Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

(2020) 16:204
Fadldkk. Penelitian Kedokteran Hewan BMC https://
doi.org/10.1186/s12917-020-02423-2

ARTIKEL PENELITIAN Akses terbuka

Dampak suplementasi makanan Mannan-

oligosakarida dan β-Glukan terhadap
pertumbuhan, histopatologi, kolonisasi E-coli
dan transkrip hati penyakitTNF-αDanNF- ϰB
ayam pedaging ditantang denganE.coliHAI78
Sabreen Ezzat Fadl1*, Ghada Ahmed El-Gammal2, Osama Atia Sakr3, Aly ABS Salah4, Ayman Ali Atia5, Pangeran
Abdelbary Mohammed6dan Abdelhaleem Mohamed Hegazy7

Abstrak
Latar belakang:Penggunaan probiotik telah menjadi populer. Mereka dianggap sebagai alternatif dari Antibiotic Growth
Promoters (AGP). Probiotik ditambahkan ke dalam pakan ternak untuk meningkatkan kinerja pertumbuhan serta
mencegah dan mengendalikan patogen enterik. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mempelajari dampak suplementasi
makanan Mannan-oligosakarida dan β-Glucan (Agrimos®) pada ayam pedaging yang tertantang penyakit ini.Escherichia
coli HAI78(E.coliHAI78- ditandai dengan antibiotik (320 μg ciprofloxacin/ml kaldu) pada kinerja pertumbuhan, biokimia
serum, organ kekebalan-histopatologi,E-colikolonisasi, dan transkrip hati dari Tumor necrosis factoralpha (TNF-α) dan
Nuclear factor-kappa B (NF-ϰB). Sebanyak 125 anak ayam berumur satu hari digunakan untuk melakukan percobaan. Lima
ekor anak ayam berumur satu hari disembelih untuk diukur berat awal jaringan limfoidnya. Anak ayam yang tersisa (120)
dibagi menjadi empat kelompok menurut suplementasi Mannan-oligosakarida dan β-Glucan, danE.coliinfeksi. Data
dianalisis menggunakan SPSS versi 16.
Hasil:Hasil menunjukkan perubahan signifikan pada kinerja pertumbuhan, biokimia serum, dan ekspresi gen
hati terpilih dengan lesi patologis, terutama pada organ limfoid akibatE.coliinfeksi. Perubahan ini diatasi
dengan suplementasi Mannan-oligosakarida dan β-Glucan.
Kesimpulan:Dapat disimpulkan bahwa suplementasi Mannan-oligosakarida dan β-Glukan pada pakan ayam broiler
meningkatkan respon imun ayam broiler dan mengurangi lesi patologis akibat penyakit tersebut.E.coliinfeksi.

Kata kunci:Antioksidan, Ekspresi gen, Kinerja pertumbuhan, Histopatologi, Imunostimulan, Agrimos

* Korespondensi:nourmallak@yahoo.com
1Departemen Biokimia, Fakultas Kedokteran Hewan – Universitas
Matrouh, Matrouh, Mesir
Daftar lengkap informasi penulis tersedia di akhir artikel

