Animal-Cell Culture Media: History, Characteristics, and

Current Issues
1. SEJARAH
 Rintisan Percobaan Budidaya (1882–1907)
Pada tahun 1882, Sydney Ringer mengembangkan solusi Ringer, garam yang
seimbang larutan dengan komposisi yang mirip dengan cairan tubuh, dan berhasil
membuat jantung katak tetap berdetak setelah diseksi dan dikeluarkan dari tubuh. Ini
dikatakan sebagai contoh pertama budidaya in vitro dari jaringan hewan.
 Percobaan penggunaan media alami (1907-)
pada tahun 1909, Burrows menemukan bahwa getah bening tidak cocok untuk
penanaman sel dari hewan berdarah panas dan menggunakan plasma sebagai gantinya.
Setelah itu, plasma darah menjadi media kultur utama untuk berbagai sel hewan. Ia
berhasil membudidayakan embrio ayam sel dengan menggunakan plasma darah ayam
yang sudah tersedia.
 Percobaan menggunakan media sintetik (1911-)
Margaret R. Lewis dan Warren H. Lewis (1911) menunjukkan bahwa larutan
Locke–Lewis—yang merupakan modifikasi larutan Locke yang juga mengandung asam
amino, kaldu, dan glukosa (atau maltose) lebih efektif untuk budidaya sel embrio ayam
dibandingkan dengan perimbangan sederhana larutan garam.
 Kelahiran garis sel yang stabil (1940-)
Pada tahun 1940, Wilton R. Earle dkk. menggunakan karsinogen untuk berhasil
menciptakan keabadian fibroblas tikus (sel L). Pada tahun 1951, George O. Gey dan rekan
kerjanya menciptakan garis sel manusia yang berkembang biak tanpa batas dari jaringan
pasien dengan kanker serviks uteri (sel HeLa).
 Pembentukan media basal dan penelitian protein dengan media bebas (1946-)
Media Baker dan media lainnya yang telah berkembang hingga saat ini. Titik ini
mengandung komponen turunan alami dari komposisi yang tidak diketahui, termasuk
plasma, serum, kaldu, pepton, dan ekstrak jaringan. Untuk menemukan komponen penting
dalam bahan-bahan alami tersebut dan untuk mengembangkan media terdefinisi yang
sebanding efisien dalam budidaya sel, relatif terhadap media yang mengandung bahan
alami, dua strategi utama yang dilakukan. Strategi pertama adalah menggunakan dialysis
serum untuk mendukung sel pada tingkat minimum dan untuk menambahkan yang
 ditentukan komponen untuk memaksimalkan proliferasi sel. Strategi kedua tidak
bergantung pada serum, atau bahkan protein sama sekali, dan melibatkan formulasi media
secara eksklusif dari komponen definitif.
 Identifikasi pengganti serum dan pengembangan media bebas serum disesuaikan
dengan jenis sel (1970-)
Insulin ditemukan sebelumnya oleh Frederick Banting dan Charles Best (1921),
tetapi penelitian skala besar ke dalam peptida ini sebagai suplemen untuk media kultur
dimulai pada 1960 an.
 Perbaikan media basal (1970-)
Selain menjadi sumber hormon, faktor pertumbuhan, protein pembawa, dan lipid,
serum meningkatkan kadar berbagai senyawa dengan berat molekul rendah di media basal.
Akibatnya, media basal tradisional dari serum mana yang dikecualikan kadang-kadang
tidak dapat mendukung secara memadai pertumbuhan sel.

