Mengutip artikel ini: Fang-Li Gang, Feng Zhu, Chao-Fu Yang, Xiao-Ting Li, Hua Yang,
MingXia Sun, Wen-Jun Wu &Ji-Wen Zhang (2018): Aktivitas antijamur, anti-meradang dan neuritogenic
senyawa yang baru diisolasi dari Disporopsisaspersa, Penelitian Produk Alami, DOI:
10.1080/14786419.2018.1519709
Untuk menautkan ke artikel ini: https://doi.org/10.1080/14786419.2018.1519709
aktivitas antijamur
terhadap Pseudoperonospora cubensis dan ester naphthylacetate; aktivitas antijamur; Phytophthora infestans dengan
nilai EC50 22,82, 18,90 lg / mL, aktivitas neuritogenic; masing-masing. Senyawa 1 menunjukkan promosi yang signifikan
pada aktivitas anti-inflamasi pertumbuhan neurite dalam sel PC-12 yang diinduksi NGF, dan penghambatan moderat pada
produksi NO yang disebabkan oleh lipopolisakarida (LPS) dalam sel mikroglial BV-2.
1. Perkenalan
Disporopsis aspersa (HUA) ENGL. ex DIELS (Liliaceae) adalah ramuan abadi, tingginya sekitar 20-50 cm, daun
bulat telur, ovat-lanset atau ovat-elliptik; bunga kuning-hijau dengan banyak bintik-bintik hitam; buah
hampir bulat, berdiameter sekitar 8 mm, biru-ungu saat dewasa, dan didistribusikan di Sichuan (timur ke
barat daya), Yunnan (utara dan barat), Guangxi (timur laut), Hubei (barat) dan Hunan (du Toit et
al. 2010; Wang dkk. 2015). Seluruh herbal dapat digunakan sebagai obat untuk melengkapi darah,
memperkuat konstitusi tubuh, mengobati demam terus-menerus, keringat malam, batuk kering dan
kanker (Nguyen et al. 2006).
HUBUNGI Nwzjw@nwsuaf.edu.cn Ji-Wen Zhang
Fang-Li Gang dan Feng Zhu berkontribusi sama untuk pekerjaan ini.
tersebut mencakup 7 karbon kuarter, 11 methines, 1 metilen, dan 3 metil, di mana karbon kuarter
mengandung ester karbonil pada dC 170,2 dan 6 karbon cincin benzena ( dC 130,5, 134,0, 132,2, 147,9,
137,0, 136,5). Berdasarkan hal di atas, dapat dinilai secara awal bahwa struktur senyawa mengandung
cincin naftalena, cincin benzena dan gugus isopropil.
Tabel 1. Aktivitas antijamur senyawa terisolasi terhadap Pseudoperonospora cubensis dan Phytophthora infestans.
Phytophthora Pseudoperonospora cubensis
infestans
Persamaan Persamaan
100 lg/ regresi toksik Rp 100 lg/ regresi toksik Rp
Comp mL (±SDc) (lg/mL)
EC50 y 1/4 ax þ b 2.000 mL (±SDc) EC50 (lg/mL) y 1/4 ax þ b 2.000
CK1a,d – – – – – – – –
CK2b 100.0 ± 0.32 1.99 y 1/4 0.988 99.5 ± 2.39 y 0.978
2.524.25x þ 0.55 1/4 4.082.42x þ
1 49,4 ± 0,97 51.13 y 1/4 0.989 54.8 ± – – –
2.131.37x þ 1.65
2 78.9 ± 0.88 22.82 y 1/4 0.998 79.1 ± 18.9 y 0.988
3.010.91x þ 1.12 1/4 1.342.88x þ
aCK1
adalah air sebagai kontrol kosong.
bCK2
adalah azoxystrobin sebagai kontrol positif.
berarti standar deviasi. d"-" menunjukkan bahwa EC50 tidak diuji.
cSD
1
H NMR (500 MHz, CDCl3) d 4,42 (1 H, dd, J 1/4 10,5, 3,4 Hz), 4,37 (1 H, dd, J 1/4 10,5,
0,6 Hz), 4,18 (1 H, dd, J 1/4 10,0, 0,5 Hz), 1,52 (s, 3H). 13 C NMR (125 MHz, CDCl3) d 178.4,
73.7, 73.3, 72.2, 29.7, 21.4.
