Machine Translated by Google

Sejak Januari 2020 Elsevier telah membuat pusat informasi COVID-19 dengan

informasi gratis dalam bahasa Inggris dan Mandarin tentang novel coronavirus COVID

19. Pusat informasi COVID-19 diselenggarakan di Elsevier Connect, the

situs web berita dan informasi publik perusahaan.

Elsevier dengan ini memberikan izin untuk membuat semua yang terkait dengan COVID-19

penelitian yang tersedia di pusat sumber daya COVID-19 - termasuk ini

konten penelitian - segera tersedia di PubMed Central dan lainnya

repositori yang didanai publik, seperti database WHO COVID dengan hak

untuk penggunaan kembali dan analisis penelitian yang tidak terbatas dalam bentuk apa pun atau dengan cara apa pun

dengan pengakuan sumber aslinya. Izin ini adalah

diberikan secara gratis oleh Elsevier selama pusat sumber daya COVID-19
tetap aktif.
Machine Translated by Google

BAB

14
Prinsip dan aplikasi kultur
jaringan hewan
Anju Verma1 , Megha Verma2 dan Anchal Singh3
1
Departemen Patologi Tumbuhan, Institut Genetika & Genomik Pemuliaan Tanaman, Pusat Sekolah Tinggi
Teknologi, Universitas Georgia, Athena, GA, Amerika Serikat 2 Seni dan Sains Genetik Terapan, St. Louis, MO,
Amerika Serikat 3 Departemen Biokimia, Institut Sains, Universitas Hindu Banaras, Varanasi, UP, India

Ringkasan strain sel. Pada pertengahan 1900-an, kultur sel hewan

Teknologi kultur sel hewan dalam skenario saat ini
telah menjadi sangat diperlukan dalam bidang ilmu
kehidupan, yang memberikan dasar untuk mempelajari
regulasi, proliferasi, dan diferensiasi serta untuk
melakukan manipulasi genetik. Ini membutuhkan
keterampilan teknis khusus untuk melaksanakan dengan
sukses. Bab ini menjelaskan teknik penting kultur sel hewan para
Apa yang dapat Anda harapkan untuk diketahui
Bab ini menjelaskan dasar-dasar kultur sel hewan
beserta aplikasi terbarunya. Tujuan utamanya adalah
untuk secara progresif membimbing siswa melalui area
dasar dan untuk menunjukkan pemahaman tentang
konsep dasar kultur sel serta bagaimana melakukan
kultur sel dan menangani jalur sel. Bab ini memberikan
wawasan tentang jenis kultur sel, media kultur dan
penggunaan serum, uji viabilitas, dan signifikansi
translasi kultur sel.
Sejarah dan metode
Perkenalan
Kultur sel adalah proses di mana sel manusia, hewan,
atau serangga tumbuh dalam lingkungan buatan yang
menguntungkan. Sel-sel tersebut dapat berasal dari
eukariota multiseluler, garis sel yang sudah mapan atau mapan
menjadi teknik laboratorium yang umum, tetapi konsep
mempertahankan garis sel hidup yang terpisah dari
sumber jaringan aslinya baru ditemukan pada abad
ke-19. Kultur sel hewan kini menjadi salah satu alat
utama yang digunakan dalam ilmu kehidupan di bidang
penelitian yang memiliki potensi nilai ekonomi dan komersialisasi.
Perkembangan media kultur dasar telah memungkinkan
serta ilmuwan untuk bekerja dengan berbagai macam
penerapannya.
sel dalam kondisi yang terkendali; ini telah memainkan
peran penting dalam memajukan pemahaman kita
tentang pertumbuhan dan diferensiasi sel, identifikasi
faktor pertumbuhan, dan pemahaman tentang
mekanisme yang mendasari fungsi normal berbagai
jenis sel. Teknologi baru juga telah diterapkan untuk
menyelidiki bioreaktor densitas sel tinggi dan kondisi kultur.
Banyak produk bioteknologi (seperti vaksin virus)
pada dasarnya bergantung pada pembiakan massal
garis sel hewan. Meskipun banyak protein yang lebih
sederhana diproduksi menggunakan rDNA dalam kultur
bakteri, protein yang lebih kompleks yang mengalami
glikosilasi (modifikasi drat karbohidrat) saat ini harus
dibuat dalam sel hewan. Saat ini, penelitian kultur sel
ditujukan untuk menyelidiki pengaruh kondisi kultur pada
kelangsungan hidup, produktivitas, dan keteguhan
modifikasi pasca translasi seperti glikosilasi, yang
penting untuk aktivitas biologis protein rekombinan.
Biologis yang dihasilkan oleh teknologi recom binant
DNA (rDNA) dalam kultur sel hewan antara lain agen
antikanker, enzim, imunobiologikal [interleukin, limfokin,
antibodi monoklonal (mABs)], dan hormon.

Bioteknologi Hewan.
DOI: https://doi.org/10.1016/B978-0-12-811710-1.00012-4 269 © 2020 Elsevier Inc. Semua hak dilindungi undang-undang.
Machine Translated by Google
270 14. Prinsip dan aplikasi kultur jaringan hewan
Kultur sel hewan telah digunakan di berbagai bidang,
dari penelitian dasar hingga lanjutan. Ini telah menyediakan
sistem model untuk berbagai upaya penelitian: 1. Studi
tentang biologi sel dasar, siklus sel
mekanisme, fungsi sel khusus, interaksi cellcell dan
cellmatrix.
2. Uji toksisitas untuk mempelajari efek obat baru.
3. Terapi gen untuk mengganti gen nonfungsional
dengan sel pembawa gen fungsional.
4. Karakterisasi sel kanker, peran
berbagai bahan kimia, virus, dan radiasi pada sel
kanker.
5. Produksi vaksin, mAB, dan farmasi
narkoba.
6. Produksi virus untuk digunakan dalam produksi vaksin
(misalnya, cacar air, polio, rabies, hepatitis B, dan
campak).
Saat ini, kultur sel mamalia merupakan prasyarat untuk
pembuatan terapi biologis seperti hormon, antibodi,
interferon, faktor pembekuan, dan vaksin.
Pengembangan kultur sel hewan
Kultur sel mamalia pertama berasal dari awal abad ke-20.
Kultur awalnya dibuat untuk mempelajari perkembangan
kultur sel dan kejadian fisiologis normal seperti perkembangan
saraf. Ross Harrison pada tahun 1907 menunjukkan
pertumbuhan serat saraf pertama secara in vitro. Namun,
pada tahun 1950-an kultur sel hewan dilakukan pada skala
industri. Itu dengan epidemi besar polio pada 1940-an dan
1950-an dan persyaratan yang menyertai untuk vaksin virus
bahwa kebutuhan kultur sel dalam skala besar menjadi
jelas. Vaksin polio dari virus yang dinonaktifkan menjadi
salah satu produk komersial pertama yang dikembangkan
dari kultur sel hewan (Tabel 14.1).
Konsep dasar kultur sel
Kultur jaringan adalah pemeliharaan in vitro dan
perbanyakan jaringan sel atau organ yang diisolasi dalam
lingkungan buatan yang sesuai. Banyak sel hewan dapat
diinduksi untuk tumbuh di luar organ atau jaringan asalnya
di bawah kondisi tertentu bila dilengkapi dengan media
yang mengandung nutrisi dan faktor pertumbuhan. Untuk
pertumbuhan sel in vitro, kondisi kultur mungkin tidak
menyerupai kondisi in vivo sehubungan dengan suhu, pH,
CO2, O2, osmolalitas, dan nutrisi. Selain itu, sel yang
dikultur membutuhkan kondisi steril bersama dengan
pasokan nutrisi yang stabil untuk pertumbuhan dan kondisi
inkubasi yang canggih. Penting
II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik
faktor yang mempengaruhi pertumbuhan sel dalam media
kultur adalah media itu sendiri. Saat ini, sel-sel hewan
dibiakkan dalam media alami atau media buatan tergantung
kebutuhan percobaan. Media kultur adalah langkah paling
penting dan esensial dalam kultur jaringan hewan. Ini
tergantung pada jenis sel yang perlu dikultur untuk tujuan
diferensiasi pertumbuhan sel atau produksi produk farmasi
yang dirancang. Selain itu, media yang mengandung serum
dan bebas serum sekarang tersedia yang menawarkan
berbagai tingkat keuntungan pada kultur sel. Kondisi steril
penting dalam pengembangan garis sel.
Sel-sel dari berbagai jaringan dan organisme yang
berbeda kini tumbuh di laboratorium. Sebelumnya, tujuan
utama kultur sel adalah untuk mempelajari pertumbuhan,
persyaratan pertumbuhan, siklus sel, dan sel itu sendiri.
Saat ini, kultur homogen yang diperoleh dari kultur sel
primer merupakan alat yang berguna untuk mempelajari
asal dan biologi sel. Kultur organotipik dan histotipe yang
meniru masing-masing organ/jaringan berguna untuk
produksi jaringan buatan.
Bagaimana kultur sel diperoleh?
Ada tiga metode yang biasa digunakan untuk memulai
budaya dari hewan.
Kultur organ
Seluruh organ dari embrio atau sebagian organ dewasa
digunakan untuk memulai kultur organ in vitro. Sel-sel ini
dalam kultur organ mempertahankan karakternya yang
berbeda, aktivitas fungsionalnya, dan juga mempertahankan
arsitektur in vivo-nya. Mereka tidak tumbuh dengan cepat,
dan proliferasi sel terbatas pada pinggiran eksplan. Karena
budaya ini tidak dapat diperbanyak untuk waktu yang lama,
penjelasan baru diperlukan untuk setiap percobaan yang
mengarah pada variasi antar percobaan dalam hal
reproduktifitas dan homogenitas. Kultur organ berguna
untuk mempelajari sifat fungsional sel (produksi hormon)
dan untuk memeriksa efek agen eksternal (seperti obat-
obatan dan molekul mikro atau makro lainnya) dan produk
pada organ lain yang secara anatomi ditempatkan terpisah
in vivo.
Kultur eksplan primer
Fragmen yang diperoleh dari jaringan hewan dapat
dipertahankan dengan berbagai cara. Jaringan melekat ke
permukaan dibantu oleh konstituen matriks ekstraseluler
(ECM), seperti kolagen atau bekuan plasma, dan bahkan
dapat terjadi secara spontan. Ini menimbulkan sel-sel yang
bermigrasi dari pinggiran eksplan.
Kultur ini dikenal sebagai eksplan primer, dan sel yang
bermigrasi dikenal sebagai perkembangan. Ini telah
digunakan untuk menganalisis karakteristik pertumbuhan kanker
Machine Translated by Google

Konsep dasar kultur sel 271

TABEL 14.1 Tonggak sejarah dalam kultur sel dan mikrofluida.

1878 Claude Bernard Ditetapkan bahwa keadaan fisiologis sel yang mirip dengan sel hidup dapat dipertahankan bahkan setelah kematian
organisme.

1907 Harison Jebakan sel dan pertumbuhan serat saraf embrio katak secara in vitro.

1912 Alexis Carriel Inisiasi kultur jaringan sel jantung embrio ayam menggunakan ekstrak embrio sebagai media kultur yang dilaporkan
selama periode 34 tahun.

1913 Steinhardt, Israel, dan Lambert Tumbuhkan virus vaccinia dalam fragmen jaringan kornea babi guinea.

1916 Rous dan Jone Tripsin digunakan untuk menangguhkan sel yang menempel dalam kultur.

1927 Carrel dan Rivera Vaksin virus pertama untuk cacar air.

1948 Sanford, Earle, dan Kemungkinan Kultur sel tunggal menggunakan kapiler kaca skala mikro

1949 Enders, Weller, dan Robbins Virus polio tumbuh pada sel embrio manusia dalam kultur.

1952 Astaga Pembentukan garis sel kontinu dari karsinoma serviks manusia (sel HeLa).

1955 Burung rajawali Menetapkan kebutuhan nutrisi sel dalam kultur dan menentukan media kultur untuk pertumbuhan.

1956 Lapangan Kecil Media HAT (hypoxanthin, aminopterin, thymidine) diperkenalkan untuk pemilihan sel.

1961 Hayflick dan Moorhead Mempelajari fibroblas manusia (WI-38) dan menunjukkan umur yang terbatas dalam kultur.

1965 daging Media HAMS bebas serum pertama.

1975 Kohler dan Milstein Hibridoma pertama mensekresi antibodi monoklonal.

1977 Genetek Protein manusia rekombinan pertama: somatistatin.

1979 Terry, Jerman, dan Angell Sistem kromatografi gas menggunakan microchannels silikon-etsa

1985 Collen Aktivator plasminogen jaringan rekombinan (tPA) dalam sel mamalia. Hormon pertumbuhan manusia yang
dihasilkan dari bakteri rekombinan diterima untuk penggunaan terapeutik.

1986 persetujuan FDA Antibodi monoklonal pertama disetujui oleh FDA untuk digunakan pada manusia (Orthoclone OKT3).

1986 Genetek Protein rekombinan pertama yang dikomersialkan (interferon alfa-2a).

1989 Amgen Protein rekombinan Erythropoietin (EPO) yang diproduksi dalam sel CHO tersedia secara komersial.

1992 Manz, Harrison, Verpoorte, Fettinger, Elektroforesis chip kaca dengan mesin mikro untuk memisahkan molekul
Paulus, Ludi, dan Widmer

1992 persetujuan FDA Faktor pembekuan darah rekombinan pertama yang direkayasa secara genetik digunakan dalam pengobatan
hemofilia A.

1996 Wilmut Produksi domba transgenik (Dolly) melalui teknik transfer nuklir.

1997 Hadd, Raymond, Halliwell, Jacobson, dan Perangkat microchip untuk pengujian enzim
Ramsey

1998 Duffy, McDonald, Schueller, dan Pembuatan sistem mikrofluida menggunakan PDMS (polydimethylsiloxane)
Sisi putih

2000 Panaro, Yuen, Sakazume, Fortina, Sistem lab-on-chip (bioanalyzer)

Kricka, Wilding

2002 Cloneid Diklaim menghasilkan bayi manusia hasil kloning bernama EVE.

2003 Zheng Chip kristalisasi protein

2004 persetujuan FDA Antibodi monoklonal antiangiogenik pertama yang menghambat pertumbuhan pembuluh darah atau
angiogenesis (untuk terapi kanker).

2005 Sanford, Earle, dan Kemungkinan Kultur sel tunggal dalam sistem mikrofluida terbuka

2005 Birch Titer antibodi yang dilaporkan pada skala industri 5 g/L atau lebih.

2009 Nathalie Cartier-Lacave Terapi gen gabungan dengan terapi sel induk darah, yang mungkin menjadi alat yang berguna untuk mengobati
penyakit otak yang fatal.

