PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Patologi klinis adalah "subspesialisasi patologi yang berhubungan dengan
penggunaan metode laboratorium seperti kimiawi, mikrobiologi, hematologi,
dan sebagainya yang digunakan untuk diagnosis dan pengobatan penyakit."
Secara umum, patologi klinis adalah studi penyakit di lingkungan klinis
dengan menggunakan tes laboratorium. Tes laboratorium harus digunakan
dengan prosedur diagnostik lainnya. Sebelum tes laboratorium digunakan
untuk menegakkan diagnosis yang mungkin, terdapat dua prosedur diagnostik
sangat penting yaitu mendapatkan riwayat lengkap pasien, dan melakukan
pemeriksaan fisik lengkap. Pengetahuan yang diperoleh dari dua prosedur
dasar tersebut, seorang diagnosa dapat memilih prosedur diagnostik untuk
mengklarifikasi atau mengklasifikasikan masalah yang teridentifikasi
(Stockham dan Scott, 2008).
Alasan utama menganalisis sampel pasien melalui prosedur laboratorium
adalah untuk mendeteksi keadaan patologis yang tidak teridentifikasi.
Menentukan, mengklasifikasikan, atau mengkonfirmasi gangguan
patofisiologis atau keadaan penyakit. Menghilangkan (menyingkirkan)
kemungkinan penyebab penyakit hewan dan untuk menilai perubahan keadaan
patologis baik karena perkembangan alami penyakit atau karena terapi medis
atau bedah. Dokter hewan membutuhkan patologi klinis dan sering
menggunakan tes laboratorium. Hubungannya dengan metode diagnostik lain
untuk mengidentifikasi atau mengklasifikasikan keadaan patologis yang
berkembang pada mamalia domestik dan untuk mengevaluasi penyakit pada
hewan menggunakan data laboratorium yang dikumpulkan selama analisis
darah, urin, cairan tubuh, dan aspirasi jaringan (Sirois, 2020).
Kumpulan data laboratorium yang dikumpulkan pada hewan yang sakit
biasanya mencakup data hematologi, konsentrasi kimia serum atau plasma,
hasil urinalisis, dan interpretasi sitologi. Beberapa sistem tubuh misalnya,
integumen, saraf, tulang, dan kardiovaskular yang relatif mudah dievaluasi
melalui metode visual atau pencitraan seperti pemeriksaan fisik, radiografi,
dan ultrasonografi, sedangkan sistem tubuh lainnya seperti, hemik, imun,
kemih, dan endokrin, lebih baik dievaluasi dengan tes laboratorium (Stockham
dan Scott, 2008).
Keberhasilan dokter hewan bergantung pada hasil laboratorium untuk
membantu menegakkan diagnosis, melacak perjalanan penyakit, dan
menawarkan prognosis kepada klien. Seorang dokter hewan dididik dalam
interpretasi hasil tes, sedangkan teknisi veteriner dididik untuk menghasilkan
hasil tes yang akurat (Sirois, 2020). Maka dilakukan pelatihan kompetensi
sarjana kedokteran hewan untuk mencapai gelar dokter dengan kegiatan
PPDH (Program Profesi Dokter Hewan) pada Rotasi Patologi Klinik untuk
memahami prosedur tes laboratorium dan mampu melakukan interpretasi hasil
tes laboratorium.
1.2 Rumusan Masalah
1.2.1 Bagaimana metode dan interpretasi hematologi dan ulas darah pada
mamalia dan non mamalia?
1.2.2 Bagaimana metode dan interpretasi pemeriksaan sitologi?
1.2.3 Bagaimana metode dan interpretasi pemeriksaan urin?
1.3 Tujuan
1.3.1 Mengetahui metode dan interpretasi hematologi dan ulas darah pada
mamalia dan non mamalia.
1.3.2 Mengetahui metode dan interpretasi pemeriksaan sitologi.
1.3.3 Mengetahui metode dan interpretasi pemeriksaan urin.
1.4 Manfaat
Manfaat dari pelaksanaan kegiatan Koasistensi Pendidikan Profesi Dokter
Hewan (PPDH) Rotasi Patologi Klinik adalah mendapat pengetahuan,
pengalaman, wawasan, dan keterampilan baik softskill maupun hardskill di
bidang laboratorium patologi klinik. Manfaat lain bagi mahasiswa yang
sedang menjalankan koasistensi yaitu untuk mencapai kompetensi
professional medik veteriner.
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA
Gambar 2.1 Sel darah merah anjing (kiri). Sebagian besar sel berukuran sama dan
memiliki pusat pucat yang menonjol. Sel darah merah kucing (kanan).
Sel-sel ini lebih kecil dari sel darah merah anjing, ada sedikit variasi
dalam ukuran (anisositosis), dan mereka memiliki pucat pusat yang
terbatas; 100× objektif (Reagen dkk, 2019).
Gambar 2.2 Sel darah merah sapi (kiri). Ada sedikit variasi dalam ukuran sel-sel ini
(anisositosis), dan mereka biasanya memiliki pucat pusat yang terbatas.
Sel darah merah kambing (kanan). Perhatikan ukuran sel yang sangat
kecil dan pusat pucat yang minimal. Hal ini juga umum untuk memiliki
sedikit variasi dalam ukuran (anisositosis) dan bentuk (poikilositosis).
Sel darah merah kelinci (bawah). Ada sedikit variasi dalam ukuran sel
darah merah (anisositosis). Sebagian besar sel memiliki sentral pucat
dalam jumlah sedang; 100× objektif (Reagen dkk, 2019).
Morfologi leukosit (sel darah putih) yang pertama adalah neutrofil
tersegmentasi yang merupakan sel darah putih yang paling umum ditemukan
dalam darah perifer dari semua spesies domestik yang umum, kecuali
ruminansia, di mana limfosit adalah sel darah putih yang dominan. Neutrofil
tersegmentasi biasanya berdiameter 10-12 m dan memiliki inti tunggal dengan
beberapa lekukan, sehingga inti dibagi menjadi beberapa lobus. Biasanya, ada
tiga hingga lima lobus atau segmen per sel. Neutrofil dari spesies domestik
umum yang berbeda terlihat sangat mirip. Pengecualian utama adalah bahwa
sitoplasma neutrofil sapi sering berwarna lebih merah muda dibandingkan
dengan spesies lain. Pada spesies hewan laboratorium umum, neutrofil serupa
dalam ukuran dan bentuk dengan spesies domestik yang umum, tetapi mereka
sering memiliki butiran sitoplasma kecil yang menonjol dengan jumlah yang
bervariasi. Granula lebih kecil dari granula yang ada dalam eosinofil, dan
dengan demikian sel-sel ini dapat dengan mudah dibedakan. Kelinci dan
marmot memiliki butiran yang sangat menonjol, dan oleh karena itu sel-sel ini
disebut pseudoeosinofil. Pada kelinci, istilah yang tepat untuk sel-sel ini
adalah "heterofil." (Reagen dkk, 2019).
Gambar 2.3 Neutrofil tersegmentasi pada anjing (kiri). Sel dengan inti tersegmentasi
dan sitoplasma merah muda adalah neutrofil matang. Basofil, heterofil,
dan eosinofil kelinci (kanan). Sel dengan nukleus yang tidak
tersegmentasi dengan baik dan sitoplasma ungu muda dengan sedikit
butiran kecil berwarna ungu di kiri atas adalah basofil. Sel di kanan
bawah dengan nukleus tersegmentasi dan butiran kecil berwarna
kemerahan yang berbeda adalah heterofil. Sel dengan banyak granula
bulat besar di sisi dalam (kanan atas) adalah eosinofil. apusan darah;
100× objektif (Reagen dkk, 2019).
Limfosit adalah jenis sel kedua yang paling umum dalam darah perifer
dari sebagian besar spesies domestik dan merupakan jenis sel yang paling
umum pada ruminansia. Pada sebagian besar spesies hewan laboratorium
umum, persentase limfosit lebih besar daripada neutrofil. Biasanya, sel-sel ini
bulat, sedikit lebih kecil dari neutrofil, dan memiliki inti bulat hingga oval dan
kadang-kadang sedikit menjorok. Pola kromatin terdiri dari area kaca halus
yang bercampur dengan area yang lebih menggumpal. Terdapat sejumlah kecil
sitoplasma berwarna biru muda. Beberapa limfosit memiliki multiple, kecil,
butiran ungu merah muda di sitoplasma. Selain limfosit kecil, banyak hewan
mungkin memiliki beberapa limfosit sedang hingga besar. Ini terutama
berlaku untuk ruminansia. Seringkali, sel-sel ini memiliki lebih banyak
sitoplasma daripada limfosit kecil. Selain itu, kromatin inti ruminansia sering
lebih menonjol dengan area kondensasi yang terkadang ditandai. Hal ini dapat
menyebabkan kesimpulan yang salah bahwa nukleolus hadir dalam sel-sel ini
(Reagen dkk, 2019).
Gambar 2.4 Limfosit kecil (kiri). Sel dengan inti bulat hingga oval dan tepi
sitoplasma biru muda adalah limfosit kecil. Limfosit besar (kanan). Sel
dengan inti bulat hingga sedikit menjorok dengan sejumlah kecil
sitoplasma biru muda adalah limfosit besar. Perhatikan pola kromatin
inti yang sering terlihat pada limfosit sapi normal. apusan darah sapi;
100× objektif (Reagen dkk, 2019).
