PROPOSAL PROGRAM KREATIVITAS MAHASISWA

Mengangkat Derajat Semak Belukar (Hyptis pectinata Poit.) sebagai

Suplemen Terapi Metastasis Kanker Payudara Berbasis Kapsul

BIDANG KEGIATAN
PKM–PENELITIAN

Diusulkan oleh :
Shofi’atun Ni’mah Ketua 175010014;2017
Intan Meyta Parusiza Anggota 1 175010008;2017
Ayu Wulandari Anggota 2 18105011079;2018

UNIVERSITAS WAHID HASYIM

SEMARANG
2019

i
 PENGESAHAN PROPOSAL PKM-PENELITIAN

1. Judul Kegiatan : Mengangkat Derajat Semak

2. Bidang Kegiatan
3. Ketua Pelaksana Kegiatan
a. Nama Lengkap
b. NIM
c. Jurusan
d. Perguruan Tinggi
e. Alamat Rumah dan No Tel./HP
f. Email
4. Anggota Pelaksana Kegiatan/Penulis
5. Dosen Pendamping
a. Nama Lengkap
b. NIDN/NIDK
c. Alamat Rumah dan No Tel/HP
6. Biaya Kegiatan Total
a. Kemriskedikti
b. Sumber lain (sebutkan. . .)
7. Jangka Waktu Pelaksanaan
Belukar (Hyptis pectinata Poit.)
sebagai Suplemen Terapi
Metastasis Kanker Payudara
Berbasis Kapsul
: PKM-P
: Shofi’atun Ni’mah
: 175010014
: Farmasi
: Universitas Wahid Hasyim
: Ds. Tegalharjo, Kec. Trangkil, Kab.
Pati / 085233055623
: shofiatunimah23@gmail.com
: 2 Orang
: Drs. H. Ibrahim Arifin, M. Sc., Apt.
: 0616056301
: Jl. Watukaji VIII/A9 Gedawang,
Semarang / 081213533547
: Rp. 12.381.000,-
: Rp. –
: 5 Bulan

Semarang, 13 Desember 2019

Menyetujui,
Wakil Dekan 1 Ketua Pelaksana Kegiatan,

(Drs. H. Ibrahim Arifin, M. Sc., Apt.) (Shofi’atun Ni’mah)

NPP. 07.00.1.0028 NIM. 175010014

Wakil Rektor III Bidang Kemahasiswaan Dosen Pendamping

(Dr.H. Andi Purwono, SIP., M.Si) (Drs. H.Ibrahim Arifin, M. Sc., Apt.)
NPP. 04.01.1.0048 NIDN. 0616056301

ii
 DAFTAR ISI
HALAMAN SAMPUL ...................................................................................... i
HALAMAN PENGESAHAN ........................................................................... ii
DAFTAR ISI ...................................................................................................... iii
DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... v
DAFTAR TABEL ............................................................................................. v
BAB 1. PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang .............................................................................................. 1
1.2 Rumusan Masalah ......................................................................................... 1
1.3 Tujuan Penelitian .......................................................................................... 2
1.4 Urgensi Penelitian ......................................................................................... 2
1.5 Target Luaran ................................................................................................ 2
1.6 Kontribusi Penelitian..................................................................................... 2
1.7 Manfaat Penelitian ........................................................................................ 2

BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Metastasis Kanker Payudara dan Sel MCF-7 ............................................... 3
2.2 Semak Belukar (Hyptis pectinata) Poit
2.2.1 Deskripsi ............................................................................................... 3
2.2.2 Klasifikasi ............................................................................................. 4
2.2.3 Morfologi Tanaman................................................................................4
2.2.4 Kandungan Senyawa ............................................................................ 4
2.2.5 Khasiat .................................................................................................. 4
2.3 Metode MTT Assay ...................................................................................... 5
2.4 Kapsul ........................................................................................................... 5
2.5 Essensial Oil ................................................................................................. 5
2.6 Landasan Teori ............................................................................................. 6
2.7 Hipotesis ....................................................................................................... 6

BAB 3 METODE PENELITIAN

3.1 Alat dan Bahan
3.1.1 Alat untuk Penelitian ............................................................................. 6
3.1.2 Bahan untuk Penelitian .......................................................................... 7
3.2 Waktu dan Tempat Penelitian ....................................................................... 7
3.3 Variabel Penelitian ........................................................................................ 7
3.4 Langkah Kerja Penelitian
3.4.1 Pengumpulan Bahan Uji ........................................................................ 7
3.4.2 Determinasi Tanaman............................................................................ 8
3.4.3 Pembuatan Senyawa Uji ........................................................................ 8
3.4.3.1 Pembuatan Serbuk Semak Belukar (Hyptis pectinata) Poit ..... 8
3.4.3.2 Pembuatan Ekstrak Metanol Daun Semak Belukar .................. 8
3.4.3.3 Pembuatan Sediaan Kapsul....................................................... 8

iii
 3.4.4 Uji Antikanker Metode MTT Assay ...................................................... 8
3.4.5 Migrasi Sel Berbasis Metode Scratch Wound Healing ......................... 9
3.4.6 Uji Keseragaman Bobot Kapsul ............................................................ 9
3.4.7 Uji Higroskopisitas Kapsul ................................................................... 9
3.5 Analisa Data
3.5.1 Analisa Uji Sitotoksik pada Sel Kanker Payudraa MCF-7 .................. 9
3.5.2 Analisa Migrasi Sel ............................................................................. 9

BAB 4 BIAYA DAN JADWAL KEGIATAN

4.1 Anggara Kegiatan ........................................................................................ 10
4.2 Jadwal Kegiatan ............................................................................................ 10

