Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

JKAMIBIOSCIENCE DANBIOENGINEERING © 2006, Masyarakat untuk Bioteknologi, Jepang

Jil. 101, No. 4, 346–353. DOI
2006: 10.1263/jbb.101.346

Degradasi Senyawa Aromatik yang Dipercepat di Lingkungan Perairan

dengan Penggunaan Interaksi antaraSpirodela polyrrhiza
dan Bakteri di Rizosfernya
Tadashi Toyama,1,2* Ning Yu,1Hirohide Kumada,1Kazunari Sei,1
Michihiko Ike,1dan Masanori Fujita1,3
Divisi Energi Berkelanjutan dan Teknik Lingkungan, Sekolah Pascasarjana Teknik, Universitas Osaka,
2-1 Yamadaoka, Suita, Osaka 565-0871, Jepang,1Departemen Kimia Terapan, Institut Muroran
Teknologi, 27-1 Mizumoto-cho, Muroran, Hokkaido 050-8585, Jepang,2dan Kochi Nasional
Sekolah Tinggi Teknologi, 200-1 Monobe Otsu, Nangoku, Kouchi 783-8508, Jepang3

Diterima 24 November 2005/Diterima 24 Januari 2006

Degradasi bahan kimia organik yang dipercepat oleh asosiasi tanaman-bakteri air dilaporkan untuk
pertama kalinya dengan penjelasan peran dan kontribusi tanaman air dan bakteri dalam rizosfernya
menggunakan duckweed raksasa yang tumbuh cepat,Spirodela polirhiza.Hasilnya jelas menunjukkan
degradasi yang dipercepat dari ketiga senyawa aromatik (fenol, anilin dan 2,4-diklorofenol [2,4-DCP])
yang diuji oleh asosiasi tanaman-bakteri air. Dalam sistem degradasi fenol, bakteri pendegradasi fenol
yang berasal dari fraksi rizosferS. polirhiza terutama berkontribusi, sedangkan dalam sistem degradasi
anilinS. polirhizaterutama disumbangkan dengan merangsang bakteri pendegradasi anilin baik di
rhizosfer dan fraksi air balk. Di sisi lain dalam sistem degradasi 2,4-DCP,S. polirhizaitu sendiri terutama
berkontribusi pada penghapusannya oleh up- ambil dan degradasi. Dengan demikian, mekanisme
penghilangan senyawa aromatik yang dipercepat adalah: sangat berbeda tergantung pada substrat.S.
polirhizamenunjukkan akumulasi selektif bakteri pendegradasi fenol pada fraksi rizosfernya, sedangkan
bakteri pendegradasi anilin dan 2,4-DCP tidak banyak terakumulasi.S. polirhizamengeluarkan
peroksidase dan lakase. Namun, kedua aktivitas enzim tersebut meningkat dengan penambahan
senyawa aromatik, menurunkan kemampuan
S. polirhizaitu sendiri seharusnya karena produksi peroksidase daripada lakase karena perubahan
aktivitas peroksidase dan konsentrasi masing-masing senyawa aromatik sesuai. Dari hasil yang
diperoleh dalam penelitian ini, dapat disimpulkan bahwa kelayakan penggunaan asosiasi
tanaman-bakteri air untuk mempercepat degradasi bahan kimia organik terutama senyawa
rekalsitran di lingkungan perairan ditunjukkan.

[Kata kunci:fitoremediasi, rizosfer, asosiasi mikroba tanaman air,Spirodela polirhiza,aromatik

senyawa, lakase, peroksidase]

Fitoremediasi, yaitu penggunaan tanaman untuk membersihkan
lingkungan yang tercemar, terutama diterapkan untuk
menghilangkan radionuklida (1) atau logam berat (2) di lingkungan
tanah dan untuk menghilangkan nitrogen atau fosfor (3, 4) di
lingkungan air menggunakan kemampuan akumulasi dan
transformasi tanaman itu sendiri selama beberapa dekade terakhir.
Baru-baru ini, percepatan degradasi bahan kimia organik termasuk
xenobiotik bandel seperti hidrokarbon minyak bumi (5– 7), pelarut
terklorinasi (8, 9), hidrokarbon aromatik polisiklik (10–12), dan
pestisida (13–16) telah dilaporkan di rhizosphere atau rhizoplane
tanaman terestrial oleh asosiasi tanaman-mikroba tertentu.
Degradasi yang dipercepat ini terutama disebabkan oleh
kemampuan, yang disebut efek rizosfer, tanaman untuk
mengangkut oksigen dan mengeluarkan eksudat zat aktif fisiologis
seperti karbohidrat,
* Penulis yang sesuai. surel:toyama@wb.env.eng.osaka-u.ac.jp
telepon: +81-(0)6-6879-7674 faks: +81-(0)6-6879-7675
asam amino dan asam organik ke dalam rizosfer, sehingga
aktivitas mikroba di rizosfer terstimulasi (17, 18). Selain itu,
dilaporkan bahwa tanaman dapat merekrut mikroba yang
mengandung fenotipe atau genotipe khusus untuk
herbisida (19, 20) dan degradasi hidrokarbon minyak bumi (
7, 21) ke dalam rizosfer dan interior akar, dan seleksi ini
terjadi tergantung pada bermacam-macam tanaman dan
kontaminan.
Pada beberapa tanaman air, efek rizosfer ini juga telah
dilaporkan, tetapi sebagian besar studi berfokus pada
percepatan nitrifikasi (22–25) dan degradasi substrat
yang mudah terurai (22, 26, 27). Hanya ada satu laporan
tentang percepatan mineralisasi surfaktan, alkilbenzena
sulfonat linier (LAS), alkohol etoksilat linier (LAE), dan
asam amino campuran (MAA) oleh mikrobiota tanaman
air (28). Namun, laporan ini hanya menunjukkan fakta
bahwa mineralisasi yang dipercepat terjadi dan
mekanisme yang berkontribusi sejauh mana

