Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Jurnal Equine Veterinary Science 120 (2023) 104164

Daftar isi tersedia diScienceDirect

Jurnal Equine Veterinary Science

halaman utama jurnal:www.j-evs.com

Riset Asli

Mengevaluasi Keamanan Mitoterapi Intra-Artikular pada Model Equine:

Pengobatan Baru yang Potensial untuk Osteoarthritis
Jennifer M. Cassanosebuah,∗, Krzysztof Maryczsebuah,b, Marta Hornasebuah, Marcos Perez Noguesc,
Jessica M. Morgan sebuah, Daniel B. Herrmannsebuah, Larry D. Galuppoc, Natalia Vapniarskyd

Departemen Kedokteran Hewan dan Epidemiologi, Institut Kedokteran Hewan untuk Penyembuhan Regeneratif, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas California,
sebuah

Davis, CA
bInternational Institute of Translational Medicine (MIMT), Malin, Wisznia Mała, Polandia
cDepartemen Ilmu Bedah dan Radiologi, Institut Kedokteran Hewan untuk Penyembuhan Regeneratif, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas California, Davis, CA

dDepartemen Patologi, Mikrobiologi dan Imunologi, Institut Kedokteran Hewan untuk Penyembuhan Regeneratif, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas
California, Davis, CA

articleinfo abstrak

Riwayat artikel: Tidak ada perawatan saat ini yang tersedia untuk menghentikan perkembangan osteoarthritis pada kuda atau manusia.
Diterima 1 September 2022 Injeksi mitokondria intra-artikular adalah pengobatan baru yang berpotensi meningkatkan metabolisme sel dan mengurangi
Diterima dalam bentuk revisi 19 Oktober
peradangan, tetapi keamanan pengobatan ini belum ditetapkan pada kuda. Mitokondria yang berasal dari darah autolog yang
2022 Diterima 9 November 2022
diisolasi menggunakan kit yang tersedia secara komersial disuntikkan ke sendi karpus kiri dari 3 kuda yang dipantau selama
Tersedia online 13 November 2022
28 hari. Kuda menerima pemeriksaan fisik, evaluasi gaya berjalan yang direkam dengan video, pengukuran diameter sendi,
Kata kunci: pengumpulan cairan sinovial, dan pengumpulan darah pada hari ke 0 (dasar sebelum mitoterapi, hari injeksi mitokondria), 1,
Kuda 3, 7, 14, dan 28. Peradangan sistemik terjadi dinilai melalui hitung darah lengkap, fibrinogen, dan plasma serum amiloid A
Mitokondria (SAA). Peradangan lokal dinilai melalui sitologi cairan sinovial dan parameter pemeriksaan fisik. Parameter pemeriksaan fisik
Osteoartritis tetap stabil dan tidak ada pembengkakan sendi yang diamati setelah mitoterapi. Tidak ada perubahan yang dicatat dalam
Mitoterapi
video evaluasi gait yang direkam sebagaimana ditentukan oleh evaluator buta. Hitung darah lengkap mengungkapkan tidak
Sinovitis
ada peningkatan yang signifikan dalam sel darah putih. SAA hanya meningkat sedikit dalam 1 kuda. Fibrinogen menjadi sedikit
meningkat di atas kisaran referensi pada 2 kuda pada hari ke 7, tetapi kemudian dinormalisasi. Peningkatan ringan dalam
jumlah sel berinti cairan sinovial dan protein total terjadi pada hari 1 dan 3, tetapi diselesaikan dalam 7 hari tanpa intervensi.
Injeksi mitokondria autolog ke dalam sendi interkarpal kuda ditoleransi dengan baik tanpa tanda-tanda peradangan.
Informasi keamanan ini memungkinkan untuk penelitian selanjutnya yang mengevaluasi kemanjuran mitoterapi.

Diterbitkan oleh Elsevier Inc.

Ini adalah artikel akses terbuka di bawah lisensi CC BY (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/)

1. Perkenalan
Osteoarthritis (OA) adalah kelainan progresif yang berhubungan
dengan nyeri kronis dan penurunan fungsi individu, akibatnya
Pernyataan konflik kepentingan: Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan.
Kesejahteraan hewan/pernyataan etis: Semua eksperimen hewan yang dilakukan memenuhi
Prinsip Panduan Internasional untuk Penelitian Biomedis yang Melibatkan Hewan sebagaimana
dikeluarkan oleh Dewan Organisasi Internasional Ilmu Kedokteran. Semua prosedur telah
disetujui oleh Komite Perawatan dan Penggunaan Hewan Institusional dan Dewan Peninjau Uji
Coba Klinis di University of California, Davis.
∗Penulis koresponden di: Jennifer M. Cassano. Sekolah Kedokteran Hewan, Universitas
dalam biaya individu dan sosial ekonomi yang substansial[1]. Prevalensi
OA meningkat di seluruh dunia dan diperkirakan akan meningkat lebih
lanjut dengan harapan hidup yang lebih lama, menyoroti pentingnya
manajemen yang tepat[2]. Atlet kuda menyediakan model OA alami
yang memungkinkan untuk penelitian translasi [3,4]. Kuda memiliki
prevalensi OA yang sama tingginya dengan manusia, berkontribusi
terhadap sekitar 60% ketimpangan yang mengakibatkan kerugian
ekonomi dan masalah kesejahteraan.[5]. Model kuda memungkinkan
untuk penyelidikan patogenesis OA dan sarana untuk menguji
kemanjuran intervensi terapi baru dengan potensi manfaat bagi
manusia dan kuda.
OA ditandai dengan aktivasi sel imun bawaan dan produksi sitokin.

