Machine Translated by Google

molekul

Artikel

Isolasi dan Karakterisasi Senyawa Fenilpropanoid

dan Lignan dari Peperomia pellucida [L.]
Kunth dengan Aktivitas Estrogenik
I Gusti Agung Ayu Kartika1 , Di Jae Bang2, Catur Riani 3, Muhammad Insanu4,
, Kyu
Jong Hwan Kwak 5,* 2,* danHyuk Chung
I Ketut Adnyana 1,*

1
Departemen Farmakologi dan Farmasi Klinik, Sekolah Farmasi, Institut Teknologi Bandung, Ganesha
10, Bandung 40132, Indonesia; kartikaayu269@students.itb.ac.id Mencegah Laboratorium Farmasi,
2
Sekolah Farmasi, Universitas Sungkyunkwan, Suwon-Si, Gyeonggi-Do 16419, Korea;
injae753@naver.com Laboratorium Bioteknologi Farmasi, Sekolah Farmasi, Institut Teknologi Bandung,
3
Ganesha 10, Bandung 40132, Indonesia; catur@fa.itb.ac.id Jurusan Biologi Farmasi, Sekolah Farmasi,
Institut Teknologi Bandung, Ganesha 10, Bandung 40132, Indonesia; insanu@fa.itb.ac.id Laboratorium
4
Fitokimia, Sekolah Farmasi, Universitas Sungkyunkwan, Suwon-Si, Gyeonggi-Do 16419, Korea

* Korespondensi: jhkwak@skku.edu (JHK); khchung@skku.edu (KHC); ketut@fa.itb.ac.id (IKA)

Editor Akademik: Natalizia Miceli

Diterima: 9 September 2020; Diterima: 22 Oktober 2020; Diterbitkan: 23 Oktober 2020

Abstrak: Ekstrak Peperomia pellucida [L.] Kunth sebelumnya telah dibuktikan memiliki efek seperti
estrogenik in vivo , sehingga berfungsi sebagai agen anti-osteoporosis. Namun, senyawa yang
bertanggung jawab atas efek ini belum ditentukan. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk
mengisolasi dan mengelusidasi senyawa-senyawa potensial yang memiliki aktivitas estrogenik.
Struktur senyawa hasil isolasi diidentifikasi menggunakan 1D 1H dan 13C-NMR dan dikonfirmasi dengan 2D FT-NMR.
Aktivitas estrogenik dievaluasi menggunakan uji E-SCREEN, dan studi docking molekuler dilakukan
untuk memprediksi afinitas pengikatan senyawa yang diisolasi ke reseptor estrogen. Pada percobaan
ini, kami berhasil mengisolasi tiga fenilpropanoid dan dua turunan lignan, yaitu, 6-alil-5-metoksi-1,3-
benzodioksol-4-ol (1), pachypostaudin B (2), pellucidin A (3), dillapiole (4), dan apiol (5). Di antara
senyawa-senyawa tersebut, isolasi 1 dan 2 dari P. pellucida dilaporkan untuk pertama kalinya dalam
penelitian ini. Tes aktivitas dengan jelas menunjukkan bahwa ekstrak etil asetat dan fraksi, subfraksi,
dan senyawa yang diisolasi menunjukkan aktivitas estrogenik. Fraksi metanol ekstrak etil asetat
menghasilkan aktivitas estrogenik tertinggi, sedangkan 1 dan 2 memiliki aktivitas agonis parsial.
Beberapa senyawa (turunan dari dillapiole dan pellucidin A) juga memiliki aktivitas anti-estrogenik. Dalam
studi docking, aktivitas estrogenik 1–5 tampaknya dimediasi oleh mekanisme klasik yang bergantung pada
ligan seperti yang disarankan oleh interaksi pengikatan antara senyawa dan reseptor estrogen; pengikatan
terjadi pada Arg 394 dan His 524 dari reseptor alfa dan Arg 346 dan His 475 dari reseptor beta. Singkatnya,
kami mengungkapkan bahwa P. pellucida adalah agen anti-osteoporosis yang menjanjikan karena aktivitas
estrogeniknya, dan senyawa yang bertanggung jawab untuk aktivitas ini ditemukan sebagai turunan lignan
dan fenilpropanoid. Kehadiran senyawa lain baik dalam ekstrak atau fraksi dapat berkontribusi pada efek
sinergis, seperti yang ditunjukkan oleh aktivitas estrogenik fraksi metanol yang lebih tinggi. Oleh karena
itu, kami menyarankan penelitian lebih lanjut tentang aktivitas osteoporosis dan keamanan senyawa yang
teridentifikasi, terutama mengenai efeknya pada organ yang responsif terhadap estrogen.

Kata kunci: Peperomia pellucida; fenilpropanoid dan lignan; fitoestrogen; E-LAYAR; perkaitan

Molekul 2020, 25, 4914; doi:10.3390/molecules25214914 www.mdpi.com/journal/molecules

Machine Translated by Google

Molekul 2020, 25, 4914 2 dari 18

1. Perkenalan

Estrogen adalah hormon steroid yang terkenal. Estrogen bekerja pada berbagai jaringan dan terlibat
dalam berbagai proses fisiologis. Mereka mengatur pembentukan organ reproduksi baik pada wanita maupun
pria, perlindungan dan diferensiasi sistem saraf pusat, remodeling dan pertumbuhan tulang, metabolisme
lipid di hati, dan vasodilatasi sistem kardiovaskular [1,2]. Aktivitas estrogen terutama dimediasi oleh dua
reseptor estrogen yang berbeda, ERÿ dan Erÿ, yang bekerja secara antagonis [3,4].

Berbagai ligan alami dan sintetis dapat memodulasi aktivitas estrogenik. Beberapa di antaranya disebut
modulator ER selektif (SERMs) karena mereka dapat bertindak seperti estrogen di beberapa jaringan tetapi
memblokir aksi estrogen di jaringan lain, sehingga memberikan efek spesifik jaringan dengan bekerja pada ER selektif [5].
Dengan demikian, fitoestrogen, sekelompok besar senyawa turunan tumbuhan yang memiliki sifat estrogenik, juga dapat
berperan sebagai SERM [5,6]. Fitoestrogen memiliki berbagai tingkat aktivitas estrogenik, dan interaksinya dengan
reseptor estrogen dalam beberapa hal serupa dengan interaksi SERM/ER [7].
Kegiatan semacam ini menawarkan keuntungan farmakologis atau nutraceutical [8-10]. Kelompok senyawa
fenolik yang saat ini diklasifikasikan sebagai fitoestrogen meliputi chalcones, flavonoid (isoflavonoid, flavon,
flavonol, flavanon), stilbenoid, dan lignan [6,8-11].
Peperomia pellucida adalah tanaman yang digunakan di seluruh dunia baik sebagai tanaman obat maupun sayuran.
Penerapan ekstrak etanol dan airnya telah menunjukkan efek seperti estrogenik yang khas dalam uji anti-osteoporosis in
vivo , termasuk peningkatan berat rahim dan mencegah keropos tulang pada tikus yang diovariektomi , dan mendorong
penyembuhan patah tulang pada cedera lubang bor pada tikus, yang biasanya digunakan sebagai model hewan dalam
studi osteoporosis [12-14]. Estrogen diketahui memiliki efek langsung pada osteoklas, osteosit, dan osteoblas, masing-
masing menyebabkan penurunan resorpsi tulang, penghambatan remodeling tulang, dan pemeliharaan pembentukan
tulang [15]. Baru-baru ini, kami menunjukkan bahwa ekstrak etil asetat dari tumbuhan ini memiliki efek agonis parsial
dalam uji estrogenik menggunakan garis sel MCF-7/BUS . Namun, tidak ada data yang menunjukkan senyawa mana
yang berkontribusi terhadap efek estrogenik ini.
Oleh karena itu, penting untuk mengidentifikasi dan mengkarakterisasi senyawa ini untuk memahami mekanisme yang
mendasari efek estrogeniknya. Karena fitoestrogen dapat berperan dalam proses penyembuhan tulang, senyawa-senyawa
tersebut dalam P. pellucida dapat dianggap sebagai kandidat potensial untuk agen anti-osteoporosis.
Pada penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi senyawa dari ekstrak etil asetat P. pellucida yang berpotensi
bertanggung jawab terhadap aktivitas estrogeniknya dan melakukan uji estrogenik pada senyawa tersebut
beserta ekstrak, fraksi, dan subfraksinya.
Penting untuk menentukan aktivitas estrogenik dan anti-estrogenik sampel untuk mengevaluasi aplikasi klinis
potensial mereka dan lebih jelas mengidentifikasi senyawa yang bertanggung jawab.
Aktivitas estrogenik terkait dengan efek anti-osteoporosis, sedangkan aktivitas antiestrogenik dikaitkan
dengan sifat antikanker. Pengetahuan ini juga penting dalam memprediksi keamanan sampel, terutama dalam
konteks kanker dan penyakit lain yang dapat dipengaruhi oleh estrogen [16].
Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan sel MCF-7/BUS—sel kanker payudara dengan
reseptor estrogen positif. Selain ekspresi reseptor progesteron dan human epidermal growth factor
receptor 2 (HER2), sel-sel ini juga mengekspresikan reseptor untuk estrogen, seperti ERÿ, ERÿ, dan G-
protein coupled receptor 30 [17,18]. ERÿ dan ERÿ panjang penuh dilaporkan diekspresikan dalam berbagai jaringan.
Reseptor estrogen (ER) ditemukan terlokalisasi di nukleus, mitokondria, dan membran plasma (sekitar 5%–
10% dari populasi) [19]. ER juga telah ditemukan di organel sitoplasma diskrit, seperti retikulum endoplasma
[20]. Pada sel kanker payudara, membran plasma terutama mengandung ERÿ, dengan sedikit ERÿ [ 21]. ERÿ
terdapat pada sekitar 75% kanker payudara [22].
Aktivitas biologis estrogen dimediasi oleh jalur genomik dan non-genomik [23-25]. Efek genomik adalah
yang melibatkan migrasi kompleks reseptor estrogen ke inti sel dan interaksi langsung dengan kromatin pada
sekuens DNA spesifik yang disebut sebagai elemen respons estrogen (EREs). Dalam pensinyalan genomik
langsung (mekanisme klasik pensinyalan estrogen), reseptor estrogen nuklir ERÿ dan ERÿ bertindak sebagai
faktor transkripsi yang diaktifkan ligan, sedangkan dalam pensinyalan genomik tidak langsung, kompleks
reseptor estrogen bertindak melalui interaksi protein-protein
Machine Translated by perantara
merangsang Googlepensinyalan PI3K/Akt dan MAPK (mitogen-activated protein kinase) [23-25]. Uji E-SCREEN dan
studi penambatan molekuler digunakan untuk menilai aktivitas estrogenik sampel dan menentukan mekanismenya melalui
karakterisasi interaksi dengan ER.

Molekul 2020, 25, 4914 3 dari 18

2. Hasil

dengan faktor transkripsi dan elemen respons lainnya. Di sisi lain, efek non-genomik 2.1. Isolasi dan Identifikasi Senyawa
dari Ekstrak Etil Asetat P. pellucida melibatkan regulasi ekspresi gen secara tidak langsung melalui berbagai peristiwa
pensinyalan intraseluler. Di jalur non-genomik, E2 berikatan dengan ER yang terlokalisasi di membran sel dan mengaktifkan
transduksi sinyal Bioassay E-SCREEN untuk menilai aktivitas estrogenik digunakan untuk memandu isolasi lima senyawa
dari ekstrak etil asetat P. pellucida. Ekstrak etil asetat dari jalur atau fungsi bagian udara melalui aktivasi kaskade
pensinyalan GPR30, sehingga merangsang perantara pensinyalan PI3K/Akt dan MAPK (mitogen-activated protein kinase)
[23-25]. Uji E-SCREEN dan P. pellucida selanjutnya diekstraksi dengan menangguhkan dalam metanol diikuti dengan
mempartisi
docking molekuler
denganyang
petroleum
digunakan
eter. Fraksi
untuk menilai
metanol,
aktivitas
yang menunjukkan
estrogenik sampel
aktivitas
danestrogenik
menentukanyang
mekanismenya
lebih kuat, adalah
melalui
studi
karakterisasi interaksi dengan ER. difraksinasi dengan kromatografi gel silika. Fraksi terpilih dikromatografi ulang pada
silika gel, kolom RP-C18, kolom Sephadex LH-20, kolom Lobar, dan preparatif daur ulang 2. Hasil kromatografi cair kinerja
tinggi (HPLC) dengan kolom JAIGEL-GS310 menggunakan kombinasi pelarut yang berbeda. Semua senyawa yang diisolasi
diklasifikasikan sebagai lignan dan 2.1. Isolasi dan Identifikasi Senyawa dari P. pellucida Ethyl Acetate Extract
phenylpropanoids. Struktur senyawa ditunjukkan pada Gambar 1.