DAFTAR PUSTAKA ....................................................................................... 10

LAMPIRAN
Lampiran 1. Biodata Ketua, Anggota Kelompok dan Dosen Pendamping......... 11
Lampiran 2. Justifikasi Anggaran Kegiatan ........................................................ 16
Lampiran 3. Susunan Organisasi Tim Peneliti dan Pembagian Tugas ............... 20
Lampiran 4. Surat Pernyataan Ketua Pelaksana ................................................. 22

iv
 DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Semak Belukar (Hyptis pectinata) Poit ............................................ 4
Gambar 2. Struktur Eugenol .............................................................................. 4
Gambar 3. Struktur β- caryophyllene .................................................................. 5
Gambar 4. Struktur Caryophyllene oxide ........................................................... 5
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Rancangan Anggaran Penelitian ........................................................... 10
Tabel 2. Jadwal Tahap Penelitian ....................................................................... 10

v
 1

BAB 1. PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Kanker merupakan salah satu penyakit yang sangat kompleks dan berada
di peringkat pertama sebagai penyebab kematian terbanyak di seluruh dunia.
(Katzung, 1995). Insiden kanker di Indonesia diperkirakan 100 per 100.000
penduduk per tahun. (Puspitasari et al. 2003). Kanker adalah penyakit yang
ditandai dengan pembelahan sel yang tidak terkendali dengan kemampuan sel-sel
tersebut untuk menyerang jaringan biologis lainnya, baik dengan pertumbuhan
langsung di jaringan yang bersebelahan (invation) atau dengan migrasi sel ke
tempat yang jauh (metastasis) (Contran et al. 1994).
Jenis kanker yang paling banyak diderita wanita adalah kanker payudara
(30% dari seluruh kasus kanker pada wanita), dan 14% dari kasus tersebut
berakhir dengan kematian (Medina & Kittrell 2003). Kanker payudara adalah
abnormalitas pertumbuhan sel menjadi ganas yang menyerang kelenjar payudara,
saluran kelenjar air susu dan jaringan penunjang lainnya (Almog et al. 1997)
Obat antikanker atau sitostatika adalah obat yang dapat menghentikan
pertumbuhan sel-sel kanker, supaya terapi keganasan ini dapat berhasil dengan
baik. Mekanisme kerja obat antikanker ini didasarkan atas terjadinya gangguan
pada salah satu proses sel yang essensial (Nafrialdi and Gan, 1995). Uji sitotoksik
untuk mengetahui potensi antikanker suatu ekstrak / senyawa dinyatakan dengan
IC50 yang merupakan konsentrasi larutan uji yang dapat mematikan 50% populasi
sel.
Berdasarkan penelitian (Suzery dan Cahyono, 2014) IC50 yang dimiliki
oleh tanaman Hyptis pectinata Poit adalah 18,90 µg/mL. Diketahui bahwa Hyptis
pectinata Poit mengandung zat-zat yang dapat dimanfaatkan sebagai obat
antikanker karena minyak atsiri yang mampu menghambat pertumbuhan sel
kanker melalui mekanisme regulasi daur sel kanker termasuk reseptor-reseptor
hormon pertumbuhan dan protein kinasenya, penghambatan angiogenesis
(penghambat protein COX2 yang memicu terjadinya metastasis), menghambat
enzim antiapoptosis (BCl2) sehingga mampu menginduksi sel mati secara
terencana (apoptosis) (Meiyanto et al. 2008).
Tingginya kemampuan tanaman Hyptis pectinata Poit. sebagai antikanker
memunculkan banyak gagasan untuk melakukan modifikasi sediaan. Salah satu
modifikasi sediaannya yaitu berbasis sediaan kapsul agar lebih mudah dikonsumsi
masyarakat luas (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1995).
Berdasarkan latar belakang tersebut, maka penelitian ini bertujuan untuk
mengetahui efek sediaan kapsul suplemen ekstrak semak belukar (Hyptis
pectinata Poit) sebagai terapi metastasis kanker payudara pada sel kanker MCF-7.
1.2 Rumusan Masalah
Berdasarkan uraian di atas, diperoleh rumusan masalah sebagai berikut:
 2

1. Apakah ekstrak semak belukar (ESB) dapat diformulasikan menjadi

sediaan kapsul?
2. Apakah ESB dan kapsul ESB memiliki efek sitotoksik terhadap sel kanker
MCF-7?
3. Apakah ESB dan kapsul ESB mampu menghambat metastasis kanker
payudara MCF-7?
1.3 Tujuan Penelitian
Berdasarkan Rumusan masalah, dapat ditentukan tujuan penelitian sebagai
berikut :
1. Tujuan Umum
Mengembangkan formulasi inovatif dengan memanfaatkan semak belukar
agen pencegah progresivitas metastasis kanker payudara yang aplikatif.
2. Tujuan Khusus
a. Mengembangkan formulasi baru suplemen antikanker dalam bentuk
kapsul.
b. Mengkaji efek sitotoksik ekstrak semak belukar terhadap sel MCF-7.
c. Mengetahui efek ESB dan formulasi kapsul ESB dalam penghambatan
metastasis kanker payudara.
1.4 Urgensi Penelitian
Penelitian ini digunakan untuk mengembangkan potensi bahan
alam berupa semak belukar sebagai terapi metastasis kanker payudara
pada sel kanker MCF-7 menggunakan metode MTT Assay. Kemudian
hasil ekstraksi dibuat dalam bentuk sediaan untuk dimanfaatkan sebagai
suplemen antikanker payudara. Selain itu, hasil penelitian ini dapat
dipublikasikan menjadi jurnal ilmiah sehingga dapat dimanfaatkan secara
luas oleh masyarakat.
1.5 Target Luaran
Target luaran dari penelitian ini adalah :
1. Publikasi menjadi artikel dalam jurnal ilmiah yang terakreditasi berskala
internasional.
2. Poster yang berisikan data konsentrasi semak belukar (Hyptis pectinata
Poit) yang menghasilkan efek terapi metastasis kanker payudara pada sel
kanker MCF-7.
1.6 Kontribusi Penelitian
Penelitian ini berperan dalam pengembangan agen kemopreventif
metastasis kanker payudara. Data hasil dari penelitian ini dapat dijadikan
sebagai acuan yang dapat dipertanggungjawabkan secara ilmiah untuk
pengembangan penelitian selanjutnya.
1.7 Manfaat Penelitian
Manfaat dari penelitian ini adalah :
1. Bagi Mahasiswa Pelaksana Penelitian
 3

