Soal Screening Doping

Level Easy:

1. Jelaskan urgensi praktikum analisis doping

Untuk memahami keterampilan dalam melakukan analisis sampel biologis untuk
mendeteksi adanya kandungan senyawa doping dalam tubuh yang digunakan pada
kondisi tertentu.

2. Jelaskan tujuan praktikum analisis doping

Untuk mengetahui matriks yang digunakan, prinsip, dan teknik dalam bioanalisis
senyawa doping

3. Jelaskan pengertian doping

Doping merupakan penggunaan zat terlarang dalam olahraga untuk meningkatkan
performa atau penampilan seorang atlet pada kompetisi olahraga. Penggunaan doping
merupakan suatu hal yang ilegal untuk dilakukan karena membahayakan keselamatan
pemakainya, menyebabkan ketergantungan, dan melanggar sportivitas dalam olahraga.
Ada beberapa faktor yang mempengaruhi seorang atlet menggunakan doping seperti
aspek psikososial, persaingan, dan tekanan untuk menang.

4. Jelaskan golongan obat-obatan yang termasuk doping

Golongan stimulan contoh obat amfetamin
Golongan anabolic androgenic steroid contoh kombinasi GH (growth hormone) dam
HCG (human chorionic gonadotropin)
Golongan diuretik contoh HCT
Golongan beta bloker contoh bisoprolol

5. Jelaskan mekanisme kerja golongan obat doping

Golongan stimulan mekanismenya meningkatkan neurotransmitter seperti noradrenalin,
dopamin, dan serotonin
Golongan anabolic androgenic steroid mekanismenya mempengaruhi androgen
endogen sehingga dapat meningkatkan dan menambah massa otot
Golongan diuretik mekanismenya meningkatkan produksi urin dengan tujuan
melarutkan obat-obatan yang digunakan termasuk metabolitnya
Golongan beta bloker mekanismenya mengurangi rasa cemas sehingga lebih
berkonsentrasi
6. Apa organisasi anti-doping di Indonesia dan dunia?
Jawab: Dalam mengurangi penggunaan doping tingkat dunia terdapat organisasi World
Anti Doping Agency (WADA), sedangkan di Indonesia sendiri terdapat organisasi
Lembaga Anti Doping Indonesia (LADI).
7. Jelaskan sampel biologis yang sering digunakan untuk analisis doping
- Urin
Urin adalah cairan biologis yang paling umum digunakan dalam analisis doping
karena hampir semua doping agent yang dikomsumsi akan diekskresikan melalui
urin. Namun dalam pengujian sampel urin perlu penyiapan sampel yang tepat untuk
mencegah ketidakmurnian saat analisis
- Darah
Matriks darah diketahui memberikan informasi pelengkap untuk analisis urin, maka
perlu dilakukan preparasi sampel untuk menggunakan matriks ini seperti metode
PPT, LLE, SPE. Selama beberapa tahun terakhir metode DBS untuk pengumpulan
darah dalam kontrol doping sering digunakan

8. Jelaskan metode skirining yang paling sering digunakan dalam analisis doping
Metode skrining yang paling sering digunakan untuk analisis doping adalah GC/MS yang
sensitif dan selektif mendeteksi doping golongan steroid bebas dan terkonjugasi.
Metode ini juga mampu mendeteksi enam marker diagnostik steroid yang berguna
untuk identifikasi jenis kelamin dan interpretasi hasil