2011 Melanie Welham, David Tosh Perawatan molekul 1 M menyebabkan sel punca berubah menjadi prekursor sel hati.

2012 Willison dan Klug Proteomik sel tunggal dan molekul tunggal memanfaatkan teknologi nanospace

2012 Maria Blasco Terapi gen pertama berhasil melawan penurunan terkait penuaan pada tikus.

II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik

Machine Translated by Google
272 14. Prinsip dan aplikasi kultur jaringan hewan
sel dibandingkan dengan rekan normal mereka, terutama dengan
mengacu pada perubahan pola pertumbuhan dan morfologi sel.
Budaya sel
Ini adalah metode kultur jaringan yang paling umum digunakan
dan dihasilkan dengan mengumpulkan sel-sel yang tumbuh dari
eksplan atau suspensi sel yang tersebar (mengambang bebas
dalam media kultur). Sel-sel yang diperoleh dengan perlakuan
enzimatik atau dengan cara mekanis dikultur sebagai lapisan
tunggal yang melekat pada substrat padat.
Kultur sel terdiri dari tiga jenis: (1) kultur sel prekursor, yaitu
sel-sel yang tidak berdiferensiasi yang berkomitmen untuk
berdiferensiasi; (2) kultur sel terdiferensiasi, yaitu sel yang telah
terdiferensiasi sempurna yang telah kehilangan kapasitas untuk
berdiferensiasi lebih lanjut; dan (3) kultur sel punca, yaitu sel yang
tidak berdiferensiasi yang terus berkembang menjadi semua jenis
sel.
Sel dengan jenis dan karakteristik sel yang ditentukan dipilih
dari kultur dengan kloning atau dengan metode lain; garis sel ini
menjadi strain sel.
Kultur monolayer Kultur
monolayer adalah kultur yang bergantung pada jangkar yang
biasanya setebal satu sel dengan lapisan sel yang kontinu di
bagian bawah bejana kultur.
Kultur suspensi Beberapa
sel bersifat nonadhesif dan dapat disimpan secara mekanis
dalam suspensi, tidak seperti kebanyakan sel yang tumbuh
sebagai lapisan tunggal (misalnya, sel leukemia). Ini menawarkan
banyak keuntungan dalam perbanyakan sel.
Bagian sel dan penggunaan tripsin
Passaging adalah proses subkultur sel untuk menghasilkan
sejumlah besar sel dari yang sudah ada sebelumnya. Subkultur
menghasilkan garis sel yang lebih homogen dan menghindari
penuaan yang terkait dengan kepadatan sel tinggi yang
berkepanjangan. Pemisahan sel melibatkan pemindahan sejumlah
kecil sel ke dalam setiap pembuluh baru. Setelah subkultur, sel
dapat diperbanyak, dikarakterisasi, dan disimpan. Kultur sel yang
melekat perlu dipisahkan dari permukaan labu atau cawan kultur
jaringan menggunakan protein. Protein yang disekresikan oleh sel
membentuk jembatan yang erat antara sel dan permukaan.
Campuran trypsin-EDTA digunakan untuk memecah protein di
tempat-tempat tertentu. Tripsin adalah pengurai protein atau
proteolitik; itu menghidrolisis peptida yang dicerna pepsin dengan
hidrolisis ikatan peptida.
EDTA menyerap ion logam tertentu yang dapat menghambat
aktivitas tripsin, dan dengan demikian meningkatkan kemanjuran
tripsin. Proses trypsinization dan prosedur untuk menghilangkan
sel-sel yang melekat diberikan dalam Flowchart 14.1.
II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik
Tripsinisasi
Bilas kultur monolayer
Tambahkan trypsin-EDTA
Menetaskan
Hentikan trypsinization
Sel berputar
Tambahkan media segar
Hitung sel
Benih labu baru
Inkubasi pada suhu 37°C
FLOWCHART 14.1 Tripsinisasi sel-sel yang melekat.
Kuantisasi
Kuantisasi dilakukan untuk mengkarakterisasi pertumbuhan sel
dan untuk menetapkan kondisi kultur yang dapat direproduksi.
Jumlah sel
Hemocytometer penting untuk memantau tingkat pertumbuhan
serta untuk menyiapkan kultur baru dengan nomor sel yang
diketahui. Jenis kamar hitung yang paling banyak digunakan
disebut hemositometer. Ini digunakan untuk memperkirakan
jumlah sel. Konsentrasi sel dalam suspensi ditentukan dengan
menempatkan sel dalam ruang bening secara optik di bawah
mikroskop. Jumlah sel dalam area tertentu dengan kedalaman
yang diketahui dihitung, dan konsentrasi sel ditentukan dari
hitungan.
Penghitungan elektronik
Untuk pekerjaan throughput tinggi, penghitung sel elektronik
digunakan untuk menentukan konsentrasi setiap sampel.
Kuantisasi lain Dalam
beberapa kasus, kandungan DNA atau konsentrasi protein
perlu ditentukan daripada jumlah sel.
Rekonstruksi struktur tiga dimensi
Sel yang diperbanyak sebagai suspensi sel atau monolayer
menawarkan banyak keuntungan tetapi tidak memiliki potensi
interaksi sel ke sel dan interaksi matriks sel yang terlihat pada
kultur organ. Untuk alasan ini, banyak metode kultur yang dimulai
dengan populasi sel yang tersebar mendorong susunan sel-sel ini
menjadi struktur seperti organ. Jenis budaya ini dapat dibagi
menjadi dua tipe dasar.
Machine Translated by Google
Saluran seluler
Budaya histotipik
Interaksi sel sel yang mirip dengan kepadatan seperti
jaringan dapat dicapai dengan penggunaan ECM yang sesuai
dan faktor terlarut dan dengan menumbuhkan kultur sel hingga
kepadatan sel yang tinggi. Hal ini dapat dicapai dengan (a)
menumbuhkan sel-sel dalam reservoir yang relatif besar
dengan media yang memadai dilengkapi dengan filter di mana
sel-sel tersebut penuh sesak; (b) menumbuhkan sel pada
konsentrasi tinggi pada agar atau agarosa atau sebagai agregat
yang diaduk (spheroids); dan (c) menumbuhkan sel pada
permukaan luar serat berongga di mana sel diunggulkan pada
permukaan luar dan media dipompa melalui serat dari reservoir.
Kultur organotipik Untuk
mensimulasikan interaksi sel heterotipik selain interaksi sel
homotipik, sel-sel dari garis keturunan yang berbeda
digabungkan kembali. Co-kultur klon sel epitel dan fibroblast
dari kelenjar susu memungkinkan sel untuk membedakan
fungsi di bawah lingkungan hormonal yang benar, sehingga
menghasilkan protein susu.
Jenis kultur sel
Kultur sel primer
Sel-sel ini diperoleh langsung dari jaringan dan organ melalui
disintegrasi mekanis atau kimiawi atau dengan pencernaan
enzimatik. Sel-sel ini diinduksi untuk tumbuh dalam wadah kaca
atau plastik yang sesuai dengan media kompleks.
Kultur ini biasanya memiliki tingkat pertumbuhan yang rendah
dan heterogen; namun, mereka masih lebih disukai daripada
garis sel karena ini lebih mewakili jenis sel dalam jaringan
asalnya. Struktur morfologi sel dalam kultur terdiri dari berbagai
jenis: (1) tipe epitel, yang berbentuk poligonal dan tampak pipih
karena menempel pada substrat dan membentuk lapisan tipis
yang menerus (yaitu lapisan tunggal pada permukaan padat);
(2) tipe epitheloid, yaitu bergaris luar bulat dan tidak membentuk
lembaran seperti sel epitel dan tidak menempel pada substrat;
(3) tipe fibroblast, yang berbentuk sudut dan memanjang dan
membentuk jaringan sel terbuka daripada sel yang padat,
bersifat bipolar atau multipolar, dan menempel pada substrat;
dan (4) jenis jaringan ikat, yang berasal dari jaringan fibrosa,
tulang rawan, dan tulang, dan dicirikan oleh sejumlah besar
bahan ekstraseluler berserat dan amorf.
Keuntungan dan kerugian dari kultur sel primer
Kultur ini mewakili model eksperimental terbaik untuk studi
in vivo. Mereka berbagi kariotipe yang sama dengan induknya
dan mengungkapkan karakteristik yang tidak
II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik
273
terlihat pada sel kultur. Namun, mereka sulit diperoleh dan
memiliki rentang hidup yang terbatas. Potensi kontaminasi oleh
virus dan bakteri juga merupakan kelemahan utama.
Bergantung pada jenis sel dalam kultur, pri
kultur sel mary juga dapat dibagi menjadi dua jenis.
Anchorage-dependent/adherent cells Sel-sel
ini membutuhkan permukaan nontoksik yang stabil dan
lembam secara biologis untuk perlekatan dan pertumbuhan
dan sulit untuk tumbuh sebagai suspensi sel. Sel STO fibroblast
tikus adalah sel jangkar.
Anchorage-independen / sel suspensi
Sel-sel ini tidak membutuhkan permukaan padat untuk
menempel atau tumbuh. Sel dapat tumbuh terus menerus
dalam media cair. Sumber sel adalah faktor pengatur untuk sel
suspensi. Sel-sel darah bersifat vaskular dan tersuspensi dalam
plasma dan sel-sel ini dapat dengan mudah dibentuk dalam
kultur suspensi.
Kultur sel sekunder
Ketika kultur sel primer dilewatkan atau disubkultur dan
tumbuh untuk jangka waktu yang lama dalam media segar,
mereka membentuk kultur sekunder dan tahan lama (tidak
seperti sel kultur sel primer) karena ketersediaan nutrisi segar
secara berkala. Passaging atau subkultur dilakukan dengan
pencernaan enzimatik dari sel-sel yang melekat. Ini diikuti
dengan mencuci dan menangguhkan kembali jumlah sel yang
dibutuhkan dalam volume media pertumbuhan yang sesuai.
Kultur sel sekunder lebih disukai karena mudah tumbuh dan
tersedia; mereka telah berguna dalam penelitian virologi,
imunologi, dan toksikologi.
Keuntungan dan kerugian dari kultur sel sekunder
Kultur jenis ini berguna untuk mendapatkan populasi sel
yang sama dalam jumlah besar dan dapat ditransformasikan
untuk tumbuh tanpa batas. Kultur sel ini mempertahankan
karakteristik selulernya. Kerugian utama dari sistem ini adalah
bahwa sel memiliki kecenderungan untuk berdiferensiasi
selama periode waktu tertentu dalam kultur dan menghasilkan
sel yang menyimpang.
Saluran seluler
Kultur primer, ketika disubkultur, menjadi garis sel atau galur
sel yang dapat terbatas atau kontinu, bergantung pada umurnya
dalam kultur. Mereka dikelompokkan menjadi dua jenis
berdasarkan umur budaya.
Machine Translated by Google

274 14. Prinsip dan aplikasi kultur jaringan hewan

Garis sel terbatas Kerugian utama dari kultur ini adalah ketidakstabilan kromosom,
variasi fenotip dalam kaitannya dengan jaringan donor, dan
Garis sel dengan jumlah generasi dan pertumbuhan sel yang
perubahan penanda jaringan yang spesifik dan khas (Freshney,
terbatas disebut garis sel terbatas. Sel tumbuh lambat (2496 jam).
1994).
Sel-sel ini dicirikan oleh ketergantungan jangkar dan batasan
kepadatan.

Siklus pertumbuhan
Garis sel yang tidak terbatas

Garis sel yang diperoleh dari garis sel yang diubah secara in Sel-sel dalam kultur menunjukkan pola pertumbuhan yang
vitro atau sel kanker adalah garis sel yang tidak terbatas dan dapat khas, fase lag, fase eksponensial atau log, diikuti oleh fase dataran
tinggi. Waktu penggandaan populasi sel dapat dihitung selama
ditumbuhkan dalam bentuk monolayer atau suspensi. Sel-sel ini
fase log dan fase dataran tinggi. Ini sangat penting dan dapat
membelah dengan cepat dengan waktu generasi 1214 jam dan
digunakan untuk mengukur respon sel terhadap kondisi kultur
berpotensi untuk disubkultur tanpa batas.
yang berbeda untuk perubahan konsentrasi nutrisi dan efek
Garis sel dapat menunjukkan aneuploidi (Bhat, 2011) atau
komponen hormonal atau toksik. Waktu penggandaan populasi
heteroploidi karena perubahan jumlah kromosom.
Garis sel yang diabadikan adalah sel yang diubah dengan sifat menggambarkan tingkat pembelahan sel dalam kultur dan
dipengaruhi oleh sel yang tidak tumbuh dan mati.
pertumbuhan yang berubah. Sel HeLa adalah contoh garis sel
abadi. Ini adalah sel epitel manusia yang diperoleh dari trans
karsinoma serviks fatal yang dibentuk oleh human papilloma virus
18 (HPV18).
Garis sel yang tidak terbatas mudah untuk dimanipulasi dan
dipertahankan. Namun, garis sel ini memiliki kecenderungan untuk Fase siklus pertumbuhan
berubah selama periode waktu tertentu.
Waktu penggandaan populasi, jeda waktu, dan kepadatan
saturasi dari garis sel tertentu dapat ditetapkan dan dikarakterisasi
untuk jenis sel tertentu. Kurva pertumbuhan terdiri dari kultur
Garis sel yang umum normal dan dapat dibagi menjadi fase lag, fase log, dan fase
digunakan Saat ini, untuk produksi zat aktif biologis dataran tinggi.
pada skala industri, kultur sel mamalia merupakan
prasyarat. Dengan kemajuan dalam teknologi kultur sel
Lag phase
hewan, sejumlah jalur sel telah berevolusi dan digunakan
untuk produksi vaksin, protein terapeutik, agen farmasi, Ini adalah fase pertumbuhan awal subkultur dan pembibitan
dan agen antikanker. Untuk produksi garis sel, sel ulang selama populasi sel membutuhkan waktu untuk pulih.
manusia, hewan, atau serangga dapat digunakan. Garis Jumlah sel tetap relatif konstan sebelum pertumbuhan yang cepat.
sel yang dapat tumbuh dalam suspensi lebih disukai Selama fase ini, sel menggantikan elemen glikokaliks yang hilang
karena memiliki laju pertumbuhan yang lebih cepat. selama tripsinisasi, menempel pada substrat, dan menyebar.
Ovarium hamster Cina (CHO) adalah garis sel mamalia Selama proses penyebaran, sitoskeleton muncul kembali;
yang paling umum digunakan. kemunculannya kembali mungkin merupakan bagian integral dari
Saat memilih galur sel, sejumlah parameter umum harus proses.
dipertimbangkan, seperti karakteristik pertumbuhan, waktu
penggandaan populasi, kepadatan saturasi, efisiensi pelapisan,
fraksi pertumbuhan, dan kemampuan tumbuh dalam suspensi.
Fase log Ini
Tabel 14.2 menunjukkan beberapa garis sel yang umum digunakan.
adalah periode peningkatan jumlah sel secara eksponensial
dan pertumbuhan populasi sel karena pembelahan yang
berkelanjutan. Panjang fase log tergantung pada kepadatan
penyemaian awal, laju pertumbuhan sel, dan kepadatan di mana
Keuntungan dari garis sel kontinu
proliferasi sel dihambat oleh kepadatan. Fase ini mewakili bentuk
1. Garis sel yang terus menerus menunjukkan pertumbuhan sel yang lebih cepat kultur yang paling dapat direproduksi karena fraksi pertumbuhan
dan mencapai kepadatan sel yang lebih tinggi dalam kultur. dan viabilitasnya tinggi (biasanya 90%100%), dan populasinya
2. Media bebas serum dan bebas protein untuk lini sel yang paling seragam. Namun, kultur sel tidak dapat disinkronkan, dan
banyak digunakan mungkin tersedia di pasaran. sel dapat didistribusikan secara acak dalam siklus sel.
3. Cell lines berpotensi untuk dikulturkan dalam suspensi
pada bioreaktor skala besar.

II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik

Machine Translated by Google

Pemantauan pertumbuhan sel 275

TABEL 14.2 Garis sel yang umum digunakan dan asal-usulnya.

Saluran seluler Asal Organisme

H1, H9 Sel punca embrionik Manusia

HEK-293 Ginjal embrio berubah dengan adenovirus Manusia

HeLa Sel epitel Manusia

HL 60 Sel leukemia promyelocytic manusia Manusia

MCF-7 Kanker payudara Manusia

A549 Kanker paru-paru Manusia

A1 hingga A5-E Amnion Manusia

ND-E Kerongkongan Manusia

CHO Indung telur Hamster Cina

Vero Sel epitel ginjal Monyet hijau Afrika

Cos-7 sel ginjal Monyet hijau Afrika

3T3 Fibroblas Mouse

BHK21 Fibroblas Hamster Suriah

MDCK Sel epitel Anjing

E14.1 Sel punca embrionik (tikus) Mouse

COS Ginjal Monyet

DT40 Sel limfoma anak ayam

S2 Sel mirip makrofag Drosophila

GH3 Tumor hipofisis Tikus

L6 Myoblast Tikus

Sf9 dan Sf21 Ovarium Cacing Fall Army (Spodoptera frugiperda)

ZF4 dan sel AB9 Sel fibroblas embrionik ikan zebra

Plateau phase apoptosis, dan toksisitas di lingkungan yang berbeda.