Monosit tidak ada atau hadir dalam jumlah rendah dalam darah perifer dan
terlihat sangat mirip di semua spesies domestik umum dan spesies hewan
laboratorium. Sel-sel ini biasanya berdiameter 15-20 m, dan nukleusnya dapat
berbentuk berbeda, seperti oval atau oval dengan lekukan tunggal (berbentuk
kacang merah), atau memiliki banyak lekukan dan lobulasi. Kromatin nukleus
tampak berbutir halus hingga berenda, dengan hanya sedikit area kondensasi.
Jumlah sedang sitoplasma biasanya biru abu-abu dan mungkin memiliki
banyak vakuola diskrit berukuran bervariasi (Reagen dkk, 2019).
Gambar 2.5 Monosit (kiri). Sel besar dengan nukleus yang sangat menjorok ke
dalam, sitoplasma biru keabu-abuan, dan vakuola sitoplasma
multipel adalah monosit. Eosinofil (kanan). Sel dengan nukleus
tersegmentasi dan banyak, butiran berbentuk batang kemerahan di
sitoplasma adalah eosinofil. Apusan darah kucing; 100× objektif
(Reagen dkk, 2019).
Eosinofil tidak ada atau hadir dalam jumlah yang sangat rendah pada
hewan normal. Sel-sel ini biasanya berukuran sama dari neutrofil tetapi
seringkali sedikit lebih besar. Inti sangat mirip dengan neutrofil dalam hal
mereka tersegmentasi, tetapi segmen sering tidak terdefinisi dengan baik.
Sitoplasma berwarna biru pucat dan memiliki beberapa granula kemerahan
hingga oranye kemerahan. Jumlah dan bentuk butiran sangat berbeda untuk
sebagian besar spesies domestik yang umum. Butiran eosinofilik anjing
berbentuk bulat dan cukup bervariasi dalam ukuran dan jumlah. Seringkali ada
beberapa vakuola dengan ukuran bervariasi di sitoplasma juga. Granula
eosinofilik kucing berbentuk batang dan biasanya mengisi sitoplasma (Reagen
dkk, 2019).
Basofil jarang terlihat dalam darah tepi semua spesies domestik yang
umum. Mereka paling sering terlihat pada kuda. Basofil memiliki ukuran yang
sama atau sedikit lebih besar dari neutrofil, dan sitoplasma berwarna ungu
muda. Nukleus tersegmentasi tetapi seringkali tidak sampai ke tingkat
neutrofil yang matang. Jumlah kecil, bulat, butiran sitoplasma ungu kadang-
kadang dapat ditemukan pada basofil anjing. Ada atau tidak adanya butiran
mungkin tergantung pada jenis pewarna yang digunakan. Basofil kucing
mengandung butiran kecil, bulat, lavender yang tidak jelas. Baik basofil sapi
dan kuda memiliki beberapa butiran kecil berwarna ungu di sitoplasma. Pada
kelinci, sel-sel ini lebih umum daripada kebanyakan spesies lain dan secara
teratur terlihat dalam darah perifer. Sel-selnya memiliki butiran sitoplasma
ungu yang melimpah (Reagen dkk, 2019).
Gambar 2.6 Basofil kelinci (kiri). Sel dengan inti yang tersegmentasi buruk,
sitoplasma berbusa ungu, dan beberapa butiran ungu yang berbeda
adalah basofil. Trombosit kucing (kanan). Sel kecil, bulat hingga oval,
berinti biru muda dengan granula sitoplasma merah muda hingga ungu
adalah trombosit. Perhatikan ukuran yang lebih besar dari beberapa
trombosit yang umum pada kucing; 100× objektif (Reagen dkk, 2019).
Platelet, juga dikenal sebagai trombosit, secara morfologis terlihat sangat
mirip pada spesies hewan domestik dan laboratorium umum. Trombosit kecil,
berinti, berbentuk diskoid, sel pewarnaan biru muda yang mungkin memiliki
banyak, halus, butiran merah muda sampai ungu di sitoplasma. Mereka
biasanya berdiameter 2-4 μm (Reagen dkk, 2019).
2.2 Darah Hewan Non-Mamalia
Sel darah merah reptil secara signifikan berbeda dari kebanyakan hewan
domestik. Dalam keadaan sehat, sel darah merah matur adalah sel elips dengan
inti bulat hingga oval, membran inti halus hingga minimal tidak beraturan, dan
kromatin inti berwarna gelap. Ukurannya sangat bervariasi antara spesies
reptil dan dapat berkisar dari sekitar 13 hingga 25 μm dalam dimensi
terbesarnya. Nukleus untuk rasio sitoplasma juga bervariasi antara spesies
reptil. Sitoplasma terwarnai secara homogen berwarna merah muda hingga
oranye-merah karena hemoglobin. Namun, sitoplasma mungkin tampak hijau-
biru bila diwarnai dengan diff quick atau biru bila terkena formalin. Beberapa
spesies reptil umumnya memiliki inklusi sitoplasma tunggal, kecil, homogen,
biru, bulat dalam sel darah merah individu yang sehat. Inklusi ini harus
dibedakan dari organisme infeksius dan dapat berupa organel atau artefak
yang mengalami degenerasi. Jumlah polikromatofil yang rendah dapat terjadi
pada reptil yang sehat, terutama yang sedang berganti kulit (Reagen dkk,
2019).
Gambar 2.15 Sel darah merah reptil. Sel darah merah normal dari ular dan kadal.
Terkadang sel darah merah memiliki inklusi kebiruan kecil di
sitoplasma seperti yang ditunjukkan pada sel darah merah ular.
Dibandingkan dengan sel darah merah dewasa, polikromatofil
memiliki sitoplasma biru dan nukleus yang lebih besar dan tidak terlalu
gelap. Darah ular (Boa constrictor) dan iguana hijau; 100× objektif
(Reagen dkk, 2019).
Heterofil sebagian besar reptil memiliki sitoplasma yang mengandung
banyak granula memanjang, umumnya lonjong hingga batang hingga
berbentuk gelendong, granul oranye hingga merah-coklat yang sebagian dapat
mengaburkan nukleus. Ukuran heterofil bervariasi dengan spesies reptil dan
dapat bervariasi dalam ukuran dari sekitar 10 hingga 23 μm dengan diameter.
Sebaliknya, inti heterofil dari kadal, seperti iguana hijau (Iguana iguana) dan
inland bearded dragon (Pogona vitticeps), berlobus. Lobulasi tidak begitu
menonjol seperti pada neutrofil mamalia. Granula heterofil mungkin terlihat
kurang jelas dengan apusan darah cepat bila dibandingkan dengan apusan
darah pewarnaan Wright (Reagen dkk, 2019).
Gambar 2.7 (c) Apusan darah dari iguana yang diwarnai dengan quick stain tetapi
tidak overstain. Warnanya cocok dengan warna yang diharapkan dari
sel darah reptil (d) Apusan darah dari iguana yang sama seperti gambar
(c) tetapi diwarnai dengan pewarnaan Wright; Monosit, Limfosit, dan
Trombosit (kanan). Sel mononuklear bulat dengan sitoplasma biru
berlimpah dan inti bulat hingga oval adalah monosit (kiri). Sel bulat
dengan inti bulat dan sedikit sitoplasma adalah limfosit kecil (bagian
atas). Sel-sel berinti oval yang mengelompok dengan sedikit sitoplasma
biru adalah trombosit (kanan bawah). Apusan darah iguana hijau
(Iguana iguana); 100× objektif (Reagen dkk, 2019).
Dalam keadaan sehatan, limfosit reptil dan amfibi secara morfologis mirip
dengan mamalia. Ukuran limfosit dapat berkisar dari sekitar 5 hingga 15 μm
dengan diameter tergantung pada spesiesnya. Dalam apusan darah yang sama,
mungkin ada limfosit yang lebih kecil dan limfosit yang lebih besar. Limfosit
memiliki inti bulat tunggal yang terletak eksentrik, jumlah sitoplasma biru
pucat hingga biru yang rendah, dan rasio nukleus terhadap sitoplasma yang
tinggi. Kromatin halus sampai kasar menggumpal. Sel darah yang terkadang
membingungkan dengan limfosit termasuk trombosit (trombosit) dan sel darah
merah yang belum matang (Reagen dkk, 2019).
Trombosit biasanya berbentuk oval, memiliki pewarnaan yang sangat
pucat hingga sitoplasma yang tidak berwarna, dan mudah menggumpal pada
apusan darah (Gambar 2.17). Sel darah merah yang belum matang yang
berbentuk bulat mungkin membingungkan dengan limfosit; namun, limfosit
memiliki nukleus yang terletak secara eksentrik versus nukleus yang terletak
di pusat khas dari sel darah merah yang belum matang, dan limfosit umumnya
memiliki rasio nukleus terhadap sitoplasma yang lebih tinggi (yaitu jumlah
sitoplasma yang lebih rendah dibandingkan dengan ukuran nukleus). Pola
kromatin sel darah merah yang belum matang akan lebih mirip dengan sel
darah merah (termasuk polikromatofil) pada apusan yang sama (Reagen dkk,
2019).
Monosit kebanyakan reptil dan amfibi mirip dengan mamalia. Namun,
beberapa monosit reptil mungkin memiliki granulasi sitoplasma merah muda
seperti debu yang halus. Sel-sel ini juga disebut sebagai azurofil atau monosit
azurofilik. Monosit adalah sel mononuklear besar dengan jumlah sitoplasma
biru hingga abu-abu yang melimpah. Inti berbentuk oval hingga bulat,
terkadang menjorok atau berbentuk "U". Monosit umumnya lebih besar,
memiliki lebih sedikit kondensasi kromatin daripada limfosit, dan memiliki
rasio inti terhadap sitoplasma yang lebih rendah. Monosit mungkin memiliki
beberapa vakuola sitoplasma yang jelas (Reagen dkk, 2019).