2.2. Aktivitas antijamur
Seperti yang ditunjukkan pada Tabel 1 dan Gambar S2, aktivitas antijamur terhadap P. infestans dan
P.cubensis dari senyawa terisolasi dievaluasi oleh penghambatan pelepasan zoospore. Dalam skrining
aktivitas awal kami, ester naphthylacetate (1) dan furanone (2) menunjukkan beberapa aktivitas
antijamur pada 100 lg / mL. Selanjutnya, nilai EC50 dari senyawa yang lebih aktif ditentukan lebih
lanjut. Ester naphthylacetate baru menunjukkan aktivitas antijamur yang memuaskan terhadap P.
infestans dengan nilai EC50 51,13 lg / mL. Selain itu, furanone menunjukkan aktivitas antijamur yang baik
terhadap P. infestans dan P. cubensis dengan nilai EC50 masing-masing 22,82, 18,90 lg / mL. Sayangnya,
kedua senyawa ini tidak memiliki aktivitas penghambatan terhadap jamur dan bakteri lain (Tabel S2).
2.3. Aktivitas neuritogenic
Ester baru (1) dievaluasi untuk aktivitas neuritogenic menggunakan sel pheochromocytoma tikus (PC-12)
sebagai model diferensiasi neuron (Gambar S3). Uji viabilitas sel tidak menunjukkan efek toksik senyawa
1 pada sel PC-12 pada konsentrasi 1,25 hingga 20 lM. Setelah senyawa 1 diinkubasi dengan NGF (20 ng /
mL) selama 48 jam dalam sel PC-12, tingkat diferensiasi sel pertama meningkat dan kemudian menurun
dengan meningkatnya konsentrasi senyawa. Dibandingkan dengan kontrol kosong (0,77 ± 0,20%) dan
kontrol NGF (14,63 ± 0,36%), senyawa 1 menunjukkan pertumbuhan neurite yang diinduksi NGF pada
konsentrasi 1,25 hingga 20 lM, dan tingkat diferensiasi sel tertinggi dicapai pada 2,5 lM (19,29 ± 0,30%).
2.4. Aktivitas anti-inflamasi
Dalam penelitian ini, aktivitas anti-inflamasi senyawa target 1 pada konsentrasi 1,25 hingga
20 lM terhadap produksi NO yang disebabkan oleh lipopolisakarida (LPS) dalam sel mikroglial BV-2
diukur. Uji kelayakan sel tidak menunjukkan efek toksik dari senyawa 1 pada sel mikroglial BV-2. Seperti
yang diilustrasikan pada Gambar S4, konsentrasi senyawa 1 yang berbeda menunjukkan aktivitas anti-
inflamasi yang lebih lemah.
3. Bagian eksperimental
3.1. Umum
Semua reagen dibeli dari sumber komersial tanpa pemurnian lebih lanjut. TLC dilakukan pada pelat gel
silika GF254, dan bintik-bintik terdeteksi di bawah lampu ultraviolet atau diwarnai oleh 5% (V / V) asam
sulfat / 0,1 g asam fosfat oksidase mL1 dalam etanol. Kromatografi kolom dilakukan di atas gel silika (100-
200 mesh dan 200-300 mesh) dan Sephadex LH-20 (GE Healthcare Co., Buckinghamshire, Inggris). 1 H
NMR, 13C NMR, DEPT 135, COSY, HMBC dan HMQC dicatat pada spektrometer A Bruker AMX500 ( CDCl3)
dengan TMS sebagai standar internal pada 25 C. Titik leleh semua senyawa diukur pada alat titik leleh
WRS-1B. Spektrum massa highresolution (HR-ESI-MS) ditentukan pada spektrometer massa API QSTAR
Pular-1. Rotasi khusus dilakukan pada polarimeter otomatis Perkin-Elmer 241 MC (PerkinElmer,
Waltham, MA).
