UNIVERSITAS PANCASILA

FAKULTAS FARMASI

SKRIPSI

PENGARUH PEMBERIAN POLIHERBAL X

TERHADAP KADAR MALONDIALDEHID DAN
AKTIVITAS SUPEROKSIDA DISMUTASE PADA TIKUS
MODEL STROKE ISKEMIK

Oleh

Syafina Hanif Fauzziyyah

NPM 2018210211

Dibuat untuk memperoleh

Gelar Sarjana Farmasi pada
Universitas Pancasila

JAKARTA
2022
 PERNYATAAN SKRIPSI DAN SUMBER INFORMASI

Saya yang bertandatangan di bawah ini menyatakan bahwa skripsi dengan judul
”PENGARUH PEMBERIAN POLIHERBAL X TERHADAP KADAR
MALONDIALDEHID DAN AKTIVITAS SUPEROKSIDA DISMUTASE PADA
TIKUS MODEL STROKE ISKEMIK“ adalah karya saya sendiri dan belum diajukan
untuk publikasi dalam bentuk apapun kepada pihak manapun. Informasi yang berasal
atau dikutip dari karya yang diterbitkan maupun tidak diterbitkan dari penulis lain telah
dicantumkan dalam daftar rujukan di bagian akhir skripsi ini.

Jakarta, 15 Juli 2022

Syafina Hanif Fauzziyyah

NPM : 2018210211

i
 UNIVERSITAS PANCASILA
FAKULTAS FARMASI
JAKARTA

PENGESAHAN SKRIPSI

Judul

“PENGARUH PEMBERIAN POLIHERBAL X TERHADAP KADAR

MALONDIALDEHID DAN AKTIVITAS SUPEROKSIDA DISMUTASE
PADA TIKUS MODEL STROKE ISKEMIK”

Oleh

SYAFINA HANIF FAUZZIYYAH

NPM: 2018210211

Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Skripsi

Fakultas Farmasi Universitas Pancasila
Pada Tanggal 11 Agustus 2022

Universitas Pancasila
Fakultas Farmasi Dekan

(Prof. Dr. apt. Syamsudin, M.Biomed.)

Pembimbing
1. Prof. Dr. apt. Syamsudin, M. Biomed. 1. ………………
2. Prof. Drh. Bambang Pontjo Priosoeryanto, MS. PhD. APVet. 2. ….........

Penguji
1. Prof. Dr. apt. Ros Sumarny, M.S. 1. ………………
2. Dr. apt. Nimade Dwi Sandhiutami, M.Kes. 2. ……….
3. apt. Diah Kartika Pratiwi, M.Farm. 3. ……………...

iii
 KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa, karena atas berkat dan
kasih karunia-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul
“PENGARUH PEMBERIAN POLIHERBAL X TERHADAP KADAR
MALONDIALDEHID DAN AKTIVITAS SUPEROKSIDA DISMUTASE
PADA TIKUS MODEL STROKE ISKEMIK”. Penulisan skripsi ini disusun dalam
rangka memenuhi salah satu persyaratan untuk mencapai gelar Sarjana Farmasi pada
Fakultas Farmasi Universitas Pancasila, Jakarta.

Saya menyadari bahwa, selama proses penyusunan skripsi ini terdapat bantuan dan
bimbingan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, penghargaan dan ucapan terima kasih
yang sebesar-besarnya saya sampaikan kepada Prof. Dr. apt. Syamsudin, M.
Biomed. selaku dosen pembimbing skripsi I dan Prof. Drh. Bambang Pontjo
Priosoeryanto, MS. PhD. APVet., DACCM selaku dosen pembimbing skripsi II
yang telah memberikan saran, motivasi dan arahan sejak awal hingga terselesaikannya
penyusunan skripsi ini. Terima kasih atas waktu, tenaga, kasih sayang dan ilmu yang
telah diberikan selama penyusunan skripsi ini. Dengan rasa hormat dan terima kasih
juga disampaikan kepada:

1. Prof. Dr. apt. Syamsudin, M. Biomed. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas
Pancasila.

2. Prof. Dr. apt. Ros Sumarny, M.S. selaku dosen pembimbing akademik yang telah
memberikan bimbingan dan bantuan selama saya menempuh pendidikan di
program studi Farmasi Universitas Pancasila.
3. Drh. Tri Isyani Tungga Dewi, M.Si selaku pendamping penelitian selama di RSHP
FKH IPB yang memiliki andil besar dalam proses penelitian juga telah
meluangkan waktu dalam memberikan bimbingan dan saran selama penelitian
skripsi ini.
4. Tim penguji yang telah memberikan saran dalam menyelesaikan skripsi ini.

5. Segenap karyawan dan staf laboratorium di RSHP dan Divisi Patologi

iv
6. Departemen Klinik, Reproduksi & Patologi Fakultas Kedokteran Hewan Institut
Pertanian Bogor yang telah membantu selama penelitian skripsi ini.
7. Segenap dosen pengajar, karyawan, dan staf laboratorium Fakultas Farmasi
Universitas Pancasila .
8. Orang tua beserta keluarga yang selalu memberikan motivasi, dukungan dan doa
tiada henti.
9. Teman-teman seperjuangan skripsi yang selalu memberikan motivasi, semangat,
doa dan dukungan.

Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari kata sempurna, oleh
karena itu penulis menerima apabila ada kritik dan saran yang membangun. Akhir kata,
saya berharap Tuhan Yang Maha Esa berkenan membalas segala kebaikan semua
pihak yang telah membantu, semoga skripsi ini juga dapat bermanfaat bagi penelitian
dan pengembangan ilmu pengetahuan di masa depan khususnya dalam bidang farmasi.

Jakarta, 15 Juli 2022

Penulis

v
 DAFTAR ISI
Hal
HALAMAN PERNYATAAN ............................................................................ i
HALAMAN PERSETUJUAN ........................................................................... ii
HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................ iii
KATA PENGANTAR ........................................................................................ iv
DAFTAR ISI ....................................................................................................... vi
DAFTAR TABEL .............................................................................................. viii
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... ix
DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................... x
ABSTRAK ........................................................................................................... xi
ABSTRACT .......................................................................................................... xii
BAB I PENDAHULUAN .............................................................................. 1
A. LATAR BELAKANG ................................................................. 1
B. RUMUSAN MASALAH ............................................................. 3
C. TUJUAN PENELITIAN ............................................................. 4
D. MANFAAT PENELITIAN ......................................................... 4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA..................................................................... 5
A. TINJAUAN BOTANI ................................................................. 5
B. STROKE ISKEMIK .................................................................. 10
C. TRIMETILTIN KLORIDA (TMT) ........................................ 13
D. HEWAN MODEL STROKE ISKEMIK .................................. 14
E. RADIKAL BEBAS ...................................................................... 15
F. STRESS OKSIDATIF ................................................................. 18
G. PEROKSIDASE LIPID .............................................................. 19
H. PIRACETAM ............................................................................. 21
I. MALONDIALDEHID (MDA) .................................................. 22
J. SUPEROKSIDASI DISMUTASE (SOD) ................................. 24
K. SEDIAAN POLIHERBAL X ..................................................... 24
L. LANDASAN TEORI .................................................................. 24
M. HIPOTESIS ................................................................................. 26
BAB III RANCANGAN PENELITIAN ......................................................... 27
A. PRINSIP PENELITIAN ............................................................. 27

vi
 B. BAHAN PENELITIAN ............................................................... 27
C. TEMPAT PENELITIAN ............................................................ 28
D. HEWAN COBA ........................................................................... 28
E. TAHAPAN PENELITIAN ......................................................... 28
F. ANALISIS DATA ........................................................................ 29
BAB IV BAHAN, ALAT, DAN METODE PENELITIAN ........................... 30
A. BAHAN ........................................................................................ 30
B. ALAT ........................................................................................... 30
C. METODE PENELITIAN ........................................................... 31
BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................... 35
A. HASIL PEMBERIAN POLIHERBAL X TERHADAP KADAR
MALONDIALDEHID (MDA) .................................................. 35
B. HASIL PEMBERIAN POLIHERBAL X TERHADAP
AKTIVITAS SUPEROKSIDA DISMUTASE (SOD) .............. 40
BAB V SIMPULAN DAN SARAN ............................................................... 44
A. SIMPULAN .................................................................................. 44
B. SARAN ......................................................................................... 44
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 45
LAMPIRAN ........................................................................................................ 50

vii
 DAFTAR TABEL
Hal

Tabel V.1 Hasil Pengukuran Kadar MDA (nmol/mL)............................................... 35

Tabel V.2 Hasil Uji Statistik Mann-Whitney kadar MDA (nmol/mL) ...................... 39

Tabel V.3 Hasil Pengukuran Aktivitas SOD (U/mL) ................................................ 41

Tabel V.4 Hasil Uji Statistik Mann-Whitney Aktivitas SOD (U/mL) ....................... 43

viii
 DAFTAR GAMBAR
Hal
Gambar II.1 Tanaman Kelor…………………………………………………... 5
Gambar II.2 Tanaman Meniran………………………………………………... 7
Gambar II.3 Tanaman Jintan Hitam…………………………………………… 8
Gambar II.4 Klasifikasi Stroke ........................................................................... 10
Gambar II.5 Rumus Kimia Trimetiltin klorida ................................................... 13
Gambar II.6 Sumber Eksogen dan Endogen Radikal Bebas ............................... 16
Gambar II.7 Rumus Kimia Piracetam ................................................................. 20
Gambar II.8 Rumus Bangun MDA ..................................................................... 22
Gambar II.9 Tiga Fase Reaksi Berantai Peroksidasi Lipid ................................. 23
Gambar II.10 Sediaan Poliherbal X ...................................................................... 26
Gambar V.1 Hasil Pengukuran Kadar MDA ...................................................... 35
Gambar V.2 Mekanisme Neurotoksisitas Trimetiltin klorida………………….. 36
Gambar V.3 Hasil Pengukuran Aktivitas SOD………………………………… 41

ix
 DAFTAR LAMPIRAN
Hal
Lampiran 1 Surat Keterangan Galur Hewan Coba…………………………………..50
Lampiran 2 Surat Keterangan Ethical Clearance……………………………………51
Lampiran 3 Skema Kerja Penelitian………………………………………………...52
Lampiran 4 Data Penimbangan Berat Badan Tikus…………………………………53
Lampiran 5 Tabel Konversi Dosis Manusia Ke Tikus……………………………….53
Lampiran 6 Perhitungan Dosis………………………………………………………54
Lampiran 7 Foto Alat dan Bahan Penelitian Yang Digunakan………………………56
Lampiran 8 Pembuatan Kurva Baku Larutan Standar MDA………………………...59
Lampiran 9 Hasil Pengukuran Kadar MDA…………………………………………61
Lampiran 10 Hasil Statistik Uji Normalitas Data Kadar MDA…………………….62
Lampiran 11 Hasil Statistik Uji Homogenitas Data Kadar MDA……………………63
Lampiran 12 Hasil Statistik Uji Kruskal-Wallis MDA...…………………………….64
Lampiran 13 Hasil Statistik Uji Mann Whitney Kadar MDA………………………..65
Lampiran 14 Hasil Pengukuran Aktivitas SOD……………………………………...76
Lampiran 15 Hasil Statistik Uji Normalitas Data Aktivitas SOD……………………77
Lampiran 16 Hasil Statistik Uji Homogenitas Data Aktivitas SOD………………….78
Lampiran 17 Hasil Statistik Uji Kruskal-Wallis Data Aktivitas SOD………………..79
Lampiran 18 Hasil Statistik Uji Mann Whitney Data Aktivitas SOD………………..80

x
 ABSTRAK

(A) SYAFINA HANIF FAUZZIYYAH (2018210211)

(B) PENGARUH PEMBERIAN POLIHERBAL X TERHADAP KADAR
MALONDIALDEHID DAN AKTIVITAS SUPEROKSIDA DISMUTASE
PADA TIKUS MODEL STROKE ISKEMIK
(C) xii + 49 halaman; 4 tabel ; 13 gambar ; 17 lampiran.
(D) Kata kunci: daun kelor (Moringa oleifera L), meniran (Phyllanthus niruri L),
jintan hitam (Nigella sativa L), stroke iskemik, malondialdehid, superoksida
dismutase.
(E) Sediaan poliherbal X dengan komposisi daun kelor (Moringa oleifera L),
meniran (Phyllanthus niruri L) dan jintan hitam (Nigella sativa L) diketahui
merupakan tanaman yang mengandung senyawa flavonoid yang memiliki
aktivitas antioksidan. Penelitian ini bertujuan untuk melihat apakah terdapat
peningkatan kadar Malondialdehid (MDA) dan aktivitas Superoksida Dismutase
(SOD) pada model tikus stroke iskemik. Penelitian eksperimental ini
menggunakan tikus galur Wistar jantan yang terbagi menjadi 7 kelompok yaitu
kelompok kontrol normal, kelompok kontrol positif, kelompok kontrol negatif,
dan 4 kelompok tingkatan dosis poliherbal X (50; 100; 200; 400 mg/kgBB).
Pengukuran kadar MDA dilakukan dengan metode Thiobarbituric Acid
Reactivity Test (TBARs), pengukuran aktivitas SOD dilakukan dengan
menggunakan metode Misra dan Fridovich. Hasil rata-rata pengukuran kadar
MDA otak tikus pada 7 kelompok secara berturut-turut adalah 1,9969 nmol/mL,
7,1825 nmol/mL, 1,6076 nmol/mL, 5,1859 nmol/mL, 3,6271 nmol/mL, 2,2537
nmol/mL, 1,6807 nmol/mL. Hasil rata-rata pengukuran aktivitas SOD otak tikus
pada 7 kelompok secara berturut-turut adalah 181,21 U/mL, 111,41 U/mL,
181,52 U/mL, 125,76 U/mL, 164,04 U/mL, 184,44 U/mL, 190,33 U/mL.
Kesimpulan hasil yang didapatkan adalah pemberian poliherbal X dosis 400
mg/kgBB memiliki efek antioksidan dengan menurunkan kadar MDA dan
meningkatkan aktivitas SOD.
(F) Daftar Rujukan: 53 buah (1952 – 2022).
(A) Prof. Dr. apt. Syamsudin, M.Biomed; Prof. Drh. Bambang Pontjo Priosoeryanto,
M.S., PhD., APVet. DACCM
(G) 2022

xi
 ABSTRACT

(B) SYAFINA HANIF FAUZZIYYAH (2018210211)

(C) EFFECT OF ADMINISTRATION OF POLYHERBAL X ON
MALONDIALDEHYD LEVELS AND SUPEROXIDE DISMUTASE
ACTIVITY IN RATS WITH ISCEMIC STROKE MODEL
(D) xii + 49 pages; 4 tables ; 13 pictures ; 17 attachments
(E) Keywords: Moringa leaf (Moringa oleifera L), meniran (Phyllanthus niruri L),
black cumin (Nigella sativa L), ischemic stroke, malondialdehyde, superoxide
dismutase.
(F) Polyherbal preparation X with composition Moringa leaf (Moringa oleifera L),
meniran (Phyllanthus niruri L) and black cumin (Nigella sativa L) are known to
contain flavonoid compounds that have antioxidant activity. This study aims to
see whether there is an increase in levels of Malondialdehyde (MDA) and
Superoxide Dismutase (SOD) activity in ischemic stroke rat models. This
experimental study used male Wistar rats which were divided into 7 groups,
namely normal control group, positive control group, negative control group,
and 4 groups of polyherbal X dose levels (50; 100; 200; 400 mg/kgBW). MDA
levels were measured using the Thiobarbituric Acid Reactivity Test (TBARs)
method, while SOD activity was measured using the Misra and Fridovich
method. The results of the average measurement of MDA levels in the rat brain
in 7 groups were 1.9969 nmol/mL, 7.1825 nmol/mL, 1.6076 nmol/mL, 5.1859
nmol/mL, 3.6271 nmol/ mL, 2.2537 nmol/mL, 1.6807 nmol/mL. The average
results of the measurement of brain SOD activity of rats in 7 groups in a row
were 181.21 U/mL, 111.41 U/mL, 181.52 U/mL, 125.76 U/mL, 164.04 U/ mL,
184.44 U/mL, 190.33 U/mL. The conclusion of the results obtained is that the
administration of polyherbal X at a dose of 400 mg/kgBW has an antioxidant
effect by reducing MDA levels and increasing SOD activity.
(G) Reference List: 53 pieces (1952 – 2022).
(H) Prof. Dr. apt. Syamsudin, M. Biomed; Prof. Drh. Bambang Pontjo
Priosoeryanto, MS. PhD. APVet., DACCM
(I) 2022

xii
 BAB I
PENDAHULUAN

A. LATAR BELAKANG
Stroke secara nyata menjadi penyebab kematian dan kecacatan di seluruh dunia,
sehingga dianggap sebagai masalah penting di negara berkembang. Data
epidemiologi menunjukkan bahwa 16,9 juta orang menderita stroke setiap tahun.
Meskipun pencegahan primer telah berkontribusi pada penurunan kejadian stroke
di negara-negara berpenghasilan tinggi. Selain itu, kejadian stroke iskemik pada
orang dewasa muda sedang meningkat, menunjukkan perlunya intervensi
pencegahan khusus pada kelompok usia tersebut. Jumlah penderita stroke hampir
dua kali lipat antara tahun 1990 dan 2010, kini telah mencapai 33 juta orang.
Menurut proyeksi epidemiologi, jumlah ini akan meningkat menjadi 77 juta pada
tahun 2030 (1). Stroke iskemik mencapai sekitar 70–80% dari keseluruhan kasus
stroke. Peningkatan produksi radikal bebas terjadi baik pada saat iskemia otak
maupun pada saat reperfusi (2). Iskemia menginduksi stress oksidatif dan reaksi
peroksidasi lipid dimana hal tersebut berkontribusi pada kerusakan sekunder
jaringan saraf (3).
Studi farmakologis telah menyarankan bahwa obat-obatan herbal atau produk
yang sesuai dapat melebarkan pembuluh kardioserebral, menekan agregasi
trombosit, meningkatkan sirkulasi di otak, melindungi cedera iskemik dan
reperfusi, memiliki sifat neuroprotektif terhadap hipoksia. Obat-obatan herbal
mengandung kombinasi bahan-bahan bioaktif yang memberikan efek sinergis,
dan karenanya telah menarik lebih banyak perhatian dalam beberapa tahun
terakhir (4). Obat-obatan herbal dicirikan sebagai multi-konstituen, multitarget
dan multi-efek, telah diakui memiliki efektivitas yang baik dalam mengobati
stroke, dan menarik minat yang luas dari para peneliti (5). Studi tentang stroke
dengan menggunakan hewan percobaan seperti tikus Wistar digunakan untuk
mempelajari aspek patofisiologis dari masing-masing jenis stroke sebelum
diterapkan untuk pencegahan dan terapi stroke pada manusia (6). Moringa