Mengasah pengetahuan, kreativitas dan keterampilan mahasiswa dalam

mengembangkan sumber daya alam yang bermanfaat bagi kesehatan.
2. Bagi Masyarakat dan Negara
Sebagai media yang memberikan informasi kepada masyarakat tentang
kegunaan semak belukar sebagai terapi metastasis kanker payudara pada
sel kanker MCF-7.
Memilik potensi ekonomi dengan memanfaatkan semak belukar (Hyptis
pectinata Poit.) sebagai penghasil devisa Negara.
3. Bagi Industri
Menghasilkan suplemen terapi metastasis kanker payudara yang dapat
dimanfaatkan oleh masyarakat luas dengan harga yang terjangkau dan
penggunaan yang mudah.
4. Bagi Ilmu Pengetahuan
Memberi dukungan ilmiah molekuler untuk kepentingan medis yang
dipercaya oleh kalangan medis, khusunya dokter yang bergerak dalam
terapi kanker payudara.
BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Metastasis Kanker Payudara dan Sel MCF-7
Metastasis artinya kanker yang dapat menyebar ke bagian tubuh lain,
seperti paru-paru, hati, otak atau tulang (Hartwell et al. 1994). Metastasis dimulai
dengan invasi sel tumor ke jaringan sekitarnya. Sel-sel tumor invasif melakukan
pelekatan dari sel ke sel kemudian menempel ke matriks ekstraseluler (ECM) (Li
and Feng, 2011).
Penelitian yang dilakukan oleh Suzery dan Cahyono tahun 2014, IC50 yang
dimiliki oleh tanaman Hyptis pectinata Poit. adalah 18,90 µg/mL. Tingginya
kemampuan tanaman Hyptis pectinata Poit. sebagai antikanker memunculkan
banyak gagasan untuk melakukan modifikasi sediaan.
Sel MCF-7 bisa digunakan sebagai penelitian kanker payudara in vitro
karena sel MCF-7 memiliki karakteristik antara lain resisten agen kemoterapi
(Mechetner et al., 1998; Aouali et al., 2003), mengekspresikan reseptor estrogen
(ER+), overekspresi BCl2 (Butt et al., 2000) dan tidak mengekspresi caspase-3
(Onuki et al., 2003; Prunet et al., 2005).
2.2 Semak Belukar (Hyptis pectinata)
2.2.1 Deskripsi
Semak belukar (Hyptis pectinata) pada Gambar 1. Dibawah ini adalah
genus tanaman berbunga di keluarga Lamiaceae. Ada 300 hingga 400 spesies
yang mungkin tahunan atau abadi dan ramuan kecil untuk semak besar, di
Brazil tanaman ini dikenal sebagai Sambacaita atau Canudinho dan banyak
digunakan dalam pengobatan tradisional untuk mengobati peradangan, infeksi
bakteri, nyeri dan kanker.
 4

Gambar 1. Semak Belukar (Hyptis pectinata)

2.2.2 Klasifiksi
Taksonomi tanaman semak belukar (Hyptis pectinata) dapat
diklasifikasikan sebagai berikut (Ferguson, 1990) :
Kingdom : Plantae
Sub Kingdom : Tracheobionta
Super Divisi : Magnoliophyta
Divisi : Spermatophyta
Kelas : Magnoliopsida
Sub Kelas : Magnolidae
Ordo : Lamiales
Family : Lamiaceae
Genus : Hyptis
Species : Hyptis pectinata (L.) Poit.
2.2.3 Morfologi Tanaman
Tinggi tanaman Semak belukar (Hyptis pectinata) bisa mencapai 3 m,
daun aromatik, berbentuk bulat telur dengan panjang 2-8 cm dan lebar 2-7 cm
(Cheng, 2000).
2.2.4 Kandungan Senyawa
Semak belukar (Hyptis pectinata) memiliki kandungan minyak atsiri /
essensial oil, antara lain dari golongan monoterpen yaitu cymene, timol dan β-
terpinene (Barbosa, C. V. dkk, 2012). Menurut Serafini et al (2012) Hyptis
pectinata Poit yang berasal dari Brazil mengandung minyak atsiri dengan
randemen 0,5% (v/w) (Santos et al, 2008; Arigoni Blank et al, 2008;
Raymundo et al, 2011), dengan penyusun utama calamusenone, β-kariofilena
dan kariofilena oksida yang semuanya termasuk kedalam golongan
sesquiterpen (Santos et al, 2008)
2.2.5 Khasiat
a) Senyawa Eugenol

Gambar 2. Struktur Eugenol

Senyawa eugenol mempunyai aktivitas farmakologi sebagai
analgesik, antiinflamasi, antimikroba, antiviral, antifungi, antiseptik,
 5

antispasmodik, antiemetik, stimulant, anestesi lokal, antioksidan dan

antikanker (Wulan et al, 2010).
b) β-caryophyllene

Gambar 3. Struktur β-caryophyllene

β-caryophyllene adalah seskuiterpen bicyclic alami yang merupakan
konstituen dari minyak atsiri. Manfaat β-caryophyllene adalah sebagai
antiinflamasi alami terbaik di dunia.
c) Caryophyllene oxide