California, Departemen Kedokteran Hewan dan Epidemiologi, Institut Kedokteran Hewan Makrofag sinovial dianggap sebagai tipe sel utama yang berkontribusi
untuk Pengobatan Regeneratif, 1 Shields Avenue Davis, CA 95616. pada proses inflamasi, meskipun tipe sel lain juga menghasilkan
Alamat email:jmcassano@ucdavis.edu,jen.cassano.dvm@gmail.com (JM Cassano). mediator proinflamasi dan de-

https://doi.org/10.1016/j.jevs.2022.104164
0737-0806/Diterbitkan oleh Elsevier Inc. Ini adalah artikel akses terbuka di bawah lisensi CC BY (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/)
JM Cassano, K. Marycz, M. Horna dkk.
peningkatan produksi mediator antiinflamasi[6–9]. Perawatan yang
tersedia difokuskan pada perbaikan peradangan yang sedang
berlangsung. Mereka termasuk injeksi kortikosteroid, asam hialuronat,
glikosaminoglikan polisulfat, plasma kaya trombosit, serum terkondisi
autologous, atau konsentrat sumsum tulang.[10]. Namun, terapi saat
ini bervariasi dalam kemanjuran, dan tidak ada yang menghentikan
atau membalikkan tahap akhir OA, menyoroti perlunya perawatan
inovatif.[9].
Mitokondria adalah organel pusat metabolisme energi dan
kelangsungan hidup sel, dan disfungsi mereka telah terlibat dalam
penyakit yang berkaitan dengan usia dan inflamasi. Disfungsi
mitokondria telah didokumentasikan pada OA tahap awal dan akhir
pada kondrosit. Ini telah terlibat dalam banyak jalur, termasuk stres
oksidatif, peradangan yang diinduksi sitokin, katabolisme matriks, dan
apoptosis kondrosit.11,12]. Sinoviosit dengan mitokondria
disfungsional dapat melepaskan spesies oksigen reaktif dan oksida
nitrat (NO) yang secara langsung merusak matriks ekstraseluler dan
mengaktifkan jalur inflamasi yang mengarah ke OA[13]. Gangguan
fungsi mitokondria dikaitkan dengan pergeseran ke fenotipe sinoviosit
inflamasi yang melepaskan banyak mediator inflamasi seperti sitokin,
spesies oksigen reaktif, dan matriks metaloproteinase.13,14]. Strategi
untuk meningkatkan metabolisme mitokondria yang sehat dan
mengurangi eksaserbasi kaskade inflamasi pada kondrosit dan
sinoviosit dapat menjadi pilihan terapi potensial untuk pengobatan
sinovitis dan osteoartritis. Salah satu pendekatan inovatif untuk
mengobati disfungsi mitokondria adalah mengganti mitokondria yang
disfungsional dengan mitokondria eksogen untuk mempromosikan
peremajaan sel penerima dan mengembalikan fungsinya.
Sebelum menentukan apakah mitoterapi manjur dalam mengobati
sinovitis dan osteoartritis, demonstrasi keamanan terapi baru ini
sangat penting. Banyak terapi biologis menginduksi berbagai tingkat
peradangan setelah injeksi intra-artikular, menyebabkan resistensi di
antara beberapa dokter untuk mengadopsi terapi ini dan kekhawatiran
mengenai manfaat secara keseluruhan.[15–17]. Dokter sering
mengobati respon inflamasi aseptik umum yang membatasi diri
terhadap terapi biologis intra-artikular dengan antiinflamasi nonsteroid
sistemik. Pemberian antiinflamasi nonsteroid sistemik dapat mengubah
cara biologis berinteraksi dengan lingkungan sendi dan bagaimana hal
ini berdampak pada kemanjuran biologis tidak diketahui. Idealnya,
terapi intra-artikular untuk pengobatan sinovitis dan osteoarthritis
tidak akan menginduksi peradangan yang terbukti secara klinis dan
akan ditoleransi dengan baik serta manjur. Studi ini dirancang untuk
menentukan bagaimana injeksi mitokondria autologus yang
diturunkan dari darah perifer mempengaruhi kuda sehat pada tingkat
lingkungan sendi sistemik dan lokal. Hipotesis kami adalah bahwa
mitoterapi dapat ditoleransi dengan baik dan memiliki efek merugikan
lokal atau sistemik minimal pada kuda normal.
2. Bahan-bahan dan metode-metode
2.1. Kuda
3 ekor kuda dewasa yang digunakan dalam penelitian ini merupakan
bagian dari kawanan Center for Equine Health (CEH). Penilaian kesehatan
sistemik didasarkan pada hitung darah lengkap (CBC) normal, profil
biokimia, pemeriksaan fisik, dan kesehatan pada pemeriksaan dasar
ketimpangan tungkai depan. Kuda tidak menerima vaksinasi atau
pengobatan dengan antiinflamasi sistemik dalam waktu 4 minggu
pendaftaran studi. Semua prosedur telah disetujui oleh Komite Perawatan
dan Penggunaan Hewan Institusional dan Dewan Peninjau Uji Coba Klinis di
University of California, Davis.
2.2. isolasi mitokondria
Total mitokondria diisolasi dari trombosit kuda yang sehat
menggunakan kit isolasi Mitokondria komersial untuk sel yang dikultur
2
Jurnal Equine Veterinary Science 120 (2023) 104164
(ThermoFisher Scientific, Cat # 89874) sesuai dengan petunjuk pabrikan dan
seperti yang dijelaskan sebelumnya [18,19]. Vena jugularis disiapkan secara
aseptis dan sepuluh mL darah dikumpulkan ke dalam tabung darah sitrat
dan dengan lembut dibalik 8-10 kali setelah pengambilan sampel kemudian
diproses untuk isolasi trombosit. Platelet-rich plasma (PRP) pertama kali
disiapkan dengan cara mensentrifugasi darah pada 800 g selama 5 menit,
kemudian trombosit kemudian diendapkan dari PRP pada 2500 g selama 15
menit. Trombosit yang diperoleh dicuci 2 kali dengan Hank's Balanced Salt
Solution (HBSS, Gibco Cat # 14170122) dan mengalami lisis, menggunakan
buffer lisis yang disediakan yang mengandung protease inhibitor cocktail
(1:1000) di atas es. Campuran dihomogenkan, dilanjutkan dengan inkubasi
selama 5 menit pada es dengan vorteks setiap 1 menit. Lisat sel
disentrifugasi pada 700×g selama 10 menit pada 4°C menjadi pelet debris
seluler dan fraksi sitosolik. Mitokondria kemudian dibuat pelet dari
supernatan yang dikumpulkan dengan sentrifugasi pada 12.000×g selama
15 menit pada 4°C, dan disuspensikan kembali dalam 100 μL HBSS dingin
dan disimpan dalam es sampai digunakan. Kandungan protein dari preparat
mitokondria yang diperoleh dikuantifikasi dengan menggunakan Kit Uji
Protein Pierce Bicinchoninic Acid (BCA) (Fisher Scientific, Cat # 23225).
2.3. Visualisasi mitokondria menggunakan mikroskop confocal
Untuk mengonfirmasi bahwa protokol berhasil dalam isolasi
mitokondria, suspensi diwarnai dengan MitoRed MitoTracker (Sigma Aldrich
Cat # M22425) dengan rasio 1:1000, selama 30 menit dalam inkubator kultur
sel (37°C, 5% CO2). Mitokondria yang diwarnai kemudian dicuci 3 kali dengan
HBSS, ditempatkan pada slide mikroskopis yang bersih, disebarkan untuk
membuat apusan dan dipasang dengan kaca penutup menggunakan
ProLong Diamond Antifade Mountant (Invitrogen, Cat# P36961). Mitokondria
bernoda divisualisasikan menggunakan mikroskop confocal (Observer Z1