Bioassay E-SCREEN untuk menilai aktivitas estrogenik digunakan untuk memandu isolasi lima Lignan yang merupakan produk alami yang dicirikan oleh inti fenilpropanoid (unit

C6C3 ). Secara struktural, senyawa dari ekstrak etil asetat P. pellucida. Ekstrak etil asetat dari bagian udara terdiri dari dua atau lebih unit fenilpropanoid sebagai perancah dasar [26-28].

Senyawa 1, P. pellucida selanjutnya diekstraksi dengan menangguhkan dalam metanol diikuti dengan mempartisi dengan minyak bumi 4, dan 5 diklasifikasikan sebagai fenilpropanoid, yang

mengandung eter bagian methylenedioxyphenyl planar . Fraksi metanol, yang menunjukkan aktivitas estrogenik yang lebih kuat, difraksinasi dengan gugus alil [28]. Senyawa 2 dan 3

diklasifikasikan sebagai bisnorlignan. Norlignan alami dengan kromatografi gel silika. Fraksi terpilih dikromatografi ulang pada gel silika, senyawa RP-C18 berdasarkan difenilpentana, yang

diturunkan dari penyatuan dua unit fenilpropanoid dalam kolom, kolom Sephadex LH-20, kolom Lobar, dan daur ulang preparatif posisi kinerja tinggi ÿ, ÿÿ atau ÿ , ÿÿ dan ditandai dengan

hilangnya karbon terminal rantai [29-31]. Dalam kromatografi cair (HPLC) dengan kolom JAIGEL-GS310 menggunakan kombinasi pelarut yang berbeda. bisnorlignans, kehilangan ini

memaksa rantai untuk diatur secara berbeda dari pada lignan (persimpangan Semua senyawa yang diisolasi diklasifikasikan sebagai lignan dan fenilpropanoid. Struktur antara dua unit

fenilpropanoid
sentral [32]. adalah melalui ikatan ÿ–ÿ (8–8ÿ) ) dan neo-lignan (persimpangannya adalah senyawa yang ditunjukkan pada Gambar 1. bukan tipe ÿ–ÿ), di mana kiralitas memainkan peran

Gambar 1. Struktur kimia senyawa 1–5 yang diisolasi dari bagian udara P. pellucida seperti Gambar 1. Struktur kimia senyawa 1–5 yang diisolasi dari bagian udara P. pellucida seperti

yang dijelaskan dalam bahan dan metode. dalam bahan dan metode.

Lignan adalah produk alami yang ditandai dengan inti fenilpropanoid (unit C6C3 ). Secara
struktural, mereka terdiri dari dua atau lebih unit fenilpropanoid sebagai perancah dasar [26-28].
Senyawa 1, 4, dan 5 diklasifikasikan sebagai fenilpropanoid, yang mengandung gugus
methylenedioxyphenyl planar dengan gugus alil [28]. Senyawa 2 dan 3 diklasifikasikan sebagai
bisnorlignan. Norlignan adalah senyawa alami berdasarkan difenilpentana, yang diturunkan dari
penyatuan dua unit fenilpropanoid pada posisi ÿ, ÿ atau ÿ, ÿ dan ditandai dengan hilangnya karbon terminal rantai [2
Pada bisnorlignan, kehilangan ini memaksa rantai diatur secara berbeda dari pada lignan (persimpangan
antara dua unit fenilpropanoid melalui ikatan ÿ–ÿ (8–8 )) dan neo-lignan (persimpangan bukan tipe ÿ–
ÿ), di mana kiralitas memainkan peran sentral [32].
Machine Translated by Google

Molekul 2020, 25, 4914 4 dari 18

Struktur senyawa dijelaskan dengan analisis spektral NMR dan sesuai

dengan yang dilaporkan dalam literatur [33,34].
6-Alil-5-metoksi-1,3-benzodioksol-4-ol (1)
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): ÿ 5,91 (2H, s, H-2), 6,27 (1H, s, H-7), 3,33 (2H, d, 6,44 Hz, H-1 ), 5,90
(1H, m, H-2 ), 5,07 (1H, m, H-3a), 5,06 (1H, m, H-3b), 3,76 (3H, s, 5-OMe), 5,36 (1H, brs, OH ).
13C-NMR (213,8 MHz, CDCl3): ÿ 145,2 (C-1), 101,9 (C-2), 132,8 (C-3), 133,6 (C-4), 141,2 (C-5), 125,3
(C-6), 101.2 (C-7), 33.8 (C-1 ), 137.2 (C-2 ), 116.2 (C-3”), 62.1 (5-OMe).
1,1 -(1R,2S)-Siklobutana-1,2-diilbis(2,4,5-trimetoksibenzena) (3, Pellucidin A)
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): ÿ 6,48 (2H, s, H-3/3 ), 6,98 (2H, s, H-6/6 ), 3,85 (2H, m, H-7/7 ), 2.29 (2H,
m, H-8/8 ÿ), 1.92 (2H, m, H-8/8 ÿ), 3.75 (6H, s, 4/4 -OMe), 3.85 dan 3.86 (masing-masing 6H, s, 2/2 -OMe
dan 5/5 -OMe).
13C-NMR (213,8 MHz, CDCl3): ÿ 124,8 (C-1/1 ), 147,8 (C-2/2 ), 98,0 (C-3/3 ), 151,3 (C-4/4 ), 143,3 (C
-5/5 ), 112,0 (C-6/6 ), 40,7 (C-7/7 ), 27,3 (C-8/8 ), 56,5 (4/4 -OMe), 56,8 dan 56,8 (2/2 - OMe dan 5/5 -OMe).

4,5-Dimetoksi-6-prop-2-enil-1,3-benzodioksol (4, Dillapiole)

1H-NMR (400 MHz, CDCl3): ÿ 5,88 (2H, s, H-2), 6,35 (1H, s, H-7), 3,30 (2H, d, 6,53 Hz, H-1 ), 5,93
(1H, m, H-2 ), 4,99 (2H, m, H-3 ), 4,01 (3H, s, 4-OMe), 3,75 (3H, s, 5-OMe).
13C-NMR (100 MHz, CDCl3): ÿ 144,6 (C-1), 101,1 (C-2), 136,0 (C-3), 137,6 (C-4), 144,3 (C-5), 126,1
(C-6), 102,8 (C-7), 33,9 (C-1 ), 137,4 (C-2 ), 115,6 (C-3 ), 60,0 (4-OMe), 61,3 (5-OMe).
4,7-Dimetoksi-5-prop-2-enil-1,3-benzodioksol (5, Apiol)
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): ÿ 5,95 (2H, s, H-2), 6,30 (1H, s, H-6), 3,31 (2H, d, 6,48 Hz, H-1 ), 5,94
(1H, m, H-2 ), 5,04 (2H, m, H-3 ), 3,88 (3H, s, 4-OMe), 3,85 (1H, s, 7-OMe).
13C-NMR (213,8 MHz, CDCl3): ÿ 135,3 (C-1), 101,8 (C-2), 139,0 (C-3), 136,5 (C-4), 126,0 (C-5), 108,4
(C-6), 139,3 (C-7), 34,3 (C-1 ), 137,6 (C-2 ), 115,6 (C-3 ), 60,4 (4-OMe), 57,1 (7-OMe).
Pada penelitian
Molekul 2020, ini, REVIEW
25, x UNTUK PEER 1 diisolasi pertama kali dari sumber alami, dan 2 diisolasi pertama kali dari
5 dari 18

P. pellucida. Spektrum 1 dibandingkan dengan nilai literatur 4 [34] karena mereka memiliki struktur
yang mirip, 3adengan CHpengecualian98.0 kelompok berbeda yang melekat Rumah pada C-4. Pada C-2a, posisi4a6-OCH3
6.30 (1H, 4a s) , 4 memilikiC gugus148.0
metoksil sedangkan 1 memiliki gugus hidroksil. Analisis NMR 2D
dilakukan5a C
untuk mengonfirmasi 142.5
struktur kimia 2.1H , 13C, DEPT , DEPT 90ÿ , DEPT 135ÿ , NYAMAN, NOESY,
45ÿ
6a CH 114.4
Data 1H
HSQC,dan dan 13C HMBCdari 2 sesuai
NMR ditunjukkan 6,53
dengan literatur,
pada
HMBC (1H, detik)
Tabel
yang
adalahmenegaskan
1, sementara
3,39 (3H, s)
3,57
korelasi dtk)C-1,
ditunjukkan
( 3H,COSY, pada2a, Gambar
3,84, 4a,
NOESY, 5a dan
3,86, 3,87, 2.
8-OMe CH3 5a- 3,91 (masing-masing 3H, dtk) C-8
OMe CH3 60,6 57,0 H-6a bahwa 2 adalah 9,9 -bisnorlignan, C-5a
5,7,8-trimetoksi-1-(2,4,5-trimetoksifenil)-1,2-dihidronaftalena
pachypostaudin B [35,36]. 56.2, atau
56.1 56,9, 56,4, H-6, 3a 4xOMe CH3
C-5, 7, 2a, 4a

Gambar 2. Korelasi Kunci COSY, NOESY, dan HMBC dari Pachypostaudin B (2). Gambar 2. Korelasi Kunci COSY, NOESY, dan HMBC dari Pachypostaudin B (2).

2.2. Uji Sitotoksisitas

Tes sitotoksisitas dilakukan sebelum tes estrogenik. Untuk ini, kami menggunakan metode WST-1.
Viabilitas sel (dalam %) dengan adanya fraksi, subfraksi, dan lima senyawa hasil isolasi dari ekstrak etil asetat
P. pellucida ditunjukkan pada Tabel 2. Ekstrak etil asetat menghasilkan
Machine Translated by Google

Molekul 2020, 25, 4914 5 dari 18

Tabel 1. Data 1H (600 MHz), 13C (150,9 MHz), DEPT, COSY, NOESY, dan HMBC NMR (CDCl3 ) dari pachypostaudin
B (2).

DEPT HSQC
Posisi Karbon NYAMAN NOESY HMBC
C/H 13C 1H

C-2, 3, 8, 9, 10, 1a,

1 CH 28.5 4,89 (1H, d, 8,11 Hz) H-2
2a, 6a
2 CH2 29.9 2,42/2,66 (2H, m) H-1 C-3, 4, 1a
3 CH 123.7 5,68 (1H, m) H-2 H-4 C-2, 10

4 6,82 (1H, dd, 3,19,

CH 121.3 H-2, 3 C-2
9,75 Hz)
5 C 151.7
6 CH 96.0 6,44 (1H, detik) Rumah C-5, 7, 8, 10
7 C 152,6
8 C 140,4
9 C 124.6
10 C 117.1
1a C 132.4
2a C 150,8
3a CH 98,0 6.30 (1H, detik) Rumah C-2a, 4a
4a C 148,0
5a C 142.5
6a CH 114.4 6,53 (1H, detik) C-1, 2a, 4a, 5a
8-OMe CH3 60.6 3,39 (3H, detik) C-8
5a-OMe CH3 57,0 3,57 (3H, dtk) H-6a C-5a
56,9, 56,4, 3,84, 3,86, 3,87, 3,91
4xOM CH3 H-6, 3a C-5, 7, 2a, 4a
56,2, 56,1 (masing-masing 3H, dtk)

2.2. Uji Sitotoksisitas

Tes sitotoksisitas dilakukan sebelum tes estrogenik. Untuk ini, kami menggunakan metode WST-1.
Viabilitas sel (dalam %) dengan adanya fraksi, subfraksi, dan lima senyawa hasil isolasi dari ekstrak
etil asetat P. pellucida ditunjukkan pada Tabel 2. Ekstrak etil asetat menghasilkan viabilitas sel (dalam
%) lebih dari 100% pada konsentrasi yang diuji [37]. Viabilitas sel tidak berbeda nyata dengan kontrol
kendaraan (p > 0,05). Semua sampel pada konsentrasi ini dianggap tidak beracun dan diharapkan
tidak mengganggu hasil efek proliferasi sampel dalam pengujian E-SCREEN.

Tabel 2. Hasil uji viabilitas sampel uji dari P. pellucida menggunakan uji proliferasi sel WST-1.