3.2. Bahan tanaman
D. aspersa dikumpulkan pada Mei 2015 dari provinsi Sichuan (barat daya), Cina. Itu diidentifikasi oleh
Wenjun Wu (Laboratorium Kunci R&D Pestisida Botani di Provinsi Shaanxi) sebagai D. aspersa. Spesimen
voucher (Sampel No. WNQ2015-05) disimpan di Laboratorium Utama R&D Pestisida Botani di Provinsi
Shaanxi.
3.3. Ekstraksi dan isolasi
3.4. Sintesis kimia
Di bawah udara, labu bawah diisi dengan asam 1-naphthylacetic (1,86 g, 10 mmol), thymol (1,50 g, 10
mmol), CDI (1,62 g, 10 mmol) dalam DCM anhidrat (30 mL). Campuran terus diaduk pada 25 C selama 14
jam sampai tidak ada perubahan yang diamati oleh TLC, kemudian H2O (30 mL) ditambahkan dan
diekstraksi tiga kali dengan diklorometana (30 mL), dikeringkan di atas Na2SO4. Setelah menguapkan
pelarut di bawah tekanan yang berkurang, residu dimurnikan dengan kromatografi kolom flash untuk
memberikan produk murni 1 (2,48 g).
3.5. Aktivitas antijamur terhadap Pseudoperonospora cubensis danPhytophthora infestans
Aktivitas antijamur terhadap P. infestans dan P. cubensis ditentukan menggunakan penghambatan
pelepasan zoospore (Mitani et al. 2001; Zhu dkk. 2018). Suspensi zoosporangia dengan konsentrasi
masing-masing bidang 60-70 (10 10) disiapkan untuk mengevaluasi aktivitas antijamur senyawa 1 dan
2. Suspensi zoosporangia campuran (0,1 mL) dengan senyawa target (0,1 mL) dalam tabung EP,
ditempatkan di lemari es 4 C, dikultur dalam kondisi gelap selama 4 jam. Air sebagai kontrol kosong dan
azoxystrobin sebagai yang positif. Pelepasan zoospore dicatat dan tingkat penghambatan dihitung
sebagai berikut (persamaan 1) ketika tingkat pelepasan zoospore kontrol mencapai 90%.
p0P1
Penghambatanð%Þ 1/4 100 (1)
P0
Di mana Ia adalah sel pembawa neurite (sel mengandung satu atau lebih neuritis lebih besar dari
panjang tubuhnya) jumlah; It adalah jumlah sel total
3.7. Aktivitas anti-inflamasi
Senyawa 1 (20, 10, 5, 2,5, 1,25 lM) juga dievaluasi untuk kegiatan anti-inflamasi mereka menggunakan
sel mikroglial BV-2 yang diinduksi LPS sebagai model peradangan (Dong et al. 2014; Huang
dkk. 2015; Zhang dkk. 2016). Sel BV-2 diunggulkan ke dalam pelat 96well pada kepadatan 1,5 105 sel / mL
untuk inkubasi 24 jam, diprakarsikan dengan senyawa target pada konsentrasi yang ditentukan dengan
lipopolisakarida (LPS) (1 lg / mL) untuk 24 jam lainnya. Sel-sel yang diobati quercetin berfungsi sebagai
kontrol positif, sementara sel-sel pelarut saja sebagai sel negatif. Akhirnya, senyawa judul 1 dievaluasi
aktivitas penghambatan terhadap produksi NO yang diinduksi oleh LPS menggunakan tes Griess dan
kelangsungan hidup sel dievaluasi menggunakan uji SRB.
4. Kesimpulan
Singkatnya, ester baru (1) dan terpenoid (2) diisolasi dari D. aspera untuk pertama kalinya, dan
strukturnya dijelaskan oleh sifat fisik / kimia, sifat spektroskopi dan perbandingan dengan data yang
dipublikasikan, selanjutnya aktivitas antijamur mereka, aktivitas neuritogenik dan kegiatan anti-inflamasi
ditentukan. Dari hasil bioassay, kedua senyawa tersebut semuanya menunjukkan aktivitas antijamur
yang baik, terutama furanone (2) menunjukkan aktivitas antijamur yang lebih baik terhadap P. infestans
dan P. cubensis dengan nilai EC50 masing-masing 22,82, 18,90 lM. Selain itu, ester naphthylacetate baru
(1) memiliki promosi yang signifikan pada pertumbuhan neurite dalam sel PC-12 yang diinduksi NGF,
sementara efek yang lebih lemah pada produksi NO yang diinduksi LPS pada
Sel BV-2.