Eosinofil reptil memiliki sitoplasma tidak berwarna sampai biru pucat
yang mengandung banyak butiran sitoplasma merah-oranye terang sampai
merah muda; namun, beberapa spesies reptil seperti iguana hijau memiliki
butiran eosinofil yang berwarna biru pucat hingga abu-abu. Ukuran eosinofil
bervariasi sesuai dengan spesies reptil dan dapat berkisar dari diameter sekitar
9 hingga 20 μm. Eosinofil dengan butiran merah-oranye hingga merah muda
dapat dibedakan dari heterofil dalam apusan darah yang sama dengan bentuk
butiran (umumnya bulat pada eosinofil) dan/atau warna butiran (lebih
intens/warna cerah pada eosinofil) (Reagen dkk, 2019).
Gambar 2.7 Eosinofil (kiri). Sel mononuklear bulat (a, b) dengan butiran sitoplasma
kebiruan adalah eosinofil. Apusan darah yang ditunjukkan pada
gambar (a) diwarnai dengan pewarnaan cepat; apusan darah yang
ditunjukkan pada gambar (b) diwarnai dengan pewarnaan Wright dan
berasal dari hewan yang sama; Basofil (kanan). Dua sel bulat hingga
oval dengan butiran sitoplasma ungu tua dan vakuola sitoplasma
kecil yang jelas adalah basofil (kiri dan kanan lapangan). Apusan
darah iguana hijau (Iguana iguana); 100× objektif (Reagen dkk,
2019).
Basofil dari reptil dan amfibi memiliki banyak butiran sitoplasma
berwarna ungu tua atau magenta yang umumnya bulat dan kecil. Granula
mungkin sangat banyak sehingga mengaburkan nukleus. Ukuran basofil reptil
bervariasi menurut spesiesnya tetapi dapat berkisar dari diameter sekitar 7
hingga 20 μm. Perbedaan dari basofil mamalia adalah bahwa inti basofil pada
reptil dan amfibi umumnya bulat hingga lonjong dan tidak berlobus seperti
pada mamalia. Sitoplasma basofil terkadang terlihat bervakuola atau berbusa
karena prosedur pewarnaan; namun, beberapa butiran ungu tua akan tetap ada
dan mungkin lebih mudah ditemukan di atas nukleus (Reagen dkk, 2019).
Gambar 2.8 Sel darah merah unggas normal. Sel elips dengan inti bulat hingga oval
dan kromatin inti berwarna gelap adalah sel darah merah. Gambar (b)
berasal dari apusan darah cepat dan berisi heterofil matang dan dua
trombosit di kiri tengah hingga bawah lapangan; gambar (a) berasal dari
apusan darah perwarnaan Wright. Angsa (genus tidak ditentukan, a) dan
cockatiel (Nymphicus hollandicus, b) apus darah; 100× objektif.
(Reagen dkk, 2019).
Morfologi sel darah unggas sangat mirip dengan morfologi sel darah
reptil. Granulosit unggas (heterofil, eosinofil, dan basofil) paling berbeda dari
granulosit mamalia; namun, limfosit dan monosit unggas serupa, secara
morfologis, dengan mamalia. Mirip dengan reptil, unggas juga memiliki sel
darah merah berinti. Dalam keadaan sehat, sel darah merah matang adalah sel
elips dengan inti bulat hingga oval dan kromatin inti berwarna gelap (Gambar
2.8. Heterofil dari ayam dan kalkun berdiameter sekitar 13 μm. Monosit dari
ayam dan kalkun berdiameter sekitar 14 μm. Eosinofil dari ayam dan kalkun
berdiameter sekitar 12 μm (Reagen dkk, 2019).
2.3 Hematologi
Hematologi adalah ilmu yang mempelajari tentang komponen seluler
darah. Darah terdiri dari sel dan plasma. Sel-sel tersebut adalah sel darah putih
(leukosit), eritrosit (eritrosit), dan trombosit. Komponen plasma terdiri dari
air, protein, elektrolit/mineral, lipid, karbohidrat terlarut, asam amino, dan zat
nonseluler lainnya seperti hormon. Setiap komponen darah memiliki fungsi
spesifik dan dapat berubah sebagai respons terhadap keadaan penyakit
(Rosenfeld dan Dial, 2010). Hitung darah lengkap (CBC) adalah panel tes
diagnostik yang memberikan banyak informasi tentang parameter darah. Profil
hematologi meliputi pengukuran hemoglobin (Hb), hematokrit (Hct) atau
volume sel terkemas (PCV), indeks sel darah merah (volume sel rata-rata
(MCV), rata-rata hemoglobin sel darah (MCH), konsentrasi hemoglobin sel
darah rata-rata (MCHC)), jumlah sel total (trombosit, sel darah merah (RBC)
dan sel darah putih (WBC)), jumlah WBC diferensial dan komentar oleh ahli
hematologi veteriner tentang morfologi populasi eritrosit, leukosit dan
trombosit. CBC secara rutin dilakukan pada pasien yang sakit karena kelainan
yang ada pada darah dapat menunjukkan jenis proses penyakit yang terjadi
pada pasien (Barger dan Macneill, 2015).
Pengukuran PCV dan jumlah sel dapat dilakukan secara manual dengan
menggunakan tabung mikrohematokrit dan hemositometer. Metode
mikrohematokrit untuk perhitungan PCV adalah cara paling sederhana untuk
menilai massa sel darah merah secara manual. PCV ditentukan dengan
mensentrifugasi darah antikoagulan dalam tabung kapiler kecil untuk
memisahkan sel dari plasma. PCV dihitung dengan membagi panjang eritrosit
yang dikemas dengan panjang total eritrosit yang dikemas, buffy coat dan
plasma. Berbagai perangkat sederhana (Gambar 9) tersedia untuk melakukan
pengukuran ini, tetapi hanya penggaris yang diperlukan (Day dan Kohn,
2012).
Gambar 2.9 Pembaca dengan skala parabola geser untuk memudahkan pengukuran
volume sel yang dikemas atau mikrohematokrit dari tabung kapiler
(Day dan Kohn, 2012).
Protein plasma dapat diukur dengan menggunakan refraktometer
(Gambar 2.10). Tabung mikrohematokrit dicetak dan dipatahkan di atas buffy
coat. Setetes plasma dinyatakan pada prisma dan nilai protein dibaca dari
skala (Villiers dan Ristic, 2016).
A B C
Gambar 2.11 Metode wedge smear a) Tetesan darah dapat diperoleh dengan
menempatkan dua batang aplikator kayu ke dalam tabung dan
menyatukannya saat menariknya dari tabung. b) Teteskan satu tetes
darah ke ujung kaca yang buram. c) Pegang slide atas (penyebar)
sekitar 30 derajat, dan tarik kembali ke dalam tetesan darah (Sirois,
2020).
Setelah mengering, apusan darah harus diwarnai untuk membedakan
dengan jelas sel-sel individu dan untuk mengidentifikasi karakteristik seluler
yang abnormal. Apusan darah dapat diwarnai dengan pewarnaan jenis
Romanowsky. Pewarnaan Romanowsky yang umum tersedia meliputi
pewarnaan Wright dan pewarnaan Wright-Giemsa. Pewarna Romanowsky
tersedia dalam formulasi satu langkah atau tiga langkah. Komponen pewarna
mungkin agak berbeda, tetapi biasanya termasuk larutan fiksatif dan buffer
eosin dan metilen biru. Fiksatif yang digunakan biasanya 95% metanol.
Komponen eosin disangga pada pH asam, dan menodai komponen dasar sel,
seperti hemoglobin dan butiran eosinofilik. Komponen metilen biru disangga
ke pH basa, dan menodai komponen asam sel, seperti inti leukosit. Pewarnaan
tiga langkah yang memberikan hasil yang dapat diterima adalah Diff-Quick
(Sirois, 2020).
Ketika pewarnaan tiga langkah digunakan, slide dapat dibilas dengan air
suling di antara masing-masing dari tiga komponen. Pembilasan terakhir
dengan air suling harus dilakukan pada semua slide dan kemudian slide
dibiarkan kering sebelum pemeriksaan mikroskopis apusan. Lamanya waktu
pewarnaan slide bervariasi dan dipengaruhi oleh sejumlah faktor, seperti usia
pewarna. Untuk pewarnaan tiga langkah, waktu rata-rata untuk merendam
slide adalah 30 detik untuk setiap komponen. Sel tampak gelap jika terlalu
banyak diwarnai, sedangkan pembilasan yang ekstensif dapat
menyebabkannya terlihat pudar (Sirois, 2020).
2.5 Metode Sitologi
Sitopatologi, sering disingkat sitologi, adalah pemeriksaan mikroskopis
individu sel atau kelompok sel untuk mengidentifikasi asal mereka dan setiap
perubahan karakteristik penyakit. Sitologi adalah alat diagnostik yang cepat
dan aman yang dapat digunakan untuk menyelidiki massa superfisial atau
internal, organ internal, limfa nodul dan cairan (efusi, cairan sendi, cairan
serebrospinal (CSF), lavage bronchoalveolar (BAL), urin, cuci prostat).