Viabilitas Sel (dalam %, Rata-rata ±

Kelompok Sampel
0,1 µg/mL SD) 1 µg/mL 10 µg/mL
Fraksi Metanol 97,15 ± 14,97 114,01 ± 48,88 118,99 ± 30,94
Fraksi Petroleum Eter 67,67 ± 8,09 72,33 ± 8.78 76,60 ± 12,25
Subfraksi 1 101,75 ± 15,31 104,48 ± 18,09 106,23 ± 17,42
Subfraksi 2 103,15 ± 52,06 104,41 ± 12,63 108,90 ± 23,77
Subfraksi 3 118,42 ± 6,28 ± 10,37 81,2097.23
± 9,80 118,66 ± 19,22 95,83 ± 12,79 87,17 ±
Subfraksi 4 0,17
Subfraksi 5 80,47 ± 21,69 91,55 ± 20,19 97,91 ± 29,11
Subfraksi 6 124,44 ± 23,11 106,25 ± 0,67 101,85 ± 47,25
Subfraksi 7 104,56 ± 12,10 107,05 ± 30,85 115,53 ± 18,68
Subfraksi 8 108,36 ± 0,87 109,53 ± 17,14 112,90 ± 33,80 111,34 ± 6,68 110,83 ± 98,07
Subfraksi 9 ± 27,05 6.07
Turunan dari Dillapiole 113,95 ± 18,36 107,08 ± 19,05 101,65 ± 19,26
Pachypostaudin B 105,43 ± 12,92 86,94 ± 8.93 82,06 ± 14,77
Pellusidin A 88,82 ± 2,65 107,92 ± 11,05 125,56 ± 23,10
Dillapiole 89,88 ± 19,04 105,00 ± 11,97 104,96 ± 4,49 116,88 ± 5,39 110,04 ± 33,57
Apiol 104,68 ± 23,58
Machine Translated bySubfraksi
Google 9 111.34 ±6.68 110,83 ± 6,07 98,07 ± 27,05
Turunan Molekul 113.95 ± 18.36 107.08 ± 19.05 101,65 ± 19,26
Dillapiole 105.43 ± 12,92 86,94 ± 8,93 82,06 ± 14,77
Pachypostaudin 88.82 ± 2,65 107,92 ± 11,05 125,56 ± 23,10 6 dari
B Pellucidin A 2020, 25, 18
4914 Dillapiole 89.88 ± 19,04 105.00 ± 11.97 104,96 ± 4,49
Apiol 2.3. 116.88 ± 5.39 110,04 ± 33,57 104,68 ± 23,58

Pengujian E-SCREEN 2.3.

Uji E-LAYAR
Uji E-SCREEN digunakan untuk menentukan aktivitas estrogenik sampel uji. Pengujian Pengujian E-SCREEN digunakan
untuk menentukan aktivitas estrogenik dari sampel uji. The menilai estrogenisitas bahan kimia berdasarkan efek
proliferatif estrogen pada uji target mereka menilai estrogenisitas bahan kimia berdasarkan efek proliferasi estrogen pada sel
mereka sebagai titik akhir. Uji kuantitatif ini membandingkan jumlah sel untuk sel target inokulasi yang serupa sebagai titik
akhir. Uji kuantitatif ini membandingkan jumlah sel untuk jumlah sel MCF-7/BUS yang serupa tanpa adanya estrogen (kontrol
negatif) dan dengan adanya jumlah inokulasi sel MCF-7/BUS tanpa adanya estrogen (kontrol negatif) dan dalam 17ÿ-
estradiol (kontrol positif) untuk berbagai konsentrasi bahan kimia yang diduga bersifat estrogenik. adanya 17ÿ-estradiol (kontrol
apakah
positif)
senyawa
untuk berbagai
yang diuji
konsentrasi
bersifat estrogenik.
bahan kimia yang diduga Efek estrogenik dinyatakan sebagai %RPE, yang menunjukkan

Efek
secaraestrogenik
estrogenik
secara
estrogenik
diisolasi. dinyatakan
kuantitatif
kuantitatif
daridari
fraksi
mirip
ekstrak
mirip
etil sebagai
dengan
asetat,
dengan
etil asetat
yang %RPE,
subfraksi,
yang
dan yang
diperoleh
diperoleh
merupakan
dan menunjukkan
dengan
senyawa
dengan
agonis
E2,
yang
E2, apakah
agonis
penuh
yaitu
diisolasi.
(RPE
(RPE senyawa
pengujian
ekstrak
==100%)
100%) tersebut
penuh
dan
[38].
[38]. menginduksi
fraksinya,
menginduksi
Gambar
Gambar subfraksi,respon
33menunjukkan
menunjukkan
respon dan proliferasi
proliferatif
senyawa
aktivitas
aktivitas
yang yang
yang

Gambar 3. Aktivitas estrogenik ekstrak etil asetat dan fraksi, subfraksi, dan isolasinya Gambar 3. Aktivitas estrogenik
ekstrak etil asetat dan fraksi, subfraksi, dan senyawanya dari P. pellucida diukur menggunakan uji E-SCREEN . Sel
diperlakukan dengan senyawa terisolasi dari P. pellucida diukur menggunakan uji E-SCREEN. Sel diberi perlakuan 1
µg/mL sampel selama 144 jam, dan efek proliferatif relatif terhadap sel dengan adanya E2 dengan 1 µg/mL sampel
selama 144 jam, dan efek proliferatif relatif terhadap sel dengan adanya ( 10ÿ9 M, 100%) kemudian diselidiki
menggunakan
sulforhodamine
setidaknya dua
uji sulforhodamine
percobaan
b (SRB). Data
duplikat
perbedaan
terpisah
tersebut
b (SRB).
atau
dengan
yang
sebagai
rangkap
Data
signifikan
duplikat
dinyatakan
rata-
tiga atau
untuk
secara
rata rangkap
E2
±setiap
SD
statistik
(10ÿ9
dari
kelompok.
tiga
M,
setidaknya
dibandingkan
100%)
untuk dinyatakan
setiap
kemudian
duadengan
grup
percobaan
diselidiki
sebagai
simbol
metanol
terpisah
**rata-rata
menggunakan
. Simbol
mewakili
dengan
±**SD
mewakili
dari
uji
perbedaan
Bonferroni;
yang
secara ** yang
signifikan
statistik
dengansignifikan
secara
dibandingkan
uji secara
statistik statistik
Kruskal–Wallis
dibandingkan
dengan dibandingkan
subfraksi
menggunakan
dengan dengan
1, dianalisis
subfraksi
penyesuaian fraksi
dengan uji metanol,
1, dianalisis
Bonferroni; ** fraksi,
Kruskal–Wallis
dan ## p dan
mewakili
<0,01, ## mewakili
menggunakan
#perbedaan
p <0,05, ## pperbedaan
yang
penyesuaian
<0,01.
signifikan
p
<0,01, # p <0,05, ## p <0,01.

Sampel
tinggi
tinggi memiliki
Sampel
daripada kekuatan
memiliki
kontrol aktivitas
kekuatan
pembawa estrogenik
aktivitas
(sel yang yang
estrogenik bervariasi
diperlakukan
yang dan
bervariasi
dengan memiliki
0,1%
dan DMSO),aktivitas
memiliki estrogenik
kecuali
aktivitas
untuk yang
estrogenik
aktivitasjauh
yang lebih
ekstrak
jauh lebih
etil
asetat
3, 4, dan 6daripada kontrol
(p <0,01). Efek pembawa ( sel(%RPE
agonis penuh diperlakukan
> 80%)dengan
diamati0,1%
untukDMSO), kecuali 2,
dan subfraksi untuk
3, 4,ekstrak
dan 6 (petil<0,01).
asetatEfek
dan subfraksi
agonis 2,
penuh (%RPE
dillapiole,
MCF-7/BUS
estrogenik
fraksi
[39]. >
rendah
dan 80%)
Jadi, diamati
subfraksi
(%RPE
pada untuk
konsentrasi
<25%). fraksi
1, sedangkan
Agonis
yang dan subfraksi
subfraksi
penuh
sama, 1, sedangkan
menunjukkan
efek
3, turunan
estrogenik
dari
kapasitassubfraksi
dillapiole,
dari sampel
yang 3, diklasifikasikan
turunan
pellucidin
lebih
lain tinggi
A dan dari
untuk dillapiole,
dillapiole,
menginduksi
sebagai pellucidin
menginduksi
efek A dan
proliferasi
agonisefeksel
parsial (%RPE
estrogenik dari dibandingkan
lebih tinggi 25% hingga 80%). Proses
ekstrak. pemisahan
Namun, menghasilkan
pemurnian beberapa
fraksi metanol fraksitidak
lebih lanjut dan subfraksi yang sampel
menghasilkan memilikidengan
efek

aktivitas yang lebih tinggi.

 Molekul 2020, 25, x UNTUK PEER REVIEW 7 dari 18

Machine Translated by Google

menginduksi efek estrogenik rendah (%RPE <25%). Agonis penuh menunjukkan kapasitas yang lebih
tinggi untuk menginduksi proliferasi sel MCF-7/BUS [39]. Jadi, pada konsentrasi yang sama, efek
estrogenik dari sampel lain diklasifikasikan sebagai efek agonis parsial (%RPE dari 25% hingga 80%). Itu
Molekul 2020, 25, 4914 7 dari 18
Proses pemisahan menghasilkan beberapa fraksi dan subfraksi yang memiliki efek estrogenik lebih tinggi
dibandingkan ekstrak. Namun, pemurnian fraksi metanol lebih lanjut tidak menghasilkan sampel dengan
aktivitas yang lebih
atau subfraksi tinggi. Senyawa-senyawa tersebut memiliki aktivitas yang lebih rendah daripada fraksi
aslinya.
Senyawa-senyawa
dillapiole
subfraksi
danmemiliki
aslinya.
dillapioleDalam
aktivitastersebut
dibandingkan memiliki
Dibandingkan
yang jauh
dengan
lebih
dengan aktivitas
fraksi
rendah (pyang
fraksi
metanol, lebih turunan
<0,01).
metanol, rendah
turunan daripada
dillapiole,
dillapiole,fraksi
pellucidin atau
pellucidin
A danA
Subfraksi 1 juga memiliki aktivitas yang lebih unggul dari senyawa ini, aktivitas yang
secara
Senyawa
senyawa
signifikan
polifenol
ini ( p lebih
<0,05
< 0,05
rendah
untuk
untukturunan
(pturunan
<0,01).
dillapiole
dillapiole
Subfraksi dan
dan
1 pjuga
p
<0,01
<0,01
memiliki
untuk
untuk
aktivitas
pellucidin
pellucidin
superior
AA dandandillapiole).
terhadap
dillapiole).
Polifenol yang terdeteksi pada ekstrak etil asetat P. pellucida mungkin bertanggung jawab
atas hasil ini karena, senyawa yang terdeteksi pada ekstrak etil asetat P. pellucida mungkin
bertanggung jawab atas hasil ini secara kimiawi, fitoestrogen adalah fitokimia fenolik atau
polifenol [40,41]. karena secara kimia fitoestrogen merupakan fitokimia fenolik atau polifenol
[40,41].
Kegiatan
ditunjukkanestrogenik
estrogenik
dosis dibandingkan.
pada
senyawa senyawa
Gambarsebagai dalam
4. Aktivitas
responsmenanggapi
estrogenik berbagai
terhadap cenderung
rentang dosis
dosis dibandingkan.
meningkat
yang luas
dengan Aktivitas
Hasilnya
peningkatan
Hasilnya
aktivitas
pellucidin ditunjukkan
semuaestrogenik
diisolasi,
senyawa
Akecuali
memiliki pada Gambar
pellucidin
yang
yang
aktivitas
diisolasi,
lebihA.
tinggi 4.meningkatkan
estrogenik
Secara Aktivitas
kecuali estrogenik
keseluruhan,
terendah.
pellucidin aktivitas
dosis
A.apiol cenderung
Secara
untuk
memiliki
estrogenikmeningkat
keseluruhan,
hampir
dari
lebih
semua
yangapiol
tinggidengan
lain,
senyawa
memiliki hampir
sedangkan
daripada
yang
yang lain, sedangkan pellucidin A memiliki aktivitas estrogenik paling rendah.

Gambar 4. Aktivitas estrogenik lima senyawa yang diisolasi dari ekstrak etil asetat P. pellucida Gambar 4.
Aktivitas estrogenik lima senyawa yang diisolasi dari ekstrak etil asetat P. menggunakan uji E-SCREEN. Sel
diperlakukan dengan senyawa dalam kisaran dosis 0,001–10 µg/mL pellucida menggunakan uji E-SCREEN.
Sel diperlakukan dengan senyawa dalam kisaran dosis selama 144 jam, dan efek proliferatif relatif pada sel
kemudian
relatif
standar.
dinyatakan
pada
Datadiselidiki
sel
sebagai menggunakan
dinyatakan
kemudianrata-rata
diselidiki
sebagai
± SD sulforhodamine
rata-rata
menggunakan b ( 0,001–10
dari uji±sulforhodamine
SD dari SRB),
setidaknya µg/mL
dengan
b (SRB), selama
dua10ÿ9 M E2144
percobaan
dengan 10ÿ9 jam,
sebagai
terpisah
M E2dan efekstandar.
kontrol
dengan
sebagai proliferatif
duplikat
kontrolData
** dibandingkan * ujistatistik * **
atau rangkap tiga
dengan
rangkap
kelompok
Kruskal-Wallis
untuk
kelompok
setiap
tiga
kendaraan:
kelompok.
untuk
kendaraan:
menggunakan
setiap
p Setidaknya
<0,05,
kelompok
p <0,05,
penyesuaian
** p mewakili
<dua
.p
Simbol
<0,01,
percobaan
Bonferroni.
perbedaan
* dianalisis
dan simbol
terpisah
dengan
Kruskal-Wallis
* dan
dengan
**
dibandingkan
0,01,
mewakili
duplikat
dianalisis
statistik
menggunakan
penyesuaianperbedaan
atau
dengan
dengan
Tes
Bonferroni.