346
VOL. 101, 2006
tidak jelas. Dengan demikian kelayakan penggunaan asosiasi
mikroba tumbuhan air untuk mempercepat degradasi bahan
kimia organik terutama senyawa rekalsitran masih belum jelas.
Penelitian ini berfokus pada duckweed raksasa yang
tumbuh cepat,Spirodela polirhiza,yang tersebar di seluruh
dunia dan sering digunakan untuk pengolahan air limbah (
29, 30), dan melakukan uji degradasi senyawa aromatik
menggunakan mikrokosmos air tambak untuk
mengkonfirmasi percepatan degradasi dan untuk
menjelaskan peran dan kontribusi keduanya.S. polirhizadan
mikroba dalam mempercepat degradasi senyawa aromatik.
Perubahan jumlah bakteri pendegradasi senyawa total dan
aromatik pada air curah dan rizosfer dipantau dengan
metode plate count selama uji degradasi. Selain itu, aktivitas
enzim peroksidase dan lakase dariS. polirhizadianalisis
untuk mengevaluasi kontribusi dariS. polirhizasendiri untuk
degradasi senyawa yang diuji.
BAHAN DAN METODE
Senyawa aromatik Tiga senyawa aromatik, fenol,
anilin dan 2,4-diklorofenol (2,4-DCP), digunakan dalam penelitian ini.
Ketiga senyawa ini dipilih berdasarkan prioritas untuk diteliti untuk
perumusan standar kualitas air lingkungan untuk konservasi
kehidupan akuatik pada tahun 2003 di Jepang.
Bahan dan perawatan tanaman Tanaman utuhS. poli-
rhizadiperoleh dari kultur stok laboratorium yang ada. Mereka dipelihara
dalam wadah yang berisi 10akuair tambak yang diperoleh dari Kolam
Inukai di Kampus Suita Universitas Osaka (Suita, Osaka) dan
diaklimatisasi dengan air tambak selama 2 bulan sebelum digunakan
untuk percobaan. Air tambak diganti dua kali seminggu untuk mencegah
kekurangan nutrisi dan pertumbuhan alga selama aklimatisasi. Untuk
mendapatkan sterilS. polirhiza,kuncup musim dingin (turion) dariS.
polirhizadisterilkan dengan pencucian 5 menit dalam larutan natrium
hipoklorit (0,5% klorin tersedia), dibilas dua kali dengan air steril dan
kemudian dikecambahkan pada larutan nutrisi Hoagland steril (31)
dengan modifikasi (36,1 mg/akuTAHU3, 293 mg/akuK2JADI4,
3,87 mg/akuNaH2PO4, 103 mg/akuMgSO4⋅7H2O, 147 mg/akuCaCl2⋅2H2HAI,
3,33 mg/akuFeSO4⋅7H2O, 0,95 mg/akuH3BO3, 0,39 mg/akuMnCl2⋅4H2O,
0,03 mg/akuCuSO4⋅ 5H2O, 0,08 mg/akuZuSO4⋅ 7H2O, 0,254 mg/aku H2
Melenguh4⋅H2O, pH 7,0). Mereka dipindahkan secara aseptik ke 300 ml
Labu erlenmeyer berisi 200 ml larutan nutrisi Hoagland modifikasi steril
dan dipelihara sampai digunakan untuk percobaan. Semua bahan
tanaman ditumbuhkan secara statis dalam ruang inkubasi pada suhu 28±
1°C di bawah lampu neon pada 8000 lux (kondisi 16 jam terang dan 8 jam
gelap).
Desain uji degradasi senyawa aromatik sistem dibangunLima
untuk tes
setiap senyawa aromatik seperti yang ditunjukkan pada Tabel 1.
Sistem uji A terdiri dari air kolam alami dengan
TABEL 1. Desain lima sistem uji untuk mengevaluasi degradasi senyawa aromatik yang dipercepat
di rizosferS. polirhizaoleh asosiasi tanaman-mikroba
Komponen mikrokosmos
Rhizobakteri dari
Sistem pengujian Bakteri di air kolamsebuah
(CFU/sistem pengujian)
(CFU/sistem pengujian)
SEBUAH (7.2±2.0)×105
B (7.2±2.0)×105
C (7.2±2.0)×105
D (7.2±2.0)×105
E -
sebuahJumlah total bakteri yang dapat dikultur ditampilkan sebagai rata-rata±selang kepercayaan 95%.
DEGRADASI AROMATIK PADA RHIZOSFER TANAMAN AIR 347
30 pelepah utuh dan tidak sterilS. polirhizauntuk mengevaluasi efek
degradasi yang dipercepat oleh seluruh asosiasi tanaman-mikroba.
Sistem uji B terdiri dari air tambak alami dengan 30 pelepah sterilS.
polirhizauntuk mengecualikan efek mikroba di rizosfer (rhizobakteri)
dariS. polirhizasehingga kontribusi dariS. polirhizauntuk
mempercepat degradasi senyawa aromatik dengan merangsang
mikroba air tambak dapat dievaluasi. Sistem uji C terdiri dari air
tambak alami dengan rhizobakteri sebanyak 30 pelepahS. polirhiza
untuk mengecualikan efek dariS. polirhizasehingga kontribusi
rhizobakteriS. polirhiza degradasi senyawa aromatik dapat
dievaluasi. Untuk koleksi rhizobakteri, 30 pelepah dewasaS. polirhiza
dikumpulkan, dicuci dengan lembut dua kali selama 1 menit dalam
50 ml steril 5 mg /aku natrium tripolifosfat (TPP) untuk
menghilangkan mikroba dalam fraksi air curah. Kemudian akar
dipotong, dipindahkan ke tabung reaksi yang berisi 10 ml TPP, dan
divorteks selama 60 detik, ultrasonikasi (20 kHz, 200 w, interval 5
detik, 4 detik).°C) selama 60 detik dan vortex selama 60 detik. Sistem
uji D hanya terdiri dari air tambak alami sehingga kontribusi
mikroba dalam air tambak terhadap degradasi senyawa aromatik
dapat dievaluasi. Ini disebut sebagai kontrol sistem pengujian
lainnya. Sistem uji E terdiri dari air tambak steril dengan 30 pelepah
sterilS. polirhizauntuk mengecualikan efek mikroba baik di air
tambak dan di rizosferS. polirhizasehingga kontribusi dariS.
polirhizadegradasi senyawa aromatik hanya dapat dievaluasi.
Sistem uji ini dibangun menggunakan 300 ml air tambak dari
tambak Inukai (pH 7,4, oksigen terlarut: DO, 8,93 mg/aku; PO4-P,
0,066 mg/aku;NH4-N, 0,05 mg/aku;TIDAK2-N, 0,005 mg/aku;TIDAK3
-N, 0,38 mg/akudan karbon organik terlarut: DOC, 3,12 mg/l)dalam
500 ml Labu erlenmeyer. Setiap senyawa aromatik diubah untuk
memberikan konsentrasi akhir 10 (fenol dan anilin) atau 5 mg/aku (
2,4-DCP). Eksperimen kontrol tanpa penambahan senyawa aromatik
juga dilakukan. Untuk menghalangi cahaya dari samping atau
bawah, labu di bawah permukaan air ditutup dengan aluminium
foil. Semua mikrokosmos diinkubasi secara statis dalam ruang
inkubasi pada suhu 28±1°C di bawah lampu neon pada 8000 lux
(cahaya 16 jam dan kondisi gelap 8 jam) selama 3 (fenol dan anilin)
atau 5 hari (2,4-DCP). Selama percobaan, konsentrasi senyawa
aromatik, perilaku populasi bakteri dipantau secara berkala.
Peroksidase dan produksi lakase olehS. polirhizaselama
penghilangan senyawa aromatik Dua puluh daun sterilS.
polirhizadiinokulasi ke dalam 200 ml larutan nutrisi Hoagland
modifikasi steril, dan ditambahkan fenol, anilin atau 2,4-DCP hingga
konsentrasi akhir 5 mg/akuuntuk memantau penghilangan senyawa
aromatik yang diubah denganS. polirhizadan perubahan aktivitas
enzimatiknya. Untuk percobaan kontrol, 20 daun sterilS. polirhiza
diinokulasi ke dalam 200 ml larutan nutrisi Hoagland modifikasi
steril untuk memantau aktivitas enzimatik tanpa senyawa aromatik.
Dua ratus mililiter steril larutan nutrisi Hoagland yang dimodifikasi
dengan masing-masing senyawa aromatik (5 mg/l)tetapiS. polirhiza
juga siap untuk memeriksa bahwa abi-
Senyawa aromatik
S. polirhiza (konsentrasi awal)
S. polirhizasebuah
(daun/sistem uji)
(2.4±0.7)×107 30
- 30 Fenol (10 mg/l)
(2.4±0.7)×107 - Anilin (10 mg/l)
- - 2,4-DCP (5 mg/l)
- 30
348 TOYAMA ET AL. J.BIOSCI. BIOENG.,