PEMILIHAN MEDIUM DASAR

 Pemilihan media basal : peran komponen medium
Serum
Serum berfungsi sebagai sumber asam amino, protein, vitamin, drat karbohidrat,
lipid, hormon, faktor pertumbuhan, garam anorganik, elemen jejak, dan senyawa lainnya.
Ini juga meningkatkan kapasitas buffer pH media dan membantu mengurangi tegangan
geser (yaitu, kerusakan fisik yang disebabkan oleh manipulasi dan pengadukan pipet).
Selanjutnya, serum mengubah kondisi pada substrat kultur, memungkinkan perlekatan sel
untuk mudah berkembang biak di sana. Fetal bovine serum (FBS) adalah yang terbanyak
serum yang populer dan banyak digunakan saat ini. Jenis serum lainnya adalah digunakan
dalam situasi tertentu, termasuk serum betis (CS) dan serum kuda. Peneliti dapat memilih
jenis serum yang sesuai berdasarkan jenis serumnya karakteristik. Fetal bovine serum
umumnya kaya akan faktor pertumbuhan dan mengandung kadar γ-globulin yang rendah
(yang memiliki aktivitas penghambatan pertumbuhan sel). Dengan demikian, sangat cocok
untuk sel yang sulit t
Alternatif untuk serum
Ketika suplementasi serum tidak sesuai atau tidak diinginkan, peneliti dapat memilih
beberapa pengganti serum. Mereka termasuk ekstrak serum, ekstrak jaringan atau
hidrolisat, faktor pertumbuhan, hormon, protein pembawa seperti albumin dan transferin,
 lipid, logam, vitamin, poliamina, dan reduktor. Jumlah kombinasi suplemen ini hampir tak
terbatas dan sering berinteraksi satu sama lain. Pemilihan mereka dengan demikian
menimbulkan upaya yang sangat besar, waktu, dan biaya: seseorang tidak dapat
merancang media yang optimal hanya dengan mencobanya dalam kombinasi sembarang
secara acak. Studi menyeluruh tentang catatan sebelumnya tentang kombinasi yang
berhasil, jika tersedia, sangat membantu.

HAL-HAL PERHATIAN SAAT MENGGUNAKAN MEDIA BUDAYA

4,1 | Menyiapkan kultur bebas serum
Ada dua hal yang perlu diperhatikan saat bekerja dengan sistem kultur bebas serum.
Pertama, klon sel yang tidak diinginkan dalam bejana kultur dapat terjadi dipilih selama
subkultur karena media bebas serum dapat berpromosi proliferasi klon sel tertentu atau
subtipe sel lebih sering daripada media yang mengandung serum. Kedua, kotoran dalam
serum bebas menengah, baik yang dapat dihindari maupun yang tidak dapat dihindari,
mungkin memiliki efek yang lebih kuat pada sel yang dikultur daripada media yang
mengandung serum karena kurangnya aktivitas penetral racun yang dikandung serum.
Selain itu, ada tindakan pencegahan lain untuk biakan bebas serum: yaitu, minimalisasi
konsentrasi tripsin dan pemilihan faktor adhesi.57
4,2 | perubahan pH
pH media kultur yang digunakan untuk kultur sel hewan umumnya dipertahankan
oleh hubungan kesetimbangan antara jadi dium bikarbonat (NaHCO3) dalam media kultur
dan CO2 dalam inkubator. Banyak laboratorium menetapkan konsentrasi CO2 inkubator
menjadi 5%-6% dengan konvensi, tetapi secara teknis, seharusnya disesuaikan dengan
konsentrasi NaHCO3 dalam media kultur. Misalnya, 5% CO2 sesuai untuk media dengan
26 mmol L−1 NaHCO3 ditambahkan (misalnya media MEM), 2% CO2 untuk media
dengan 14 mmol L−1 ditambahkan (misalnya, media F-12 Ham), dan 10% CO2 untuk
media dengan 44 mmol L−1 NaHCO3 ditambahkan (misalnya, DMEM sedang). Angka-
angka ini adalah nilai teoritis yang dihitung dengan menggunakan persamaan Henderson–
Hasselbalch dalam praktiknya, memeriksa pH media kultur setelah mencapai
kesetimbangan dan kemudian membuat penyesuaian kecil pada konsentrasi CO2 lebih
baik.
4,3 | Stres oksidatif
Eksperimen budaya secara umum dan khususnya bila dilakukan di bawah
konsentrasi oksigen yang lebih tinggi, seperti percobaan kultur organ, dapat membuat sel
 terpapar stres oksidatif, yang berdampak negatif pada sel dan jaringan dalam kultur.
Suplementasi dengan zat dengan aktivitas antioksidan (misalnya, vitamin [C, E],
glutathione, selenite, β mercaptoethanol, dithiothreitol, atau asam lipoat) efektif, terutama
ketika serum (mengandung antioksidan) tidak ditambahkan ke media.
Selain itu, ion besi dan tembaga dalam keadaan bebas meningkatkan produksi
spesies oksigen reaktif. Oleh karena itu yang terbaik untuk ion-ion ini dikomplekskan
dengan pembawa yang sesuai (misalnya, transferin, albumin, atau agen chelating) dan
untuk disuplai ke sel dalam keadaan ini, sementara mereka diisolasi dari sistem reaktif.
Perhatian juga diperlukan dengan sehubungan dengan ion besi bebas, yang mudah
dihidroksilasi dan mengendap dalam larutan berair.
4,4 | Kebutuhan nutrisi
Jumlah nutrisi yang cukup dalam medium merupakan prasyarat untuk sel untuk
berperilaku dengan baik. Beberapa jenis sel membutuhkan tingkat nutrisi yang lebih tinggi
daripada yang lain, tergantung pada aktivitas metabolisme dan tingkat proliferasinya.
Karakteristik sel seperti itu harus diperhitungkan dalam pemilihan media. DMEM,
misalnya, awalnya dirancang untuk mengandung glukosa pada 5,6 mmol L−1. Sekarang,
versi modifikasi dari DMEM dengan konsentrasi glukosa tinggi, 25 mmol L−1, yang bisa
digunakan untuk sel yang membutuhkan jumlah glukosa yang lebih besar, tersedia dari
berbagai pemasok. Satu peringatan saat menggunakan media glukosa tinggi ini untuk sel
yang berkembang biak secara aktif adalah akumulasi metabolit, seperti laktat, dan
penurunan pH. Peneliti disarankan untuk mengganti media pada interval yang tepat atau
menggunakan HEPES untuk memberikan kapasitas penyangga pH yang lebih kuat ke
media.