Aktivitas
Aktivitas
dianggap
memiliki anti-estrogenik
anti-estrogenik
memiliki dari
antiestrogenisitas semua
antiestrogenisitas
dari semua
bila dapat senyawa
senyawa
bila juga
menghambat
dapatjuga ditentukan
menghambat
ditentukan
proliferasi (Gambar
proliferasi
(Gambar
sel yang5).5).
sel Sampel
diinduksi
Sampel
yang diinduksi
dengan
dianggap
oleh 17ÿ-estradiol, 17ÿ-estradiol, dibandingkan dengan efek 17ÿ-estradiol saja [39 ]. Hasil
penelitian
penelitian
estrogenik menunjukkan
menekanmenunjukkan
estradiol,
aktivitas bahwa
estrogenik
menunjukkan
bahwa dibandingkan
turunan
estradiol,
bahwa dengan
dillapiole
dan
ini menunjukkan
pellucidin efek 17ÿ-estradiol
dari dillapiole
A secara
bahwadan
signifikan
senyawa saja
pellucidin [39].
menekan
iniAdapat Hasil
secarabertindak
aktivitas
signifikan
sebagai
sebagai
estrogen
karena antagonis
antagonis
memblokir
anti-estrogen
ERER atau
pengikatan
atau memiliki
memblokir
memiliki 17ÿ-estradiol.
17ÿ-estradiol
pengikatan
efek antagonis
ke efek
dan antagonis.
17ÿ-estradiol
ERÿ17ÿ-estradiol.
memusuhi
ke ERÿHasil senyawa
sangat dapat
daninimemusuhi
sangat
relevan bertindak
relevan
karena
ekspresi
anti-
gen yang distimulasi estrogen. ekspresi gen yang distimulasi estrogen.

Mekanisme estrogenik senyawa dipelajari. Dalam penelitian ini, efek proliferatif dari masing-masing
agen estrogenik dibandingkan dengan efeknya bila digunakan dalam kombinasi dengan tamoxifen, agen
antagonis. Hasilnya (Gambar 6) menunjukkan bahwa tamoxifen menyebabkan penekanan yang signifikan
terhadap efek proliferatif estradiol dan senyawanya. Dalam hal ini, tamoxifen memberikan efek anti-
estrogeniknya . Hasil ini menunjukkan bahwa aktivitas estrogenik sampel yang diuji mungkin dimediasi
oleh mekanisme aksi yang sama seperti estradiol, yang terkait dengan tamoxifen. Ini menunjukkan
mekanisme yang bergantung pada ligan klasik.
Machine Translated by Google

Molekul UNTUK
Molekul 2020, 25, TINJAUAN
4914 2020, 25, x TEMAN 8 dari 18
8 dari 18

Gambar 5. Efek estrogenik dari senyawa yang diuji pada sel MCF-7/BUS dengan adanya 10ÿ9 M E2.
Sel diperlakukan dengan estradiol saja atau estradiol dalam kombinasi dengan 10 µg/mL sampel yang
diuji selama 144 jam, dan efek proliferatif relatif pada sel kemudian diselidiki menggunakan tes SRB.
Data dinyatakan sebagai rata-rata ± SD dari setidaknya dua percobaan terpisah dalam rangkap dua atau
rangkap tiga untuk setiap kelompok. Simbol * dan **kelompok
mewakiliestradiol:
perbedaan p <0,01,
statistikdianalisis
dibandingkan
dengan
dengan
uji
* **
p <0,05,penyesuaian Bonferroni.
Kruskal-Wallis menggunakan

Mekanisme estrogenik senyawa dipelajari. Dalam penelitian ini, efek proliferatif dari
masing-masing agen estrogenik dibandingkan dengan efeknya bila digunakan dalam kombinasi
dengan tamoxifen, agen antagonis. Hasil (Gambar 6) menunjukkan bahwa tamoxifen
menyebabkan Gambar 5. Efek estrogenik yang signifikan dari senyawa yang diuji pada sel
MCF-7/BUS
Data
senyawanya.
yang
selama Sel
kombinasi
estrogeniknya.
diuji
144pada
jam,
Dalamdengan
diperlakukan
sel
dengan
danMCF-7/BUS
Hasil
hal
efek
10 adanya
ini,
inidengan 10ÿ9
proliferatif
µg/mL
sel
menunjukkan
tamoxifen
dengan
sampel M E2
estradiol
relatif
adanya
yang . menekan
saja
diobati
bahwa
pada atau
diuji
10ÿ9
sel
dengan
aktivitas
Gambarefek
kemudian
E2. proliferatif
Mestradiol dalam
estradiol
estrogenik
mengerahkan
5.diselidiki
Efeksaja estradiol
kombinasi
estrogenik
dari
atau
menggunakan
sampel
efek dan
dengan
estradiol
anti-
dariyang
senyawa
dalam
tes
diuji
SRB.
Ini
yang 10
duaµg/mL
dinyatakan
atau
terkait yang
rangkap
sebagai
dengan diuji dapat
rata-rata dimediasi
tiga untuk± sampel
tamoxifen. oleh
SD dariselama mekanisme
setidaknya144 dua aksi yang
jam,percobaan sama seperti
dan efek proliferatif
terpisah dalam estradiol,
relatif rangkap
pada sel
kemudian
Simbol
perbedaan
rata-rata pdiselidiki
* ±dan
<0,05,statistik
** SD **dari
<0,01, menggunakan
menunjukkan
dibandingkan
dianalisis
setidaknya dengan
dengan SRB
mekanisme
Bonferroni.
dua percobaan
uji masing-masing
kelompokyang bergantung
Kruskal-Wallis
rangkapterpisah
estradiol:kelompok.
tiga untuk pada
menggunakan
dalam
tes.setiap
Data ligan
rangkap klasik.
kelompok.
dinyatakan mewakili
penyesuaian
dua atauSimbol
sebagai
p *
*dan ** mewakili perbedaan statistik dibandingkan dengan kelompok estradiol: p <0,01,
dianalisis dengan uji Kruskal-Wallis menggunakan penyesuaian Bonferroni.
* **
p <0,05,

Mekanisme estrogenik senyawa dipelajari. Dalam penelitian ini, efek proliferatif dari masing-
masing agen estrogenik dibandingkan dengan efeknya bila digunakan dalam kombinasi dengan
tamoxifen, agen antagonis. Hasilnya (Gambar 6) menunjukkan bahwa tamoxifen menyebabkan
penekanan yang signifikan terhadap efek proliferatif estradiol dan senyawanya. Dalam hal ini,
tamoxifen memberikan efek anti-estrogeniknya. Hasil ini menunjukkan bahwa aktivitas estrogenik
sampel yang diuji mungkin dimediasi oleh mekanisme aksi yang sama seperti estradiol, yang terkait
dengan tamoxifen. Ini menunjukkan mekanisme yang bergantung pada ligan klasik.

Gambar 6. Efek estrogenik estradiol dan senyawa yang diuji dengan adanya
10ÿ6 M tamoxifen Gambar 6. Efek estrogenik estradiol dan senyawa yang diuji
dengan adanya 10ÿ6 M pada sel MCF-7/BUS. Sel diperlakukan dengan estradiol
dan sampel sendiri atau dalam kombinasi dengan tamoxifen pada sel MCF-7/
BUS. Sel diperlakukan dengan estradiol dan sampel sendiri atau dalam tamoxifen
selama 144 jam, dan kemudian efek proliferatif relatif pada sel diselidiki
menggunakan kombinasi SRB dengan tamoxifen selama 144 jam, dan kemudian
efek proliferatif relatif pada sel diuji. Data dinyatakan sebagai rata-rata ± SD dari
setidaknya dua percobaan terpisah dalam rangkap dua atau diselidiki
menggunakan tes SRB. Data dinyatakan sebagai rata-rata ± SD dari setidaknya
dua
rangkap
pengujian
rangkap
dua
senyawa
satu
tiga
atau
batang
terpisah
rangkap
tunggal
menunjukkan
untuk
tiga
dalam
untuk
setiap
isolasi
kombinasinya
setiap
kelompok.
sementara
kelompok.
Bilah
dengan
percobaan
Bilah
hitam
dantamoxifen.
hitam
**
menunjukkan
mewakili
putih
menunjukkan
dalam
Simbol
senyawa
*
perbedaan statistik dalam isolasi sementara bilah putih menunjukkan
dengan tamoxifen.
kombinasinya
dianalisis
Simbol * dibandingkan
dengan uji-t sampel
denganindependen
efek estrogenik
atau sampel
uji Mann-Whitney
saja: * p <0,05,
U. ** p <0,01,

2.4. Docking Molekuler

Docking molekuler digunakan untuk mengidentifikasi interaksi senyawa yang diisolasi dengan ERÿ
dan ERÿ. Pada pengujian ini, energi ikat dan profil ikatan hidrogen senyawa yang diisolasi dengan
estradiol, suatu ligan alami, dianalisis dan dibandingkan.
Gambar
Molecular
Efek
afinitas 6. kedari
estrogenik
docking
pengikatan ERterhadap
mengungkapkan
estradioltamoxifen
dan senyawabahwa
padayang
sel
kelimaMCF-7/BUS.
diujisenyawa
dengan tersebut
adanya
Sel diperlakukan
10ÿ6
menunjukkan
M
dengan
dan
pengikatanestradiol
kemudian senyawa dan sampel
efek proliferatif
lebih rendahsaja atau di
relatifdaripada kedua
pada selkombinasireseptor
adalah estradiol. (Tabel
dengan Semua 3). Namun,
tamoxifensenyawaenergi
selama memiliki
144 jam,
afinitas yang sebanding terhadap kedua reseptor, kecuali senyawa 2 yang diselidiki
menggunakan
Data uji SRB.
dinyatakan sebagai rata-rata ± SD dari setidaknya dua terpisah dan 3, yang lebih disukai mengikat ERÿ. Senyawa yang diisolasi
diamati mengikat berbagai percobaan dalam rangkap dua atau rangkap tiga untuk masing-masing kelompok. Bilah hitam menunjukkan

pengujian senyawa tunggal dalam isolasi sementara bilah putih menunjukkan kombinasinya dengan tamoxifen. Simbol *
Machine Translated by Google

Molekul 2020, 25, 4914 9 dari 18

residu asam amino, terutama di ERÿ. Secara keseluruhan, senyawa 2 memiliki energi ikat dan kemiripan
residu asam amino yang paling tinggi dibandingkan dengan senyawa lainnya. Data penambatan molekuler
juga didukung oleh visualisasi residu asam amino di tempat pengikatan (Gambar S10 dan S11, Bahan
Pelengkap).

Tabel 3. Data docking molekuler pengikatan estradiol dan lima senyawa P. pellucida yang diisolasi
ke reseptor estrogen.

Senyawa Ikatan Hidrogen (ER ÿ) Ikatan Hidrogen (ER ÿ)

ÿG Ikatan Asam amino H-Bond ÿG Ikatan Asam amino H-Bond
(kkal/mol) Residu Jarak (Å) (kkal/mol) Residu Jarak (Å)

17ÿ-estradiol AG 394 2.26 AG 346 2.05

ÿ9,55 ÿ9,55
DIA 524 2.24 DIA 475 2.16
ÿ5.45 - - ÿ5.29 LEU 298 2,09
Turunan dari Dillapiole
Pachypostaudin B HIS-475 1,91
ÿ8.17 HIS-524 3.02 ÿ7.03
LEU-476 2,74
Pellusidin A ÿ8.20 HIS-524 3.15 ÿ7.65 - -
ÿ5.14 - - ÿ5.26 LEU 476 3.09
Dillapiole
Apiol ÿ5.58 ARG-394 3.01 ÿ5.44 AG 346 2.11