Confocal Spinning Disc V.2 Zeiss dengan ruang pencitraan langsung). Semua
gambar diperoleh dengan kamera Canon PowerShot.
2.4. Persiapan mitokondria untuk injeksi
Fraksi mitokondria total yang dikumpulkan dari masing-masing kuda
disuspensikan kembali dalam 1 mL plasma darah-platelet autologus masing-
masing kuda. Sampel dari masing-masing buffer isolasi mitokondria
dikumpulkan dan dipastikan negatif untuk endotoksin (kartrid reagen
Charles River Endosafe LAL, Cat #PTS5505F) dan mycoplasma (kit deteksi
Abm MycoplasmaPCR; Cat# G238) sebagai tindakan pencegahan keamanan
ekstra sebelum injeksi intra-artikular.
2.5. Injeksi Arthrocentesis dan Mitokondria
Kuda dibius menggunakan detomidine (0,01 mg/kg secara
intravena) untuk setiap arthrocentese. Kulit di atas sendi interkarpal kiri
disiapkan secara steril dan sampel cairan sinovial diperoleh dengan
artrosentesis aseptik, diikuti dengan injeksi 1 mL preparat mitokondria.
Arthrocentesis tambahan dilakukan pada hari pasca injeksi 1, 3, 7, 14,
28. Sampel cairan sinovial diserahkan untuk analisis sitologi di William
R. Pritchard Veterinary Medical Teaching Hospital (VMTH), UC Davis.
2.6. Pemantauan klinis dan pemeriksaan ketimpangan
Pemeriksaan fisik lengkap dan pemeriksaan ketimpangan yang
terdiri dari kondisi umum, suhu rektal, detak jantung, laju pernapasan,
warna membran mukosa, waktu pengisian kapiler, skor ketimpangan,
dan lingkar sendi pada tingkat tulang karpal aksesori dilakukan pada
setiap titik waktu arthrosentesis sebelum mitoterapi hari 0 (dasar, hari
injeksi mitokondria), 1, 3, 7, 14, dan 28. Ketimpangan dinilai secara
independen oleh 2 pengamat
JM Cassano, K. Marycz, M. Horna dkk.
Gambar 1.Mikrograf confocal dua dan tiga dimensi dari mitokondria terisolasi diwarnai dengan pelacak MitoRed berpendar. Perbesaran diatur pada 100X, Bilah skala 5 μm.
(MPN, ahli bedah kuda naik dan JMC, dokter kuda berpengalaman)
secara langsung menggunakan skor ketimpangan Dyson dan Ross[20].
Evaluasi kiprah direkam dengan video dan dinilai oleh seorang peneliti
(JMM, naik kedokteran olahraga dan rehabilitasi) yang tidak
mengetahui tanggal rekaman untuk menilai secara objektif apakah ada
ketimpangan yang diinduksi dengan pengobatan. Darah dikumpulkan
melalui vena jugularis sebelum mitoterapi hari 0 (dasar, hari injeksi
mitokondria), 1, 3, 7, 14, dan 28. Serum amiloid A (SAA), protein fase
akut dan penanda inflamasi akut, telah diukur menggunakan uji aliran
lateral kuantitatif komersial dan pembaca (Stablelab EQ-1 Zoetis).
Hitung darah lengkap dan fibrinogen dilakukan oleh William R.
Pritchard Veterinary Medical Teaching Hospital (VMTH), UC Davis.
2.7. Statistik
Data dianalisis menggunakan uji Friedman's pengukuran berulang untuk
data nonparametrik dengan uji perbandingan berganda Dunn untuk
perbandingan analisis post-hoc dengan baseline menggunakan GraphPad
Prism 9 untuk Windows (GraphPad Software Inc., CA, USA). Signifikansi
ditetapkan padaP<.05.
3. Hasil
3.1. isolasi mitokondria
Kandungan protein dari fraksi mitokondria terisolasi yang dinilai
melalui uji BCA ditemukan 0,300 mg untuk kuda A, 0,609 mg untuk
kuda B, dan 0,493 mg untuk kuda C. Kandungan protein fraksi
mitokondria digunakan sebagai pemeriksaan internal bahwa protokol
isolasi berhasil, itu tidak digunakan untuk menyeimbangkan dosis
fraksi mitokondria antar individu. Mikroskopi confocal dari fraksi
mitokondria dari protokol isolasi mengungkapkan penampakan banyak
mitokondria yang tampaknya utuh (Gambar 1).
3.2. Parameter klinis setelah mitoterapi
Tidak ada perubahan yang relevan secara klinis dalam parameter
pemeriksaan fisik (kondisi umum, suhu rektal, detak jantung, laju
pernapasan, warna membran mukosa, waktu pengisian kapiler, dan lingkar
sendi pada tingkat tulang karpal aksesori) atau skor ketimpangan yang
diamati pada titik waktu mana pun setelah mitoterapi di semua 3 kuda.
Contoh video analisis gaya berjalan disertakan dalam Gambar Tambahan 1.
3
Jurnal Equine Veterinary Science 120 (2023) 104164
Tidak ada perubahan dalam penilaian tungkai depan yang disuntikkan dari
rekaman video evaluasi kiprah dari waktu ke waktu.
3.3. Hitung darah lengkap dan penanda inflamasi sistemik
setelah mitoterapi
Hitung darah lengkap menunjukkan perubahan minimal pada
parameter leukosit, eritrosit, dan trombosit setelah mitoterapi.Tabel 1).
Plasma serum amiloid A (SAA) penanda peradangan sistemik akut
meningkat ringan pada 1 kuda (normal kurang dari 20 ug/mL[21]),
namun, nilai telah kembali ke 0 ug/mL pada hari ke 7 (Gambar 2
SEBUAH). Fibrinogen sedikit meningkat di atas kisaran referensi pada 2
kuda pada hari ke 7, tetapi kemudian dinormalisasi (Gambar 2B).
Jumlah sel darah putih (WBC), SAA atau nilai fibrinogen secara statistik
tidak berbeda dari waktu ke waktu (WBC,P=.93; SAA,P>0,99; fibrinogen,
P=.64).
3.4. Analisis cairan sinovial setelah mitoterapi
Peningkatan ringan dalam jumlah sel berinti cairan sinovial dan
protein total terdeteksi pada hari 1 dan 3 setelah mitoterapi, tetapi ini
diselesaikan dalam 7 hari tanpa intervensi.Gambar. 3SEBUAH,3B).
Jumlah sel berinti cairan sinovial atau protein total cairan sinovial tidak
berbeda secara statistik dari waktu ke waktu (jumlah sel berinti cairan
sinovial,P=.06; protein total cairan sinovial,P=.23). Secara keseluruhan,
parameter cairan sinovial tetap tidak berubah setelah mitoterapi (Meja
2).
4. Diskusi
Injeksi mitokondria autolog ke dalam sendi interkarpal kuda dapat
ditoleransi dengan baik dan tidak menghasilkan perubahan parameter
klinis. Sementara perubahan minimal pada nilai peradangan sendi sistemik
dan lokal terdeteksi pada awalnya, ini diselesaikan tanpa intervensi dalam 7
hari. Informasi keselamatan ini sangat penting untuk melangkah maju
dengan mengevaluasi potensi mitoterapi untuk mengobati sinovitis dan
osteoartritis.
Banyak terapi biologis yang lebih baru untuk osteoarthritis menginduksi
peradangan yang terlihat secara klinis, sering disebut sebagai "joint flare"
pada banyak spesies, termasuk pada kuda.15,16,22]. Secara konsep, “joint
flare” bersifat self-limiting; namun, pembengkakan, panas, dan nyeri lokal
secara klinis mengkhawatirkan karena kesamaan gejala ini dengan artritis
septik dini. Flare sendi juga dapat meningkatkan keparahan peradangan
intra-artikular yang sudah ada sebelumnya. Kuda khususnya
JM Cassano, K. Marycz, M. Horna dkk. Jurnal Equine Veterinary Science 120 (2023) 104164