2. Metode
Pencarian literatur dilakukan di PubMed dan Google Scholar antara 1880 dan Mei 2016
menggunakan kata kunci yang sesuai.
3. Hasil
Pada awal teknologi kultur sel, komponen utama media adalah produk turunan alami
seperti serum. Bidang kemudian secara bertahap beralih ke penggunaan media sintetik
berbahan dasar kimia karena bahan-bahan yang diturunkan secara alami memiliki
kelebihan seperti yang besar. Saat ini, sel-sel penting secara industry dapat dibiakkan
dalam media sintetik. Namun demikian, kombinasi dan konsentrasi komponen dalam
media tersebut tetap harus dioptimalkan. Selain itu, media yang mengandung serum masih
 digunakan secara umum dalam bidang penelitian dasar. Di bidang teknologi reproduksi
berbantuan dan pengobatan regeneratif, beberapa mediumnya komponen secara alami
diturunkan di hampir semua contoh.

4. Media : media kultur sel hewan

5. Kesimpulan
Sejak keberhasilan budidaya sel hewan Harrison, kultur sel teknologi telah
berkembang pesat, dengan banyak terobosan. Dengan bahan habis pakai (misalnya, media
kultur) dan kultur sel peralatan sekarang dipasok secara komersial, menjadi mungkin
untuk siapa pun untuk bekerja dengan mudah dengan sel berbudaya. Akibatnya, telah ada
lebih sedikit kesempatan akhir-akhir ini untuk menghargai nilai penelitian budaya media,
serta kekurangan dan keterbatasannya. Dengan kemajuan di obat regeneratif dan
biofarmasi, penciptaan budaya sistem yang tidak memerlukan campur tangan manusia
diperkirakan akan terus berlanjut: tren ini mungkin akan meningkat di masa depan.
Bahkan dengan tren ini, media kultur sangat penting untuk kualitas terbaik percobaan
kultur sel, serta pekerjaan biofarmasi. Disini lagi, perlu diperhatikan media kultur saat ini
dan formulasinya telah ditetapkan melalui upaya abadi dari para peneliti yang tak
terhitung banyaknya. Mulai sekarang, penyelidik harus mendorong evolusi lebih lanjut
media budaya, dengan tujuan meningkatkan kinerja budaya
 Cell Culture: Growing Cells as Model Systems In
Vitro
1. Prinsip
The Cell Culture Laboratory
 Keamanan Laboratorium Kultur Sel
Penerapan teknik kultur sel yang menarik dalam penelitian biomedis membutuhkan
pengelolaan potensi bahaya yang terkait dengan agen infeksius yang dijejali oleh sel
biakan (mis., HBV atau HIV), tetapi juga pengendalian reagen yang dapat bersifat toksik,
korosif, atau mutagenik. Potensi bahaya ini bisa membahayakan kesehatan pekerja
laboratorium bila masuk ke dalam tubuh (misalnya, melalui kontak kulit dan selaput lendir
dengan padatan, cairan, atau aerosol) dan mengancam lingkungan bila ditangani dengan
tidak tepat. Sebelum memulai pekerjaan kultur sel apa pun, paparan yang dikurangi atau
dihilangkan terhadap agen yang berpotensi berbahaya perlu dipastikan untuk
meminimalkan infeksi, patogenisitas, reaksi alergi, dan kontak dengan racun yang
dilepaskan. Hal ini dapat dicapai dengan pelatihan personel lab yang ketat dan penerapan
praktik kultur sel standar yang harus ditinjau ulang.
 Penanganan Cell Line yang Aman
The Advisory Committee on Dangerous Pathogens (ACDP) adalah badan nasional
dikelola oleh Health and Safety Executive (HSE). Ini memberi nasihat tentang bahaya dan
risiko bagi pekerja dan orang lain dari paparan patogen dan telah menerbitkannya
rekomendasi. Karena beberapa jenis sel bersifat patogenik atau membawa agen penyebab
penyakit, penting untuk terlebih dahulu menentukan Kelompok Bahayanya dan
menerapkan langkah-langkah keamanan yang sesuai. Ini termasuk penilaian risiko tertulis
dan meninjau fasilitas laboratorium