Level: Medium – Hard

1. Apa fungsi dari positive control urine, dan negative control urine dalam doping
control analysis?
Jawab: These controls provide an aid in the interpretation of positive and negative
test results and verify proper test performance. Positive controls are used to assess
the test validity of the experimental protocol or equipment by producing the
expected result. Negative controls are characterized by the absence of reagents or
components that are necessary for successful analyte detection.
Kontrol ini memberikan bantuan dalam interpretasi hasil tes positif dan negatif dan
memverifikasi kinerja tes yang tepat. Kontrol positif digunakan untuk menilai validitas
uji protokol atau peralatan eksperimental dengan menghasilkan hasil yang
diharapkan. Kontrol negatif ditandai dengan tidak adanya reagen atau komponen
yang diperlukan untuk deteksi analit yang berhasil.
2. Apa syarat dari negative control urine?
Jawab: The negative control urine must not contain any of the target compounds.
The chromatograms should not have any integrated peaks within the expected
retention time ranges for any of the monitored diagnostic ions
Urin kontrol negatif tidak boleh mengandung senyawa target apa pun. Kromatogram
tidak boleh memiliki puncak yang terintegrasi dalam rentang waktu retensi yang
diharapkan untuk setiap ion diagnostik yang dipantau
3. Apa itu MRM (Multiple reaction monitoring)?
Jawab: is a highly specific and sensitive mass spectrometry technique that can
selectively quantify compounds within complex mixtures.
 Modern liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS)
with multiple reaction monitoring (MRM) mode serves as the foundation for
accurate simultaneous multi-analyte quantitation across large sample sets to provide
high-quality information on target molecular profiles in complex systems.
adalah teknik spektrometri massa yang sangat spesifik dan sensitif yang dapat
mengukur senyawa secara selektif dalam campuran kompleks. Kromatografi cair-
spektrometri massa tandem modern (LC-MS/MS) dengan mode multiple reaction
monitoring (MRM) berfungsi sebagai dasar untuk kuantisasi multi-analit simultan
yang akurat di seluruh set sampel besar untuk memberikan informasi berkualitas
tinggi pada profil molekul target dalam sistem yang kompleks
4. Bagaimana penerapan Teknik MRM dalam doping control?
For doping control purposes, screening methods are designed to maximize the
detection of as many compounds as possible at the expense of optimum conditions
for individual compounds. Tandem MS systems (MS/MS) have gained widespread use
because this technique can be used to isolate ions in order to determine their
relationship with other ions (either generated at the same time or during subsequent
fragmentation), thereby providing additional structural information. The detection of
target compounds by LC-MS/MS is achieved by comparing the retention time and
relative intensities of multiple reaction monitoring (MRM; also called selected
precursor/product ion pairs) from a sample to those obtained from the analysis of a
reference compound. The likelihood that a target compound and an interfering
substance will have the same precursor/product ion pair is considerably lower than
the likelihood that the two spectra will contain the same fragment ion due to the
electrospray ionization method used in LC-MS.
Untuk tujuan kontrol doping, metode skrining dirancang untuk memaksimalkan
deteksi senyawa sebanyak mungkin dengan mengorbankan kondisi optimal untuk
masing-masing senyawa. Sistem Tandem MS (MS/MS) telah digunakan secara luas
karena teknik ini dapat digunakan untuk mengisolasi ion untuk menentukan
hubungannya dengan ion lain (baik dihasilkan pada waktu yang sama atau selama
fragmentasi berikutnya), sehingga memberikan informasi struktural tambahan.
Deteksi senyawa target oleh LC-MS/MS dicapai dengan membandingkan waktu
retensi dan intensitas relatif dari pemantauan reaksi berganda (MRM; juga disebut
pasangan ion prekursor/produk terpilih) dari sampel dengan yang diperoleh dari
analisis senyawa referensi . Kemungkinan bahwa senyawa target dan zat pengganggu
akan memiliki pasangan ion prekursor/produk yang sama jauh lebih rendah daripada
kemungkinan bahwa dua spektrum akan mengandung ion fragmen yang sama karena
metode ionisasi elektrospray yang digunakan dalam LC-MS.
 5. Apa hal terkait analisis senyawa doping menggunakan LC-MS/MS yang perlu
diperhatikan, berkaitan dengan waktu retensi antara internal strandar dengan
kalibrator, positive control urine, negative control urine, dan sampel?
Jawab: Internal standard retention times are expected to be stable and within ±0.3
min of the retention times presented in Tables 2– 4. Retention times for target
compounds present in calibrators and positive control urine are expected to be
within ±0.5 min of the retention times presented in Tables 2– 4. (the table can be
seen in: 10.1007/978-1-61779-934-1_10)
6. Jelaskan workflow dalam doping control analysis!
Jawab:

