REKAYASA PROTEIN MELALUI

MUTAGENESIS
Prof. Titania T. Nugroho, Ph. D.

Rekayasa protein melalui

mutagenesis protein
terarah

a) Menyisipkan hasil PCR dengan DNA

yang mengandung mutasi ke dalam
plasmid
b) Hibridisasi DNA sintetik yang
mengandung mutasi, dgn plasmid
atau bakteriofag berrantai tunggal,
diikuti sintesis rantai komplemen
(oligodirected mutagenesis with
plasmid DNA)

1
 Oligonucleotide
directed
mutageneisi with
plasmid DNA
(Baca keterangan
Gambar 8.3. buku
Molecular
Biotechnology)

Catatan:
MCS = Multiple Cloning Site

Mutagenesis menggunakan PCR dengan

Mega Primer
A M
*
5'
3'
}Template
1. PCR with primers A (5' flanking primer) and M (mutagenic primer)
2. Purify product

*
*
PCR with A-M megaprimer and B, 3' flanking primer

A-M megaprimer
*
}Template
B
Purify product

*
*
mutant gene

2
 Cara lain
mutagenesis
menggunaka
n PCR.
Mutagenesis
terarah
nukleotida
dengan PCR
(Gambar 8.4.
Buku
Molecular
Biotechnolog
y)

Mutagenesis
random
menggunakan
campuran primer
degeneratif
(Gambar 8.6. Buku
Molecular
Biotechnology)