengan eritrosit donor maka terjadi gumpalan.

Uji saring terhadap antibod penting bukan hanya pada transfusi tetapi juga ibu

hamil yang kemungkinan terkena penyakit hemolitik pada bayi baru lahir.

Pemeriksaan Crossmatch di UTD dan BDRS saat ini menggunakan metode gel

dalam cup kecil yang lebih mudah dan praktis, metode ini telah menggantikan

metode tabung yang lebih sulit dan memerlukan banyak peralatan untuk

pemeriksaan. Namun begitu metode tabung yang saat ini telah menggunakan

teknik yang lebih ketat yaitu menggunakan beberapa fase pemeriksaan dan

medium pemeriksaan yang lebih banyak, missal menggunakan bovine albumin,

serum coombs dan inkubasi pada suhu 37°C yang akan menambah sensitivitas

pemeriksaan(Cipta Nurgaha, 2015).

 BAB
PEMERIKSAAN DARAH
VI

A. Definisi Pemeriksaan Darah

Pemeriksaan darah lengkap adalah tes darah yang dilakukan untuk mengetahui

jumlah sel darah merah, sel darah putih, dan trombosit dalam tubuh Anda. Jumlah

sel darah dapat menggambarkan kondisi kesehatan Anda sehingga bisa membantu

dokter dalam menentukan diagnosis dan pengobatan.

B. Darah Vena

Darah vena adalah darah yang berada di pembuluh darah vena, membawa

darah miskin akan oksigen menuju ke jantung. Pembuluh darah vena juga

berdinding tiga lapis seperti arteri, tetapi lapisan tengah berotot lebih tipis, kurang

kuat, lebih mudah kempes, dan kurang elastis dari pada arteri. Untuk

mendapatkan sampel darah vena dilakukan venipuncture yaitu cara pengumpulan

darah dengan melakukan tusukan kedalam pembuluh darah vena.

Pada umumnya semua pembuluh vena cukup besar yang letaknya superficial

dapat dipergunakan untuk pengambilan darah, namun vena mediana cubital, pada

anterior lengan (sisi dalam lipatan siku) terletak dekat dengan permukaan kulit,

cukup besar, dan tidak terdapat saraf besar sehingga vena ini dijadikan pilihan

utama karena minimal rasa sakitnya. Apabila tidak memungkinkan, vena

chepalica atau vena basilica bisa menjadi pilihan berikutnya.

Pengambilan darah pada vena basilica harus dilakukan dengan hati-hati karena

letaknya berdekatan dengan arteri brachialis dan syaraf median. Terdapat dua cara

pengambilan sampel darah vena, yaitu cara terbuka (menggunakan jarum spuit)
dan cara tertutup (jarum dan tabung vacum/ vacutainer). Pada penelitian ini

menggunakan cara terbuka.

C. Jenis Pemeriksaan Darah

1. Pemeriksaan Rutin: Kadar Hb, Jumlah Leukosit, Hitung Jenis Leukosit

(Differential Counting) dan Laju Endap Darah

2. Pemeriksaan penyaring (Screening):

Gambaran Darah Tepi, Jumlah Eritrosit, Hematokrit, Indeks Eritrosit,

Hitung Retikulosit dan Hitung Trombosit

3. Pemeriksaan Lanjutan: Tes Coombs, Fragilitas Osmotik Eritrosit dan

Kimia Klinik ≈ hematologi

4. Pemeriksaan Khusus: Penentuan kadar zat/sel khusus (Fe, B12, as.folat,

G6PD, Hb elektroforese, sel LE)

5. Pemeriksaan darah lengkap : Pemeriksaan darah rutin dan Pemeriksaan

penyaring

D. Langkah – Langkah Pada Prosedur Venipuncture

1. Identifikasi pasien; setidaknya dua pengenal (nama lengkap, alamat,

tanggal lahir) jangan melanjutkan prosedur jika ada ketidaksesuaian

identifikasi, Formulir Permintaan pemeriksaan harus tertulis jelas nama

pasien, alamat, tanggal lahir, no identitas, tanggal pengambilan sampel,

jenis pemeriksaan yang diperlukan

2. Phlebotomis memperkenalkan diri dan menyampaikan prosedur yang akan

dilakukan

3. Verifikasi puasa untuk keperluan pemeriksaan tertentu (kapan terakhir

makan, minum)
4. Lakukan hand hygiene, kenakan sarung tangan; disarankan untuk tidak

menyentuh pasien tanpa sarung tangan

5. Posisikan pasien supaya nyaman, letakkan lengan pasien lurus diatas meja

dengan telapak tangan menghadap keatas

6. Ikat lengan dengan cukup erat menggunakan tourniquet untuk

membendung aliran darah, kemudian pasien disuruh mengepal dan

membuka tangannya beberapa kali untuk mengisi pembuluh darah

7. Dalam keadaan tangan pasien masih mengepal, ujung telunjuk pemeriksa

mencari lokasi pembuluh darah yang akan ditusuk

8. Bersihkan lokasi tersebut dengan kapas alkohol dan biarkan kering

9. Peganglah spuit dengan tangan kanan dan ujung telunjuk pada pangkal

jarum

10. Tegangkan kulit dengan jari telunjuk dan ibu jari kiri diatas pembuluh

darah supaya pembuluh darah tidak bergerak, kemudian tusukkan jarum

dengan sisi miring menghadap keatas dan membentuk sudut ± 30oC

11. Jarum dimasukkan sepanjang pembuluh darah ± 1 - 1½ cm

12. Dengan tangan kiri, pengisap spuit ditarik perlahan-lahan sehingga darah

masuk kedalam spuit, sementara itu kepalan tangan dibuka dan ikatan

pembendung direnggangkan atau dilepas sampai didapat sejumlah darah

yang dikehendaki

13. Letakkan kapas pada tempat tusukan, jarum ditarik Kembali

14. Pasangkan plester untuk menutup bekas tusukan pada lengan pasien

15. Alirkan darah yang terambil ke dalam tabung vacutainer EDTA

16. Segera bolak- balikkan vacutainer sesuai rekomendasi produsen tabung

 BAB
PEMERIKSAAN DARAH
VII

A. Antikoagulan EDTA (Etylendiamine Tetraacetic Acid)

Pemeriksaan hematologi pada umumnya memerlukan sampel darah yang

ditambah antikoagulan. Antikoagulan adalah bahan yang digunakan untuk

mencegah pembekuan darah. EDTA pada umumnya tersedia dalam bentuk garam

sodium/natrium (sequestrene Na2) atau potassium/kalium

(dipotassiumethylenediamine tetraacetic), mencegah koagulasi dengan cara

mengikat kalsium.

EDTA mempunyai keunggulan dibandingkan antikoagulan lainnya, yaitu

tidak mempengaruhi sel sel darah, sehingga ideal untuk uji hematologi. EDTA

ada tiga macam yaitu, dinatrium EDTA (Na2EDTA), dipotassium EDTA

(K2EDTA ) dan tripotassium EDTA (K3EDTA).Na2 EDTA dan K2 EDTA

biasanya digunakan dalam bentuk kering sedangkan K3 EDTA dalam bentuk cair.

Dari ketiga EDTA ini K2 EDTA yang paling baik dan dianjurkan oleh ICSH

(International Council for Standardization in Hematology ).

Perbandingan volume darah dengan antikoagulan tidak sesuai dapat

menyebabkan kesalahan pada hasil. EDTA kurang dari yang dibutuhkan

menyebabkan hitung trombosit menurun karena terjadi mikrotrombi di dalam

penampung yang dapat menyumbat alat, sedangkan bila berlebihan akan

menyebabkan sel membengkak kemudian disintegrasi, membentuk fragmen

dalam ukuran yang sama dengan trombosit sehingga terhitung oleh alat

penghitung elektronik, berakibat peningkatan palsu hitung jumlah trombosit, bila

disintegrasi ini membentuk fragmen dalam ukuran yang berbeda dengan ukuran
trombosit akan menyebabkan penurunan palsu hitung jumlah trombosit(Sacher

dan person, 2004).