Sitologi memiliki risiko komplikasi yang relatif rendah bagi pasien dan
memiliki waktu penyelesaian yang cepat. Sitologi dapat memberikan
diagnosis awal yang memungkinkan perencanaan pendekatan diagnostik dan
bedah. Keakuratan pemeriksaan sitologi dari bagian tubuh manapun sangat
bergantung pada kualitas koleksi, pewarnaann, dan iterpretasi materi.
Ketidakcukupan dalam salah satu langkah tersebut akan mempengaruhi
kualitas sitologi diagnostik (Villiers dan Ristic, 2016).
Sampel sitologi dari massa padat pada tubuh hewan atau yang diperoleh
dari prosedur pembedahan dapat dikumpulkan dengan teknik swab, scrape,
atau imprint. Fine needle biopsy juga dapat digunakan untuk beberapa sampel
padat serta sampel cairan. Sentesis mengacu pada sampel cairan yang
dikumpulkan dari rongga tubuh. Swab umumnya dikumpulkan hanya ketika
imprints, scrapings, dan aspirasi tidak dapat dilakukan, seperti pada saluran
fistula dan koleksi vagina. Area tersebut diusap dengan kapas yang lembab
dan steril atau rayon swab. Cairan isotonik steril (misalnya saline 0,9%) harus
digunakan untuk melembabkan swab. Melembabkan swab membantu
meminimalkan kerusakan sel selama pengumpulan sampel dan persiapan ulas
(Sirois, 2020).
Gambar 2.12 Sebuah kapas basah dapat digunakan untuk mengumpulkan beberapa
sampel sitologi (Sirois, 2020).
2.5.1 Swab Telinga
Sampel telinga biasanya diambil dari telinga untuk
mengidentifikasi parasit atau sel dan mikroorganisme. Sampel harus
dikumpulkan setelah pemeriksaan otoskopi awal, tetapi sebelum
dibersihkan. Sebuah cotton bud dimasukkan ke bawah ke persimpangan
antara saluran telinga vertikal dan horizontal dan diputar untuk
mengumpulkan puing-puing, yang ditransfer ke slide untuk sitologi.
Kotoran dapat dicampur dengan parafin cair, kaca penutup dioleskan dan
kaca objek diperiksa. Di bawah daya rendah (objektif 4X), Otodectes,
Demodex, telur dan debris mudah terlihat, tetapi perbesaran yang lebih
tinggi (lensa 40X atau 100X) diperlukan untuk melihat yeast atau bakteri
dengan jelas. Swab steril yang digunakan untuk mengumpulkan bahan
dapat dimasukkan ke dalam media transpor untuk kultur bakteri (Villiers
dan Ristic, 2016).
Gambar 2.13 Usap digulung pada slide kaca bersih untuk membuat noda
(Sirois, 2020).
Sampel swab telinga mungkin mengandung sejumlah wax yang
berlebihan. Hal ini dapat mengganggu evaluasi sampel. Untuk
meminimalkan efek ini, pemanasan dengan gantle pada slide mungkin
diperlukan. Melewatkan slide sebentar melalui api atau gantle heat dari
pengering rambut yang hangat dapat digunakan untuk melarutkan wax.
Panas berlebih harus dihindari, karena akan merusak komponen seluler
sampel. Selain prosedur pewarnaan Gram, ini adalah satu-satunya
keadaan di mana sampel sitologi mungkin memerlukan aplikasi panas
(Sirois, 2020).
2.5.2 Swab Luka
Swab luka dapat dilakukan dengan metode imprints yang juga
disebut sebagai cetakan apusan, dapat dibuat dari lesi eksternal pada
hewan hidup atau dari jaringan yang diambil selama pembedahan atau
nekropsi. Teknik ini mudah untuk dikumpulkan, tetapi sampel yang
dikumpulkan lebih sedikit sel daripada kerokan dan biasanya
mengandung jumlah kontaminasi yang lebih besar (bakteri dan seluler)
dibandingkan dengan fine-needles biopsi. Akibatnya, imprints dari lesi
superfisial hanya sering mencerminkan infeksi bakteri sekunder lokal
atau displasia jaringan yang diinduksi peradangan. Metode ini dengan
cara membersihkan permukaan massa ulserasi dengan saline-kain kasa
yang dibasahi, kemudian ambil slide kaca bersih, tempelkan dengan
lembut ke permukaan lesi dan segera angkat tanpa mengolesi slide
melintasi lesi. Ulangi prosedur untuk mendapatkan beberapa imprints
pada satu slide (Villiers dan Ristic, 2016).
Gambar 2.15 Pisau skalpel dapat digunakan untuk mengumpulkan sel dari
massa padat (Sirois, 2020).
2.5.4 Fine Needle Aspiration
Fine Needle Aspiration (FNA) adalah metode yang paling umum
untuk massa kulit, limfa nodul, dan organ dalam. Sampel dapat diperoleh
dengan teknik yang berbeda, tergantung pada sifat lesi. Metode khusus
jarum adalah metode yang memiliki keuntungan bahwa sel-sel halus dan
rapuh tidak rusak oleh pengisapan dan hemodilusi diminimalkan.
Metode ini biasanya digunakan untuk aspirasi massa lunak dan limfa
nodul. Metode ini diimobilisasi dengan satu tangan dengan jarum 21-23
G, 16-25 mm dimasukkan ke dalam lesi (tanpa jarum suntik). Jarum
kemudian digerakkan ke sana kemari di dalam massa, sambil
mengarahkannya ke berbagai arah. Dengan demikian, sampel akan
mewakili seluruh lesi dan bukan hanya sebagian saja (Villiers dan Ristic,
2016).
Gambar 2.16 Teknik fine needle aspiration. Massa diimobilisasi dengan satu
tangan sementara jarum dimasukkan ke dalam lesi dan
digerakkan ke sana kemari (Villiers dan Ristic, 2016).
Metode continuous suction adalah metode yang berguna untuk
aspirasi massa yang keras dan eksfoliatif yang buruk (misalnya
fibrosarcoma). Jarum 21–23 G, 16–25 mm yang dipasang pada spuit
2,5–5 ml dimasukkan ke dalam lesi, dan suction dilakukan dengan
menarik plunger. Saat hisapan dipertahankan, jarum digerakkan ke sana
kemari di dalam lesi, mengarahkannya setiap kali, dan berhati-hati untuk
menghindari mendorongnya melalui massa ke jaringan sekitarnya.
Suction kemudian dilepaskan sebelum melepaskan jarum dari lesi.
Intermittent suction adalah metode yang digunakan untuk lesi kecil di
mana jarum tidak dapat digerakkan. Jarum dengan spuit terpasang
dimasukkan ke dalam lesi dan kemudian plunger ditarik dan dilepaskan
sebentar-sebentar, menjaga jarum tetap diam. Suction kemudian
dilepaskan sebelum melepaskan jarum dari lesi. Aspirasi dari organ
dalam (hati, limpa, paru-paru, dll.) biasanya dilakukan dengan panduan
ultrasound. Setelah lesi diidentifikasi pada ultrasonografi, lokasi harus
disiapkan untuk aspirasi dengan membersihkan permukaan kulit dengan
antiseptik, berhati-hati untuk menghilangkan gel ultrasound. Setelah
aspirasi dilakukan, jarum suntik berisi udara dipasang pada jarum. Jika
teknik suction digunakan, jarum suntik harus dilepas, diisi dengan udara
dan kemudian disambungkan kembali ke jarum. Sambil memegang
ujung jarum di atas kaca objek yang bersih, pendorong ditekan dengan
cepat dan isi jarum dikeluarkan ke kaca objek (Villiers dan Ristic, 2016).
2.5.5 Cairan Abnormal Tubuh
Cairan abnormal tubuh diambil dengan metode sentesis yang
mengacu pada memasukkan jarum ke dalam rongga tubuh atau organ
apa pun untuk tujuan mengeluarkan cairan. Pengumpulan cairan dari
rongga peritoneum (abdominosentesis atau parasentesis) dan rongga
dada (thoracocentesis) biasanya dilakukan pada praktik hewan kecil.
Sampel cairan untuk evaluasi sitologi juga dapat dikumpulkan dari
sekitar tulang belakang, dari dalam sendi (artrosentesis), dan dari mata.
Anestesi umum diperlukan untuk pengumpulan cairan serebrospinal,
cairan sinovial, dan humor aquos dan vitreous. Sebelum pengumpulan
cairan peritoneum atau pleura, tempat tersebut harus disiapkan secara
aseptik dan semua peralatan dan perlengkapan harus dikumpulkan.
Mempersiapkan beberapa apusan dari cairan, segera setelah
dikumpulkan sangat membantu. Sebagian cairan harus dikumpulkan
dalam tabung EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid) (Sirois, 2020).
Gambar 2.17 Pengumpulan cairan peritoneum dengan abdominosentesis
(Sirois, 2020).
Jarum 21-gauge paling sering digunakan dan harus dipasang pada
spuit 60 mL. Pada pasien hewan kecil, thoracocentesis biasanya
dilakukan dengan hewan dalam posisi berdiri dan jarum dimasukkan ke
dalam ruang interkostal ketujuh atau kedelapan di sepanjang aspek
tengkorak tulang rusuk. Abdominosentesis dapat dilakukan pada hewan
yang berdiri atau dengan pasien dalam posisi berbaring miring. Jarum
dimasukkan ke perut ventral di sebelah kanan garis tengah kira-kira 1
sampai 2 cm ekor ke umbilikus. Prosedurnya sedikit berbeda untuk
hewan eksotis dan hewan ternak. Kemudahan pengumpulan dapat
mencerminkan volume cairan yang ada atau tekanan di dalam rongga
tubuh itu. Total volume yang dikumpulkan harus dicatat pada saat
pengumpulan. Karakteristik kotor tertentu dari cairan tubuh harus dicatat
pada pengumpulan, termasuk warna sampel dan kekeruhan. Selanjutnya,
jumlah sel berinti total, jenis sel, dan fitur morfologi ditentukan (Sirois,
2020).