Tabel 1
Ringkasan Analit Hitung Darah Lengkap dari waktu ke waktu pada kuda setelah injeksi mitokondria.

Parameter Eritrosit Hari 0 Hari 1 Hari ke-3 Hari 7 Hari 14 Hari 28

RBC (juta sel/uL) H1 9.28 9.06 10.50 9.65 8.14 8.2

Referensi (6.2 –10.2) H2 6.97 6.94 6.30 6.46 7.06 6.6
H3 7.92 9.30 9.18 9.21 9.69 8.85
Hemoglobin (gm/dl) H1 15.7 15.4 18.1 16.5 13.7 13.8
Referensi (11.2 –17.2) H2 13.1 13.1 11.8 12.1 13.3 12.6
H3 14.0 16.6 16.0 16.5 17 15.8
Hematokrit (%) H1 44.9 43.7 50.7 46.5 39.2 39.1
Referensi (30 –46) H2 36.9 36.7 33.3 33.9 37.2 34.6
H3 39.3 46.1 45.4 45.4 47.9 43.7
Parameter Leukosit
WBC (sel/uL) H1 7.720 7.850 6.940 7.340 6.750 5.680
Referensi (5.000 –11.600) H2 4.670 4.520 4.710 4.690 4.810 5.380
H3 7.960 7.670 8.330 7.930 7.730 7.270
Neutrofil (sel/uL) H1 5.280 4.570 3.380 3.810 3.470 2.650
Ref (2.600 –6.800) H2 2.890 2.893 2.940 2.980 3.030 3.180
H3 4.820 4.372 4.750 4.650 4.490 4.400
Limfosit (sel/uL) H1 2.060 2.710 2.900 2.930 2.840 2.630
Referensi (1.600 –5.800) H2 1.550 1.492 1.500 1.440 1.443 1.900
H3 2.320 2.761 2.570 2.450 2.610 2.410
Monosit (sel/uL) H1 180 260 320 260 250 200
Referensi (0 –500) H2 140 136 160 170 241 180
H3 250 153 390 280 270 330
Eosinofil (sel/uL) H1 170 280 320 310 170 170
Ref (0 –200) H2 70 0 90 80 96 80
H3 530 384 570 530 320 100
Basofil (sel/uL) H1 20 30 20 20 20 40
Referensi (0 –100) H2 10 0 10 10 0 40
H3 20 0 40 30 40 20
Parameter Lainnya
Trombosit (sel/uL) H1 144.000 139.000 116.000 164.000 136.000 136.000
Referensi (100.000 –225.000) H2 126.000 97.000 122.000 119.000 116.000 133.000
H3 169.000 159.000 166.000 161.000 155.000 164.000
Protein Plasma (gm/dL) H1 7.1 6.9 6.9 6.7 6.6 6.5
Referensi (5.8 –8.7) H2 7.5 7.7 7.4 7.5 7.6 7.6
H3 6.8 7.1 7.1 7.3 7.5 7.3