penghapusan otic senyawa aromatik diubah.
Analisis senyawa aromatik Aliquot (1 ml) dari
sampel dari setiap mikrokosmos disentrifugasi (20.000×g,15 menit)
dan supernatan menjadi sasaran HPLC dilengkapi dengan kolom
Shimpack VP-ODS (150×4,6 mm id, ukuran partikel 5µm; Shimadzu,
Kyoto) dan detektor UV/VIS. Sebagai fase gerak, masing-masing 50%
dan 70% asetonitril digunakan untuk analisis fenol dan anilin,
sedangkan asam asetat 2% dalam 60% asetonitril digunakan untuk
2,4-DCP di bawah laju alir 1,0 ml/menit. Deteksi dilakukan pada
panjang gelombang 270, 254 dan 225 nm untuk fenol, anilin dan
2,4-DCP, masing-masing.
Pengambilan sampel untuk pemantauan mikroba Mikroba diko-
dipilih dari air curah dan fraksi rizosfer secara terpisah. Untuk fraksi
air curah, 10 ml sampel air curah hanya dikumpulkan. Untuk fraksi
rizosfer, tiga pelepah dewasaS. polirhizadikumpulkan, dicuci dengan
lembut dua kali selama 1 menit dalam 50 ml steril 5 mg /akuTPP
untuk menghilangkan mikroba dalam fraksi air curah. Kemudian
akar dipotong, dipindahkan ke tabung reaksi yang berisi 10 ml TPP,
dan divorteks selama 60 detik, ultrasonikasi (20 kHz, 200 w, interval
5 detik, 4 detik).°C) selama 60 detik dan vortex selama 60 detik.
ences ditentukan oleh Student'sttes denganP<0,05.
HASIL
Degradasi senyawa aromatik Degradasi
profil tiga senyawa aromatik ditunjukkan padaGambar 1. Dalam
sistem yang diubah fenol, fenol segera dan sepenuhnya
dihilangkan dalam sistem uji A dan C. Tidak ada perbedaan
dalam laju penyisihan fenol antara kedua sistem uji ini. Dalam
sistem uji B dan D, fenol juga dihilangkan dengan cepat dan
lengkap pada laju yang hampir sama dengan sistem uji A dan C
setelah periode jeda 24 dan 48 jam, masing-masing. Di sisi lain,
sekitar 36% dari fenol diubah telah dihapus dalam sistem uji E
setelah 72 jam dari periode percobaan. Dalam sistem yang
diubah anilin, penghilangan lengkap anilin diamati dalam
sistem uji A, B dan C setelah periode jeda sekitar 40 jam. Tingkat
penghapusan berada di urutan A, B dan C. Sekitar 25% dari
anilin diubah

Pencacahan total bakteri pendegradasi senyawa aromatik

dan dapat dikultur Jumlah total budidaya dan aro-
bakteri pendegradasi senyawa matic dalam air curah dan fraksi rizosfer
ditentukan dengan melapisi sampel yang diencerkan secara serial dalam
rangkap tiga. Untuk total bakteri yang dapat dibiakkan, 1/10 medium
Luria–Bertani yang diencerkan (1,0 g/akubakto-pepton, 0,5 g/akuekstrak
ragi, 1,0 g/aku,pH 7,0) sedangkan untuk bakteri pendegradasi senyawa
aromatik digunakan media garam basal (1,0 g/akuK2HPO4, 1,0 g/aku (NH
4)2JADI4, 0,2 g/akuMgSO4⋅7H2O, 0,01 g/akuFeCl3, 0,05 g/akuNaCl, 0,01 g/

akuCaCl2, pH 7,2) ditambah 100 mg/akufenol, anilin atau 2,4-DCP

digunakan. Jumlah bakteri ditentukan sebagai unit pembentuk koloni
(CFU) per ml untuk bakteri dalam air curah dan CFU per pelepahS.
polirhizauntuk bakteri di rizosfer, masing-masing. Hasilnya ditampilkan
sebagai CFU per sistem pengujian yang dihitung sebagai berikut: (CFU/
ml)× (total volume air curah dalam sistem uji) untuk bakteri dalam air
curah dan (CFU/daunS. polirhiza)× (jumlah totalS. polirhizadalam sistem
uji) untuk bakteri di rizosfer, masing-masing.