Pernyataan pengungkapan
Tidak ada potensi konflik kepentingan yang dilaporkan oleh penulis.
Pendanaan
Kami dengan penuh syukur mengakui Program R&D Kunci Nasional Tiongkok (2017YFD0200506), Universitas Yanan (YDY2017-
08), dan Yayasan Ilmu Pengetahuan Alam Provinsi Shaanxi (2018JM02055).
Referensi
Bai R, Zhang CC, Yin X, Wei J, Gao JM. 2015. Striatoids A-F, cyathane diterpenoid dengan aktivitas neurotrofik dari kultur
jamur Cyathus striatus. J Nat Prod. 78(4):783–788.
Dong Z, Gu Q, Cheng B, Cheng Z-B, Tang G-H, Sun Z-H, Zhang J-S, Bao J-M, Yin S. 2014. Natural nitric oxide (NO) inhibitor
dari Aristolochia mollissima. RSC Adv. 4(98):55036–55043.
Du Toit K, Drewes SE, Bodenstein J. 2010. Struktur kimia, asal tumbuhan, etnobotani dan aktivitas biologis
homoisoflavanones. Nat Prod Res. 24(5):457–490.
Hotchkiss DJ, Soengas R, Booth KV, Weymouth-Wilson AC, Eastwick-Field V, Fleet GWJ. 2007. Isomerisasi aldosa hijau: 2-C-
metil-1,4-lakton dari reaksi ketoses Amadori dengan kalsium hidroksida. Tetrahedron Lett. 48(4):517–520.
Huang Z, Zhu ZX, Li YT, Pang DR, Zheng J, Zhang Q, Zhao YF, Ferreira D, Zjawiony JK, Tu PF, dkk. 2015. Anti-inflamasi labdane
diterpenoids dari Leonurus macranthus. J Nat Prod. 78(9):2276–2285.
Mitani S, Araki S, Yamaguchi T, Takii Y, Ohshima T, Matsuo N. 2001. Aktivitas antijamur dari novel Fungisida Cyazofamid
terhadap infestan Phytophthora dan Jamur Patogen Tanaman Lainnya secara in Vitro. Hama Biochem Physiol. 70 (2): 92–99.
Nguyen AT, Fontaine J, Malonne H, Duez P. 2006. Homoisoflavanones dari Disporopsis aspera. Fitokimia. 67(19):2159–2163.
Wang Y, Li S, Han D, Meng K, Wang M, Zhao C. 2015. Penentuan simultan rutin, luteolin, quercetin, dan asam betulinic dalam
ekstrak diel Disporopsis pernyi (Hua) oleh UPLC. Metode Anal J Chem. 2015: 130873.
Zhang C, Wang S, Zeng KW, Li J, Ferreira D, Zjawiony JK, Liu BY, Guo XY, Jin HW, Jiang Y, dkk. 2016. Nitric oxide inhibitory dimeric
sesquiterpenoids dari Artemisia rupestris. J Nat Prod. 79(1):213–223.
Zhang CC, Yin X, Cao CY, Wei J, Zhang Q, Gao JM. 2015. Konstituen kimia dari Hericium erinaceus dan kemampuannya untuk
merangsang pertumbuhan neurite yang dimediasi NGF pada sel PC12. Bioorg Med Chem Lett. 25(22):5078–5082.
Zhu F, Yuan C, Gang F, Yang C, Wu W, Zhang J. 2018. Isolasi yang dipandu bioassay dari senyawa antijamur dari Disporopsis
aspersa (Hua) engl. ex diels terhadap Pseudoperonospora cubensis dan Phytophthora infestans. Chem
Biodivers. 15(7):e1800090.