Gambar 2.Perubahan minimal pada parameter sistemik serum amiloid A dan fibrinogen setelah mitoterapi. Serum amyloid A (A) rentang referensi normal yang dilaporkan adalah 0 –20 ug/mL, satu
kuda pada hari 1 meningkat di luar rentang referensi. Kisaran referensi Fibrinogen (B) adalah 100 –400 mg/dL, dengan dua kuda ditinggikan di luar kisaran referensi pada hari ke 7. Tidak ada cairan
sinovial yang berbeda secara statistik dari waktu ke waktu berdasarkan pada pengukuran berulang uji Friedman (SAA,P>0,99; fibrinogen,P=.64).

sangat rentan terhadap peradangan setelah injeksi biologis intra-artikular
seperti plasma kaya trombosit dan sel punca mesenkim [15,17,23,24]. Flare-
up seperti itu dilaporkan bahkan ketika menggunakan sumber turunan
autologus, yang telah membatasi aplikasi klinis dari terapi ini. Sementara
ukuran sampel dari penelitian ini kecil dan pemantauan lebih lanjut pada
populasi pasien yang lebih besar diindikasikan, fakta bahwa mitokondria
intra-artikular tidak menyebabkan peradangan yang terlihat secara klinis
atau ketidaknyamanan pasien dalam penelitian ini cukup menjanjikan.
Pada 3 kuda yang diteliti, mitoterapi dapat ditoleransi dengan sangat
baik sehingga tidak ada indikasi klinis untuk memantau peradangan
sistemik atau lokal melalui parameter laboratorium setelah pengobatan,
namun hal ini mendorong bahwa penelitian laboratorium ini
rameters juga tetap sangat normal. Sementara beberapa peningkatan
ringan dalam jumlah sel berinti cairan sinovial dan protein total mengikuti
injeksi, parameter ini dinormalisasi tanpa intervensi. Beberapa perubahan
lokal pada jumlah sel berinti cairan sinovial dan protein total cairan sinovial
dapat diinduksi oleh aspirasi cairan sinovial saja.[6]. Mereka dianggap
disebabkan oleh respon inflamasi lokal untuk memasuki membran sinovial
dan/atau oleh sejumlah kecil perdarahan yang terkait dengan aspirasi yang
mengakibatkan masuknya sel dan protein.6,25,26]. Keterbatasan penelitian
ini adalah kurangnya kelompok kontrol kuda yang dipantau secara
bersamaan atau penggunaan kontrol ekstremitas kontralateral yang
menerima injeksi plasebo atau penyisipan jarum saja. Kontrol kontralateral
juga akan membantu dalam menginterpretasikan variabilitas individu dalam
kekebalan

4
JM Cassano, K. Marycz, M. Horna dkk. Jurnal Equine Veterinary Science 120 (2023) 104164

Gambar 3.Perubahan minimal pada parameter lokal jumlah nukleasi total cairan sinovial dan protein total setelah mitoterapi. Peningkatan ringan jumlah sel berinti cairan sinovial (A)
sel/ul dan protein total cairan sinovial (B) g/dL diselesaikan dalam 7 hari. Tidak ada cairan sinovial yang secara statistik berbeda dari waktu ke waktu berdasarkan pengukuran berulang
uji Friedman (jumlah sel berinti cairan sinovial,P=.06; protein total cairan sinovial,P=.23).

Meja 2
Ringkasan analit Cairan Sinovial dari waktu ke waktu pada kuda setelah injeksi mitokondria.

Hari 0 Hari 1 Hari ke-3 Hari 7 Hari 14 Hari 28

Total Protein (g/dL) H1 2.9 2.5 2.7 1.8 1.7 2.1

Referensi (0 –3.0) H2 1.5 2.9 2.0 2.3 1.7 1.6
H3 2.5 3.6 3.3 1.5 2.4 2.3
Total RBC (sel/uL) H1 <30.000 360.000 30.000 <20.000 <30.000 <20.000
H2 <20.000 120.000 <30.000 <30.000 <30.000 <30.000
H3 <20.000 <20.000 180.000 30.000 <30.000 <30.000
Total Sel Bernukleasi (sel /uL) Ref H1 900 780 1.710 140 390 80
(0 –3.000) H2 60 2190 450 270 210 360
H3 630 3.030 2.970 510 270 420
Diferensial Manual
Neutrofil (%) H1 0 26 25 4 4 0
referensi<10% H2 0 41 0 0 0 0
H3 0 49 28 1 0 0
Mononuklir (%) H1 100 74 75 96 96 100
H2 100 59 100 100 100 100
H3 100 51 72 99 100 100