B. Pemeriksaan Hitung Jumlah Trombosit

Metode pemeriksaan jumlah trombosit Pemeriksaan hitung trombosit dapat

dilakukan dengan metode langsung dan tidak langsung. Metode langsung dapat

dilakukan dengan metode Rees Ecker, metode Brecher Cronkite, dan metode

otomatis. Metode Rees Ecker dapat dilakukan dengan cara darah diencerkan

dengan larutan BCB (Brilliant Cresyl Blue), sehingga trombosit akan tercat terang

kebiruan. Trombosit dihitung dengan bilik hitung dibawah mikroskop,

kemungkinan kesalahan metode Rees Ecker 16-25% Metode Brecher Cronkite

dapat dilakukan dengan cara darah diencerkan dengan larutan amonium oksalat

1% untuk melisiskan eritrosit, trombosit dihitung pada bilik hitung menggunakan

mikroskop fase kontras. Kemungkinan kesalahan Brecher Cronkite 8-10%. Hitung

trombosit cara tak langsung dilakukan dengan metode Fonio dan estimasi jumlah

trombosit pada sediaan apus darah tepi (SADT).

a. Metode Fonio dilakukan menggunakan darah kapiler dicampur dengan

larutan magnesium sulfat 14% kemudian dibuat SADT dan dilakukan
pengecatan giemsa. Jumlah trombosit dihitung dalam 1000 eritrosit,
jumlah mutlak trombosit dapat diperhitungkan dari jumlah mutlak
eritrosit. Cara Fonio lebih kasar daripada cara langsung. Cara estimasi
jumlah trombosit pada SADT, semua hasil hitung trombosit baik normal
maupun abnormal yang diperiksa secara langsung harus dilakukan cross
check dengan SADT yang bertujuan untuk mengetahui ada tidaknya
perbedaan hitung trombosit secara langsung dan estimasi
b. Metode otomatis hematology analyzer Metode otomatis menggunakan
hematology analyzer yang berfungsi untuk pengukuran dan pemeriksaan
sel darah dalam sampel darah. Alat hematology analyzer memiliki
 beberapa kelebihan yaitu efisiensi waktu, volume sampel, dan ketepatan
hasil.
Pemeriksaan dengan hematology analyzer dapat dilakukan dengan cepat
hanya memerlukan waktu sekitar 45 detik. Sampel darah yang digunakan dapat
menggunakan darah perifer dengan jumlah darah yang lebih sedikit. Hasil yang
dikeluarkan alat ini biasanya sudah melalui quality control yang dilakukan oleh
intern laboratorium.
Beberapa kekurangan hematology analyzer antara lain tidak dapat menghitung
sel abnormal, misalnya sel-sel yang belum matang pada leukemia, infeksi
bakterial, sepsis dan sebagainya, dan tidak mampu menghitung ketika jumlah sel
sangat tinggi. Cross check menggunakan sediaan apus darah tepi sangat berarti.
Penggunaan alat hematology analyzer perlu mendapatkan perhatian khusus
dalam hal perawatan. Suhu ruangan harus dilakukan kontrol secara berkala,
reagen harus dalam penyimpanan yang baik, dan sampel dijaga supaya tidak
terjadi aglutinasi. Sampel darah yang digunakan adalah sampel darah yang sudah
ditambahkan antikoagulan. Apabila sampel yang digunakan terdapat darah yang
menggumpal, maka apabila terhisap alat akan merusak alat tersebut.
Prinsip kerja hematology analyzer adalah sampel darah yang sudah dicampur
dengan reagen dilusi sebanyak 200x proses hemolyzing untuk mengukur jumlah
leukosit. Selanjutnya sampel dilakukan dilusi lanjutan sebanyak 200x (jadi
40.000x) untuk mengukur eritrosit dan trombosit. Sampel diproses pada blok data
processing dan hasilnya akan ditampilkan pada monitor dan dicetak dengan mesin
print.
C. Pengukuran Jumlah Trombosit dengan Hematology Analyzer

Metode pengukuran hematology analyzer untuk menghitung jumlah trombosit

adalah dengan metode pengukuran sel atau disebut volumetric impedance. Metode

volumetric impedance menggunakan larutan elektrolit (diluent) yang dicampur

dengan sel-sel darah dihisap melalui aperture. Bilik pengukuran terdapat dua

electrode yang terdiri dari internal electrode dan eksternal, electrode yang terletak

dekat dengan aperture. Kedua elektroda tersebut dilewati arus listrik yang konstan

Apabila sel-sel darah melalui aperture maka hambatan antara kedua elektroda

tersebut akan naik dan terjadi tegangan yang sangat kecil sesuai dengan nilai

tahanannya.

Tegangan tersebut diterima oleh detection circuit, kemudian sinyal tegangan

tersebut dikuatkan atau diperbesar pada rangkaian amplifier dan dikirim ke 12

rangkaian elektronik. Rangkaian elektronik terdapat rangkaian Treshold Circuit

yang berfungsi untuk menghilangkan sinyal noise yang diakibatkan oleh elektrik

noise (gangguan listrik), debu, sisa-sisa cairan, dan partikel yang lebih kecil atau

lebih besar dari sel darah yang diukur (Infolabmed, 2017). Nilai puncak diperoleh

dengan sinyal dikirim ke A/D converter, kemudian data yang diperlukan disimpan

pada memori untuk setiap nilai maksimum.

Data tersebut akan dikoreksi oleh CPU dan akan ditampilkan pada layar LCD.

Jumlah sinyal untuk setiap ukuran sel disimpan pada memori dalam bentuk

histogram. Eritrosit dan trombosit yang dihitung memiliki ukuran yang berbeda

sehingga CPU dapat membedakan penghitungan untuk setiap jenis sel. Sedangkan

ketiga jenis sel leukosit yang dihitung memiliki ukuran sel yang hampir sama
sehingga CPU menggunakan histogram untuk membedakan populasi ketiga jenis

sel WBC.

Terkadang terdapat dua sel atau lebih yang melewati aperture secara

bersamaan, peristiwa tersebut disebut coincidence. Apabila larutan sampel sudah

cukup diencerkan dan dicampur, coincidence dapat diprediksi secara statistik

dengan tingkat keakuratan yang tinggi

 BAB
MENGIDENTIFIKASI HEMATOPOESIS
VIII

A. Hematopoiesis

Hematopoiesis merupakan proses produksi (mengganti sel yang mati) dan

perkembangan sel darah dari sel induk / asal / stem sel, dimana terjadi proliferasi,

maturasi dan diferensiasi sel yang terjadi secara serentak(Setiabudy, 2009).

Proliferasi sel menyebabkan peningkatan atau pelipat gandaan jumlah sel, dari

satu sel hematopoietik pluripotent menghasilkan sejumlah sel darah. Maturasi

merupakan proses pematangan sel darah, sedangkan diferensiasi menyebabkan

beberapa sel darah yang terbentuk memiliki sifat khusus yang berbeda-beda.

Tempat terjadinya hematopoiesis pada manusia :

1. Embrio dan Fetus

a. Stadium Mesoblastik, Minggu ke 3-6 s/d 3-4 bulan kehamilan : Sel-sel

mesenchym di yolk sac. Minggu ke 6 kehamilan produksi menurun

diganti organ-or

b. Stadium Hepatik, Minggu ke 6 s/d 5-10 bulan kehamilan : Menurun dalam

waktu relatif singkat. Terjadi di Limpa, hati, kelenjar limfe

c. Stadium Mieloid, Bulan ke 6 kehamilan sampai dengan lahir,

pembentukan di sumsum tulang : Eritrosit, leukosit, megakariosit.

2. Bayi sampai dengan dewasa Hematopoiesis terjadi pada sumsum tulang,

normal tidak diproduksi di hepar dan limpa, keadaan abnormal dibantu

organ lain.
 a. Hematopoiesis Meduler (N) Lahir sampai dengan 20 tahun : sel sel darah

→ sumsum tulang. Lebih dari 20 tahun : corpus tulang panjang berangsur

– angsur diganti oleh jaringan lemak karena produksi menurun.

b. Hematopoiesis Ekstrameduler (AbN) Dapat terjadi pada keadaan tertentu,

misal: Eritroblastosis foetalis, An.Peniciosa, Thallasemia, An.Sickle sel,

Spherositosis herediter, Leukemia. Organ – organ Ekstrameduler : Limpa,

hati, kelenjar adrenal, tulang rawan, ginjal, dll gan lain.

B. Macam – macam Hematopoiesis

1. Seri Eritrosit (Eritropoesis) Perkembangan eritrosit ditandai dengan

penyusutan ukuran (makin tua makin kecil), perubahan sitoplasma (dari

basofilik makin tua acidofilik), perubahan inti yaitu nukleoli makin hilang,

ukuran sel makin kecil, kromatin makin padat dan tebal, warna inti gelap.

Tahapan perkembangan eritrosit yaitu sebagai berikut :

a. Proeritroblas

Proeritroblas merupakan sel yang paling awal dikenal dari seri eritrosit.