 Prosedur Eksperimental yang Aman di Laboratorium Kultur Sel

Untuk memastikan lingkungan kerja yang aman dengan garis sel dan agen
biohazard, alat pelindung diri (APD) harus dipakai di laboratorium kultur sel. Jas lab,
sarung tangan, dan kacamata menciptakan penghalang antara laboratorium pekerja dan
sumber yang berpotensi berbahaya. Selanjutnya, lemari biosafety mengandalkan pada
aliran udara berfilter HEPA yang stabil dan searah dan menciptakan ruang tertutup, ruang
kerja berventilasi. Ini meminimalkan paparan peneliti dan lingkungan terhadap bahan
 berbahaya yang terkait dengan sel yang dikultur, sekaligus melindungi kultur sel dari
kontaminasi. Saat menangani sel media kultur dan melakukan eksperimen di lab kultur sel,
juga direkomendasikan untuk meninjau Lembar Data Keselamatan Bahan (MSDS) terkait
dengan reagen laboratorium. Ini rincian sifat kimia dan fisik dari produk, menguraikan
rute penyimpanan dan pembuangan yang sesuai, menginformasikan tentang potensi
bahaya kesehatan dan toksisitas, dan memberi saran tentang APD yang harus ada saat
menangani produk ini.

 Peralatan untuk laboratorium kultur sel

Meskipun berbagai teknik dan pengujian dilakukan dalam kultur sel yang berbeda
laboratorium, tema umum pekerjaan kultur sel adalah asepsis — penciptaan lingkungan
mikro yang bebas dari mikroorganisme patogen yang tidak diinginkan, termasuk bakteri,
virus, jamur, dan parasit. Karena asepsis adalah komponen penting dari kesuksesan
pekerjaan kultur sel, ruang terpisah atau area khusus harus didedikasikan untuk ini bekerja
dan tidak digunakan untuk tujuan lain. Beberapa peralatan bisa membantu dalam
mencapai ruang kerja yang steril dan umumnya menghasilkan efisiensi yang lebih tinggi,
akurasi, dan konsistensi kinerja kultur sel