Kultur menjadi konfluen pada akhir fase log karena Hasil produk dapat ditingkatkan jika pemantauan
tingkat pertumbuhan selama fase ini berkurang, dan pertumbuhan sel dikelola dengan baik. Sejumlah faktor
proliferasi sel dapat berhenti pada beberapa kasus karena mempengaruhi pertumbuhan maksimum sel dalam reaktor batch.
kelelahan. Sel-sel bersentuhan dengan sel-sel di sekitarnya, Pengamatan sel secara teratur dalam kultur membantu
dan permukaan pertumbuhan ditempati. Pada tahap ini, memantau kesehatan sel dan tahap pertumbuhan;
kultur memasuki fase stasioner dan fraksi pertumbuhan perubahan kecil pada pH, suhu, kelembapan, O2, CO2,
turun antara 0% dan 10%. Juga, susunan dan muatan nutrisi terlarut, dll., dapat berdampak pada pertumbuhan sel.
permukaan sel dapat berubah, dan mungkin ada peningkatan Pemantauan laju pertumbuhan secara terus menerus juga
memberikan catatan bahwa sel telah mencapai kepadatan
relatif dalam sintesis protein khusus versus protein struktural.
maksimumnya dalam jangka waktu tertentu.

Karakteristik kultur sel

Pemantauan pertumbuhan sel
Kultur sel hewan dapat ditanam untuk berbagai pengujian
berbasis sel untuk menyelidiki morfologi, ekspresi protein,
pertumbuhan sel, diferensiasi,
Kultur sel hewan menunjukkan karakteristik spesifik dan
berbeda dari kultur mikroba. Karakteristik penting dari sel
hewan adalah tingkat pertumbuhan yang lambat, kebutuhan
substrat padat untuk sel-sel yang bergantung pada
penjangkaran, kurangnya dinding sel (yang mengarah ke

II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik

Machine Translated by Google

276 14. Prinsip dan aplikasi kultur jaringan hewan

kerapuhan), dan kepekaan terhadap kondisi fisiokimia
seperti pH, kadar CO2, dll. Beberapa variabel bioproses
fundamental adalah sebagai berikut:
Suhu Suhu
merupakan salah satu variabel yang paling mendasar
karena secara langsung mengganggu proses
pertumbuhan dan produksi. Dalam skala kecil, inkubator
yang dikontrol secara termostatis dapat digunakan untuk
mengontrol suhu. Namun, kultur sel yang ditanam dalam
skala besar dalam bioreaktor membutuhkan kontrol suhu
yang lebih sensitif. Bioreaktor yang berbeda menggunakan
1. Uji [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium
metode yang berbeda untuk mempertahankan suhu kultur sel. bromide] (MTT)/MTS/resazurin.
Suhu dalam bioreaktor dijaga oleh selimut panas dan 2. Uji penanda protease.
jaket air dengan sensor suhu. 3. Uji ATP.
pH
pH media kultur dapat dikontrol dengan menambahkan
larutan alkali (NaOH, KOH) atau asam (HCl).
Penambahan gas CO2 ke dalam bioreaktor, penyanggaan
dengan natrium bikarbonat, atau penggunaan larutan
penyangga alami membantu menjaga pH biakan.
Elektroda pH tipe elektrokimia perak klorida adalah
elektroda yang paling umum digunakan dalam bioreaktor.
Oksigen
Oksigen terlarut merupakan variabel paling mendasar
yang perlu terus disuplai ke media kultur sel. Itu
dikonsumsi dengan sumber karbon dalam kultur aerobik
(Moore et al., 1995). Difusi melalui permukaan cair atau
membran adalah salah satu metode untuk memberikan
oksigen terlarut ke media.
proliferasi dengan cepat dan akurat adalah persyaratan
penting dalam banyak situasi eksperimental yang
melibatkan studi in vitro dan in vivo. Penentuan jumlah
sel dapat berguna untuk menentukan aktivitas faktor
pertumbuhan, konsentrasi senyawa beracun, skrining
obat, durasi paparan, perubahan ukuran koloni, efek
karsinogenik senyawa kimia, dan efek pelarut (seperti
etanol, pro pylene , dll.).
Tes untuk mengukur sel yang layak (tes viabilitas)
adalah sebagai berikut:
Uji MTT memungkinkan penghitungan sel yang aktif
secara metabolik secara sederhana, akurat, dan andal
berdasarkan versi konversi MTT tetrazolium kuning pucat.
Nicotinamide adenine dinucleotide dalam sel aktif yang
aktif secara metabolik mereduksi senyawa tetrazolium
menjadi produk formazan berwarna cerah atau mereduksi
resazurin menjadi resorufin fluoresen (Gbr. 14.1). Tes
MTT dan resazurin banyak digunakan, karena murah dan
dapat digunakan dengan semua jenis sel. Uji penanda
protease menggunakan substrat protease sel-permeant
glycylphenylalanyl-aminofluorocoumarin (GF-AFC).
Substrat, yang tidak memiliki bagian penghambat
aminoterminal, diproses oleh aminopeptidase di dalam
sitoplasma untuk melepaskan AFC. Jumlah AFC yang
dilepaskan sebanding dengan jumlah sel yang layak.
Pengujian ini memiliki sensitivitas yang lebih baik daripada
resuzurin dan sel tetap hidup; dengan demikian,
multiplexing dimungkinkan. Uji ATP adalah uji viabilitas sel yang paling

Viabilitas sel

Jumlah sel yang layak dalam kultur memberikan

indikasi yang akurat tentang kesehatan kultur sel (Stacey
dan Davis, 2007). Trypan blue dan erythrosin B
menentukan kelangsungan hidup sel melalui hilangnya
integritas membran sel. Kedua pewarna ini tidak dapat
menembus membran sel saat membran utuh, tetapi
diambil dan ditahan oleh sel mati (yang tidak memiliki
membran utuh). Pewarnaan Erythrosin B lebih disukai
daripada Trypan blue karena menghasilkan hasil yang
lebih akurat dengan negatif palsu dan positif palsu yang
lebih sedikit.

Sitotoksisitas
Bahan kimia beracun dalam media kultur mempengaruhi
fungsi dasar sel. Efek sitotoksisitas dapat menyebabkan
kematian sel atau perubahan dalam metabolismenya. GAMBAR 14.1 Ringkasan skematis dari peristiwa biokimia dalam pengujian
Metode untuk mengakses nomor sel dan sel yang layak viabilitas yang berbeda.

II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik

Machine Translated by Google

media budaya 277

uji MTT Sel yang layak

Hari 1 Tripsinisasi sel

Aktif
Hitung/rekam sel Metabolisme

Sel di 96 sumur

Hari 2
Obati sel dengan antagonis aminopeptidase
Hari 3 Tambahkan MTT

Menetaskan GF-AFC
(Substrat tembus sel)
Hapus media

Tambahkan pelarut MTT

GAMBAR 14.3 Prinsip uji pelepasan protease luminescent.
Baca absorbansi

FLOWCHART 14.2 Pengujian MTT. LDH digunakan untuk menilai kematian sel (Gambar 14.2). Pengujian ini
banyak digunakan tetapi memiliki sensitivitas terbatas karena waktu
paruh LDH pada 37 C adalah 9 jam.
Uji pelepasan protease didasarkan pada pelepasan protease
intraseluler dari sel mati/terkompromi ke dalam media biakan. Protease
yang dilepaskan membelah substrat untuk membebaskan aminoluciferin,
yang berfungsi sebagai substrat untuk luciferase (Gambar 14.3) dan
mengarah pada produksi sinyal "glowtype" (Cho et al., 2008).

Fenomena Hayflick
Batas Hayflick atau fenomena Hayflick didefinisikan sebagai berapa
kali populasi sel normal membelah sebelum memasuki fase penuaan.

Macfarlane Burnet menciptakan istilah "batas c" pada tahun 1974.

GAMBAR 14.2 Prinsip uji pelepasan LDH.
diukur menggunakan reaksi kumbang luciferase untuk menghasilkan
cahaya. Pengujian dan prosedur MTT diberikan dalam Bagan Alir 14.2.
Hayflick dan Moorhead (1961) menunjukkan bahwa populasi sel janin
manusia normal membelah dalam kultur antara 40 dan 60 kali sebelum
berhenti. Tampaknya ada korelasi antara jumlah maksimum bagian dan
penuaan. Fenomena ini terkait dengan panjang telomer. Mitosis berulang
menyebabkan pemendekan telomere pada DNA sel.

Pemendekan telomer pada manusia pada akhirnya membuat pembelahan

Tes untuk mendeteksi sel mati adalah sebagai berikut:
1. Pelepasan laktat dehidrogenase (LDH).
2. Pelepasan protease.
3. Pewarnaan DNA.
Sel-sel yang layak dalam kultur memiliki membran luar yang utuh.
Hilangnya integritas membran mendefinisikan sel "mati". Sel mati dapat
dideteksi dengan mengukur aktivitas enzim penanda yang keluar dari
sel mati ke dalam media biakan atau dengan mewarnai kandungan
sitoplasma atau inti dengan pewarna vital yang hanya dapat masuk ke
sel mati. LDH adalah enzim yang ada di semua jenis sel. Ini mengkatalisis
oksidasi laktat menjadi piruvat dengan adanya ko-enzim NAD1. Pada sel
yang rusak, LDH dilepaskan dengan cepat. Jumlah yang dikeluarkan
sel menjadi tidak mungkin, dan berkorelasi dengan penuaan. Ini
menjelaskan penurunan pasase sel yang dipanen dari individu yang
lebih tua.
media budaya
Salah satu faktor terpenting dalam kultur sel hewan adalah komposisi
media. Pertumbuhan in vitro dan pemeliharaan sel-sel hewan
membutuhkan nutrisi yang tepat, hormonal, dan faktor stroma yang
menyerupai lingkungan in vivo mereka sedekat mungkin. Faktor
lingkungan yang penting adalah media di mana sel dikelilingi, substrat di
mana sel itu berada

II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik

Machine Translated by Google
278 14. Prinsip dan aplikasi kultur jaringan hewan
pertumbuhan sel, suhu, konsentrasi oksigen dan karbon dioksida,
pH, dan osmolalitas. Selain itu, sel membutuhkan zat kimia yang
tidak dapat disintesis oleh sel itu sendiri. Setiap media yang berhasil
terdiri dari senyawa isotonik, dengan berat molekul rendah yang
dikenal sebagai media basal dan menyediakan garam organik,
sumber energi, asam amino, dan berbagai suplemen.
Komponen dasar dalam media kultur
10 komponen dasar penyusun sebagian besar media
kultur sel hewan adalah sebagai berikut: garam anorganik
(Ca21, Mg21, Na1, K1), sumber nitrogen (asam amino),
sumber energi (glukosa, fruktosa), vitamin, lemak dan
lemak. komponen larut (asam lemak, kolesterol), prekursor
asam nukleat, faktor pertumbuhan dan hormon, antibiotik,
pH dan sistem penyangga, dan konsentrasi oksigen dan
karbon dioksida.
Formulasi lengkap media yang mendukung pertumbuhan dan
pemeliharaan kultur sel mamalia sangat kompleks. Untuk alasan ini,
media kultur pertama yang digunakan untuk kultur sel didasarkan
pada cairan biologis seperti plasma, serum getah bening, dan
ekstrak embrionik. Kebutuhan nutrisi sel dapat bervariasi pada
berbagai tahap siklus kultur. Jenis sel yang berbeda memiliki
persyaratan yang sangat spesifik, dan media yang paling cocok
untuk setiap jenis sel harus ditentukan secara eksperimental. Media
dapat diklasifikasikan menjadi dua kategori: (1) media alami dan (2)
media buatan.
Media alami
Media alami terdiri dari cairan biologis alami yang cukup untuk
pertumbuhan dan proliferasi sel dan jaringan hewan. Media yang
berguna untuk mendorong pertumbuhan sel ini terdiri dari tiga jenis:
1. Koagulan atau gumpalan: Plasma dipisahkan dari
darah heparin dari ayam atau hewan lain tersedia secara
komersial dalam bentuk plasma cair.
2. Cairan biologis: Ini termasuk cairan tubuh seperti plasma, getah
bening serum, cairan ketuban, cairan pleura, hemolimf
serangga, dan serum betis janin. Cairan ini digunakan sebagai
media kultur sel setelah pengujian toksisitas dan sterilitas.
3. Ekstrak jaringan: Ekstrak hati, limpa, tulang
sumsum tulang, dan leukosit digunakan sebagai media
kultur sel. Ekstrak embrio ayam merupakan ekstrak jaringan
yang paling umum digunakan pada beberapa media kultur.
Media buatan Media
mengandung sebagian atau seluruh komponen yang ditentukan
yang dibuat secara artifisial dengan menambahkan beberapa nutrisi
(organik dan anorganik). Ini berisi larutan garam seimbang dengan
pH spesifik dan osmotik
II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik
tekanan yang dirancang untuk kelangsungan hidup segera sel.
Media buatan yang dilengkapi dengan serum atau dengan formulasi
senyawa organik yang sesuai mendukung kelangsungan hidup
kultur sel yang lebih lama.
Media buatan dapat dikelompokkan ke dalam empat kelas
berikut: media yang mengandung serum, media bebas serum, media
yang ditentukan secara kimiawi, dan media bebas protein.
Serum
Cairan bening kekuningan yang diperoleh setelah fibrin dan sel
dikeluarkan dari darah dikenal sebagai serum. Ini adalah suplemen
media yang tidak ditentukan dari campuran yang sangat kompleks
dari molekul kecil dan besar dan mengandung asam amino, faktor
pertumbuhan, vitamin, protein, hormon, lipid, dan mineral, di antara
komponen lainnya (Tabel 14.3) .
Keuntungan serum dalam media kultur sel 1. Memiliki
nutrisi dasar yang ada baik dalam bentuk larut atau dalam bentuk
terikat protein.
2. Menyediakan beberapa hormon seperti insulin dan transferrin.
Insulin sangat penting untuk pertumbuhan hampir semua sel
dalam kultur dan transferin bertindak sebagai pengikat besi.
3. Mengandung banyak faktor pertumbuhan seperti
platelet-derived growth factor (PDGF), transforming growth factor
beta (TGF-B), epidermal growth factor (EGF), dan chondronektin.
Faktor-faktor ini merangsang pertumbuhan sel dan mendukung
fungsi khusus sel.
4. Ini memasok protein, yang membantu perlekatan sel ke permukaan
biakan (misalnya, fibronektin).
5. Menyediakan protein pengikat seperti albumin dan
transferin, yang membantu mengangkut molekul dalam sel.
6. Menyediakan mineral seperti Ca21, Mg21, Fe21, K1
Na1, Zn21, dll., yang meningkatkan perlekatan sel.
7. Meningkatkan viskositas medium, yang memberikan
perlindungan terhadap kerusakan mekanis selama agitasi
dan aerasi kultur suspensi.
8. Memberikan tekanan osmotik yang sesuai.
Kerugian media yang mengandung serum 1. Mahal: Fetal
calf serum mahal dan sulit diperoleh dalam jumlah banyak.
2. Variasi: Variasi batch-to-batch terjadi pada serum, dan tidak ada
keseragaman dalam komposisi serum.
Hal ini dapat mempengaruhi pertumbuhan dan hasil serta dapat
memberikan hasil yang tidak konsisten.
3. Kontaminasi: Media serum berisiko tinggi terkontaminasi virus,
jamur, dan mikoplasma.
Machine Translated by Google

media budaya 279

TABEL 14.3 Komponen serum, komposisinya, dan perannya dalam kultur sel hewan.