Proeritroblas adalah sel yang terbesar, dengan diameter sekitar 15-20µm. Inti

mempunyai pola kromatin yang seragam, yang lebih nyata dari pada pola

kromatin hemositoblas, serta satu atau dua anak inti yang mencolok dan

sitoplasma bersifat basofil sedang. Setelah mengalami sejumlah pembelahan

mitosis, proeritroblas menjadi basofilik eritroblas.

b. Basofilik Eritroblas
 Basofilik Eritroblas agak lebih kecil daripada proeritroblas, dan

diameternya rata-rata 10µm. Intinya mempunyai heterokromatin padat dalam

jala-jala kasar, dan anak inti biasanya tidak jelas. Sitoplasmanya yang jarang

nampak basofil sekali.

c. Polikromatik Eritroblas (Rubrisit)

Polikromatik Eritoblas adalah Basofilik eritroblas yang membelah

berkali-kali secara mitotris, dan menghasilkan sel-sel yang memerlukan

hemoglobin yang cukup untuk dapat diperlihatkan di dalam sediaan yang

diwarnai. Setelah pewarnaan Leishman atau Giemsa, sitoplasma warnanya

berbeda-beda, dari biru ungu sampai lila atau abu-abu karena adanya

hemoglobin terwarna merah muda yang berbeda-beda di dalam sitoplasma

yang basofil dari eritroblas. Inti Polikromatik Eritroblas mempunyai jalan

kromatin lebih padat dari basofilik eritroblas, dan selnya lebih kecil.

d. Polikromatik Eritroblas (Normoblas)

Polikromatik Eritroblas membelah beberapa kali secara mitosis.

Normoblas lebih kecil daripada Polikromatik Eritroblas dan mengandung inti

yang lebih kecil yang terwarnai basofil padat. Intinya secara bertahap menjadi

piknotik. Tidak ada lagi aktivitas mitosis. Akhirnya inti dikeluarkan dari sel

bersama-sama dengan pinggiran tipis sitoplasma. Inti yang sudah dikeluarkan

dimakan oleh makrofagmakrofag yang ada di dalam stroma sumsum tulang

e. Retikulosit Retikulosit adalah sel-sel eritrosit muda yang kehilangan inti

selnya, dan mengandung sisa-sisa asam ribonukleat di dalam sitoplasmanya,

serta masih dapat mensintesis hemoglobin.

 Retikulosit dianggap kehilangan sumsum retikularnya sebelum

meninggalkan sumsum tulang, karena jumlah retikulosit dalam darah perifer

normal kurang dari satu persen dari jumlah eritrosit. Dalam keadaan normal

keempat tahap pertama sebelum menjadi retikulosit terdapat pada sumsung

tulang. Retikulosit terdapat baik pada sumsum tulang maupun darah tepi. Di

dalam sumsum tulang memerlukan waktu kurang lebih 2 – 3 hari untuk

menjadi matang, sesudah itu lepas ke dalam darah.

f. Eritrosit

Eritrosit merupakan produk akhir dari perkembangan eritropoesis. Sel ini

berbentuk lempengan bikonkaf dan dibentuk di sumsum tulang. Pada manusia,

sel ini berada di dalam sirkulasi selama kurang lebih 120 hari. Jumlah normal

pada tubuh laki – laki 5,4 juta/µl dan pada perempuan 4,8 juta/µl. setiap

eritrosit memiliki diameter sekitar 7,5 µm dan tebal 2 µm.

Perkembangan normal eritrosit tergantung pada banyak macammacam

faktor, termasuk adanya substansi asal (terutama globin, hem dan besi).

Faktor-faktor lain, seperti asam askorbat, vitamin B12, dan faktor intrinsic

(normal ada dalam getah lamung), yang berfungsi sebagai koenzim pada

proses sintesis, juga penting untuk pendewasaan normal eritrosit.

Pada sistem Eritropoesis dikenal juga istilah Eritropoiesis inefektif, yang

dimaksud Eritropoiesis inefektif adalah suatu proses penghancuran sel induk

eritroid yang prematur disumsum tulang. Choi, dkk, dalam studinya bahwa

pengukuran radio antara retikulosit di sumsum tulang terhadap retikulosit di

 darah tepi merupakan ukuran yang pentng untuk bisa memperkirakan beratnya

gangguan produksi SDM.

Seri Leukosit a. Leukosit Granulosit / myelosit Myelosit terdiri dari 3 jenis

yaitu neutrofil, eosinofil dan basofil yang mengandung granula spesifik yang

khas. Tahapan perkembangan myelosit yaitu :

1) Mieloblas Mieloblas adalah sel yang paling muda yang dapat dikenali

dari seri granulosit. Diameter berkisar antara 10-15µm. Intinya yang bulat dan

besar memperlihatkan kromatin halus serta satu atau dua anak inti.

2) Promielosit Sel ini agak lebih besar dari mielobas. Intinya bulat atau

lonjong, serta anak inti yang tak jelas.

3) Mielosit Promielosit berpoliferasi dan berdiferensiasi menjadi mielosit.

Pada proses diferensiasi timbul grnula spesifik, dengan ukuran, bentuk, dan sifat

terhadap pewarnaan yang memungkinkan seseorang mengenalnya sebagai

neutrofil, eosinofil, atau basofil. Diameter berkisar 10µm, inti mengadakan

cekungan dan mulai berbentuk seperti tapal kuda.

4) Metamielosit Setelah mielosit membelah berulang-ulang, sel menjadi

lebih kecil kemudian berhenti membelah. Sel-sel akhir pembelahan adalah

metamielosit. Metamielosit mengandung granula khas, intinya berbentuk

cekungan. Pada akhir tahap ini, metamielosit dikenal sebagai sel batang. Karena

sel-sel bertambah tua, inti berubah, membentuk lobus khusus dan jumlah lobi

bervariasi dari 3 sampai 5. Sel dewasa (granulosit bersegmen) masuk sinusoid-

sinusoid dan mencapai peredaran darah. Pada masing-masing tahap mielosit yang
tersebut di atas jumlah neutrofil jauh lebih banyak daripada eosinofil dan basofil.

b. Leukosit non granuler

1) Limfosit Sel-sel precursor limfosit adalah limfoblas, yang merupakan

sel berukuran relatif besar, berbentuk bulat. Intinya besar dan mengandung

kromatin yang relatif dengan anak inti mencolok. Sitoplasmanya homogen dan

basofil. Ketika limfoblas mengalami diferensiasi, kromatin intinya menjadi lebih

tebal dan padat dan granula azurofil terlihat dalam sitoplasma. Ukuran selnya

berkurang dan diberi nama prolimfosit. Sel-sel tersebut langsung menjadi limfosit

yang beredar.

2) Monosit Monosit awalnya adalah monoblas berkembang menjadi

promonosit. Sel ini berkembang menjadi monosit. Monosit meninggalkan darah

lalu masuk ke jaringan, disitu jangka hidupnya sebagai makrofag mungkin 70

hari.

C. Seri Trombosit (Trombopoesis) Pembentukan Megakariosit dan Keping-keping

darah Megakariosit adalah sel raksasa (diameter 30-100µm atau lebih). Inti

berlobi secara kompleks dan dihubungkan dengan benang-benang halus dari

bahan kromatin. Sitoplasma mengandung banyak granula azurofil dan

memperlihatkan sifat basofil setempat. Megakariosit membentuk tonjolantonjolan

sitoplasma yang akan dilepas sebagai keping-keping darah. Setelah sitoplasma

perifer lepas sebagai keping-keping darah, megakariosit mengeriput dan intinya

hancur.
 BAB
PEMERIKSAAN HEMOGLOBIN
IX

A. Definisi Hemoglobin

Hemoglobin adalah suatu protein tetrametrik dalam eritrosit yang

mengangkut oksigen ke jaringan dan mengembalikan karbon dioksida dan proton

ke paru-paru. Hemoglobin terdiri dari dua subunit polipeptida yang berlainan.

Komposisi subunit polipeptida tersebut adalah hemoglobin dewasa normal,

hemoglobin janin, dan hemoglobin sel sabit..

Hemoglobin adalah protein kompleks yang terdiri atas protein, globin, dan

pigmen hem yang mengandung zat besi. Hemoglobin salah satu bagian dari darah

dan hemoglobin memiliki peranan penting dalam pembentukan sel darah merah.

Hemoglobin merupakan salah satu protein yang paling penting dalam tubuh

manusia, karena fungsinya dalam transportasi oksigen dan karbondioksida,

kekurangan hemoglobin, berdampak pada kesehatan seperti kepala pusing, badan

lemah, lelah, kurang energi, kurang nafsu makan, daya konsentrasi menurun, jika

tidak dilakukan upaya peningkatan kadar hemoglobin menjadi normal seperti

anemia. Tingkat konsumsi protein sangat diperhatikan karena semakin rendah

tingkat konsumsi protein maka akan makin cenderung menderita anemia.

Hemoglobin merupakan molekul yang memiliki dua bagian utama yaitu

globin dan gugus heme, globulin merupakan suatu protein yang terbentuk dari

empat rantai polipeptida yang berlipat-lipat, sedangkan gugus heme merupakan

empat gugus nonprotein yang mengandung besi dengan masing-masing terikat ke

salah satu polipeptida pada globin. Masing-masing dari keempat atom besi dapat

berikatan secara reversibel dengan satu molekul oksigen, oleh karena itu setiap
molekul hemoglobin dapat mengambil empat molekul oksigen dari alveolus di

paru-paru, selain itu hemoglobin juga mengikat bagian ion hidrogen asam dari

asam karbonat terionosasi yang dihasilkan dari tingkat jaringan dari karbon

dioksida. Hemoglobin menyangga asam ini sehingga pH darah tetap normal.