3. Diskusi

Dalam penelitian ini, aktivitas estrogenik ekstrak etil asetat P. pellucida dan senyawanya diselidiki.
Ekstrak ini dianggap menarik karena menghasilkan efek agonis parsial (%RPE 25%–80%) pada penelitian
kami sebelumnya.
Obat SERM juga diketahui bertindak sebagai agonis reseptor estrogen parsial untuk mempertahankan
kepadatan tulang selama pengobatan osteoporosis sekaligus bertindak sebagai antagonis reseptor estrogen
pada jaringan payudara untuk pencegahan kanker payudara [42]. Obat ini dapat bekerja secara selektif dan
juga berperan sebagai antagonis ketika agonis penuh hadir. Agen ini dapat memblokir atau merangsang
ekspresi gen tertentu [43,44]. Selain bertindak sebagai agonis parsial, fitoestrogen juga dapat bertindak sebagai
agonis dengan aktivitas estrogenik rendah atau antagonis untuk ER, menginduksi ekspresi produk gen yang
responsif terhadap estrogen. Ketika bekerja pada reseptor estrogen, mereka berperilaku berbeda dari estrogen
dan bertindak seperti SERM [45-48].
Ekstrak biasanya mengandung banyak senyawa yang mungkin berinteraksi satu sama lain untuk
menghasilkan efek yang diamati. Dalam penelitian ini, ekstrak etil asetat dipisahkan dan dimurnikan di
bawah bimbingan bioassay E-SCREEN untuk mengisolasi beberapa senyawa dengan aktivitas estrogenik
potensial. Kemudian, aktivitas estrogenik dari ekstrak etil asetat dan fraksi metanol dan petroleum eternya,
subfraksi (1–9), dan lima senyawa yang diisolasi dibandingkan.
Pada penelitian ini, senyawa 1, turunan baru dillapiole (6-alil-5-metoksi-1,3-benzodioxol-4-ol), dan 2,
pachypostaudin B, diisolasi dari P. pellucida untuk pertama kalinya. Sebelumnya, pachypostaudin B
diisolasi dari kulit kayu Pachypodanthium staudlii Engl. dan Diels dan Pachypodanthium membatasi Engl.
dan Diels [35,49]. Senyawa tersebut dianggap sebagai penanda kemotaksonomi untuk keluarga
Annonaceae, mengingat kejadiannya yang unik [32]. Tidak ada aktivitas yang terkait dengan senyawa ini telah dilaporkan.
Meskipun senyawa 2 telah dilaporkan sebagai agen antiviral terhadap polio, tidak ada data yang memadai untuk
mendukung pernyataan ini [29,35].
Isolasi senyawa lain (3-5) telah dilaporkan dalam penelitian sebelumnya. Pellucidin A dan dillapiole
diisolasi dari ekstrak kloroform P. pellucida dan apiol diisolasi dari fraksi netral yang larut dalam eter
[34,50]. Pellucidin A dari P. pellucida dilaporkan memiliki efek antimutagenik dan antijamur terhadap
Trichophyton mentagrophytes [34]. Dillapiole memiliki banyak efek yang dilaporkan; telah ditemukan
bertindak sebagai inhibitor sitokrom P450 3A4, agen antibakteri, insektisida, agen antijamur, dan agen
antiinflamasi selain aktivitas adduksi DNA [51-57].
Dillapiole yang diisolasi dari P. pellucida dilaporkan memiliki efek gastroprotektif [58]. Apiol ditunjukkan
memiliki efek acaricidal [59], efek adduksi DNA [57], dan anti-proliferatif
Machine Translated by Google

Molekul 2020, 25, 4914 10 dari 18

efek [60]. Efek anti-proliferasi apiol yang diisolasi dari Athamanta sicula L. dilaporkan terhadap K-562
(leukemia myelogenous kronis manusia), NCI-H460 (tumor paru-paru manusia), dan garis sel MCF-7.
Apiol dilaporkan memiliki penghambatan 100% terhadap garis sel MCF-7 pada konsentrasi 100 µg/mL dengan
IC50 sebesar 36 µg/mL dalam studi ini [57,60]. Dengan demikian, penelitian ini adalah laporan pertama dari
aktivitas estrogenik dari senyawa yang diisolasi ini (1-5).
Fraksi metanol memiliki aktivitas estrogenik tertinggi di antara sampel yang diuji. Aktivitas estrogenik
yang lebih tinggi dari fraksi metanol relatif terhadap fraksi petroleum eter menunjukkan bahwa aktivitas
estrogenik sebagian besar disebabkan oleh senyawa polar-semipolar. Temuan ini sesuai dengan penelitian
sebelumnya [61]. Bahkan agen anti-estrogenik seperti tamoxifen harus menjalani bioaktivasi menjadi
hidroksitamoksifen, yang lebih polar, untuk memiliki afinitas tinggi terhadap reseptor estrogen [62].
Semua senyawa memiliki aktivitas estrogenik yang lebih rendah daripada fraksi dan subfraksi aslinya.
Temuan ini menunjukkan bahwa aktivitas estrogenik fraksi dan subfraksi, atau bahkan ekstrak, mungkin
dihasilkan oleh interaksi antara senyawa di dalamnya.
Seperti disebutkan di bagian hasil, semua senyawa yang diisolasi diklasifikasikan sebagai lignan.
Selain isoflavon, lignan merupakan salah satu kelompok utama senyawa fitoestrogen.
Lignan, termasuk enterolakton dan enterodiol, menunjukkan aktivitas estrogenik yang lemah [46,63]. Sebuah
penelitian sebelumnya melaporkan keberhasilan isolasi satu senyawa lignan dari P. pellucida yang memiliki
aktivitas estrogenik [64]. Senyawa tipe lignan mungkin sangat berkontribusi pada aktivitas estrogenik yang
diamati untuk ekstrak etil asetat P. pellucida.
Senyawa yang diisolasi dalam penelitian ini menunjukkan profil aktivitas estrogenik yang berbeda. Apiol
memiliki aktivitas estrogenik tertinggi, sedangkan pellucidin A memiliki aktivitas terendah. Aktivitas estrogenik
cenderung meningkat dengan peningkatan dosis, kecuali untuk pellucidin A yang aktivitasnya mulai menurun
pada dosis 10 µg/mL. Hanya turunan dari dillapiole dan pellucidin A yang memberikan efek anti-estrogenik yang signifikan.
Kehadiran aktivitas estrogenik dan anti-estrogenik didukung oleh data docking molekuler. Data
menunjukkan bahwa semua senyawa memiliki afinitas yang mengikat kedua ER.
ER hadir di berbagai organ dalam tubuh. Aktivitas ERÿ dan ERÿ diketahui bersifat antagonis satu
sama lain di banyak jaringan. Aktivasi ERÿ meningkatkan proliferasi dan kelangsungan hidup sel,
sedangkan ERÿ menghasilkan efek protektif atau anti-proliferasi dan pro-apoptosis pada prostat dan
payudara [3,4,65]. Dengan cara yang sama, efek anti-proliferatif juga ditemukan diberikan oleh ERÿ di
otak, usus besar, dan paru-paru [66-71]. Di dalam tulang, estrogen dapat menginduksi apoptosis
osteoklas hanya melalui ERÿ [72,73].
Aktivitas estrogenik senyawa uji mungkin dimediasi oleh mekanisme yang sama seperti estradiol
karena menurun dengan estradiol bila dikombinasikan dengan tamoxifen. Tamoxifen bertindak sebagai
agen anti-estrogen di payudara karena penghambatan kompetitifnya terhadap estrogen, perekrutan ko-
represor, dan penghambatan fungsi aktivasi konstitutif-2 (AF-2). AF-2 adalah domain aktivasi non-asam
yang terletak di domain pengikat ligan estrogen dan memiliki peran dalam memediasi mekanisme estrogen
yang bergantung pada ligan [74-76]. Tamoxifen diketahui dapat mencegah kanker payudara dengan
menstimulasi estrogen melalui mekanisme genomik dan non-genomik [77,78]. Oleh karena itu, mekanisme
aksi sampel mungkin terkait dengan mekanisme tersebut, terutama mekanisme yang bergantung pada
ligan klasik.
Secara keseluruhan, efek agonis parsial dari ekstrak etil asetat mungkin dihasilkan oleh interaksi
senyawa. Senyawa tersebut mungkin bekerja secara individual, sinergis, atau antagonis atau seperti yang
dijelaskan dalam penelitian lain [79,80]. Untuk mengonfirmasi bahwa mekanisme aksi senyawa terjadi
melalui mekanisme yang bergantung pada ligan klasik, kemampuan pengikatan senyawa ke ER
dikarakterisasi menggunakan penambatan molekuler. Beberapa senyawa memiliki afinitas pengikatan
terhadap residu asam amino yang sama atau berbeda. Misalnya, 3 dan 5 memiliki berbagai jenis residu
asam amino yang berikatan dengan Erÿ, menunjukkan adanya aksi individu atau sinergis. Sebaliknya, 2
dan 3 memiliki energi pengikatan yang serupa, residu asam amino untuk pengikatan, dan jarak ikatan-H,
menunjukkan kemungkinan bahwa mereka saling memusuhi atau bahkan estrogen. Kemungkinan ini perlu diselidiki lebih lan
Machine Translated by Google

Molekul 2020, 25, 4914 11 dari 18

Aktivitas anti-estrogenik yang tinggi dari pellucidin A mungkin juga dimediasi oleh mekanisme selain
mekanisme yang bergantung pada ligan klasik. Ini dipertimbangkan mengingat afinitas pengikatannya yang rendah
terhadap ERÿ . Senyawa ini mungkin dapat memblokir serapan nuklir dari reseptor dan kemudian menghambat
bolak-balik nukleositoplasmanya. Dalam hal ini, agen anti-estrogenik dapat berikatan dengan ER untuk membentuk
kompleks dan kemudian berikatan dengan elemen respons estrogen (ERE), yang menyebabkan inaktivasi unit
transkripsi [81]. Efek ini lebih kuat untuk dosis senyawa yang lebih tinggi, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 4.
Pada penelitian ini, senyawa yang diisolasi dari P. pellucida ditemukan memiliki profil estrogenik yang
berbeda. Efeknya pada osteoporosis harus dinilai dalam penelitian selanjutnya untuk menentukan apakah mereka
juga menunjukkan aktivitas anti-osteoporosis yang baik seperti yang diharapkan dari agen dengan aktivitas estrogenik.
Agen estrogenik diketahui memiliki efek pada osteoklas, osteosit, dan osteoblas, masing -masing menyebabkan
penurunan resorpsi tulang, penghambatan remodeling tulang, dan pemeliharaan pembentukan tulang [15].
Keamanan senyawa juga harus diperiksa karena aktivitas estrogenik dapat merusak tidak hanya organ payudara
dan tulang tetapi juga organ lain yang responsif terhadap estrogen.

4. Bahan dan Metode

4.1. Instrumen dan Bahan

Kromatografi kolom dilakukan pada silika (Si) gel 60 (230–400 mesh, Merck, Darmstadt,
Jerman), LiChroprep RP-18 (40–63 µm, Merck, Kenilworth, NJ, USA), Sephadex LH-20 (25– 100
µm, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), dan kolom Lobar, sedangkan kromatografi lapis tipis
(TLC) dilakukan pada pelat silika gel 60 F254 pralapis (Merck) dan pelat RP-18 F254S (Merck ).
Eksperimen resonansi magnetik nuklir (NMR) dilakukan pada spektrometer Bruker AVANCE III
HD 850, AVANCE III 600, dan AscendTM 400 dengan rangkaian pulsa biasa.
Tanaman P. pellucida (liar) dikoleksi dari Cagak dan Ciater, Provinsi Jawa Barat, Indonesia, pada bulan
Maret–April 2016. Tanaman tersebut diautentikasi oleh ahli botani di Herbarium Bandungense, Institut Teknologi
Bandung, Indonesia, dengan nomor dokumen 705 /I1.CO2.2/PL/2016. Sebagai pelarut ekstraksi, n-heksana dan
etil asetat disediakan oleh CV Fadillah (Bandung Kulon, Indonesia). Fetal bovine serum (FBS) dibeli dari HyClone
(Logan, UT, USA). Dulbecco yang dimodifikasi Eagle's Medium (DMEM) dan trypsin-EDTA dibeli dari Invitrogen
(Carlsbad, CA, USA). Reagen WST-1 dibeli dari Roche, Mannheim, Jerman. Penisilin dan streptomisin diperoleh
dari GibcoBRL (Grand Island, NY, USA). Dimethyl sulfoxide (DMSO), quercetin, stigmasterol, Na2CO3, 17ÿ-
estradiol, dan tamoxifen dibeli dari Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).

4.2. Proses Ekstraksi

Ekstrak etil asetat yang digunakan dalam penelitian ini dibuat dengan teknik maserasi berurutan selama 3
× 24 jam setelah ekstraksi 500 g tanaman kering dengan n-heksana. Residu ekstrak n-heksana dikeringkan dan
diekstraksi dengan 10 L etil asetat. Filtrat ditampung dan diuapkan dengan menggunakan rotary evaporator.