© Penulis. 2020Akses terbukaArtikel ini dilisensikan di bawah Lisensi Internasional Creative Commons Atribusi 4.0, yang mengizinkan
penggunaan, berbagi, adaptasi, distribusi, dan reproduksi dalam media atau format apa pun, selama Anda memberikan kredit yang sesuai
kepada penulis asli dan sumbernya, berikan a tautan ke lisensi Creative Commons, dan tunjukkan jika ada perubahan. Gambar atau materi pihak
ketiga lainnya dalam artikel ini termasuk dalam lisensi Creative Commons artikel tersebut, kecuali dinyatakan lain dalam batas kredit materi
tersebut. Jika materi tidak termasuk dalam lisensi Creative Commons artikel dan tujuan penggunaan Anda tidak diizinkan oleh peraturan
perundang-undangan atau melebihi penggunaan yang diizinkan, Anda harus mendapatkan izin langsung dari pemegang hak cipta. Untuk
melihat salinan lisensi ini, kunjungihttp://creativecommons.org/licenses/by/4.0/. Pengabaian Dedikasi Domain Publik Creative Commons (http://
creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) berlaku untuk data yang tersedia dalam artikel ini, kecuali dinyatakan lain dalam batas kredit
pada data tersebut.
Fadldkk. Penelitian Kedokteran Hewan BMC (2020) 16:204
Latar belakang
Meningkatnya permintaan protein hewani di seluruh dunia
menyebabkan kesenjangan, sehingga mencari penggerak
pertumbuhan untuk mengkompensasi kesenjangan ini. Ada
banyak pemacu pertumbuhan sebagai pemacu pertumbuhan
antibiotik (AGP). AGP banyak digunakan untuk mencegah
penyakit unggas melalui pencegahan patogen dan
meningkatkan kinerja pertumbuhan. Namun penggunaan
AGP dalam makanan unggas dapat menyebabkan masalah
serius seperti patogen yang resisten terhadap antibiotik dan
residu obat [1]. Juga, Tayeri dkk. [2] melaporkan penggunaan
rutin antibiotik (flavomisin) meningkatkan Enterococci. Oleh
karena itu, pencarian alternatif pengganti antibiotik sangatlah
mendesak. Prebiotik digunakan sebagai salah satu alternatif
pengganti antibiotik pemacu pertumbuhan.3]. Prebiotik
adalah komponen pakan yang tidak dapat dicerna yang
berasal dari gula, termasuk rafinosa, galaktooligosakarida,
dan β-glukan.4]. Mereka mencegah penyakit enterik dan
meningkatkan kinerja unggas. Prebiotik telah terbukti
mengubah sistem kekebalan tubuh, memodifikasi mikroflora
gastrointestinal, dan mengurangi invasi patogen seperti
Salmonella spp.DanE.coli [5].Fungsi utama prebiotik adalah
mengaktifkan metabolisme beberapa kelompok bakteri
menguntungkan di saluran usus dan/atau merangsang
pertumbuhannya. Pelicano dkk. [6], Musim semi dkk. [7],dan
Xu dkk. [8] telah menunjukkan bahwa penambahan prebiotik
ke dalam makanan ayam pedaging menghasilkan
peningkatan mikroflora usus dan juga pertumbuhannya.
Komposisi mikroflora usus berperan penting dalam
pencernaan, yang dapat dilakukan secara positif, negatif, atau
netral. Modifikasi mikroflora gastrointestinal mengurangi
perlekatan patogen dan mungkin memiliki efek
menguntungkan pada kecernaan nutrisi [9].Pemberian
agrimos® (Mannan-oligosakarida (MOS), dan β-Glucans), yang
diperoleh dari strain tertentuSaccharomyces cerevisiaedinding
sel ditemukan untuk meningkatkan kinerja produktif dan
fungsi kekebalan pada ayam broiler [10]. Juga, Wang dkk. [1]
dan Dawood dkk. [11] melaporkan efek antioksidan Mannan-
oligosakarida pada ayam pedaging dan ikan air tawar merah.
Oleh karena itu, penelitian ini dilakukan untuk menguji efek
agrimos® (MOS dan β-Glucans) terhadap pertumbuhan, imunitas,
biokimia serum, histopatologi, ekspresi gen hati terpilih, dan
kolonisasi tanaman.E.colipada ayam pedaging.
Tabel 1Angka kematian ayam broiler yang terinfeksiE.colidan memakan agrimos®pada 35 hari (n =30)
Grup Kontrol tidak terinfeksi Kendalikan yang terinfeksi
Parameter
Jumlah Jumlah. 30 30
Nomor Mati. 1 2
Bertahan hidup % 96,67 93.33
% Kematian 3.33 6.67
Halaman 2 dari 14
Hasil
Tanda-tanda klinis dan lesi postmortem (PM).E.coli
infeksi
Infeksi eksperimental denganE.colimengungkapkan tanda-tanda
klinis sugestif dan lesi PM setelah 48 jam. pasca infeksi berupa
depresi disertai diare berwarna keputihan.
Lesi PM menunjukkan pembesaran hati dan kongesti serta
distensi kandung empedu dan sekum. Perubahan tersebut
kurang menonjol pada kelompok yang terinfeksi agrimos
(lihat Tabel1).
Kinerja pertumbuhan
Pakan yang ditambah dengan agrimos® pada kelompok
ketiga dan keempat secara signifikan (P≤0,05) meningkatkan
berat badan (BB) dan pertambahan total selama seluruh
percobaan, dan meningkatkan rasio konversi pakan (FCR)
dibandingkan dengan kelompok lain (lihat Tabel2). Di sisi lain,
parameter yang disebutkan di atas mengalami penurunan
yang signifikan (P≤0,05) pada kelompok yang terinfeksi
dibandingkan dengan kelompok lain.
Parameter serum berhubungan dengan fungsi hati
Di meja3), ada yang signifikan (P≤0,05) peningkatan
aktivitas enzim alanine transaminase (ALT) dan aspartate
aminotransferase (AST) pada kelompok ayam broiler yang
diinfeksiE.colidibandingkan dengan kelompok kontrol
yang tidak terinfeksi. Namun, total protein serum dan
albumin secara signifikan (P≤0,05) menurun. Suplementasi
Agrimos® tidak mempengaruhi ALT, AST, dan albumin
serum, namun total protein serum dan globulin
berpengaruh secara signifikan (P≤0,05) bila dibandingkan
dengan kelompok kontrol tidak terinfeksi.
Aktivitas enzim antioksidan serum
Tingkat MDA serum secara signifikan (P≤0,05) meningkat
pada ayam broiler yang terinfeksiE.coli (lihat Tabel4).
Namun, aktivitas serum katalase (CAT) dan superoksida
dismutase (SOD) secara signifikan (P≤0,05) berkurang
dibandingkan kelompok lainnya. Suplementasi Agrimos®
secara signifikan (P≤0,05) menurunkan peroksidasi lipid
serum (MDA) dengan signifikan (P≤0,05) peningkatan CAT
dan SOD serum bila dibandingkan dengan kelompok
kontrol yang terinfeksi.
Agrimos® tidak terinfeksi Agrimos® terinfeksi
30 30
0 1
100 96,67
0 3.33
Fadldkk. Penelitian Kedokteran Hewan BMC (2020) 16:204 Halaman 3 dari 14

Meja 2Kinerja pertumbuhan ayam broiler yang terinfeksiE.colidan memakan agrimos®pada 35 hari (n =30)
Grup Kontrol tidak terinfeksi Kendalikan yang terinfeksi Agrimos® tidak terinfeksi Agrimos® terinfeksi
Parameter

Bobot awal (g/ekor) Bobot 45,33 ± 0,88A 45 ± 1,00A 45,67 ± 0,88A 45,67 ± 1,20A

akhir (g/ekor) Pertambahan 1544,33 ± 1,76B 1358,67 ± 2,03C 1736,33 ± 2,33A 1547,00±1,73B

bobot total (g/ekor) Nilai 1499 ± 1,53B 1313,67 ± 2,19C 1690,67 ± 1,45A 1501,33 ± 0,67B

FCR 1,67 ± 0,005B 1,87 ± 0,006A 1,54 ± 0,003C 1,66 ± 0,003B

Nilai dinyatakan sebagai rata-rata ± kesalahan standar. Berarti pada baris yang sama (ac) dengan huruf yang berbeda berbeda nyata pada (P≤0,05)