Ada tiga jenis Hemoglobin yaitu :

a) HbA merupakan mayoritas dari hemoglobin orang dewasa, mempunyai rantai

globin 2 alfa dan 2 beta.

b) HbA2 merupakan minoritas dari hemoglobin orang dewasa, mempunyai rantai

globin 2 alfa dan 2 beta.

c) HbF merupakan hemoglobin fetal, mempunyai rantai globin 2 alfa dan 2

gamma. Saat bayi lahir 2/3 jenis hemoglobinnya adalah jenis hemoglobin HbF
dan 1/3nya adalah HbA. Menjelang usia 5 tahun menjadi HbA > 95 %, HbA2 <
3.5 % dan HbF < 1.5%

B. Struktur Hemoglobin
Hemoglobin terdiri dari 2 bagian utama, yaitu hem dan globin. Setiap molekul
hemolobin memiliki 4 gugus hem identik yang melekat pada 4 rantai globin,
keempat rantai globin tersebut merupakan rangkaian polipeptida yang terdiri dari
atas 2 buah rantai alfa (α) dan 2 buah rantai beta (β). Selain itu hemoglobin juga
memiliki 4 molekul nitrogen protoporphyrin IX, dan 4 atom besi dalam bentuk
(f2+) yang berpasangan dengan protoporphyrin IX untuk membentuk 4 molekul
hem, hem disintesis di mitokondria eritrosit sedangkan globin disintesis di sel
muda eritrosit(Sujud et all, 2015).
Fungsi Hemoglobin Menurut ada beberapa fungsi dari hemoglobin diantaranya
adalah sebagai berikut :

1) Mengikat Oksigen, protein dalam sel darah merah memiliki dungsi sebagai
mengikat oksigen yang akan disirkulasikan ke paru-paru.

2) Pertahanan Tubuh, sirkulasi darah yang terus dipompa oleh jantung dapat
mempertahankan tubuh dari serangan virus, bahan kimia, maupun bakteri. Darah
tersebut nantinya akan disaring oleh fungsi ginjal dan akan dikeluarkan melalui
urine sebagai hasil toksin dari tubuh.

3) Menyuplai Nutrisi, selain mengangkut oksigen, darah juga akan menyuplai

nutrisi ke jaringan tubuh dan mengangkut zat sebagai hasil dari metabolisme.

C. Kadar Hemoglobin

Kadar hemoglobin adalah ukuran pigmen respiratorik dalam butiranbutiran darah

merah. Hemoglobin kaya akan protein akan zat besi yang memiliki afinitas (daya
gabung) terhadap oksigen akan membentuk oxihemoglobin di dalam sel darah
merah, dengan melalui fungsi ini maka oksigen dibawa dari paruparu ke jaringan-
jaringan. Hemoglobin dapat diukur secara kimia jumlah Hb/100 ml darah dapat
digunakan sebagai indeks kapasitas pembawa oksigen pada darah.

D.Jenis-jenis Hemoglobin

Ada tiga jenis hemoglobin yang disintesis, yaitu hemoglobin embrio,

hemoglobin janin, dan hemoglobin orang dewasa. Maing-masing jenis
hemoglobin memiliki pengaturan khusus pada rantai globin dan setiap rantai
globin berada dibawah pengaruh kromosom tertentu. Asam amino adalah
komponen penting dari setiap rantai globin, posisikhas dari asam amino dalam
setiap rantai , serta kekhususan dari asam amino itu sendiri adalah penting untuk
fungsi normal dari molekul hemoglobin. Kelainan struktural dari rantai protein
dapat menyebabkan cacat hemoglobin.

Faktor Yang Mempengaruhi Hemoglobin ,ada beberapa faktor yang dapat

mempengaruhi kadar hemoglobin, yaitu:
1. Kecukupan Zat Besi dalam tubuh Zat besi dibutuhkan untuk produksi
hemoglobin. Besi merupakan mikronutrien yang berperan penting untuk produksi
hemoglobin dalam sel darah merah, itu sebabnya mengapa anemia gizi besi dapat
menyebabkan kadar hemoglobin rendah, karena terbentuknya sel darah merah
menjadi lebih kecil.

2. Usia Orang tua, anak-anak, wanita hamil, dan wanita yang sedang menstruasi
akan lebih rentan mengalami penurunan kadar hemoglobin, karena pada anakanak
biasanya diakaibatkan oleh suatu pertumbuhan yang sangat pesat dan tidak
seimbangnya asupan zat besi yang cukup dan pola makan yang tidak teratur.

3. Jenis Kelamin Perempuan dinilai lebih mudah mengalami penurunan kadar

hemoglobin daripada laki-laki, salah satunya saat perempuan mengalami
menstruasi yang menyebabkan keluarnya darah yang sangat banyak yang terjadi
selama beberapa hari, oleh karena itu perempuan akan mengalami penurunan
kadar hemoglobin.

4. Penyakit Sistemik Beberapa penyakit seperti thalasemia, leukimia, dan

tuberkolosis juga dapat mempengaruhi kadar hemoglobin, karena penyakit
tersebut dapat mempengaruhi sel darah merah yang disebabkan oleh adanya
gangguan pada sumsum tulang.

5. Obat Diuretik Kafein menyebabkan hampir semua pemeriksaan subsrat dan

enzim dalam darah akan meningkat, karena terjadinya hemokonsentrasi terutama
pada pemeriksaan hemoglobin, hematokrit, elektrolit, dan pemeriksaan hitung
jenis leukosit, sedangkan pada urine akan terjadi pengenceran.

6. Tablet Besi Obat suplemen zat besi yang sering dikonsumsi juga dapat
meningkatkan kadar hemoglobin

7. Teh Kebiasaan mengkonsumsi teh setiap hari dapat menghambat penyerapan

zat besi, sehingga hal ini akan menyebabkan penurunan kadar hemoglobin.

8. Obat Pengontrol Hipertensi Obat-obatan yang sering dipakai untuk mengontrol

hipertensi (tekanan darah tinggi) juga dapat berpengaruh terhadap nilai kadar
hemoglobin.
E. Metode Pemeriksaann Kadar Hemoglobin

1) Metode sahli

Pada pemeriksaan kadar kadar hemoglobin metode sahli prinsip yang

digunakan pada pemeriksaan ini adalah hemoglobin diubah menjadi hematin
asam, kemudian warnanya dibandingkan secara visual dengan standart dalam alat
itu, metode ini dinilai lemah karena larutan pada hematin asam buakn larutan
sejati dan alat yang di estimasi tidak dapat di standartkan, catra ini juga dinilai
tidak teliti karena tidak semua hemoglobin seperti karboxyhemoglobin,
methemoglobin, dan sulfhemoglobin bisa diubah menjadi hematin asam.

2) Metode Cyanmeth

Pada pemeriksaan metode cyanmeth menggunakan prinsip pemeriksaan yaitu

darah yang susdah diencerkan dengan larutan drabkin akan terjadi hemolysis
eritrosit dan korvensi hemoglobin diubah menjadi cyanmethemoglobin. Kemudian
larutan yang sudah terbentuk diperiksa menggunakan spektrofotometer yang
absorbansinya sebanding dengan kadar hemoglobin dalam darah, metode
fotometrik cyanmethemoglobin dinilai metode estimasi kadar hemoglobin yang
paling akurat.

3) Metode Tallquist

Prinsip kerja pada metode tallquist adalah membandingkan darah asli dengan
skala warna yang bertingkat-tingkat mulai dari warna merah muda sampai merah
tua, metode tallquist menggunakan skala warna mulai dari merah muda 10% dan
di tengah-tengah ada bagian yang sengaja dilubangi, dimana darah dapat
diperbandingkan secara langsung.

4) Metode Impedensi Cyanide Free

Hemoglobin Metode ini menghitung dan mengukur sel-sel darah secara

otomatis berdasarkan variasi impedensi aliran listrik terhadap sel-sel yang
dilewatkan oleh berkas cahaya, prinsip yang digunakan adalah pengukuran jumlah
dan sifat-sifat sel yang dibungkus oleh cairan akan dialirkan melalui celah sempit
sehingga sel dapat lewat satu per satu dan kemudian dilakukan perhitungan
jumlah sel dan ukurannya.