respon terhadap arthrocentesis, dan desain studi khasiat masa depan akan
mendapat manfaat dari pertimbangan ini. Namun, perubahan cairan
sinovial yang terlihat dalam penelitian ini berada dalam kisaran yang
dilaporkan dalam literatur dalam penelitian setelah peradangan yang
diinduksi oleh arthrocentesis saja [6,25,26].
Konsep mengganti mitokondria disfungsional dengan mitra
fungsional mereka untuk mempromosikan peremajaan sel penerima
dan mengembalikan fungsinya telah mendapat perhatian khusus dan
menjadi tantangan ilmiah yang nyata.[27–29]. Dalam sel, dinamika
mitokondria diatur oleh proses fusi, fisi, dan mitofag. Fusi antara
mitokondria yang rusak dan yang sehat mengembalikan fungsi yang
tepat dari organel yang rusak ini[30]. Fusi menghasilkan pertukaran
metabolit, protein, peptida, dan DNA mitokondria (mtDNA) dan
akibatnya, peningkatan fungsi mitokondria di dalam sel. Baru-baru ini,
mitokondria, yang berasal dari sejumlah sumber jaringan yang
berbeda, telah terbukti mengubah profil metabolisme sel yang terluka/
meradang dan menginduksi proses regeneratif.31,32]. Pemberian
mitokondria eksogen ke dalam jaringan jantung iskemik menurunkan
sitokin inflamasi seperti tumor necrosis factor-alpha (TNF-
α) dan interleukin-6 (IL-6)[27]. Sel punca mesenchymal (MSC) dapat
menggantikan mitokondria yang rusak atau mengkompensasi
kerusakan mitokondria melalui transfer mitokondria antara MSC dan
sel yang rusak/meradang secara in vitro [28,29,33]. Studi awal ini
menyoroti potensi mitoterapi sebagai pengobatan untuk berbagai
penyakit.
Administrasi agen stabilisasi mitokondria telah menunjukkan
potensi yang menjanjikan untuk pengobatan osteoarthritis pasca-
trauma [12,34]. Apakah akan menggunakan stabilisasi mitokondria
agen versus pemberian mitokondria eksogen kemungkinan akan didasarkan
pada keadaan proses penyakit. Pada awal perkembangan osteoarthritis,
kerusakan mitokondria lebih lanjut dapat dicegah dengan zat penstabil,
sedangkan kemudian dalam proses penyakit mitokondria eksogen mungkin
diperlukan untuk menyelamatkan fungsi metabolisme sel. Persiapan
mitokondria eksogen kemungkinan akan lebih mahal dan terhalang oleh
variabilitas individu yang melekat pada biologis dibandingkan dengan obat
seperti agen stabilisasi mitokondria, tetapi pada tahap akhir mitokondria
eksogen osteoarthritis mungkin diperlukan penyelamatan. Ini adalah bidang
penemuan yang sedang berlangsung dan pendekatan pelengkap ini untuk
memulihkan fungsi mitokondria keduanya dapat berperan dalam
menyembuhkan osteoartritis.
Banyak penelitian sebelumnya telah menggunakan MSC sebagai sumber
mitokondria.28,29,33,35]. Namun ketersediaan dan kualitas MSC dibatasi
oleh biaya dan waktu untuk mengisolasi dan membiakkan sel, serta faktor
pasien seperti status kesehatan dan usia yang dapat mempersulit
implementasi klinis.[36–38]. Dalam penelitian ini kami menggunakan
trombosit sebagai sumber mitokondria, dengan tujuan kemudahan isolasi
dalam aplikasi klinis di masa mendatang. Karena persiapan plasma kaya
trombosit adalah umum dalam praktik kuda, kami menemukan bahwa kami
dapat mengisolasi mitokondria dengan andal dari sumber ini menggunakan
centrifuge dasar dan kit komersial, dengan jumlah bahan sumber yang
relatif kecil, sepuluh mililiter darah tepi.
Berdasarkan data keamanan awal kami yang menjanjikan, langkah
selanjutnya adalah mengeksplorasi kemanjuran mitoterapi intra-artikular
dalam mengurangi artritis kuda. Model sinovitis yang diinduksi, seperti
model sinovitis yang diinduksi equine lipopolysaccharide (LPS) [23,39], akan
menjadi tes yang tepat untuk kemanjuran mitoterapi. Publikasi terbaru dari
anggota tim ini menunjukkan

