LAPORAN PENGAMATAN SEMENTARA

Nama : Ahmat Hendrawan

NIM : 205090107111019
Kelas : Biologi C
Topik : Isolasi Mitokondria

A. Preparasi
No Perlakuan Fungsi Hasil
1. Mencit didislokasi pada Untuk membuat mencit Mencit menjadi tidak
bagian leher hilang kesadaran dan sadar dan otak dengan
memutus bagian otak dengan tulang belakang putus
tulang belakang
2. Mencit dibedah pada Agar dapat diambilnya organ Dada mencit
bagian dada pada hati dan menjaga agar terbuka/terbeah dan organ
ruangan bersuhu rendah jaringan tidak rusak hati dapat diambil
3. Gelas beaker berisi Untuk pencucian organ hati Gelas beaker siap dan es
larutan buffer disiapkan dan menjaga jaringan hati dengan garam siap
dalam wadah berisi es agar tidak rusak digunakan
dan garam
4. Hati mencit dicuci tiga Untuk membersihkan kotoran Hati mencit bersih dari
kali pada tiap gelas beker seperti darah yang menempel kotoran (darah)
pada hati
5. Organ hati dikeringkan Untuk mengeringkan dan Organ hati mencit kering
dengan blotting paper menghilangkan jaringan ikat dan bersih dari jaringan
dan jaringan ikat lemak yang menempel ikat
dibersihkan dengan
pinset dan gunting
6. Organ hati dipotong- Agar hati menjadi lebih kecil Hati berbentuk kecil dan
potong menjadi bagian dan halus halus
kecil dan dimasukkan ke
tissue press
7. Hati mencit dimasukkan Agar jarngan tidak rusak Jaringan tidak rusak dan
ke dalam larutan buffer (sukrosa isotonis), (EDTA didapatkan filtrat hati
sukrosa, EDTA, dan Tris mencegah kerusakan mencit
HCl, kemudian diaduk protein), (Tris HCl
dan disaring keseimbangan pH), dan
penyaringan agar didapatkan
filtrat dari hati
8. Filtrat hati mencit Agar filtrat hati menjadi Homogenat hati dengan
dimasukkan ke dalam homogen dengan buffer buffer
buffer dan dilakukan
homogenisasi
9. Campuran buffer hati Agar mendapatkan sel Didapatkan cairan sel
mencit diinkubasi individu dan menghambat yang terpisah dan
dengan larutan tripsi aktivits enzim tripsin ektivitas enzim tripsi
inhibitor terhambat
10 Campuran disentrifugasi Untuk memisahkan organel Organel yang berukuran
. dengan kecepatan rendah yang berukuran relative besar besar terpisah (pellet dan
selama 15 menit supernatant)
 11 Pelet dibuang dan Untuk mendapatkan pellet Pelet dengan kandungan
. supernatant dengan kandungan mitokondria
disentrifugasi (kembali) mitokondria
dengan kecepatan tinggi
selama 12 menit
12 Pelet disentrifugasi Untuk menjaga kemurnian Mitokondria menjadi
. dengan kecepatan tinggi mitokondria murni
(ketiga)

B. Uji Mitokondria dengan Spektofotometri

No Perlakuan Fungsi Hasil
.
1. Pelet (mitokondria) Untuk membuat ikatan antara Mitokondria telah
diinkubasi dengan 10 mitokondria dengan JG-B berikatan dengan JG-B
um pewarna JG-B
2. Larutan mitokondria Agar dilakukan pemisahan Terdapat dua larutan
dengan JG-B dibagi dan perlakuan berjumlah dua mitokondria-JG-B
menjadi dua larutan
3. Larutan mitokondria Agar diketahuinya Absorbansi mitokondria
dnegan JG-B dianalisa absorbansi dari larutan dengan JG-B diketahui
dengan spektofotometri mitokondria dengan JG-B
4. Sentrifugasi lerutan Untuk dilakukan pemisahan Pelet dan supernatant
kedua mitokondria antara pellet dengan terpisah
dnegan JG-B supernatan
5. Supernatan dianalisa Agar diketahinya absorbansi Absorbansi supernatant
dengan absorbansi dari supernatan diketahui
6. Pelet didapatkan diberi Agar diketahuinya Absorbansi dari pellet
perlakuan dengan absorbansi dari pelet diketahui
spektofotometri

C. Uji Mitokondria dengan Mikroskop Confocal

No Perlakuan Fungsi Hasil
.
1. Pelet mitokondria Untuk dipersiapkan uji Pelet mitokondria telah
diletakkan pada gelas percobaan berada pada gelas slide
slide
2. Pelet mitokondria Untuk pewarnaan Mitokondria menjadi
ditetesi pewarna JG-B mitokondria sehingga dapat berwarna (hijau) dan
dan dibiarkan selama 5- diamati dnegan jelas mudah diamati
10 menit
3. Slide glass dibilasAgar pewarna yang tidak Preparat bersih dari sisa
dengan aquades dan terserap hilang dan pewarna dan udara pada
ditutup dengan kaca mempersiapkan preparate preparate hilang
preparate sebelum iamati serta
enghilangkan udara pada
tutup kaca
4. Preparat mitokondira Untuk didapatkan pencitraan Citra preparate
 diamati dengan dari preparat mitokondria
mirkoskop
confocal/laser
pemindaian
5. Preparat mitokondria Untuk mengamati reaksi oleh Preparat teretesi
ditetesi dengan tembaga cairan tembaga dan variasi mitokondira dan
askorbat denagn pada konsentrasi cairan didapatkan hasil variasi
konsentrasi berbeda dan tembaga
diamati dengan confocal
6. Preparat lain ditetesi Untuk mengamati reaksi oleh Preparat mitokondria
dengan sambiloto ekstrak sabiloto dan variasi tertetesi ekstrak sambiloto
dengan beragam akiba konsentrasi sambiloto dan hasil bervariasi
konsentrasi dan diamati
dengan mirkoskop
7. Hasil pengamatan Untuk diketahui perbedaan Perbedaan perlakuan
dibandingkan hasil dari dua perlakuan didapatkan ahsil yang
berbeda antara tembaga
askorbat dan sambiloto