4.3. Proses Isolasi

Pada penelitian ini berhasil diisolasi 5 senyawa dari ekstrak etil asetat P. pellucida.
Dua di antaranya adalah senyawa yang baru diisolasi dari tanaman ini. Kami menggunakan beberapa metode
untuk mengisolasi senyawa ini. Senyawa-senyawa tersebut diberi nama sesuai urutan penyelesaian proses isolasi.
Proses isolasi dimulai dengan fraksinasi ekstrak etil asetat (6 g) menggunakan metanol 70% dan petroleum
eter melalui metode kromatografi cair-cair. Dua fraksi diperoleh dari proses ini. Fraksi metanol (1,475 g)
selanjutnya difraksinasi menggunakan kolom Si gel dengan 100% n-heksana, n-heksana, dan etil asetat (7:3), n-
heksana dan etil asetat (1:1), n-heksana dan etil asetat (3:7), 100% etil asetat, etil asetat dan etanol (1:1), dan
etanol 100% sebagai fase gerak, berturut-turut. Berdasarkan profil TLC, subfraksi dipisahkan atau digabungkan
menjadi 9 subfraksi: F1 (31,3 mg), F2 (97,6 mg), F3 (55,2 mg), F4 (67,3 mg), F5 (72,9 mg), F6 (37,9 mg). mg),
Machine Translated by Google

Molekul 2020, 25, 4914 12 dari 18

F7 (72,6 mg), F8 (40,5 mg), dan F9 (471,1 mg). Kami memutuskan untuk menggabungkan F1 dan F2 sesuai
dengan hasil uji aktivitas dan profil TLC serupa. Fraksi gabungan ini dipisahkan lebih lanjut menggunakan
kolom RP-C18 dengan metanol 70%–100% sebagai fase gerak. Dari proses ini diperoleh 20 subfraksi .
Menurut profil TLC, kami menggabungkan beberapa fraksi dengan karakteristik unik dan mencoba mengisolasi
senyawa potensial.
Gabungan subfraksi F6 dan F7, dengan berat total 10,5 mg, difraksinasi menggunakan kolom Lobar
dengan n-heksana, metilen klorida, dan metanol dengan perbandingan 10:10:0,3 sebagai fase gerak.
Subfraksi ke-3 dipisahkan lebih lanjut menggunakan kolom Sephadex LH-20 dengan metanol sebagai fase
gerak. Subfraksi ke-3 dari proses tersebut digunakan untuk mengisolasi senyawa 1 (2,4 mg).
F10 dipisahkan menggunakan kolom Sephadex LH-20 dengan fase gerak yang terdiri dari metilen
klorida dan metanol dalam rasio yang sama. Senyawa 2 (0,8 mg) diperoleh melalui kristalisasi subfraksi ke-3
menggunakan metanol sebagai pelarut.
Subfraksi gabungan F11 (5,6 mg) dan F12 (4,0 mg) dipisahkan menggunakan kolom Sephadex LH-20
dengan metanol sebagai fase gerak. Fraksi ke-4 dari proses ini digunakan untuk mengisolasi senyawa 3 (3,4
mg) melalui kristalisasi dengan metanol sebagai pelarut.
Senyawa 4 dan 5 diisolasi dari ekstrak etil asetat (8,67 g). Ekstrak etil asetat difraksinasi menggunakan
kolom Si gel dengan beberapa kombinasi fase gerak: 100% n-heksana; n-heksana dan etil asetat (10:1); n-
heksana dan etil asetat (1:1); n-heksana, etil asetat, dan metanol (10:10:1); n-heksana, etil asetat, metanol
(10:10:5); etil asetat, metanol, air (10:5:3); etil asetat, metanol, air (10:10:7); metilen klorida dan metanol (3:1);
metilen klorida dan metanol (1:1); dan kemudian 100% metanol, berturut-turut.

Berdasarkan profil TLC, fraksi dipisahkan atau digabungkan, menghasilkan 12 fraksi: F1 (68,9
mg), F2 (9 mg), F3 (3,6 mg), F4 (522,5 mg), F5 (954,6 mg), F6 (493,1 mg), F8 (771,7 mg), F9 (751,2
mg), F10 (1,016 g), F11 (2,051 g), dan F12 (274,3 mg). Fraksi 4 dipilih untuk fraksinasi lebih lanjut.
Fraksi ini dipisahkan menggunakan kromatografi kolom pada RP-C18. Pemurnian lebih lanjut subfraksi kedua
dari proses pemisahan ini dilakukan pada instrumen HPLC preparatif daur ulang untuk mendapatkan senyawa
4 (61,2 mg) dan 5 (4,4 mg). Prosedur isolasi lengkap ditunjukkan pada Gambar Bahan Pelengkap S1.

Data dari 1H dan 13C-NMR digunakan untuk mendukung identifikasi senyawa yang diisolasi
(Gambar S2-S9, Bahan Pelengkap). Spektra 1H dan 13C NMR masing-masing tercatat pada 400
dan 213,8/100 MHz dalam CDCl3, kecuali untuk senyawa spektra 2 yang tercatat pada 600 dan
150,9 MHz. Senyawa 2 dianggap sebagai senyawa yang menarik, sehingga dianalisis lebih lanjut
menggunakan 2D NMR meliputi Distortionless Enhancement by Polarization Transfer (DEPT),
Correlation Spectroscopy (COSY), Nuclear Overhauser Effect Spectroscopy (NOESY) dan
Heteronuclear Multiple Bond Correlation Spectroscopy (HMBC). ChemSpider® digunakan untuk
mencari informasi tentang senyawa.

4.4. Garis Sel

Sel kanker payudara manusia MCF-7/BUS sensitif estrogen yang digunakan dalam uji E-SCREEN
disediakan oleh Dr. Soto (Universitas Tufts, Boston, MA, AS). Phenol Red DMEM yang disuplementasi
dengan serum janin sapi 5%, penisilin (100 unit/mL), dan streptomisin (100 µg/mL) digunakan sebagai media
pertumbuhan. Sel-sel diinkubasi dalam inkubator yang dilembabkan pada suhu 37 ÿC dan 5% CO2/95% udara.

4.5. Uji Sitotoksisitas

Sitotoksisitas dievaluasi menggunakan uji proliferasi sel WST-1 seperti yang dijelaskan sebelumnya [82].
Konsentrasi sampel, terutama ekstrak dan fraksi, sebagai µg/mL ditentukan dengan mempertimbangkan
seluruh kandungan sampel. Pertama, larutan stok yang mengandung 10.000 µg/mL dari setiap
sampel disiapkan dengan menangguhkan sejumlah sampel tertentu dalam volume aseton yang
sesuai sebagai pembawa, seperti 2 mg sampel dalam 200 µL aseton, diikuti dengan pencampuran
vorteks. Dari larutan stok, diencerkan secara serial dengan konsentrasi 10 µg/mL, 100 µg/mL, dan 1000 µg/mL
Machine Translated by Google

Molekul 2020, 25, 4914 13 dari 18

disiapkan (larutan A). Kemudian, air suling digunakan untuk membuat larutan lain yang diencerkan secara
berurutan dengan konsentrasi 1 µg/mL, 10 µg/mL, dan 100 µg/mL dari larutan A (larutan B dengan aseton 10%).
Akhirnya, larutan encer berseri dengan konsentrasi 0,1 µg/mL, 1 µg/mL, dan 10 µg mL dibuat dengan
mencampurkan larutan B dan media untuk menghasilkan larutan uji, yang mengandung aseton 1%.
Konsentrasi aseton yang digunakan dalam penelitian ini dianggap tidak beracun bagi sel berdasarkan
studi pendahuluan kami yang didukung oleh literatur lain [83,84]. Pada akhir masa inkubasi tambahan,
semua media dipindahkan dan disentrifugasi pada 8000 rpm selama 4 menit pada suhu kamar.
Absorbansi 80 µL supernatan diukur dengan menggunakan pembaca pelat mikro VERSAmax (Molecular
Devices, Sunnyvale, CA, USA) pada 440 nm versus referensi 690 nm. Viabilitas sel (dalam%) dihitung
menggunakan rumus berikut: (%) = [(penyerapan sampel)/(penyerapan kontrol kendaraan) × 100].

4.6. Uji E-LAYAR

Uji E-SCREEN dilakukan seperti yang dijelaskan sebelumnya [85]. Untuk menentukan aktivitas
estrogenik, sampel (ekstrak, fraksi, subfraksi, dan senyawa yang diisolasi) ditambahkan ke media
percobaan pada konsentrasi media tertentu. Estradiol (10ÿ9 M, E2) ditambahkan ke 1 µg/mL sampel
untuk menentukan aktivitas antiestrogenik. Selanjutnya, untuk mengetahui mekanisme kerja sampel,
sampel digabungkan dengan tamoxifen 10ÿ6 M. Absorbansi diukur menggunakan pembaca pelat mikro
VERSAmax (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA).
Tingkat aktivitas estrogenik dinyatakan sebagai %RPE (efek proliferatif relatif), yang dihitung sebagai
berikut: %RPE = [(S ÿ 1)/(E ÿ 1)] × 100, di mana S = proliferasi sampel dan E = proliferasi kontrol positif
(10ÿ10 M E2). Excel (Microsoft, New York, NY, USA) digunakan untuk menghitung parameter ini
berdasarkan rumus dan fungsi yang ditunjukkan.

4.7. Tes Docking Molekuler

Target aktivitas estrogenik senyawa adalah orientasi ligan yang terikat pada situs aktif reseptor
estrogen alfa (ERÿ) dan beta (ERÿ), yang ditentukan dengan menggunakan docking otomatis. File
struktur protein diambil dari PDB (www.rcsb.org/pdb) (PDB ID: 1GWR untuk ERÿ dengan resolusi 2,4 Å
dan 3OLS untuk ERÿ dengan resolusi 2,2 Å). Discovery Studio digunakan untuk mengedit protein dengan
menghilangkan heteroatom dan molekul air. Studi ini menggunakan Avogadro untuk mengoptimalkan
ligan secara geometris. Autodock Tools 4.0 digunakan, dan metode algoritma genetika Lamarckian
diterapkan. Autodock4 dan Autogrid4 digunakan untuk menghitung parameter docking. Peta grid
dipusatkan pada residu protein tertentu, yang dihasilkan dengan Autogrid. Semua torsi dibiarkan berputar
selama proses docking.

4.8. Analisis data

Perangkat lunak SPSS versi 22.0 untuk Windows digunakan untuk melakukan analisis statistik.
Analisis statistik dilakukan dengan analisis varians satu arah (ANOVA) atau uji-t Student untuk data yang
terdistribusi normal. Data yang tidak terdistribusi normal dianalisis menggunakan uji Kruskal-Wallis dengan
penyesuaian Bonferroni atau uji Mann-Whitney U. Nilai sampel dianggap signifikan pada p <0,05 atau p
<0,01. Data dari setiap pengujian dinyatakan sebagai rata-rata ± standar deviasi (SD).

5. Kesimpulan

Kesimpulannya, ekstrak etil asetat dari P. pellucida dapat menghasilkan efek agonis parsial melalui
interaksi senyawa penyusunnya. Senyawa yang diisolasi ditentukan untuk mengerahkan efek
estrogeniknya melalui afinitas pengikatannya terhadap ER dalam mekanisme yang bergantung pada ligan
klasik. Di antara senyawa yang diisolasi, senyawa 2, pachypostaudin B, yang pertama kali diisolasi dari
P. pellucida, tampaknya memiliki potensi yang menjanjikan sebagai agen estrogenik, terutama untuk
pengobatan osteoporosis. Studi selanjutnya juga diperlukan untuk lebih menentukan kemanjuran dan
keamanan senyawa yang diisolasi pada jaringan target di mana ER hadir.
Machine Translated by Google

Molekul 2020, 25, 4914 14 dari 18

Bahan Tambahan: Berikut ini tersedia secara online. Data NMR senyawa tersedia sebagai informasi pendukung.

Kontribusi Penulis: Konseptualisasi, IGAAK, JHK, KHC, dan IKA; metodologi, IGAAK, IJB, JHK, KHC; perangkat lunak, IGAAK; validasi,
IGAAK, IJB, dan JHK; analisis formal, IGAAK; investigasi, IGAAK, IJB, MI, JHK, dan IKA; sumber daya, JHK, KHC, dan IKA; kurasi data, IGAAK,
IJB, dan JHK; penulisan—penyusunan draf asli, IGAAK, CR, MI, dan IKA; penulisan—review dan editing, IGAAK, CR, MI, dan IKA; visualisasi,
IGAAK; supervisi, CR, MI, JHK, KHC, dan IKA; administrasi proyek, IGAAK, JHK, KHC, dan IKA; akuisisi pendanaan, JHK, KHC, dan IKA
Semua penulis telah membaca dan menyetujui versi naskah yang diterbitkan.

Pendanaan: Penelitian ini didanai oleh Kementerian Riset, Teknologi, dan Pendidikan Tinggi Republik Indonesia melalui Beasiswa PMDSU dan
World Class Research (WCR), Kyu Hyuck Chung dan Jong Hwan Kwak. APC didanai oleh I Ketut Adnyana melalui Proyek WCR.

Ucapan Terima Kasih: Para penulis mengucapkan terima kasih yang tulus kepada semua anggota Laboratorium Pencegahan Farmasi, Sekolah
Farmasi, Universitas Sungkyunkwan, atas bantuan teknis dan saran mereka. Penulis juga mengucapkan terima kasih kepada Vienna Saraswaty
(Unit Riset Teknologi Bersih, LIPI) dan Syaikhul Aziz (Institut Teknologi Sumatera) atas saran mereka dalam mengekstraksi dan menampilkan
data NMR.
Konflik Kepentingan: Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan.