E.Dampak Kekurangan Hemoglobin

Ada beberapa dampak dari kekurangan hemoglobin diantaranya sebagai berikut :

1) Mata berkunang-kunang, yaitu respon dari syaraf pusat akibat kurangnya

oksigen ke otak dan mengganggu ke syaraf mata

2) Sering pusing, yaitu respon dari sitem syaraf pusat akibat otak yang mengalami
kekurangan pasokan oksigen dan memerlukan energi yang banyak

3) Lelah, letih, lesu, lunglai

4) Nafas cepat dan sesak nafas, yaitu respon dari sistem kardiovaskular, jika
hemoglobin berkurang, maka kebutuhan oksigen untuk obat jantung juga
berkurang

5). Wajah pucat merupakan respon dari jaringan epitel, hemoglobin yang
mewarnai sel darah merah menjadi merah dan akan tampak pucat.
 BAB
PEMERIKSAAN HEMOGLOBIN
X

A. Pemeriksaan Kadar Hemoglobin

Metode Talquist

1. Metode : Talquist

2. Prinsip : Warna darah yang menempel pada kertas saring talquist

dibandingkan dengan warna standar yang tersedia pada buku talquis.Standar
menunjukkan kadar Hb dalam prosentase. Kadar Hb 100 % setara dengan 15,8
gr/dl 3(Sugiono, 2011).

Alat : a. Kapas alkohol 70 % b. Blood lancet c. Kertas saring dan buku talquis

4. Prosedur kerja:

a. Lakukan sterilisasi lokal dengan kapas alkohol 70 %

b. Lakukan tusukan perifer (hapus tetes pertama yang keluar)

c. Teteskan setetes darah pada kertas saring talquis

d. Setelah merata cocokkan warnanya dengan standar warna yang ada pada
buku talquis

e. Baca prosentasenya pada warna standar pada buku talquist

5. Nilai Normal : Prosentase minimal 80 % Catatan : Metode ini tidak

dianjurkan untuk digunakan karena akurasinya kurang dan tingkat kesalahan
antara 25- 50%. Metode ini sudah jarang digunakan, kadangkadang digunakan
dalam keadaan darurat.

B. Pemeriksaan Kadar Hemoglobin Metode Sahli

1. Metode : Sahli ( kolorimetris )

2. Reagensia : a. HCl 0.1 N b. Alkohol 70 % c. Edta d. Aquadest

3. Prinsip : Hemoglobin diubah menjadi hematin asam dengan bantuan larutan

HCl 0.1 N, kemudian warna yang erjadi dibandingkan secara visual dengan
warna standar.
4. Bahan : Darah kapiler

5. Alat yang dipakai :

a. Hemoglobinometer , yang terdiri atas:  Gelas berwarna coklat (warna

standar)  Tabung hemometer/tabung pengencer  Pipet hemoglobin yang
mempunyai rumus 20 cmm  Pengaduk dari gelas

b. Pipet pasteur

c. Blood lancet

d. Kapas

6. Prosedur :

a. Isi 5 tetes larutan HCl 0.1 N kedalam tabung pengencer

b. Hisap darah dengan menggunakn pipet hemoglobin sampai tepat pada

tanda 20 cmm

c. Bersihkan bagian luar ujung pipet dengan kapas kẻring

d. Darah ditiup hati-hati ke dalam larutan HCl 0.1N dalam tabung pengencer
tanpa menimbulkan gelembung udara

e. Sebelum dikeluarkan, bilas pipet 2 sampai 3 kali kedalam larutan HCl 0.1N
dengan menghisap dan meniup HCl 0.1N ke dalam tabung pengencer

f. Campurlah darah dengan HCl 0.1 N g. Encerkan dengan aquadest tetes demi
tetes sambil điaduk sampai đidapatkan warna yang sama dengan warna
standar

h. Baca pada minicus bawah dan nyatakan dalam % atau gr/dl

7. Harga nỏmal :

a. Wanita : 11 - 15 gr/dl

b. Pria : 13 - 17 gr/d

c. Bayi : 17 - 23 gr/dl
Catatan : Pemeriksaan kadar hemoglobin metode sahli ini sudah mulai
ditinggalkan karena tingkat akurasinya yang belum optimal , karena alat ini
tidak distandarisasi ulang

Pemeriksaan Hb sahli ini sewaktu-waktu dapat mengalami kesalahan karena :

1. Volume pipet hb tidak tepat 20 cmm

2. Warna standar sering sudah pucat

3. Pengambilan darah yang kurang baik

4. Reagen yang digunakan kurang sempurna Tingkat kesalahan berkisar antara

5 sampai 10 %

C. Pemeriksaan Kadar Hemoglobin Metode Falling Drop

1. Metode : Melakukan pemeriksaan kadar Hemoglobin dengan larutan

CUSO4 BJ 1.053 dan BJ 1.062 (Susilo,2014).

2. Prinsip :

 Larutan CuSO4 Bj 1.053 Larutan ini setara dengan kadar hemoglobin 12.5
gr/dl Pada pemeriksaan kadar Hb, tetesan darah harus “TENGGELAM”.

 Larutan CuSO4 Bj 1.062 Larutan ini setara dengan kadar hemoglobin 16.9
gr/dl Pada pemeriksaan kadar Hb, tetesan darah harus “TERAPUNG”

F. Alat :
 Backer glass ukuran 50 ml.
 Blood lancet
 Capillary tube  Kassa Steril  Alkohol Swab
G. Reagen :
 CuSO4 BJ 1.053

 CuSO4 BJ 1.062

5. Cara Kerja :

a. Siapkan 2 buah beaker glass ukuran 50 ml, beri identitas masing-masing

Dengan tanda Bj : 1.053 dan Bj : 1.062 ( maksimal untuk 20 pemeriksaan)

b. Ke dalam beaker glass Bj : 1.053 masukkan larutan CuSO4 Bj 1.053

sebanyak 40 ml ( untuk 20 pemeriksaan )

c. Ke dalam beaker glass Bj : 1.062 masukkan larutan CuSo4 Bj 1.062

sebanyak 40 ml ( Untuk 20 pemeriksaan )

d. Desinfeksi ujung jari donor dengan alkohol swab, Dengan cara dari ujung
jari menuju ke pangkal jari

e. Tusuk jari manis dengan posisi Vertikal,menggunakan blood lancet

f. Usap jari donor dengan kassa steril dari ujung jari menuju ke pangkal jari

g. Ambil darah donor dengan menggunakan capilari tube dari lubang yang
ada anticoagulant heparin ( warna merah ) sampai hampir penuh.

h. Teteskan darah kapiler posisi tegak lurus dengan jarak tetesan ±2-3 cm dari
permukaan larutan masing-masing 1 tetes ke dalam 2 jenis larutan tersebut.

i. Perhatikan tetesan darah tersebut dalam waktu 15 detik. 6. Interpretasi hasil

:
 BAB
PEMERIKSAAN LEUKOSIT
XI

A. Pengertian Leukosit
Leukosit merupakan sel darah putih yang diproduksi oleh jaringan
hemopoetik untuk jenis bergranula (polimorfonuklear) dan jaringan limpatik
untuk jenis tak bergranula (mononuklear), berfungsi dalam sistem pertahanan
tubuh terhadap infeksi.

Leukosit paling sedikit dalam tubuh jumlahnya sekitar 4.000-11.000/mm3

. Berfungsi untuk melindungi tubuh dari infeksi. Karena itu, jumlah leukosit
tersebut berubah-ubah dari waktu ke waktu, sesuai dengan jumlah benda asing
yang dihadapi dalam batas-batas yang masih dapat ditoleransi tubuh tanpa
menimbulkan gangguan fungsi. Meskipun leukosit merupakan sel darah, tapi
fungsi leukosit lebih banyak dilakukan di dalam jaringan. Leukosit hanya
bersifat sementara mengikuti aliran darah ke seluruh tubuh. Apabila terjadi
peradangan pada jaringan tubuh leukosit akan pindah menuju jaringan yang
mengalami radang dengan cara menembus dinding kapiler.

B. Jenis-Jenis Leukosit
Leukosit terdiri dari 2 kategori yaitu granulosit dan agranulosit.

a. Granulosit, yaitu sel darah putih yang di dalam sitoplasmanya terdapat

granulagranula. Granula-granula ini mempunyai perbedaan kemampuan
mengikat warna misalnya pada eosinofil mempunyai granula berwarna merah
terang, basofil berwarna biru dan neutrofil berwarna ungu pucat.

b. Agranulosit, merupakan bagian dari sel darah putih dimana mempunyai inti
sel satu lobus dan sitoplasmanya tidak bergranula. Leukosit yang termasuk
agranulosit adalah limfosit, dan monosit.

Limfosit terdiri dari limfosit B yang membentuk imunitas humoral dan

limfosit T yang membentuk imunitas selular. Limfosit B memproduksi
antibodi jika terdapat antigen, sedangkan limfosit T langsung berhubungan
dengan benda asing untuk difagosit. Ada tidaknya granula dalam leukosit serta
sifat dan reaksinya terhadap zat warna, merupakan ciri khas dari jenis leukosit.
Selain bentuk dan ukuran, granula menjadi bagian penting dalam menentukan
jenis leukosit.

Dalam keadaan normal leukosit yang dapat dijumpai menurut ukuran

yang telah dibakukan adalah basofil, eosinofil, neutrofil batang, neutrofil
segmen, limfosit dan monosit. Keenam jenis sel tersebut berbeda dalam
ukuran, bentuk, inti, warna sitoplasma serta granula didalamnya.