Respon imun terhadap penyakit Newcastle (ND)
Respon imun terhadap vaksinasi ND yang dinilai dengan titer
Hemagglutination Inhibition (HI) menunjukkan adanya
perbedaan log2 GM. Terdapat perbedaan titer HI yang
signifikan pada minggu kedua setelah infeksi antar masing-
masingE.colikelompok tertular dan kelompok kontrol negatif,
serta kelompok tertular agrimos. Selain itu, kelompok agrimos
berbeda nyata dibandingkan ketiga kelompok lainnya.
Setelah vaksinasi pada minggu kedua dan ketiga, pola ini
terlihat dimana tidak ada perbedaan yang tercatat di antara
masing-masing vaksinasiE.colikelompok tertular, kontrol tidak
tertular, dan kelompok tertular agrimos. Selain itu, kelompok
agrimos berbeda secara signifikan dibandingkan ketiga kelompok
lainnya (lihat Tabel5).
KolonisasiE.coli
KolonisasiE.colipada kelompok kontrol yang terinfeksi pada
organ berbeda menunjukkan angka masing-masing sebesar
67, 44, 22, 44, dan 53% pada saluran pernapasan, hati,
kandung empedu, limpa, dan usap tinja (lihat Tabel6). Namun,
pada kelompok yang terinfeksi agrimos, terjadi kolonisasi
E.colidi berbagai organ menunjukkan penurunan angka sebesar 22,
33, 22, 11, dan 33% masing-masing di saluran pernapasan,
hati, kandung empedu, limpa, dan usap tinja.
Beratnya organ kekebalan tubuh
Pada usia nol, 15, dan 35 hari, berat organ kekebalan
versus berat badan dievaluasi (lihat Tabel7dan Gambar.1).
Pada hari ke 15 dan 35, hasil berat timus menunjukkan
peningkatan yang signifikan (P≤0,05) pada kelompok
agrimos tidak terinfeksi dan terinfeksi dibandingkan
dengan kelompok lainnya. Namun, ada sebuah
penurunan yang signifikan (P≤0,05) pada kelompok kontrol terinfeksi
dibandingkan dengan kelompok kontrol tidak terinfeksi.
Hasil limpa pada hari ke 15 menunjukkan adanya peningkatan yang
signifikan (P≤0,05) pada kelompok tertular agrimos dibandingkan
kelompok lainnya. Selain itu, terjadi peningkatan yang signifikan (P≤
0,05) pada kelompok agrimos tidak terinfeksi dibandingkan dengan
kelompok kontrol tidak terinfeksi dan terinfeksi. Namun, pada hari ke
35, kelompok agrimos yang tidak terinfeksi mengalami peningkatan
berat limpa yang signifikan. (P≤0,05) dibandingkan kelompok lainnya.
Selain itu, kelompok kontrol yang terinfeksi mengalami peningkatan
yang signifikan (P≤0,05) dibandingkan kelompok kontrol tidak
terinfeksi pada hari ke 15 namun terjadi penurunan yang signifikan (P≤
0,05) pada hari ke 35.
Berat bursa meningkat secara signifikan (P≤ 0,05) pada
kelompok agrimos tidak terinfeksi dibandingkan kelompok
lain, namun mengalami penurunan yang signifikan (P≤ 0,05)
pada kelompok kontrol terinfeksi dibandingkan kelompok
lainnya pada hari ke 15 dan 35.
Berat timus dan bursa pada kelompok kontrol yang tidak terinfeksi
secara signifikan (P≤0,05) menurun, namun berat limpa meningkat
secara signifikan (P≤0,05) meningkat. Kelompok yang terinfeksi kontrol
menunjukkan peningkatan yang signifikan (P≤0,05) peningkatan bobot
timus, limpa, dan bursa pada hari ke 15, kemudian menunjukkan
peningkatan yang signifikan (P≤0,05) penurunan pada hari ke 35.
Kelompok agrimos tidak terinfeksi dan terinfeksi menunjukkan
penurunan yang signifikan (P≤0,05) peningkatan bobot limpa dan
bursa pada hari ke 15 dan 35 namun menunjukkan peningkatan yang
signifikan (P≤0,05) peningkatan berat timus pada hari ke 15 saja, yang
kembali ke ukuran normal pada hari ke 35.
Temuan patologis ayam broiler
Pemeriksaan histopatologi limpa, bursa, timus, hati,
dan duodenum ayam kontrol

Tabel 3Fungsi hati serum ayam broiler yang terinfeksiE.colidan memakan agrimos®pada 35 hari (n =5)
Grup Kontrol tidak terinfeksi Kendalikan yang terinfeksi Agrimos® tidak terinfeksi Agrimos® terinfeksi
Parameter

ALT (u/l) 19,33 ± 0,88B 26,33 ± 0,88A 18,67 ± 0,88B 20,67 ± 0,67B

AST (u/l) 53,33 ± 1,76B 92,67 ± 0,88A 51,33 ± 0,88B 52,67 ± 1,45B

Jumlah protein (g/dl) 2,27 ± 0,08B 1,9 ± 0,06C 2,9 ± 0,12A 2,7 ± 0,11A

Albumin (g/dl) 1,20 ± 0,02A 0,47 ± 0,05B 1,24 ± 0,03A 1,21 ± 0,01A

Globulin (g/dl) 1,06 ± 0,09B 1,43 ± 0,01A 1,66 ± 0,12A 1,49 ± 0,11A

Nilai dinyatakan sebagai rata-rata ± kesalahan standar. Berarti pada baris yang sama (ac) dengan huruf yang berbeda berbeda nyata pada (P≤0,05)
Fadldkk. Penelitian Kedokteran Hewan BMC (2020) 16:204 Halaman 4 dari 14

Tabel 4Antioksidan serum ayam broiler yang terinfeksiE.colidan memakan agrimos®pada 35 hari (n =5)
Grup Kontrol tidak terinfeksi Kendalikan yang terinfeksi Agrimos® tidak terinfeksi Agrimos® terinfeksi
Parameter