Referensi
1. Penyebab, JF; Korach, KS Estrogen receptor null mice: Apa yang telah kita pelajari dan kemana mereka akan membawa kita?
Endokr. Wahyu 1999, 20, 358–417. [Referensi Silang] [PubMed]
2. Gustafsson, J.-A. Apa yang dapat dipelajari oleh farmakolog dari kemajuan terbaru dalam pensinyalan estrogen
Tren Pharmacol. Sains. 2003, 24, 479–485. [Referensi Silang]
3. Nelson, AW; Tilley, WD; Neal, DE; Carroll, JS Beta reseptor estrogen pada kanker prostat: Teman atau musuh?
Endokr. Relat. Kanker 2014, 21, T219–T234. [Referensi Silang] [PubMed]
4. Williams, C.; Edvardsson, K.; Lewandowski, SA; Ström, A.; Gustafsson, J.-A. Sebuah studi luas genom tentang efek represif beta reseptor
estrogen pada pensinyalan alfa reseptor estrogen dalam sel kanker payudara.
Onkogen 2008, 27, 1019–1032. [Referensi Silang] [PubMed]
5. Mangalath, DL; Sadasivan, C. Selective Estrogen Receptor Modulators (SERMs) from Plants. Dalam Produk Alami Bioaktif ; John Wiley &
Sons, Ltd.: Hoboken, NJ, AS, 2015; hlm. 375–386, ISBN 978-3-527-68440-3.
6. Sirtori, CR; Arnoldi, A.; Johnson, SK Phytoestrogen: Akhir cerita? Ann. Kedokteran 2005, 37, 423–438. [Referensi Silang]
[PubMed]
7. Oseni, T.; Patel, R.; Pyle, J.; Jordan, VC Modulator reseptor estrogen selektif dan fitoestrogen.
Planta Med. 2008, 74, 1656–1665. [Referensi Silang] [PubMed]
8. Lampe, JW Isoflavonoid dan Lignan Phytoestrogen sebagai Dietary Biomarker. J.Nutr. 2003, 133, 956S–964S.
[Referensi Silang]

9. Cornwell, T.; Cohick, W.; Raskin, I. Diet fitoestrogen dan kesehatan. Fitokimia 2004, 65, 995–1016.
[Referensi Silang]

10. Sirotkin, AV; Harrath, AH Fitoestrogen dan efeknya. eur. J. Pharmacol. 2014, 741, 230–236. [Referensi Silang]
11. Poluzzi, E.; Piccinni, C.; Raschi, E.; Rampa, A.; Recanatini, M.; De Ponti, F. Phytoestrogen di postmenopause: Keadaan seni dari perspektif
kimia, farmakologi dan peraturan. Kur. Kedokteran kimia 2014, 21, 417–436. [Referensi Silang]

12. Firenze, NT; Huguette, STS; Hubert, DJ; Raceline, GK; Keinginan, DDP; Pierre, K.; Teofil, D.
Ekstrak air Peperomia pellucida (L.) HBK mempercepat penyembuhan patah tulang pada tikus Wistar. Pelengkap BMC.
Alternatif. Kedokteran 2017, 17, 188. [Referensi Silang] [PubMed]

13. Ngueguim, FT; Khan, MP; Donfack, JH; Tewari, D.; Dimo, T.; Kamtchouing, P.; Maurya, R.; Chattopadhyay, ekstrak N. Ethanol dari
Peperomia pellucida (Piperaceae) mendorong penyembuhan patah tulang dengan efek anabolik pada osteoblas. J. Etnofarmakol. 2013,
148, 62–68. [Referensi Silang]
14. Putri, CA; Kartika, A.; Adnyana, IK Efek pencegahan herba Peperomia pellucida (L.) Kunth pada
tikus osteoporosis yang diinduksi ovariektomi. Dagu. Kedokteran 2016, 25, 546–551. [Referensi Silang]
15. Khosla, S.; Oursler, MJ; Monroe, DG Estrogen dan Skeleton. Tren Endokrinol. Metab. 2012, 23, 576–581.
[Referensi Silang]

16. Deroo, BJ; Korach, reseptor KS Estrogen dan penyakit manusia. J.Clin. Selidiki. 2006, 116, 561–570. [Referensi Silang]
Machine Translated by Google

Molekul 2020, 25, 4914 15 dari 18

17. Villalobos, M.; Olea, N.; Brotons, JA; Olea-Serrano, MF; Ruiz de Almodovar, JM; Pedraza, V. Uji E-screen : Perbandingan stok sel MCF7
yang berbeda. Mengepung. Perspektif Kesehatan. 1995, 103, 844–850. [Referensi Silang]
18. Liu, Z.; Yu, X.; Syaikh, ZA Aktivasi cepat ERK1/2 dan AKT dalam sel kanker payudara manusia oleh kadmium.
Toksikol. Aplikasi Pharmacol. 2007, 228, 286–294. [Referensi Silang]
19. Desouza, J.; Gadkar, S.; Jagtap, D.; Sachdeva, G. Ukuran, situs, dan pensinyalan: Tiga atribut reseptor estrogen. Bioma. Res. J. 2019, 6,
37. [Ref Silang]
20. Levin, ER Reseptor estrogen membran plasma. Tren Endokrinol. Metab. 2009, 20, 477–482. [Referensi Silang]
21. Pedram, A.; Razandi, M.; Levin, ER Sifat reseptor estrogen fungsional pada membran plasma.
Mol. Endokrinol. 2006, 20, 1996–2009. [Referensi Silang] [PubMed]
22. Siersbæk, R.; Kumar, S.; Carroll, JS Signaling pathways dan reseptor steroid memodulasi reseptor estrogen
fungsi ÿ pada kanker payudara. Gen Dev. 2018, 32, 1141–1154. [Referensi Silang]
23. Fuentes, N.; Silveyra, mekanisme pensinyalan reseptor Estrogen P.. Lanjut Kimia Protein. Struktur. Biol. 2019, 116,
135–170. [Referensi Silang]

24. Marczell, I.; Balogh, P.; Nyiro, G.; Cium, AL; Kovacs, B.; Bekesi, G.; Racz, K.; Patocs, A. Pensinyalan yang diinisiasi reseptor estrogen alfa
yang terikat membran bergantung pada dinamin dalam sel kanker payudara. eur. J.Med. Res.
2018, 23, 31. [Ref Silang] [PubMed]
25. Björnström, L.; Sjöberg, M. Mekanisme Pensinyalan Reseptor Estrogen: Konvergensi Tindakan Genomik dan Nongenomik pada Gen
Sasaran. Mol. Endokrinol. 2005, 19, 833–842. [Referensi Silang]
26. Ward, RS Kemajuan Terbaru dalam Kimia Lignan. Dalam Studi Kimia Produk Alami; Produk Alami Bioaktif (Bagian E); Atta-ur-Rahman,
Ed.; Elsevier: Amsterdam, Belanda, 2000; Volume 24, hlm. 739–798.

27. Simpson, D.; Amos, S. Bab 12—Metabolit Tumbuhan Lainnya. Dalam Farmakognosi; Badal, S., Delgoda, R., Eds.; Pers Akademik: Boston,
MA, AS, 2017; hlm. 267–280, ISBN 978-0-12-802104-0.
28. Cui, Q.; Du, R.; Liu, M.; Rong, L. Lignan dan Turunannya dari Tumbuhan sebagai Antiviral. Molekul 2020, 25, 183. [Ref Silang] [PubMed]

29. Ayres, DC; Loike, JD Lignans: Sifat Kimia, Biologis dan Klinis; Cambridge University Press: Cambridge, Inggris, 1990; ISBN
978-0-521-30421-4.
30. Ward, RS Lignan, neolignan, dan senyawa terkait. Nat. Melecut. Rep. 1993, 10, 1–28. [Referensi Silang] [PubMed]
31. Suzuki, S.; Umezawa, T. Biosintesis lignan dan norlignan. J. Wood Sci. 2007, 53, 273–284. [Referensi Silang]
32. Frezza, C.; Venditti, A.; Toniolo, C.; De Vita, D.; Franceschin, M.; Ventron, A.; Tomassini, L.; Foddai, S.; Guiso, M.; Nicoletti, M.; et al. Nor-

Lignan: Kejadian pada Tumbuhan dan Aktivitas Biologis—Sebuah Tinjauan.

Molekul 2020, 25, 197. [Ref Silang]
33. Bayma, JD; Arruda, MS; Müller, AH; Arruda, AC; Canto, WC Senyawa dimerik ArC2 dari Peperomia pellucida. Fitokimia 2000, 55, 779–
782. [Referensi Silang]
34. Ragasa, C.; Dumato, M.; Rideout, J. Senyawa antijamur dari Peperomia pellucida. Kimia ACGC.
Res. Komunal. 1998, 7, 54–61.

35. Ngajui, BT; Lontsi, D.; Ayafor, JF; Sondengam, BL Pachypophyllin dan pachypostaudin A dan B:
Tiga bisnorlignan dari pachypodanthium staudtii. Fitokimia 1989, 28, 231–234. [Referensi Silang]
36. Eklund, P.; Raitanen, J.-E. 9-Norlignans: Kemunculan, Properti, dan Persiapan Semisintetiknya dari Hydroxymatairesinol. Molekul 2019,
24, 220. [Ref Silang] [PubMed]
37. Kartika, IGAA; Insanu, M.; Riani, C.; Chung, KH; Adnyana, IK Perbedaan Polaritas dan Adanya Senyawa Fitoestrogen Yang Mempengaruhi
Aktivitas Estrogen Ekstrak Peperomia pellucida. Sains Melayu, diterima.
38. Soto, A.; Sonnenschein, CL; Chung, K.; Fernández, M.; Olea, N.; Olea Serrano, F. Pengujian E-SCREEN sebagai Alat
untuk Mengidentifikasi Estrogen: Pembaruan tentang Polutan Lingkungan Estrogen. Mengepung. Perspektif Kesehatan.
1995, 103 (Sup. 7), 113–122. [Referensi Silang] [PubMed]
39. Resende, FA; de Oliveira, APS; de Camargo, MS; Vilegas, W.; Varanda, EA Evaluasi Potensi Estrogen Flavonoid Menggunakan Strain
Ragi Rekombinan dan Pengujian Proliferasi Sel MCF7/BUS. PLoS SATU 2013, 8, e74881. [Referensi Silang] [PubMed]

40. Ahmad, I.; Yanuar, A.; Mulia, K.; Mun'im, A. Ekstraksi Kandungan Polifenol dari Peperomia pellucida (L) Kunth Herb dengan 1-Ethyl-3-
methylimidazolium Bromide. India J. Pharm. Sains. 2018, 79, 1013–1017.
[Referensi Silang]

41. Bacciottini, L.; Falchetti, A.; Pampaloni, B.; Bartolini, E.; Carossino, AM; Brandi, ML Fitoestrogen: Makanan
atau obat? Klinik. Penambang Kasus. Metab Tulang. 2007, 4, 123–130.
Machine Translated by Google

Molekul 2020, 25, 4914 16 dari 18

42. An, K.-C. Modulator Reseptor Estrogen Selektif. Tulang Belakang Asia J. 2016, 10, 787–791. [Referensi Silang]
43. Hajirahimkhan, A.; Simmler, C.; Yuan, Y.; Anderson, JR; Chen, S.-N.; Nikoli'c, D.; Dietz, BM; Pauli, GF; van Breemen, RB; Bolton, JL Evaluasi
Aktivitas Estrogen Spesies Licorice Dibandingkan dengan Hop yang Digunakan dalam Botani untuk Gejala Menopause. PLoS SATU 2013, 8,
e67947. [Referensi Silang]
44. McGregor, JI; Jordan, VC Panduan dasar mekanisme aksi antiestrogen. Pharmacol. Wahyu 1998, 50,
151–196.