1
 2

oleifera L. atau daun kelor merupakan anggota famili Moringaceae, yang

banyak dibudidayakan di Asia, Polinesia, dan Hindia Barat. Daun Moringa
oleifera L dapat berfungsi sebagai sumber yang kaya zat yang memiliki aktivitas
antioksidan seperti betakaroten, vitamin C, vitamin E, dan polifenol. Banyak
penelitian telah membuktikan nilai terapeutik potensial dari Moringa oleifera L
termasuk antikanker, antidiabetes, anti-aterosklerosis, antifertilitas, pereda nyeri,
depresan. Hasil penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa ekstrak daun juga
menunjukkan efek antioksidan dan dapat melindungi terhadap kerusakan oksidatif
(7).
Phyllanthus niruri L. atau meniran merupakan famili Euphorbiaceae memiliki
banyak manfaat dalam bidang Kesehatan. Ekstrak methanol dari meniran dapat
meningkatkan aktivitas antioksidan endogen-superoksida dismutase (SOD) dan
katalase (CAT) pada hati, ginjal, jaringan jantung dan otak tikus. Dapat diduga
bahwa Phyllanthus niruri L. atau meniran mengandung bioagen, yang
menghambat peroksidasi lipid dan mencegah sintesis superoksida yang berlebihan
akibat hiperglikemia kronis. Berdasarkan hal tersebut, Phyllanthus niruri L. atau
meniran dapat memperbaiki metabolisme lipoprotein, mengurangi rasio
kolesterol-fosfolipid, mengontrol kerusakan biomembran dan mengurangi
peroksidasi lipid terkait ROS (8)
Nigella sativa L. atau jintan hitam merupakan famili Ranunculaceae genus
Nigella adalah tanaman yang berasal dari Mediterania dan Asia Timur. Ekstrak
jintan hitam memiliki banyak kegunaan berdasarkan berbagai penelitian yang
telah dilakukan memaparkan beberapa potensi dari jintan hitam, yaitu
meningkatkan sistem kekebalan tubuh, antitumor, antidiabetik, efek menurunkan
kadar lemak, menurunkan kolesterol serum, menurunkan trigliserida, menurunkan
lemak total, meningkatkan serum insulin yang berefek sebagai hipoglikemik,
menghambat nekrosis hepar, renoprotektif, dan menaikan konsentrasi T3 serum
yang menurun serta mempunyai efek yang berpengaruh terhadap sistem saraf
(9,10).
Berdasarkan penjabaran latar belakang tersebut maka diperlukan suatu
penelitian mengenai potensi poliherbal X dengan komposisi daun kelor (Moringa
 3

oleifera L.), meniran (Phyllanthus niruri L.), dan jintan hitam (Nigella sativa
L.) secara ilmiah untuk pengobatan stroke atau dapat memperbaiki kondisi stress
oksidatif pada hewan model stroke iskemik dimana parameter yang digunakan
adalah penurunan kadar Malondialdehid (MDA) dan peningkatan aktivitas enzim
Superoksida Dismutase (SOD).

B. RUMUSAN MASALAH
Berdasarkan latar belakang yang telah diuraikan di atas, maka dapat dirumuskan
permasalahan dalam penelitian ini, yaitu:
1. Apakah pemberian poliherbal X berpengaruh terhadap penurunan kadar
MDA pada tikus model stroke iskemik?
2. Apakah pemberian poliherbal X berpengaruh terhadap peningkatan aktivitas
SOD pada tikus model stroke iskemik?
3. Berapa dosis terbaik dari pemberian poliherbal X yang berpengaruh terhadap
kadar MDA dan aktivitas SOD pada tikus model stroke iskemik?

C. TUJUAN PENELITIAN
1. Untuk mengetahui pengaruh pemberian poliherbal X terhadap penurunan
kadar MDA pada tikus model stroke iskemik
2. Untuk mengetahui pengaruh pemberian poliherbal X terhadap peningkatan
aktivitas SOD pada tikus model stroke iskemik
3. Mengetahui dosis pemberian poliherbal X yang terbaik dapat menurunkan
kadar MDA dan meningkatkan aktivitas SOD pada tikus model stroke iskemik

D. MANFAAT PENELITIAN
1. Memberikan informasi ilmiah untuk pengembangan dan penelitan obat yang
berkaitan dengan penggunaan poliherbal X
2. Secara teoritis, penelitian ini diharapkan mampu memberikan informasi
ilmiah mengenai kadar SOD dan MDA setelah pemberian poliherbal X
3. Secara aplikatif, penelitian ini diharapkan dapat digunakan sebagai bahan
adjuvant terapi pada penderita stroke iskemik
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

A. TINJAUAN BOTANI
1. Klasifikasi Daun Kelor

Gambar II.1 Daun Kelor (Moringa oleifera L ) (11).

Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Kelas : Dicotyledoneae
Ordo : Brassicales
Famili : Moringaceae
Genus : Moringa
Spesies : Moringa oleifera Lamk (11).
Keterangan : Simplisia yang digunakan ekstrak Moringa oleifera folium
a. Nama Daerah
Di Indonesia tanaman kelor dikenal dengan nama yang berbeda di setiap
daerah, diantaranya kelor (Jawa, Sunda, Bali, Lampung), maronggih
(Madura), moltong (Flores), keloro (Bugis), ongge (Bima), murong atau
barunggai (Sumatera) dan hau fo (Timur). Kelor atau yang dikenal dengan
nama Drumstick yang merupakan tanaman asli kaki gunung Himalaya bagian
barat laut India, Afrika, Arab, Asia Tenggara, Amerika Selatan (12).

4
 5

b. Morfologi
Kelor (Moringa oleifer L.) tumbuh dalam bentuk pohon, berumur panjang
(perenial) dengan tinggi 7-12 m. Batang berkayu (lignosus), tegak, berwarna
putih kotor, kulit tipis, permukaan kasar. Percabangan simpodial, arah cabang
tegak atau miring, cenderung tumbuh lurus dan memanjang. Daun majemuk,
bertangkai panjang, tersusun berseling (alternate), beranak daun gasal
(imparipinnatus), helai daun saat muda berwarna hijau muda, setelah dewasa
hijau tua, bentuk helai daun bulat telur, panjang 1-2 cm, lebar 1-2 cm, tipis
lemas, ujung dan pangkal tumpul (obtusus), tepi rata, susunan pertulangan
menyirip (pinnate), permukaan atas dan bawah halus. Bunga muncul di ketiak
daun (axillaris), bertangkai panjang, kelopak berwarna putih agak krem,
menebar aroma khas. Buah kelor berbentuk panjang bersegi tiga, panjang 20-
60 cm, buah muda berwarna hijau setelah tua menjadi cokelat, bentuk biji
bulat berwarna coklat kehitaman, berbuah setelah berumur 12-18 bulan. Akar
tunggang, berwarna putih, membesar seperti lobak (13).
c. Kandungan Kimia
Kandungan fitokimia dalam daun kelor yaitu tanin, steroid dan triterpenoid,
flavanoid, saponin, antraquinon, dan alkaloid. Berbagai jenis golongan
flavonoid dalam bentuk senyawa murni seperti quercetin, koamferol, luetiolin,
dan lain sebagainya. Flavonoid inilah yang mempengaruhi berbagai macam
aktivitas biologi atau farmakologi, diantaranya antioksidan, antitumor,
antiangiogenik, antiinflamasi, antialergik dan antiviral (14).
d. Kegunaan
Penelitian dan uji clinis tentang fungsi kelor sebagai obat mulai berkembang
meskipun manfaat dan khasiatnya belum banyak diketahui oleh masyarakat.
Hasil penelitian sebelumnya fungsi daun kelor sebagai farmakologis, yaitu
antimikroba, antijamur, antihipertensi, antihyperglikemik, antitumor,
antikanker, anti-inflamasi (15).
 6

2. Klasifikasi Tanaman Meniran

Gambar II.2 Tanaman Meniran (Phyllanthus niruri L.) (16)

Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Kelas : Dicotyledoneae
Ordo : Euphorbiales
Famili : Moringaceae
Genus : Phyllanthus
Spesies : Phyllanthus niruri L (16).
Keterangan : Simplisia yang digunakan ekstrak Phyllanthus niruri herba
a. Nama Daerah
Penyebarannya di seluruh Indonesia teridentifikasi dengan adanya nama
daerah yang berbeda untuk menyebutkan tanaman meniran. Di Sumatera
dikenal dengan nama sidukung anak, dudukung anak, ba’me tano. Di Sulawesi
dikenal dengan nama bolobungo. Di Maluku dikenal dengan nama gosau ma
dungi, gosau ma dongi roriha, belalang babiji (17).
b. Morfologi
Habitus berupa semak semusim setinggi 30-100 cm. Batang berupa batang
masif, bulat, licin, tak berambut, berdiameter ±3 mm, berwarna hijau. Daun
majemuk dan saling berseling. Anak daun berjumlah 15-24, berbentuk bulat
telur, ujung daun tumpul dan pangkalnya membulat. Panjang daun ±1,5 cm,
lebar ±7 mm, bertepi rata, dan berwarna hijau. Bunga berupa bunga tunggal,
terletak di dekat tangkai anak daun, menggantung, berwarna putih. Daun
kelopak berbentuk bintang. Benang sari dan putik tidak tampak jelas. Mahkota
 7

kecil dan berwarna putih. Buah bulat, pipih, berdiameter ±2 mm dan berwarna
hijau keunguan. Biji kecil, keras, berbentuk ginjal, dan berwarna coklat. Akar
tunggang berwarna putih kotor (16).
c. Kandungan Kimia
Meniran juga mengandung berbagai unsur kimia yaitu Lignan, terpen
flavonoid, lipid, benzenoid, steroid berupa beta-sitosterol dan alcanes berupa
triacontacal dan triacontanol. Komponen lainnya berupa tanin, vitamin C, dan
vitamin K. Serta banyak mengandung mineral terutama kalium, damar dan zat
penyamak (17).
d. Kegunaan
Meniran (Phyllanthus niruri L.) memiliki banyak manfaat dalam bidang
kesehatan yaitu sebagai antioksidan, antibiotik, hepatoprotektor, antipiretik,
antitusif, antiplatelet, antiinflamasi, antivirus, diuretik, ekspektoran,
antidiabetik ( menurunkan kadar glukosa darah), antibakterial, anti urolithiasis,
antihiperurisemia, antineoplastik, anti amnestik, dan immunostimulant (18).

3. Klasifikasi Biji Jintan Hitam

Gambar II.3 Biji Jintan Hitam (Nigella sativa L.) (19)

Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Kelas : Dicotyledonae
 8

Ordo : Ranunculales
Famili : Ranunculaceae
Genus : Nigella
Spesies : Nigella sativa L (19)
Keterangan : Simplisia yang digunakan ekstrak Nigella sativa semen
a. Nama Daerah
Nama atau sebutan Jinten Hitam (Nigella sativa L,) ini berbeda-beda di setiap
wilayah Negara misalnya di kawasan Negara barat tanaman ini sering disebut
black carraway, black seeds atau coriander seeds sedangkan di negara-negara
Persia tanaman ini dinamakan Zhonais atau coru syiah dan dalam bahasa Hindi
kalonji. Di Negara Malasyia dan Indonesia sendiri tanaman ini mempunyai
nama “Jinten Hitam” yang mana dalam kesehariannya masyarakat kita
menggunakannya sebagai rempah bahan bummbu masakan dan sebuah obatan
herbal yang mampu menimalisir problem kesehatannya (20).
b. Morfologi
Menurut Djoko (1952) Batang tanaman jintan hitam ini berwarna hijau, tegak,
lunak, beralur, berusuk dan berbulu kasar. Tanaman ini berdaun lonjong
dengan panjang 1.5-2 cm, berdaun tunggal dengan ujung dan pangkalnya
runcing dan berwarna hijau. Kelopak bunga berjumlah lima dengan ukuran
kecil, berbentuk bundar dan ujungnya agak meruncing. Kelopak bunga pada
umumnya berjumlah lima, berwarna putih kebiruan. Biji dari tanaman ini
berbentuk oval dengan warna coklat
c. Kandungan Kimia
Kandungan ekstrak minyak jintan hitam antara lain minyak volatil, minyak
campuran, protein, asam amino, gula reduksi, cairan kental, alkaloid, asam
organik, tanin, resin, metarbin, melatin, serat, mineral, vitamin, tiamin, niasin,
7 piridoksin, asam folat. Biji dan daun jintan hitam mengandung saponin dan
polifenol. Kandungan biji jintan hitam antara lain: thymoquinone,
thymohydroquinone, dithymoquinone, thymol, carvacrol, nigellicine,
nigellidine, nigellimine-N-oxide dan alpha-hedrin (21).
9
 9

d. Kegunaan
Ekstrak jintan hitam berpotensi meningkatkan sistem kekebalan tubuh,
antitumor, antidiabetik, efek menurunkan kadar lemak, menurunkan kolesterol
serum, menurunkan trigliserida, menurunkan lemak total, meningkatkan serum
insulin yang berefek sebagai hipoglikemik, menghambat nekrosis hepar,
renoprotektif, dan menaikan konsentrasi T3 serum yang menurun serta
mempunyai efek yang berpengaruh terhadap sistem saraf (22-24).

B. STROKE ISKEMIK
1. Definisi Stroke Iskemik
Stroke atau Cerebrovaskular accident menurut World Health Organization
(WHO) adalah tanda-tanda klinis yang berkembang cepat akibat gangguan
fungsi otak fokal ataupun global karena adanya sumbatan atau pecahnya
pembuluh darah di otak dengan gejala-gejala yang berlangsung 24 jam atau
lebih (25). Stroke iskemik merupakan kematian beberapa sel otak secara
mendadak disebabkan karena kekurangan oksigen ketika aliran darah ke otak
hilang karena adanya penyumbatan arteri di otak (26).

Gambar II.4 Stroke Iskemik (45)

2. Patofisiologi Stroke Iskemik

Stroke iskemik disebut juga infark atau non-hemorragic disebabkan oleh
gumpalan atau penyumbatan arteri yang menuju ke otak yang sebelumnya
sudah mengalami aterosklerosis. Stroke iskemik terjadi karena adanya
obstruksi pada pembuluh yang mensuplai darah ke otak. Hal yang mendasari
 10

terjadinya obstruksi adalah peningkatan deposit lemak yang melapisi

pembuluh darah atau biasa disebut sebagai ateroskelrosis. Kondisi ini
kemudian menyebabkan dua obstruksi yaitu trombosis serebral dan emboli
serebral. Trombosis serebral mengacu pada trombus (bekuan darah) yang
berkembang di bagian pembuluh darah yang tersumbat. Emboli serebral
mengacu pada bekuan darah yang umumnya terbentuk pada lokasi lain pada
sistem peredaran darah, biasanya jantung dan arteri besar di dada bagian atas
dan leher. Sebagian dari pecahan bekuan darah lepas, memasuki aliran darah
dan berjalan melalui pembuluh darah otak hingga mencapai pada pembuluh
darah yang lebih kecil untuk dimasuki oleh plak tersebut. Penyebab penting
kedua terjadinya emboli adalah denyut jantung yang tidak teratur, yang dikenal
sebagai fibrilasi atrium. Ini menyebabkan kondisi dimana bekuan darah
terbentuk di jantung kemudian lepas dan berjalan ke otak.
Tipe kedua adalah stroke hemoragik terjadi karena kerusakan atau pecahnya
pembuluh darah di otak, perdarahan dapat disebabkan karena hipertensi yang
terjadi sangat lama dan anuerisma otak. Ada dua macam stroke hemoragik
yaitu subarachnoid hemorrhage dan intracerebral hemorrhage. Stroke
hemoragik terjadi pada otak yang mengalami kebocoran atau pecahnya
pembuluh darah di dalam otak, sehingga darah menggenangi atau menutupi
ruang-ruang jaringan sel otak. Adanya darah yang mengenangi atau menutupi
ruang-ruang jaringan sel otak akan menyebabkan kerusakan jaringan sel otak
dan menyebabkan kerusakan fungsi kontrol otak. Genangan darah bisa terjadi
pada otak sekitar pembuluh darah yang pecah (intracerebral hemorage) atau
dapat juga genangan darah masuk kedalam ruang sekitar otak (subarachnoid
hemorage) bila ini terjadi stroke bisa sangat luas dan fatal bahkan sampai pada
kematian (45).
3. Gejala dan Tanda Stroke
Pada umumnya pasien stroke mengalami kelemahan pada salah satu sisi tubuh
dan kesulitan dalam berbicara atau memberikan informasi karena adanya
penurunan kemampuan kognitif atau bahasa. Gejala klinis yang dialami pada
pasien stroke menurut American Stroke Association, 2016, antara lain:
 11

a. Mendadak mengalami mati rasa atau kelemahan pada wajah, lengan atau
kaki, terutama pada satu sisi tubuh.
b. Mendadak kebingungan, kesulitan bicara atau memahami pembicaraan.
c. Mendadak mengalami gangguan penglihatan pada satu atau kedua mata.
d. Mendadak mengalami gangguan berjalan, pusing, kehilangan
keseimbangan atau koordinasi.
e. Mendadak mengalami sakit kepala tanpa sebab.
Tanda dan gejala stroke sering terjadi secara mendadak yang kemudian
dapat langsung meningkat atau memburuk secara perlahan, tergantung pada
jenis stroke dan area otak yang terkena.
4. Penatalaksanaan Terapi Stroke
Secara umum penatalaksaan stroke dimulai dengan evaluasi dan diagnosis
yang cepat karena theraupetic window stroke akut yang sangat pendek,
evaluasi juga harus dilakukan secara sistemik dan cermat yang meliputi
anamnesis, pemeriksaan fisik, pemeriksaan neurologis dan skala stroke. Terapi
umum yang diberikan untuk stroke meliputi stabilisasi jalan napas dan
pernapasan, stabilisasi hemodinamik, pemeriksaan awal fisik umum (tekanan
darah, jantung, neurologi umum awal), pengendalian peninggian tekanan
intrakranial, penanganan transformasi hemoragik, pengendalian kejang,
pengendalian suhu tubuh dan pemeriksaan penunjang (EKG dan CT-Scan)
(46). Tujuan dari terapi stroke, antara lain :
1) Mengurangi terjadinya cedera neurologis dan menurunkan angka kematian
serta kecacatan jangka panjang;
2) Mencegah terjadinya komplikasi sekunder, yaitu imobilitas dana disfungsi
neurologis;
3) Mencegah terjadinya stroke berulang (46).
 12

C. TRIMETILTIN KLORIDA

Gambar II.5 Struktur Kimia Trimetiltin klorida (50)