Analisis enzimatik Aktivitas peroksidase dan lakase dalam jumlah besar

air dan fraksi jaringan akar ditentukan. Untuk analisis aktivitas
enzimatik pada fraksi jaringan akar, akar dari tiga pelepahS.
polirhizamenjadi sasaran ultrasonikasi (20 kHz, 200 w, interval 5
detik, 4°C) dalam 6 ml dapar fosfat (50 mM dapar kalium fosfat
[pH 7,0], 2 mM EDTA, 1% polivinilpirolidon) selama 5 menit,
disentrifugasi (20.000×g,15 menit, 4°C), dan supernatan
digunakan untuk analisis. Untuk aktivitas peroksidase, 2,0 ml
sampel (air curah atau fraksi jaringan akar), 0,6 ml guaiakol 3,0
mM, 0,6 ml buffer kalium fosfat 500 mM (pH 7,0), 0,12 ml 25 mM
EDTA, 0,6 ml 45 mM H2HAI2dan 2,08 ml air MilliQ dicampur dan
peningkatan absorbansi pada 436 nm (SEBUAH436) diukur dalam
rangkap tiga. Reaksi enzimatik diikuti selama 1, 5 sampai 10
menit. Adapun lakase, 2,0 ml sampel, 0,12 ml 25 mM 2,2-
azinobis-(3-methylbenzothiazoline-6-solfonic acid) diammonium
salt (ABTS), 0,6 ml asam malonat 500 mM, 0,12 ml 25 mM EDTA
dan 3,16 ml air MilliQ dicampur dan meningkatkan absorbansi
padaA420diukur dalam rangkap tiga. Reaksi enzimatik diikuti
selama 20, 40 hingga 60 detik. Satu unit aktivitas peroksidase
dan lakase (U) mewakili jumlah enzim yang mengkatalisis
oksidasi 1µmol guaiacol dan ABTS masing-masing dalam 1
menit. Hasil ditunjukkan sebagai aktivitas enzim per g berat
akar kering. Berat kering akar ditentukan setelah akar
dikeringkan pada suhu 105°C selama 2 jam. ARA. 1. Profil degradasi fenol (A), anilin (B) dan 2,4-diklorofenol (C)
Analisis statistik Semua percobaan dilakukan di pada sistem uji A (kotak tertutup), B (lingkaran tertutup), C (segitiga
rangkap tiga dan hasilnya ditunjukkan sebagai nilai rata-rata dengan tertutup), D (berlian terbuka) dan E (kotak terbuka), masing-masing. Bilah
standar deviasi (±selang kepercayaan 95%). Perbedaan yang signifikan- kesalahan mewakili interval kepercayaan 95%.
VOL. 101, 2006
ARA. 2. Jumlah total bakteri pendegradasi senyawa aromatik dan dapat dikultur dalam fraksi air curah (batang terbuka) dan fraksi rizosfer (batang tertutup)
dalam sistem yang diubah fenol (A), anilin (B) dan 2,4-diklorofenol (C), masing-masing. Bilah kesalahan mewakili interval kepercayaan 95%.
telah dihapus dalam sistem uji D dan E setelah 72 jam periode
percobaan. Dalam sistem yang diubah 2,4-DCP, sekitar 80% dari 2,4-DCP
dihilangkan dalam sistem pengujian A, sementara sekitar 57% dari
2,4-DCP dihilangkan dalam sistem uji B dan E pada laju yang
sama setelah 120 jam periode percobaan. Melalui percobaan,
hanya sedikit dan tidak ada penghilangan 2,4-DCP yang diamati
masing-masing pada sistem pengujian C dan E. Setiap efek
merugikan dari tiga senyawa aromatik pada pertumbuhanS.
polirhizatidak diamati selama tes degradasi.
Mekanisme degradasi senyawa aromatik Perubahan total bakteri
pendegradasi senyawa yang dapat dikultur dan aromatik dirangkum
dalamGambar 2.danMeja 2. Selama periode percobaan 3 hari, total
bakteri yang dapat dikultur dalam air curah dan fraksi rizosfer
meningkat secara serupa bahkan di antara sistem uji yang berbeda
dalam 3 hari. Dalam sistem uji A dan B, total bakteri yang dapat
dibiakkan cenderung sedikit lebih besar daripada di sistem uji C dan
D. Dalam sistem yang diubah 2,4-DCP, jumlah total bakteri yang
dapat dibiakkan cenderung berkurang dibandingkan dengan fenol-
atau anilin-
DEGRADASI AROMATIK PADA RHIZOSFER TANAMAN AIR 349
sistem yang diubah.
Dalam sistem yang diubah fenol, bakteri pendegradasi fenol
dalam fraksi air curah hanya 10,1% dari total bakteri yang dapat
dibiakkan, sedangkan bakteri di fraksi rizosfer menyumbang
40,6% pada awal percobaan dalam sistem uji A. Setelah 3 hari
periode percobaan, bakteri pendegradasi fenol meningkat
menjadi 51,6% dari total bakteri yang dapat dibiakkan di fraksi
rizosfer. Bahkan saat sterilS. polirhizadigunakan (sistem uji B),
bakteri dalam fraksi air curah segera terakumulasi di fraksi
rizosfer dan 57,9% bakteri di rizosfer adalah bakteri
pendegradasi fenol setelah 3 hari. Ketika bakteri dalam fraksi
rizosfer ditemukan dan diinokulasi ke dalam fraksi air curah
(sistem uji C), 39,8% bakteri pendegradasi fenol awal meningkat
menjadi 85,2% dari total bakteri yang dapat dibiakkan
sementara bakteri pendegradasi fenol dalam air curah (sistem
uji D) ditempati hanya 19,5% dari total bakteri yang dapat
dibiakkan bahkan setelah 3 hari.
S. polirhizajuga bisa mempercepat degradasi fenol dengan
mengumpulkan bakteri pendegradasi fenol secara selektif; lagi
350 TOYAMA ET AL. J.BIOSCI. BIOENG.,

MEJA 2. Distribusi dan perubahan total kultur dan senyawa aromatik yang menurunkan bakteri dalam air curah
dan fraksi rizosfer selama uji degradasi
Jumlah total bakteri pengurai dan senyawa aromatik yang dapat dikultursebuah(CFU/sistem pengujian)