Level: Advanced

1. Jelaskan kondisi optimal HPLC untuk analisis senyawa golongan beta bloker!
Jawab: Dalam kebanyakan kasus, pemisahan dilakukan pada fase diam alkil, seperti
C18 dan C8. Fase diam siano dan kolom berbasis silika yang tidak dimodifikasi juga
telah digunakan, serta yang monolitik. Fase gerak yang diterapkan pada analisis β-
blocker biasanya terdiri dari berbagai kombinasi asetonitril atau metanol dengan
buffer. Buffer fosfat paling sering digunakan (5 mM hingga 50 mM).
β-blocker terprotonasi pada pH rendah dari fase gerak. Biasanya, peningkatan retensi
β-blocker diamati ketika pH fase gerak meningkat menjadi 6,5. Peningkatan pH
 mengurangi protonasi, meningkatkan hidrofobisitas. Parameter penting lainnya
adalah jenis fase diam dan ukuran partikelnya. Empat senyawa dipisahkan dalam 25
menit menggunakan 5 µm C18; namun, mengubah kolom menjadi monolitik
memungkinkan waktu dikurangi menjadi 5 menit (dengan laju aliran yang
meningkat). Pengurangan ukuran partikel fase diam C18 menjadi 3,5 µm
memungkinkan pemisahan 5–8 komponen campuran β-blocker dalam 10 menit,
sedangkan pengurangan lebih lanjut menjadi 1,7 µm memberikan pemisahan hingga
selusin senyawa dalam waktu yang sama.
(for further explanation, please check out this articles:
https://doi.org/10.3390/molecules28073249)
2. Jelaskan metode analisis yang terbaik untuk menganalisis doping golongan anabolic
steroids, dan internal standar apa yang digunakan!
Jawab: Reversed-phase LC in combination with gradient elution is preferred for the
detection. Mobile phases consist of aqueous solutions of formic acid (0.1%) or
ammonium acetate in combination with acetonitrile or methanol. As internal
standard 17a-methyltestosterone, deuterated analogues of testosterone or
fluoxymesterone can be used.
LC fase terbalik dalam kombinasi dengan elusi gradien lebih disukai untuk deteksi.
Fase gerak terdiri dari larutan berair asam format (0,1%) atau amonium asetat dalam
kombinasi dengan asetonitril atau metanol. Sebagai 17a-methyltestosterone standar
internal, analog testosteron atau fluoxymesterone yang dideuterasi dapat digunakan.

3. Jelaskan metode analisis yang terbaik untuk menganalisis doping golongan narkotika
dan internal standar apa yang digunakan!
Jawab: Detection of narcotics is performed by reversed-phase LC-MS using an
aqueous solution of acetic acid (1%) and MeOH. Gradient elution is applied starting
with low percentages of organic modifier in order to improve the retention of the
poorly retained morphine and hydromorphone. In contrast, high percentages of
organic modifier are necessary for the elution of hydrophobic compounds including
buprenorphine and methadone. As an internal standard nalorphine is used
Deteksi narkotika dilakukan dengan fase terbalik LC-MS menggunakan larutan asam
asetat (1%) dan MeOH. Elusi gradien diterapkan dimulai dengan persentase
pengubah organik yang rendah untuk meningkatkan retensi morfin dan hidromorfon
yang kurang tertahan. Sebaliknya, persentase pengubah organik yang tinggi
diperlukan untuk elusi senyawa hidrofobik termasuk buprenorfin dan metadon.
Sebagai nalorfin standar internal digunakan

4. Apa hal yang perlu diperhatikan dalam analisis LC-MS/MS untuk anabolic agents?
Jawab: For anabolic agents, chromatographic peaks for the calibrator and positive
urine control corresponding to 3 ¢-hydroxystanozolol, 16 β-hydroxystanozolol,
gestrinone, epitrenbolone, clenbuterol, and tetrahydrogestrinone must be identi fi
 able for all monitored diagnostic ions, and the ratio of the peak heights of the most
abundant ion to that of 17 α-methyltestosterone should be in excess of 0.1, 0.03, 1.0,
0.3, 0.2, and 10.0, respectively. Alternatively, the peak heights for the most abundant
transitions should be in excess of 20,000, 3,000, 10,000, 50,000, 3,000, and 100,000,
respectively (see Note 7). For anabolic agents, only metabolites can be detected in
the urine for many of the compounds (see Note 8). (note 7 and 8 can be seen in:
10.1007/978-1-61779-934-1_10)

Untuk agen anabolik, puncak kromatografi untuk kalibrator dan kontrol urin positif
sesuai dengan 3 ¢-hidroksistanozolol, 16 β-hidroksistanozolol, gestrinon,
epitrenbolon, klenbuterol, dan tetrahidrogestrinon harus dapat diidentifikasi untuk
semua ion diagnostik yang dipantau, dan rasio puncak ketinggian ion yang paling
melimpah dengan 17 α-methyltestosterone harus lebih dari 0,1, 0,03, 1,0, 0,3, 0,2,
dan 10,0, masing-masing. Sebagai alternatif, ketinggian puncak untuk transisi yang
paling melimpah harus lebih dari 20.000, 3.000, 10.000, 50.000, 3.000, dan 100.000,
masing-masing (lihat Catatan 7). Untuk agen anabolik, hanya metabolit yang dapat
dideteksi dalam urin untuk banyak senyawa (lihat Catatan 8).

List of links that we highly recommend you to open:

For further explanation, please check out these articles:

https://drive.google.com/drive/folders/1grS4B7nbc-Ibd4jNeO5SaaGXCiDfKOqw?
usp=share_link

Open this website to check out the list of prohibited substances by WADA:

https://www.wada-ama.org/en/prohibited-list

Also, you can watch this youtube video (it only takes 28.30 min of ur time 😉):

https://youtu.be/RhN_tjXwQcE