Trimetiltin klorida (TMT) merupakan senyawa organotin yang bersifat

neurotoksik pada sistem limbus dan hippokampus pada manusia dan hewan.
Patologi yang dapat ditimbulkan oleh induksi TMT adalah gangguan
neurodegeneratif berupa kematian sel saraf dan gangguan kognitif. Trimetyltin
sebagai produk sampingan dalam produksi senyawa timbal dan memiliki aplikasi
yang luas dalam bidang pertanian dan industri, seperti sebagai stabilisator panas
PVC. Senyawa ini berpengaruh terhadap fungsi dan fisiologi otak melalui studi
mekanisme patologis neurotoksik. Pengamatan secara eksperimental terhadap
pemberian senyawa kimia ini berperan penting dalam pembuatan hewan model
untuk penelitian pada penyakit manusia. Gambaran patologik yang ditimbulkan
oleh induksi TMT adalah gangguan neurodegeneratif seperti kematian sel saraf
dan gangguan kognitif. Kerusakan struktural otak diamati mulai 2-3 hari setelah
pemberian TMT, lebih jelas dalam waktu 21 hari, dan terus berlanjut selama lebih
beberapa minggu. Trimetyltin (TMT) merupakan senyawa kimia yang dapat
dengan mudah melewati barier pembuluh darah otak dan masuk ke dalam otak
karena senyawa ini larut dalam air dan lemak sehingga berpotensi menyebabkan
kerusakan pada otak. Perubahan patologi otak tersebut dapat terjadi pada daerah
serebelum dan hippocampus (49).
 13

Gambar V.2 Mekanisme Neurotoksisitas Trimetiltin klorida (50)

Neurotoksik yang disebabkan oleh TMT dapat dilihat dari gambar V.2 dimana
Na+-K+-ATPase yang tersusun atas subunit dan merupakan sejenis protein
membran pada semua sel eukariotik tingkat tinggi dan peran subunit -nya sangat
dekat dengan fungsi sistem saraf. Fungsi utama Na+-K+-ATPase adalah
mempertahankan gradien konsentrasi Na+ dan K+, memperoleh kekuatan
pendorong untuk mengangkut ion dengan menghidrolisis ATP, dan kemudian
menghasilkan sinyal listrik yang penting untuk menjaga eksitabilitas sistem saraf
dan jaringan otot. TMT adalah inhibitor fosforilasi oksidatif ekstensif, yang dapat
menghambat aktivitas Na+-K+-ATPase dan H+-K+-ATPase, sehingga
menghambat produksi energi dalam sel. AMP-activated protein kinase (AMPK)
adalah sensor energi untuk mempertahankan homeostasis dan merupakan protein
kinase serin/treonin yang terkait erat dengan metabolisme energi. AMPK, suatu
heterotrimer yang terdiri dari satu subunit katalitik dan dua subunit pengatur,
dapat diaktifkan dengan pengurangan energi, malnutrisi, hipoksia, dan
sebagainya, dan berpartisipasi dalam metabolisme energi sel dengan mengurangi
penggunaan ATP dan mendorong sintesis ATP. Reseptor yang diaktifkan
proliferator g coactivator-1 (PGC-1) adalah ko-aktivator transkripsi dari gen
terkait mitokondria, yang terkait erat dengan metabolisme energi intraseluler. Ia
dapat mengontrol metabolisme energi sel dengan mengubah kepadatan
mitokondria dan mengatur proses oksidasi dan pengambilan glukosa dalam sel.
Sementara itu, PGC-1α juga berperan penting dalam memerangi kerusakan
peroksidatif pada sistem saraf pusat. Oleh karena itu, perubahan ekspresi PGC-1α
 14

intraseluler dapat secara tidak langsung mencerminkan produksi energi

intraseluler.
Paparan trimetiltin klorida menyebabkan perubahan signifikan pada fosforilasi
AMPK di hipokampus dan medula oblongata, yang dapat menyebabkan gangguan
metabolisme energi. Kerusakan oksidatif terjadi di hipokampus dan medula
oblongata tikus yang diinduksi oleh TMT, yang selanjutnya menyebabkan
penurunan ekspresi proliferator g coactivator-1 (PGC-1). PGC-1 adalah ko-
aktivator transkripsi dari gen terkait mitokondria, yang terkait erat dengan
metabolisme energi intraseluler. Ia dapat mengontrol metabolisme energi sel
dengan mengubah kepadatan mitokondria dan mengatur proses oksidasi dan
pengambilan glukosa dalam sel. PGC-1α berperan penting dalam memerangi
kerusakan peroksidatif pada sistem saraf pusat. Oleh karena itu, perubahan
ekspresi PGC-1α intraseluler dapat secara tidak langsung mencerminkan produksi
energi intraseluler. TMT dapat mengaktivasi AMPK dan menurunkan regulasi
PGC-1α sehingga terjadi peningkatan peroksidasi dan peningkatan radikal bebas
yang menyebakan cedera peroksidatif sistem saraf pusat (50). Disfungsi
mitokondria yang diinduksi stress oksidative akan merangsang kematian neuron
hipokampus dan menyebabkan kelainan perilaku dan gangguan kognitif (51).

D. HEWAN MODEL STROKE ISKEMIK

Hewan model stroke iskemik merupakan hewan model yang dirancang untuk
dipergunakan dalam percobaan stroke iskemik. Sampai saat ini, ada dua metode
atau model yang telah dikembangkan untuk merangsang stroke pada tikus. Model
pertama didasarkan pada ukuran iskemik, yaitu iskemik global dan iskemik fokal.
Iskemik global adalah iskemik yang berkembang dengan menghentikan keempat
arteri yang melayani otak yaitu dua arteri charotic dan dua arteri vertebralis kiri
dan kanan. Iskemik fokal dihasilkan dari berhentinya salah satu arteri otak, yaitu.
arteri serebral tengah. Model kedua didasarkan pada durasi oklusi, yaitu oklusi
permanen dan oklusi sementara. Oklusi permanen terjadi secara permanen dengan
kerusakan pada korteks serebri, striatum/globus palidua, nukleus talamus, dan
hipokampus. Jenis oklusi ini digunakan untuk mempelajari obat trombolitik baru.
 15

Oklusi sementara terjadi dalam waktu tertentu, dan kerusakan dapat terjadi pada
daerah korteks dan striatum. Kedua cara tersebut di atas hampir tidak diterapkan
di Indonesia karena keterbatasan alat penunjang dan bahan kimia, serta biaya yang
relatif tinggi (40).
Berdasarkan alasan tersebut penelitian ini dilakukan untuk mengembangkan
metode sederhana untuk merangsang stroke iskemik pada hewan uji (tikus Wistar)
dengan pemberian senyawa kimia, gambaran patologik yang ditimbulkan oleh
induksi Trimetiltin klorida (TMT) adalah gangguan neurodegeneratif seperti
kematian sel saraf dan gangguan kognitif. Perubahan patologi otak tersebut dapat
terjadi pada daerah serebelum dan hippocampus. Paparan trimetiltin klorida
(TMT) menginduksi perubahan aktivitas superoksida dismutase (SOD), kadar
malondialdehid (MDA), aktivitas dan ekspresi Na+-K+-ATPase di hipokampus,
medula oblongata mencit dan sel N2a. Setelah paparan trimetiltin klorida, terjadi
perubahan signifikan pada fosforilasi AMPK di hipokampus dan medula
oblongata, yang dapat menyebabkan gangguan metabolisme energi. Kerusakan
oksidatif terjadi di hipokampus dan medula oblongata tikus yang diinduksi oleh
TMT, yang selanjutnya menyebabkan penurunan ekspresi PGC-1α (50).
Berkaitan dengan akibat yang ditimbulkan oleh senyawa TMT pada otak yang
menyerupai gambaran patologis penyakit stroke, maka senyawa ini berpotensi
digunakan sebagai model induksi pada tikus untuk penyakit stroke (49).

E. RADIKAL BEBAS
Radikal bebas adalah suatu senyawa atau molekul yang mengandung satu atau
lebih elektron tidak berpasangan pada orbital luarnya. Adanya elektron yang tidak
berpasangan menyebabkan senyawa tersebut sangat reaktif mencari pasangan
dengan cara menyerang dan mengikat elektron molekul yang berada di sekitarnya.
Target utama radikal bebas adalah protein, asam lemak tak jenuh dan lipoprotein,
serta unsur DNA termasuk karbohidrat. Dari ketiga molekul tersebut yang paling
rentang terhadap serangan radikal bebas adalah asam lemak tak jenuh. Serangan
radikal bebas terhadap molekul di sekelilingnya akan menyebabkan terjadinya
reaksi berantai yang kemudian menghasilkan senyawa baru (30).
 16

Sebenarnya radikal bebas penting artinya bagi Kesehatan dan fungsi tubuh
yang normal yaitu mengurangi peradangan, membunuh bakteri, dan
mengendalikan torus otot polos pembuluh darah dan organ-organ dalam tubuh.
Namun bila dihasilkan melebihi batas kemampuan proteksi antioksidan seluler,
maka dia akan menyerang sel itu sendiri. Struktur sel yang berubah turut merubah
fungsinya, yang akan mengarah pada proses munculnya penyakit. Radikal bebas
yang sangat berbahaya dalam makhluk hidup antara lain golongan hidroksil (OH-
), dan peroksidal (RO-2), peroksinitrit (ONOO-), asam hipoklorit (HOCL), dan
hidrogen peroksida (H2O2) (33).

Gambar II.6 Sumber eksogen dan endogen radikal bebas (33)

Sumber radikal bebas dapat diperoleh dari dua sumber yaitu endogen dan
eksogen. Beberapa sumber eksogen antara lain polusi udara akibat asap
kendaraan, asap rokok, gas buangan dari pabrik. Beberapa kondisi juga bisa
memicu terbentuknya radikal bebas di dalam tubuh, misalnya stress, sakit,
olahraga berlebihan dan lain-lain. Secara endogen radikal bebas terbentuk sebagai
respon normal dari serangkaian proses biokima dalam tubuh. Secara alamiah
radikal bebas dibentuk dalam tubuh makhluk hidup termasuk manusia, binatang
dan tumbuhan. Dalam kondisi normal jumlah radikal tersebut berada dalam
keseimbangan atau terkendali. Sumber radikal bebas endogen tersebut berasal dari
proses oto-oksidasi, oksidasi enzimatik, respiratory burst, reaksi yang dikatalisis
ion logam transisi, dan ischemia reperfusion injury. Bentuk senyawa dari radikal
bebas di antaranya radikal superoksida (O2) dan radikal hidroksida (OH+).
Senyawa tersebut merupakan jenis radikal bebas yang sebenarnya. Dua senyawa
lain yang berhubungan merujuk pada jenis lainya, yaitu spesies oksigen non
 17

radikal di antaranya hidrogen peroksida (H2O2) dan oksigen singlet (O2-).

Senyawa-senyawa tersebut dikenal sebagai Reactive Oxygen Species (ROS).
Walaupun proses oksidasi esensial untuk kehidupan, beberapa proses oksidasi
dapat menyebabkan kerusakan sel. Reactive oxygen species (ROS) secara
endogen dapat diproduksi oleh tubuh melalui proses produksi energi, sintesis
senyawa biologis, dan fagositosis yang terjadi pada aktivitas sistem imun.
Walaupun radikal bebas dapat di hasilkan secara endogen dari dalam tubuh, secara
fisiologis sel-sel tubuh juga dapat menghasilkan scjumlah enzim dan senyawa
antioksidan yang berperan untuk melawan stres oksidatif yang terjadi di dalam
tubuh. Secara alami tubuh dapat menghasilkan antioksidan, yang disebut sebagai
antioksidan endogen seperti superoksida dismutase (SOD), katalase (CAT),
glutation peroksidase (GPx), glutation reduktase (GR) dan seruloplasmin. Apabila
jumlah radikal bebas lebih tinggi dibandingkan antioksidan endogen dapat
menimbulkan stres oksidatif dalam tubuh. Stres oksidatif dalam tubuh
menimbulkan kerusakan pada sel. Stres oksidatif dalam tubuh dapat diukur
dengan menggunakan salah satu parameternya yaitu kadar MDA. Semakin tinggi
stres oksidatif yang terjadi dalam tubuh maka semakin tinggi kadar MDA plasma
(30).
Pembentukan radikal bebas terjadi pada saat iskemia maupun saat reperfusi,
melalui beberapa macam mekanisme. Selama iskemia, ketika suplai oksigen
terbatas, rantai transpor elektron pada membran mitokondria bagian dalam
mengalami reduksi yang cukup besar, maka akan terbentuk superoksid.
Terbentukya radikal oksigen di mitokondria merupakan mekanime utama
terbentuknya radikal bebas selama iskemia. Pada kondisi patologis, dalam
keadaan iskemia, karier transpor elektron pada membran mitokondria bagian
dalam mengalami kerusakan akibatnya banyak mengalami reduksi. Jika banyak
karier elektron mengalami reduksi menghasilkan sampai sebesar lebih 2%
elektron terlepas akan menghasilkan secara langsung elektron oksigen tidak
berpasangan dan terbentuk superoksid. Pada kondisi normal, otak mempunyai
aktifitas rendah santin oksidase, dalam keadaan iskemia terjadi peningkatan
konversi santin dehidrogenase menjadi santin oksidase akibat peningkatan kadar
 18

kalsium intrasel. Kerusakan adenin nukleotida selama iskemia menghasilkan

akumulasi hipoksantin. Metabolisme Hipoksantin terjadi dengan adanya oksigen
setelah reperfusi dan mengalami oksidasi oleh enzim santin oksidase dan
terbentuk superoksid, H2O2 serta asam urat. Namun, kondisi ini lebih jelas terlihat
pada iskemia global, dimana aktifitas santin oksidase meningkat 5 kali lipat
setelah 15 menit iskemia pada penelitian tikus (2).

F. STRESS OKSIDATIVE
Stress oksidatif yaitu suatu keadaan ketidakseimbangan antara prooksidan dengan
antioksidan dimana produksi radikal bebas melebihi kemampuan penghambat
radikal alamiah atau kapasitas seluler untuk menghasilkan respons antioksidan
aktif. Mekanisme penghambat radikal bebas terdiri dari antioksidan endogen dan
eksogen. Antioksidan endogen terdiri dari Superoksid dismutase (SOD),
Glutathion peroksidase (GPx) dan katalase. Antioksidan eksogen terdiri dari vit E,
betakaroten dan vit C (41).
Stres oksidatif memiliki efek reflektif dalam patogenesis stroke karena
kerentanan tinggi otak terhadap kerusakan yang diinduksi spesies Reactive
Oxygen Species (ROS). Otak menjadi target karena berbagai alasan, termasuk
konsentrasi lipid peroksidasi yang tinggi, tingkat antioksidan defensif yang
rendah, konsumsi oksigen yang tinggi, dan kadar zat besi yang tinggi yang
bertindak sebagai pro-oksidan melalui stres. Malondialdehid (MDA) adalah
produk peroksidasi lipid (LPO) akhir. Senyawa ini merupakan aldehida reaktif
dan merupakan salah satu dari beberapa spesies elektrofil reaktif yang
menyebabkan toksisitas seluler. Produksi aldehida digunakan sebagai biomarker
untuk mengukur tingkat stres oksidatif (42). Stress oksidatif menyebabkan
ketidakseimbangan dalam system pembentukan dan penangkapan radikal bebas
sehingga menurunkan aktivitas antioksidan (34). peroksida lipid sebagai akibat
dari stress oksidatif merupakan reaksi berantai yang terus menghasilkan pasokan
radikal bebas yang dapat merusak jaringan dan dapat menyebabkan penyakit
degenerative seperti kanker, penyakit stroke, diabetes, penuaan dan lain-lain.
 19

G. PEROKSIDASI LIPID
Peroksidasi (auto-oksidasi) lipid merupakan salah satu molekul yang paling
sensitif terhadap serangan radikal bebas sehingga terbentuk lipid peroksida.
Peroksidasi lipid adalah reaksi yang terjadi antara radikal bebas dengan asam
lemak tak jenuh majemuk (Polyunsaturated fatty acid, PUFA) yang sedikitnya
memiliki tiga ikatan rangkap. Peroksidasi (auto-oksidasi) lipid yang terpajan oleh
oksigen bertanggung jawab tidak saja terhadap pembusukan makanan, tetapi juga
kerusakan jaringan in vivo. Efek merugikan diperkirakan disebabkan oleh radikal
bebas (ROO, RO, OH) yang dihasilkan sewaktu terbentuknya peroksidasi dari
asam lemak yang mengandung ikatan rangkap yang diselilingi metilen, radikal
asam lemak yang terdapat pada asam lemak tidak jenuh ganda alami. Produk akhir
dari peroksida lipid berupa hidrokarbon dan gugus karbonil terutama aldehid
seperti malondialdehid (MDA) sehingga MDA dapat digunakan sebagai tolak
ukur dalam menentukan kadar peroksida lipid jaringan dan organ (28).
Peroksidasi lipid adalah suatu reaksi berantai yang menghasilkan radikal bebas
secara terus menerus dan lebih lanjut. Umumnya peroksidasi lipid dapat melalui
tiga tahap reaksi, yaitu inisiasi, propagasi, dan terminasi. Proses peroksidasi lipid
dalam reaksi berantai secara keseluruhan sebagai berikut :
1. Inisiasi, yaitu senyawa lipid diserang oleh radikal bebas dengan cara
mengambil atau memberikan satu elektron bebas tak berpasangan, sehingga
terbentuk senyawa radikal baru
RH + OH● → R● + H2O
Keterangan: RH = senyawa lipid
OH = Senyawa radikal hidroksil
R● = Senyawa radikal baru yang terbentuk
2. Propagasi, yaitu senyawa radikal yang baru terbentuk menyerang molekul lipid
lain di dekatnya membentuk senyawa radikal peroksil dan menyebabkan reaksi
berantai. Senyawa radikal peroksil bersama dengan atom hidrogen dari rantai
hidrokarbon lain membentuk lipid hidroperoksida atau peroksida siklik.
R● + O2 → ROO● ROO● + R1H → ROOH + R1●
Keterangan: R● = Senyawa radikal bebas
 20

ROO ● = Radikal peroksil

ROOH = Lipid hidroperoksid
R1● = senyawa radikal bebas baru
3. Terminasi, yaitu peristiwa penstabilan senyawa radikal dengan ikatan rantai
samping asam lemak antara 2 senyawa radikal lipid untuk membentuk senyawa
tidak radikal.
R● + R1 → R- R1
Keterangan: R● = senyawa radikal
R1● = senyawa radikal lain (30)