Senyawa aromatik pendegradasi bakterib

Sistem pengujian hari Total bakteri yang dapat dikultur
(% bakteri pendegradasi senyawa aromatik)
Air curah Rizosfer Air curah Rizosfer
Fenol
SEBUAH 0 (7.2±2.0)×105 (2.4±0.7)×107 (7.2±1.9)×104(10,1%) (9.9±2.6)×106(40,6%)
3 (8.6±2.3)×108 (3.1±1.0)×108 (1,4±0.3)×108(16,7%) (1,6±0.2)×108(51,6%)
B 0 (7.2±2.0)×105 -c (7,2±1.9)×104(10,1%) -
3 (3.9±1.2)×108 (2.9±1.0)×108 (8,4±2.8)×107(21,3%) (1.7±0.3)×108(57,9%)
C 0 (2.5±0.8)×107 - (1,0±0.3)×107(39,8%) -
3 (2.1±0.2)×108 - (1,8±0.3)×108(85,2%) -
D 0 (7.2±2.0)×105 - (7,2±1.9)×104(10,1%) -
3 (1.2±0.2)×108 - (2,4±0,5)×107(19,5%) -
anilin
SEBUAH 0 (7.2±2.0)×105 (2.4±0.7)×107 (1.1±0,5)×105(15,4%) (5.3±1.0)×105(2.2%) (3.2
3 (3.7±1.3)×108 (2.7±0.9)×108 (4,6±1.9)×107(12,6%) ±1.5)×107(11,9%)
B 0 (7.2±2.0)×105 - (1,1±0,5)×105(15,4%) -
3 (7.1±2.3)×108 (2.6±0.9)×108 (6,1±2.2)×107(8,6%) (6,4 (1.3±0.4)×107(5,0%)
C 0 (2.5±0.8)×107 - ±1.1)×105(2,5%) (3,3± -
3 (3.9±1.2)×108 - 1.6)×107(8,4%) (1,1±0,5) -
D 0 (7.2±2.0)×105 - ×105(15,4%) (3,8±0.9)× -
3 (3.4±0.8)×108 - 107(11,1%) -
2,4-DCP
SEBUAH 0 (7.2±2.0)×105 (2.4±0.7)×107 (3.4±0.9)×104(4,7%) (4,7 (3.2±1.3)×105(1,3%)
3 (5.2±1.8)×108 (9.3±0.7)×107 ±0.7)×106(0,9%) (3,4± (1,5±0.3)×106(1,6%)
B 0 (7.2±2.0)×105 - 0.9)×104(4,7%) (3,2±0.7) -
3 (4.7±1.3)×107 (5.1±1.6)×107 ×106(6,9%) (3,6±1.4)×10 (1.1±0.7)×106(2.2%)
C 0 (2.5±0.8)×107 - 5(1,4%) (3,1±0.9)×107( -
3 (1.9±0.2)×108 - 16,1%) (3,4±0.9)×104( -
D 0 (7.2±2.0)×105 - 4,7%) (3,7±0.9)×105( -
3 (9.0±2.0)×106 - 4.1%) -
Hasil ditampilkan sebagai mean±selang kepercayaan 95%.
sebuah

bHasil ditunjukkan sebagai persentase bakteri pendegradasi senyawa aromatik dalam total bakteri yang dapat dikultur.
c -,Tidak diuji.