5
JM Cassano, K. Marycz, M. Horna dkk.
menyatakan bahwa in-vitro, mitokondria dapat mengubah fenotipe sinoviosit
kuda yang distimulasi oleh LPS[40]. Dengan demikian, model sinovitis yang
diinduksi LPS akan menjadi titik awal yang logis untuk mengevaluasi kemanjuran
mitoterapi dalam menyembuhkan osteoartritis kuda. Setelah demonstrasi
kemanjuran dalam model penelitian, uji klinis double blind dapat dieksplorasi
pada kuda dan kemudian pada manusia, karena data keamanan sebelumnya telah
ditetapkan.
5. Kesimpulan
Studi keamanan percontohan ini menunjukkan injeksi mitokondria
autologus ke dalam sendi interkarpal kuda ditoleransi dengan baik pada 3
kuda, memberikan informasi keamanan awal yang penting untuk aplikasi
klinis pada kuda dan manusia. Mitoterapi memiliki potensi untuk
menguntungkan pasien dengan proses inflamasi dan penyakit degeneratif,
seperti osteoarthritis dimana pengobatan baru sangat dibutuhkan. Studi
selanjutnya dapat bergerak untuk mengevaluasi kemanjuran mitoterapi
untuk mengobati sinovitis dan osteoartritis, dengan pengetahuan bahwa
terapi ini akan menginduksi peradangan minimal untuk menghalangi
penggunaan dokter.
Tambahan Gambar 1. Video kiprah representatif dari Kuda C pada Hari 7.
Sendi intercarpal kiri disuntik dengan mitokondria yang berasal dari darah perifer
autologus pada hari ke 0, dan seperti yang terlihat dalam contoh video analisis
gaya berjalan ini, tidak ada ketidaknyamanan yang terdeteksi.
Etika Penerbitan
Penelitian asli berikut dilaporkan secara akurat dan objektif dalam
diskusi. Ini belum pernah diterbitkan sebelumnya atau sedang ditinjau
di jurnal lain mana pun. Semua penulis telah melihat dan
Kontribusi Penulis
Konseptualisasi diusulkan oleh LDP, KM, NV, dan JMC. Metodologi
mitokondria dan penyelidikan laboratorium dilakukan oleh KM dan
DBH. Investigasi klinis dilakukan oleh MH, MPN, dan JMC. Investigasi
analisis gaya berjalan dan visualisasi dilakukan oleh JMM. Analisis
formal dilakukan oleh NV dan JMC. JMC bertanggung jawab atas
pengawasan pelaksanaan proyek dan tim. Penulisan - draf naskah asli
adalah JMC dan semua penulis terlibat dalam penulisan-peninjauan dan
penyuntingan.
Pengungkapan keuangan
Dukungan keuangan diberikan oleh Center for Equine Health di UC
Davis dengan dana yang disediakan oleh dana taruhan satelit Negara
Bagian California dan kontribusi dari donor swasta.
Bahan pelengkap
Materi tambahan yang terkait dengan artikel ini dapat ditemukan,
dalam versi online, di doi:10.1016/j.jevs.2022.104164.
Referensi
[1] Hunter DJ, Schofield D, Callander E. Dampak individu dan sosial ekonomi dari
osteoarthritis. Nat Rev Rheumatol 2014;10(7):437–41. doi:10.1038/nrrheum.
2014.44.
[2] Safiri S, Kolahi AA, Smith E, dkk. Beban osteoartritis global, regional, dan nasional
1990-2017: analisis sistematis studi beban penyakit global 2017. Ann Rheum Dis
2020:819–28. doi:10.1136/annrheumdis-2019-216515.
[3] Frisbie DD, Kisiday JD, Kawcak CE, Werpy NM, McIlwraith CW. Evaluasi fraksi vaskular stroma
yang diturunkan dari adiposa atau sel punca mesenkimal yang diturunkan dari sumsum
tulang untuk pengobatan osteoartritis. J Orthop Res 2009;27(12):1675– 80. doi:10.1002/
jor.20933.
[4] McIlwraith CW, Frisbie DD, Kawcak CE. Kuda sebagai model osteoarthritis yang
terjadi secara alami. Res Sendi Tulang 2012;1(11):297–309. doi:10.1302/
2046-3758.111.2000132.
6
Jurnal Equine Veterinary Science 120 (2023) 104164
[5]Kannegieter NJ. Sinovitis proliferatif kronis dari sendi equine metacarpophalangeal.
Vet Rec 1990;127(1):8–10.
[6] Andreassen SM, Vinther AML, Nielsen SS, dkk. Perubahan konsentrasi biomarker
hemostatik dan inflamasi dalam cairan sinovial setelah injeksi lipopolisakarida intra-
artikular pada kuda. BMC Vet Res 2017;13(1):182. doi:10.1186/s12917-017-1089-1.
[7]Firth EC, Wensing T, Seuren F. Model penyakit sinovitis yang diinduksi pada kuda
poni. Cornell Vet 1987;77(2):107–18.
[8] Pearson W, Orth MW, Lindinger MI. Evaluasi respons inflamasi yang diinduksi melalui
injeksi intra-artikular interleukin-1 pada kuda yang menerima diet nutraceutical dan
penilaian efek klinis pemberian nutraceutical jangka panjang. Am J Vet Res
2009;70(7):848–61. doi:10.2460/ajvr.70.7. 848.
[9] Chow YY, Chin KY. Peran peradangan dalam Patogenesis Osteoarthritis. Mediator
Inflamm 2020;2020:8293921. doi:10.1155/2020/ 8293921.
[10] Wilson JM, McKenzie E, Duesterdieck-Zellmer K. Survei internasional mengenai
penggunaan modalitas rehabilitasi pada kuda. Front Vet Sci 2018;5(JUN):1–8. doi:
10.3389/fvets.2018.00120.
[11] Blanco FJ, Rego I, Ruiz-Romero C. Peran mitokondria dalam osteoarthritis. Nat Rev
Rheumatol 2011;7(3):161–9. doi:10.1038/nrrheum.2010.213.
[12] Bartell LR, Fortier LA, Bonassar LJ, Szeto HH, Cohen I, Delco ML. Terapi mitoprotektif
mencegah disfungsi mitokondria yang cepat dan bergantung pada regangan setelah
cedera tulang rawan artikular. J Orthop Res 2020;38(6):1257–67. doi:10.1002/jör. 24567.
[13] Li M, Luo X, Long X, dkk. Peran potensial mitokondria dalam sinoviosit. Klinik
Rheumatol 2021;40(2):447–57. doi:10.1007/s10067-020-05263-5.
[14] Yoshitomi H. Regulasi respon imun dan peradangan kronis oleh Synoviocytes seperti
fibroblast. Immunol depan 2019;10:1395. doi:10.3389/fimmu. 2019.01395.
[15] Joswig AJ, Mitchell A, Cummings KJ, dkk. Injeksi intra-artikular berulang dari sel induk
mesenkimal alogenik menyebabkan respons yang merugikan dibandingkan dengan
sel autolog pada model kuda. Stem Cell Res Ther 2017;8(1):42. doi:10.1186/
s13287-017-0503-8.
[16] Broeckx S, Suls M, Beerts C, dkk. Sel induk mesenchymal alogenik sebagai
pengobatan untuk penyakit sendi degeneratif kuda: studi percontohan. Curr Stem
Cell Res Ther 2014;9(6):497–503. doi:10.2174/1574888x09666140826110601.