H. PIRACETAM

Gambar II.7 Struktur Kimia Piracetam

Piracetam adalah obat nootropik dalam kelompok racetam, dengan nama kimia 2-
oxo-1-pyrrolidine acetamide. Piracetam merupakan turunan siklik dari
neurotransmitter gamma aminobutyric acid (GABA). Piracetam merupakan
golongan agen nootropik yang berbentuk bubuk kristal putih dan tidak berbau.
Piracetam bekerja dengan cara meningkatkan efektifitas dari fungsi telencephalon
otak melalui peningkatan fungsi neurotransmiter kolinergik. Telencephalon inilah
yang mengatur fungsi kognitif pada manusia (memori, kesadaran, belajar dan
lain). Fungsi lain dari piracetam adalah menstimulasi glikolisis oksidatif,
meningkatkan konsumsi oksigen pada otak, serta mempengaruhi pengaturan
cerebrovaskular dan juga mempunyai efek antitrombolitik untuk mengurangi lesi
neuron utama. Oleh karena itu piracetam biasanya digunakan untuk pengobatan
stroke, terutama stroke iskemik. Piracetam mempengaruhi aktifitas otak melalui
berbagai mekanisme yang berbeda antara lain merangsang transmisi neuron di
otak, merangsang metabolisme otak, memperbaiki mikrovaskular tanpa efek
vasodilatasi. Distribusi dari piracetam di distribusikan melewati sawar otak dan
 21

terkonsentrasi pada bagian abu-abu dari korteks cerebri dan cerebelum, nukleus
caudatus, hipokampus, korpus genikulatum lateral, dan pleksus koroideus.
Ekskresi, Piracetam di ekskresi melalui urin dan feces, ekskresi melalui urin
mencapai 98% oleh karena itu diperlukan perhatian khusus pada penderita dengan
gangguan ginjal. Piracetam memiliki profil farmakokinetika yang baik terlihat
dari bioavailabilitas hampir 100% dan bersifat mudah larut dalam air. Kadar
puncak terlihat setelah 1,5 jam dengan waktu paruh 5-6 jam. Piracetam terdiri dari
gugus asetamida dan inti pirolidin yang bersifat basa. Meskipun bersifat water
soluble, piracetam mudah menembus bloodbrain barrier dikarenakan berat
molekul piracetam yang kecil mengakibatkan piracetam mudah melewati sawar
darah otak. Penyerapan piracetam dalam tubuh tidak terganggu dengan adanya
makanan dan tidak dimetabolisme oleh hati. Piracetam berperan dalam
memperbaiki fluiditas membran sel. Membran sel terdiri dari molekul lipid bilayer
diselingi dengan molekul protein. Membran fluiditas diyakini penting untuk
sejumlah kegiatan termasuk transportasi membran, kegiatan enzim, sekresi
hormon, dan mengikat reseptor dan stimulasi. Interaksi piracetam dengan
membrane sel berdasarkan pengamatan menggunakan resonansi magnetic studi
spektroskopi melibatkan membran buatan, yang menunjukkan molekul piracetam
mengelilingi gugus kepala polar fosfolipid. Membentuk kompleks obat lipid yang
diperkirakan mendorong reorganisasi lipid, yang dapat mempengaruhi fungsi dan
fluiditas membran. Piracetam meningkatkan deformabilitas eritrosit yang
merupakan elastisitas dan kemampuan sel darah merah melewati mikrovaskuler
tanpa mengalami perubahan bentuk dan fungsi. Dengan meningkatnya
deformabilitas eritrosit maka akan mempermudah aliran darah melewati
pembuluh darah otak yang kecil sehingga memperbaiki keadaan iskemia. Efek ini
terlihat lebih signifikan ketikan kondisi membran terganggu seperti keadaan
hipoksia, iskemia, dan penuaan (48).
 22

I. MALONDIALDEHID (MDA)

Gambar II.8 Rumus bangun MDA (30)

Malondialdehid adalah senyawa dialdehid yang merupakan produk akhir dari

peroksida lipid di alam tubuh menyebabkan ketengikan oksidatif. Malondialdehid
di dalam material biologi (mitokondria, sitosol, lisosom) terdapat dalam bentuk
bebas atau kompleks (terikat) dengan unsur pokok beberapa jaringan.
Malondialdehid merupakan aldehid terbesar, dengan kisaran 82% berasal dari
PUFA (Polyunsalurated Fatty Acid) teroksidasi dan mencapai 80% jika berasal
dari LDL teroksidasi (30).
Peroksidasi lipid merupakan suatu rangkaian reaksi yang terjadi dalam 3 fase.
Diawali dengan fase inisiasi, dimana terjadi abstraksi ion H dari ikatan C-H lipid
dengan paparan oksidan dan terbentuk carbon centred lipid radical. Kemudian
diikuti dengan fase propagasi yang merupakan bagian yang kompleks, dimana
radikal lipid dengan cepat mengalami penggabungan dengan O2 dan terbentuk
radikal peroksi. Reaksi kedua pada fase ini membuat peningkatan jumlah yang
dramatis sehubungan dengan adanya abstraksi ion H dari lipid oleh radikal peroksi
membentuk lipid hidroperoksidase. Penggabungan O2 dengan lipid radikal yang
baru terbentuk menambah jumlah peroksidasi membran lipid. Disamping
abstraksi ion H juga terjadi 3 reaksi penting lain yaitu fragmentasi, rearrangement
dan cyclizations Akhirnya rangkaian peroksidasi lipid berakhir dengan satu atau
lebih reaksi terminasi (2).
 23

Gambar II.9 Tiga fase reaksi berantai peroksidasi lipid (2)

Metode ini dikenal dengan metode TBARs (Thiobarbituric Acid Reactivity

Test) yang merupakan salah satu indicator peroksida lipid yang paling awal
digunakan. Pengukuran menggunakan spektrofotometer atas dasar penyerapan
warna yang terbentuk dari reaksi TBA dan MDA. Prinsip pengukurannya adalah
dengan mereaksikan dua molekul TBA dengan satu molekul MDA pada kondisi
sehingga menghasilkan senyawa kompleks MDA-TBA yang berwarna merah
muda yang dapat diukur serapannya dengan spektrofotometer UV-VIS Pada
Panjang gelombang 532 nm (29). Analisis MDA merupakan analisis radikal bebas
secara tidak langsung dan mudah menentukan jumlah radikal bebas yang
terbentuk. Analisis radikal bebas secara langsung sulit dilakukan karena senyawa
radikal sangat tidak stabil dan reaksinya pun berjalan sangat cepat. Pengukuran
kadar MDA secara spektrofotometer pada Panjang gelombang 532 nm merupakan
metode utama, baik untuk identifikasi, pemeriksaan kemurnian maupun
penetapan (35). Metode ini di samping dapat dipakai untuk analisis zat dalam
jumlah/kadar kecil, metode ini juga cepat, sederhana, spesifik, sensitive dan non-
distruktif. Pengukuran kadar MDA telah digunakan secara luas sebagai indikator
 24

dari kerusakan oksidatif pada lemak tak jenuh sekaligus merupakan indikator
keberadaan radikal bebas (33).

J. SUPEROKSIDASE DISMUTASE (SOD)

Superoksida dismutase adalah enzim yang berfungsi sebagai katalisator reaksi
dismutase dari anion superoksida menjadi hidrogen peroksida (H2O2) dan oksigen
(O2). 2 O2 + 2H → H2O2 + O2. SOD di dalam tubuh berfungsi untuk melindungi
sel-sel tubuh dan berperan sebagai antioksidan untuk mengatasi reaksi radikal
bebas, melalui pengikatan ion logam, penangkapan oksigen, mengurangi
toksisitas oksigen menjadi bentuk-bentuk non radikal pada sitosol dan
mitokondria. Superoksida dismutase terdapat dalam sitosol mengandung mineral
tembaga (Cu) dan seng (Zn), sedangkan yang berada di dalam mitokondria
mengandung mineral mangan (Mn). Aktivitas enzim SOD ini memiliki peran
penting dalam sistem pertahanan tubuh, terutama terhadap aktivitas senyawa
oksigen reaktif yang dapat menyebabkan stress oksidatif (29). Pengujian SOD
merupakan salah satu parameter mengetahui adanya aktivitas antioksidan yaitu
berdasarkan kemampuan menghambat reaksi yang dikatalisis oleh O2 (36).
Saat ini tersedia metode Adrenochrome Assay yang mudah dilaksanakan dan
sensitive untuk mengukur aktivitas SOD. Pengukuran didasarkan pada
kemampuan SOD menghambat autooksidasi spontan dari epinefrin. Larutan
epinefrin dalam suasana asam akan stabil, tetapi spontan akan teroksidasi dengan
adanya kenaikan pH. Autooksidasi terjadi paling cepat disertai dengan
terbentuknya adrenokrom dengan kecepatan linear yaitu pada pH 10,2 dan suhu
30oC (37).

E. SEDIAAN POLIHERBAL X
Poliherbal yang digunakan pada penelitian ini yaitu dalam bentuk sediaan kapsul.
Kapsul adalah sediaan obat tradisional yang terbungkus cangkang keras.
Persyaratan sediaan kapsul sebagaimana dimaksud dalam Peraturan BPOM No 32
tahun 2019 yaitu bentuk sediaan kapsul dapat berisi:
25
 25

a. ekstrak kering;
b. bahan cair;
c. campuran ekstrak kental dengan bahan pengering; dan/atau
d. serbuk Simplisia tertentu (54).

Gambar II.10 Sediaan poiherbal X

No Registrasi : POM TR 193326191

Komposisi dari sediaan kapsul poliherbal X yaitu Tiap 500 mg mengandung
1) ekstrak Moringa oleifera folium 300 mg
2) ekstrak Phyllanthus niruri herba 100 mg
3) ekstrak Nigella sativa semen 100 mg

K. LANDASAN TEORI
1. Kandungan fitokimia dalam daun kelor yaitu tanin, steroid dan triterpenoid,
flavanoid, saponin, antraquinon, dan alkaloid. Flavonoid inilah yang
mempengaruhi berbagai macam aktivitas biologi atau farmakologi,
diantaranya antioksidan, antitumor, antiangiogenik, antiinflamasi, antialergik
dan antiviral (14).
2. Kandungan kimia yang terdapat dalam Phyllanthus niruri L. yaitu Lignan,
terpen flavonoid, lipid, benzenoid, steroid berupa beta-sitosterol dan alcanes
berupa triacontacal dan triacontanol. Komponen lainnya berupa tanin, vitamin
C, dan vitamin K. Serta banyak mengandung mineral terutama kalium, damar
dan zat penyamak (17).
3. Kandungan Kimia ekstrak minyak jintan hitam antara lain minyak volatil,
minyak campuran, protein, asam amino, gula reduksi, cairan kental, alkaloid,
asam organik, tanin, resin, metarbin, melatin, serat, mineral, vitamin, tiamin,
 26

4. niasin, 7 piridoksin, asam folat. Biji dan daun jintan hitam mengandung
saponin dan polifenol (21).
5. Menurut penelitian yang dilakukan oleh Woranan Kirisattayakul, Moringa
oleifera L. dapat menurunkan stres oksidatif terutama di korteks serebral
dengan mekanisme lain seperti penurunan kapasitas pembangkitan stres
oksidatif baik melalui mitokondria atau melalui sel-sel inflamasi (31).
6. Menurut penelitian yang dilakukan oleh Hossein Hosseinzadeh, Nigella sativa
L. ekstrak dapat menurunkan cedera reperfusi iskemia global. Penghambatan
cedera mungkin terkait dengan sifat antioksidan, pemulung radikal bebas dan
efek lain dari ekstrak, yang memerlukan penelitian lebih lanjut. Disimpulkan
bahwa larutan berair dan etanol ekstrak dari Nigella sativa L biji memiliki efek
perlindungan terhadap iskemia pada tikus. Efek ini dapat dikaitkan dengan
adanya komponen alkaloid dan/atau konstituen lainnya (39).
7. Menurut penelitian yang dilakukan oleh Nelli Giribabu, Pengobatan tikus
jantan diabetes dengan Phyllanthus niruri L ekstrak air daun (200 dan 400 mg/
kg) selama 28 hari berturut-turut mencegah peningkatan jumlah produk
peroksidasi lipid (LPO), malondialdehid (MDA), dan penurunan superoksida
dismutase (SOD), katalase (CAT), dan glutathione tingkat aktivitas
peroksidase (GPx) di ginjal tikus (38).

L. HIPOTESIS
Terdapat pengaruh pemberian poliherbal X dengan komposisi ekstrak daun kelor
(Moringa oleifera L.), meniran (Phyllanthus niruri L), dan jintan hitam (Nigella
sativa L.) memiliki efek antioksidan dapat memperbaiki kondisi stress oksidatif
pada hewan model stroke iskemik dengan menurunkan kadar malondialdehid
(MDA) dan meningkatkan aktivitas superoksida dismutase (SOD).
 BAB III
RANCANGAN PENELITIAN

A. PRINSIP PENELITIAN
Penelitian dilakukan secara eksperimental pada hewan uji tikus (Rattus
norvegicus) galur Wistar jantan. tikus diaklimatisasi kemudian dilakukan
pengelompokan hewan. Hewan uji dibagi menjadi 7 kelompok yaitu kelompok
kontrol normal, kelompok kontrol positif, kelompok kontrol negatif, dan 4
kelompok tingkatan dosis poliherbal X (50; 100; 200; 400 mg/kgBB). Masing-
masing kelompok uji kecuali kelompok kontrol normal diberikan Trimetiltin
Klorida (TMT) dengan dosis 0,5 mg/kgBB melalui intraperitoneal selama 7 hari.
Pada hari ke-8 kelompok kontrol positif diberikan piracetam dengan dosis 50
mg/kgBB secara oral dan 4 kelompok tingkatan dosis diberikan poliherbal X
dengan dosis 50 mg/kgBB, 100 mg/kgBB, 200 mg/kgBB, 400 mg/kgBB secara
oral selama 14 hari. Sedangkan kelompok kontrol normal dan kontrol negative
hanya diberi pakan dan minum. Pada hari ke-22 seluruh kelompok uji di
euthanasia menggunakan ketamin dan xylazine. Setelah tikus di euthanasia, tikus
dibedah diambil organ otak dibuat homogenate kemudian diukur kadar MDA dan
aktivitas SOD..

B. BAHAN PENELITIAN
Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah poliherbal X dengan komposisi
tiap 500 mg mengandung eksrak daun kelor (Moringa oleifera L.) 300 mg,
meniran (Phyllanthus niruri L) 100 mg, dan jintan hitam (Nigella sativa L.) 100
mg yang berasal dari sediaan kapsul Onoake produksi Nukleus Farma PT. Natura
Nuswantara Nirmala dengan variasi dosis terapi 50mg/kg BB, 100 mg/kg BB, 200
mg/kg BB, dan 400 mg/kgBB.

27
 28

C. TEMPAT PENELITIAN
Penelitian ini dilakukan di Rumah Sakit Hewan Pendidikan Fakultas Kedokteran
Hewan Institut Pertanian Bogor.

D. HEWAN COBA
Hewan coba yang digunakan adalah tikus jantan (Rattus norvegicus) galur wistar,
sehat, umur 3-3,5 bulan dengan BB 200-250 g. Digunakan sekurang-kurangnya 4
kelompok uji dan 3 kelompok kontrol. Banyaknya jumlah hewan uji tiap
kelompok dihitung menggunakan rumus Federer
Rumus Federer : (n-1)(t-1) ≥ 15 ; dengan t = jumlah kelompok
n = jumlah hewan uji
Jika t = 7, maka jumlah hewan coba (n) :
(n-1)(7-1) ≥ 15 →6(n-1) ≥ 15 → n ≥ 4
Berdasarkan perhitungan tersebut, maka jumlah hewan coba minimal yang
diperlukan adalah 4 ekor tikus untuk setiap kelompok. Total hewan coba yang
dibutuhkan adalah 28 ekor tikus untuk keseluruhan percobaan.

E. TAHAPAN PENELITIAN
1. Pelaksanaan Kaji Etik
2. Persiapan Hewan Coba
3. Persiapan Bahan Penelitian
a. Pembuatan Sediaan Uji Larutan Stock 1%
b. Pembuatan Larutan Trimetiltin Klorida (TMT)
4. Pembuatan Hewan Model Sroke Iskemik
5. Prosedur Perlakuan Penelitian
6. Pengambilan Sampel
7. Pengambilan Data
a. Pengukuran Kadar MDA
b. Pengukuran Aktivitas SOD
 29

F. ANALISIS DATA
Data hasil pengukuran kadar MDA dan aktivitas SOD yang diperoleh dari masing-
masing kelompok perlakuan dianalisis statistic menggunakan IBM SPSS versi 20.
Uji normalitas data menggunakan One Sample Kolmogorov-Smirnov Test. Data
terdistribusi normal (P>0,05) dianalisis menggunakan uji parametrik One Way
Anova dan apabila terdapat perbedaan yang nyata (P<0,05) maka dilakukan uji
lanjutan post-hoc LSD. Sebaliknya, jika data terdistribusi tidak normal dianalisis
dengan uji non parametrik Kruskal-Wallis dan apabila berbeda nyata (P<0,05)
dilakukan uji lanjutan Mann-Whitney. Nilai signifikansi bermakna (P<0,05) pada
interval kepercayaan 95%
 BAB IV
BAHAN, ALAT, DAN METODE PENELITIAN

A. BAHAN
1. Bahan uji
a. Poliherbal X dengan komposisi tiap 500 mg mengandung eksrak daun
kelor (Moringa oleifera L.) 300 mg, meniran (Phyllanthus niruri L) 100
mg, dan jintan hitam (Nigella sativa L.) 100 mg yang berasal dari sediaan
kapsul Onoake produksi Nukleus Farma PT. Natura Nuswantara Nirmala
dengan variasi dosis terapi 50mg/kg BB, 100 mg/kg BB, 200 mg/kg BB,
dan 400 mg/kgBB.
b. Piracetam syrup 500 mg/5 ml
c. Larutan Trimetiltin Klorida (TMT)
2. Pereaksi
a. Aquadest
b. Larutan MDA standar 1,1,3,3–tetraetoksipropan (TEP)
c. Untuk pengukuran MDA : Asam Trikloroasetat (TCA) 20%, Asam
Tiobarbiturat (TBA) 0,67%
d. Untuk pengukuran SOD : Larutan Dapar Natrium Karbonat pH 10,2,
Larutan epinefrin 0,01 M.
3. Pengambilan Sampel
a. Ketamine
b. Xylazine
c. NaCl 0,9% fisiologis
d. Phosphate Buffered Saline (PBS)

B. ALAT
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah perawatan tikus antara lain bak
(kandang), kawat kasa, tempat makan tikus dan tempat minum tikus. untuk
mengukur berat badan tikus menggunakan timbangan digital. Untuk perlakuan

30
 31

menggunakan alat suntik dan sonde oral. Peralatan untuk pembedahan dan
pemeriksaan yaitu seperangkat alat bedah, cawan penguap, mortar & alu, pipet
tetes, tabung reaksi, rak tabung, vortex, water bath, sentrifugasi, mikropipet, ph
meter, lemari pendingin dan spektrofotometer UV-VIS