dari 50% dari total bakteri yang dapat dikultur adalah bakteri
pendegradasi fenol dalam fraksi rizosfernya (Gambar. 1, 2 dan
Meja 2). Perlu dicatat bahwa bahkan sterilS. polirhizabisa
selektif mengakumulasi bakteri pendegradasi fenol dalam
waktu 3 hari. Mengingat fakta bahwa laju degradasi fenol
hampir sama dalam sistem uji A, B, C dan D, peran
S. polirhizauntuk degradasi fenol adalah untuk mengakumulasi
dan merangsang bakteri pendegradasi fenol di fraksi
rizosfernya.S. polirhizasendiri dapat mendegradasi fenol tetapi
kontribusinya jauh lebih rendah daripada degradasi oleh bakteri
(Gambar 1). Dengan demikian, bakteri di fraksi rizosfer
memainkan peran penting untuk degradasi fenol.
Dalam sistem yang diubah anilin, bakteri pendegradasi anilin
masuk fraksi air curah adalah 15,4% dari total bakteri yang
dapat dibiakkan dan yang berada di fraksi rizosfer hanya 2,2%
pada awal percobaan dalam sistem uji A. Bahkan setelah 3 hari
periode percobaan, bakteri pendegradasi anilin hanya
menyumbang 12,6% dan 11,9% dalam air curah dan fraksi
rizosfer, masing-masing. Saat sterilS. polirhizadigunakan (sistem
uji B), bakteri pendegradasi anilin di fraksi air curah (8,6%) dan
rhizosfer (5,0%) lagi-lagi tidak dapat menempati populasi besar
bahkan setelah 3 hari. Juga, bakteri pendegradasi anilin dalam
fraksi air curah tidak dapat menempati populasi yang besar
terlepas dari dengan (sistem uji C)/tanpa (sistem uji D) bakteri
yang diinokulasi pulih dari rizosfer. Ketika mempertimbangkan
fakta bahwa 10 mg/akudari anilin
terdegradasi dalam waktu 60 jam dalam sistem uji B
sementara lebih dari 70% anilin yang diubah masih tersisa
setelah 72 jam dalam sistem uji D (Gambar 1), tidak ada efek
yang jelas dariS. polirhizamengakumulasi bakteri
pendegradasi anilin secara selektif di fraksi rizosfernya
karena bakteri di air curah dan fraksi rizosfer sekitar 5-10% (
Gambar 2. danMeja 2). Bakteri di fraksi rizosfer juga
memiliki kemampuan degradasi anilin sampai batas
tertentu meskipun lengkap degradasi anilin yang diubah
dikonfirmasi setelah 72 jam. Dengan demikian,S. polirhiza
dianggap memainkan peran penting untuk degradasi anilin
dengan merangsang bakteri pendegradasi anilin di air
curah dan fraksi rizosfer.
Dalam sistem yang diubah 2,4-DCP, distribusi dan Sifat
bakteri pendegradasi 2,4-DCP hampir sama dengan bakteri
pendegradasi anilin tetapi populasinya jauh lebih kecil yaitu
masing-masing hanya 0,9–16,1% dan 1,3-2,2% dari total bakteri
yang dapat dikultur dalam air curah dan fraksi rizosfer.
Tampaknya ada sedikit efek dariS. polirhizauntuk merangsang
bakteri pendegradasi 2,4-DCP di fraksi rizosfernya meskipun
tidak ada efek yang jelas dariS. polirhizamengakumulasi bakteri
pendegradasi 2,4-DCP secara selektif di fraksi rizosfer ini dan
bakteri pendegradasi 2,4-DCP jauh lebih rendah. Memang,
populasi 2,4-DCP-degradasi ing bakteri kurang dari 5% dari total
bakteri yang dapat dibiakkan di sebagian besar sistem yang
diubah 2,4-DCP bahkan setelah 3 hari. Dengan demikian,
VOL. 101, 2006 DEGRADASI AROMATIK PADA RHIZOSFER TANAMAN AIR
ARA. 3. Penghapusan fenol (A), anilin (B) dan 2,4-diklorofe-
nol (C) dengan sterilS. polirhiza,dan aktivitas peroksidase dan lakase
secara bersamaan di jaringan akar. Konsentrasi senyawa aromatik dalam
larutan nutrisi dengan (lingkaran tertutup) dan tanpa (lingkaran terbuka)
sterilS. polirhiza,aktivitas peroksidase dalam sistem yang diubah senyawa
aromatik (kotak tertutup) dan kontrol (kotak terbuka), dan aktivitas
lakase dalam sistem yang diubah senyawa aromatik (segitiga tertutup)
dan kontrol (segitiga terbuka), masing-masing.
S. polirhizamemainkan peran penting untuk 2,4-DCP re- bergerak
dengan kemampuan absorpsi dan degradasi itu sendiri (Gambar 1).
Penghapusan senyawa aromatik denganS. polirhiza Untuk
menilai kemampuanS. polirhizauntuk menghilangkan aromatik
senyawa, perjalanan waktu penghilangan senyawa aromatik
pound dan ekspresi aktivitas enzimatik olehS. polirhiza
ditampilkan diGambar 3. Baik aktivitas peroksidase dan lakase
dariS. polirhizaterus-menerus terdeteksi bahkan
351
dalam sistem kontrol di mana senyawa aromatik tidak
diubah. Dalam sistem yang diubah fenol, kedua aktivitas
enzimatik meningkat menjadi 13 unit/g-akar kering dalam
48 jam pertama dan 91% dari fenol yang diubah dihilangkan
secara konstan dalam 168 jam. Aktivitas peroksidase
menunjukkan penurunan bertahap sesuai dengan
penurunan fenol, sedangkan aktivitas lakase tetap tinggi
bahkan pada 168 jam. Dalam sistem anilin yang diubah,
aktivitas lakase meningkat segera menjadi 15 unit/g-akar
kering, sedangkan peroksidase meningkat secara bertahap
menjadi 10 unit/g-akar kering dalam 72 jam pertama dan
26% dari anilin yang diubah dihilangkan dalam 168 jam.
Aktivitas peroksidase menunjukkan sedikit penurunan
setelah 120 jam sesuai dengan penurunan anilin, sedangkan
aktivitas lakase tetap tinggi bahkan setelah 168 jam. Dalam
sistem yang diubah 2,4-DCP, unit/g-akar kering setelah 48
jam periode jeda. Penghapusan cepat dari
2,4-DCP diamati dalam 24 jam pertama dan 2,4-DCP yang
diubah benar-benar dihilangkan dalam 120 jam. Aktivitas
peroksidase menunjukkan penurunan bertahap sesuai dengan
penurunan 2,4-DCP, sementara aktivitas lakase tetap tinggi
bahkan setelah 168 jam sama seperti untuk fenol dan anilin
yang diubah. sistem. Ketiga senyawa aromatik ini tidak
terdeteksi dari jaringan akarS. polirhizadigunakan dalam uji
degradasi. Jadi tidak ada bukti bahwaS. polirhizamengambil
ketiga senyawa aromatik ini.
DISKUSI
Ada banyak laporan tentang upaya eksperimental dan
aplikasi praktis dari percepatan degradasi bahan kimia
organik menggunakan asosiasi mikroba tanaman terestrial.
Dalam laporan tersebut, efek rizosfer, transportasi oksigen
dan sekresi zat aktif fisiologis, tanaman telah terbukti
mengaktifkan mikroba di rizosfer tanaman, yang
meningkatkan degradasi berbagai bahan kimia. Asosiasi
tanaman-mikroba air juga dapat menjadi obat yang hemat