[17] Velloso Alvarez A, Boone LH, Braim AP, dkk. Survei Penggunaan Klinis Terapi Intra-
Artikular Non-steroid oleh Praktisi Equine. Dokter Hewan Depan
Sains. 2020;7(Oktober):1–10. doi:10.3389/fvets.2020.579967
[18] Chen W, Paradkar PN, Li L, dkk. Abcb10 secara fisik berinteraksi dengan mitoferrin-1
(Slc25a37) untuk meningkatkan stabilitas dan fungsinya dalam mitokondria eritroid.
Proc Natl Acad Sci USA 2009;106(38):16263–8. doi:10.1073/pnas.0904519 106.
[19] Rambold AS, Kostelecky B, Elia N, Lippincott-Schwartz J. Pembentukan jaringan
tubular melindungi mitokondria dari degradasi autophagosomal selama kelaparan
nutrisi. Proc Natl Acad Sci USA 2011;108(25):10190–5. doi:10.1073/
pnas.1107402108.
[20]Ross Michael W, Dyson SJ. Diagnosis dan Penatalaksanaan Ketimpangan pada Kuda.
St Louis, Mo: Ilmu Kesehatan Elsevier; 2011.
[21] Long A, penanda inflamasi Nolen-Walston R. Equine di abad kedua puluh satu: fokus
pada serum amyloid a. Dokter Hewan Klinik Utara Am Equine Pract 2020;36(1):147–
60. doi:10.1016/j.cveq.2019.12.005.
[22] Kim S, Elam L, Johnson V, dkk. Injeksi intra-artikular sel stroma mesenkim alogenik
vs. asam hialuronat dengan berat molekul tinggi pada anjing dengan osteoartritis:
data eksplorasi dari uji klinis prospektif double-blind, acak. Ilmu Kedokteran Hewan
Depan 2022;9:890704. doi:10.3389/fvets.2022.890704.
[23] Williams LB, Koenig JB, Black B, Gibson TWG, Sharif S, Koch TG. Sel-sel stroma mesenchymal
yang diturunkan dari darah tali pusat alogenik kuda mengurangi jumlah sel berinti cairan
sinovial dan menginduksi peradangan ringan yang sembuh sendiri ketika dievaluasi dalam
model sinovitis yang diinduksi lipopolisakarida. Dokter hewan kuda
J 2016;48(5):619–25. doi:10.1111/evj.12477.
[24] Ferris DJ, Frisbie DD, Kisiday JD, dkk. Hasil klinis setelah pemberian sel punca
mesenkimal sumsum tulang secara intraartikular pada 33 kuda dengan cedera
mencekik. Vet Surg 2014;43(3):255–65. doi:10.1111/j.1532-950X.2014. 12100.x.
[25] Brama PAJ, Van Den Boom R, DeGroot J, Kiers GH, Van Weeren PR. Aktivitas
kolagenase-1 (MMP-1) dalam cairan sinovial kuda: Pengaruh usia, patologi sendi,
olahraga, dan artrosentesis berulang. Equine Vet J 2004;36(1):34–40. doi:10.
2746/0425164044864705.
[26] Van Den Boom R, Brama PAJ, Kiers GH, DeGroot J, Barneveld A, Van Weeren PR.
Pengaruh arthrocentesis berulang dan latihan pada matrix metalloproteinase dan
tumor necrosis factorαaktivitas pada sendi kuda normal. Equine Vet J
2004;36(2):155–9. doi:10.2746/0425164044868602.
[27] McCully JD, Levitsky S, del Nido PJ, Cowan DB. Transplantasi mitokondria untuk
penggunaan terapeutik. Klinik Terjemahan Med 2016;5. doi:10.1186/
s40169-016-0095-4.
[28] Paliwal S, Chaudhuri R, Agrawal A, Mohanty S. Kemampuan regeneratif sel punca
mesenkimal melalui transfer mitokondria. J Biomed Sci 2018:25. doi:10.1186/
s12929-018-0429-1.
[29] Paliwal S, Chaudhuri R, Agrawal A, Mohanty S. MSC spesifik jaringan manusia
menunjukkan kemampuan transfer mitokondria diferensial yang dapat
menentukan kemampuan regeneratifnya. Stem Cell Res Ther 2018;9. doi:10.1186/
s13287-018-1012-0.
[30] Scott I, Youle RJ. Fisi dan fusi mitokondria. Esai Biochem 2010;47:85–
98. doi:10.1042/bse0470085.
JM Cassano, K. Marycz, M. Horna dkk.
[31] Mahrouf-Yorgov M, Augeul L, Da Silva CC, dkk. Sel induk mesenchymal merasakan
mitokondria dilepaskan dari sel yang rusak sebagai sinyal bahaya untuk mengaktifkan sifat
penyelamatannya. Perbedaan Kematian Sel 2017;24(7):1224–38. doi:10.1038/cdd.2017. 51.
[32] Jalur RK, Hilsabeck T, Rea SL. Peran disfungsi mitokondria pada penyakit terkait usia.
Biochim Biophys Acta - Bioenerg 2015;1847(11):1387–400. doi:10.1016/
j.bbabio.2015.05.021.
[33] Thomas MA, Fahey MJ, Pugliese BR, Irwin RM, Antonyak MA, Delco ML. Sel stroma
mesenchymal manusia melepaskan mitokondria fungsional dalam vesikel
ekstraseluler. Depan Bioeng Biotechnol 2022;10:1–2. doi:10.3389/fbioe.2022.
870193.
[34] Delco ML, Bonnevie ED, Szeto HS, Bonassar LJ, Fortier LA. Terapi mitoprotektif
mempertahankan viabilitas kondrosit dan mencegah degenerasi kartilago dalam
model ex vivo osteoarthritis posttraumatic. J Orthop Res 2018;176(3):139– 48. doi:
10.1002/jor.23882.
[35] Jiang D, Gao F, Zhang Y, dkk. Transfer mitokondria sel punca mesenkimal secara
efektif melindungi sel epitel kornea dari kerusakan mitokondria.
Kematian Sel Dis 2016;7(11). doi:10.1038/cddis.2016.358.
Jurnal Equine Veterinary Science 120 (2023) 104164
[36] Bernardino PN, Smith WA, Galuppo LD, Mur PE, Cassano JM. Terapi sebelum terapi
sel stroma mesenchymal meningkatkan hasil pada cedera ortopedi kuda. Am J Vet
Res 2022;83(10). doi:10.2460/ajvr.22.04.0072.
[37] Alicka M, Kornicka-Garbowska K, Kucharczyk K, Kȩpska M, Rocken M, Marycz K.
Kerusakan sel punca turunan adiposa yang bergantung pada usia yang diisolasi
dari kuda. Stem Cell Res Ther 2020;11(1):1–20. doi:10.1186/ s13287-019-1512-6.
[38] Carter-Arnold JL, Neilsen NL, Amelse LL, Odoi A, Dhar MS. Analisis in vitro kuda, sel
punca mesenkim yang diturunkan dari sumsum tulang menunjukkan perbedaan
dalam usia dan jenis kelamin kuda yang cocok. Equine Vet J 2014;46(5):589– 95. doi:
10.1111/evj.12142.
[39] Andreassen SM, Vinther AML, Nielsen SS, dkk. Perubahan konsentrasi biomarker
hemostatik dan inflamasi dalam cairan sinovial setelah injeksi lipopolisakarida intra-
artikular pada kuda. BMC Vet Res 2017;13(1):1–7. doi:10.1186/s12917-017-1089-1.
[40] Kornicka-Garbowska K, Groborz S, Lynda B, Galuppo L, Marycz K. Transfer
mitokondria memulihkan plastisitas sinoviosit (FLS) seperti fibroblas dalam model
sinovitis in vitro yang diinduksi LPS. Sinyal Komunikasi Seluler 2022;20(1):1–7. doi:
10.1186/ s12964-022-00923-2.