1. Neutrofil
Neutrofil berukuran sekitar 14 μm, granulanya berbentuk butiran halus
tipis dengan sifat netral sehingga terjadi percampuran warna asam (eosin) dan
warna basa (metilen biru), sedang pada granula menghasilkan warna ungu
atau merah muda yang samar. Neutrofil berfungsi sebagai garis pertahanan
tubuh terhadap zat asing terutama terhadap bakteri. Bersifat fagosit dan dapat
masuk ke dalam jaringan yang terinfeksi. Sirkulasi neutrofil dalam darah
yaitu sekitar 10 jam dan dapat hidup selama 1-4 hari pada saat berada dalam
jaringan ekstravaskuler.

Neutrofil adalah jenis sel leukosit yang paling banyak yaitu sekitar 50-
70% diantara sel leukosit yang lain. Ada dua macam netrofil yaitu neutrofil
batang (stab) dan neutrofil segmen (polimorfonuklear). Perbedaan dari
keduanya yaitu neutrofil batang merupakan bentuk muda dari neutrofil
segmen sering disebut sebagai neutrofil tapal kuda karena mempunyai inti
berbentuk seperti tapal kuda. Seiring dengan proses pematangan, bentuk
intinya akan bersegmen dan akan menjadi neutrofil segmen. Sel neutrofil
mempunyai sitoplasma luas berwarna pink pucat dan granula halus berwarna
ungu.

Neutrofil segmen mempunyai granula sitoplasma yang tampak tipis

(pucat), sering juga disebut neutrofil polimorfonuklear karena inti selnya
terdiri atas 2-5 segmen (lobus) yang bentuknya bermacam-macam dan
dihubungkan dengan benang kromatin. Jumlah neutrofil segmen yaitu
sebanyak 3-6, dan bila lebih dari 6 jumlahnya maka disebut dengan neutrofil
hipersegmen (Kiswari,2014).
 Peningkatan jumlah neutrofil disebut netrofilia. Neutrofilia dapat terjadi
karena respon fisiologik terhadap stres, misalnya karena olah raga, cuaca yang
ekstrim, perdarahan atau hemolisis akut, melahirkan, dan stres emosi akut.
Keadaan patologis yang menyebabkan netrofilia diantaranya infeksi akut,
radang atau inflamasi, kerusakan jaringan, gangguan metabolik, apendisitis
dan leukemia mielositik. Sedangkan penurunan jumlah neutrofil disebut
dengan neutropenia, neutropenia ditemukan pada penyakit virus,
hipersplenisme, leukemia, granolositosis, anemia, pengaruh obat-obatan.

2. Eosinofil

Eosinofil dalam tubuh yaitu sekitar 1-6%, berukuran 16 μm. Berfungsi

sebagai fagositosis dan menghasilkan antibodi terhadap antigen yang
dikeluarkan oleh parasit. Masa hidup eosinofil lebih lama dari neutrofil yaitu
sekitar 8-12 jam. Eosinofil hampir sama dengan neutrofil tapi pada eosinofil,
granula sitoplasma lebih kasar dan berwarna merah orange. Warna kemerahan
disebabkan adanya senyawa protein kation (yang bersifat basa) mengikat zat
warna golongan anilin asam seperti eosin, yang terdapat pada pewarnaan
Giemsa.

Granulanya sama besar dan teratur seperti gelembung dan jarang

ditemukan lebih dari 3 lobus inti. Eosinofil lebih lama dalam darah
dibandingkan neutrophil Eosinofil akan meningkat jumlahnya ketika
ditemukan penyakit alergi, penyakit parasitik, penyakit kulit, kanker, flebitis,
tromboflebitis, leukemia mielositik kronik (CML), emfisema dan penyakit
ginjal. Sedangkan pada orang stres, pemberian steroid per oral atau injeksi,
luka bakar, syok dan hiperfungsiadrenokortikal akan ditemukan jumlah
eosinofil yang menurun

3. Basofil
Basofil adalah jenis leukosit yang paling sedikit jumlahnya yaitu kira-
kira kurang dari 2% dari jumlah keseluruhan leukosit. Sel ini memiliki ukuran
sekitar 14 μm, granula memiliki ukuran bervariasi dengan susunan tidak
teratur hingga menutupi nukleus dan bersifat azrofilik sehingga berwarna
gelap jika dilakukan pewarnaan Giemsa. Basofil memiliki granula kasar
berwarna ungu atau biru tua dan seringkali menutupi inti sel, dan bersegmen.
Warna kebiruan disebabkan karena banyaknya granula yang berisi
histamin, yaitu suatu senyawa amina biogenik yang merupakan metabolit dari
asam amino histidin. Basofil jarang ditemukan dalam darah normal. Selama
proses peradangan akan menghasilkan senyawa kimia berupa heparin,
histamin, beradikinin dan serotonin. Basofil berperan dalam reaksi
hipersensitifitas yang berhubungan dengan imunoglobulin E (IgE) 4. Monosit
Jumlah monosit kira-kira 3-8% dari total jumlah leukosit. Monosit memiliki
dua fungsi yaitu sebagai fagosit mikroorganisme (khusunya jamur dan bakteri)
serta berperan dalam reaksi imun (Kiswari,2014).
a. Monosit merupakan sel leukosit yang memiliki ukuran paling besar
yaitu sekitar 18 μm, berinti padat dan melekuk seperti ginjal atau biji
kacang, sitoplasma tidak mengandung granula dengan masa hidup 20-40
jam dalam sirkulasi. Inti biasanya eksentris, adanya lekukan yang dalam
berbentuk tapal kuda. Granula azurofil, merupakan lisosom primer, lebih
banyak tapi lebih kecil. Ditemui retikulim endoplasma sedikit. Juga
ribosom, pliribosom sedikit, banyak mitokondria.
Aparatus Golgi berkembang dengan baik, ditemukan mikrofilamen dan
mikrotubulus pada daerah identasi inti. Monosit terdapat dalam darah,
jaringan ikat dan rongga tubuh. Monosit tergolong fagositik mononuclear
(system retikuloendotel) dan mempunyai tempat-tempat reseptor pada
permukaan membrannya 5.
b. Limfosit
Limfosit adalah jenis leukosit kedua paling banyak setelah neutrofil
(20- 40% dari total leukosit). Jumlah limfosit pada anak-anak relatif lebih
banyak dibandingkan jumlah orang dewasa, dan jumlah limfosit ini akan
meningkat bila terjadi infeksi virus. Berdasarkan fungsinya limfosit dibagi
atas limfosit B dan limfosit T. Limfosit B matang pada sumsum tulang
sedangkan limfosit T matang dalam timus. Keduanya tidak dapat
dibedakan dalam pewarnaan Giemsa karena memiliki morfologi yang
sama dengan bentuk bulat dengan ukuran 12 μm. Sitoplasma sedikit
 karena semua bagian sel hampir ditutupi nukleus padat dan tidak
bergranula.
Limfosit B berasal dari sel stem di dalam sumsum tulang dan tumbuh
menjadi sel plasma, yang menghasilkan antibodi. Limfosit T terbentuk jika
sel stem dari sumsum tulang pindah ke kelenjar thymus yang akan
mengalami pembelahan dan pematangan. Di dalam kelenjar thymus,
limfosit T belajar membedakan mana benda asing dan mana bukan benda
asing. Limfosit T dewasa meninggalkan kelenjar thymus dan masuk ke
dalam pembuluh getah bening dan berfungsi sebagai bagian dari sistem
pengawasan kekebalan