2.6 Metode Pemeriksaan Urin
Metode pemeriksaan urin menurut Sirois, (2020), meliputi sifat fisik urin,
evaluasi kimia urin, dan analisis sedimen urin. Sifat fisik urin mencakup
semua pengamatan yang dapat dilakukan tanpa bantuan mikroskop atau
reagen kimia, yaitu volume, warna, bau, transparansi, dan berat jenis urin.
Pada pemeriksaan volume urin biasanya pemilik hewan sering memberikan
informasi mengenai jumlah urin yang dikeluarkan. Pada evaluasi warna dan
kejernihan urin dengan menempatkannya dalam wadah bening dan
menahannya dengan latar belakang putih untuk dapat dibandingkan.
Gambar 2.18 Warna urin paling baik dinilai dalam pencahayaan yang baik
dengan latar belakang putih (Sirois, 2020).
Pada pemeriksaan bau, sampel dibiarkan berdiri pada suhu kamar
yang dapat mengembangkan bau amonia sebagai akibat dari pertumbuhan
bakteri. Pada pemeriksaan berat jernih urin dapat ditentukan sebelum atau
sesudah sentrifugasi, karena partikel yang mengendap selama sentrifugasi
memiliki sedikit atau tidak berpengaruh pada berat jenis. Jika urin keruh,
sampel harus disentrifugasi dan supernatan digunakan untuk menentukan
berat jenis. Berat jenis didefinisikan sebagai berat (densitas) sejumlah
cairan dibandingkan dengan jumlah air suling yang sama. Jumlah dan
berat molekul zat terlarut menentukan berat jenis urin. Untuk menentukan
berat jenis urin dapat menggunakan refraktometer, urinometer, atau strip
reagen. Berat jenis strip reagen adalah metode yang paling tidak dapat
diandalkan untuk menentukan berat jenis urin pada hewan. Berat jenis urin
lebih jarang ditentukan dengan penggunaan urinometer. Instrumen ini
membutuhkan sejumlah besar urin (sekitar 10 mL), dan umumnya
memberikan hasil yang kurang dapat direproduksi daripada refraktometer.
Berat jenis urin harus diukur dengan refractometer (Sirois, 2020).
Pengujian untuk berbagai konstituen kimia urin biasanya dilakukan
dengan strip reagen yang diresapi dengan bahan kimia yang sesuai atau
dengan tablet reagen. Ada beberapa penganalisis otomatis yang digunakan
untuk kimia serum yang juga dapat digunakan untuk pengujian urin.
Beberapa strip reagen secara bersamaan menguji banyak konstituen, yaitu
pH, protein, glukosa, keton, bilirubin, urobilinogen, hemoprotin, dan
leukosit. Strip reagen harus dicelupkan ke dalam sampel urin sehingga
terendam seluruhnya; kemudian harus dikeluarkan dan ujung panjangnya
dimiringkan di atas tisu untuk memungkinkan kelebihan urin. Urin juga
dapat ditambahkan ke strip reagen dari pipet. Perubahan warna pada setiap
bantalan reagen dicatat pada interval waktu tertentu. Konsentrasi berbagai
konstituen ditentukan dengan membandingkan warna pada strip dengan
bagan warna pada label wadah strip. Penting untuk dicatat bahwa sejumlah
besar kondisi (misalnya, obat-obatan, faktor makanan, faktor lingkungan)
dapat mempengaruhi hasil tes urinalisis (Sirois, 2020).
Gambar 2.19 Wadah uji strip reagen dan strip dipstick kombinasi (Sirois, 2020).
Pemeriksaan mikroskopis sedimen urin merupakan bagian penting dari
urinalisis lengkap, terutama untuk mengenali penyakit pada saluran kemih.
Banyak kelainan pada sampel urin yang tidak dapat dideteksi dengan strip tes
atau tablet reagen, dan seringkali informasi yang lebih spesifik dapat diperoleh
dengan mengamati sedimen urin. Selain itu, pemeriksaan sedimen urin
kadang-kadang membantu dalam diagnosis penyakit sistemik. Sampel terbaik
untuk pemeriksaan sedimen adalah sampel pagi hari atau sampel yang
dikumpulkan setelah beberapa jam kekurangan air. Karena sampel tersebut
lebih terkonsentrasi, kemungkinan menemukan elemen yang terbentuk
meningkat. Sedimen harus diperiksa saat urin masih segar, karena bakteri akan
berkembang biak jika sampel dibiarkan pada suhu kamar untuk jangka waktu
tertentu. Perubahan lain juga dapat terjadi pada sampel seiring bertambahnya
usia (Sirois, 2020).
Urin yang dikumpulkan dengan cystocentesis adalah sampel terbaik untuk
pemeriksaan mikroskopis. Jika sampel tidak dapat diperiksa dalam waktu 1
jam setelah pengumpulan, sampel harus didinginkan atau diawetkan. Untuk
pengukuran semikuantitatif unsur-unsur yang terbentuk dalam urin, volume
urin yang digunakan dan volume sedimen yang diperoleh harus dicatat. Jika
volume yang cukup telah diperoleh, 5-10 mL sampel yang tercampur dengan
baik harus ditempatkan dalam tabung sentrifus berbentuk kerucut dan
disentrifugasi selama 3-5 menit pada sekitar 1000-2000 rpm, tergantung pada
radius sentrifus. Setelah sentrifugasi, volume sedimen dicatat, dan supernatan
dituang dengan hati-hati untuk meninggalkan kira-kira 0,5 mL urin di dasar
tabung. Endapan disuspensikan dengan mencampurnya perlahan dengan pipet
(Sirois, 2020).
Sedimen dapat diperiksa dengan pewarnaan maupun tidak. Memeriksa
sedimen yang tidak diwarnai terlebih dahulu memungkinkan evaluasi
spesimen yang lebih baik. Untuk memeriksa sedimen yang tidak terwarnai,
setetes kecil sedimen tersuspensi ditempatkan pada kaca objek bersih, ditutup
dengan kaca penutup, dan diperiksa segera. Penggunaan pewarna dalam
sedimen dapat membantu mengidentifikasi jenis sel yang berbeda. Namun,
pewarna sering memasukkan artefak ke dalam sedimen, terutama bahan
endapan dan bakteri. Pewarnaan sedimen urin yang tersedia termasuk
pewarnaan Sternheimer-Malbin (Sedi-Stain, Becton, Dickinson, Franklin
Lakes, NJ) dan 0,5% biru metilen baru, yang mengandung sedikit formalin.
Satu tetes pewarna dicampur dengan sedimen tersuspensi sebelum
menempatkan setetes sedimen pada slide mikroskop. Sebuah kaca penutup
ditempatkan di atas setetes sedimen berwarna (Sirois, 2020).
Gambar 2.20 Sedimen urin bernoda dan tidak bernoda disiapkan untuk pemeriksaan
mikroskopis (Sirois, 2020).
Salah satu metode yang dapat menyederhanakan prosedur urinalisis adalah
dengan menyiapkan dua tetes sedimen urin berdampingan pada slide
mikroskop yang sama. Tetesan yang ditambahkan pewarna dapat digunakan
untuk mengidentifikasi sel, sedangkan sisi yang tidak diwarnai dapat
digunakan untuk mengukur unsur-unsur dalam urin. Spesimen awalnya harus
diamati di bawah daya rendah (10x lensa objektif) untuk mengevaluasi
kualitas keseluruhan preparasi dan untuk mengidentifikasi elemen yang lebih
besar, seperti cast atau agregat sel. Seluruh area di bawah kaca penutup harus
diperiksa, karena cast cenderung bermigrasi ke arah tepi kaca penutup. Cast
dan kristal diidentifikasi dan dilaporkan sebagai jumlah yang diamati per
medan daya rendah. Lensa berdaya tinggi (lensa objektif 40x) diperlukan
untuk mengidentifikasi sebagian besar objek secara akurat, untuk mendeteksi
bakteri, dan untuk membedakan jenis sel. Minimal 10 bidang mikroskopis
harus diamati dengan lensa berdaya tinggi. Sel epitel, sel darah merah, dan sel
darah putih dilaporkan sebagai jumlah rata-rata yang diamati per bidang daya
tinggi. Bakteri dilaporkan sedikit, sedang, atau banyak, dan karakteristik
morfologisnya (misalnya, kokus, basil) dicatat (Sirois, 2020).
BAB III. METODE
3.1 Metode Pemeriksaan
3.1.1 Metode Hematologi
1. Pemeriksaan Eritrosit
Sampel Darah
Diambil menggunakan pipet thoma hingga skala 0.5.
Dibersihkan ujung pipet menggunakan tisu.
Dicampurkan sampel darah dengan reagen Hayem
(mamalia), Reagen Natt-Herrick (non-mamalia).
Dicampurkan sampel darah dengan reagen hingga
mencapai skala 101.
Dihomogenkan, kemudian dibuang 2-3 tetes dari pipet.
Diletakkan hemositometer yang telah diberi cover slip di
mikroskop. Dengan perbesaran kecil, cari kamar hitung.
Kemudian, semprotkan larutan darah dan reagen ke
hemositometer.