2. Hasil
APLIKASI
 Sistem Model dalam Kesehatan dan Penyakit
Kultur sel adalah salah satu teknik terpenting dalam seluler dan molekuler biologi
karena menyediakan platform untuk menyelidiki biologi, biokimia, fisiologi (misalnya,
penuaan) dan metabolisme sel tipe liar dan sel yang sakit. Interaksi dan rute infeksi antara
sel tipe liar dan pathogen agen (misalnya, bakteri dan virus) juga dapat dipelajari dalam
budaya tertentu. Selain itu, garis sel kanker yang diabadikan telah memberikan wawasan
kepada para peneliti biologi kanker dan melalui pengobatan selektif sel tipe liar dengan
Radiasi UV, virus, dan racun, agen penyebab tumorigenisitas telah diidentifikasi.
Akhirnya, sel induk berpotensi majemuk yang diinduksi manusia (hIPSCs) telah berasal
dari individu dengan kelainan bawaan dan dibedakan ke arah jenis sel yang terkena di
mana penyakit bermanifestasi. Somatik yang diturunkan dari hIPSC ini sel adalah
platform yang cocok untuk mempelajari mekanisme molekuler suatu penyakit dalam
sebuah piring.
 Pengembangan Obat dan Pengujian Obat
Alat kultur sel juga dapat diterapkan untuk menyaring bahan kimia baru, kosmetik,
dan senyawa obat untuk kemanjurannya dan menilai sitotoksisitas obat dalam sel tertentu
jenis. Jenis sel detoksifikasi seperti hepatosit dan sel ginjal sering kali sangat diminati
untuk tujuan ini. Saat menggunakan kokultur sel atau sel sakit yang diperoleh dari masing-
masing pasien, skrining juga memungkinkan obat untuk secara selektif menargetkan jenis
sel tertentu (misalnya, dalam pengobatan kanker), pada dosis yang tidak beracun dan
dengan efek samping minimal bagi pasien. Lebih-lebih lagi, kultur sel skala besar dapat
berfungsi untuk generasi rekayasa genetika protein, antibodi, hormon. dan biofarmasi yang
dapat diisolasi dan digunakan secara terapeutik.

 Virologi dan Produksi Vaksin

Kultur sel dengan sel mamalia menawarkan inang bagi virus untuk bereplikasi,
memungkinkan peneliti untuk mempelajari tingkat pertumbuhan, perkembangan, dan
kondisi yang diperlukan untuk siklus menular mereka. Selanjutnya, virus yang dilemahkan
digunakan dalam vaksin terhadap polio, campak, cacar air, rabies, dan hepatitis B
dibesarkan pada hewan kultur sel.

 Regenerasi Jaringan dan Transplantasi

hIPSC, sel punca embrionik, dan sel punca dewasa memiliki kapasitas untuk
beregenerasi dan berdiferensiasi menjadi jenis sel khusus yang dapat digunakan sebagai
pengganti jaringan atau organ. Kultur sel ini seringkali dilakukan dalam protein 3D
matriks yang memungkinkan sel mengatur dirinya sendiri menjadi kelompok sel
fungsional (organoid)
 Rekayasa Genetika dan Terapi Gen
Ekspresi gen tertentu dan pengaruhnya terhadap sel dapat dipelajari oleh pengenalan
bahan genetik baru (misalnya, DNA, RNA) ke dalam inti sel mamalia yang dikultur.
Demikian pula pentingnya gen dalam mengatur spesifik jalur dapat diamati melalui
membungkam mereka. Seringkali, vektor virus atau enzim khusus digunakan untuk
melakukan tugas-tugas ini. Mengubah genom dari sel juga dapat membantu memulihkan
gen disfungsional pada pasien.
 Manfaat menyeluruh menggunakan teknik kultur sel untuk mengatasi pertanyaan
penelitian ilmiah dan translasi dasar ini adalah homogenitas dan reproduktifitas data yang
dapat dihasilkan menggunakan garis sel klon. Mempelajari sistem seluler yang terisolasi
dan disederhanakan dalam lingkungan yang terdefinisi dengan baik dan terkontrol
membatasi pemaparan efek perancu yang melekat pada suatu sistem in vivo dan karenanya
memungkinkan untuk generasi yang disederhanakan namun kuat kumpulan data