C. METODE PENELITIAN
1. Pelaksanaan Kaji Etik
Persetujuan kaji etik dilakukan oleh Komisi Etik Hewan Kedokteran Hewan
Institut Pertanian Bogor. Pelaksanaan Kaji etik dilakukan sebelum perlakuan
bertujuan untuk menjaga keamanan dan hak-hak bagi subjek penelitian
maupun peneliti, sehingga dapat memperkecil kesalahan dalam penelitian.
Pertimbangan kaji etik terkait dengan prinsip penggunaan hewan uji yaitu 3R
(Reduction, Replacement, dan Refinement).
2. Persiapan Hewan Coba
Hewan coba yang digunakan adalah tikus (Rattus norvegicus) galur wistar
jantan, sehat, umur 3-3,5 bulan dengan BB 200-250 gram, sebanyak 28 ekor.
Sebelum pengujian dimulai tikus diaklimatisasi dalam ruang percobaan selama
7 hari. Hewan ditempatkan secara acak 4 tikus per kandang, dan Selama
aklimatisasi tikus diberikan minum dan pakan 30 g/hari dan 10 ml air. Di akhir
aklimatisasi, berat badan tikus ditimbang kembali dan beratnya berkisar antara
200-250 gram.
3. Persiapan Bahan Penelitian
a. Pembuatan Sediaan Uji Larutan Stock 2%
Ditimbang bahan uji (isi kapsul poliherbal X) sebanyak 2 gram kemudian
dilarutkan ke dalam 100 ml aquades
b. Pembuatan Larutan Trimetiltin Klorida (TMT)
Larutan TMT dosis 0,5 mg/kgBB dibuat dengan cara TMT ditimbang dan
dilarutkan dalam NaCl 0,9%.
 32

4. Pembuatan Hewan Model Stroke Iskemik

Pemberian TMT dilakukan sekali setelah aklimatisasi selama 7 hari. Satu ekor
tikus diberikan TMT dosis 0,5 mg/kgBB yang dilarutkan dengan 0,5 ml NaCl
0,9%. Kemudian diamati Tikus akan menunjukkan kerusakan neurologi dan
tingkah laku progresif mulai 24 jam setelah pemberian. Kelainan neurotoksik
seperti depresi, tremor persisten pada lingkungan statis, postur kaku, epilepsi,
serta penurunan tungkai depan (49). Setelah itu, semua hewan coba uji Ladder
Rung Walking Test bertujuan untuk membuktikan tikus tersebut mengalami
stroke dengan menilai fungsi motorik tikus (44).
5. Prosedur Perlakuan Penelitian
a. Semua tikus diaklimatisasi selama 7 hari, selama aklimatisasi tikus
diberikan pakan dan minum yang seragam
b. Semua tikus jantan wistar dibagi dalam 7 kelompok yang masing-masing
terdiri dari 4 ekor, yaitu :
Kelompok 1 : Hewan uji (control normal) diberikan secara oral
aquadest dan pakan biasa selama 14 hari
Kelompok 2 : Hewan uji (control negatif) diinduksi TMT selama 7
hari serta diberikan secara oral aquadest dan pakan biasa
Kelompok 3 : Hewan uji (control positif) diinduksi TMT selama 7
hari kemudian diberikan secara oral piracetam syrup selama 14 hari
Kelompok 4 : Hewan uji diinduksi TMT selama 7 hari kemudian
diberikan sediaan uji pada dosis terapi 50 mg/kg BB secara oral dan
pakan biasa selama 14 hari
Kelompok 5 : Hewan uji diinduksi TMT selama 7 hari kemudian
diberikan sediaan uji pada dosis terapi 100 mg/kg BB secara oral dan
pakan biasa selama 14 hari
Kelompok 6 : Hewan uji diinduksi TMT selama 7 hari kemudian
diberikan sediaan uji pada dosis terapi 200 mg/kg BB secara oral dan
pakan biasa selama 14 hari
 33

Kelompok 7 : Hewan uji diinduksi TMT selama 7 hari kemudian

diberikan sediaan uji pada dosis terapi 400 mg/kg BB secara oral dan
pakan biasa selama 14 hari
c. Pembedahan dan pengambilan sampel semua hewan coba dilakukan sehari
setelah hari terakhir pemberian poliherbal X,
6. Pengambilan Sampel
Pengukuran kadar MDA dan aktivitas SOD menggunakan homogenat otak
tikus, sehingga dilakukan pembuatan homogenate otak dengan cara :
Setelah masa perlakuan berakhir, semua hewan coba dieuthanasi dengan cara
disuntikan ketamin dan xylazin. Setelah hewan dieutanasia, kemudian
dilakukan nekropsi untuk mengambil sampel organ otak. Setelah diambil,
organ dicuci terlebih dahulu dengan larutan NaCl 0,9% untuk menghilangkan
sisa darah yang terdapat pada organ. Organ kemudian dikeringkan dengan
kertas saring dan ditimbang dengan timbangan analitik. Organ otak tikus
dihancurkan dengan menggunakan mortar dan diekstraksi dengan larutan
Phosphat Buffered Saline. Homogenate otak disentrifugasi pada 3000 rpm
selama 10 menit kemudian supernatant dituang kedalam tabung yang bersih
dan digunakan untuk pengukuran selanjutnya (47).
7. Pengambilan Data
a. Pengukuran kadar MDA
Pengukuran kadar MDA dilakukan dengan metode Thiobarbituric Acid
Reactivity Test (TBARs). Sebanyak 200 µL sample (supernatan dari
homogenate yang disentrifugasi) ditambah 1 ml TCA 20% dan 2 ml TBA
0,67% kemudian divortex hingga homogen. Larutan dipanaskan diatas
penangas air selama 10 menit, lalu dinginkan. Setelah itu dilakukan
pengukuran absorban dengan menggunakan Spektrofotometer UV-VIS
pada panjang gelombang 532 nm (47).
b. Pengukuran Aktivitas SOD
Pengukuran aktivitas SOD menggunakan metode Misra dan Fridovich.
Sebanyak 100 µL sample (supernatan dari homogenate yang
disentrifugasi) ditambahkan 2800 µL dapar natrium karbonat pH 10,2 dan
 34

100 µL larutan epinefrin 0,01 M dalam tabung reaksi. Dengan cara yang
sama dilakukan juga untuk aquadest (blangko). Kemudian dimasukan ke
dalam kuvet dan diukur serapan setelah menit ke 1, 2, 3 dan 4 pada panjang
gelombang 480 nm. Dengan cara yang sama dilakukan juga untuk blanko
dengan pembacaan serapan setelah menit ke-1, 2, 3 dan 4 (18).
Rumus pengukuran aktivitas SOD:
𝐴−𝐵
% Hambatan = 𝑥 100%
𝐴
% hambatan
Aktivitas SOD (U/mL) = 𝑥 1 unit/10 uL x 100
50%

Keterangan:
A = Rata-rata selisih absorban/menit tanpa sampel (blanko)
B = Rata-rata selisih absorban/menit sampel
50% = Unit aktivitas SOD didefinisikan sebagai jumlah SOD diperlukan
untuk menyebabkan inhibisi 50% dari oksidasi epinefrin (SOD50)
 BAB V
HASIL DAN PEMBAHASAN

A. HASIL PEMBERIAN POLIHERBAL X TERHADAP KADAR

MALONDIALDEHID (MDA)
Pengukuran kadar MDA dilakukan dengan metode TBARs (Thiobarbituric Acid
Reactivity Test) yaitu reaksi Asam Trikloroasetat (TCA) dan Asam Tiobarbiturat
(TBA) dengan satu molekul MDA pada kondisi asam sehingga menghasilkan
senyawa kompleks MDA-TBA yang berwarna merah muda lalu diukur
serapannya dengan spektrofotometer UV-VIS. Pada Panjang gelombang 532 nm.
Hasil pengukuran kadar MDA pada masing-masing kelompok hewan uji dapat
ditampilkan pada table V.1
Tabel V.1 Hasil Pengukuran Kadar MDA (nmol/mL)
Kadar MDA (nmol/mL) pada kelompok ke -
No.
I II III IV V VI VII
1 2,4071 11,7060 1,7779 7,6870 5,5710 3,1953 1,6570
2 2,7474 11,5250 1,6570 8,3990 5,7770 2,7340 2,0399
3 2,4989 11,7800 1,9884 8,5804 4,9328 3,0228 2,4071
4 2,5907 12,2770 2,0399 8,3587 5,6090 3,1258 1,8809
Jumlah 10,2441 47,2880 7,4632 33,0251 21,8898 12,0779 7,9849
X 2,5610 11,8220 1,8658 8,2563 5,4725 3,0195 1,9962
SD 0,1451 0,3217 0,1795 0,3916 0,3707 0,2031 0,3158

Hasil Rata-rata Kadar MDA

14,00
Kadar MDA (nmol/ml)

12,00
10,00
8,00
6,00 11,8220
4,00 8,2563
2,00 5,4725
2,5610 1,8658 3,0195 1,9962
0,00
1 2 3 4 5 6 7
Kelompok

Gambar V.1 Hasil Pengukuran Kadar MDA

35
37
 36

Keterangan :
Kelompok I = Normal Kelompok IV = Dosis 50mg/kgBB
Kelompok II = Kontrol Negatif Kelompok V = Dosis 100mg/kgBB
Kelompok III = Kontrol Positif Kelompok VI = Dosis 200mg/kgBB
Kelompok VII = Dosis 400mg/kgBB

Berdasarkan data hasil pengukuran rata-rata kadar MDA pada kelompok

kontrol negatif menunjukan adanya peningkatan rata-rata kadar MDA sebesar
11,8220 nmol/mL. Hal ini disebabkan terjadinya kerusakan sel otak pada tikus
saat diinduksi Trimetiltin Klorida (TMT). TMT dapat mengaktivasi AMPK dan
menurunkan regulasi PGC-1α sehingga terjadi peningkatan peroksidasi dan
peningkatan radikal bebas yang menyebakan cedera peroksidatif sistem saraf
pusat. Cedera peroksidatif sistem saraf menyebabkan kerusakan sel neuron dalam
otak tikus dan menghasilkan senyawa radikal bebas yang berakibat terjadinya
stres oksidatif. Adanya stres oksidatif ini memicu peningkatan proses peroksidasi
lipid (50). Produk hasil peroksidasi lipid dalam tubuh dapat dalam bentuk bebas
atau kompleks dengan jaringan dalam tubuh disebut dengan malondialdchid
(MDA) (28).
Hasil pengukuran kadar MDA kelompok kontrol positif menunjukan hasil
penurunan kadar yang rendah dibandingkan kelompok lain sebesar 1,8658
nmol/mL. Hal ini menunjukan bahwa proses peroksidasi lipid dapat dilakukan
pencegahan dengan pemberian Piracetam. Piracetam merupakan obat
neuroprotector, dimana Neuroprotektor merupakan salah satu terapi yang
ditujukan untuk mengurangi terjadinya kerusakan sel. Piracetam berperan dalam
memperbaiki membran sel dan meningkatkan aliran darah di otak. Darah
memberikan oksigen dan glukosa yang dibutuhkan untuk metabolisme sel, dan
membantu membuang limbah seluler. Aliran darah yang lebih baik memberikan
lebih banyak oksigen dan nutrisi ke neuron meningkatkan kognisi, memori dan
focus (7). Sehingga terjadi pemulihan sel-sel neuron yang rusak akibat induksi
TMT. Piracetam telah terbukti memiliki peran klinis yang signifikan dalam
mengobati demensia vaskular dan meningkatkan kinerja kognitif, memori dan
42
 37

kesadaran. Piracetam menormalkan metabolisme ATP, meningkatkan sintesis

fosfolipid dan fungsi ribosom dan meningkatkan implementasi glukosa. Piracetam
telah terbukti memiliki aktivitas antioksidan melalui blokade Ca2+entri diinduksi
oleh glutamat di wilayah iskemik. Selain itu, mengurangi resistensi pembuluh otak
dan meningkatkan aliran darah (53).
Berdasarkan rata-rata kadar MDA pada kelompok yang diberikan poliherbal
X dengan dosis 400 mg/kgBB memiliki rata-rata kadar MDA lebih rendah
dibandingkan dengan kelompok dosis 50 mg/kgBB, 100 mg/kgBB dan 200
mg/kgBB. Hal ini menunjukan bahwa semakin tinggi dosis poliherbal X yang
diberikan maka, pengaruh penurunan kadar MDA semakin tinggi. Hal ini dapat
terjadi karena mekanisme kerja dari flavonoid dan polifenol yang terkandung
dalam poliherbal X. Flavonoid mampu memodulasi berbagai jalur termasuk NF-
κB, MAPK, ERK, dan Nrf2. Molekul flavonoid dapat memodulasi dan
mengurangi ekspresi produk gen proapoptosis dan proinflamasi. ROS digunakan
sebagai molekul pensinyalan selama respon imun, dan keberadaan antioksidan
dapat mencegah ROS yang dimediasi fosforilasi molekul dan target jalur,
mencegah aktivasi mereka dan transkripsi. Flavonoid juga dapat menghambat
aktivasi kinase dan fosfatase yang akan berkontribusi pada kematian sel apoptosis.
Setelah flavonoid dioksidasi oleh radikal bebas, kuinon yang dihasilkan terlibat
dalam jalur pensinyalan yang terlibat dalam antioksidan dan perbaikan seluler.
Antioksidan flavonoid memiliki beberapa perlindungan saraf seluler yang
berbeda. Flavonoid mengurangi jumlah peradangan dan stres oksidatif di
lingkungan seluler melalui berbagai cara. Senyawa flavonoid secara langsung
mengais radikal bebas dan ROS, meningkatkan konsentrasi intraseluler GSH dan
molekul antioksidan, memodulasi jalur pensinyalan NF-kB untuk mengurangi
apoptosis, dan mengurangi masuknya Ca+2 intraseluler yang dimediasi glutamat
(53).
 38

Table V.2 Hasil Uji Statistik Mann-Whitney Kadar MDA (nmol/mL) Antar Kelompok
Kelompok Rata-rata I II III IV V VI VII
I 2,5610
II 11,8220 *
III 1,8658 * *
IV 8,2563 * * *
V 5,4725 * * * *
VI 3,0195 * * * *
VII 1,9962 * * * * *
Keterangan : * (ada perbedaan bermakna) α = 0,05
Kelompok I = Normal Kelompok IV = Dosis 50mg/kgBB
Kelompok II = Kontrol Negatif Kelompok V = Dosis 100mg/kgBB
Kelompok III = Kontrol Positif Kelompok VI = Dosis 200mg/kgBB
Kelompok VII = Dosis 400mg/kgBB

Tabel V.2 memperlihatkan ada atau tidaknya perbedaan masing-masing

kelompok perlakuan terhadap kadar MDA yang diuji secara statistic
menggunakan uji Mann - Whitney. Hasil yang didapat yaitu pada kelompok
tingkatan dosis 50 mg/KgBB dan 100 mg/KgBB memiliki perbedaan bermakna
dengan kelompok kontrol normal, sehingga dapat diartikan bahwa dosis 50
mg/KgBB dan 100 mg/KgBB tidak mampu menurunkan kadar MDA. Kelompok
tingkatan dosis 200 mg/KgBB mempunyai perbedaan bermakna dengan
kelompok kontrol negatif dan tidak mempunyai perbedaan bermakna
dibandingkan dengan kelompok kontrol normal sehingga dapat diartikan bahwa
dosis 200 mg/kgBB dapat menurunkan kadar MDA hingga mendekati keadaan
kelompok kontrol normal. Kelompok tingkatan 400 mg/KgBB tidak mempunyai
perbedaan bermakna dibandingkan dengan kelompok kontrol positif sehingga
dapat diartikan bahwa dosis 200 mg/kgBB dapat menurunkan kadar MDA hingga
mendekati keadaan kelompok positif. Sedangkan kelompok tingkatan 400
mg/KgBB mempunyai perbedaan bermakna dengan kelompok control normal dan
kelompok kontrol negatif, schingga dapat dinyatakan bahwa dosis 400 mg/KgBB
mampu menurunkan kadar MDA.
 39

Penurunan kadar MDA pada kelompok percobaan dengan pemberian tingkatan

dosis poliherbal X terjadi karena pada komposisi poliherbal X yaitu mengandung
eksrak daun kelor (Moringa oleifera L.) 300 mg, meniran (Phyllanthus niruri L)
100 mg, dan jintan hitam (Nigella sativa L.) mempunyai senyawa flavonoid yang
berfungsi sebagai antioksidan atau dapat menurunkan senyawa radikal bebas
(14,17,21). Penurunan kadar MDA pada kelompok tingkat dosis 400 mg/KgBB
menunjukkan bahwa poliherbal X mempunyai pengaruh yang dapat menurunkan
kadar MDA. Flavonoid berperan sebagai antioksidan dengan cara menghambat
enzim yang bertanggung jawab untuk memproduksi radikal anion superoksida
(O2) seperti xantin oksidase dan protein kinase C. Sehingga pembentukan ROS
radikal bebas yang abnormal dapat diatasi maka stres oksidatif tidak terjadi
sehingga kadar MDA tidak meningkat (53).