Komponen Fungsi kemungkinan

Protein dan polipeptida

Albumin Agen pengikat dan penyangga utama, antioksidan, pengangkut molekul yang tidak larut
Transferin Pengkhelat besi dan transporter

Fraksi alfa, beta, dan gamma globulin Mengikat besi dan pembawa besi dan mencegah infeksi

Protein pengatur Mengatur ekspresi gen

Faktor pertumbuhan
Faktor pertumbuhan epidermal (EGF) Proliferasi dan diferensiasi

Faktor pertumbuhan fibroblas (FGF) Proliferasi dan diferensiasi

Hormon
Insulin Metabolisme glukosa dan protein
Transferin Penggabungan besi oleh sel

4. Faktor sitotoksik dan penghambat: Serum itu sendiri
mungkin sitotoksik dan mungkin mengandung faktor
penghambat, yang pada gilirannya dapat menghambat
pertumbuhan dan proliferasi sel kultur. Enzim poliamina
oksidase dalam serum bereaksi dengan poliamina seperti
spermin dan spermidin untuk membentuk poliamino-aldehida sitotoksik.dan prion).
5. Proses hilir: Adanya serum dalam media kultur dapat
mengganggu isolasi dan pemurnian produk kultur. Langkah
tambahan mungkin diperlukan untuk mengisolasi produk
kultur sel.
Media bebas serum
3. Mereka mengurangi variabilitas dari batch ke batch dan
meningkatkan reproduksi antar budaya.
4. Pengolahan hilir produk dari kultur sel dalam media
bebas serum lebih mudah.
5. Mengurangi risiko kontaminasi mikroba (mikoplasma, virus,
6. Media bebas serum mudah didapat dan siap pakai. Mereka
juga hemat biaya jika dibandingkan dengan media yang
mengandung serum.
Kerugian dari media bebas serum 1. Laju
pertumbuhan dan densitas saturasi yang dicapai lebih rendah
daripada media yang mengandung serum.

Penggunaan serum dalam media kultur menghadirkan bahaya
keamanan dan sumber kontaminasi yang tidak diinginkan untuk
produksi biofarmasi. Karena sejumlah garis sel dapat ditumbuhkan
dalam media bebas serum yang dilengkapi dengan komponen
tertentu dari serum janin sapi, pengembangan media jenis ini
dengan komposisi tertentu telah meningkat dalam beberapa
dekade terakhir.
Eagle (1959) mengembangkan “media esensial minimal” yang
terdiri dari garam seimbang, glukosa, asam amino, dan vitamin.
Dalam 50 tahun terakhir, pekerjaan yang cukup besar telah
dilakukan untuk mengembangkan media kultur yang lebih efisien
untuk memenuhi kebutuhan spesifik garis sel tertentu.
2. Media bebas serum terbukti lebih mahal karena melengkapi
dengan hormon dan faktor pertumbuhan meningkatkan
biaya secara besar-besaran.
3. Media yang berbeda diperlukan untuk jenis sel yang berbeda
karena setiap spesies memiliki persyaratan karakteristiknya
sendiri.
4. Diperlukan kontrol kritis terhadap pH dan suhu serta
kemurnian ultra reagen dan air dibandingkan dengan
media yang mengandung serum.
Media yang ditentukan secara kimiawi

Media ini mengandung konstituen anorganik dan organik murni

Keuntungan media biakan bebas serum 1. Media
bebas serum disederhanakan, dan komposisinya
lebih jelas.
2. Mereka dapat dirancang khusus untuk jenis sel. Dimungkinkan
untuk membuat media yang berbeda dan untuk beralih dari
media penambah pertumbuhan ke media pemicu diferensiasi
dengan mengubah kombinasi dan jenis faktor pertumbuhan
dan penginduksi.
bersama dengan tambahan protein seperti EGF, insulin, vitamin,
asam amino, asam lemak, dan kolesterol.
media bebas protein
Media ini mengandung konstituen nonprotein yang diperlukan
untuk kultur sel. Formulasi DME, MEM, RPMI-1640, ProCHO TM,
dan CDM-HD adalah

II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik

Machine Translated by Google

280 14. Prinsip dan aplikasi kultur jaringan hewan

contoh media bebas protein Mereka mempromosikan pertumbuhan Pengujian stabilitas

sel yang sangat baik dan memfasilitasi pemurnian hilir produk
yang diekspresikan.
Karakterisasi garis sel
Karakterisasi garis sel penting untuk memastikan kualitas
produk biofarmasi turunan sel. Ini membantu dalam menentukan
sumber sel sehubungan dengan identitasnya dan keberadaan
garis sel lain, kontaminan molekuler, dan agen endogen.
Karakterisasi dan pengujian substrat sel (cell line yang berasal
dari sumber manusia atau hewan) merupakan salah satu komponen
terpenting dalam pengendalian produk biologi. Ini membantu untuk
mengkonfirmasi identitas, kemurnian, dan kesesuaian substrat sel
untuk penggunaan manufaktur. Stabilitas substrat harus diperiksa
minimal dua titik waktu selama budidaya untuk produksi. Selain itu,
stabilitas genetik dapat diuji dengan pengurutan genomik atau
transkrip, analisis peta restriksi, dan penentuan nomor salinan
(pedoman FDA, 2012).

Karakterisasi galur sel mamalia bersifat spesifik spesies dan dapat

bervariasi tergantung pada riwayat galur sel dan jenis komponen
media yang digunakan untuk pembiakan.
Tes pengujian virus
Karakterisasi garis sel mamalia dapat dilakukan dengan empat
Pengujian virus terhadap substrat sel harus dirancang untuk
cara: 1. Pengujian identitas. mendeteksi spektrum virus. Tes skrining yang tepat harus dilakukan
berdasarkan budidaya garis selnya. Perkembangan dari efek

2. Pengujian kemurnian. cytopathogenic karakteristik (CPE) memberikan indikasi awal

3. Pengujian stabilitas. kontaminasi virus. Beberapa virus yang menjadi perhatian khusus
4. Uji keamanan virologi. dalam kerja produksi sel adalah human immunodeficiency virus,
human papilloma virus, hep atitis virus, human herpes virus,
hantavirus, simian virus, sendai virus, dan bovine virus diare virus.
Tes identitas

Pengujian identitas dapat dilakukan dengan analisis isoenzim.

Untuk deteksi virus yang menyebabkan penyakit imunodefisiensi
Pola pita enzim intraseluler (yang spesifik spesies) dapat ditentukan
dan hepatitis, deteksi urutan dengan tes PCR sudah memadai. Sel
dengan menggunakan gel agarosa. Sidik jari DNA dan pengetikan
yang terpapar serum atau bovine serum albumin memerlukan tes
kario, serta pengurutan DNA dan RNA adalah metode alternatif
virus bovine.
untuk pengujian identitas.
Beberapa tes pengujian virus adalah tes plak XC, tes fokus S 1 L,
tes transkripsi terbalik. XC pla que assay digunakan untuk
Karyotyping mendeteksi retrovirus murine ekotropik yang menular. S 1 L-focus
assay digunakan untuk menguji sel untuk keberadaan retrovirus
Karyotyping penting karena menentukan setiap perubahan
murine xenotropik dan amfotropik menular yang mampu berinteraksi
kromosom kotor dalam garis sel. Kondisi pertumbuhan dan
dengan sel murine dan nonmurine.
subkultur garis sel dapat menyebabkan perubahan kariotipe;
misalnya, sel HeLa adalah garis sel kanker epitel manusia pertama
Uji real-time (RT) seperti uji transkriptase terbalik produk-enhanced
yang dibentuk dalam kultur jangka panjang, dan mereka memiliki
(FPERT) fluoresen waktu-nyata dan uji kuantitatif real-time untuk
nomor kromosom hiper triploid (3n1).
transkrip terbalik produk fluoresen yang ditingkatkan (QPERT)
mendeteksi konversi templat RNA menjadi cDNA karena adanya
template RT ketika infeksi retrovirus hadir di garis sel.
Pengujian kemurnian

Kontaminasi bakteri dan jamur pada garis sel terjadi karena

teknik dan bahan sumber yang tidak murni.
Terjadinya kontaminan dapat diuji dengan metode inokulasi
langsung pada dua media yang berbeda.
Infeksi mikoplasma adalah kontaminasi kultur sel/garis sel dengan
mikoplasma, dan merupakan masalah serius. Deteksi dengan
mikroskop tidak memadai dan memerlukan pengujian tambahan
dengan PCR pewarnaan fluoresen, uji ELISA, autoradiografi,
pewarnaan imun, atau uji mikrobiologi.
Keuntungan dari kultur sel hewan
1. Kondisi fisikokimia dan fisiologis: Peran dan pengaruh pH,
suhu, konsentrasi O2/CO2 , dan tekanan osmotik media
kultur dapat diubah untuk mempelajari pengaruhnya terhadap
kultur sel (Freshney, 2010).

II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik

Machine Translated by Google
Signifikansi terjemahan
2. Metabolisme sel: Untuk mempelajari metabolisme sel dan
menyelidiki fisiologi dan biokimia sel.
3. Uji sitotoksik: Pengaruh berbagai senyawa atau
obat pada jenis sel tertentu seperti sel hati dapat dipelajari.
4. Kultur homogen: Kultur ini membantu mempelajari biologi dan
asal sel.
5. Data biologis berharga dari sel berskala besar
kultur: Protein spesifik dapat disintesis dalam jumlah besar
dari sel yang dimodifikasi secara genetik dalam kultur skala
besar.
6. Konsistensi hasil: Reproduktifitas hasil yang dapat diperoleh
dengan menggunakan jenis tunggal/populasi klon.
7. Identifikasi jenis sel: Jenis sel tertentu dapat dideteksi dengan
keberadaan penanda seperti molekul atau kariotipe.
8. Etika: Pertanyaan etika, moral, dan hukum untuk
memanfaatkan hewan dalam percobaan dapat dihindari.
Kerugian dari kultur sel hewan
1. Pengeluaran dan keahlian: Ini khusus
teknik yang membutuhkan kondisi aseptik, personel terlatih,
dan peralatan mahal.
2. Dediferensiasi: Karakteristik sel dapat berubah setelah
periode pertumbuhan sel yang berkelanjutan dalam kultur,
yang menyebabkan sifat terdiferensiasi dibandingkan dengan
strain aslinya.
3. Jumlah produk yang rendah: Jumlah mAB dan protein
rekombinan yang sangat kecil yang dihasilkan diikuti oleh
pemrosesan hilir untuk mengekstraksi produk murni
meningkatkan biaya secara luar biasa.
4. Kontaminasi: Mycoplasma dan infeksi virus sulit dideteksi dan
sangat menular.
5. Ketidakstabilan: Konstitusi kromosom aneuploidi dalam garis sel
kontinu menyebabkan ketidakstabilan.
Selain itu, sistem ini tidak dapat menggantikan hewan hidup yang
kompleks untuk menguji respons bahan kimia atau dampak vaksin
atau racun.
Masalah etika
Meskipun banyak kemajuan dalam pengembangan teknik kultur
sel, potensi biohazard bekerja dengan jaringan hewan dan manusia
menghadirkan sejumlah masalah etika, termasuk masalah pengadaan,
penanganan, dan penggunaan akhir bahan. Di sebagian besar
negara, penelitian biomedis diatur secara ketat. Perundang-undangan
sangat bervariasi di berbagai negara. Komite etik penelitian, komite
etik hewan berbasis hewan
II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik
281
penelitian, dan dewan penelitian kelembagaan untuk subjek manusia
memiliki peran utama dalam tata kelola penelitian.
Beberapa pedoman untuk penggunaan hewan percobaan atau
donor termasuk jaminan kondisi yang layak untuk hewan kandang
dan rasa sakit atau ketidaknyamanan yang minimal untuk hewan
yang dibunuh atau dioperasi.
Pedoman ini berlaku untuk vertebrata yang lebih tinggi dan tidak
untuk vertebrata yang lebih rendah seperti ikan atau invertebrata lainnya.
Penggunaan serum janin sapi dalam media kultur
hewan
Fetal bovine serum (FBS)-media yang ditambahkan biasanya
digunakan dalam kultur sel hewan. Dalam beberapa tahun terakhir,
metode produksi FBS menjadi sorotan karena masalah kesejahteraan
hewan. FBS dipanen dari janin sapi yang diambil dari sapi bunting
saat penyembelihan. Metode umum pengambilan janin adalah
dengan tusukan jantung tanpa anestesi apapun. Praktik pengambilan
FBS ini tidak manusiawi karena membuat janin merasa sakit dan/
atau tidak nyaman. Selain masalah moral, ada banyak masalah
ilmiah dan teknis sehubungan dengan penggunaan FBS dalam kultur
sel. Upaya sekarang sedang dilakukan untuk mengurangi penggunaan
FBS dan menggantinya dengan alternatif sintetis.
Dalam kasus jaringan manusia, beberapa pertimbangan itu
yang perlu diperhatikan adalah sebagai berikut (Freshney, 2011):
1. Persetujuan: Persetujuan pasien dan/atau kerabat atas
penggunaan tisu.
2. Ringkasan proyek: Penjelasan proyek, termasuk tujuan,
hasil, dan manfaat kesehatan dari penelitian.
3. Permintaan izin: Dokumen tentang kemungkinan
penggunaan tisu.
4. Kepemilikan: Penetapan kepemilikan sehubungan dengan
cell lines dan turunannya.
5. Masalah paten: Penggunaan jaringan secara komersial.
Signifikansi terjemahan
Dalam penelitian biomedis, penggunaan kultur sel hewan dan
manusia telah bermanfaat untuk beragam aplikasi. Ini menyediakan
alat yang sangat diperlukan untuk memproduksi sejumlah produk,
termasuk biofarmasi, mAB, dan produk untuk terapi gen. Selain itu,
kultur sel hewan menyediakan sistem uji yang memadai untuk
mempelajari jalur biokimia, respons intra dan interseluler, mekanisme
patologis, dan produksi virus. Beberapa aplikasi kultur sel hewan
dibahas di bawah ini.
Machine Translated by Google
282 14. Prinsip dan aplikasi kultur jaringan hewan
TABEL 14.4 Vaksin hepatitis B rekombinan dalam sel eukariotik.
Nama dagang Pembuatan
Sci B-Vac SciGen
GenHevac B Pasteur-Merieux Aventis
Enivac HB Panacea Biotec Ltd
Revac-B Bharat Biotech International Ltd
Vaksin antivirus
Teknologi kultur sel hewan telah memainkan peran
penting dalam pengembangan produksi vaksin virus.
Penetapan teknologi kultur sel pada tahun 1950-an dan
sebagai akibatnya penggantian hewan hidup untuk
pengembangan antigen telah menyebabkan kemajuan
besar dalam teknologi bioproses. Dengan munculnya
teknologi DNA, manipulasi molekuler virus telah mengarah
pada pengembangan vaksin rekombinan terhadap virus
hepatitis B (HBV) dan beberapa vaksin potensial lainnya
yang sedang dalam tahap akhir uji klinis. Tabel 14.4 daftar
vaksin hepatitis B rekombinan dalam sel eukariotik.
Produksi partikel virus oleh kultur sel
Produksi partikel virus oleh kultur sel berbeda dengan
produksi molekul seperti protein, enzim, dan racun oleh
bakteri atau sel hewan. Pembentukan produk mungkin
tidak terkait dengan perkembangan atau pertumbuhan sel
dan dapat terjadi melalui jalur metabolisme sekunder,
tidak seperti produksi virus, yang tidak dihasilkan dari jalur
metabolisme sekunder.
Produksi virus terjadi setelah infeksi virus mengarahkan
mesin sel untuk melakukan produksi partikel virus.
Dua tahap terlibat dalam produksi virus:
1. Sistem kultur sel: Ini membutuhkan pengembangan
sistem yang efisien untuk konversi substrat media
kultur dalam massa sel.
2. Produksi virus: Fase ini berbeda dengan
fase infeksi dan memiliki kebutuhan nutrisi dan
metabolisme yang berbeda. Sejumlah garis sel yang
diabadikan digunakan untuk produksi industri vaksin
virus. Tabel 14.5 memberikan garis sel yang digunakan
untuk vaksin.
Produksi partikel mirip virus
Sebagian besar vaksin klasik yang ada untuk penyakit
virus adalah virus hidup yang diubah atau tidak aktif
secara kimiawi. Namun, inaktivasi virus atau
II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik
Protein rekombinan Tuan rumah ekspresi
protein HBsAgS, M, dan L Sel mamalia (CHO)
protein HBsAg S dan M Sel mamalia (CHO)
protein HBsAg S Ragi (P. pendeta)
protein HBsAg S Ragi (P. pendeta)
TABEL 14.5 Garis sel yang digunakan untuk produksi vaksin virus.
Garis sel Asal
BHK-21 Ginjal (hamster)
Vero Ginjal (monyet hijau Afrika)
MDCK Ginjal (cocker spaniel)
CHO Hamster Cina
Hela Sel epitel (manusia)
pengembalian strain yang dilemahkan dapat berisiko
infeksi pada individu yang divaksinasi. Virus dengan gen
tersegmentasi dengan tingkat pertukaran genetik yang
tinggi dapat menjalani re-assortment atau rekombinasi
materi genetik dengan virus dari serotipe berbeda dalam
inang yang divaksin, yang dapat menghasilkan produksi
varian virus baru. Selain itu, beberapa vaksin virus hidup
bersifat teratogenik; misalnya, Smithburn neu rotropic
strain (SNS) (Smithburn, 1949) dan MP12-dilemahkan
(Caplen et al., 1985) strain vaksin dari virus demam Rift
Valley. Jenis vaksin baru yang tidak menunjukkan efek
samping yang khas dari vaksin virus yang dilemahkan
atau tidak aktif telah dimungkinkan dengan pengembangan
teknologi rDNA.
Partikel mirip virus (VLP) sangat efektif karena meniru
struktur keseluruhan virus; namun, partikel-partikel ini
tidak memiliki materi genetik menular. Protein kapsid
dapat beragregasi untuk membentuk partikel seperti inti
tanpa adanya asam nukleat. Partikel-partikel yang
berkumpul secara spontan ini secara struktural mirip
dengan virus otentikasi dan mampu merangsang sel-B yang dimediasi
respon imun. Selain itu, VLP merangsang respons
proliferatif CD4 dan respons limfosit T sitotoksik (Jeoung
et al., 2011).
VLP menyerupai dan meniru struktur virus dan mampu
menimbulkan respons kekebalan yang kuat tanpa
menyebabkan kerusakan. Keuntungan utama VLP adalah
kesederhanaan dan sifat nonpatogeniknya. Mereka
kekurangan replikasi karena kekurangan informasi genetik
virus, sehingga menghilangkan kebutuhan untuk inaktivasi virus.
Ini penting karena perawatan inaktivasi mengarah pada
modifikasi epi tope (Cruz et al., 2002). Sebagai struktural
Machine Translated by Google