Dibiarkan beberapa menit agar sel memenuhi kamar
hitung.
Dihitung jumlah sel darah merah pada 5 kotak di kamar
hitung eritrosit, dengan perbesaran kuat.
Hasil
Sampel Darah
Hasil
3. Penetapan Nilai Hematokrit
Sampel Darah
•Dimasukkan ke tabung mikrohematokrit hingga terisi ¾
bagian.
Disumbat salah satu ujung tabung mikrohematokrit
dengan menggunakan clay seal.
•Dimasukkan tabung mikrohematokrit ke dalam mesin
sentrifus dengan posisi clay seal menghadap ke luar.
•Disentrifus dengan kecepatan 16,000 RPM selama 3-5
menit.
•Dibaca dengan menggunakan microhematocrit reader dan
hasil dinyatakan dalam % (persen).
Hasil
Sampel Darah
• Dilakukan Metode apus darah
• Sampel darah yang diambil kemudian diteteskan pada
bagian ujung objek glass
• Tetesan darah kemudian ditempelkan dengan bagian ujung
object glass lain, setelah darah merata pada bagian bawah
object glass, dilakukan apus darah dengan posisi object
glass 30°
• Apusan darah difiksasi menggunakan methanol
• kemudian diwarnai dengan pewarnaan giemsa untuk
pengamatan diferensial leukosit.
Hasil
3.1.3 Pemeriksaan Sitologi
1. Swab Telinga
Sampel Eksudat
Diswab sampel serumen telinga yang didapatkan pada
object glass secara tipis menggunakan cotton bud.
Ditutup preparat menggunakan cover glass lalu diamati
menggunakan mikroskop.
Hasil
2. Swab Luka
Sampel Serumen
Ditempelkan object glass pada lesi luka kulit yang
bereksudat kemudian dibiarkan kering.
Diwarnai preparat menggunakan metode pewarnaan Diff-
Quik yang diawali dengan fiksasi menggunakan metanol
selama 2-5 detik.
Setelah difiksasi, dilanjutkan dengan pewarnaan eosin
selama 25-30 detik.
Diwarnai dengan methylene blue selama 25-30 detik.
Dibuang pewarna dan dibilas menggunakan air mengalir
secara perlahan hingga warna pada preparat hilang dan
hanya tersisa di area yang terwarnai.
Dikeringkan preparat dengan cara diangin-anginkan lalu
diamati menggunakan mikroskop.
Hasil
3. Kerokan Kulit
Sampel Kerokan Kulit
Lesi crustae kulit dikerok menggunakan scalpel blade
Hasil kerokan kulit diamati menggunakan mikroskop
Hasil
Hasil
b.Uji Benda Keton
Sampel Urin
Dimasukkan 10 mL urin ke dalam tabung reaksi.
Ditambahkan 0.5 mL asam asetat glasial.
Ditambahkan Na Nitroprusside 5%.
Ditambahkan 3 mL amoniak pekat melalui dinding
tabung perlahan (untuk kontrol).
Ditambahkan 4-5 tetes aseton.
Diamati perubahan reaksi yang terjadi.
Hasil
c. Uji Darah
Sampel Urin
Dimasukkan sampel urin sebanyak 1 mL ke dalam
tabung reaksi.
Ditambahkan 0.5 mL larutan Benzidine.
Ditambahkan 2 tetes darah (untuk kontrol).
Diamati perubahan reaksi yang terjadi.
Hasil
4.1.6 Fibrinogen
Tabel 4.8 Hasil pemeriksaan fibrinogen mamalia.
Spesies Hasil Kisaran Normal Keterangan
(g/dL) (g/dL)
Anjing 1.6 2-4 Hipofibrinogenemia
Kucing - 2-4 Normal
Kelinci 2.4 0.3-0.9 Hiperfibrinogenemia
Kambing 0.4 0.1-0.4 Normal
Sapi 0.8 0.32-1.35 Normal
Hasil pemeriksaan fibrinogen dengan memanaskan
mikrohematokrit dan diamati menggunakan refraktometer didapatkan
hasil bahawa terdapat penurunan pada anjing dan peningkatan pada
kelinci. Fibrinogen diubah menjadi fibrin yang tidak larut selama
kaskade koagulasi, yang mengarah pada pembentukan bekuan darah
yang stabil. Peningkatan kadar fibrinogen menandakan peradangan
nonspesifik sementara penurunan kadar dapat terjadi akibat insufisiensi
hati yang parah, disseminated intravascular coagulation (DIC) atau,
jarang, defisiensi kongenital (defisiensi faktor I). Adanya bekuan dalam
sampel atau penggunaan lithium heparin sebagai antikoagulan akan
menyebabkan penurunan kadar fibrinogen yang salah (Villiers dan
Rictic, 2016).
4.1.7 Leukosit
Tabel 4.9 Hasil pemeriksaan leukosit mamalia.
Spesies Hasil Kisaran Normal Keterangan
(g/dL) (g/dL)
Anjing 5.2 6.0-17.0 Leukopenia
Kucing 5.1 2.87-17.02 Normal
Kelinci 3.4 5.5 – 12.5 Leukopenia
Kambing 6.9 4-13 Normal
Sapi 6.2 5.1-13.3 Normal
Hasil perhitungan leukosit pada kucing, kambing, dan sapi adalah
dalam kisaran normal, sedangkan pada anjing dan kelinci mengalami
penurunan (leukopenia). Leukosit (sel darah putih) termasuk granulosit
(neutrofil, eosinofil dan basofil) dan sel mononuklear (monosit dan
limfosit). Perubahan leukosit dapat mempengaruhi setiap jenis sel darah
tepi. Proses penyakit dapat menurunkan atau meningkatkan jumlah
leukosit yang bersirkulasi. Pola perubahan jumlah leukosit absolut dari
setiap jenis sel digunakan untuk mengidentifikasi penyakit yang
mendasari yang bersifat inflamasi (menular dan tidak menular),
metabolik, dan neoplastik, dan untuk mengidentifikasi respons fisiologis
terhadap kegembiraan dan stres. Jumlah total leukosit memberikan
informasi tentang jumlah total leukosit dan mengidentifikasi leukositosis
atau leukopenia. Jumlah sel diferensial memberikan jumlah absolut
setiap leukosit dan memungkinkan karakterisasi lengkap dari
leukositosis atau leukopenia (yaitu, pola leukogram). Setiap pola
leukogram dapat digunakan untuk mengembangkan daftar kemungkinan
proses penyakit (diagnosis diferensial) (Rosenfeld dan Dial, 2010).
Leukosit sangat penting untuk pertahanan, dan untuk inisiasi serta
kontrol inflamasi dan imunitas. Neutrofil, makrofag, dan sel natural
killer (NK) (sel limfoid khusus) memberikan respons imun bawaan,
yang merupakan garis pertahanan pertama melawan patogen yang
menyerang dan tidak melibatkan memori imunologis. Sel-sel limfoid
mengatur respons imun adaptif atau didapat, yang diaktifkan oleh
peradangan yang disebabkan oleh patogen apa pun yang melewati
respons bawaan. Respon imun adaptif mengembangkan memori
imunologis. Selain sebagai sel efektor (melaksanakan fungsi), leukosit
berperan penting dalam regulasi hemopoiesis, inflamasi dan imunitas.
Meskipun umumnya protektif terhadap jaringan inang, leukosit juga
terlibat dalam inflamasi yang merugikan, alergi, dan immunemediated
disease (Villiers dan Rictic, 2016).
100x obj
40xobj
100x obj
40x obj
Ket Basofil, heterofil (panah hitam), dan eosinofil. Sel dengan nukleus
yang tidak tersegmentasi dengan baik dan sitoplasma ungu muda
dengan jumlah granula kecil berwarna ungu di kiri atas adalah
basofil. Sel di kanan bawah dengan nukleus tersegmentasi dan
butiran kecil berwarna kemerahan yang berbeda adalah heterofil.
Sel dengan banyak granula bulat besar di sisi dalam (kanan atas)
adalah eosinofil.
Kambin
g
Ket. Limfosit kecil (panah hitam). Sel dengan inti bulat hingga oval dan
tepi sitoplasma biru muda adalah limfosit kecil.
100x obj
Ket. Limfosit (panah hitam). Sel bulat dengan inti bulat tunggal dan
jumlah sitoplasma biru yang rendah adalah limfosit. Eosinofil
(panah kuning). Sel mononuklear bulat dengan butiran sitoplasma
kebiruan adalah eosinofil.
Ayam
Ket. Heterofil (panah hitam). Sel dengan inti berlobus dan butiran
sitoplasma merah-oranye tidak jelas adalah heterofil matang.
Limfosit kecil (panah kuning). Sel dengan inti bulat sampai agak
oval, kromatin yang menggumpal kasar, dan sejumlah kecil
sitoplasma biru adalah limfosit kecil.
4.2.9 Hasil Perhitungan Relatif dan Absolut Leukosit Mamalia
Tabel 4.26 Hasil perhitungan monosit pada non mamalia.
Spesies Relatif Absolut Kisaran Keterangan
(%) Normal
(103/µL) (103/µL)
Iguana 13 14.2 0.4-2.3 Monositosis
Ayam 26 27.7 0.00 – 0.50 Monositosis
Hasil perhitungan monosit pada iguana dan ayam adalah mengalami
peningkatan (monositosis) dari kisaran normal. Monositosis
menunjukkan penyakit inflamasi, terutama peradangan granulomatosa.