MDA (n.mol/l) 0,65 ± 0,02C 1,17 ± 0,08A 0,65 ± 0,01C 0,8 ± 0,03B

KUCING (u/ml) 12,7 ± 0,01B 9,73 ± 0,15C 15,36 ± 0,13A 13,03 ± 0,09B

SOD (u/ml) 12,18 ± 0,0C 9,37 ± 0,0D 17,2 ± 0,89A 15,0 ± 0,0B

Nilai dinyatakan sebagai rata-rata ± kesalahan standar. Berarti pada baris yang sama (ac) dengan huruf yang berbeda berbeda nyata pada (P≤0,05)

kelompok tidak terinfeksi (pada hari ke 15 dan 35 setelah
infeksi), tidak menunjukkan perubahan histopatologis yang
jelas (lihat Gambar.2a dan b). Mengenai kelompok kontrol
yang terinfeksi (pada hari ke 15), bursa menunjukkan tingkat
hiperplasia epitel, degenerasi, dan ulserasi yang bervariasi
dalam beberapa kasus. Perubahan ini dikaitkan dengan
proliferasi jaringan fibrosa subkortikal dalam beberapa kasus
(lihat Gambar.2c, d, dan e). Timus kelompok ini menunjukkan
penyempitan lebar kortikal dan peningkatan medula dalam
banyak kasus. Beberapa kasus lain memiliki tampilan area
bening atau lubang yang berisi inti kecil berwarna gelap (ciri
khas apoptosis pada organ limfoid), (lihat Gambar. 2F). Tidak
ada perubahan mikroskopis yang terdeteksi pada limpa
kelompok ini. Mengenai kelompok kontrol yang terinfeksi
(pada hari ke-35), perubahan serupa terlihat pada hari ke-15,
tetapi lebih banyak lubang yang terdeteksi di timus. Juga, area
fokus agregasi sel bulat terlihat pada hati kelompok ini (lihat
Gambar.3A). Duodenum kelompok ini menunjukkan
hiperplasia pada sel epitel yang melapisi vili usus disertai
vakuolasi (lihat Gambar.3B).
Pemeriksaan histopatologi bursa Fabricius pada sebagian besar
kasus pada kelompok agrimos tidak terinfeksi pada hari ke 15 (4
dari 5), menunjukkan lipatan normal (plica) yang normal (lihat
Gambar.3C). Beberapa dari kasus ini menunjukkan pusat germinal
yang sangat melebar dan korteks yang sempit, berhubungan
dengan lobulasi epitel tingkat ringan. Satu kasus menunjukkan
penipisan limfositik folikular. Perubahan histopatologi serupa
terlihat pada bursa Fabricius pada kelompok agrimos yang tidak
terinfeksi pada hari ke 35. Satu kasus menunjukkan pori-pori di
dalam korteks banyak plicae (lihat Gambar. 3d), dan ini dikaitkan
dengan edema interfollicular. Mengenai kelenjar timus pada
kedua waktu (hari ke 15 dan
35), tidak ada perubahan histopatologis yang jelas terlihat
pada lobus timus kecuali pada beberapa kasus (2 dari 10),
yang menunjukkan pembentukan trombus dalam pembuluh
darah timus (lihat Gambar.3e). Mengenai tonsil sekum
kelompok agrimos yang tidak terinfeksi pada hari ke 15 dan
35, hanya pengelupasan epitel yang terlihat pada beberapa
kasus (lihat Gambar.3f), dan tidak ada perubahan
histopatologis yang jelas terlihat pada nodul limfoid (agregasi
limfoid), (lihat Gambar.4A). Dua kasus (dari 10) menunjukkan
kista nekrotik (lihat Gambar.4B). Tidak ada perubahan
mikroskopis yang jelas terlihat pada limpa kelompok ini (lihat
Gambar.4C). Pemeriksaan mikroskopis hati kelompok ini
menunjukkan area fokus ringan dari agregasi sel bulat (lihat
Gambar.4d) dalam dua kasus (dari 10).
Pemeriksaan histopatologi bursa Fabricius pada sebagian
besar kasus pada kelompok terinfeksi agrimos pada hari ke 15
dan 35 setelah infeksi (2 dari 4), menunjukkan gambaran
morfologi normal namun 2 kasus menunjukkan edema
interfollicular (lihat Gambar.4e) dan hiperplasia dan lipatan
epitel yang berhubungan dengan aktivasi sel mukosa (piala).
Mengenai kelenjar timus pada kedua waktu (hari ke 15 dan
35), tidak ada perubahan histopatologis yang jelas terlihat
pada lobus timus kecuali dalam beberapa kasus (1 dari 4),
yang menunjukkan area fokus nekrosis dan hialinisasi (lihat
Gambar.4F). Tidak ada perubahan mikroskopis yang jelas
terlihat pada limpa kelompok ini (lihat Tabel8Dan9).
Ekspresi gen berhubungan denganE.coliinfeksi dan
suplementasi Agrimos
Hasil Q-PCR menunjukkan bahwa tingkat ekspresi
faktor kappa nuklir (NF) dan faktor nekrosis tumor-

Tabel 5Titer HI untuk ND pada periode yang berbeda (n =5)

Grup Kendalikan yang terinfeksi Kontrol tidak terinfeksi Agrimos® terinfeksi Agrimos® tidak terinfeksi
Usia
0 hari 4,6 ± 0,07B 4,8 ± 0,06B 4,8 ± 0,06B 5,2 ± 0,06A
CV = 11,6% CV = 9,03% CV = 9,3% CV = 8,3%

minggu pertama hal. ay 5,2 ± 0,06C 5,6 ± 0,7B 5,6 ± 0,07B 6,2 ± 0,06A
CV = 8,6% CV = 9,5% CV = 9,5% CV = 7,2%

minggu ke-2 P.v 6 ± 0,09B 6,2 ± 0,11B 6,2 ± 0,06B 7 ± 0,09A

CV = 11,5 CV = 13.4 CV = 6,9% CV = 10%

minggu ke-3 P.v 4,95 ± 0,09B 4,6 ± 0,24B 4,8 ± 0,06B 6 ± 0,09A
CV = 14,5% CV = 11,6% CV = 9% CV = 11,7%

Rata-rata log2GM ± SEM 5,19 ± 0,3B 5,3 ± 0,37B 5,35 ± 0,34B 6,1 ± 0,37A
Tidak ada perbedaan antara item yang membawa huruf yang sama pada baris
yang sama GMRata-rata geometris,CVKoefisien variasi,P. ayPasca vaksinasi
Fadldkk. Penelitian Kedokteran Hewan BMC (2020) 16:204 Halaman 5 dari 14