45. Mäkelä, S.; Santi, R.; Salo, L.; McLachlan, JA Fitoestrogen adalah agonis estrogen parsial pada tikus jantan dewasa. Mengepung. Perspektif
Kesehatan. 1995, 103, 123–127.
46. Lecomte, S.; Demay, F.; Ferriere, F.; Pakdel, F. Phytochemical Menargetkan Reseptor Estrogen: Lebih Bermanfaat
Daripada Efek Samping? Int. J.Mol. Sains. 2017, 18, 1381. [Ref Silang]

47. Nath, D. Fitoestrogen: Agen yang Mungkin untuk Mengontrol Kesuburan. GJORM 2018, 3. [Ref Silang]
48. Mostrom, M.; Evans, TJ Bab 52—Fitoestrogen. Dalam Toksikologi Reproduksi dan Perkembangan; Gupta, RC, Ed.; Pers Akademik: San Diego,
CA, AS, 2011; hlm. 707–722, ISBN 978-0-12-382032-7.
49. Mathouet, H.; Elomri, A.; Lameiras, P.; Daïch, A.; Vérité, P. Sebuah alkaloid, dua seskuiterpen konjugat
dan fenilpropanoid dari Pachypodanthium membatasi Engl. dan Diels. Fitokimia 2007, 68, 1813–1818.
[Referensi Silang]

50. Manalo, JB; Han, BH; Han, YH; Taman, MH; Anzaldo, FE Studi tentang senyawa netral Peperomia pellucida yang larut dalam eter. Lengkungan.
Farmasi. Res. 1983, 6, 133–136. [Referensi Silang]
51. Budzinski, JW; Trudeau, VL; Drouin, CE; Panahi, M.; Arnason, JT; Foster, BC Modulasi sitokrom
manusia P450 3A4 (CYP3A4) dan P-glikoprotein (P-gp) dalam monolayer sel Caco-2 oleh produk milk
thistle sumber komersial dan goldenseal terpilih. Bisa. J. Physiol. Pharmacol. 2007, 85, 966–978.
[Referensi Silang]

52. Kwon, YS; Choi, WG; Kim, WJ; Kim, WK; Kim, MJ; Kang, WH; Kim, CM Konstituen antimikroba
dari Foeniculum vulgare. Lengkungan. Farmasi. Res. 2002, 25, 154–157. [Referensi Silang]
53. Monteiro, M. Aktivitas antibakteri dari minyak aduncum Piper dan dillapiole, konstituen utamanya, Terhadap strain yang resistan terhadap berbagai
obat. Bol. bahasa Latin. Caribe Plantas Med. Aromat. 2014, 13, 517–526.
54. Parise-Filho, R.; Pastrello, M.; Pereira Camerlingo, CE; Silva, GJ; Agostinho, LA; de Souza, T.; Motter Magri, FM; Ribeiro, RR; Brandt, CA; Polli,
MC Aktivitas anti-inflamasi dillapiole dan beberapa analog semisintetik. Farmasi. Biol. 2011, 49, 1173–1179. [Referensi Silang] [PubMed]

55.Rafael , MS; Hereira-Rojas, WJ; Roper, JJ; Nunomura, SM; Tadei, WP Potensi pengendalian Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) dengan ekstrak
Piper aduncum L. (Piperaceae) ditunjukkan oleh biomarker kromosom dan efek toksik pada inti interfase. Genet. Mol. Res. 2008, 7, 772–781.
[Referensi Silang]
56. Vizcaíno Páez, S.; Pineda Mejía, R.; Garcia, C.; Gil, J.; Durango, D. Metabolisme dan aktivitas antijamur
safrole, dillapiole, dan turunannya terhadap Botryodiplodia theobromae dan Colletotrichum acutatum.
Bol. bahasa Latin. Caribe Plantas Med. Aromat. 2016, 15, 1–17.

57. Zhou, GD; Moorthy, B.; Bi, J.; Donnelly, KC; Randerath, K. DNA mengadisi dari ramuan alkoxyallylbenzene dan konstituen bumbu dalam sel
manusia (HepG2) yang dikultur. Mengepung. Mol. Mutagen. 2007, 48, 715–721.
[Referensi Silang] [PubMed]

58. Rojas-Martínez, R.; Arrieta, J.; Cruz-Antonio, L.; Arrieta-Baez, D.; Velázquez-Méndez, A.; Sánchez-Mendoza, M.; Rojas-Martínez, R.; Arrieta, J.;
Cruz-Antonio, L.; Arrieta-Baez, D.; et al. Dillapiole, Diisolasi dari Peperomia pellucida, Menunjukkan Aktivitas Gastroprotektor terhadap Lesi
Lambung yang Diinduksi Etanol pada Tikus Wistar. Molekul 2013, 18, 11327–11337. [Referensi Silang] [PubMed]

59. Lagu, HY; Yang, JY; Suh, JW; Lee, HS Aktivitas Acaricidal Apiol dan Turunannya dari Benih Petroselinum sativum terhadap Dermatophagoides
pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, dan Tyrophagus putrescentiae. J.Agri. Makanan Kimia. 2011, 59, 7759–7764. [Referensi Silang]
[PubMed]
60. Stefano, VD; Pitonzo, R.; Schillaci, D. Aktivitas antimikroba dan antiproliferatif Athamanta sicula L.
(Apiaceae). Farmakogni. Mag. 2011, 7, 31–34. [Referensi Silang] [PubMed]
61. Creusot, N.; Budzinski, H.; Balaguer, P.; Kinani, S.; Porcher, J.-M.; Aït-Aïssa, S. Analisis yang diarahkan pada efek senyawa pengganggu endokrin
dalam sedimen multi-terkontaminasi: Identifikasi ligan baru reseptor estrogen dan kehamilan X. Anal. Bioanal. kimia 2013, 405, 2553–2566.
[Referensi Silang]
62. Katzenellenbogen, BS; Miller, MA; Eckert, RL; Sudo, K. Farmakologi antiestrogen dan mekanisme aksi. J. Steroid Biochem. 1983, 19, 59–68.
[Referensi Silang]
Machine Translated by Google

Molekul 2020, 25, 4914 17 dari 18

63. Mueller, JADI; Simon, S.; Chae, K.; Metzler, M.; Korach, KS Phytoestrogen dan metabolit manusianya menunjukkan sifat agonis dan antagonis
yang berbeda pada reseptor estrogen alfa (ERalpha) dan ERbeta dalam sel manusia. Toksikol. Sains. 2004, 80, 14–25. [Referensi Silang]

64. Xu, S.; Li, N.; Ning, M.-M.; Zhou, C.-H.; Yang, Q.-R.; Wang, M.-W. Senyawa Bioaktif dari
Peperomia pellucida. J.Nat. Melecut. 2006, 69, 247–250. [Referensi Silang]
65. Chang, EC; Frasor, J.; Komm, B.; Katzenellenbogen, BS Dampak reseptor estrogen beta pada jaringan gen yang diatur oleh reseptor estrogen
alfa pada sel kanker payudara. Endokrinologi 2006, 147, 4831–4842. [Referensi Silang]
66. Mak, P.; Tinggalkan, saya.; Dompet, B.; Bae, D.; Yang, X.; Taglienti, CA; Gouvin, LM; Sharma, VM; Mercurio, AM
ERbeta menghambat EMT kanker prostat dengan mendestabilisasi HIF-1alpha dan menghambat lokalisasi nuklir siput yang dimediasi VEGF :
Implikasi untuk penilaian Gleason. Sel Kanker 2010, 17, 319–332. [Referensi Silang] [PubMed]
67. McPherson, SJ; Husain, S.; Balanathan, P.; Hedwards, SL; Niranjan, B.; Hibah, M.; Chandrasiri, UP; Toivanen, R.; Wang, Y.; Taylor, RA; et al.
Apoptosis teraktivasi reseptor-beta estrogen pada hiperplasia jinak dan kanker prostat tidak bergantung pada androgen dan dimediasi oleh
TNFalpha. Proses Natl. Acad. Sains. AS 2010, 107, 3123–3128. [Referensi Silang] [PubMed]

68. Paterni, I.; Granchi, C.; Katzenellenbogen, JA; Minutolo, F. Reseptor estrogen alfa (ERÿ) dan beta (ERÿ):
Ligan subtipe-selektif dan potensi klinis. Steroid 2014, 90, 13–29. [Referensi Silang]
69. Pinton, G.; Thomas, W.; Bellini, P.; Manente, AG; Favoni, RE; Harvey, BJ; Mutti, L.; Moro, L. Reseptor estrogen ÿ menggunakan fungsi represif
tumor pada mesothelioma pleura ganas manusia melalui inaktivasi EGFR dan memengaruhi respons terhadap gefitinib. PLoS SATU 2010, 5,
e14110. [Referensi Silang] [PubMed]
70. Rudolph, A.; Toth, C.; Hoffmeister, M.; Roth, W.; Herpel, E.; Jansen, L.; Marx, A.; Brenner, H.; Chang-Claude, J.
Ekspresi reseptor estrogen ÿ dan prognosis kanker kolorektal. Sdr. J. Kanker 2012, 107, 831–839.
[Referensi Silang] [PubMed]

71. Yu, C.-P.; Ho, J.-Y.; Huang, Y.-T.; Cha, T.-L.; Sun, G.-H.; Yu, D.-S.; Chang, F.-W.; Chen, S.-P.; Hsu, R.-J.
Estrogen menghambat perkembangan sel karsinoma sel ginjal melalui aktivasi reseptor-ÿ estrogen. PLoS SATU 2013, 8, e56667. [Referensi
Silang]

72. Garcia, AJ; Tom, C.; Guemes, M.; Polanco, G.; Mayorga, SAYA; Wend, K.; Miranda-Carboni, GA; Krum, SA
Pensinyalan ERÿ mengatur ekspresi MMP3 untuk menginduksi pembelahan FasL dan apoptosis osteoklas. J. Penambang Tulang. Res.
2013, 28, 283–290. [Referensi Silang]

73. Khalid, AB; Krum, SA Reseptor Estrogen Alfa dan Beta di Tulang. Tulang 2016, 87, 130–135. [Referensi Silang]
74. Berry, M.; Metzger, D.; Chambon, P. Peran dua domain pengaktif reseptor estrogen dalam aktivitas agonis yang bergantung pada tipe sel dan
konteks promotor dari anti-estrogen 4-hidroksitamoksifen.
EMBO J. 1990, 9, 2811–2818. [Referensi Silang]

75. Peng, J.; Sengupta, S.; Jordan, VC Potensi modulator reseptor estrogen selektif sebagai pengobatan dan pencegahan kanker payudara. Agen
Antikanker Med. kimia 2009, 9, 481–499. [Referensi Silang]
76. Shang, Y.; Brown, M. Penentu molekuler untuk spesifisitas jaringan SERM. Sains 2002, 295, 2465–2468.
[Referensi Silang]

77. Raffo, D.; Pontiggia, O.; Bal de Kier Joffé, E.; Simian, M. Tindakan non-genomik estradiol dan 4-OH-tamoxifen
pada sel kanker payudara murine. Oncol. Rep. 2015, 33, 439–447. [Referensi Silang] [PubMed]
78. Yu, F.; Bender, W. Mekanisme tamoxifen dalam pencegahan kanker payudara. Res Kanker Payudara. 2001, 3, A74.
[Referensi Silang]

79. Khan, F.; Peter, XK; Mackenzie, RM; Katsoulis, L.; Gehring, R.; Munro, OQ; van Heerden, FR; Drewes, SE
Venusol dari Gunnera perpensa: Studi struktural dan aktivitas. Fitokimia 2004, 65, 1117–1121.
[Referensi Silang] [PubMed]

80. De Mariotti, KC; Schmitt, GC; Barreto, F.; Fortunato, RE; Penyanyi, RB; Dallegrave, E.; Leal, MB; Limberger, RP Evaluasi aktivitas anti-estrogenik
atau estrogenik dari ekstrak akar air Gunnera manicata L. Braz. J. Farmasi. Sains. 2011, 47, 601–604. [Referensi Silang]

81. Dauvois, S.; Putih, R.; Parker, MG Antiestrogen ICI 182780 mengganggu nukleositoplasma reseptor estrogen
bolak-balik. J. Sel Sci. 1993, 106, 1377–1388. [PubMed]
82. Kim, SDM; Lee, JE; Jeong, MH; Choi, SJ; Lee, K.; Chung, KH Evaluasi perbandingan mutagenisitas dan genotoksisitas kondensat asap yang
berasal dari rokok Korea. Mengepung. Toksikol Kesehatan. 2015, 30.
[Referensi Silang]

83. Vandhana, S.; Deepa, Humas; Aparna, G.; Jayanti, U.; Krishnakumar, S. Evaluasi pelarut yang cocok untuk menguji aktivitas anti-proliferasi
triclosan—Obat hidrofobik dalam kultur sel. IJBB 2010, 47, 166–171.
Machine Translated by Google

Molekul 2020, 25, 4914 18 dari 18

84. Jamalzadeh, L.; Ghafoori, H.; Sariri, R.; Rabuti, H.; Nasirzade, J.; Hasani, H.; Aghamaali, MR Efek Sitotoksik Beberapa Pelarut
Organik Umum pada MCF-7, RAW-264.7 dan Sel Endotel Vena Umbilikal Manusia. Avicenna J. Med. Biokimia. 2016, dalam
pers. [Referensi Silang]
85. Oh, SM; Ryu, BT; Chung, KH Identifikasi aktivitas estrogenik dan antiestrogenik dari solar yang dapat dihirup
partikel buangan dengan fraksinasi terarah bioassay. Lengkungan. Farmasi. Res. 2008, 31, 75–82. [Referensi Silang]

Ketersediaan Sampel: Sampel senyawa tersedia dari penulis.

Catatan Penerbit: MDPI tetap netral sehubungan dengan klaim yurisdiksi dalam peta yang diterbitkan dan afiliasi kelembagaan.

© 2020 oleh penulis. Penerima Lisensi MDPI, Basel, Swiss. Artikel ini adalah artikel akses terbuka yang
didistribusikan berdasarkan syarat dan ketentuan Atribusi Creative Commons

(CC BY) lisensi (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).