C. Hemopoisis Sel Darah Putih / Lekosit

a. Seri granulosit
1. Mieloblast
Mieloblast adalah sel termuda diantara seri granulosit. Sel ini
memiliki inti bulat yang berwarna biru kemerah-merahan, dengan satu
atau lebih anak inti, kromatin inti halus dan tidak menggumpal. Sitoplasma
berwarna biru dan sekitar inti menunjukkan warna yang lebih muda.
Mieloblast biasanya lebih kecil daripada rubriblast dan sitoplasmanya
kurang biru dibandingkan rubriblast. Jumlahnya dalam sumsum tulang
normal adalah < 1% dari jumlah sel berinti.
1. Promielosit
Dalam fase ini sitoplasma seri granulosit telah memperlihatkan
granula berwarna biru tua / biru kemerah-merahan. Berbentuk bulat dan
tidak teratur. Granula sering tampak menutupi inti. Granula ini terdiri dari
lisozom yang mengandung mieloperoksidase, fosfatase asam, protease dan
lisozim. Inti promielosit biasanya bulat dan besar dengan struktur kromatin
kasar. Anak inti masih ada tetapi biasanya tidak jelas. Jumlah sel ini dalam
sumsum tulang normal adalah 1-5 %.
2. Mielosit
Pada mielosit granula sudah menunjukkan diferensiasi yaitu telah
mengandung laktoferin, lisozim peroksidase dan fosfatase lindi. Inti sel
mungkin bulat atau lonjong atau mendatar pada satu sisi, tidak tampak
 anak inti, sedangkan kromatin menebal. Sitoplasma sel lebih banyak
dibandingkan dengan promielosit. Jumlahnya dalam keadaan normal
adalah 2-10 %.
3. Metamielosit
Dalam proses pematangan, inti sel membentuk lekukan sehingga
sel berbentuk seperti kacang merah, kromatin menggumpal walaupun
tidak terlalu padat. Sitoplasma mengandung granula kecil berwarna
kemerah-merahan. Sel ini dalam keadaan normal tetap berada dalam
sumsum tulang dengan jumlah 5-15 %.
4. Neutrofil Batang dan Segmen
Metamielosit menjadi batang apabila lekukan pada inti melebihi
setengah ukuran inti yang bulat sehingga berbentuk seperti batang yang
lengkung. Inti menunjukkan proses degeneratif, kadang-kadang tampak
piknotik pada kedua ujung inti. Sitoplasma mengandung granula halus
berwarna kemerah merahan. Dalam darah tepi ditemukan hanya 2-6% dari
sel-sel leukosit normal. Selanjutnya sel ini menjadi neutrofil
segmen.Dalam sumsum tulang normal sel ini merupakan 10-40 % dari sel
berinti.
b. Seri Limfosit
1. Limfoblast dan Prolimfosit
Limfoblast memiliki inti bulat berukuran besar dengan satu atau
beberapa anak inti, kromatin inti tipis rata dan tidak menggumpal.
Sitoplasma sedikit dan berwarna biru. Prolimfosit menunjukkan kromatin
lebih kasar tetapi belum menggumpal seperti limfosit. Kadang-kadang
sulit membedakan limfoblast dari limfosit dan pada keadaan ragu-ragu
dianjurkan untuk menganggap sel itu sebagai limfosit
. 2. Limfosit Ada yang besar (limposit besar), ada yang sedang (limposit
sedang), ada yang kecil (limposit kecil). Inti sel, letaknya dalam sel
eksentrik, Bentuk inti Oval / bulat dan relatif besar, Warna inti Biru gelap,
Kromatin kompak memadat, Membran inti kurang jelas terlihat, Butir
inti(nucleoli) tidak ada, sitoplasma, luasnya/lebarnya relatif sempit,Warna
sitoplasma Oxyphil, Perinuklear Zone umumnya tidak ada,Granula dalam
 sitoplasma tidak ada. Kalau ada granula disebut granula Azurophil. c. Seri
Monosit
1. Monoblast dan Promonosit

Monoblast dan promonosit dalam keadaan normal sulit dikenal atau

dibedakan dari mieloblast dalam sumsum tulang, tetapi pada keadaan
abnormal misalnya pada proliferasi berlebihan sel seri ini, monobalst dan
promonosit dapat dikenali dari intinya yang memperlihatkan lekukan
terlipat atau menyerupai gambaran otak dan sitoplasma dengan
pseudopodia.

2. Monosit Inti sel letaknya dalam sel eksentrik.

Bentuk inti menyerupai otak (brain like form), Warna inti kemerah-
merahan/keunguan, Kromatin tersusun lebih kasar, butir inti (nucleoli)
tidak ada, Sitoplasma, Luasnya/lebarnya relatif lebih besar kadangkadang
ada pseudopodia, Warna sitoplasma biru pucat, Perinuklear Zone tidak
ada, Granula dalam sitoplasma kadang-kadang ada granula Azurophil.

A. Kelainan Morfologi Leukosit Kelainan morfologi leukosit ada 2 macam,

diantaranya: a. Kelainan sitoplasma
1. Granulasi toksik (infeksi akut, luka bakar dan intoksikasi)
2. Granulasi polimorfonuklear (leukemia dan sindrom mielodisplasia)
3. Badan dohle (keracunan, luka bakar dan infeksi berat)
4. Batang aurer (leukemia myeloid akut)
5. Limpositik plasma biru (infeksi virus dan mononucleosis infeksiosa)
Smudge sel (leukemia limfosit kronik) Vakuolisasi (keracunan dan infeksi
berat).
b. Kelainan inti sel
1. Hipersegmentasi (anemia megaloblastik, infeksi, uremia dan GGK)
2. Intipiknotik (sepsis dan leukemia)
3. Anomaly pelgerhuet (leukemia kronik mielodisplastik)
 BAB
PEMERIKSAAN LEUKOSIT
XII
A. Pemeriksaan Hitung Jumlah Lekosit
1. Metode : Mikrovisual

2. Prinsip : Darah diencerkan dalam pipet leukosit, kemudian dimasukkan

dalam kamar hitung. Jumlah leukosit dihitung dalam volume tertentu,
dengan menggunakan faktor konversi jumlah leukosit per ul darah dapat
diperhitungkan

3. Bahan pemeriksan :

a. Darah kapiler

b. Darah vena dengan anticoagulan (EDTA, Oxalat)

4. Alat yang dipakai :

a. Pipet thoma leukosit

b. Kamar hitung improved neubauer

c. Dek glass

d. Mikroskop

5. Reagent :

a. Larutan turk,yang mempunyai susunan sebagai berikut :

 Larutan gentian violet 1% dalam air 1 ml

 Asam asetat glacial 1 ml

 Aquadest ad 100 ml Saringlah sebelum dipakai

b. HCl 1% Ini dalah suatu larutan pengencer yang bagus untuk

mengerjakan angka leukosit, karena larutan ini bekerja dengan cepat dan
cukup untuk menghemolisakan semua eritrosit yang tidak bernukleus.

6. Prosedur :

a. Mengisi Pipet Leukosit :

1) Isaplah darah sampai garis tanda 0.5 tepat

2) Hapuslah kelebihan darah yang melekat pada ujung pipet

3) Masukkan ujung pipet dalam larutan turk sambil menahan darah pada
garis tanda tadi. Pipet dipegang dengan sudut 45º dan larutan turk dihisap
perlahan-lahan Sampai tanda 11. Hati-hatilah jangan sampai terjadi
gelembung udara.

4) Angkatlah pipet dari cairan, tutup ujung pipet dengan ujung jari lalu
lepaskan karet penghisap.

5) Kocoklah pipet itu selama 15-30 detik. Jika tidak segera akan dihitung,
letakkanlah dalam sikap horizontal.

b. Mengisi Kamar Hitung :

1) Letakkanlah kamar hitung yang bersih benar dengan kaca penutupnya

terpasang mendatar diatas meja.

2) Kocoklah pipet yang diisi tadi selama 3 menit terus menerus, jagalah
jangan sampai ada cairan terbuang dari dalam pipet itu waktu mengocok.

3) Buanglah cairan yang ada di dalam batang kapiler pipet (3 atau 4 tetes)
dan segeralah sentuhkan ujung pipet itu dengan sudut 30º pada permukaan
kamar hitung dengan menyinggung pinggir kaca penutup. Biarkan kamar
hitung itu terisi cairan perlahan-lahan dengan daya kapilaritasnya sendiri.

4) Biarkanlah kamar hitung itu selama 2 atau 3 menit agar leukosit dapat
mengendap.

c. Menghitung Jumlah Sel :

1) Pakailah lensa obyektif kecil, yaitu dengan pembesaran 10 kali.

Turunkan lensa kondensor atau kecilkan diafragma. Meja mikroskop harus
datar sikapnya.

2) Kamar hitung dengan bidang bergarisnya diletakkan dibawah obyektif

dari focus mikroskop diarahkan pada garis bagi itu. Dengan sendirinya
leukosit jelas terlihat.
3) Hitunglah semua leukosit yang terdapat dalam keempat bidang besar
pada sudutsudut seluruh permukaan yang dibagi.

a) Mulailah menghitung sel dari sudut kiri atas, terus ke kanan kemudian
turun ke bawah dan kanan kiri lalu turun lagi ke bawah dan dimulai lagi
dari kiri ke kanan. Cara seperti ini dilakukan pada keempat bidang besar.

b) Kadang-kadang ada sel yang letaknya menyinggung garis batas sesuatu

bidang. Sel-sel yang menyinggung garis batas sebelah kiri atau garis atas
haruslah dihitung. Sebaliknya sel-sel yang menyingung garis batas sebelah
kanan atau bawah tidak boleh dihitung.

Perhitungan :

Jumlah lekosit = N x Fb x P = N x 2.5 x 20

N = Jumlah lekosit dalam 4 kotak W

Fb = Faktor Bilik Hitung

P = Pengenceran Catatan : 1µL = 1 mm3

Harga Normal : 4000-10.000/µL

Wanita : 3.7 – 5.4 Juta/µL Pria : 3.9 – 5.9 Juta/µL

 BAB
PEMERIKSAAN TROMBOSIT
XIII

A. Trombosit
Trombosit (keping - keping darah) merupakan hasil akhir dari trombopoiesis
dengan ciri-ciri sebagai berikut :

 Berbentuk elemen paling kecil dalam sediaan hapusan darah ±1/5 –1/4 dari
besar eritrosit.