Tabel 6KolonisasiE.colidan tingkat pelepasan yang dinilai
dari kolonisasi usus (n =5)
RT usap Hati G. kandung kemih Limpa Usap tinja
+T%+T%+T%+T%+T%
E.coli 6 9 67 4 9 44 2 9 22 4 9 44 8 15 53
E.coli +AA2 9 22 3 9 33 2 9 22 1 9 11 5 15 33
usap RTUsap saluran pernapasanAE.coli +SEBUAH =E.coli + Agrimos®
gen alpha (TNF) dari jaringan hati secara signifikan (P≥
0,05) meningkat pada kelompok yang tertularE.coli (Ara.5)
dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif.
Pada kelompok agrimos yang tidak terinfeksi, ekspresi gen
NF dan TNF pada jaringan hati tidak menunjukkan perbedaan
yang signifikan dibandingkan dengan kelompok kontrol yang
tidak terinfeksi. Tingkat gen tersebut serupa dengan tingkat
kelompok kontrol yang tidak terinfeksi.
Ditemukan bahwa tingkat ekspresi NF dan TNF
signifikan (P≥0,05) berkurang akibat suplementasi
agrimos® bila dibandingkan dengan kelompok
terinfeksi tanpa suplementasi. Hal ini menunjukkan
efek perlindungan dari suplementasi agrimos®
terhadap ekspresi gen anak ayam broiler yang
terinfeksi yang disebutkan di atas.
Diskusi
Dalam penelitian ini, kelompok kontrol terinfeksiE.coli
menunjukkan tanda-tanda klinis yang bervariasi sesuai
dengan usia mereka, organ yang terlibat, dan kondisi penyakit
yang terjadi bersamaan. Hasil gejala klinis padaE.colikelompok
yang terinfeksi (bahkan pada kelompok yang diobati) serupa
dengan hasil Remus dkk. [12] yang mencatat kerusakan hati
parah terjadi pada kasusE.coliinfeksi. Namun, suplementasi
makanan dari agrimos®mengurangi tanda-tanda klinis dan
lesi PM. Hasil ini konsisten dengan Sohail dkk. [13]. Sebaliknya,
hasil kinerja pertumbuhan pada kelompok kontrol yang
terinfeksi menunjukkan perlambatan yang signifikan.
Keterbelakangan ini mungkin disebabkan olehE.coli infeksi.
Hasil ini sesuai dengan Manafi dkk.
[14].Sementara itu, Agrimos®suplementasi makanan secara
signifikan meningkatkan kinerja pertumbuhan, yang mungkin
disebabkan oleh peningkatan kecernaan dan asupan pakan
juga. Jahanian dan Ashnagar [15] melaporkan bahwa
suplementasi MOS dalam makanan meningkatkan koefisien
kecernaan bahan kering dan protein kasar. Hasil ini selaras
dengan hasil El-Far dkk. [16] dan Mousa dkk. [17] masing-
masing pada ayam pedaging dan puyuh jepang.
Hasil parameter biokimia menunjukkan peningkatan yang
signifikan pada aktivitas AST dan ALT serum, serta konsentrasi
globulin, sedangkan total protein serum dan albumin
menurun secara signifikan pada kelompok kontrol yang
terinfeksi. Hasil ini setuju dengan Manafi et al. [14], yang
melaporkan hasil yang sama ketika burung ditantangE.coli.
Hasil ini mungkin disebabkan olehE.coliinfeksi. PatogenE.coli
Infeksi pada ayam pedaging menyebabkan infeksi lokal atau
sistemik (colibacillosis). Colibacillosis adalah penyakit menular
yang ditandai dengan septikemia fatal akut atau perikarditis
fibrinosa subakut, airsacculitis, salpingitis, dan peritonitis [18].
Dalam penelitian ini,E.coliterjadi infeksi colibacillosis yang
ditandai dengan hasilE.colikolonisasi dan peningkatan
parameter biokimia serum. Selain itu, Sharma dkk. [19]
melaporkan bahwa peningkatan aktivitas serum ALT
merupakan indikasi cedera seluler pada hepatosit dan juga
AST pada otot jantung dan hepatosit. Di sisi lain,
hipoproteinemia mungkin disebabkan oleh kerusakan
hepatosit, yang mengakibatkan kegagalan sintesis protein
plasma, dimana hati merupakan tempat sintesis albumin.
Selain itu, hipoproteinemia mungkin disebabkan oleh penyakit
ginjal, yang menyebabkan hilangnya protein dan gagal
jantung kongestif [19,20]. Pada saat yang sama,
hiperglobulinemia dikaitkan dengan sirosis hati, hepatitis, dan
proliferasi sel Kuffer [19]. Namun, suplementasi makanan dari
agrimos®tidak mempengaruhi aktivitas AST dan ALT serum
serta konsentrasi albumin tetapi secara signifikan
meningkatkan total protein dan globulin serum. Hasil di atas
sesuai dengan hasil Mousa dkk. [17]. Sementara itu,
Yalçinkaya dkk. [21] menemukan penurunan yang signifikan
pada

Tabel 7Berat organ imun ayam broiler umur 35 hari (n =5)

Organ Perawatan dan usia

C- C+ A- SEBUAH+

Nol hari Pada 15 hari Pada 35 hari Hari nol Pada 15 hari Pada 35 hari Nol hari Pada 15 hari Pada 35 hari Nol hari Pada 15 hari Pada 35 hari

T/BW 0,287 0,59 0,134 0,287 0,377 0,069 0,287 0,65 0,282 0,287 0,627 0,276
± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±
0,033Y 0,012bX 0,008BZ 0,033Y 0,013cX 0,006CZ 0,033Y 0,006kapak 0,012AY 0,033Y 0,009kapak 0,011AY

S/BW 0,036 0,046 0,132 0,036 0,094 0,056 0,036 0,11 0,229 0,036 0,127 0,159
± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±
0,007Y 0,003dY 0,011BX 0,007Z 0,004cX 0,006CY 0,007Z 0,006oleh 0,009KAPAK 0,007Z 0,003ay 0,005BX