B. HASIL PEMBERIAN POLIHERBAL X TERHADAP AKTIVITAS

SUPEROKSIDA DISMUTASE (SOD)
Parameter lain yang digunakan untuk menguji efek antioksidan secara in vivo
adalah dengan mengukur aktivitas SOD. SOD adalah salah satu antioksidan
enzimatik yang mempunyai fungsi katalitik dalam menetralkan radikal bebas
menjadi H2O2 dan O2. Aktivitas suatu enzim ditentukan dengan mengukur jumlah
produk yang terbentuk per satuan waktu. Pengukuran berdasarkan reaksi produk
dengan senyawa yang dapat menghasilkan warna. Pengukuran aktivitas SOD
menggunakan metode Misra dan Fridovich. Metode ini berdasarkan pada
kemampuan penghambatan autooksidasi epinefrin menjadi adenokrom oleh SOD.
Perubahan epinefrin menjadi adenokrom menimbulkan warna coklat. Semakin
besar kadar SOD sampel, maka semakin besar penghambatan dan semakin
berkurang intensitas warnanya. Warna coklat dideteksi dengan spektrofotometer
pada panjang gelombang 480 nm (18).
Hasil pengukuran aktivitas SOD pada masing-masing kelompok hewan uji dapat
ditampilkan pada table V.3
 40

Tabel V.3 Hasil Pengukuran Aktivitas SOD (U/mL)

Aktivitas SOD (U/mL) pada kelompok ke -
No.
I II III IV V VI VII
1 183,84 107,47 191,11 125,66 159,60 188,28 184,24
2 170,91 113,94 174,55 126,87 162,83 173,74 188,40
3 187,88 115,15 189,90 123,23 164,85 189,09 192,32
4 182,22 109,09 170,51 127,27 168,89 186,67 196,36
Jumlah 724,85 445,66 726,06 503,03 656,16 737,78 761,33
X 181,21 111,41 181,52 125,76 164,04 184,44 190,33
SD 7,27 3,71 10,52 1,82 3,89 7,21 5,20

Hasil Rata-rata Aktivitas SOD

250
Aktivitas SOD (U/ml)

200

150

100 181,21 181,52 184,44 190,33

164,04
111,41 125,76
50

0
1 2 3 4 5 6 7
Kelompok

Gambar V.4 Hasil Pengukuran Aktivitas SOD

Hasil pengukuran aktivitas SOD setiap kelompok perlakuan disajikan pada

tabel V.3. dan gambar V.2. Rata-rata aktivitas SOD pada kelompok kontrol
negative 73,94 U/ml lebih rendah dibandingkan dengan rata-rata aktivitas SOD
pada kelompok normal, kelompok kontrol positif dan kelompok kontrol dosis.
Pada penelitian ini hewan percobaan yaitu tikus diberikan Trimethyltin chloride
(TMT) selama 7 hari yang dapat meningkatkan kerusakan sel neuron sehingga
produksi radikal bebas juga meningkat. Jumlah radikal bebas yang meningkat
tersebut dapat mengakibatkan pemakaian antioksidan endogen (50). Pada
kelompok kontrol negatif tidak diberikan antioksidan eksogen sehingga
penggunaan antioksidan endogen pada kelompok kontrol negatif lebih tinggi
dibandingkan kelompok lainya. Untuk mengukur aktivitas SOD digunakan
adenochrom assay yang mudah dilaksanakan dan sensitive untuk mengukur
 41

aktivitas SOD. Pengukuran didasarkan pada kemampuan SOD menghambat

autooksidasi dari epinefrin. Larutan epinefrin dalam keadaan asam akan stabil
tetapi spontan akan teroksidasi dengan adanyakenaikan PH. Autooksidasi terjadi
paling cepat disertai dengan terbentuknya adenokrom dengan kecepatan linier
yaitu pada pH 10,2 dan suhu 30°C (4)
Rata-rata aktivitas SOD pada kelompok III kontrol positif 181,21 U/ml lebih
bandingkan dengan kelompok dosis yang diberikan poliherbal X. Hal ini
dikarenakan pemberian piracetam Piracetam bekerja dengan cara meningkatkan
efektifitas dari fungsi telencephalon otak melalui peningkatan fungsi
neurotransmiter kolinergik. Telencephalon inilah yang mengatur fungsi kognitif
pada manusia (memori, kesadaran, belajar dan lain). Fungsi lain dari piracetam
adalah menstimulasi glikolisis oksidatif, meningkatkan konsumsi oksigen pada
otak, serta mempengaruhi pengaturan cerebrovaskular dan juga mempunyai efek
antitrombolitik untuk mengurangi lesi neuron utama. Oleh karena itu piracetam
biasanya digunakan untuk pengobatan stroke, terutama stroke iskemik. Piracetam
mempengaruhi aktifitas otak melalui berbagai mekanisme yang berbeda antara
lain merangsang transmisi neuron di otak, merangsang metabolisme otak,
memperbaiki mikrovaskular tanpa efek vasodilatasi. Sehingga SOD didalam
tubuh tetap terjaga (48). Rata-rata aktivitas SOD pada kelompok VII dosis 400
mg/KgBB sebesar 190,33 U/ml lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok VI
dosis 200 mg/KgBB, kelompok V dosis 100 mg/KgBB. Hal ini menunjukan
bahwa semangkin tinggi poliherbal X yang diberikan maka, mampu
meningkatkan aktivitas SOD lebih baik di dalam tubuh. Hal ini terjadi karena
adanya flavonoid dalam kandungan poliherbal X yang bekerja dalam
mempertahankan aktivitas SOD (53).
 42

Table V.4 Hasil Uji Statstik Mann-Whitney Aktivitas SOD (U/mL) Antar Kelompok
Kelompok Rata-rata I II III IV V VI VII
I 181,21
II 111,41 *
III 181,52 *
IV 125,76 * * *
V 164,04 * * * *
VI 184,44 * * *
VII 190,33 * * * *
Keterangan : * (ada perbedaan bermakna) α = 0,05
Kelompok I = Normal Kelompok IV = Dosis 50mg/kgBB
Kelompok II = Kontrol Negatif Kelompok V = Dosis 100mg/kgBB
Kelompok III = Kontrol Positif Kelompok VI = Dosis 200mg/kgBB
Kelompok VII = Dosis 400mg/kgBB
Tabel V.4 secara statistik, rata-rata aktivitas SOD pada kelompok control
negative dengan kelompok kontrol positif, kelompok perlakuan dosis
50mg/kgBB, 100mg/kgBB, 200mg/kgBB, 400mg/kgBB menunjukan adanya
perbedaan bermakna. Kelompok IV pemberian poliherbal X dosis 50 mg/kgBB,
kelompok V dosis 100 mg/kgBB dengan kelompok positif menunjukan adanya
perbedaan bermakna. Hasil rata-rata aktivitas SOD kelompok IV sebesar 125,76
U/ml dan kelompok V sebesar 164,04 U/ml lebih rendah dibandingkan dengan
kelompok kontrol positif 181,52 U/ml yang dapat diartikan bahwa pemberian
poliherbal X 50 mg/kgBB dan dosis 100 mg/kgBB belum mampu meningkatkan
SOD sebaik piracetam yang digunakan sebagai kontrol positif
Kelompok VI pemberian poliherbal X dosis 200 mg/kgBB secara statistik
menunjukan tidak ada perbedaan bermakna dengan kelompok control positif
pemberian piracetam. Hal ini menunjukan bahwa pada pemberian poliherbal X
200 mg/kgBB dapat mempertahankan aktivitas SOD di dalam tubuh sebaik
piracetam sebagai kontrol positif. Semangkin tinggi dosis poliherbal X yang akan
diberikan maka aktivitas SOD akan semangkin meningkat. Flavonoid yang
terdapat pada poliherbal X dan pemberian piracetam sebagai antioksidan eksogen
dan serebroprotektif mampu mempertahankan aktivitas SOD di di dalam tubuh
(53).
 BAB VI
SIMPULAN DAN SARAN

A. SIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa
1. Terdapat pengaruh pemberian poliherbal X memiliki efek antioksidan dapat
memperbaiki kondisi stress oksidatif pada hewan model stroke iskemik dengan
menurunkan kadar malondialdehid (MDA)
2. Terdapat pengaruh pemberian poliherbal X memiliki efek antioksidan dapat
memperbaiki kondisi stress oksidatif pada hewan model stroke iskemik dengan
meningkatkan aktivitas superoksida dismutase (SOD).
3. Dosis pemberian poliherbal X yang optimal pada penurunan kadar MDA dan
peningkatan aktivitas SOD tikus model stroke iskemik yaitu dosis 400
mg/kgBB

B. SARAN
1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai toksisitas dan stabilitas
poliherbal X untuk mengetahui toksisitas dan stabilitas poliherbal X
2. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang pengaruh pemberian Poliherbal
X tikus model stroke iskemik dengan menggunakan metode lain untuk lebih
merangsang stroke iskemik pada tikus wistar untuk pengujian hewan

43
46
 44

DAFTAR PUSTAKA

1. Y. Be´jot, B. Daubail, M. Giroud. Epidemiology of stroke and transient ischemic

attacks: Current knowledge and perspectives. 2015; 172 (1) : 59-68. doi:
10.1016/j.neurol.2015.07.013.
2. Siswonoto, Susilo. Hubungan Kadar Malondialdehid Plasma Dengan Keluaran
Klinis Stroke Iskemik Akut. 2008. Semarang ; Universitas Diponegoro.
3. Hosseinzadeh, Hossein. Jaafari, Mahmoud Reza. KhoeiB, Ali Reza. et al. Anti-
ischemic Effect of Nigella sativa L. Seed in Male Rats. Iranian Journal of
Pharmaceutical Research (2006) 1: 53-58.
4. Feigin, VL. Herbal medicine in stroke: does it have a future? Stroke. 38: 1734–
1736. 2007.
5. Zhang, J. Li Y, Chen X. Pan Y, Zhang S, et al. Systems Pharmacology Dissection
of Multi-Scale Mechanisms of Action for Herbal Medicines in Stroke Treatment
and Prevention. PLoS ONE 9(8): e102506. 2014.
doi:10.1371/journal.pone.0102506.
6. Adnyana, I.M.O. Sudewi, A.A.R. Samatra, D.P.G.P. Suprapta, D.N. et al. A
simple method to stimulate ischemic stroke in Wistar rat for animal testing. Bali
Medical Journal 6(1): 156-160. 2017. DOI:10.15562/bmj.v6i1.430.
7. Kirisattayakul, Woranan. Wattanathorn, Jintanaporn. Tong-Un, Terdthai. et al.
Cerebroprotective Effect of Moringa oleifera against Focal Ischemic Stroke
Induced by Middle Cerebral Artery Occlusion. Hindawi Publishing Corporation
Oxidative Medicine and Cellular Longevity Volume 2013, Article ID 951415, 10
pages http://dx.doi.org/10.1155/2013/951415.
8. Lee, Nathanael Y. S. et al. The pharmacological potential of Phyllanthus niruri.
Royal Pharmaceutical Society, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 68
(2016), pp. 953–969.
9. Gilani AH, Jabeen Q, Khan MAU. A review of medicinal uses and
pharmacological activities of Nigella sativa. 2004. Pak J Biol Sci 4:441–451.
10. Khanam M, Dewan ZF. Effects of the crude and the n-hexane extract of Nigella
sativa Linn. (kalajira) upon diabetic rats. Banglad J Pharm 4:17-20. 2008.
11. Integrated Taxonomic Information System. Moringa oleifera (Drumstick and
Name. Encyclopedia of Life Newsletter. Tanggal akses 6 September 2014.
http://hy_ entries/46214757/overview/moringa-oleifera.
12. Duke, J.A., Moringa oleifera Lam. (Moringaceae). In: Duke, J.A. (Ed.),
Handbook of Nuts. 2001. CRC Press, Boca Raton, FL, USA, pp. 214–217.
 45

13. Sashidhara KV, JN. Rosaiah, E. Tyagi, R. et al. Rare Dipeptide and Urea
Derivatives from Roots of Moringa oleifera as Potential Anti-inflammatory and
Antinociceptive Agents.Europe an Journal of Medicinal Chemistry 44 (1); 432-
436. 2009.
14. Kasolo, JN. Bimeya, GS. Ojok, L. et al. Phytochemicals and Uses of Moringa
oleifera Leaves in Ugandan Rural Communities. Journal of Medical Plant
Research,4(9): 753-757. 2010.
15. Toma, A., Deyno, S. Phytochemistry and pharmacological activities of Moringa
oleifera. International Journal of Pharmacognosy, 1, 222- 231. 2014.
16. Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia (BPOM RI). Informasi
Obat Nasional Indonesia (IONI). 2008. Jakarta: BPOM RI, KOPER POM dan CV
SagungSeto.
17. Agus Kardinan dan Fauzi Rahmat Kusuma. Hidup sehat secara Alami. Dalam:
Meniran Penambah Daya Tahan Tubuh Alami. Cet.1. 2004. Jakarta: Agro Media
Pustaka.
18. Lee N, Khoo W. Adnan M. et al. The pharmacological potential of Phyllanthus
niruri. Journal of Pharmacy and Pharmacology, 2016. Volume 68. Hal 953–969.
19. JT Hong, SR Ryu, HJ Kim et al. “Neuroprotective effects of green tea extract on
experimental ischemia-reperfusion brain injury,”. 2000. Brain Research Bulletin,
vol. 53, no. 6, hmm. 743–749.
20. Departemen Kesehatan RI. 1979. Materia Medika Indonesia Jilid III. Dirjen POM.
21. Hutapea JR. Inventaris Tanaman Obat Indonesia (III). 1994. Jakarta: Badan
Penelitian dan Pengembangan Kesehatan, Depkes RI.
22. Gilani AH, Jabeen Q, Khan MAU. A review of medicinal uses and
pharmacological activities of Nigella sativa. 2004. Pak J Biol Sci 4:441–451.
23. Thippeswamy NB, Naidu KA. Antioxidant potency of cumin varieties cumin,
black cumin and bitter cumin on antioxidant systems. 2005. Europ Food Research
Technol 224:109-115.
24. Khanam M, Dewan ZF. Effects of the crude and the n-hexane extract of Nigella
sativa Linn. (kalajira) upon diabetic rats. Banglad J Pharm 4:17-20.
25. WHO., 2014. Stroke cerebrovascular Accident.
http://www.who.int/topics/cerebrov vascular_accident/en/.
26. Johnson, W., Onuma, O., Owolabi, M., Sachdev, S., 2016. Stroke : a global
 46

response is needed. Bulletin of The World Health Organization, Vol. 94, p. 633-
708.
27. Sacco, R. L., Kasner, S. E., Broderick, J. P. et al. An updated definition of stroke
for the 21st century: A statement for healthcare professionals from the American
heart association/American stroke association. 2013. Stroke, 44(7), 2064–2089.
https://doi.org/10.1161/STR.0b013e318296aeca.
28. Nurhasanah F, Syamsudin S. Antioxidant Effects of Chinese Petai (Leucaena
Leucocephala L.) Seed Extract on White Rats. J Indonesian Pharmaceutical
Sciences. 2005;3(1):13–6.
29. Natural Wha, Free R. Potential and Its Applications In Health. Yogyakarta:
Kanisius. 2007;21–4.
30. EZ Longa, PR Weinstein, S. Carlson, and R. Cummins, “Reversible middle
cerebral artery occlusion without craniectomy in mice,” Punch, vol. 20, no. 1, p.
84–91, 1989.
31. Kirisattayakul, Woranan. Wattanathorn, Jintanaporn. Tong-Un, Terdthai. et al.
“Pengaruh serebroprotektif dari Moringa oleifera terhadap Stroke Iskemik Fokal
yang Diinduksi oleh Oklusi Arteri Serebral Tengah”.
32. Mariyati L. Effects of Ethanol Extract of Beluntas Leaves (Plunchea Indica L.)
Less.) Against Malondialdehyde Levels and Superoxide Dismutase Activity in
Mice Using Swimming Method. Jakarta: Faculty of Pharmacy, Pancasila
University; 2014.
33. Kaleem, M. Antidiabetic and antioksidant activity of amona squamosa extract in
streptozotocin-induced diabetic rats. 2006. Aligarh; Aligarh muslim.
34. Kanjaya A. Antioxidant Activity and Gel Formulation of Ethanol Extract 70%
Strawberry Leaves (Fragraria Vesca L.) With Sepigel 305 Base (Thesis). Jakarta:
Faculty of Pharmacy, Pancasila University; 2016.
35. Jati Sh. Antioxidant Effect of 70% Ethanol Extract of Bay Leaf (Syzygium
Polyanthum [Wight.] Walp.) on the Liver of Wistar Male White Rats Induced by
Carbon Tetrachloride (Ccl4). Muhammadiyah Surakarta university; 2008.
36. Dusun Cc, Djarkasi Gss, Thelma D, Tuju J. Kandungan Polifenol Dan Aktivitas
Antioksidan Teh Daun Jambu Biji (Psidium Guajava L). In: Cocos. 2017.
37. Nisma F, Situmorang A, Muhammad F. Antioxidant Activity Test of 70% Ethanol
Extract of Rosella Flowers (Hibiscus Sabdariffa L.) Based on Sod (Superoxyd
Dismutase) Activity and Mda (Malonyldialdehyde) Levels in Sheep Red Blood
Cells Under Oxidative Stress In Vitro . In J Lemlitbang Uhamka, 2011. Jakarta.
 47

38. Nelli Giribabu, Pasupuleti Visweswara Rao, Korla Praveen Kumar, et al.
“Aqueous Extract of Phyllanthus niruri Leaf Display In Vitro Antioxidant Activity
and Prevents Increased Oxidative Stress in Streptozotocin-Induced Male Diabetic
Rat Kidneys”. 2014. DOI: 10.1155/4747.
39. Hosseinzadeh, Hossein. Jaafari, Mahmoud Reza. KhoeiB, Ali Reza. et al.2006.
Anti-ischemic effect of Nigella sativa L. Seed on Male Rats. Iranian Journal of
Pharmaceutical Research.
40. Adnyana, I.M.O. Sudewi, A.A.R. Samatra, D.P.G.P. et al. A simple method to
stimulate ischemic stroke in Wistar rat for animal testing. 2017. Bali Medical
Journal 6(1): 156-160. DOI:10.15562/bmj.v6i1.430.
41. Siswonoto, Susilo. Hubungan Kadar Malondialdehid Plasma Dengan Keluaran
Klinis Stroke Iskemik Akut. Semarang: Universitas Diponegoro. 2008.
42. Elsayed, Wael M. Abdel-Gawad, El-Hady A. Mesallam, Dalia I. A. et al. The
relationship between oxidative stress and acute ischemic stroke severity and
functional outcome. The Egyptian Journal of Neurology, Psychiatry and
Neurosurgery (2020) 56:74 https://doi.org/10.1186/s41983-020-00206-y.
43. Gusev E, Skvortsova V I. Brain Ischemia. 1st ed. New York : kluwer Academic /
Plenum Publisher, 2003 : 1 – 72.
44. Lukito, Astrid Nandikasari. Indra, Mohammad Rasjad. Ekstrak Kulit dan Biji
Anggur (Vitis vinifera) Menurunkan Jumlah Sel Neuron yang Rusak, Volume
Infark, dan Memperbaiki Fungsi Motorik pada Tikus Wistar Model Stroke
Iskemik. Majalah Kesehatan FKUB; Volume 3, Nomer 1, Maret 2016.
45. Arifianto, A. S., Sarosa, M. (2014). Klasifikasi Stroke Berdasarkan Kelainan
Patologis dengan Learning Vector Quantiation. Eeccis, 8(2), 117–122. Retrieved
from http://jurnaleeccis.ub.ac.id/index.php/eeccis/article/viewFile/248/218.
46. Misbach J, Rusdi L, Amiruddin A. et al. Guideline Stroke. 2011. PERDOSSI,
Kelompok Studi Stroke Perhimpunan Dokter Spesialis Saraf Indonesia. Jakarta.
47. Catherine, Chintia. Ferdinal Frans. Pengaruh hipoksia sistemik kronik terhadap
kadar Malondialdehid (MDA) pada darah dan jaringan ginjal tikus Sprague
Dawley. 2018. Jakarta; Tarumanagara Medical Journal Vol. 1, No. 1, 54-58.
48. Doijad, R.C. Pathan, A.B. Pawar, N.B. et al. Therapeutic Applications Of
Citicoline And Piracetam As Fixed Dose Combination. Journal of Pharma and Bio
Science. 2012. h. 15-20.
49. Masnunah, Siti., Wiratmini, Ngurah Intan., Ni Made Rai Suarni. Uji Efektivitas
 48