Gambar 4. Struktur Caryophyllene oxide

Caryophyllene oxide adalah seskuiterpen bicyclic dan metabolit β-
caryophyllene yang telah ditemukan dalam C. sativa dan memiliki sifat
antikanker.
2.3 Metode MTT Assay
Metode MTT didasarkan pada reaksi reduksi reagen MTT (3-(4,5
dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromide) yang dikatalis oleh enzim
suksinat dehidrogenase yang dikandung oleh sel hidup membentuk kristal
formazen berwarna ungu dan tidak larut air. Penambahan reagen stopper (bersifat
detergenik) akan melarutkan kristal berwarna ini yang kemudian diukur
absorbansinya menggunakan ELISA reader. Intensitas warna ungu yang terbentuk
proporsional dengan jumlah sel hidup. Sehingga jika intensitas warna ungu
semakin besar, maka berarti jumlah sel semakin banyak (CCRC, 2009)
2.4 Kapsul
Kapsul adalah sediaan padat yang terdiri obat dalam cangkang keras atau
lunak yang dapat larut (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1995). Kapsul
dapat berisi campuran serbuk atau serbuk yang digranulasi (Voigt, 1995).
Pemanfaatan semak belukar (Hyptis pectinata) Poit. Sebagai sediaan kapsul untuk
metastasis kanker payudara merupakan salah satu cara pemanfaatan yang
terbilang menarik, dikarenakan melihat dari manfaat kandungan senyawa yang
ada.
Kapsul dipilih menjadi wujud dari pemanfaatan semak belukar salah
satunya yaitu mudah di absorpsi, selain itu kapsul tidak menimbulkan bau dan
rasa yang tidak enak, sehingga konsumen mudah untuk mengkonsumsinya.
2.5 Essensial Oil
 6

Minyak atsiri Hyptis pectinata Poit dengan komponen penyusun terbanyak

yaitu eugenil asetat, kariofilena oksida, Germakren-D, β–kariofilena, trans-fitol
(Arrigoni Blanket al, 2008; Santoset al, 2008; Raymundoet al, 2011; Serafiniet al,
2012). Penelitian Arifin., dkk dibahas 7 puncak tertinggi untuk menentukan
kualitas Hyptis pectinata Poit dari Jawa Barat, yaitu eugenil asetat, n-heneikosana,
heksahidrofarnesil aseton, trans-fitol, β– kariofilena, Germakren-D dan
Kariofilena oksida. Namun pada literatur kandungan terbanyak adalah senyawa β–
kariofilena, Germakren-D, Kariofilena oksida.
2.6 Landasan Teori
Metastasis merupakan proses invasi sel tumor ke jaringan di sekitarnya.
Metastasis salah satunya disebabkan oleh adanya protein COX2 dan BCl2. Hyptis
pectinata Poit mengandung minyak atsiri yang mampu menghambat pertumbuhan
sel kanker melalui mekanisme regulasi daur sel kanker termasuk reseptor-reseptor
hormon pertumbuhan dan protein kinasenya, sehingga mampu menginduksi sel
mati secara terencana (apoptosis).
Efek sitotoksik ESB diamati melalui metode MTT Assay. Dari analisis
hasil MTT Assay, dapat ditentukan nilai IC50 yang digunakan untuk menentukan
besarnya konsentrasi pada metode uji antimetastasis. Metode Scratch Wound
Healing dilakukan untuk menguji kemampuan antimetastasis ESB terhadap sel
MCF-7. Agar ESB dapat mudah dikonsumsi untuk pengobatan, ESB diubah ke
dalam bentuk sediaan yaitu kapsul. Bentuk sediaan kapsul akan mempercepat
hancur dan melarutnya bahan di dalam tubuh, sehingga dapat segera di absorpsi
dan tidak menimbulkan bau serta rasa yang tidak enak, stabil dalam penyimpanan,
bentuk praktis dan menarik serta lebih mudah dalam formulasi.
2.7 Hipotesis
a. Ekstrak semak belukar dapat diformulasikan menjadi sediaan kapsul.
b. Ekstrak semak belukar dan kapsul ESB memiliki efek sitotoksik terhadap
sel MCF-7.
c. Ekstrak semak belukar dan kapsul ESB mampu menghambat metastasis
kanker payudara.
BAB 3. METODE PENELITIAN
3.1 Alat dan Bahan
3.1.1 Alat untuk penelitian
1. Alat ekstraksi : vacum rotary evaporator, batang pengaduk, kain flannel
dan timbangan analitik, corong pisah, kertas whatmann No.1 dan oven.
2. Alat pembuatan kapsul : cangkang kapsul, stirer, vakum rotary
evaporator, alat-alat gelas.
3. Alat yang digunakan untuk pengujian sitotoksik secara in vitro :
autoclave (Hirayama), Laminar Air Flow (Zeiss MC 80), Cell Counter,
penangas air, neraca analitik (Sartorius), mikropipet (Gilson), mikroskop
cahaya, Sentrifuge (Sorvall), hemocytometer (Neubauer), Tissue Culture
Dish (Nuclon), Conical Tube (Nuclon), ELISA Reader (SLT 240 ATC),
 7