B/BW 0,157 0,329 0,121 0,157 0,259 0,064 0,157 0,394 0,355 0,157 0,338 0,317
± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±
0,024Y 0,003bX 0,004CY 0,024Y 0,01cX 0,006DZ 0,024Y 0,003kapak 0,014KAPAK 0,024Y 0,017bX 0,013BX
Nilai dinyatakan sebagai rata-rata ± kesalahan standar. Berarti pada baris yang sama (ad), (AC) dan (XZ) dengan huruf yang berbeda berbeda nyata pada (P≤0,05) T
timusBWBerat badan,SLimpa,BBursa
Fadldkk. Penelitian Kedokteran Hewan BMC (2020) 16:204 Halaman 6 dari 14

Gambar 1Timus ayam umur satu hari (A1). Timus kelompok kontrol tidak terinfeksi pada hari ke 35 (A2). Timus kelompok kontrol yang terinfeksi pada hari ke 35 (A3).
Timus kelompok tidak terinfeksi agrimos pada hari ke 35 (A4). Timus kelompok terinfeksi agrimos pada hari ke 35 (A5). Bursa ayam umur satu hari (B1). Bursa
kelompok kontrol tidak terinfeksi pada hari ke 35 (B2). Bursa kelompok kontrol terinfeksi pada hari ke 35 (B3). Bursa kelompok tidak terinfeksi agrimos pada hari ke 35
(B4). Bursa kelompok terinfeksi agrimos pada hari ke 35 (B5). Limpa ayam umur satu hari (C 1). Limpa kelompok kontrol tidak terinfeksi pada hari ke 35 (C 2). Limpa
kelompok kontrol yang terinfeksi pada hari ke 35 (C 3). Limpa kelompok agrimos tidak terinfeksi pada hari ke 35 (C 4). Limpa kelompok terinfeksi agrimos pada hari ke
35 (C 5)

kegiatan AST dan ALT. Hasil penelitian ini tidak sesuai
dengan Rokade et al. [22], yang menemukan
peningkatan signifikan dalam aktivitas serum AST dan
ALT, dan konsentrasi protein pada pakan ayam
pedaging yang diberi suplemen MOS. Hasil ini mungkin
disebabkan oleh sifat antioksidan MOS, yang
dilaporkan oleh Dawood et al. [11]. Di sisi lain, hasil
enzim antioksidan dan MDA selaras dengan hasil Zhou
et al. [23] menemukan penurunan enzim antioksidan
yang signifikan pada burung yang terinfeksi enteritis
nekrotik. Hasil ini mungkin disebabkan oleh infeksi,
yang sebelumnya dilaporkan oleh Mishra B, Jha [24]. Di
sisi lain, Abudabos dkk. [25] melaporkan hal itu
Salmonella tipimuriumtidak berdampak pada
kapasitas antioksidan total atau stres oksidatif pada ayam
pedaging yang ditantang. Namun, agrimos®suplementasi
secara signifikan menurunkan MDA serum dan meningkatkan
CAT. Hasil ini sesuai dengan hasil El-Kader dkk. [26] pada ayam
pedaging.
Penurunan titer HI padaE.colikelompok yang terinfeksi
mungkin disebabkan oleh stres akibat infeksi dan diare,
yang dapat mengubah keseimbangan asam-basa [27].
Selain itu, peningkatan titer HI akibat nutrisi agrimos®
tampaknya tidak signifikan. Hal ini mungkin disebabkan
oleh fakta bahwa agrimos® cenderung memicu imunitas
nonspesifik dibandingkan imunitas humoral [28]. MOS
makanan merangsang respon imun humoral terhadap
penyakit bursal menular (IBDV) dan Newcastle
Fadldkk. Penelitian Kedokteran Hewan BMC (2020) 16:204 Halaman 7 dari 14

Gambar 2A.menunjukkan bursa Fabricius yang normal. Kendalikan anak ayam umur satu hari yang negatif.B.menunjukkan timus normal. Kendalikan anak ayam umur satu hari yang negatif.

C.bursaFabricius menunjukkan derajat hiperplasia epitel yang bervariasi (panah a) dan ulserasi (panah b). Kendalikan kelompok yang terinfeksi pada 15 hari pasca
infeksi.D.Bursa Fabricius menunjukkan derajat hiperplasia epitel yang bervariasi (panah a) terkait dengan degenerasi dan ulserasi (panah b). Kendalikan kelompok
yang terinfeksi pada 15 hari pasca infeksi.e.Bursa Fabricius menunjukkan derajat hiperplasia epitel yang bervariasi terkait dengan degenerasi dan proliferasi
jaringan fibrosa subkortikal. Kendalikan kelompok yang terinfeksi pada 15 hari pasca infeksi.F.Timus menunjukkan banyak lubang di korteks dan medula. Kendalikan
kelompok yang terinfeksi pada 15 hari pasca infeksi. DIA. a dan b X 100 Gambar lainnya. X 200

virus vaksin penyakit (NDV) [29]. Mengenai hasil
E.colikolonisasi, semakin tinggi tingkat kolonisasiE.coli
di berbagai organ kontrol kelompok yang terinfeksi
berada di saluran pernapasan, usap tinja, hati, dan
limpa, tempat patogen unggasE.colimenyebabkan
penyakit pernapasan dan sistemik yang parah pada
unggas [30]. Hasil ini selaras dengan penelitian Manafi
dkk. [14]. Namun kolonisasi ini dikurangi oleh agrimos
®suplementasi makanan, yang didukung oleh hasil
Sohail et al. [13].
Bursa kloaka memainkan peran penting dalam sistem
kekebalan unggas. Selain itu, berat bursal mencerminkan
respon anatomi terhadap status kekebalan pada ayam
pedaging [14]. Dalam penelitian ini, terdapat penurunan berat
timus dan bursa secara signifikan dibandingkan berat badan
pada kelompok kontrol yang terinfeksi, yang didukung oleh
Gottardo dkk. [31]. Namun, hasil ini memang benar adanya
tidak sesuai dengan yang diperoleh Manafi et al. [14].
Selain itu, berat limpa versus berat badan pada kelompok
kontrol yang terinfeksi meningkat secara signifikan pada
hari ke 15 kemudian menurun pada hari ke 35. Hasil ini
mungkin disebabkan oleh infeksi, yang didukung oleh
hasil Huff dkk. [32] pada kalkun. Di sisi lain, terjadi
peningkatan signifikan pada bobot timus, limpa, dan bursa
dibandingkan bobot badan pada agrimos.®kelompok.
Hasil ini selaras dengan hasil Sohail dkk. [13].
Kerusakan organ limfoid mengurangi resistensi terhadap
infeksi bakteri, virus, parasit, dan jamur. Dengan demikian
unggas menjadi lebih rentan terhadap infeksi lain, sehingga
menyebabkan kerugian ekonomi yang tinggi akibat kesakitan
dan kematian [33]. Oleh karena itu, penilaian rasional
terhadap imunosupresi pada unggas memerlukan
pendekatan diagnostik yang cepat dan akurat. Dengan
demikian, penelitian ini berfokus pada patologi organ limfoid.
Fadldkk. Penelitian Kedokteran Hewan BMC (2020) 16:204 Halaman 8 dari 14