Protein terapeutik rekombinan 283

morfologi VLP mirip dengan virus, epitop konformasi Protein terapeutik rekombinan
yang disajikan ke sistem kekebalan sama dengan partikel
virus asli. Respons imun/reaktivitas antibodi dalam kasus Protein memainkan peran utama dalam melakukan
VLP meningkat secara signifikan karena VLP menghadirkan reaksi biokimia, mengangkut molekul kecil di dalam sel
epitop konformasi yang lebih mirip dengan virus asli. VLP atau dari satu organ ke organ lain, pembentukan reseptor
juga menginduksi respons sel-B yang kuat. Untuk dan saluran dalam membran, dan menyediakan kerangka
perlindungan yang lebih luas dan lebih efisien, kerja untuk perancah. Jumlah protein yang berbeda
dimungkinkan untuk menyesuaikan satu atau lebih antigen secara fungsional pada manusia jauh melebihi jumlah gen
dengan struktur protein multimerik. Keuntungan lain yang akibat modifikasi pasca-translasi. Modifikasi ini termasuk
ditawarkan oleh VLP adalah bahwa VLP secara signifikan glikosilasi, fosforilasi, negara ubiquiti, nitrosilasi, metilasi,
mengurangi biaya vaksin karena dapat menimbulkan asetilasi, dan lipidasi. Perubahan struktur protein akibat
respons protektif pada dosis antigen yang lebih rendah. mutasi atau kelainan lain sering menimbulkan kondisi
sakit. Terapi protein menawarkan peluang luar biasa untuk
Vaksin berdasarkan partikel mirip virus mengurangi penyakit. Terapi pertama dari sel mamalia
FDA telah menyetujui vaksin berbasis VLP untuk HBV rekombinan adalah plasminogen jaringan manusia, yang
memperoleh persetujuan pasar pada tahun 1986. Saat
dan HPV. Vaksin HBV disetujui pada tahun 1986 dan
vaksin HPV pada tahun 2006 (Justin et al., 2011). Untuk ini, 60%70% dari semua protein apeutik rekombinan
menghasilkan VLP imunogenik, gen S dikloning dan diproduksi dalam sel mamalia.
diekspresikan dalam host ekspresi eukariotik seperti sel
ragi atau mamalia (misalnya, garis sel CHO). Kultur sel
mamma lian memungkinkan pemulihan yang mudah
karena sel mampu mensekresikan antigen HBsAg. Dua
Protein terapeutik utama
perusahaan yang memproduksi vaksin berbasis CHO Protein terapeutik utama dapat dibagi menjadi tujuh
adalah Pasteur-Merieux Aventis (Gene Hevac B) yang kelompok (Walsh, 2003): 1. Sitokin 2. Faktor pertumbuhan
berbasis di Prancis dan SciGen (Sci-B-Vac) yang berbasis
di Israel. Vaksin Gene Hevac B mengandung protein hematopoietik 3. Faktor pertumbuhan 4. Hormon 5. Produk
HBsAg S dan protein M, sedangkan Sci-B-Vac mengandung protein 6.
darah M Enzim
dan L. 7. Antibodi

Vaksin virus papiloma manusia

Virus dari keluarga Papillomaviridae diketahui
menyebabkan lesi dan kutil dan juga menyebabkan kanker serviks.
Sebagian besar protein memiliki struktur kompleks dan
Lima belas strain Papillomaviridae diketahui menyebabkan
menjalani modifikasi kimiawi untuk memastikan aktivitas
kanker serviks. HPV-16 dianggap sebagai jenis HPV risiko
biologis penuh. Modifikasi pasca-translasi protein (PTM)
tinggi karena risiko kanker mungkin lebih tinggi daripada
dapat terjadi dalam beberapa cara. Bentuk PTM yang
jenis HPV risiko tinggi lainnya. Dua protein virus HPV
paling dikenal luas adalah glikosilasi, yang melibatkan
yang dikodekan adalah L1 dan L2. L1 adalah protein
kapsid utama yang membentuk kulit terluar virus. L2 pemrosesan dan pemangkasan urutan ekstensif di
aparatus Golgi dan retikulum endoplasma.
ditemukan di bagian dalam partikel virus dan jumlahnya lebih sedikit.
Sel eukariotik mampu melakukan modifikasi jenis ini dan
L1 VLP rekombinan mampu menginduksi antibodi penawar
pada hewan. Gardasil (vaksin HPV pertama) telah disetujui karenanya lebih disukai dalam proses biofarmasi. Hamster,
ginjal bayi hamster (BHK), dan sel CHO sering menjadi
oleh FDA pada tahun 2006. Vaksin ini dibuat oleh manusia
sel inang pilihan karena pola kosilasi gli yang dihasilkan
oleh Merck and Co., Inc. Ceravarix, vaksin HPV lainnya
dari sel-sel ini lebih mirip dengan pola manusia. Tabel
(diproduksi oleh Glaxo Smithkline), disetujui oleh FDA
14.7 mencantumkan berbagai protein apeutik yang
pada tahun 2009. garis sel serangga Trichoplusia ni (Hi-5)
yang terinfeksi baculovirus rekombinan L1 (Jiang et al., diproduksi dalam galur sel hewan.
1998; Wang et al., 2000).
Sejumlah vaksin berbasis VLP lainnya sedang dalam Sitokin
uji klinis. Ini termasuk vaksin VLP anti-influenza A M2- Sitokin adalah protein dari sistem kekebalan tubuh
HBcAg (Clarke et al., 1987), dua vaksin antimalaria nikotin- yang memainkan peran sentral dalam respon imun. Sitokin
Qÿ VLP (Maurer et al., 2005), dan VLP anti AngIIQÿ. diproduksi sebagai hasil dari rangsangan kekebalan oleh
Produksi VLP pada galur sel mamalia dan galur sel Baculo berbagai sel darah putih. Interferon (IFNs) adalah keluarga
dari virus yang menginfeksi manusia dan hewan lain sitokin pertama yang ditemukan dan digunakan sebagai
dirangkum dalam Tabel 14.6. biofarmasi.

II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik

Machine Translated by Google

284 14. Prinsip dan aplikasi kultur jaringan hewan

TABEL 14.6 Produksi VLP pada lini sel mamalia dan baculo dari virus yang menginfeksi manusia dan hewan lain.

Virus Sistem ekspresi Sel Protein rekombinasi Referensi

SIV B/IC Sf9 Protein amplop gag Pr55 Yamshcikov dkk.

(1995)

Ebola sel manusia HEK293T VP40 dan glikoprotein Licata et al. (2004)

Rotasi virus B/IC Sf9 VP2, VP6, VP7 Parez dkk. (2004)

SARS-CoV Sistem sel serangga Baculovirus Sf21 protein E dan M Ho dkk. (2004)

SARS Sistem kultur sel serangga Sf-9 Protein S, protein E, dan protein M Mortola dan Roy
(2004)

Marburg dan Sistem kultur sel mamalia 293T sel VP40 dan glikoprotein Swenson et al.
Virus ebola (2005)

AAV Sistem kultur sel serangga dan sistem kultur sel SF-9 dan VP1, VP2, dan VP3 Aucoin dkk.
mamalia HEK 293 (2007)

HIV-1 Sistem ekspresi sel serangga Baculovirus Sf-21 Protein gag HIV seperti GagTN dan Pillay et al. (2009)
GagRT
Influenza A Sistem ekspresi Baculovirus Sf-9 protein H1N1, protein M1, dll. Krammer dkk.
(2010)

MERS-CoV Baculovirus rekombinan (rBV) Sf9 Spike (S), amplop (E), dan Wang dkk. (2017)
protein membran (M).
ZIKV CHO HEK293 antigen rH7 Chen dkk. (2019)

AAV, virus terkait adeno; rBV, baculovirus rekombinan; ZIKV, virus Zika.

Aplikasi interferon 2. InductOS/Dibotermin (tulang morphogenetic

IFNÿ digunakan untuk pengobatan hepatitis, dan baru-baru
ini telah disetujui untuk leukemia dan jenis kanker lainnya. IFNÿ
digunakan untuk pengobatan multiple sclerosis dan dipasarkan
dengan nama Avonex, Belaseron, dan Rebif. IFNÿ digunakan
untuk pengobatan penyakit granulomatosa kronis. Interleukin
adalah jenis sitokin lain yang membantu mengatur pertumbuhan
sel, diferensiasi, dan motilitas dan digunakan sebagai biofarmasi.
Bentuk rekombinan IL-2 digunakan untuk pengobatan karsinoma
sel ginjal.
Faktor pertumbuhan
Faktor pertumbuhan adalah protein yang berikatan dengan
reseptor pada permukaan sel untuk mengaktifkan sel untuk
proliferasi dan atau diferensiasi. Berbagai jenis faktor pertumbuhan
adalah TGF, faktor pertumbuhan seperti insulin, dan (EGF.
Sumber utama PDGF adalah trombosit, sel endotel, dan plasenta.
Dua isoform dari protein ini terdapat dalam tubuh manusia dan
keduanya memiliki satu situs glikosilasi dan tiga ikatan
disulfida.Contoh faktor pertumbuhan yang digunakan sebagai
obat biofarmasi adalah sebagai berikut: 1. Osigraft/Eptotermin
alfa (bone morphogenetic
protein) digunakan untuk pengobatan patah tulang tibia,
ditanam secara komersial dalam sel CHO, dan pertama kali
disetujui pada tahun 2001 di Eropa.
protein) digunakan untuk patah tulang tibia dan dalam operasi
tulang belakang; itu juga ditanam secara komersial dalam sel CHO.
Produk ini pertama kali disetujui di Eropa pada tahun 2002.
Hormon
Insulin, glukagon, gonadotropin, dan hormon pertumbuhan
adalah hormon terapeutik yang paling terkenal.
Biofarmasi pertama yang mendapat persetujuan dari badan
pengatur adalah insulin dan hormon pertumbuhan manusia
rekombinan. Ini diproduksi dalam sel mikroba. Bentuk rekombinan
komersial dari keluarga hormon gonadotropin adalah Gonal-F,
Luveris, Puregon, dan Ovitrelle. Semua ini diproduksi
menggunakan sel CHO dan digunakan untuk mengobati
infertilitas wanita.
Enzim terapeutik Sejumlah
enzim terapeutik rekombinan diekspresikan dalam sel
mamalia. Tissue plasminogen activator (tPA) adalah agen
trombolitik yang terlibat dalam pemecahan bekuan darah. TPA
rekombinan secara komersial dikenal sebagai Alteplase dan
Tenectplase, yang digunakan untuk pengobatan infark miokard
akut.
Penyakit Fabry, kelainan metabolisme genetik, ditandai
dengan kekurangan enzim ÿ-galactosidase A.
Fabrazyme (disetujui pada tahun 2001) adalah rekombinan

II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik

Machine Translated by Google

Terapi gen 285

TABEL 14.7 Berbagai protein terapeutik yang diproduksi dalam galur sel hewan.

Saluran seluler Protein terapeutik Aplikasi potensial Nama Produk Persetujuan (FDA)

CHO tPA Infark miokard akut Aktifkan 1987

BHK Faktor VIII Hemofilia A Kogenate FS 1993

Sp2/0 Imunoglobulin GI Artritis reumatoid, penyakit Crohn Remicade 1998

BHK Faktor VIIa Hemofilia A 1 B Tujuh Nov 1999

HEK-293 Protein aktifC Sepsis berat Xigris 2001

Hibridoma CHO imunoglobulin G2a Limfoma non-Hodgkin Bexxar 2003

CHO Imunoglobulin GI Kanker kolorektal Avastin 2004

CHO IgG yang dimanusiakan Kanker Perjeta 2012

CHO IgG1 manusiawi; DM1 Kanker Kadcyla 2013

CHO IgG4ÿ yang dimanusiakan Kanker Keytruda 2014

CHO IgG4ÿ manusia Kanker Opdivo 2014

NS0 IgG1 manusiawi Kanker Emplisit 2015

CHO IgG1ÿ manusia Kanker Darzalex 2015

CHO IgG1 Luar Biasa yang Dimanusiakan Hemostatis Praxbind 2015

CHO IgG1 manusia Kanker Bavencio 2017

CHO IgG1/ÿ yang dimanusiakan Asma Fasenra 2017

CHO IgG1ÿ manusia Psoriasis Tremfya 2017

CHO IgG1 Terglikosilasi Sklerosis ganda Ocrevus 2017

CHO IgG1 rekombinan manusia Artritis reumatoid Kevzara 2017

ÿ-galactosidase A dan diproduksi oleh sel CHO yang dimodifikasi
secara genetik.
Faktor pembekuan darah
Hemofilia A disebabkan oleh kekurangan faktor pembekuan
darah VIII, hemofilia B disebabkan oleh kekurangan faktor IX,
dan hemofilia C karena kekurangan faktor XI. Faktor VIII dan IX
adalah protein. Produk faktor VII rekombinan pertama adalah
Rekombinasi dan Kogenat, yang masing-masing diekspresikan
dalam sel CHO dan BKH. Faktor rekombinan FIX secara
komersial dijual sebagai BeneFIX dan diproduksi dalam sel CHO
rekombinan.
Antibodi
Antibodi terapeutik digunakan dalam pengobatan kanker,
penyakit kardiovaskular, infeksi, dan penyakit autoimun. Pada
tahun 2004, antibodi Avasin (Bevacizeimab) disetujui untuk
pengobatan kanker kolorektal metastatik. Antibodi ini bertindak
sebagai penghambat faktor pertumbuhan endotel vaskular.
Zenapax, antibodi lain yang tersedia secara komersial, digunakan
selama
profilaksis untuk mencegah penolakan organ yang
ditransplantasikan. Ini ditanam secara komersial di garis sel NSO
dan telah disetujui untuk digunakan manusia pada tahun 1997.
Terapi gen
Pentingnya kultur sel dalam terapi gen
Terapi gen melibatkan penyisipan, penghilangan, atau
perubahan salinan gen terapeutik atau yang berfungsi untuk
menyembuhkan penyakit atau cacat atau untuk memperlambat
perkembangan penyakit, sehingga meningkatkan kualitas hidup.
Peta genom manusia adalah langkah besar pertama menuju cara
baru untuk menangani kesehatan dan penyakit manusia.
Terapi gen sangat menjanjikan, namun, tugas mentransfer materi
genetik ke dalam sel tetap merupakan tantangan teknis yang
sangat besar dan membutuhkan budidaya dan adaptasi sel ex
vivo dari laboratorium ke keadaan yang relevan secara klinis.
Perkembangan teknologi kultur sel hewan sangat penting untuk
kemajuan terapi gen.
Penyakit monogenik yang disebabkan oleh cacat gen tunggal
(seperti fibrosis kistik, hemofilia, otot