96-Well Plate (Nunc), shaker (MRK-RETAC), vortex, eppendrof Stirer

(Plastik Brand), kamera digital (Canon, Power Shoot S 40, 6.0 mega
pixel), polpen marker, stiker/label, tabung reaksi dan rak, alumunium
foil, mikroskop intverted (Olympus CH-2), 24-Well plate (Nunc), shaker
(Gummy), yellow tip.
4. Alat Uji Migrasi Sel Metode Scracth Wound Healing Assay
Autoklaf, Laminar air flow, 24-well plate, yellow tip, inkubator CO2 5%,
tabung conical (Nunclon) inverted microscope, hemocytometer
(Naubauer), neraca analaitik, mikropipet, shaker (Gummy), kamera
digital untuk dokumentasi.
3.1.2 Bahan untuk penelitian
1. Bahan ekstraksi : Daun Hyptis pectinata, Metanol
2. Bahan pembuatan kapsul : Sediaan Ekstrak daun Hyptis Pectinata,
methanol, aquadest, heksan diklorometan, etil asetat, vivapur 101,
aerosol, amilum dan Magnesium stearat.
3. Bahan pembuatan suplemen : Sakarin, Natrium Benzoat, Asam Sitrat,
Aquadest bebas CO2.
4. Bahan untuk pengujian : Kanker payudara MCF-7 diperoleh dari UPHP
Universitas Gadjah Mada Yogyakarta, metformin, senyawa aloksan,
heparin, NaCl fisiologis 0,9%, buffer phospat 0,01 mol/L pH 7, DMSO
(Dimethyl Sulfoxide) 100% (Merck).
5. Bahan untuk uji Scratch Wound Healing Assay : media kultur
mengandung 10% FBS, media starvasi mengandung 0.5% FBS, MK,
DMSO atau akuabides sebagai pelarut sel kanker, PBS 1 kali.
3.2. Waktu dan Tempat Penelitian
1. Waktu Pelaksanaan Penelitian : 5 Bulan
2. Tempat Pelaksanaan Penelitian : Laboratorium Fitokimia Fakultas
Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang, Laboratorium Cancer
Cemoprevention Research Center Fakultas Farmasi Universitas Gadjah
Mada Yogyakarta.
3.3. Variabel Penelitian
Penelitian dilakukan dengan metode eksperimental dengan variabel-
variabel sebagai berikut :
1. Variabel bebas adalah ekstrak metanol daun Hyptis pectinata.
2. Variabel tergantung adalah presentasi pertumbuhan dan kematian sel pada uji
sitotoksik pada sel kanker payudara MCF-7 dan gambaran morfologi sel, IC50
3. Variabel terkendali adalah kondisi pertumbuhan sel, jumlah sel MCF-7 tiap
sumuran, tekanan inkubator, suhu dan lama waktu inkubasi.
3.4 Langkah Kerja Penelitian
3.4.1 Pengumpulan Bahan Uji
 8

Bahan uji yang digunakan adalah daun semak belukar (Hyptis pectinata
Poit.) yang dipanen dari Kecamatan Tembalang Kota Semarang. Daun yang
dipanen adalah yang masih segar dan tidak berpenyakit.
3.4.2 Determinasi Tanaman
Tujuan determinasi tanaman adalah untuk mengetahui identitas tanaman
daun semak belukar (Hyptis pectinata Poit.) yang akan digunakan dalam
penelitian. Determinasi tanaman dilakukan dilaboratorium Fitokimia Fakultas
Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang.
3.4.3 Pembuatan Senyawa Uji
3.4.3.1 Pembuatan Serbuk Daun Semak Belukar (Hyptis pectinata Poit.)
Daun dicuci bersih dengan air mengalir lalu di potong-potong dan
dikeringkan dalam oven dengan suhu 60 °C. Simplisia yang sudah
kering dihaluskan dengan blender. Dilakukan pengecekan kadar air
dengan moisture balance hingga diperoleh kadar air <10%. Ditimbang
berat serbuk yang diperoleh.
3.4.3.2 Pembuatan Ekstrak Metanol Daun Semak Belukar (Hyptis pectinata
Poit.)
Serbuk kering daun semak belukar (Hyptis pectinata Poit.) dimaserasi
menggunakan pelarut metanol. Ekstrak metanol yang diperoleh dikentalkan
dengan vacum rotary evaporator sampai 1/3 volum dan selanjutnya
ditambahkan akuades (1:1) dan dibiarkan semalam untuk memisahkan
klorofilnya. Terhadap ekstrak air dilakukan fraksinasi dengan berbagai pelarut
yakni heksan, diklorometan dan etilasetat. Ekstrak metanol dari daun semak
belukar (Hyptis pectinata Poit.) yang diperoleh selanjutnya dikumpulkan dan
ditimbang, masing-masing bobotnya untuk menghitung rendeman yang
dihasilkan mengguanakan rumus berikut :
Rendeman Hasil = Bobot ekstrak kental X 100%
Bobot bahan
(Seppatria, 2019)
3.4.3.2 Pembuatan Sediaan Kapsul
Ekstrak kental dikeringkan dengan penambahan Vivapur 101, Amilum
maydis, Talk, Mg. stearat dan Aerosil. Masukkan campuran tersebut kedalam
cangkang kapsul gelatin. Sediaan di evaluasi keseragaman bobotnya, waktu
hancur dan higroskopisnya (Roselyndiar, 2012)
3.4.4 Metode MTT Assay
Uji sitotoksisitas dilakukan dengan MTT assay, melalui pengamatan
viabilitas pada sel kanker payudara MCF-7. Kultur sel yang telah konfluen
dipanen kemudian didistribusikan ke dalam sumuran 96-well microplate dengan
jumlah 104 sel/sumuran. Sel tersebut diinkubasi selama 24 jam di dalam
inkubator CO2 agar dapat beradaptasi sehingga siap untuk perlakuan. Larutan uji
dibuat stok dalam pelarut DMSO kemudian diencerkan menggunakan media
kultur. Sel dicuci dengan PBS kemudian larutan uji dimasukkan ke dalam
 9