Gambar 3A.Hati menunjukkan area fokus agregasi sel bulat. Kontrol kelompok yang terinfeksi pada 35 hari pasca infeksi.B.Usus (duodenum) menunjukkan
hiperplasia epitel yang melapisi vili usus berhubungan dengan vakulasi. Kontrol kelompok yang terinfeksi pada 35 hari.C.bursaFabricius menunjukkan lipatan atipikal
normal. Agrimos®kelompok tidak terinfeksi pada 15 hari.D.Bursa Fabricius menunjukkan pori-pori di dalam korteks. Agrimos®kelompok tidak terinfeksi pada 35 hari.
e.Timus menunjukkan pembentukan trombus (panah). Agrimos®kelompok tidak terinfeksi pada 15-35 hari.F.Amandel sekum menunjukkan pengelupasan epitel
(panah). Agrimos®kelompok tidak terinfeksi pada 15-35 hari. DIA. X 200 untuk semua gambar kecuali c X 100

Perubahan patologis pada kelompok kontrol yang
terinfeksi adalah apoptosis pada organ limfoid dan area
fokus agregasi sel bulat di hati. Hasil ini selaras dengan
penelitian Kumar dkk. [34]. Sementara itu, pada limpa
terlihat adanya penipisan limfosit, area kongesti, dan
nekrosis limfosit pada pulpa putih. Selain itu, bursa
Fabricius menunjukkan penipisan limfoid pada folikel, dan
timus menunjukkan beberapa lesi seperti kongesti
meduler dan penipisan kortikal ringan.33]. Remus dkk. [12]
dilaporkanE.colimenyebabkan kerusakan hati dan epitel
yang parah. Namun, agrimos®suplementasi pada ayam
pedaging tidak menunjukkan perubahan patologis. Hasil
ini sesuai dengan hasil Awaad dkk. [10]. Selain itu, pada
kelompok yang terinfeksi, suplementasi agrimos®
mengurangi perubahan patologis yang disebabkan oleh
infeksi. Hasil ini mungkin disebabkan oleh komposisi
agrimos®,yang mengandung β-Glukan dan MOS.
Sitokin pro-inflamasi seperti faktor nuklir (NF) dan
faktor nekrosis tumor (TNF) yang dihasilkan selama
respons fase akut dapat menginduksi produksi
beberapa protein fase akut (APP) oleh hepatosit [35].
Dalam penelitian ini ditemukan bahwa agrimos®tidak
memiliki efek yang jelas terhadap tingkat ekspresi NF
atau TNF hati pada ayam broiler yang tidak terinfeksi.
Namun, penurunan aktivitas enzim hati dan penurunan
regulasi ekspresi gen NF dan TNF menunjukkan efek
perlindungan dan sifat anti-inflamasi dari agrimos.®
pada ayam broiler denganE.coliinfeksi. Hasil ini sesuai
dengan yang diperoleh Markazi [36] di dalam
Salmonellamenantang ayam pedaging.
Sebagian besar penelitian sebelumnya telah dilakukan pada
anak ayam yang sehat tanpa kondisi infeksi atau belum dapat
menjelaskan beberapa ekspresi gen di lokasi infeksi.E.coli
infeksi dianggap sebagai penyakit umum pada unggas
Fadldkk. Penelitian Kedokteran Hewan BMC (2020) 16:204 Halaman 9 dari 14

Gambar 4A.Amandel sekum menunjukkan agregasi limfoid normal (panah). Agrimos®kelompok tidak terinfeksi pada 15-35 hari.B.Amandel sekum menunjukkan
kista nekrotik (panah). Agrimos®kelompok tidak terinfeksi pada 15-35 hari.C.Limpa menunjukkan penampilan normal. Agrimos®kelompok tidak terinfeksi pada
15-35 hari.D.Hati menunjukkan area fokus ringan dari agregasi sel bulat (panah). Agrimos®kelompok tidak terinfeksi pada 15-35 hari.e.Bursa Fabricius menunjukkan
edema antar folikuler. Agrimos®kelompok yang terinfeksi pada 15 hari pasca infeksi.F.Timus menunjukkan banyak lubang kortikal di korteks dan medula (lubang ini
berisi badan apoptosis). Agrimos®kelompok yang terinfeksi pada 15 hari pasca infeksi. DIA. X 200 untuk semua gambar kecuali e X 100