 Terdiri dari sitoplasma basofilik pucat.

A. Pemeriksaan Hitung Jumlah Trombosit Secara Langsung (Direct)

Metode : Mikrovisual

2. Prinsip : Darah diencerkan dengan suatu larutan yang mengandung brilliant

cresyl blue yang akan mengecat trombosit menjadi berwarna agak biru muda.
Kemudian trombositnya dihitung dengan menggunakan kamar hitung

3. Bahan : Darah kapiler atau darah vena dengan anticoagulan (EDTA)

4. Alat yang dipakai :

a. Pipet thoma eritrosit

b. Kamar hitung improved Neubauer

c. Dek glass

d. Mikroskop

5. Reagent : Larutan Rees dan Ecker

6. Prosedur :
a. Isaplah cairan rees ecker kedalam pipet eritrosit sampai garis tanda 1 dan
buanglah lagi cairan itu

b. Isap darah sampai garis tanda 0,5 dan cairan rees ecker sampai 101.
Segeralah kocok selama 3 menit

c. Teruskan tindakan seperti untuk menghitung eritrosit dalam kamar hitung

d. Biarkan kamar hitung yang telah diisi dengan sikap datar dalam cawan petri
yang tertutup selama 10 menit agar trombosit mengendap

e. Hitunglah semua trombosit dalam seluruh bidang besar ditengah-tengah

(1mm2 ) memakai lensa obyektif besar ( dihitung 25 kotak R besar)

7. Perhitungan : Jumlah Trombosit = N x Fb x P = N x 10 x 200

N = Jumlah Trombosit dalam 25 kotak R besar

Fb = Faktor Bilik Hitung

P = Pengenceran Catatan : 1µL = 1 mm3 8. Harga Normal : 150.000 –

400.000/µL
 BAB
PEMERIKSAAN ERITROSIT
XIV

A. Eritrosit
Istilah lain dari eritrosit (sel darah merah) adalah normosit yang
merupakan tahapan terakhir dari eritropoiesis.
Eritrosit memiliki ciri-ciri :
 Bentuk cakram berwarna merah kekuningan.
 Ukuran : diameter 7 – 8 µm.
 Bentuk cakram bikonkaf menyebabkan warna terang dibagian tengah

Pemeriksaan Hitung Jumlah Eritrosit

1. Metode : Mikrovisual

2. Prinsip : Darah diencerkan dalam pipet eritrosit dengan larutan yang

bersifat isotonis, kemudian dimasukkan kedlam kamar hitung. Jumlah
eritrosit dihitung dalam volume tertentu, dengan menggunakan faktor
konversi jumlah eritrosit per ul darah dapat diperhitungkan.

3. Bahan pemeriksaan :

a. Darah kapiler

b. Darah vena dengan anticoagulant

4. Alat yang dipakai : a. Pipet thoma eritrosit b. Kamar hitung improved

neubauer c. Dek glass d. Mikroskop

5. Reagent :

a. Larutan Hayem, Yang berisi :

1) Natrium sulfat 5 gr

2) Natrium chlorida 1 gr
3) Merkurichlorida 0.5 gr

4) Aquadest ad 200 ml

b. Larutan Gowers , yang berisi :

1) Natrium sulfat 12.5 gr

2) Asam asetat glasial 33.3 ml

3) Aquadest add 200 ml c. Larutan Rees dan Ecker , yang berisi :

1) Natrium sitrat 3.8 gr

2) Larutan formaldehida 40 % sebanyak 2 ml

3) Brilliantcresylblue 30 mg 4) Aquadest add 100 ml Larutan diatas tersebut

masing-masing harus disaring sebelum dipakai

6. Prosedur :

a. Mengisi Pipet eritrosit :

1) Isaplah darah sampai garis tanda 0.5 tepat

2) Hapuslah kelebihan darah yang melekat pada ujung pipet

3) Masukkan ujung pipet dalam larutan pengencer sambil menahan darah pada
garis tanda tadi. Pipet dipegang dengan sudut 45º dan larutan dihisap
perlahan-lahan sampai garis tanda 101. Hati-hatilah jangan sampai terjadi
gelembung udara.

4) Angkatlah pipet dari cairan, tutup ujung pipet dengan ujung jari lalu
lepaskan karet penghisap. 5) Kocoklah pipet itu selama 15-30 detik. Jika tidak
segera akan dihitung, letakkanlah dalam sikap horizontal.

b. Mengisi Kamar Hitung :

1) Letakkanlah kamar hitung yang bersih benar dengan kaca penutupnya

terpasang mendatar diatas meja.

2) Kocoklah pipet yang diisi tadi selama 3 menit terus menerus, jagalah
jangan sampai ada cairan terbuang dari dalam pipet itu diwaktu mengocok.
3) Buanglah cairan yang ada didalam batang kapiler pipet (3 atau 4 tetes) dan
segeralah

sentuhkan ujung pipet itu dengan sudut 30º pada permukaan kamar hitung
dengan menyinggung pinggir kaca penutup. Biarkan kamar hitung itu terisi
cairan perlahan-lahan dengan daya kapilaritasnya sendiri.

4) Biarkanlah kamar hitung itu selama 2 atau 3 menit agar eritrosit dapat
mengendap.

c. Menghitung Jumlah Sel :

1) Turunkan lensa kondensor atau kecilkan diafragma. Meja mikroskop harus

dalam sikap rata air. 2) Aturlah focus terlebih dahulu dengan memakai lensa
obyektif kecil (10x) kemudian lensa itu diganti dengan lensa obyektif besar
(40x) sampai garis bagi dalam bidang besar tengah jelas nampak.

3) Hitunglah semua eritrosit yang terdapat dalam 5 bidang yang tersusun dari
16 bidang kecil, umpamanya pada keempat sudut bidang besar ditambah yang
ditengah-tengah. Cara menghitung sel sama seperti untuk menghitung jumlah
lekosit, yaitu mulai dari kiri kekanan kemudian dari kanan ke kiri dst.

Kapasitas untuk menghitung atau tidaknya eritrosit yang menyinggung

garis batas sama juga seperti untuk lekosit.

7. Perhitungan Jumlah Eritrosit = N x Fb x P = N x 50 x 200

N = Jumlah Eritrosit dalam 5 kotak R besa

r Fb = Faktor Bilik Hitung

P = Pengenceran Catatan : 1µL = 1 mm3 8.

Harga Normal : Wanita : 3.7 – 5.4 Juta/µL

Pria : 3.9 – 5.9 Juta/µ

 DAFTAR PUSTAKA

Bain, B. J. 2014. Hematologi : kurikulum inti. Cetakan 20. Edited by A. S. Y.Joko

Suyono, Ferdy Sandra. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC

Departemen Kesehatan RI. 2008. Pedoman Praktik Laboratorium Kesehatan yang

Benar (Good Laboratory Practice). Jakarta: Direktorat Jenderal Bina
Pelayanan Medik.

Desmawati. 2013. Sistem Hematologi dan Imunologi. Edited by D. Juliastuti.

Jakarta: Penerbit In Media. Gandasoebrata, R. 2010. Penuntun
Laboratorium Klinik. . Jakarta: Cetakan 16Dian Rakyat

Hanafiah, K. A. 2008. Rancangan Percobaan Aplikatif : Aplikasi Kondisional

Bidang Pertanaman, Peternakan, Perikanan, Industri, dan Hayati. Cetakan
pertama. Jakarta: PT RajaGrafindo Persada. Hoffbrand, A. V and Moss, P.
A. H. 2013. Kapita Selekta Hematologi. Cetakan keenam. Edited by

Notoatmodjo, S. 2012. Metodologi Penelitian Kesehatan. Edisi Revisi. Jakarta:

Rineka

Sacher, R. A. and McPherson, R. A. 2004. Tinjauan Hasil Klinis Hasil

Pemeriksaan Laboratorium. Cetakan 11. Edited by H. Hartanto. Jakarta:
Penerbit Buku Kedokteran EGC. 4

Setiabudy, R. D. 2009. Hemostasis dan Trombosis. Cetakan keempat. Jakarta:

Balai Penerbit Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.

Sugiyono. 2011. Metode Penelitian Kuantitatif Kualitatif Dan R&D. Cetakan 12.
Bandung: Alfabeta.

Sujud, Hardiasari, R. and Nuryati, A. 2015. ‘Perbedaan Jumlah Trombosit Pada

Darah Edta Yang Segera Diperiksa Dan Penundaan Selama 1 Jam Di
Laboratorium Rsj Grhasia Yogyakarta’, Medical Laboratory Technology
Journal, 1(12), pp. 91–95.