II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik

Machine Translated by Google
286 14. Prinsip dan aplikasi kultur jaringan hewan
distrofi, dan anemia sel sabit) adalah hasil utama dari terapi
gen manusia.
Langkah pertama dalam terapi gen adalah mengidentifikasi
gen yang salah. Ini diikuti oleh isolasi gen dan pembuatan
konstruksi untuk ekspresi yang benar.
Integrasi gen diikuti dengan pengiriman materi genetik in vivo
atau ex vivo sangat penting untuk keberhasilan terapi gen.
Dalam terapi in vivo, bahan genetik dimasukkan langsung ke
dalam individu di tempat tertentu, dan dalam pengobatan ex
vivo, sel target dirawat di luar tubuh pasien. Sel-sel ini kemudian
diperluas dan ditransfer kembali ke individu di lokasi tertentu.
Teknik ex vivo melibatkan terapi gen dalam sel kultur, yang
diperluas dan selanjutnya ditransfer ke jaringan target.
korelasi klinis
Sejumlah studi klinis dan uji coba untuk terapi gen telah
disetujui dan sedang dilakukan di seluruh dunia. Dari tahun
1989 sampai sekarang, sekitar 500 studi klinis telah dilaporkan;
70% dari penelitian ini ditujukan untuk pengobatan kanker.
Produk pertama yang dirancang untuk terapi gen adalah
Gendicine, obat yang diproduksi oleh Shenzhen Sibiono
Genetech, China. Gendicine digunakan untuk pengobatan
karsinoma kepala dan leher. Tumor 4 menekan gen p53 dalam
adenovirus rekombinan mengekspresikan protein p53, yang
mengarah pada pengendalian dan eliminasi tumor. SBN-cel
adalah garis sel yang disubklon dari garis sel ginjal embrionik
manusia (HEK) 293 dan telah digunakan untuk produksi
Gendicine.
Biopestisida
Dalam beberapa tahun terakhir, biopestisida menjadi
semakin penting karena meningkatnya kekhawatiran tentang
bahan kimia pertanian dan residunya di lingkungan dan makanan.
Biopestisida merupakan sarana yang efektif untuk
mengendalikan serangga dan penyakit tanaman, serta aman
bagi lingkungan. Pengendalian hama serangga secara biologis
oleh organisme hidup lain (untuk menekan penggunaan
pestisida) adalah praktik kuno. Saat ini, sejumlah kontrol
biologis sedang digunakan sebagai biopestisida. Dengan
tingginya biaya pestisida berbasis kimia dan pengembangan
resistensi terhadap beberapa pestisida kimia, baculovirus
adalah salah satu biokontrol yang paling menjanjikan untuk
hama serangga dan semakin banyak digunakan secara efektif
melawan ulat bulu di seluruh dunia. Namun, hambatan utama
dalam pengembangan baculovirus sebagai biopestisida adalah
biaya tinggi dan volume kecil metode in vitro.
Pengembangan proses produksi in vitro untuk
II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik
baculovirus dalam jumlah besar dengan biaya yang sebanding
dengan pestisida kimia akan membantu memberikan
pengendalian serangga yang aman, manjur, hemat biaya, dan
aman secara lingkungan.
Produksi baculovirus dalam kultur sel hewan
Sejumlah faktor penting untuk keberhasilan produksi
bioinsektisida komersial: 1. Produksi virus skala besar dengan
harga kompetitif
biaya.
2. Produksi virus secara ekonomis (yaitu, biaya rendah
untuk media dan menjalankan kultur).
3. Garis sel yang efektif dengan produktivitas virus
per sel yang tinggi.
4. Dengan masuknya virus ke dalam sel, terjadi penurunan
virulensi dan peningkatan risiko pembentukan mutan; ini
harus dihindari.
5. Kualitas polihedral yang dihasilkan dalam kultur sel harus
sebanding dengan yang diperoleh dari ulat.
Sistem sel baculovirus serangga menawarkan sejumlah
keuntungan. Ini menghasilkan protein rekombinan yang
fungsional dan aktif secara imunologis, karena mampu
melakukan modifikasi pasca-translasi. Sistem rekombinan
menggunakan polihedron promotor yang kuat.
Garis sel untuk produksi biopestisida
Garis sel yang paling umum digunakan dalam produksi
biopestisida adalah garis sel Sf21 dan Sf9, yang berasal dari
jaringan ovarium cacing fall army (Spodoptera frugiperda). Sel
Sf9 menunjukkan tingkat pertumbuhan yang lebih cepat dan
kepadatan sel yang lebih tinggi daripada sel Sf21 dan lebih
disukai. Garis Lima sel tinggi (ditunjuk BTI-Tn-5BI-4) yang
dibuat dari jaringan embrionik Trichoplusia ni juga digunakan.
Pembentukan mutan virus dalam kultur sel
Kultur sel secara terus menerus untuk produksi virus
menyebabkan ketidakstabilan virus dan apa yang disebut efek
pasase. Hal ini dapat mengakibatkan penurunan virulensi dan
produksi polihedral dan berbagai mutasi.
Semua perubahan ini mempengaruhi produksi komersial in
vitro. Dua jenis mutasi umumnya terlihat pada pasase terus
menerus kultur sel untuk produksi virus: (1) partikel infektif
yang rusak (DIP) dan (2) beberapa mutasi polihedral (Fp).
Mutasi Fp ditandai dengan (1) berkurangnya polihedral, (2)
peningkatan produksi BV, dan (3) kurangnya
Machine Translated by Google
Sel induk
virion tersumbat dalam polyhedra. Semua faktor ini mengurangi
infektivitas hama sasaran.
Mutan Fp yang dihasilkan secara spontan telah dilaporkan
dalam AcMNPV (Autographa California nucleopo
lyhedroviruses) (Wood, 1980), Galleria mellonella
nucleopolyhedroviruses (GmMNPV) (Fraser and Hink, 1982),
dan Helicoverpa armigera nucleopolyhedroviruses (HaSNPV)
(Chankraborty and Reid, 1999).
Mutasi DIP adalah pembentukan DIP. Mereka terjadi
karena lewatnya serial untuk waktu yang lama, yang
mengakibatkan penurunan penyaringan virus menular.
DIP telah dilaporkan pada sejumlah sistem virus hewan dan
sistem baculovirus. Pembentukan DIP dapat dihindari dengan
multiplisitas infeksi yang rendah. Ini meminimalkan
kemungkinan virus yang rusak memasuki sel dengan virion
pembantu yang utuh.
Antibodi monoklonal
Mayoritas antibodi yang tersedia di pasaran saat ini
diproduksi dalam kultur sel hewan (Van Dijk dan Van de
Winkle, 2001). Sel-sel hewan lebih disukai karena mampu
melakukan glikosilasi dan konformasi struktural, yang penting
bagi obat untuk menjadi produktif. Teknologi hibridoma telah
menjadi metode yang paling banyak digunakan untuk produksi
mAB skala kecil dan besar. Namun, antibodi ini memiliki
aplikasi terapeutik yang terbatas karena menghasilkan respon
imun yang merugikan pada penggunaan berulang.
Sejumlah garis sel sekarang digunakan untuk produksi
antibodi rekombinan. Garis CHO adalah yang paling umum
digunakan. Garis sel lain yang digunakan adalah mieloma
laut NSO, Sp 2/0, HEK-93, dan BHK.
Sejumlah faktor mempengaruhi produksi mAB. Untuk
produksi mAB konsentrasi tinggi, lini sel harus memiliki
produktivitas tinggi. Untuk produktivitas protein yang tinggi,
lini sel yang dipilih harus produktif untuk menghindari volume
reaksi yang besar dan tingginya biaya pemurnian protein.
Garis sel dengan kapasitas untuk tumbuh tanpa penjangkaran
menawarkan keuntungan dalam hal meningkatkan proses; itu
jauh lebih sederhana dibandingkan dengan yang dirancang
untuk kultur pertumbuhan sel-sel yang bergantung pada
penjangkaran. Garis sel Sp2/0 dan NSO dapat tumbuh secara
alami dalam suspensi; sel lain seperti CHO dan BHK dapat
dengan mudah disesuaikan dengan bentuk budidaya ini.
Sel induk
Sel induk adalah sel yang tidak ditentukan yang memiliki
potensi untuk berdiferensiasi menjadi sel atau jaringan jenis
lain dan menjadi sel khusus. Dua karakteristik yang
menentukan sel punca adalah kemampuannya untuk beregenerasi sendiri
II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik
287
dan berdiferensiasi menjadi sel atau jaringan lain.
Sel-sel ini memiliki kemampuan untuk memperbaharui diri
untuk membentuk sel-sel dengan fungsi yang lebih khusus.
Dalam beberapa tahun terakhir, penelitian sel punca telah
dipuji sebagai terobosan besar dalam bidang kedokteran.
Sifat mengubah sel menjadi sel fungsi khusus lainnya telah
membuat para peneliti percaya bahwa sel punca dapat
digunakan untuk membuat organ yang berfungsi penuh dan
sehat untuk menggantikan organ yang rusak atau sakit.
Kultur sel punca embrionik di laboratorium
Sel induk embrionik manusia (hESCs) ditanam pada kaldu
nutrisi. Sel-sel ini secara tradisional dikultur pada lapisan
pengumpan fibroblast embrionik tikus, yang memungkinkan
pertumbuhan berkelanjutan dalam tahap yang tidak berdiferensiasi.
Sel-sel tikus di bagian bawah cawan biakan menyediakan
permukaan lengket tempat sel-sel dapat menempel. Selain
itu, sel pengumpan melepaskan nutrisi ke media kultur. Para
peneliti sekarang telah merancang sistem kultur bebas hewan
untuk hESC dan telah menggunakan fibroblas embrionik
manusia dan sel epitel tuba falopi dewasa sebagai lapisan
pengumpan (selain media bebas serum).
Baru-baru ini, metode untuk mensubkultur sel embrionik
tanpa lapisan pengumpan telah dikembangkan.
Martigel dari BD Biosciences telah digunakan untuk melapisi
pelat kultur (Hassan et al., 2012) untuk perlekatan dan
diferensiasi yang efektif dari epiteloid yang bergantung pada
penjangkaran dan tipe sel lainnya yang normal dan berubah.
Ini adalah campuran protein agar-agar yang diisolasi dari sel
tumor tikus.
Kultur mikrofluida tiga dimensi Tonggak utama
dalam ilmu biologi adalah pembentukan teknik kultur
jaringan yang dapat memelihara dan menyebarkan
pertumbuhan sel hidup di bawah kondisi in vitro yang steril.
Kultur sel tradisional, yang dua dimensi (2D), tumbuh sebagai
kultur monolayer pada permukaan yang datar dan kaku. Sejak
perkembangannya, beberapa kemajuan telah dilakukan untuk
meningkatkan media kultur sel serta bahan biologis yang
digunakan untuk kultur. Peningkatan telah terbukti berharga
untuk studi berbasis sel karena penggabungan berbagai
teknik analitik modern, seperti fluoresensi, elektrokimia, dan
spektroskopi massa. Kultur sel 2D tidak memberikan
lingkungan in vivo yang memadai, di mana sel lain mengelilingi
sel dalam ECM tiga dimensi (3D) (Edmondson et al., 2014).
Sel dalam kondisi in vivo memproduksi dan terus menerus
mengkonsumsi nutrisi oksigen dan molekul lain, dan distribusi
dinamis seperti itu tidak ditiru dalam kultur sel 2D konvensional.
Selain itu, kultur sel 2D gagal direkapitulasi
Machine Translated by Google
288 14. Prinsip dan aplikasi kultur jaringan hewan
lingkungan 3D yang sangat kompleks, fungsi, dan fisiologi
jaringan hidup, interaksi pengaturan yang beraneka ragam
dari sel jaringan di sekitarnya, ECM, dan faktor sistemik
lainnya yang mengarah pada data nonprediktif dari respons
in vivo (Li et al., 2012 ) . Keterbatasan sistem kultur sel 2D
baru-baru ini menjadi lebih jelas. Kemajuan protokol standar
baru-baru ini di bidang biologi kuantitatif dan sistem serta
teknologi pencitraan telah memungkinkan analisis sel individu
dan pengamatan sel individu hidup yang tumbuh di
lingkungan 3D fisiologis alami.
Sel yang dikultur dalam sistem model 3D lebih mirip dengan
kondisi in vivo. Jadi, tidak seperti kultur sel 2D, yang
terkadang dapat menyebabkan data yang menyesatkan dan
nonprediksi dari respons in vivo, sistem 3D realistis untuk
menerjemahkan temuan penelitian. Dibandingkan dengan
sistem kultur sel 2D, sistem kultur sel 3D menyediakan
lingkungan biomimetik yang relevan secara fisiologis dan
lebih dekat, mendorong diferensiasi sel yang lebih baik, dan
meningkatkan fungsi sel (Edmondson et al., 2014). Sistem
kultur 3D sangat menjanjikan untuk aplikasi di berbagai
bidang, seperti biologi sel kanker, penelitian sel punca,
penemuan obat, dan berbagai analisis dan perangkat
berbasis sel. Sementara model pembiakan ini menawarkan
teknologi canggih untuk memfasilitasi pengembangan obat
dan banyak aplikasi lainnya, beberapa rintangan tetap ada
sebelum sistem universal, standar, dan tervalidasi dapat
dibuat (Sung et al., 2014) .
Perkembangan terkini dalam transisi dari kultur sel 2D ke 3D
menunjukkan aplikasi yang menjanjikan untuk banyak
industri; namun, biaya otomatisasi dan sistem pembacaan
yang mudah digunakan masih menjadi perhatian utama.
Sistem kultur sel 3D telah menyediakan alat yang ampuh
yang meniru lingkungan in vivo yang sangat kompleks dan
dinamis, dan telah mendapatkan momentum yang lebih
besar dengan integrasi teknologi mikrofluida. Microfluidics
adalah teknologi yang ditandai dengan manipulasi cairan
pada skala mikron untuk peningkatan diagnostik dan
penelitian kultur sel.
Ini menggunakan perangkat mikrofluida untuk memanipulasi
cairan di kapiler kecil atau saluran mikro. Mikrofluida adalah
ilmu memanipulasi, mencampur, memantau, dan menganalisis
volume kecil cairan atau gas di permukaan chip dan chip
mikrofluida. Teknologi ini sangat ideal karena menciptakan
kembali lingkungan mikro pembuluh darah dan telah menjadi
alat yang ampuh dalam penelitian kultur sel. Ini mencakup
pengetahuan tentang ilmu biologi, kimia, fisika, dan aplikasi
teknik (Xu dan Attinger, 2008). Model kultur sel mikrofluida
3D juga memungkinkan kontrol spasial yang tepat atas
gradien dan pertukaran medium. Itu tidak hanya meniru
tetapi juga mempromosikan beberapa fungsi yang relevan
secara biologis yang tidak terlihat dalam kultur sel 2D.
Selain itu, telah semakin banyak digunakan untuk
menghasilkan model kultur sel throughput tinggi dan telah terbukti
II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik
janji yang cukup besar untuk meningkatkan diagnostik dan
penelitian biologi (El-Ali et al., 2006).
Khususnya, kultur sel mikofluida berpotensi dapat dididik
untuk sistem analisis sel generasi berikutnya.
Beberapa pendekatan kultur sel berbasis 3D telah dibuat
untuk menyediakan lingkungan mikro biomimetik yang lebih
baik untuk sel daripada kultur 2D. Selain itu, langkah
penanganan cairan yang penting, termasuk pemuatan sel,
suplai nutrisi, dan pembuangan limbah—dalam kondisi yang
relevan secara fisiologis—dapat dilakukan dengan mikroskop
waktu nyata (Xu et al., 2014). Banyak perangkat mikrofluida
telah dikembangkan untuk tidak hanya menyediakan nutrisi
dan oksigen secara terus menerus untuk proliferasi sel tetapi
juga untuk menyelidiki beberapa karakteristik kultur sel 3D
yang dinamis, seperti perbedaan konsentrasi, gradien suhu,
dan kondisi gaya geser pada transportasi dan kultivasi sel.
Banyak platform mikrofluida untuk kultur sel 3D telah
dikembangkan dan didasarkan pada substrat yang digunakan
untuk pembuatan perangkat mikro, termasuk platform
berbasis kaca/silikon, berbasis polimer, dan berbasis kertas.
Perangkat mikro berbasis Polydimethylsiloxane (PDMS)
adalah bentuk utama dari sistem kultur sel 3D mikrofluida
karena ekonomis dan memungkinkan permeabilitas O2,
yang sangat penting dalam proliferasi sel. Untuk menyediakan
lingkungan seperti in vivo yang menyerupai jaringan hidup,
beberapa polimer alami, seperti kolagen, fibrin, dan agarosa,
telah digunakan untuk membuat perangkat mikofluida (Li et
al., 2012).
Aplikasi
Teknologi mikrofluida telah muncul sebagai platform yang
layak dan kuat untuk rekayasa jaringan—bidang multidisiplin
yang ditujukan untuk mengganti dan memperbaiki jaringan
dan/atau organ yang rusak dan berpenyakit serta
mengembangkan model in vitro untuk meniru kondisi
fisiologis. Aplikasi klinis yang sukses meliputi pengembangan
teknologi organ-on-a-chip—perangkat perfusi cairan mikro
untuk pengobatan regeneratif—dan platform berbasis chip
untuk kultur sel dan studi toksikologi.
Teknologi organ-on-a-chip Para
ilmuwan saat ini mengandalkan bentuk plat kultur sel in
vitro dan model hewan in vivo untuk mempelajari proses
biologis dan mengembangkan strategi terapeutik, meskipun
informatif memiliki kekurangan yang signifikan (Zio´ÿkowska
et al., 2011) . Platform in vitro mungkin tidak mensimulasikan
interaksi cellcell dan cellmatrix yang rumit yang penting untuk
mengatur perilaku sel in vivo (Guillouzo & Guguen-Guillouzo,
2008). Perangkat organ-on-a-chip dapat menawarkan
relevansi biologis dan menjadi syarat untuk aplikasi
throughput tinggi. Organ-on-a-chip adalah perangkat kultur
sel mikrofluida yang terdiri dari chip mikro dengan ruang
perfusi terus menerus yang
Machine Translated by Google
Sumber daya World Wide Web
diresapi dengan sel-sel hidup yang diatur untuk meniru lingkungan
mikro dan fisiologi jaringan 3D (Ghaemmaghami et al., 2012).
Keripik ini berpotensi berdampak signifikan terhadap penemuan
obat dan pengujian toksisitas (Ghaemmaghami et al., 2012). Unit
fungsional paling sederhana dari perangkat organ-on-a-chip terdiri
dari ruang mikofluida perfusi tunggal yang terdiri dari satu jenis sel
biakan.
Sistem ini digunakan untuk mempelajari respons spesifik organ,
respons kimia, seperti obat-obatan atau racun, dan rangsangan
fisik. Dalam sistem yang kompleks, dua atau lebih saluran mikro
paralel dengan perfusi independen dihubungkan oleh membran
berpori untuk membuat ulang permukaan antar jaringan yang
berbeda.
Model jaringan pada sebuah chip
Banyak model jaringan telah dikembangkan untuk meniru