Monositosis sering dikaitkan dengan penyakit menular yang disebabkan
oleh organisme yang biasanya menyebabkan peradangan granulomatosa,
seperti Mycobacterium dan Chlamydophila, dan jamur, seperti
Aspergillus. Granuloma bakteri kronis dan nekrosis jaringan masif juga
dapat menyebabkan monositosis. Dalam kebanyakan situasi, monositosis
paling sering dikaitkan dengan bersamaan heterofilia. Monositosis telah
terlihat pada defisiensi nutrisi tertentu, seperti defisiensi seng, juga
(Thrall dkk, 2012).
Tabel 4.27 Hasil perhitungan limfosit pada non mamalia.
Spesies Relatif Absolut Kisaran Keterangan
(%) (103/µL) Normal
(103/µL)
Iguana 6,4 70.1 5.2-14.4 Limfositosis
Ayam 15 16.0 1.27 – 10.20 Limfositosis
Hasil perhitungan limfosit pada iguana dan ayam adalah mengalami
peningkatan (limfositosis) dari kisaran normal. Pada iguana jumlah
limfosit dipengaruhi oleh beberapa faktor lingkungan, fisiologis, dan
jenis kelamin. Jumlah limfosit tertinggi pada musim panas dan iguana
betina memiliki limfosit lebih tinggi dari jantan. Limfositosis dapat
terjadi pada kondisi peradangan, penyembuhan luka, penyakit virus, dan
infestasi parasit seperti Anasakiasis dan Spirochidiasis. Limfositosis juga
terjadi selama ekdisis. Sama halnya dengan iguana, pada ayam
limfositosis terjadi sebagai stimulus antigen seperti infeksi virus kronis,
infeksi bakteri kronis, infeksi jamur, penyakit parasit, neoplasia limfoid
seperti limfosarkoma dan leukemia limfositik, dan toksisitas seng (Weiss
dan Wardrop, 2010).
Tabel 4.28 Hasil perhitungan heterofil pada non mamalia.
Spesies Relatif Absolut Kisaran Keterangan
(%) (103/µL) Normal
(103/µL)
Iguana 6 6.5 0.6-6.4 Heterofilia
Ayam 30 3.2 1.01 – 13.20 Normal
Hasil perhitungan nilai absolut heterofil pada ayam adalah dalam
kisaran normal, sedangkan pada iguana mengalami peningkatan
(heterofilia). Konsentrasi heterofil pada reptil juga dipengaruhi oleh
faktor musiman. Misalnya, konsentrasi heterofil tertinggi selama bulan-
bulan musim panas. Karena fungsi utama heterofil adalah fagositosis,
peningkatan yang signifikan dalam jumlah heterofil reptil biasanya
dikaitkan dengan penyakit inflamasi, terutama infeksi mikroba dan
parasit atau jaringan. cedera. Kondisi noninflamasi yang dapat
menyebabkan heterofilia termasuk stres (yaitu, kelebihan
glukokortikosteroid), neoplasia, dan leukemia heterofilik (Thrall dkk,
2012).
Tabel 4.29 Hasil perhitungan basofil pada non mamalia.
Spesies Relatif Absolut Kisaran Keterangan
(%) (103/µL) Normal
(103/µL)
Iguana 6 6.5 0.1-1.2 Basofilia
Ayam 18 19.2 0.00 – 0.40 Normal
Hasil perhitungan basofil pada ayam adalah dalam kisaran normal,
sedangkan pada iguana mengalami peningkatan (basofilia) dari kisaran
normal. pada reptil, jumlah basofil bervariasi menurut spesies, infestasi
parasit, dan faktor lainnya. Basofilia dapat dikaitkan dengan infeksi
parasit dan virus (Thrall dkk, 2012).
Tabel 4.30 Hasil perhitungan eosinofil pada non mamalia.
Spesies Relatif Absolut Kisaran Keterangan
(%) (103/µL) Normal
(103/µL)
Iguana 11 12.0 0.0-0.4 Eosinoflia
Ayam 8 8.5 0.00 – 0.74 Eosinoflia
Hasil perhitungan eosinofil pada iguana dan ayam adalah mengalami
peningkatan (eosinophilia) dari kisaran normal. pada reptile, jumlah
eosinofil bervariasi dalam hubungannya dengan beberapa faktor, seperti
spesies, musim, dan infestasi parasite. Sedangkan eosinofilia pada ayam
terjadi pada kondisi ayam yang memiliki edema wajah; ayam percobaan
terinfeksi Schistosoma atau secara alami terinfeksi Trichostrongylus
tenuis; dan pada puyuh, ayam, dan bebek yang disuntik secara
intraperitoneal dengan serum kuda atau albumin serum sapi (Weiss dan
Wardrop, 2010).
4.3 Hasil Sitologi
4.3.1 Swab Telinga
Kucing domestic short hair, berjenis kelamin jantan, dengan
kondisi hyperkeratosis serta saborrhea pada dorsal kepala hingga
tengkuk. Dilakukan swab pada telinga dengan teknik roll menggunakan
cotton bud steril dan dilakukan sitologi dengan pewarnaan diff-quick,
didapatkan hasil seperti gambar (Gambar 4.1).
Gambar 4.1 Hasil sitologi swab telinga pada kucing menggunakan pewarnaan
diff-quick, ditemukan adanya bentukan oval basofilik, seperti
kacang yang menyerupai kokus bakteri dalam jumlah lebih dari
50. 40x objektif (Dokumentasi Pribadi, 2022).
Berdasarkan gambar di atas, ditemukan adanya bentukan oval
basofilik seperti kacang yang menyerupai bakteri kokus dalam jumlah
lebih dari 50. Menurut Villiers dan Ristic (2016), bentukan tersebut
normal pada kebanyakan anjing dalam jumlah rendah (<5 per lapang
pandang), sedangkan pada kasus ini, ditemukan >5 pada satu lapang
pandang. Dari gambaran tersebut dapat didiagnosa bahwa kucing
mengalami otitis Malassezia. Malassezia (Pityrosporum) adalah tunas
kecil yeast yang mirip dengan Candida. Biasanya ditemukan pada swab
telinga dengan otitis kronis yang tidak responsif terhadap terapi
antibiotik (Willard dan Tvedten, 2012).
4.3.2 Kerokan Kulit
Marmut jantan jenis Sheba, berumur kurang lebih 1 tahun yang
dipelihara dalam 1 kandang bersama kelinci. Ditemukan adanya crustae
pada telinga dan sela-sela kaki. Dilakukan pengerokan kulit secara
dalam pada bagian crustae telinga hingga berdarah. Hasil kerokan
dijatuhkan langsung pada gelas objek, lalu diamati dimikroskop
perbesaran 10x objektif dan idapatkan bentukan seperti Gambar 4.2.
Gambar 4.2 Hasil kerokan kulit secara dalam bagian tepi telinga marmut
ditemukan adanya tungai family sarcoptidae. 10x objektif
(Dokumentasi Pribadi, 2022).
Hasil gambar diatas ditemukan tungau dengan kaki pendek dan
sepasang kaki ke-3 dan ke-4 tidak terlihat. Kakinya memiliki bentukan
seperti cakar, memiliki anus berada di posterior. Tubuhnya bulat, pipih
di bagian perut, dan cembung di bagian punggung. Dari ciri-ciri tersebut
dapat diidentifikasi bahwa tungau yang berada di gambar adalah
Sarcoptes sp. tungau ini membuat terowongan di lapisan superfisial
epidermis sela jari kaki, paw, dan pinggiran telinga (Taylor dkk, 2016).
4.3.3 Swab Luka
Marmut jantan jenis Sheba, berumur kurang lebih 1 tahun yang
dipelihara dalam 1 kandang bersama kelinci. Ditemukan adanya crustae
pada telinga dan sela-sela kaki. Dilakukan swab luka yang terlebih
dahulu dilakukan kerokan kulit secara dalam hingga berdarah. Swab luka
dilakukan dengan menempelkan gelas objek pada luka lalu dilakukan
sitologi dengan pewarnaan diff-quick dan didapatkan bentukan seperti
pada Gambar 4.3.
Gambar 4.3 Hasil swab luka terbuka pada telinga marmut karena hasil dari
kerokan kulit secara dalam hingga berdarah. Ditemukan adanya
eosinofil (panah hitam) dan eritrosit, 40x objektif (Dokumentasi
Pribadi, 2022).
Berdasarkan gambar di atas, ditemukan adanya eosinofil yang
ditunjuk dengan tanda panah. Eosinofil ditunjukan dalam bentuk sel
dengan nukleus yang tidak tersegmentasi dengan baik dan banyak, besar,
bulat, dan terdapat butiran kemerahan di sitoplasma. Pada gambar juga
ditemukan adanya eritrosit karena saat dilakukan swab luka yang didapat
adalah darah hasil dari kerokan dalam. Pada sel darah merah marmut
terdapat sedikit variasi dalam ukuran sel darah merah (anisositosis).
Sebagian besar sel memiliki sentral pucat dalam jumlah sedang (Reagen
dkk, 2019).
4.3.4 Cairan Abnormal Tubuh
Kucing domestik berjenis kelamin jantan berumur kurang lebih
satu tahun ditemukan dijalan dengan kondisi malnutrisi, cachexia,
oligouria, sempoyongan, ocular discharge, mukosa pucat, sedikit
tremor, dan rambut terlihat kusam. Dilakukan pemeriksaan radiologi di
Rumah Sakit Hewan Pendidikan Universitas Brawijaya, ditemukan
adanya opasitas yang mengarah pada cairan di abdomen, kemudian
dilakukan abdominocentesis menggunakan butterfly needle. Didapatkan
cairan berwarna putih keruh agak kekuningan sedikit dan kental,
kemudian dilakukan sitologi dengan pewarnaan diff-quick dan
didapatkan hasil seperti pada Gambar 4.4.