SKENARIO
Membudidayakan hIPSC untuk mempelajari penyakit hati yang diturunkan:
Potongan kecil biopsi kulit diperoleh dari pasien dengan penyakit hati yang diturunkan
dapat dibiakkan dalam Petri piring dengan media pertumbuhan fibroblast. Kultur fibroblas
primer akan muncul dari jaringan kulit setelah 2-3 hari. Setelah mencapai ~ 80%
pertemuan, fibroblas primer yang tumbuh dapat diisolasi dari jaringan kulit menggunakan
enzimatik pencernaan dengan kolagenase dan disubkultur di pembuluh baru. Ini
menghasilkan a populasi murni fibroblas, yang dapat ditingkatkan dan ditransduksi secara
viral untuk mengekspresikan gen pluripoten (misalnya, OCT4, NANOG, TRA-1-60),
sehingga sel somatik “repro gramming” menjadi hIPSC. hIPSC dalam budaya akan
berkemas bersama-sama rapat dalam koloni datar dengan tepi tajam dan dicirikan oleh
mereka rasio nukleo-sitoplasma yang tinggi, kemampuan memperbaharui diri, dan
kapasitas untuk membentuk sel dari ketiga lapisan germinal. Dengan demikian, hIPSC
dapat dibedakan menjadi definitive endoderm menggunakan aktivasi jalur Wnt dan
Activin A. Cells pada tahap ini diferensiasi akan bermigrasi dari koloni mereka ke dalam
lapisan tunggal, menurunkan gen pluripotensi mereka dan mengekspresikan penanda nasib
endoderm mereka (misalnya, SOX17, CXCR4, GSC). Perubahan lebih lanjut dalam
komposisi media dan faktor pertumbuhan eksogen yang ditambahkan ke sel endoderm
definitif akan mengarahkannya menuju endoderm foregut dan spesifikasi selanjutnya ke
endoderm hepatik.
Tahap akhir dari media diferensiasi hati menghasilkan seperti hepatosit sel-sel yang
mensekresi albumin dan protein serum lainnya, mengambil low-density lipopro tein
(LDL), menyimpan glikogen, dan memetabolisme obat. Yang penting, sel-sel ini akan
juga menampilkan fenotip penyakit yang diamati pada pasien yang berasal dari kulit
biopsi awalnya diperoleh. Sementara proses ini memungkinkan peneliti untuk mempelajari
dan mekanisme penyelamatan penyakit ex vivo, juga menyoroti perkembangan hati dan
munculnya penyakit dalam rahim
 BATASAN KUNCI
 Perbedaan antara Lingkungan Seluler in vitro dan in vivo
Salah satu pilar penelitian kultur sel adalah desain sel yang terdefinisi lingkungan di
mana variabel tunggal dapat dimanipulasi untuk memantau respons seluler. Untuk
mencapai tujuan ini, lingkungan seluler in vitro adalah seringkali terlalu disederhanakan
dan bergantung, misalnya, pada jenis sel tunggal yang dikultur dalam lapisan tunggal.
Namun, data yang dihasilkan dari sistem seluler seperti itu tidak benar-benar menyalin
interaksi seluler yang rumit antara berbagai jenis sel dan matriks ekstraseluler dari
lingkungan in vivo. Untuk mengatasi kekurangan ini, saat ini ada penelitian yang
signifikan dalam desain cocultures sel itu memungkinkan pensinyalan parakrin di antara
sel-sel yang juga tinggal bersama di ruang in vivo sebagai matriks bioartifical yang
memfasilitasi pertumbuhan sel dalam orientasi 3D asli mereka. Tujuannya adalah desain
sistem seluler yang meniru kompleksitas ceruk in vivo multiseluler, namun juga
memungkinkan standarisasi untuk pengujian kultur sel.

 Perbedaan antara Ekspresi Gen dalam Sel Primer dan Garis Sel Abadi
Jenis sel yang seringkali paling relevan untuk menangani penelitian translasi
pertanyaan sel primer sebenarnya sangat sulit diisolasi dan dibiakkan secara in vitro
karena terbatasnya proliferasi dan kapasitas fungsional ex vivo. Untuk menunda penuaan,
transfeksi virus sel primer dapat menyita protein penekan tumor, dengan demikian
memperluas jumlah bagian yang mungkin dan memungkinkan munculnya garis sel abadi.
Meskipun ini memfasilitasi budaya ex vivo mereka, teknik ini juga memperkenalkan
ekspresi gen karsinogenik. Selain itu, diabadikan garis sel dapat memperoleh mutasi
selama subkultur yang selanjutnya dapat mengganggu fenotipe seluler dan membuat
sistem kultur sel nonfisiologis
3. Kesimpulan
Bab ini telah menjelaskan kemungkinan besar untuk menggunakan teknik kultur sel
untuk menjawab pertanyaan penelitian dasar dan translasi dan telah menjelaskannya
pertimbangan yang diperlukan untuk mendirikan laboratorium kultur sel. Itu juga telah
menunjukkan praktek penting dan teknik untuk berhasil bekerja dengan garis sel dan
menjelaskan kondisi yang diperlukan untuk menciptakan lingkungan seluler yang meniru
ceruk in vivo mereka