sumuran (triplo). Sel diinkubasi kembali selama 24 jam di dalam inkubator CO2.
Setelah inkubasi, larutan uji dibuang dan ditambahkan pereaksi MTT sejumlah
100 μl/sumuran. Pereaksi stopper ditambahkan setelah 4 jam inkubasi dengan
MTT. Sel diinkubasi semalam pada suhu kamar dan terlindung dari cahaya. Pada
akhir inkubasi sel dibaca dengan ELISA reader pada panjang gelombang 595
nm (Mosmann, 1983)
3.4.5 Migrasi Sel Berbasis Metode Scratch Wound Healing
Perlakuan senyawa ekstrak metanol semak belukar (Hyptis pectinata
Poit.) dalam penghambatan migrasi sel kanker payudara MCF-7. Analisis
migrasi sel berbasis metode scratch wound healing assay, analisis dilakukan
pada pengamatan inkubasi jam ke 0, 18, 24 dan jam ke 42 dibawah mikroskop
inberted. Gambar migrasi kemudian diolah menggunakan software Image J.
Hasil yang didapatkan berupa luas area migrasi tiap perlakuan yang kemudia
dihitung persen penutupan sel atau persen closure menggunakan rumus :
(Luas area jam ke 0 – Luas area jam ke x)
Luas area jam ke 0 x 100%
(Seppatria, 2019)
3.4.6 Uji Keseragaman Bobot Kapsul
Timbang saksama 10 kapsul, satu persatu, beri identitas tiap kapsul,
keluarkan isi tiap kapsul. Timbang saksama tiap cangkang kapsul kosong dan
hitung bobot netto dari isi tiap kapsul dengan cara mengurangkan bobot
cangkang kapsul dari masing-masing bobot kapsul.
3.4.7 Uji Higroskopisitas Kapsul
3 kapsul ditemppatkan pada botol coklat, disimpan dalam desikator.
Masing-masing perlakuan diamati setiap hari selama tujuh hari dan setiap
minggu selama satu bulan. Pengamatan dilakukan terhadap perubahan bobot
kapsul, bentuk kapsul dan isi kapsul (Roselyndiar, 2012)
3.5 Analisis Data
3.5.1 Analisis Uji Sitotoksik pada Sel Kanker Payudara MCF-7
Persentase sel mati dengan rumus :

Aktivitas antikanker dinyatakan dalam IC50 (konsentrasi yang

menyebabkan kematian 50% populasi sel).
3.5.2 Analisis Migrasi Sel
Hasil foto sel dianalisis menggunakan software ImageJ dari kontrol sel
tanpa perlakuan dibandingkan dengan 1/2 IC50, ¼ IC50, 1/8 IC50, inkubasi jam ke
0, 18, 24 dan 42. Selanjutnya masing-masing persen closure pada tiap kelompok
perlakuan dihitung dengan Microsoft Excel 2013 untuk mengetahui
perbandingan persen closure terbaik dari masing-masing perlakuan (Seppatria,
2019).
 10

BAB 4. BIAYA DAN JADWAL KEGIATAN

4.1 Anggaran Biaya
Anggaran biaya untuk penelitian ini terlihat pada Tabel 1
Tabel 1. Rancangan anggaran penelitian
No. Jenis Pengeluaran Biaya (Rp)
1. Perlengkapan yang diperlukan 795.000
2. Bahan habis pakai 7.156.000
3. Perjalanan 1.830.000
4. Lain-lain 2.600.000

Jumlah 12.381.000
4.2 Jadwal Kegiatan
Penelitian ini direncanakan berlangsung selama 5 bulan, dengan rincian
tahap kegiatan sebagaimana terlihat pada tabel 2
Tabel 2. Jadwal tahap penelitian
No. Kegiatan Bulan
1 2 3 4 5
1. Observasi
2. Pengumpulan Data dan
Bahan Baku
3. Penelitian
4. Analisis Data
5. Evaluasi dan Konsultasi
6. Penyusunan Laporan
DAFTAR PUSTAKA
Almog, N And V. Rotter. 1997. Involvement Of P53 In Cell Differentiation And
Development. Bba-Reviews On Cancer. 1333 (1) : F1−F27.
Barbosa, C. V., Aquino, P. G. V., Ribeiro-Júnior, K. A. L., Moura, F. B. P.,
Alexandre-Moreira, M. A., Snat’Ana, A. E. G., Ferreira, J. R. O., Moraes,
M. O., Pessoa, C., Aguiar, J. S., Silva, T. G., Araújo-Júnior, J. X. 2012.
Cytotoxic and Anntitumor Activities of Hyptis Pectinata (Sambacaita)
Extract, Brasil, Silae, vol. 3, hal. 70-74.
CCRC. 2009. Prosedur Tetap Uji Sitotoksik Metode MTT. Yogyakarta: Fakultas
Farmasi, UGM.
Katzung BG. 1995. Basic & Clinical Pharmacology, 7th edition. Prentice Hall
International, pp. 881.
Roselyndiar. 2012. Formulasi Kapsul Kombinasi Ekstrak Herba Seledri dan Daun
Tempuyung. Skripsi. Universitas Indonseia. Jakarta.
Pengaruh Ekstrak Etanol Kulit Terong Ungu Terhadap Penghambatan Migrasi Sel
Kanker Payudara T47D Berbasis Metode Scratch Wound Healing. Skripsi.
Semarang. Universitas Wahid Hasyim.
Suzery, Meiny dan Cahyono, Bambang., 2014, Evaluation of Cytotoxicity Effect
of Hyptis pectinata Poit (Lamiaceae) extract using BSLT and MTT
meyhods. Jurnal Sains dan Matematika. Semarang. 22 (3) :. 84-88.
 11

LAMPIRAN
Lampiran 1. Biodata Ketua, Anggota Kelompok dan Dosen Pendamping
1. Biodata Ketua
A. Identitas Diri
1. Nama Lengkap Shofi’atun Ni’mah
2. Jenis Kelamin Perempuan
3. Program Studi Farmasi
4. NIM 175010014
5. Tempat dan Tanggal Lahir Pati, 23 September 1998
6. E-mail shofiatunimah23@gmail.com
7. Nomor Telepon/Hp 085233055623
B. Kegiatan Kemahasiswaan Yang Sedang/Pernah Diikuti
No Jenis Kegiatan Status dalam Waktu dan
Kegiatan Tempat
1. BEM (Badan Eksekutif Sekretaris 2018/2019,
Mahasiswa) Fakultas Universitas
Farmasi Wahid Hasyim
2. BEM (Badan Eksekutif Departemen 2017/2018,
Mahasiswa) Fakultas Wacana dan Kajian Universitas
Farmasi Ilmiah Wahid Hasyim
C. Penghargaan Yang Pernah Diterima
No Jenis Penghargaan Pihak Pemberi Tahun
Penghargaan
1
2

Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar
dan dapat dipertanggungjawabkan secara hukum. Apabila di kemudian
hari ternyata dijumpai ketidaksesuaian dengan kenyataan, saya sanggup
menerima sanksi.
Demikian biodata ini saya buat dengan sebenarnya untuk memenuhi salah
satu persyaratan dalam pengajuan PKM Penelitian.