Gambar 4.5 Urin yang didapatkan dari pemasangan urin kateter (Dokumentasi
Pribadi, 2022).
Urin didapatkan dari pemasangan urin kateter dan didapatkan
10mL urin berwarna merah kecoklatan dengan bau merujuk pada
amonia, terlihat keruh, dan berat jenis 1.010 menggunakan urin dipstick.
Menurut Sirois (2020), volume urin normal adalah 20-40 mL/kg BB,
dengan warna urin normal adalah kuning muda sampai kuning karena
adanya pigmen yang disebut urokrom. Urin yang berwarna merah atau
merah-coklat menunjukkan adanya sel darah merah (hematuria) atau
hemoglobin (hemoglobinuria). Urin normal memiliki bau khas yang
bervariasi antar spesies. Urine kucing, kambing, dan babi jantan
memiliki bau yang menyengat. Bau amonia dapat terjadi pada sistitis
yang disebabkan oleh bakteri yang memproduksi urease (Proteus spp.
atau Staphylococcus spp.) dan yang telah memetabolisme urea menjadi
amonia.
Berat jenis normal kucing adalah 1.030 dengan rentang 1.001-
1.080. Pada kasus isostenuria dengan bj 1.008–1.012 dapat
mengindikasikan banyak kondisi yang menyebabkan polidipsi (banyak
minum) atau polyuria (produksi urin meningkat) atau pada hewan
normal dalam keadaan tertentu. BJ dalam kisaran ini dengan azotemia
mendukung diagnosis gagal ginjal (Villiers dan Ristic, 2016), namun
mengukur BJ urin menggunakan strip reagen adalah metode yang paling
tidak dapat diandalkan untuk menentukan pada hewan, sehingga perlu
dilakukan pemeriksaan menggunakan refraktometer dan pemeriksaan
lebih lanjut.
4.4.2 Kimia Urin
Pada pemeriksaan kimia urin kucing menggunakan urin dipstick dan
dikonfirmasi dengan uji protein, glukosa, keton dan darah menggunakan
reagen. Hasil yang didapatkan terjadi pada Tabel 4.31.
Tabel 4.31 Hasil pemeriksaan kimia urin menggunakan urin dipstick.
Indikator Hasil Kisaran Keterangan
Normal (Villiers dan Ristic, 2016)
Ph 8 6.0–7.5 pH >7.5 dapat disebabkan karena
adanya bakteri penghasil urease karena
infeksi saluran kemih atau kontaminasi
sampel.
Leukosit +3 Negatif Esterease yang diproduksi oleh leukosit
merupakan indikator pyuria namun
tidak direkomendasikan karena banyak
positif palsu, sehingga perlu dilakukan
pemeriksaan mikroskopis.
Nitrit Negatif Negatif Tidak direkomendasikan (negatif
palsu). Nitrit yang dihasilkan oleh
bakteri Gram-negatif hanya dapat
dideteksi jika urin berada di VU
setidaknya selama 4 jam sebelum
pengambilan sampel.
Protein 3+ Negatif Disebabkan oleh penyakit saluran
500mg/ atau kemih terutama ginjal atau mungkin
dL sedikit sistem genital. Kadang-kadang
sejumlah kecil protein ditemukan
dalam urin hewan normal. Positif palsu
terjadi ketika urin yang sangat encer,
karena konsentrasi protein mungkin di
bawah sensitivitas metode pengujian;
Pigmenturia; dan Peningkatan palsu
pada urin yang sangat basa (pH >8).
Glukosa +1 50 Negatif Jumlah glukosa dalam urin (glucosuria)
(2,8 tergantung pada kadar glukosa darah
mg/dL) dan pada kecepatan filtrasi glomerulus
dan resorpsi tubulus. Glukosuria
biasanya tidak terjadi pada hewan
normal kecuali kadar glukosa darah
melebihi ambang ginjal (sekitar 170
hingga 180 mg/dL untuk anjing). Pada
konsentrasi ini, resorpsi tubulus tidak
dapat mengikuti filtrasi glomerulus
glukosa, dan glukosa masuk ke dalam
urin. Hasil positif palsu untuk glukosa
dapat terlihat setelah penggunaan
berbagai obat, termasuk asam askorbat
(vitamin C), morfin, salisilat (misalnya
aspirin), sefalosporin, dan penisilin.
Keton Negatif Negatif Strip tes reagen urin tidak cukup
mengidentifikasi pasien sampai ketosis
telah hadir untuk beberapa waktu.
Peningkatan palsu terjadi pada kondisi
pigmenturia dengan urin yang sangat
pekat dan asam. Penurunan palsu
terjadi pada kondisi sampel urin yang
sudah lama.
Uro- Negatif Negatif Tidak direkomendasikan karena tidak
bilinogen konsisten positif dalam keadaan
hemolitik
Bilirubin Negatif Negatif Dapat disebabkan karena hemolisis,
disfungsi hati, kolestasis obstruktif
hepatic, kolestasis obstruktif pasca-
hepatik, dan kolestasis fungsional
(karena sepsis). Peningkatan palsu
dapat terjadi karena metabolit etodolak
(NSAID), kehadiran indican (produk
perincian yang berasal dari triptofan).
Penurunan palsu dapat terjadi karena
suplementasi asam askorbat dan
paparan sinar matahari (bilirubin
menurun dengan paparan sinar UV)
Eritrosit >+4 Negatif Perdarahan (hematuria) di mana saja di
saluran urogenital, peradangan (infeksi,
kristaluria), neoplasia, trauma
(termasuk trauma pengambilan
sampel), dan koagulopati Beberapa
kondisi sistemik juga dapat
menyebabkan hematuria. Peningkatan
palsu dapat terjadi karena peroksidase
mikroba (infeksi saluran kemih atau
kontaminasi sampel). Penurunan palsu
dapat terjadi karena sampel tidak
tercampur (eritrosit mengendap), urin
yang sangat pekat, asam askorbat dan
formaldehida.
Hemo- Negatif Negatif Hemoglobinuria biasanya
globin menunjukkan hemolisis intravascular,
lisis eritrosit dengan sampel urin yang
sudah lama, myoglobinuria, dan
methaemoglobinuria.
Uji protein
BAB V. Penutup
5.1 Kesimpulan
5.2 Saran
Daftar Pustaka
Barger, A.M. dan Macneill, A.L. 2015.Clinical Pathology and Laboratory
Techniques for Veterinary Technicians. Wiley Blackwell: Lowa.
Day, M.J. dan Kohn, B. 2012. BSAVA Manual of Canine and Feline Haematology
and Transfusion Medicine. 2nd Ed. BSAVA: Gloucester, UK.
Mahindra, A.T., Batan, I.W., dan Nindhia, T.S. 2020. Gambaran Hematologi
Anjing Peliharaan Di Kota Denpasar. Jurnal Indonesia Medicus Veterinu
s9(3):314-324.
Norsiah, W. 2015. Perbedaan Kadar Hemoglobin Metode Sianmethemoglobin
Dengan Dan Tanpa Sentrifugasi Pada Sampel Leukositosis. Medical
Laboratory Technology Journal 1 (2) : 73-74.
Raskin, R.E. dan Meyer, D.J. 2016. Canine and Feline Cytology : A Colour Atlas
and Interpretation Guide, 3rd ed. Elsevier : St. Louis Missouri.
Reagan, W.J., Rovira, A.R.I., DeNicola, D.B. 2019. Veterinary Hematology Atlas
of Common Domestic and Non-Domestic Spesies. 3rd Ed. Wiley Blackwell:
Hoboken.
Rosenfeld, A.J. dan Dial, S.M. 2010. Clinical Pathology for the Veterinary Team.
Wiley Blackwell: Lowa.
Senja, N.O., Widyastuti, S.K., dan Erawan, I.G.M.K. 2020. Kadar Protein Total
Serum Sapi Bali Betina. Jurnal Indonesia Medicus Veterinus. 9(4):502-
511.
Sirois, M. 2020. Laboratory Procedures for Veterinary Technicians. 7th Ed.
Elsevier: St. Louis.
Stockham, S.L. dan Scott, M.A. 2008. Fundamentals of Veterinary Clinical
Pathology. 2nd Ed. Blackwell Publishing: Iowa, USA.
Taylor, M.A., Coop, R.L., dan Wall, R,L. 2016. Veterinary Parasitology. 4th ed.
Wiley Blackwell: UK.
Thrall, M.A., Weiser, G., Allison, R.W., dan Campbell, T.W. 2012. Veterinary
Hematology and Clinical Chemistry. 2nd. Wiley-Blackwell : USA.
Villiers, E. dan Ristic, J. 2016. BSAVA Manual of Canine and Feline Clinical
Pathology. 3rd Ed. BSAVA: Gloucester, UK.
Weiss, D.J. dan Wardrop, K.J. 2010. Schalm’s Veterinary Hematology. 6th Ed.
Blackwell: USA.
Willard, M.D dan Tvedten, H. 2012. Small Animal Clinical Diagnosis by
Laboratory Methods. Elsevier Saunders: St. Louis, Missouri.
Yustina dan Darmadi. 2017. Buku Ajar: Fisiologi Hewan. Program Studi
Pendidikan Biologi FKIP Universitas Riau. ISBN 098-602-50749-6-7.