Neuroprotektif Ekstrak Daun Pepaya (Carica papaya L.) Terhadap Sel Piramidal
Di Hipokampus Dan Korteks Serebri Mencit (Mus musculus L.) Yang Diinduksi
Trimetiltin. Metamorfosa:Journal of Biological Sciences 7(1): 30-39 (Maret 2020)
DOI: 10.24843/metamorfosa.2020.v07.i01.p05.
50. Z. Liu et al. Toxicology Letters. The main mechanisms of trimethyltin chloride-
induced neurotoxicity: Energy metabolism disorder and peroxidation damage.
Department of Preventive Medicine, North Sichuan Medical College, Nanchong,
637000, China. http://dx.doi.org/10.1016/j.toxlet.2021.04.008.
51. S. Lee et al. Brain Research Bulletin 125 187–199.
http://dx.doi.org/10.1016/j.brainresbull.2016.07.010 0361-9230. 2016. Elsevier
Inc. All rights reserved.
52. Ahmed M. Fayez et al. Neuroprotective effects of zafirlukast, piracetam and their
combination on L-Methionine-induced vascular dementia in rats. 2019.
Fundamental & Clinical Pharmacology. doi: 10.1111/fcp.12473.
53. Wróbel-Biedrawa, D. Grabowska, K. Galanty, A. et al A Flavonoid on the Brain:
Quercetin as a Potential Therapeutic Agent in Central Nervous System Disorders.
Life 2022, 12, 591. https://doi.org/ 10.3390/life12040591.
54. Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia (BPOM RI). 2019.
Peraturan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia Nomor
32 Tahun 2019 tentang Persyaratan Keamanan dan Mutu Obat Tradisional.
Jakarta: Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia.
 49

Lampiran 1. Surat Keterangan Galur Hewan Coba

 50

Lampiran 2. Surat keterangan ethical clearance

 51

Lampiran 3. Skema Kerja Penelitian

Aklimatisasi tikus selama 7 hari

Penimbangan berat badan tikus

Tikus dibagi menjadi 7 kelompok, masing-masing terdiri dari 4 tikus

Pembuatan hewan model:

Kontrol normal :
Semua kelompok uji kecuali kelompok control normal
Tanpa diberikan
Tikus di induksi stroke iskemik dengan cara menyuntikan TMT
perlakuan apapun 0,5 mg/kgBB secara intraperitoneal selama 7 hari

Kelompok Kelompok Kelompok Kelompok

Kontrol (+) : uji dosis 1 : uji dosis 2 : uji dosis 3 : uji dosis 4 :
Kontrol (-) :
Piracetam (50 Poliherbal X Poliherbal X Poliherbal X Poliherbal X
Aquadest mg/kgBB) 50 mg/kg 100 mg/kg 200 mg/kg 400 mg/kg
BB BB BB BB

Dilakukan selama 14 hari

Tikus dieuthanasia, dibedah dan diambil organ otak

HISTOPAT FUNGSI MOTORIK MDA SOD

52
 52

Lampiran 4. Penimbangan Berat Badan Tikus

Kelompok No. Tikus Hari ke-0 (g) Hari ke-15 (g)
1 199 229
2 200 220
Normal
3 204 223
4 195 216
1 203 225
2 209 229
Negative
3 207 235
4 196 215
1 201 223
2 204 226
Positif
3 199 227
4 194 213
1 203 226
2 205 228
50 mg/kgBB
3 203 223
4 204 224
1 205 225
2 202 215
100 mg/kgBB
3 199 217
4 197 214
1 207 229
2 195 217
200 mg/kgBB
3 199 227
4 204 224
1 194 217
2 203 220
400 mg/kgBB
3 196 209
4 202 214
 53

Lampiran 5. Tabel Konversi Dosis Hewan Terhadap Manusia

Tikus Tikus Marmot Kelinci Kera Anjing Manusia

20 g 200 g 400 g 1,5 kg 4 kg 12 kg 70 kg
Tikus
1,0 7,0 12,25 27,8 64,1 124,2 387,9
20 g
Tikus
0,14 1,0 1,74 3,9 9,2 17,8 56,0
200 g
Marmot
0,08 0,57 1,0 2,25 5,2 10,2 31,5
400 g
Kelinci
0,04 0,25 0,44 1,0 2,4 4,5 14,2
1,5 kg
Kera
0,016 0,11 0,19 0,42 1,0 1,9 6,1
4 kg
Anjing
0,008 0,06 0,10 0,22 0,52 1,0 3,1
12 kg
Manusia
0,0026 0,018 0,31 0,07 0,16 0,32 1,0
70 kg
 54

Lampiran 6. Perhitungan Dosis Bahan Uji

• Dosis Trimethyltin chloride (TMT)

TMT dosis 0,5 mg/kgBB yang dilarutkan dengan 0,5 ml NaCl 0,9%.
Pemberian TMT dilakukan dengan cara injeksi melalui intraperitoneal
Dosis induksi ke tikus 0,5 mg/kgBB (mis = BB tikus ialah 200 g)
200 g = 0,2 kg
0,2 kg x 0,5 mg/kgBB = 0,1 mg
Total Kebutuhan = 0,1 mg x 24 ekor x 7 hari = 16,8 mg

• Dosis Piracetam syrup 500 mg/5 ml (100 mg/ml)

Dosis lazim manusia 1200-4800 mg
Dosis untuk tikus 1200-4800 mg x 0,018 = 21,6-86,4 mg
Dosis pemberian 50 mg/200g BB
Vol. penyuntikan yang diberi untuk 1 tikus = 50 mg/100 mg x 1 ml
= 0,5 ml
Total Kebutuhan = (0,5 ml x 4 ekor) = 0,4 ml x 14 hari = 5,6 ml

• Dosis Kebutuhan Sediaan Bahan Uji

Dosis lazim manusia 3x sehari 1-2 caps @500 mg
Dosis untuk tikus 1500-3000 mg x 0,018 = 27-54 mg/hari
Larutan stock 1% = 1 gram/100 ml = 20 mg/ml
1) Dosis 50 mg/kgBB (mis = BB tikus ialah 200 g)
200 g = 0,2 kg
0,2 kg x 50 mg/kgBB = 10 mg
Vol. penyuntikan yang diberi untuk 1 tikus = 10 mg/20 mg x 1 ml = 0,5 ml
Total Kebutuhan = 0,5 ml x 4 ekor x 14 hari = 28 ml

2) Dosis 100 mg/kgBB (mis = BB tikus ialah 200 g)

200 g = 0,2 kg
0,2 kg x 100 mg/kgBB = 20 mg
Vol penyuntikkan yang diberi untuk 1 tikus = 20 mg/20 mg x 1 ml = 1 ml
 55

Total Kebutuhan = 1 ml x 4 ekor x 14 hari = 56 ml

3) Dosis 200 mg/kgBB (mis = BB tikus ialah 200 g)

200 g = 0,2 kg
0,2 kg x 200 mg/kgBB = 40 mg
Vol penyuntikkan yang diberi untuk 1 tikus = 40 mg/20 mg x 1 ml = 2 ml
Total Kebutuhan = 2 ml x 4 ekor x 14 hari = 112 ml

4) Dosis 400 mg/kgBB (mis = BB tikus ialah 200 g)

200 g = 0,2 kg
0,2 kg x 400 mg/kgBB = 80 mg
Vol penyuntikkan yang diberi untuk 1 tikus = 80 mg/20 mg x 1 ml = 4 ml
Total Kebutuhan = 0,4 ml x 4 ekor x 14 hari = 224 ml
 56

Lampiran 7. Alat dan Bahan Penelitian

Kandang Tikus Sekam Pakan Tikus

Ketamin 50 ml Xylazin 50 ml Piracetam 100 mg/5ml

Kemasan Poliherbal X Sediaan Kapsul Trimethyltin Chloride

Poliherbal X (TMT)
 57

Pemberian Oral Poliherbal X Induksi TMT Euthanasia

Ketamin Xylazin

Pembedahan Otak Tikus Organ Otak Tikus Penimbangan Otak Tikus

Larutan PBS Lumpang Alu Alat Centrifuge

 58

Larutan Standar TEP MDA Sampel Thiobarbiturat Acid (TBA)

Spektrofotmetri UV-Vis Epinephrine Trichloroacetic Acid

(TCA)
 59

Lampiran 8. Pembuatan Kurva Baku Larutan Standar MDA

Konsentrasi larutan induk TEP : 4,09 x 103 nmol/uL
Pengenceran Larutan TEP :
V1 . N1 = V2 . N2
V1 . 4,09 x 103 nmol/uL = 50 mL . 4 nmol/uL
V1 = 0,5 ml ad 50 mL

1. Larutan MDA standar 4,09 nmol/uL

Larutan TEP H2 O
No. Konsentrasi Kurva Baku (nmol/L)
(uL) (uL)
1 0,4 20 180
2 0,8 40 160
3 1,6 80 120
4 2,4 120 80
5 3,2 160 40

2. Pengukuran absorban larutan standar

Larutan ditambah 1 mL larutan TCA 20% dan 2 mL larutan TBA 0,67% lalu
dicampur homogen kemudian dipanaskan pada air mendidih selama 10 menit.
Larutan kemudian didinginkan, filtrat yang berwama merah muda diambil dan
diukur serapannya pada panjang gelombang 532 nm.
 60

Table hasil pengukuran absorbansi larutan MDA standar

Konsentrasi Kurva Baku Absorban (A) seri ke -
No.
(nmol/mL) I II III
1 0,4 0,1749 0,3227 0,2900
2 0,8 0,2563 0,4797 0,3100
3 1,6 0,4462 0,5794 0,4541
4 2,4 0,5947 0,7096 0,6192
5 3,2 0,8085 0,7872 0,8365

Persamaan regresi y = a + bx, dengan nilai y sebagai nilai absorban sebagai

konsentrasi larutan standar. Persamaan yang didapat untuk menghitung kadar
MDA.
Seri I y = (0,0809) + 0,2233x ; r = 0,9986
Seri II y = (0,3114) + 0,1574x ; r = 0,9780
Seri III y = (0,1700) + 0,1974x ; r = 0,9884
Berdasarkkan hasil pengukuran larutan standar, kurva baku MDA yang
digunakan yaitu seri I, karena mendapatkan nilai a mendekati 0, b mendekati 1
dan r mendekati 1

3. Perhitungan kadar MDA

Perhitungan kadar MDA menggunakan seri I dengan persamaan yang didapat
yaitu y = 0,0809 + 0,2233x. Kadar MDA tiap kelompok dihitung menggunakan
𝑦−𝑎
rumus : Kadar x (nmol/200uL) = 𝑏
 61

Lampiran 9. Hasil Pengukuran Kadar MDA

Kadar MDA Kadar MDA

Kelompok No. Tikus Absorban
(nmol/200 uL) (nmol/mL)
1 0,1884 0,4814 2,4071
2 0,2036 0,5495 2,7474
Normal
3 0,1925 0,4998 2,4989
4 0,1966 0,5181 2,5907
1 0,6037 2,3412 11,7060
2 0,5956 2,3050 11,5250
Negatif
3 0,6070 2,3560 11,7800
4 0,6292 2,4554 12,2770
1 0,1603 0,3556 1,7779
2 0,1549 0,3314 1,6570
Positif
3 0,1697 0,3977 1,9884
4 0,1720 0,4080 2,0399
1 0,4242 1,5374 7,6870
Dosis 2 0,4560 1,6798 8,3990
50 mg/kgBB 3 0,4641 1,7161 8,5804
4 0,4542 1,6717 8,3587
1 0,3297 1,1142 5,5710
Dosis 2 0,3389 1,1554 5,7770
100 mg/kgBB 3 0,3012 0,9866 4,9328
4 0,3314 1,1218 5,6090
1 0,2236 0,6391 3,1953
Dosis 2 0,2030 0,5468 2,7340
200 mg/kgBB 3 0,2159 0,6046 3,0228
4 0,2205 0,6252 3,1258
1 0,1549 0,3314 1,6570
Dosis 2 0,1720 0,4080 2,0399
400 mg/kg BB 3 0,1884 0,4814 2,4071
4 0,1649 0,3762 1,8809
 62

Lampiran 10. Hasil Statistic Uji Normalitas Data Kadar MDA

Uji normalitas dilakukan untuk mengetahui distribusi data pada semua kelompok
perlakuan sebagai syarat uji analisis varian (ANOVA).
Hipotesis: H0 : data terdistribusi normal
H1 : data tidak terdistribusi normal
Nilai α yang digunakan pada α = 0,05
Kriteria pengujian : Jika P > α maka H0 diterima
Jika P < 0 maka H1 diterima

Hasil perhitungan dengan program SPSS

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test

KadarMDA

N 28
Mean 4.9990
Normal Parametersa,b
Std. Deviation 3.58029
Absolute .264
Most Extreme Differences Positive .264
Negative -.175
Kolmogorov-Smirnov Z 1.398
Asymp. Sig. (2-tailed) .040

a. Test distribution is Normal.

b. Calculated from data.

Hasil uji normalitas pada data kadar MDA mendapatkan P (0.040) < α maka H1
diterima dan menolak H0 artinya data kadar MDA tidak terdistribusi normal
 63

Lampiran 11. Hasil Statistic Uji Homogenitas Data Kadar MDA

Uji homogenitas betujuan untuk mengetahui homogenitas pada data kadar MDA yang
didapat sebagai persyaratan uji (ANOVA).
Hipotesis: H0 : data homogen
H1 : data tidak homogen
Nilai α yang digunakan pada α = 0,05
Kriteria pengujian : Jika P > α maka H0 diterima
Jika P < 0 maka H1 diterima

Hasil perhitungan dengan program SPSS

Test of Homogeneity of Variances
KadarMDA

Levene Statistic df1 df2 Sig.

.752 6 21 .615

Hasil uji homogenitas pada data kadar MDA mendapatkan P (0.615) > α maka H0
diterima dan menolak H1 artinya data kadar MDA homogen
 64

Lampiran 12. Hasil Statistic Uji Kruskal-Wallis Data Kadar MDA

Uji Kruskal-Wallis dilakukan untuk mengetahui adakah perbedaan bermakna dari data
kadar MDA yang didapat dari masing-masing kelompok perlakuan dengan
Hipotesis: H0 : tidak ada perbedaan
H1 : ada perbedaan
Nilai α yang digunakan pada α = 0,05
Kriteria pengujian : Jika P > α maka H0 diterima
Jika P < 0 maka H1 diterima

Hasil perhitungan dengan program SPSS

Kruskal-Wallis Test
Ranks

Kelompok N Mean Rank

Normal 4 10.63
Test Statisticsa,b
Negatif 4 26.50
KadarMDA
Positif 4 4.00
Chi-Square 25.867
Dosis I 4 22.50
KadarMDA df 6
Dosis II 4 18.50
Asymp. Sig. .000
Dosis III 4 14.25
a. Kruskal Wallis Test
Dosis IV 4 5.13
b. Grouping Variable: Kelompok
Total 28

Hasil dari uji Kruskal Wallis dari data kadar MDA tiap kelompok perlakuan
mendapatkan P (0,000) < α, maka H1 diterima dan menolak H0
Dari uji Kruskal Wallis data kadar MDA adanya perbedaan pada setiap kelompok uji,
schingga pengujian akan dilanjutkan dengan uji Mann Whitney.
 65

Lampiran 13. Hasil Statistic Uji Mann Whitney Data Kadar MDA
Uji Mann Whiney dilakukan untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan bermakna
antara pasangan dari masing-masing kelompok uji terhadap kadar MDA dengan
Hipotesis: H0 : tidak ada perbedaan bermakna
H1 : ada perbedaan bermakna
Nilai α yang digunakan pada α = 0,05
Kriteria pengujian : Jika P > α maka H0 diterima
Jika P < 0 maka H1 diterima

Hasil perhitungan dengan program SPSS

Mann-Whitney Test
a. Kelompok 1 dan kelompok 2
Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Normal 4 2.50 10.00

KadarMDA Negatif 4 6.50 26.00

Total 8

Test Statisticsa

Kelompok 1,2 KadarMDA

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.
 66

b. Kelompok 1 dan kelompok 3

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Normal 4 6.50 26.00

KadarMDA Positif 4 2.50 10.00

Total 8

Test Statisticsa

Kelompok 1,3 KadarMDA

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed9 .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

c. Kelompok 1 dan kelompok 4

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Normal 4 2.50 10.00

KadarMDA Dosis I 4 6.50 26.00

Total 8

Test Statisticsa

Kelompok 1,4 KadarMDA

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.
 67

d. Kelompok 1 dan kelompok 5

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Normal 4 2.50 10.00

KadarMDA Dosis II 4 6.50 26.00

Total 8

Test Statisticsa

Kelompok 1,5 KadarMDA

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

e. Kelompok 1 dan kelompok 6

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Normal 4 2.75 11.00

KadarMDA Dosis III 4 6.25 25.00

Total 8

Test Statisticsa

Kelompok 1,6 KadarMDA

Mann-Whitney U 1.000
Wilcoxon W 11.000
Z -2.021
Asymp. Sig. (2-tailed) .043
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .057b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

f.
 68

g. Kelompok 1 dan kelompok 7

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Normal 4 6.38 25.50

KadarMDA Dosis IV 4 2.63 10.50

Total 8

Test Statisticsa

Kelompok 1,7 KadarMDA

Mann-Whitney U .500
Wilcoxon W 10.500
Z -2.178
Asymp. Sig. (2-tailed) .029
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

h. Kelompok 2 dan kelompok 3

Test Statisticsa

Kelompok 2,3 KadarMDA

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

i. Kelompok 2 dan kelompok 4

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Negatif 4 6.50 26.00

KadarMDA Dosis I 4 2.50 10.00

Total 8
 69

Test Statisticsa

Kelompok 2,4 KadarMDA

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

j. Kelompok 2 dan kelompok 5

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Negatif 4 6.50 26.00

KadarMDA Dosis II 4 2.50 10.00

Total 8

Test Statisticsa

Kelompok 2,5 KadarMDA

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

k. Kelompok 2 dan kelompok 6

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Negatif 4 6.50 26.00

KadarMDA Dosis III 4 2.50 10.00

Total 8
 70

Test Statisticsa

Kelompok 2,6 KadarMDA

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

l. Kelompok 2 dan kelompok 7

Test Statisticsa
Kelompok 2,7 KadarMDA

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

m. Kelompok 3 dan kelompok 4

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Positif 4 2.50 10.00

KadarMDA Dosis I 4 6.50 26.00

Total 8

Test Statisticsa

Kelompok 3,4 KadarMDA

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.
 71

n. Kelompok 3 dan kelompok 5

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Positif 4 2.50 10.00

KadarMDA Dosis II 4 6.50 26.00

Total 8

Test Statisticsa

Kelompok 3,5 KadarMDA

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

o. Kelompok 3 dan kelompok 6

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Positif 4 2.50 10.00

KadarMDA Dosis III 4 6.50 26.00

Total 8

Test Statisticsa

Kelompok 3,6 KadarMDA

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

p. Kelompok 3 dan kelompok 7

 72

Test Statisticsa

Kelompok 3,7 KadarMDA

Mann-Whitney U 6.000
Wilcoxon W 16.000
Z -.584
Asymp. Sig. (2-tailed) .559
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .686b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

q. Kelompok 4 dan kelompok 5

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Dosis I 4 6.50 26.00

KadarMDA Dosis II 4 2.50 10.00

Total 8

Test Statisticsa

Kelompok 4,5 KadarMDA

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b
a. Grouping Variable: Kelompok
b. Not corrected for ties.