Semarang, 13 Desember 2019

Ketua,

(Shofi’atun Ni’mah)
 12

2. Biodata Anggota
A. Identitas Diri
1. Nama Lengkap Intan Meyta Parusiza
2. Jenis Kelamin Perempuan
3. Program Studi Farmasi
4. NIM 175010008
5. Tempat dan Tanggal Lahir Karang Jaya, 17 Mei 2000
6. E-mail Intan.meyta17@gmail.com
7. Nomor Telepon/Hp 085267629162
B. Kegiatan Kemahasiswaan Yang Sedang/Pernah Diikuti
No Jenis Kegiatan Status dalam Waktu dan
Kegiatan Tempat
1. BEM (Badan Eksekutif Departemen 2018/2019,
Mahasiswa) Fakultas Pendidikan, Minat Universitas
Farmasi dan Bakat Wahid
Hasyim
C. Penghargaan Yang Pernah Diterima
No Jenis Penghargaan Pihak Pemberi Tahun
Penghargaan
1
2

Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar
dan dapat dipertanggungjawabkan secara hukum. Apabila di kemudian
hari ternyata dijumpai ketidaksesuaian dengan kenyataan, saya sanggup
menerima sanksi.
Demikian biodata ini saya buat dengan sebenarnya untuk memenuhi salah
satu oersyaratan dalam pengajuan PKM Penelitian.

Semarang, 13 Desember 2019

Anggota Tim 1,

(Intan Meyta Parusiza)

 13

3. Biodata Anggota
A. Identitas Diri
1. Nama Lengkap Ayu Wulandari
2. Jenis Kelamin Perempuan
3. Program Studi Farmasi
4. NIM 18
5. Tempat dan Tanggal Lahir Blora, 24 Desember 2019
6. E-mail ayuwulan25412@gmail.com
7. Nomor Telepon/Hp 085741383277
B. Kegiatan Kemahasiswaan Yang Sedang/Pernah Diikuti
No Jenis Kegiatan Status dalam Waktu dan
Kegiatan Tempat
1. TIMSUS (Tim Khusus) Departemen Kajian, 2018/2019,
BEM (Badan Eksekutif Strategi dan Universitas
Mahasiswa) Fakultas Advokasi Wahid Hasyim
Farmasi
2. BEM (Badan Eksekutif Departemen Kajian, 2019/2020,
Mahasiswa) Fakultas Strategi dan Universitas
Farmasi Advokasi Wahid Hasyim
C. Penghargaan Yang Pernah Diterima
No Jenis Penghargaan Pihak Pemberi Tahun
Penghargaan
1
2

Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar
dan dapat dipertanggungjawabkan secara hukum. Apabila di kemudian
hari ternyata dijumpai ketidaksesuaian dengan kenyataan, saya sanggup
menerima sanksi.
Demikian biodata ini saya buat dengan sebenarnya untuk memenuhi salah
satu persyaratan dalam pengajuan PKM Penelitian.

Semarang, 13 Desember 2019

Anggota Tim II,

(Ayu Wulandari)
 14

4. Biodata Dosen pendamping

A. Identitas Diri
1. Nama Lengakap Drs. H. Ibrahim Arifin, M.Sc.,
Apt.
2. Jenis Kelamin Laki-laki
3. Program Studi Farmasi
4. NPP/NIDN 07.00.1.0028/0616056301
5. Tempat dan Tanggal Lahir Semarang, 16 Mei 1963
6. Alamat E-mail Ibrahim_arifin.0919@yahoo.co.id
7. No. Telepon/Hp 081213533547
B. Riwayat Pendidikan
Gelar Akademik Sarjana S2/Magister
Nama Institusi UGM Yogyakarta UGM
Yogyakarta
Jurusan/Prodi Farmasi Farmasi-
Penemuan Obat
Tahun Masuk-Lulus 1981-1986 2001-2013
Judul Skripsi/Tesis Perbandingan Efek Sinergistik
Penetapan Kadar Asam Ursolat
Paracetamol Secara terhadap
Spektrofotometri Aktivitas
Ultra Violet dan Sitotoksik
Spektrofotometri Doxorubisin pada
Infra Merah Sel Kanker
Payudara MCF-7
Nama Pembimbing/Promotor Dr. Makin Ibnu Prof. Dr. Edy
Hadjar, Apt. Meiyanto, M.Si.,
Apt.
C. Rekam Jejak Tri Dharma PT
Pendidikan/Pengajaran
No Nama Mata Kuliah Wajib/Pilihan SKS
1. Biokimia Wajib 2
2. Biologi Sel Molekuler Wajib 3
3. Etika dan Peraturan Perundangan Wajib 2
Kesehatan
4. Desain dan Metode Penelitian Wajib 2

Penelitian
No Judul Penelitian Penyandang Dana Tahun
1. Pengembangan Metode Analisis DIKTI 2014
Sukrosa untuk Menentukan Keaslian
Madu Perdagangan Menggunakan
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
2. Teh Jamur Kombucha Sebagai DIKTI 2013
Imunomodulator terhadap
Fagosistosis Sel Makrofag dan
Proliferasi Sel Limfosit Mencit Galur
 15

Balb/C Secara in Vitro

Pengabdian Kepada Masyarakat
No Judul Pengabdian kepada Masyarakat Penyandang Dana Tahun
1 - - -

Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar
dan dapat dipertanggungjawabkan secara hokum. Apabila dikemudian
hari ternyata dijumpai ketidaksesuaian dengan kenyataan, saya sanggup
menerima sanksi. Demikian biodata ini saya buat dengan sebenarnya
untuk memenuhi salah satu persyaratan dalam pengajuan PKM Penelitian.