biaya dan menarik untuk lingkungan akuatik. lingkungan
yang terkontaminasi bahan kimia organik jika rhizo- efek
bola dikonfirmasi, dan rentang substrat yang berlaku serta
mekanisme degradasi/penghapusan diklarifikasi. Dalam
pencarian referensi kami hanya ada satu laporan yang
menunjukkan percepatan degradasi LAE dan MAA
menggunakan mikrobiota yang terkait dengan duckweed (
Lemah kecil) dan akar cattail (Typha latifolia) (28). Namun,
tidak ada upaya yang dilakukan untuk menjelaskan peran
tanaman dan bakteri di rizosfernya.
Penelitian ini berfokus pada duckweed raksasa yang tumbuh
cepat,S. polirhiza,dan percepatan degradasi fenol, anilin dan
2,4-DCP dengan peran dan kontribusi keduanyaS. polirhizadan
mikroba dikonfirmasi. Ini adalah laporan pertama tentang
percepatan degradasi bahan kimia organik dengan penjelasan
tentang peran dan kontribusi tanaman air dan bakteri di
rizosfernya. Hasilnya jelas menunjukkan degradasi yang
dipercepat dari ketiga senyawa aromatik oleh asosiasi tanaman-
bakteri air (Gambar 1). Dalam sistem degradasi fenol, bakteri
pendegradasi fenol yang berasal dari fraksi rizosferS. polirhiza
terutama berkontribusi, sedangkan dalam sistem degradasi
anilinS. polirhizaterutama disumbangkan dengan merangsang
pendegradasi anilin
352 TOYAMA ET AL.
bakteri baik di rhizosfer maupun fraksi air balk. Di sisi lain
dalam sistem degradasi 2,4-DCP,S. polirhiza sendiri terutama
berkontribusi pada penghapusannya dengan penyerapan dan
degradasi. Dengan demikian, mekanisme penghilangan
senyawa aromatik yang dipercepat cukup berbeda tergantung
pada substratnya.S. polirhizamenunjukkan akumulasi selektif
bakteri pendegradasi fenol dalam fraksi rizosfernya (Meja 2 dan
Gambar 2.), sedangkan bakteri pendegradasi anilin dan 2,4-DCP
tidak banyak terakumulasi. Ini mungkin karena substrat yang
menyimpan rahasia rizosfernya. Memang, akar tanaman
mengeluarkan fenol tetapi nitrogen atau klorin yang
mengandung aromatik seperti anilin atau 2,4-DCP (32–35), dan
oleh karena itu, bakteri pendegradasi anilin dan 2,4-DCP dapat
tidak aku- ditiru di rizosferS. poliriza.Seperti yang jelas dari
Gambar 1Bdan 1C, bakteri pendegradasi anilin dan 2,4-DCP
juga diaktifkan oleh adanyaS. polirhizamungkin karena oksigen
dan eksudat dari akarnya, yang berkontribusi pada percepatan
degradasi anilin dan 2,4-DCP sampai batas tertentu. Tetapi
dalam kasus 2,4-DCP kontribusi dariS. polirhizaitu sendiri jauh
lebih tinggi daripada bakteri. Tumbuhan juga mengeluarkan
peroksidase dan lakase dari akarnya (36–38). Diketahui bahwa
aktivitas enzimatik pada akar tanaman meningkat sebagai
respons terhadap stres senyawa fenolik dan kembali ke tingkat
normal setelah stres habis.39–41). Mereka mengkatalisis
oksidasi dan polimerisasi berbagai senyawa fenolik dan anilinik
untuk memberikan efek detoksifikasi senyawa tersebut (36–41).
Dalam penelitian ini, kedua aktivitas enzim meningkat dengan
penambahan senyawa aromatik (Gambar 3). Kemampuan
mendegradasi senyawa aromatikS. polirhizaitu sendiri
seharusnya karena produksi peroksidase daripada lakase
karena perubahan aktivitas peroksidase dan konsentrasi
masing-masing senyawa aromatik sesuai. Alasan mengapa
aktivitas lakase tetap pada tingkat yang relatif tinggi bahkan
setelah penurunan senyawa aromatik tidak jelas.
Dari hasil yang diperoleh dalam penelitian ini, dapat
disimpulkan bahwa kelayakan penggunaan asosiasi bakteri
tanaman air untuk mempercepat degradasi organisme. bahan
kimia ganic terutama senyawa bandel di perairan lingkungan
ditunjukkan. Pertanyaan jenis bakteri apa yang memainkan
peran penting untuk sistem, bagaimana membangun dan
mengoperasikan sistem untuk memaksimalkan kemampuan
asosiasi tanaman-bakteri air, dan apakah jenis bahan kimia apa
pun dapat diolah dalam sistem ini muncul di langkah
berikutnya. .
UCAPAN TERIMA KASIH
Studi ini sebagian didukung oleh Hibah Penelitian Yayasan
Air dan Lingkungan Kurita (KWEF) pada tahun 2004.
Studi ini dilakukan sebagai bagian dari Proyek Konsorsium Baru
Regional tentang “Pengembangan sistem pengolahan air limbah
canggih menggunakan elemen dan tanaman filter daur ulang” yang
dipercayakan oleh Kementerian Ekonomi, Perdagangan, dan
Industri, Jepang (METI), Biro Kansai Ekonomi, Perdagangan dan
Industri (METI-KANSAI), dan Organisasi Pengembangan Bioindustri
NPO Kinki (KBDO).
J.BIOSCI. BIOENG.,
REFERENSI
1.Zhu, YG dan Smolders, E.:Penyerapan tanaman radiocesium:
tinjauan mekanisme, regulasi dan aplikasi. J. Eks. Bot.,51,
1635–1645 (2000).
2.Garam, DE, Blaylock, M., Kumar, NP, Dushenkov, V., Ensley,
BD, Chet, I., dan Raskin, I.:Fitoremediasi: strategi baru
untuk menghilangkan logam beracun dari lingkungan
menggunakan tanaman. Bioteknologi (NY),13,468–474
(1995).
3.Reddy, KR dan DeBusk, WF:Potensi penyisihan nutrisi dari
mcrophytes air yang dipilih. J.Lingkungan. Kualitas.,14,459– 462
(1985).
4.Tripathi, BD, Srivastava, J., dan Misra, K.:Kapasitas penyisihan
nitrogen dan fosfor dari empat makrofita air terpilih di
kolam air tawar tropis. Mengepung. Konservasi.,18, 143–
147 (1991).
5.Radwan, S., Sorkhoh, N, dan el-Nemr, I.:Biodegradasi minyak
di sekitar akar. Alam,376,302 (1995).
6.Günther, T., Dornberger, U., dan Fritsche, W.:Pengaruh
ryegrass pada biodegradasi hidrokarbon di tanah.
kemosfer,33,203–215 (1996).
7.Siciliano, SD, Germida, JJ, Banks, K., dan Greer, CW: Perubahan
komposisi dan fungsi komunitas mikroba selama uji coba
lapangan fitoremediasi hidrokarbon poliaromatik. aplikasi
Mengepung. Mikrobiol.,69,483–489 (2003).
8.Walton, BT dan Anderson, TA:Degradasi mikroba
trikloretilena di rizosfer: aplikasi potensial untuk
remediasi biologis situs limbah. aplikasi Mengepung.
Mikrobiol.,56,1012–1016 (1990).
9.Anderson, TA dan Walton, BT:Perbandingan nasib [14C]
trichloroethylene di zona akar tanaman dari bekas tempat
pembuangan pelarut. Mengepung. racun. Kimia.,14,2041–2047
(1995).
10.Binet, P., Portal, JM, dan Leyval, C.:Disipasi hidrokarbon