proses biologis in vivo. Model jaringan on-chip termasuk untuk
hati, ginjal, paru-paru, usus, otot, lemak, dan pembuluh darah
serta model tumor.
Liver-on-a-chip
Berbagai bahan kimia dan obat-obatan, bila diberikan dalam
jangka panjang, mengakibatkan efek samping dan toksisitas hati
akut, yang dikenal sebagai hepatotoksisitas (Gershell & Atkins,
2003). Model in vitro yang digunakan untuk mengidentifikasi
toksisitas hati akibat obat memiliki kegunaan yang sangat terbatas.
Oleh karena itu, diperlukan alat yang efisien dan andal untuk
menguji toksisitas hati. Perangkat mikrofluida untuk jaringan dan
sel hati yang dapat mempertahankan aktivitas metabolisme dan
dapat digunakan untuk penemuan obat dan studi toksisitas telah
menunjukkan potensi besar untuk memecahkan masalah ini.
Bioreaktor dengan perfusi multiwell plate device dikembangkan
oleh Domansky et al. (2010) untuk rekapitulasi baik lingkungan
mikro fisiologis dan mekanis hepatosit yang dapat mendukung
pertumbuhan dan integritas fungsional hingga 1 minggu. Khetani
dan Bhatia (2008) mengembangkan kultur skala mikro dari sel hati
manusia dalam sistem kultur mikro multiwell yang dapat
mempertahankan fungsi fenotipik sel hati hingga beberapa minggu.
Tumor-on-a-chip
Tantangan yang signifikan untuk penelitian kanker adalah
deteksi dini dan pengembangan strategi in vitro untuk mempelajari
peran desain pembawa obat dalam transportasi tumor dan terapi
untuk menargetkan sel kanker yang membelah dengan cepat
sambil membiarkan sel normal dan sehat tidak tersentuh. Bentuk
pelat tumor-on-a-chip mikrofluida dapat digunakan untuk mendeteksi
sel tumor yang bersirkulasi (CTC) dalam aliran darah, yang dapat
mengarah pada diagnosis dini kanker (Millner et al., 2013).
Berbagai desain untuk mempelajari lingkungan mikro mikofluida
II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik
289
perangkat yang membiakkan tumor padat dan cair ditinjau oleh
Young (2013). Tatosian dan Shuler (2009) mengembangkan
sistem mikrofluida baru untuk mempelajari resistensi multiobat sel
kanker terhadap kombinasi kemoterapi. Jang dkk. (2011) membuat
perangkat mikrofluida dengan sistem injeksi aktif yang menghasilkan
64 dari 100 kombinasi larutan kimia yang berbeda pada berbagai
konsentrasi dan menyimpannya dalam ruang terisolasi. Untuk
mengoptimalkan parameter sistem untuk berbagai jenis sel kanker
sambil membutuhkan reagen dan sel dalam jumlah kecil, Jedrych
et al. (2011) menghasilkan sistem mikrofluida untuk pengukuran
berbasis terapi fotodinamik. Sistem ini memungkinkan fotosensitizer
yang diinduksi cahaya dikirim ke sel karsinoma, yang—saat
bereaksi dengan oksigen—menghasilkan toksin kimiawi yang
mematikan sel tumor.
Sumber daya World Wide Web
1. http://www.fda.gov http://
www.fda.gov/downloads/
biologicsbloodvaccines/
guidancecomplianceregulatoryinformation/ guidances/
vaccines/ucm202439.pdf http://www.fda.gov/
BiologicsBloodVaccines/
Vaksin/Produk yang Disetujui/ucm205541.htm Food
and Drug Administration (FDA atau
USFDA) melindungi dan meningkatkan kesehatan
masyarakat melalui pengaturan semua makanan (kecuali
daging dan unggas), suplai darah negara, dan biologi lainnya
(seperti vaksin dan jaringan transplantasi).
Obat harus diuji, diproduksi, dan diberi label sesuai dengan
standar FDA sebelum dapat dijual atau diresepkan. 2. http://
www.promega.com http://www.promega.com/B/media/files/
produk%20dan%20layanan/na/webinar/
mekanisme%20of%20toksisitaswebinar2.pdf?la 5 en
Promega memproduksi enzim dan produk lain untuk
bioteknologi dan biologi molekuler.
3. http://www.who.int http://
www.who.int/biologicals/publications/ trs/areas/vaccines/
cells/ WHO_TRS_878_A1Animalcells.pdf Organisasi
Kesehatan Dunia (WHO) adalah a
badan khusus yang peduli dengan kesehatan
masyarakat internasional. Itu berafiliasi dengan Perserikatan
Bangsa-Bangsa dan berkantor pusat di Jenewa, Swiss.
WHO memastikan bahwa lebih banyak orang, terutama
mereka yang hidup dalam kemiskinan yang parah, memiliki
akses terhadap perawatan yang adil dan terjangkau,
sehingga mereka dapat hidup sehat, bahagia, dan produktif.
4. http://amgenscholars.com
Machine Translated by Google
290 14. Prinsip dan aplikasi kultur jaringan hewan
http://amgenscholars.com/images/uploads/
contentImages/biotechnology-timeline.pdf
Amgen Scholars memberi ratusan
mahasiswa sarjana kesempatan untuk terlibat
dalam pengalaman penelitian musim panas langsung
di beberapa institusi terkemuka dunia. 5. http://
monographs.iarc.fr http://monographs.iarc.fr/ENG/
Monographs/ vol90/mono90-6.pdf Monografi IARC
mengidentifikasi faktor lingkungan yang dapat
meningkatkan risiko kanker pada manusia.
Ini termasuk bahan kimia, campuran kompleks,
paparan pekerjaan, agen fisik, agen biologis, dan
faktor gaya hidup. 6. www.iptonline.com http://
www.iptonline.com/articles/public/ IPTFIVE76NP.pdf
IPTonline menerbitkan "Jurnal Teknologi Farmasi,"
yang dirancang untuk memberikan informasi tentang
ide-ide terbaru, teknologi mutakhir, dan inovasi
yang membentuk masa depan penelitian,
pengembangan, dan manufaktur farmasi. 7. http://
www.aceabio.com http://www.aceabio.com/UserFiles/
doc/ literature/xcell_appnotes/
RTCA_AppNote07_ACEA_LoRes.pdf ACEA
Biosciences, Inc. (ACEA) adalah perusahaan bioteknologi
swasta. Misi ACEA adalah mengubah tes berbasis
sel dengan menyediakan produk dan solusi inovatif
dan mutakhir untuk komunitas penelitian dan penemuan
obat.
Referensi
Aucoin, MG, Jacob, D., Chahal, PS, Meghrous, J., Bernier, A., Kamen, AA,
2007. Partikel mirip virus dan produksi vektor virus menggunakan sistem
vektor ekspresi baculovirus/sistem sel serangga . Metode Mol. Biol 388,
281296.
Bhat, SM, 2011. Konsep dan Aplikasi Kultur Sel Hewan.
Alpha Sains Internasional Terbatas, Oxford.
Caplen, H., Peters, BJ, Bishop, DHL, 1985. Pelemahan virus demam Rift
Valley yang diarahkan oleh mutagen sebagai metode untuk
pengembangan vaksin . J.Gen. Virol. 66, 22712277.
Chakraborty, S., Reid, S., 1999. Bagian serial dari Helicoverpa armi gera
nucleopolyhedrovirus dalam kultur sel Helicoverpa zea. J.
Invertebr. Patol. 73, 303308.
Chen, TH, Liu, WC, Chen, IC, Liu, CC, Huang, MH, Jan, JT, et al., 2019.
Hemaglutinin rekombinan dihasilkan dari klon sel stabil Chinese Hamster
Ovary (CHO) dan kombinasi PELC/CpG adjuvant untuk pengembangan
vaksin subunit H7N9. Vaksin 37 (47), 69336941.
Cho, MH, Niles, A., Huang, R., Inglese, J., Austin, CP, Riss, T., et al., 2008.
Uji sitotoksisitas bioluminescent untuk penilaian integritas membran
menggunakan biomarker proteolitik. Toksikol. Vitro 22, 10991106.
II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik
Clarke, BE, Newton, SE, Carroll, AR, Francis, MJ, Appleyard, G., Syred, AD,
et al., 1987. Peningkatan imunogenisitas epitop peptida setelah fusi
menjadi protein inti hepatitis B. Alam 330, 381384.
Cruz, PE, Maranga, L., Carrondo, MJT, 2002. Optimalisasi proses terintegrasi :
pelajaran dari produksi retrovirus dan virus. J.
Bioteknologi. 99, 199214.
Domansky, K., Inman, W., Serdy, J., Dash, A., Lim, MH, Griffith, L.
G., 2010. Pelat multiwell perfusi untuk rekayasa jaringan hati 3D.
Laboratorium. keping 10 (1), 5158.
Eagle, H., 1959. Metabolisme asam amino dalam kultur sel mamalia.
Sains 130, 432437.
Edmondson, R., Broglie, JJ, Adcock, AF, Yang, L., 2014. Sistem kultur sel
tiga dimensi dan penerapannya dalam penemuan obat dan biosensor
berbasis sel. Pengujian kadar logam. obat. Dev. Technol. 12 (4), 207218.
El-Ali, J., Sorger, PK, Jensen, KF, 2006. Sel pada chip. Nature 442 (7101),
403411. Pedoman FDA. (http://www.fda.gov/down load/
biologicsbloodvaccines/guidancecomplianceregulatoryinformation /
guidances/vaccines/ucm202439.pdf2012.
Fraser, MJ, Hink, WF, 1982. Isolasi dan karakterisasi varian plak MP dan FP
dari virus polyhedrosis nuklir Galleria mellonella. Virologi 117, 366378.
Freshney, RI, 1994. Kultur Sel Hewan: Manual Dasar
Teknik, edisi ke-3. Wiley-Liss Inc, New York.
Freshney, RI, 2010. Kultur Sel Hewan: Manual Teknik Dasar dan Aplikasi
Khusus. Wiley, John & Sons, Inc. New Jersey.
Freshney, RI, 2011. Kultur Sel Hewan: Manual Teknik Dasar dan Aplikasi
Khusus. Wiley, John & Sons, Inc. New Jersey.
Gershell, LJ, Atkins, JH, 2003. Sejarah singkat teknologi penemuan obat
baru. Nat. Pendeta Obat. Penemuan 2 (4), 321327.
Ghaemmaghami, AM, Hancock, MJ, Harrington, H., Kaji, H., Khademhosseini,
A., 2012. Jaringan biomimetik pada chip untuk penemuan obat. Obat.
Diskov. Hari ini 17 (3), 173181.
Guillouzo, A., Guguen-Guillouzo, C., 2008. Konsep yang berkembang dalam
pemodelan jaringan hati dan implikasi untuk toksikologi in vitro. Pakar.
Opin. obat. Metab. Toksikol. 4 (10), 12791294.
Hassan, F., Ren, D., Zhang, W., Gu, X.-X., 2012. Peran c-Jun N-ter minal
protein kinase 1/2 (JNK1/2) dalam MMP- yang dimediasi makrofag 9
produksi sebagai respons terhadap Moraxella catarrhalis lipooligo
saccharide (LOS). PLoS SATU 7, e37912.
Hayflick, L., Moorhead, PS, 1961. Serial budidaya manusia
strain sel diploid. Exp. Sel Res. 3, 585621.
Ho, Y., Lin, PH, Liu, CY, Lee, SP, Chao, YC, 2004. Perakitan partikel mirip
virus korona sindrom pernapasan akut manusia . Komunikasi penelitian
biokimia dan biofisik 318 (4), 833838.
ÿ
Jang, YH, Hancock, MJ, Kim, SB, Selimovic,´ S., Sim, WY, Bae, H., et
al., 2011. Perangkat mikrofluida terintegrasi untuk pengenceran
kombinatorial dua dimensi . Laboratorium. keping 11 (19), 32773286.
Jedrych, E., Pawlicka, Z., Chudy, M., Dybko, A., Brzozka, Z., 2011.
Evaluasi prosedur terapi fotodinamik (PDT) menggunakan sistem
mikofluida. Analytica Chim. akta 683 (2), 149155.
Jeoung, HY, Lee, WH, Jeong, W., Shin, BH, Choi, HW, Lee, HS, et al., 2011.
Imunogenisitas dan keamanan partikel mirip virus dari virus
ensefalomiokarditis babi pada babi. Virologi J.8, 170.
Jiang, B., Barniak, V., Smith, RP, Sharma, R., Corsaro, B., Hu, B., et al.,
1998. Sintesis partikel mirip rotavirus dalam sel serangga: analisis
komparatif dan kuantitatif. Bioteknologi. Bioeng. 60, 369374.
Machine Translated by Google
Glosarium
Justin, C., Masum, H., Perampaladas, K., Heys, J., Penyanyi, PA, 2011.
Inovasi vaksin India: kasus Shantha Biotechnics.
Globalisasi Kesehatan 7, 9.
Khetani, SR, Bhatia, SN, 2008. Kultur mikro sel hati manusia untuk pengembangan
obat. Nat. Bioteknologi. 26 (1), 120126.
Li, XJ, Valadez, AV, Zuo, P., & Nie, Z. (2012). Kultur sel 3D mikrofluida: aplikasi
potensial untuk bioassay berbasis jaringan.
Licata, JM, Johnson, RF, Han, Z., Harty, RN, 2004. Kontribusi glikoprotein virus
Ebola, nukleoprotein, dan VP24 untuk menumbuhkan partikel mirip virus VP40.
Jurnal virologi 78 (14), 73447351.
Maurer, P., Jennings, GT, Willers, J., Rohner, F., Lindman, Y., Roubicek, K.,
et al., 2005. Vaksin terapeutik untuk ketergantungan nikotin: kemanjuran
praklinis, dan keamanan fase I dan genisitas imun. eur. J. Imunologi 35,
20312040.
Mello, IMVG, Meneghesso da Conceicao, M., Jorge, SAC, Cruz, PE, Alves, PMM,
Carrondo, MJT, et al., 2008. Vaksin virus: konsep, prinsip, dan bioproses.
Dalam: Castilho, LR, Moraes, AM, Augusto, EFP (Eds.), Teknologi Sel Hewan:
Dari Biofarmasi ke Terapi Gen. Taylor & Francis Group, New York, hlm. 435458.
Millner, LM, Linder, MW, Valdes, R., 2013. Sel tumor yang bersirkulasi: tinjauan
metode saat ini dan kebutuhan untuk mengidentifikasi fenotip yang heterogen.
Ann. Klinik. Laboratorium. Sains. 43 (3), 295304.
Moore, A., Donahue, CJ, Hooley, J., Stocks, DL, Bauer, KD, Mather, JP, 1995.
Apoptosis dalam kultur batch sel CHO: pemeriksaan oleh flow cytometry.
Sitoteknologi 17, 111.
Mortola, E., Roy, P., 2004. Perakitan dan pelepasan partikel mirip-virus SARS yang
efisien dengan sistem ekspresi heterolog.
FEBS Lett 576, 174178.
Parez, N., Garbarg-Chenon, A., Fourgeux, C., Le Deist, F., Servant Delmas, A.,
Charpilienne, A., et al., 2004. Protein VP6 virus rota berinteraksi dengan virus
besar fraksi sel B naif manusia melalui imunoglobulin permukaan. Jurnal
virologi 78 (22), 1248912496.
Smithburn, KC, 1949. Rift Valley fever: adaptasi virus neurotropik dan penggunaan
eksperimental virus yang dimodifikasi ini sebagai vaksin.
Sdr. J.Exp. Patol. 30, 116.
Stacey, GN, Davis, J., 2007. Obat-obatan dari Kultur Sel Hewan.
John Wiley & Sons, Chichester.
Sung, JH, Srinivasan, B., Esch, MB, McLamb, WT, Bernabini, C., Shuler, ML,
et al., 2014. Menggunakan sistem “body-on-a-chip” yang dipandu farmako
kinetik berbasis fisiologis untuk memprediksi respons mamalia terhadap
paparan obat dan bahan kimia. Exp. Biol. Kedokteran
1535370214529397.
Swenson, DL, Warfield, KL, Negley, DL, Schmaljohn, A., Aman, MJ, Bavari, S.,
2005. Partikel mirip virus menunjukkan potensi sebagai vaksin pan-filovirus
untuk infeksi virus Ebola dan Marburg.
Vaksin 23 (23), 30333042.
Tatosian, DA, Shuler, ML, 2009. Sistem baru untuk evaluasi campuran obat untuk
kemanjuran potensial dalam mengobati kanker yang resistan terhadap berbagai
obat. Bioteknologi. Bioeng. 103 (1), 187198. van Dijk, MA, van de Winkel, JGJ,
2001. Antibodi manusia sebagai terapi generasi selanjutnya. Kur. Opin. kimia Biol.
5, 368374.
Walsh, G., 2003. Biofarmasi Biokimia dan Bioteknologi, edisi ke-2. John Wiley and
Sons, Chichester.
Wang, C., Zheng, X., Gai, W., Zhao, Y., Wang, H., et al., 2017. Partikel mirip
virus MERS CoV yang diproduksi dalam sel serangga menginduksi
imunitas humoral dan seluler spesifik pada kera rhesus . Oncotarget 8 (8),
12686.
Wang, MY, Kuo, YY, Lee, MS, Doong, SR, Ho, JY, Lee, LH, 2000. Perakitan
sendiri protein kapsid virus penyakit menular bursal, rVP2, yang
diekspresikan dalam sel serangga dan pemurnian chimeric imunogenik
partikel rVP2H dengan kromatografi afinitas ion logam terimobilisasi.
Bioteknologi. Bioeng. 67, 104111.
II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik
291
Wood, HA, 1980. Isolasi dan replikasi mutan kekurangan oklusi dari virus
polyhedrosis nuklir Autographa californica. Virologi 105, 338344.
Xu, J., Attinger, D., 2008. Penurunan permintaan dalam chip mikofluida. J.
Micromech. Mikroeng. 18 (6), 065020.
Xu, X., Farach-Carson, MC, Jia, X., 2014. Model tumor in vitro tiga dimensi untuk
penelitian kanker dan evaluasi obat.
Bioteknologi. Lanjut 32 (7), 12561268.
Yamshcikov, GV, Ritter, GD, Vey, M., Compans, RW, 1995.
Perakitan partikel mirip virus SIV yang mengandung protein amplop
menggunakan sistem ekspresi baculovirus. Virologi 214 (1), 5058.
Muda, EW, 2013. Sel, jaringan, dan organ pada chip: tantangan dan peluang untuk
lingkungan mikro tumor kanker. Integral
Biol. 5 (9), 10961109.
Zio´ÿkowska, K., Kwapiszewski, R., Brzo´zka, Z., 2011. Perangkat mikrofluida
sebagai alat untuk meniru lingkungan in vivo. NJ
kimia 35 (5), 979990.
Bacaan lebih lanjut
Castilho, LR, Moraes, AM, Augusto, EFP, 2008. Dari Biofarmasi ke Terapi Gen.
Teknologi Sel Hewan.
Grup Taylor & Francis, New York.
Freshney, RI, 2015. Kultur Sel Hewan: Manual Teknik Dasar dan Aplikasi
Khusus, Edisi ke-7 Wiley Blackwell, USA.
Kolesnikova, S., Moiseeva, I., 2017. Prospek penggunaan kultur sel hewan
dalam penyaringan zat farmasi. J. Phys.: Conf. Ser. 784, 012028. Tersedia
dari: https://doi.org/10.1088/ 1742-6596/784/1/012028.
Luo, Tao, et al., 2019. Manipulasi sel tunggal mikrofluida dan anal ysis: metode
dan aplikasi. Mesin mikro 10 (2), 104.
Naskalska, A., Dabrowska, A., Szczepanski, A., Milewska, A., Jasik, KP, Pyrc, K.,
2019. Protein membran human coronavirus nl63 bertanggung jawab untuk
interaksi dengan reseptor adhesi. J Virologi 93 (19), e0035519.
Polat, AN, O¨ zlu¨, N., 2014. Menuju teomik fosfopro LC-MS sel tunggal. Analis
139, 47334749.
Stecey, GN, Davis, J., 2007. Obat-obatan dari Kultur Sel Hewan.
John Wiley & Sons, Chichester.
Verma, AS, Singh, A., 2014. Bioteknologi Hewan: Model dalam Penemuan dan
Terjemahan, 1st Edition Acadamic Press, USA.
Yu, F., Hunziker, W., Choudhury, D., 2019. Rekayasa platform mikrofluida
organoid-on-a-chip. Mesin mikro 10 (3), 165.
Glosarium
Antigen Zat apa pun yang menyebabkan sistem kekebalan Anda menghasilkan
antibodi untuk melawannya.
Aseptik Bebas dari mikroorganisme patogen.
Kultur sel Tumbuh in vivo
Sitotoksisitas Sejauh mana suatu agen memiliki destruktif spesifik
tindakan pada sel-sel tertentu.
Diferensiasi Perubahan dalam sel yang menyebabkan peningkatan morfo
heterogenitas logis atau kimiawi.
Diabadikan Mengubah jenis sel dengan umur terbatas in vitro menjadi jenis sel
dengan kapasitas tidak terbatas untuk berkembang biak; kadang-kadang
dicapai oleh sel hewan secara in vitro atau oleh sel tumor.
In vitro Pertumbuhan sel di luar tubuh, di kaca, seperti di tabung reaksi.
Pertumbuhan sel in vivo dalam organisme hidup.
Machine Translated by Google