Semarang, 13 Desember 2019

Dosen Pendamping

(Drs. H. Ibrahim Arifin, M. Sc., Apt.)

NIDN. 061605630
 16

Lampiran 2. Justifikasi Anggaran Kegiatan

1. Perlengkapan Volume Harga Satuan Jumlah (Rp)
yang diperlukan (Rp)
- Kertas whatman 1 lembar 20.000 20.000
No.1

- Cangkang kapsul 1 pak 50.000 50.000

- Tissue culture 1 pak 60.000 60.000

dish

- Conical tube 15 1 pak 250.000 250.000

ml

- Eppendrof tube 1 pak 200.000 200.000

- 96-well plate 4 buah 40.000 160.000

- Running ELISA 3 kali 10.000 30.000

- Alumunium Foil 1 gulung 25.000 25.000

SUB TOTAL (Rp) 795.000

2. Bahan Habis Harga Satuan
Volume Jumlah
Pakai (Rp)
- Daun Hyptis 15 kg 10.000 150.000
pectinata Poit.

- Metanol (Merck) 8L 35.000 280.000

- Media DMEM 300 ml 3.0000.000/L 900.000

- PBS 200 ml 2.500.000/L 500.000

- DMSO 10 ml 1.000.000/100 100.000

ml
 17

- Aquadest 10 ml 5.000/L 50.000

- Trypsin-EDTA 25 ml 500.000/100 125.000

ml
- FBS 50 ml 8.500.000/500 850.000
ml
- MTT 20 mg 3.000.000/g 60.000
- Reagen Stopper 35 ml 3.000.000/L 75.000
(SDS)
- Etanol 96% 3L 35.000/L 105.000

- Buffer Phosphat 10 g 1.500.000/100 150.000

- Coomasie Blue 5 ml 1.500.000/25 300.000

ml
- Etanol 70% 3L 35.000/L 105.000

- Heksan 3L 72.000/L 216.000

dikloromethan
- Etil asetat 3L 40.000/L 120.000

- Vivapur 101 500 g 550.000/500 g 550.000

- Aerosol 500 g 35.000/250 g 70.000

- Amylum 1200 g 350.000/1200 350.000

g

- Magensium 200 mg 250.000/100 500.000

mg
- Tritron-X 20 ml 2.000.000/100 400.000
ml
- Kultur Sel Kanker 1.200.000 1.200.000 1.200.000
Payudara MCF-7
SUB TOTAL (Rp) 7.156.000
3. Biaya Volume Harga Satuan
Perjalanan Jumlah
(Rp)
- Perjalanan 3 Orang 30.000 90.000
Determinasi
Tanaman
 18

- Perjalanan 3 Orang 10.000 30.000

pembelian bahan
kimia

- Perjalanan 3 Orang 120.000 360.000

Semarang-
Yogyakarta (untuk
Penelitian di UGM)

- Biaya kos di 3 Orang 300.000 900.000

Yogyakarta selama
penelitian (1 bulan)

- Pengurusan hak 3 Orang 150.000 450.000

paten / HKI

SUB TOTAL (Rp) 1.830.000

Vol. Harga Satuan

4. Biaya Lain-lain Jumlah
Satuan (Rp)
- Dokumentasi 1 Paket 200.000 200.000
- Penyusunan 1 Paket 200.000 200.000
Laporan
- Publikasi 1 Paket 350.000 350.000
- Seminar 1 Paket 500.000 500.000
- Olah Data 1 Paket 310.000 310.000
- Determinasi 1 Paket 100.000 100.000
Tanaman
- Rotary Evaporator 24 Jam 10.000 240.000
- Uji Laboratorium 3 Bulan 100.000 300.000
Fitokimia Fakultas
Farmasi Universitas
Wahid Hasyim
- Uji Laboratorium 1 Bulan 200.000 200.000
Biologi UGM
- Laboratorium 1 Bulan 200.000 200.000
Cancer
Cemoprevention
Research Center
Fakultas Kedokteran
Universitas Gadjah
 19

Mada Yogyakarta
SUB TOTAL (Rp) 2.600.000
TOTAL PENGELUARAN (Rp) 12.381.000
Terbilang (Dua Belas Juta Tiga Ratus Delapan Puluh Satu Ribu
Rupiah)
 20

Lampiran 3. Susunan Organisasi Tim Peneliti dan Pembagian Tugas

Alokasi
Program Bidang
No Nama/NIM Waktu Uraian Tugas
Studi Ilmu
(jam/minggu)
1. Shofi’atun Farmasi Farmasi 15 - Penanggun
Ni’mah jam/minggu g jawab uji
175010014 sitotoksik
- Analisis uji
sitotoksik
dan migrasi
sel
- Uji
keseragama
n bobot
kapsul dan
khigroskopi
sitas kapsul
- Melakukan
percobaan
di
Laboratoriu
m
2. Intan Meyta Farmasi Farmasi 15 - Penanggun
Parusiza jam/minggu g jawab
175010008 pencatatan
keuangan
selama
penelitian
- Pengumpul
an bahan
uji
- Determinas
i tanaman
- Melakukan
percobaan
di
laboratoriu
m
3. Ayu Farmasi Farmasi 15 - Penanggun
Wulandari jam/minggu g jawab
1810501107 penyediaan
 21

9 bahan uji
- Penanggun
g jawab
preparasi
ekstrak
- Pembuatan
senyawa uji
- Melakukan
percobaan
di
laboratoriu
m
22