r. Kelompok 4 dan kelompok 6

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Dosis I 4 6.50 26.00

KadarMDA Dosis III 4 2.50 10.00

Total 8
 73

Test Statisticsa

Kelompok 4,6 KadarMDA

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

s. Kelompok 4 dan kelompok 7

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Dosis I 4 6.50 26.00

KadarMDA Dosis IV 4 2.50 10.00

Total 8

Test Statisticsa

Kelompok 4,7 KadarMDA

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b
a. Grouping Variable: Kelompok
b. Not corrected for ties.

t. Kelompok 5 dan kelompok 6

Test Statisticsa

Kelompok 5,6 KadarMDA

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.
 74

u. Kelompok 5 dan kelompok 7

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Dosis II 4 6.50 26.00

KadarMDA Dosis IV 4 2.50 10.00

Total 8

Test Statisticsa

Kelompok 5,7 KadarMDA

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

v. Kelompok 6 dan kelompok 7

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Dosis III 4 6.50 26.00

KadarMDA Dosis IV 4 2.50 10.00

Total 8

Test Statisticsa

Kelompok 6,7 KadarMDA

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.
 75

Kesimpulan Hasil Uji Mann Whitney :

a. Perbandingan kelompok 1 dan kelompok 2 ada perbedaan bermakna
b. Perbandingan kelompok 1 dan kelompok 3 ada perbedaan bermakna
c. Perbandingan kelompok 1 dan kelompok 4 ada perbedaan bermakna
d. Perbandingan kelompok 1 dan kelompok 5 ada perbedaan bermakna
e. Perbandingan kelompok 1 dan kelompok 6 tidak ada perbedaan bermakna
f. Perbandingan kelompok 1 dan kelompok 7 ada perbedaan bermakna
g. Perbandingan kelompok 2 dan kelompok 3 ada perbedaan bermakna
h. Perbandingan kelompok 2 dan kelompok 4 ada perbedaan bermakna
i. Perbandingan kelompok 2 dan kelompok 5 ada perbedaan bermakna
j. Perbandingan kelompok 2 dan kelompok 6 ada perbedaan bermakna
k. Perbandingan kelompok 2 dan kelompok 7 ada perbedaan bermakna
l. Perbandingan kelompok 3 dan kelompok 4 ada perbedaan bermakna
m. Perbandingan kelompok 3 dan kelompok 5 ada perbedaan bermakna
n. Perbandingan kelompok 3 dan kelompok 6 ada perbedaan bermakna
o. Perbandingan kelompok 3 dan kelompok 7 tidak ada perbedaan bermakna
p. Perbandingan kelompok 4 dan kelompok 5 ada perbedaan bermakna
q. Perbandingan kelompok 4 dan kelompok 6 ada perbedaan bermakna
r. Perbandingan kelompok 4 dan kelompok 7 ada perbedaan bermakna
s. Perbandingan kelompok 5 dan kelompok 6 ada perbedaan bermakna
t. Perbandingan kelompok 5 dan kelompok 7 ada perbedaan bermakna
u. Perbandingan kelompok 6 dan kelompok 7 ada perbedaan bermakna
 76

Lampiran 14. Hasil Pengukuran Aktivitas SOD

1. Hasil Pengukuran Blangko
Serapan pada menit ke - ΔA/menit
Blangko
0,1048 0,1213 0,1350 0,1543 0,0165

2. Hasil Pengukuran Aktivitas SOD

Aktivitas Aktivitas
No. Serapan pada menit ke -
Kelompok ΔA/menit %Hambatan SOD SOD
Tikus
1 2 3 4 (U/10uL) (U/mL)
1 0,5595 0,5608 0,5621 0,5634 0,0013 91,92% 1,8384 183,84
2 0,5647 0,5671 0,5695 0,5719 0,0024 85,45% 1,7091 170,91
Normal
3 0,5472 0,5482 0,5492 0,5492 0,0010 93,94% 1,8788 187,88
4 0,5849 0,5864 0,5864 0,5879 0,0015 91,11% 1,8222 182,22
1 0,1175 0,1266 0,1358 0,1404 0,0076 53,74% 1,0747 107,47
2 0,1883 0,1954 0,2025 0,2096 0,0071 56,97% 1,1394 113,94
Negatif
3 0,1652 0,1722 0,1792 0,1862 0,0070 57,58% 1,1515 115,15
4 0,1602 0,1677 0,1752 0,1827 0,0075 54,55% 1,0909 109,09
1 0,6488 0,6495 0,6502 0,6509 0,0007 95,56% 1,9111 191,11
2 0,6170 0,6191 0,6212 0,6233 0,0021 87,27% 1,7455 174,55
Positif
3 0,6464 0,6472 0,6480 0,6488 0,0008 94,95% 1,8990 189,90
4 0,6377 0,6401 0,6425 0,6449 0,0024 85,25% 1,7051 170,51
1 0,3004 0,3066 0,3135 0,3188 0,0061 62,83% 1,2566 125,66
Dosis 2 0,2980 0,3015 0,3093 0,3161 0,0060 63,43% 1,2687 126,87
50
3 0,3140 0,3210 0,3270 0,3330 0,0063 61,62% 1,2323 123,23
mg/kgBB
4 0,3086 0,3146 0,3210 0,3266 0,0060 63,64% 1,2727 127,27
1 0,4670 0,4720 0,4780 0,4770 0,0033 79,80% 1,5960 159,60
Dosis 2 0,4685 0,4711 0,4748 0,4777 0,0031 81,41% 1,6283 162,83
100
3 0,4580 0,4612 0,4640 0,4667 0,0029 82,42% 1,6485 164,85
mg/kgBB
4 0,4980 0,5164 0,4856 0,5057 0,0026 84,44% 1,6889 168,89
1 0,5906 0,5915 0,5929 0,5935 0,0010 94,14% 1,8828 188,28
Dosis 2 0,6002 0,6034 0,6055 0,6067 0,0022 86,87% 1,7374 173,74
200
3 0,5715 0,5715 0,5730 0,5742 0,0009 94,55% 1,8909 189,09
mg/kgBB
4 0,6206 0,6216 0,6217 0,6239 0,0011 93,33% 1,8667 186,67
1 0,6989 0,7000 0,7015 0,7028 0,0013 92,12% 1,8424 184,24
Dosis 2 0,7026 0,7030 0,7045 0,7055 0,0010 94,20% 1,8840 188,40
400
3 0,6913 0,6929 0,6928 0,6932 0,0006 96,16% 1,9232 192,32
mg/kg BB
4 0,6875 0,6921 0,7154 0,6884 0,0003 98,18% 1,9636 196,36
 77

Lampiran 15. Hasil Statistic Uji Normalitas Data Aktivitas SOD

Uji normalitas dilakukan untuk mengetahui distribusi data Aktivitas SOD pada semua
kelompok perlakuan sebagai syarat uji analisis varian (ANOVA).
Hipotesis: H0 : data terdistribusi normal
H1 : data tidak terdistribusi normal
Nilai α yang digunakan pada α = 0,05
Kriteria pengujian : Jika P > α maka H0 diterima
Jika P < 0 maka H1 diterima

Hasil perhitungan dengan program SPSS

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test

AktivitasSOD

N 28
Mean 162.6739
Normal Parametersa,b
Std. Deviation 30.15034
Absolute .189
Most Extreme Differences Positive .166
Negative -.189
Kolmogorov-Smirnov Z .999
Asymp. Sig. (2-tailed) .271

a. Test distribution is Normal.

b. Calculated from data.

Hasil uji normalitas pada data Aktivitas SOD mendapatkan P (0.271) > α maka H0
diterima dan menolak H1 artinya data Aktivitas SOD terdistribusi normal
 78

Lampiran 16. Hasil Statistic Uji Homogenitas Data Aktivitas SOD

Uji homogenitas betujuan untuk mengetahui homogenitas pada data Aktivitas SOD
yang didapat sebagai persyaratan uji (ANOVA).
Hipotesis: H0 : data homogen
H1 : data tidak homogen
Nilai α yang digunakan pada α = 0,05
Kriteria pengujian : Jika P > α maka H0 diterima
Jika P < 0 maka H1 diterima

Hasil perhitungan dengan program SPSS

Test of Homogeneity of Variances

AktivitasSOD

Levene Statistic df1 df2 Sig.

3.687 6 21 .012

Hasil uji homogenitas pada data Aktivitas SOD mendapatkan P (0.012) < α maka H1
diterima dan menolak H0 artinya data Aktivitas SOD tidak homogen
 79

Lampiran 17. Hasil Statistic Uji Kruskal-Wallis Data Aktivitas SOD

Uji Kruskal-Wallis dilakukan untuk mengetahui adakah perbedaan bermakna dari data
aktivitas SOD yang didapat dari masing-masing kelompok perlakuan dengan
Hipotesis: H0 : tidak ada perbedaan
H1 : ada perbedaan
Nilai α yang digunakan pada α = 0,05
Kriteria pengujian : Jika P > α maka H0 diterima
Jika P < 0 maka H1 diterima

Hasil perhitungan dengan program SPSS

Kruskal-Wallis Test

Test Statisticsa,b

AktivitasSOD

Chi-Square 23.135
df 6
Asymp. Sig. .001

a. Kruskal Wallis Test

b. Grouping Variable: Kelompok

Hasil dari uji Kruskal Wallis dari data aktivitas SOD tiap kelompok perlakuan
mendapatkan P (0,001) < α, maka H1 diterima dan menolak H0
Dari uji Kruskal Wallis data akivias SOD adanya perbedaan pada setiap kelompok uji,
schingga pengujian akan dilanjutkan dengan uji Mann Whitney.
 80

Lampiran 18. Hasil Statistic Uji Mann Whitney Data Aktivitas SOD
Uji Mann-Whiney dilakukan untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan bermakna
antara pasangan dari masing-masing kelompok uji terhadap aktivitas SOD dengan
Hipotesis: H0 : tidak ada perbedaan bermakna
H1 : ada perbedaan bermakna
Nilai α yang digunakan pada α = 0,05
Kriteria pengujian : Jika P > α maka H0 diterima
Jika P < 0 maka H1 diterima

Hasil perhitungan dengan program SPSS

Mann-Whitney Test
a. Kelompok 1 dan kelompok 2
Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Normal 4 6.50 26.00

AktivitasSOD Negatif 4 2.50 10.00

Total 8

Test Statisticsa

AktivitasSOD

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

b. Kelompok 1 dan kelompok 3

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Normal 4 4.25 17.00

AktivitasSOD Positif 4 4.75 19.00

Total 8
 81

Test Statisticsa

AktivitasSOD

Mann-Whitney U 7.000
Wilcoxon W 17.000
Z -.289
Asymp. Sig. (2-tailed) .773
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .886b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

c. Kelompok 1 dan kelompok 4

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Normal 4 6.50 26.00

AktivitasSOD Dosis I 4 2.50 10.00

Total 8

Test Statisticsa

AktivitasSOD

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

d. Kelompok 1 dan kelompok 5

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Normal 4 6.50 26.00

AktivitasSOD Dosis II 4 2.50 10.00

Total 8
 82

Test Statisticsa

AktivitasSOD

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

e. Kelompok 1 dan kelompok 6

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Normal 4 4.75 19.00

AktivitasSOD Dosis III 4 4.25 17.00

Total 8

Test Statisticsa

AktivitasSOD

Mann-Whitney U 7.000
Wilcoxon W 17.000
Z -.289
Asymp. Sig. (2-tailed) .773
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .886b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

f. Kelompok 1 dan kelompok 7

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Normal 4 3.50 14.00

AktivitasSOD Dosis IV 4 5.50 22.00

Total 8
 83

Test Statisticsa

AktivitasSOD

Mann-Whitney U 4.000
Wilcoxon W 14.000
Z -1.155
Asymp. Sig. (2-tailed) .248
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .343b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

g. Kelompok 2 dan kelompok 3

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Negatif 4 2.50 10.00

AktivitasSOD Positif 4 6.50 26.00

Total 8

Test Statisticsa

AktivitasSOD

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b
a. Grouping Variable: Kelompok
b. Not corrected for ties.

h. Kelompok 2 dan kelompok 4

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Negatif 4 2.50 10.00

AktivitasSOD Dosis I 4 6.50 26.00

Total 8
 84

Test Statisticsa

AktivitasSOD

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

i. Kelompok 2 dan kelompok 5

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Negatif 4 2.50 10.00

AktivitasSOD Dosis II 4 6.50 26.00

Total 8

Test Statisticsa

AktivitasSOD

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

j. Kelompok 2 dan kelompok 6

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Negatif 4 2.50 10.00

AktivitasSOD Dosis III 4 6.50 26.00

Total 8
 85

Test Statisticsa

AktivitasSOD

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

k. Kelompok 2 dan kelompok 7

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Negatif 4 2.50 10.00

AktivitasSOD Dosis IV 4 6.50 26.00

Total 8

Test Statisticsa

AktivitasSOD

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b
a. Grouping Variable: Kelompok
b. Not corrected for ties.

l. Kelompok 3 dan kelompok 4

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Positif 4 6.50 26.00

AktivitasSOD Dosis I 4 2.50 10.00

Total 8
 86

Test Statisticsa

AktivitasSOD

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

m. Kelompok 3 dan kelompok 5

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Positif 4 6.50 26.00

AktivitasSOD Dosis II 4 2.50 10.00

Total 8

Test Statisticsa

AktivitasSOD

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b
a. Grouping Variable: Kelompok
b. Not corrected for ties.

n. Kelompok 3 dan kelompok 6

Ranks
Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Positif 4 3.50 14.00

AktivitasSOD Dosis III 4 5.50 22.00

Total 8
 87

Test Statisticsa

AktivitasSOD

Mann-Whitney U 4.000
Wilcoxon W 14.000
Z -1.155
Asymp. Sig. (2-tailed) .248
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .343b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

o. Kelompok 3 dan kelompok 7

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Positif 4 2.75 11.00

AktivitasSOD Dosis IV 4 6.25 25.00

Total 8

Test Statisticsa

AktivitasSOD

Mann-Whitney U 1.000
Wilcoxon W 11.000
Z -2.021
Asymp. Sig. (2-tailed) .043
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .057b
a. Grouping Variable: Kelompok
b. Not corrected for ties.

p. Kelompok 4 dan kelompok 5

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Dosis I 4 2.50 10.00

AktivitasSOD Dosis II 4 6.50 26.00

Total 8
 88

Test Statisticsa

AktivitasSOD

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

q. Kelompok 4 dan kelompok 6

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Dosis I 4 2.50 10.00

AktivitasSOD Dosis III 4 6.50 26.00

Total 8

Test Statisticsa

AktivitasSOD

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b
a. Grouping Variable: Kelompok
b. Not corrected for ties.

r. Kelompok 4 dan kelompok 7

Ranks
Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Dosis I 4 2.50 10.00

AktivitasSOD Dosis IV 4 6.50 26.00

Total 8
 89

Test Statisticsa

AktivitasSOD

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

s. Kelompok 5 dan kelompok 6

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Dosis II 4 2.50 10.00

AktivitasSOD Dosis III 4 6.50 26.00

Total 8

Test Statisticsa

AktivitasSOD

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

t. Kelompok 5 dan kelompok 7

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Dosis II 4 2.50 10.00

AktivitasSOD Dosis IV 4 6.50 26.00

Total 8
 90

Test Statisticsa

AktivitasSOD

Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 10.000
Z -2.309
Asymp. Sig. (2-tailed) .021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .029b

a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.

u. Kelompok 6 dan kelompok 7

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

Dosis III 4 3.50 14.00

AktivitasSOD Dosis IV 4 5.50 22.00

Total 8

Test Statisticsa

AktivitasSOD

Mann-Whitney U 4.000
Wilcoxon W 14.000
Z -1.155
Asymp. Sig. (2-tailed) .248
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .343b
a. Grouping Variable: Kelompok
b. Not corrected for ties.

Kesimpulan Hasil Uji Mann Whitney :

a. Perbandingan kelompok 1 dan kelompok 2 ada perbedaan bermakna
b. Perbandingan kelompok 1 dan kelompok 3 tidak ada perbedaan bermakna
c. Perbandingan kelompok 1 dan kelompok 4 ada perbedaan bermakna
d. Perbandingan kelompok 1 dan kelompok 5 ada perbedaan bermakna
e. Perbandingan kelompok 1 dan kelompok 6 tidak ada perbedaan bermakna
f. Perbandingan kelompok 1 dan kelompok 7 tidak ada perbedaan bermakna
g. Perbandingan kelompok 2 dan kelompok 3 ada perbedaan bermakna
h. Perbandingan kelompok 2 dan kelompok 4 ada perbedaan bermakna
 91

i. Perbandingan kelompok 2 dan kelompok 5 ada perbedaan bermakna

j. Perbandingan kelompok 2 dan kelompok 6 ada perbedaan bermakna
k. Perbandingan kelompok 2 dan kelompok 7 ada perbedaan bermakna
l. Perbandingan kelompok 3 dan kelompok 4 ada perbedaan bermakna
m. Perbandingan kelompok 3 dan kelompok 5 ada perbedaan bermakna
n. Perbandingan kelompok 3 dan kelompok 6 tidak ada perbedaan bermakna
o. Perbandingan kelompok 3 dan kelompok 7 ada perbedaan bermakna
p. Perbandingan kelompok 4 dan kelompok 5 ada perbedaan bermakna
q. Perbandingan kelompok 4 dan kelompok 6 ada perbedaan bermakna
r. Perbandingan kelompok 4 dan kelompok 7 ada perbedaan bermakna
s. Perbandingan kelompok 5 dan kelompok 6 ada perbedaan bermakna
t. Perbandingan kelompok 5 dan kelompok 7 ada perbedaan bermakna
u. Perbandingan kelompok 6 dan kelompok 7 tidak ada perbedaan bermakna