292 14. Prinsip dan aplikasi kultur jaringan hewan

Sedang Pemilihan komponen yang disangga di mana suatu organisme tPA aktivator plasminogen jaringan
secara alami hidup atau tumbuh. VLP Partikel mirip virus
Monolayer Satu lapisan sel yang melekat pada substratum.
Passage Proses melewati atau mempertahankan sel melalui serangkaian inang atau
kultur.
Kultur primer Kultur yang dimulai dari eksplan sel, jaringan, Pertanyaan jawaban panjang
atau organ dalam media yang kondusif untuk pertumbuhannya.
Tripsinisasi Penggunaan enzim tripsin untuk menghilangkan kepatuhan pro 1. Apa saja komponen serum dan bagaimana caranya
kecil dari permukaan sel.
mereka membantu kultur sel?
2. Apa peran media dalam kultur sel hewan?

Singkatan 3. Apa kelebihan dan keterbatasan kultur jaringan hewan?

4. Bagaimana viabilitas sel dan sitotoksisitas dapat diuji

AcMNPV Autographa California nucleopolyhedrovirus
BHK
budaya sel?
Ginjal bayi Hamster
CD4 Glikoprotein pada permukaan sel T Helper yang berfungsi 5. Apa peran kultur sel dalam terapi gen dan vaksin virus?
sebagai reseptor HIV
CDM-HD Media yang didefinisikan secara kimiawi 6. Bagaimana mikrofluida dapat merevolusi jaringan hewan
CHO Ovarium Hamster Cina budaya?
CPE Efek sitopatogenik
MENCELUPKAN
Partikel infektif yang rusak
DME Media elang yang dimodifikasi Dulbecco
EDTA Asam etilendiamintetraasetat
EGF faktor pertumbuhan epidermis Pertanyaan jawaban singkat
ELISA Enzyme-linked Immunosorbent Assay
FBS Serum janin sapi
1. Apa itu efek Hayflick?
Fp Beberapa mutasi polihedral
FPERT 2. Apa sumber sel untuk monolayer primer
Uji transkriptase terbalik yang disempurnakan dengan produk
budaya sel?
fluoresen secara real-time
GF-AFC Glisil-fenilalanil-amino-fluorokumarin 3. Serum merupakan salah satu komponen dasar media kultur sel
GmMNPV Galleria mellonella nucleopolyhedroviruses (benar/salah)?
HaSNPV Helicoverpa armigera nucleopolyhedroviruses 4. Apa protein manusia rekombinan pertama?
HBcAg Antigen inti hepatitis B
HBV 5. Apa perbedaan fase kurva pertumbuhan?
Virus hepatitis B
HEK Ginjal embrio manusia
6. Apakah vaksin HPV berbasis VLP disetujui oleh
HeLA FDA?
Mendirikan garis sel epitel manusia yang berasal dari
karsinoma serviks
hESC Sel punca embrionik manusia
Hai-5 Sel (BTI-TN-5B14) berasal dari induk
Garis sel Trichopulsia ni
Jawaban untuk pertanyaan jawaban singkat
HPV Virus papiloma manusia
HPV18 Virus papiloma manusia 18 1. Kapasitas replikasi sel yang terbatas dalam media kultur.
IFN Interferon
IL-2 Interleukin-2
L1VLP
2. Organ/jaringan hewan hidup.
HPV dengan protein kapsid mayor L1
3. Salah.
LDH Dehidrogenase laktat
mAB 4. Somatostatin.
Antibodi monoklonal
MEM Media esensial minimal 5. Fase lag, fase log, dan fase dataran tinggi.
MMT 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromida 6. Ya, Gardasil (vaksin HPV pertama) disetujui oleh FDA pada
MP12
tahun 2006.
Strain ditemukan oleh mutagenesis serial virus RVF dengan
strain ZH501 dan ZH548 Mesir
MTS 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-
carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H tetrazolium Jenis pertanyaan ya/tidak
PDGF Faktor pertumbuhan yang diturunkan dari trombosit
PTM Modifikasi pasca-terjemahan 1. Apakah sel diperoleh langsung dari organ dan jaringan dalam
QPERT Waktu nyata kuantitatif untuk uji transkrip balik produk kultur sel primer?
fluoresen yang disempurnakan 2. Apakah kultur sekunder digunakan untuk
rDNA DNA rekombinan mempelajari sel transformasi?
RT Tes waktu nyata
3. Apakah pengujian identitas merupakan cara untuk menentukan kemurnian
SNS Strain neurotropik Smithburn budaya?
STO Garis sel fibroblast embrionik tikus
TGF Mengubah faktor pertumbuhan 4. Apakah IFN-ÿ digunakan untuk pengobatan multiple
TGF-B Transformasi faktor pertumbuhan beta sclerosis?

II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik

Machine Translated by Google

Jawaban untuk pertanyaan jenis ya/tidak 293

5. Apakah Bevacizumab disetujui untuk pengobatan 2. Ya—Kultur sekunder digunakan dalam studi sel yang
kanker kolorektal? ditransformasikan karena kultur ini mempertahankan
6. Apakah pasase effect menyebabkan peningkatan karakteristik selulernya.
virulensi virus biakan? 3. Tidak—Untuk menguji kemurniannya, seseorang harus
7. Apakah sel punca tidak dapat berdiferensiasi menjadi jenis lain menggunakan PCR atau ELISA pewarnaan fluoresen.
sel? 4. Tidak—IFN-ÿ digunakan dalam pengobatan multiple
8. Perangkat mikrofluida menyediakan nutrisi dan oksigen sclerosis.
untuk proliferasi sel. 5. Ya—Ini adalah penghambat endotel vaskular
9. Sel-sel hidup digunakan dalam kultur sel faktor pertumbuhan.
mikrofluida organ-on-a-chip. 6. Tidak—Efek bagian menyebabkan ketidakstabilan virus.
10. Apakah sel embrio dapat dikultur tanpa lapisan 7. Tidak—Stem cell dapat berdiferensiasi menjadi jenis lain
feeder? jenis sel.
8. Ya—Perangkat mikrofluida juga membantu
menyelidiki karakteristik kultur sel 3D.
Jawaban untuk pertanyaan jenis ya/tidak 9. Ya—Ruang perangkat organ-on-a-chip secara terus-
menerus diinfuskan dengan sel-sel hidup.
1. Ya—Mekanis, kimia, atau enzimatik 10. Ya—Martigel dari BD biosciences dapat digunakan
disintegrasi jaringan dan organ diperlukan dalam kultur untuk melapisi pelat kultur.
sel primer.

II. Bioteknologi hewan: alat dan teknik