aromatik polisiklik 3–6-cincin di rizosfer ryegrass. Biola
Tanah. Biokimia.,32,2011–2017 (2000).
11.Miya, RK dan Firestone, MK:Dinamika komunitas
pendegradasi fenantrena di tanah rizosfer dari rumput
tahunan umum. J.Lingkungan. Kualitas.,29,584–592 (2000).
12.Miya, RK dan Firestone, MK:Biodegradasi fenantrena yang
ditingkatkan di tanah oleh eksudat akar oat yang ramping dan
puing-puing akar. J.Lingkungan. Kualitas.,30,1911–1918 (2001).
13.Hsu, TS dan Bartha, R.:Mineralisasi dipercepat dari dua
insektisida organofosfat di rizosfer. aplikasi
Mengepung. Mikrobiol.,37,36–41 (1979).
14.Boyle, JJ dan Shann, JR:Biodegradasi fenol, 2,4- DCP, 2,4-D, dan 2,4,5-
TCP pada tanah rizosfer dan nonrizosfer yang dikumpulkan di
lapangan. J.Lingkungan. Kualitas.,24,782–785 (1995).
15.Yu, YL, Chen, YX, Luo, YM, Pan, XD, He, YF, and Wong,
MH:Degradasi cepat butaklor di tanah rizosfer gandum.
kemosfer,50,771–774 (2003).
16.Singh, N., Megharaj, M., Kookana, RS, Naidu, R., dan
Sethunathan, N.:Degradasi atrazin dan simazin di
rizosfer Pennisetum. kemosfer,56,257–263 (2004).
17.Anderson, TA, Guthrie, EA, dan Walton, BT:Bioremediasi di
rizosfer: akar tanaman dan mikroba terkait membersihkan
tanah yang terkontaminasi. Mengepung. Sci. Teknologi.,27,
2630–2636 (1993).
18.Shaw, LJ dan Burns, RG:Biodegradasi polutan organik di
rizosfer. Adv. aplikasi Mikrobiol.,53,1– 60 (2003).
19.Sandmann, ERIC dan Loos, MA:Pencacahan dari
Mikroorganisme pendegradasi 2,4-D dalam tanah dan rhizo-
bola menggunakan media indikator; populasi tinggi yang
terkait dengan tebu (Saccarum ofinarum).kemosfer,13, 1073–
1084 (1984).
20.Shaw, LJ dan Burns, RG:Rizodeposit dariTrifolium
pratensedanLolium peren:efek komparatif mereka pada
VOL. 101, 2006
Mineralisasi 2,4-D di dua tanah yang kontras. Biola Tanah.
Biokimia.,37,995–1002 (2005).
21.Siciliano, SD, Fortin, N., Mihoc, A., Wisse, G., Labelle,
S., Beaumier, D., Ouellette, D., Roy, R., Whyte, LG, Banks, MK,
Schwab, P., Lee, K., dan Greer, CW: Pemilihan genotipe bakteri
endofit spesifik oleh tanaman sebagai respon terhadap
pencemaran tanah. aplikasi Mengepung. Mikrobiol.,
67,2469–2475 (2001).
22.Reddy, KR, D'Angelo, EM, dan DeBusk, TA:Transportasi oksigen
melalui makrofita akuatik: peran dalam pengolahan air limbah.
J.Lingkungan. Kualitas.,19,261–267 (1989).
23.Reddy, KR, Patrick, WH, Jr., dan Lindau, CW:Nitrifikasi-
denitrifikasi pada antarmuka sedimen akar tanaman di
lahan basah. Limnol. Kelautan.,34,1004–1013 (1989).
24.Bodelier, PLE, Libochant, JA, Blom, CWPM, dan Laanbroek, HJ:
Dinamika nitrifikasi dan denitrifikasi dalam sedimen
teroksigenasi akar dan adaptasi bakteri pengoksidasi
amonia ke habitat rendah oksigen atau anoksik. aplikasi
Mengepung. Mikrobiol.,62,4100–4107 (1996).
25.Eriksson, PG dan Weisner, SEB:Sebuah studi eksperimental
tentang efek makrofita terendam pada nitrifikasi dan
denitrifikasi dalam sistem perairan yang kaya amonium.
Limnol. Kelautan.,44,1993-1999 (1999).
26.Körner, S., Lyatuu, GB, dan Vermaat, JE:pengaruh dariLemna
gibbaL. tentang degradasi bahan organik dalam air limbah
domestik yang tertutup rumput bebek. Air Res.,
32,3092–3098 (1998).
27.Al-Nozaily, F., Alaerts, G., dan Veenstra, S.:Kinerja laguna
limbah tertutup duckweed-I. keseimbangan oksigen dan
penghapusan COD. Air Res.,34,2727–2733 (2000).
28.Federle, TW dan Schwab, BS:Mineralisasi surfaktan oleh
mikrobiota tanaman air. aplikasi Mengepung.
Mikrobiol.,55,2092–2094 (1989).
29.Caicedo, JR, Van Der Steen, NP, Arce, O., dan Gijzen,
HJ:Pengaruh konsentrasi total amonia nitrogen dan pH
terhadap laju pertumbuhan duckweed (Spirodela polirhiza).Air
Res.,34,3829–3835 (2000).
30.Körner, S., Vermaat, JE, dan Veenstra, S.:Kapasitas duckweed
untuk mengolah air limbah: pertimbangan ekologis untuk
desain yang baik. J.Lingkungan. Kualitas.,32,1583–1590 (2003).
31.Arnon, DI dan Hoagland, DR:Produksi tanaman secara artifisial
DEGRADASI AROMATIK PADA RHIZOSFER TANAMAN AIR 353
larutan kultur sosial dengan referensi khusus untuk faktor-faktor yang
mempengaruhi hasil adsorpsi nutrisi anorganik. Ilmu Tanah.,50, 463–485
(1940).
32.Peters, NK dan Verma, DPS:Senyawa fenolik sebagai pengatur
ekspresi gen dalam interaksi tanaman-mikroba. mol.
Tumbuhan Mikroba Berinteraksi.,3,4–8 (1990).
33.Fletcher, JS dan Hegde, RS:Pelepasan fenol oleh akar
tanaman tahunan dan potensi pentingnya dalam
bioremediasi. kemosfer,31,3009–3016 (1995).
34.Penyanyi, AC, Crowley, DE, dan Thompson, IP:Metabolit
tanaman sekunder dalam fitoremediasi dan
biotransformasi. Tren Bioteknologi.,21,123-130 (2003).
35.Kamath, R., Schnoor, JL, dan Alvarez, PJJ:Pengaruh substrat
yang diturunkan dari akar pada ekspresinah-luxgen dalam
Pseudomonas fluorescensHK44: implikasi untuk
biodegradasi PAH di rizosfer. Mengepung. Sci. Teknologi.,
38, 1740–1745 (2004).
36.Adler, PR, Arora, R., El Ghaouth, A., Glenn, DM, dan Solar, JM:
Bioremediasi senyawa fenolik dari air dengan peroksidase
permukaan akar tanaman. J.Lingkungan. Kualitas.,
23,1113–1117 (1994).
37.Harvey, PJ, Campanella, BF, Castro, PML, Harms,
H., Lichtfouse, E., Schäffner, AR, Smrcek, S., dan Werck-
Reichhart, D.:Fitoremediasi hidrokarbon poliaromatik,
anilin dan fenol. Mengepung. Sci. polusi. Res.,
9,29–47 (2002).
38.Mayer, AM dan Staples, RC:Lakase: fungsi baru untuk
enzim lama. fitokimia,60,551–565 (2002).
39.Flocco, CG, LoBalbo, A., Cabranza, MP, dan Giulietti,
SAYA:Penghapusan fenol oleh tanaman alfalfa (Medicago sativa
L.) ditanam secara hidroponik dan pengaruhnya terhadap beberapa
parameter fisiologis. Acta Biotechnol.,22,43–54 (2002).
40.Araujo, BS, Pletsch, M., dan Charlwood, BV:Toleransi dan
metabolisme fenol dan chloroderivatives oleh kultur akar
berbulu dariDaucus carotaL.Lingkungan. polusi.,117,329–335
(2002).
41.Agostini, E., Coniglio, MS, Milrad, SR, Tigier, HA, dan
Giulitetti, AM:Fitoremediasi 2,4-diklorofenol oleh
Brassica napuskultur akar berbulu. Bioteknologi.
aplikasi Biokimia.,37,139-144 (2003).