produksi, yang dapat menyebabkan stres oksidatif dan Kepentingan sosial-ekonomi

inflamasi yang berbeda. Jadi, dalam penelitian ini,E.coli-
ayam yang diinokulasi digunakan untuk menyelidiki
efek agrimos®pada ayam sehat dan dalam kondisi
seperti itu.
Bersama dengan data TNF atau NF, agrimos®ternyata
dapat mengatur respon sitokin pada anak ayam broilerE.coli
infeksi, dan efek imunomodulatornya tampaknya bersifat
protektif dengan menekan peradangan yang sedang
berlangsung. Singkatnya, penurunan ekspresi TNF dan NF
jaringan hati di agrimos®memberi makan anak ayam broiler
denganE.coliInfeksi mungkin merupakan indikasi
melambatnya peradangan dan pemulihan bertahap status
kesehatan anak ayam broiler yang terinfeksi.
Kedokteran hewan memainkan peran penting dalam kesehatan
masyarakat. Ruang lingkup kesehatan masyarakat veteriner mencakup
pengembangan dan pengawasan praktik higiene pangan serta
pengendalian dan pemberantasan penyakit zoonosis [37]. Selain itu,
penggunaan antibiotik pada hewan memainkan peran utama dalam
munculnya krisis resistensi antibiotik pada kesehatan masyarakat [38].
Oleh karena itu, saat ini penggunaan probiotik atau prebiotik sudah
menjadi populer. Mereka dianggap sebagai alternatif dari Antibiotic
Growth Promoters (AGP). Probiotik ditambahkan ke dalam pakan
ternak untuk meningkatkan kinerja pertumbuhan serta mencegah dan
mengendalikan patogen enterik [39].
Perhatian harus diberikan pada patogen enterik di
peternakan unggas karena dampak ekonominya (kematian,
Fadldkk. Penelitian Kedokteran Hewan BMC (2020) 16:204 Halaman 10 dari 14

Tabel 8Penilaian histopatologi agrimos makanan®suplementasi padaE.colitantangan ayam broiler ((n =10)
Lesi Kelompok yang terinfeksi Kelompok Agrimos yang tidak terinfeksi Kelompok yang terinfeksi Agrimos

Pada 15 hari Pada 35 hari Pada 15 hari Pada 35 hari Pada 15 hari Pada 35 hari

BTS B T S B T S B T S B T S B T S
Sub kapsul – Biasa – Normal Normal Normal Normal Normal Normal Normal – Normal Normal – Normal
agregasi heterofilik
Sub dan interstisial – – + +
busung

Perdarahan interstisial
Proliferasi jaringan
ikat interstisial
Lipatan epitel dan
lobulasi
Hiperplasia epitel
Degenerasi epitel dan/
atau nekrosis
– – – +
– – – –
+ – – –
+ + + +
+ + – +

Pengurangan ukuran – – – –
dan jumlah folikel

Atrofi folikel atau – –+ – ++

atrofi kortikal
Kista folikel dan – – – +
nekrosis

Penipisan limfositik – – – +
Munculnya lubang di –+ – ++ – –
medula

Sel retikuler – – – –
proliferasi
Vaskulitis – – – –
Nekrosis kortikal – – – –
Badan apoptosis dan/atau –+ – – –
karyorhexis

Hyalinisasi dan – – – –
trombosis darah
pembuluh

+ + + Parah ++ Sedang + Ringan B = Bursa T = Timus S=Limpa

penurunan berat badan, dan rasio konversi yang buruk). Selain itu, parameter biokimia serum yang abnormal.
penyebaranE.colidan tingginya penggunaan antibiotik di industri Keterbelakangan dan kelainan ini diatasi dengan agrimos
perunggasan dapat mengakibatkan resistensi bakteri terhadap antibiotik ®suplementasi, yang meningkatkan kinerja pertumbuhan.
tersebut. Sebagai gantinya, disarankan untuk menggunakan prebiotik. Juga, agrimos®meningkatkan imunitas non-spesifik, yang
pada gilirannya menyebabkan peningkatan imunitas
Kesimpulan spesifik terhadap ND, seperti yang dilaporkan dalam
Dalam penelitian ini, kelompok kontrol yang terinfeksi menunjukkan pembahasan di atas. Di sisi lain, agrimos® mengurangi
keterbelakangan dalam parameter kinerja pertumbuhan dengan stres oksidatif dan memperlambat peradangan

Tabel 9Timbulnya perubahan patologis pada organ pada periode yang berbeda (n =10)
Grup Kelompok yang terinfeksi Kelompok Agrimos yang tidak terinfeksi Kelompok yang terinfeksi Agrimos

Periode Pada 15 hari Pada 35 hari Pada 15 hari Pada 35 hari Pada 15 hari Pada 35 hari

Parameter N A T % N A T % N A T % N A T % N A T % N A T %
B 2 2 4 50 1 3 4 75 4 1 5 20 4 1 5 20 2 2 4 50 2 2 4 50
T 4 0 4 0 2 2 4 50 3 2 5 40 4 1 5 20 3 1 4 25 3 1 4 25
S 3 1 4 25 4 0 4 0 5 0 5 0 5 0 5 0 4 0 4 0 4 0 4 0
BBursaTtimusSLimpa,NNormalAAbnormalTJumlah% = Rasio
Fadldkk. Penelitian Kedokteran Hewan BMC (2020) 16:204
Gambar 5Perubahan ekspresi gen NF (kanan) dan TNF-α (kiri) di antara kelompok eksperimen. C (kontrol negatif), C+ (kontrol positif), A (agrimos®
diobati tanpa infeksi), A+ (agrimos®kelompok yang diperlakukan denganE.coliinfeksi)
terjadi sebagai akibat dariE.coliinfeksi melalui penurunan
ekspresi TNF dan NF di jaringan hati. Akibatnya, tidak perlu
menggunakan antibiotik. Jadi, Agrimos® terbukti menjadi
alternatif antibiotik yang baik untuk mengendalikan dan
mengurangiE.coliinfeksi dan kolonisasi.
Metode
Agrimos®
Kombinasi Manno-oligosakarida (MOS), dan Beta-
Glukan, yang diekstraksi darinyaSaccharomyces
cerevisiaedengan proses manufaktur khusus khusus
menghasilkan agrimos®.Agrimos®memodulasi
respons imun non-spesifik dan mendukung
pengembangan respons spesifik. Itu dibuat di
Lallemand Company (sebuah perusahaan Kanada) dan
diimpor oleh Perusahaan Egavet (Egyptian Group for
Trade and veterinary Services), Mesir.
Desain eksperimental, program pemberian makan, dan manajemen
125 anak ayam berjenis kelamin campuran (umur satu hari),
digunakan (strain ayam pedaging Cobb-505). Anak ayam
diperoleh dari peternakan swasta di Kegubernuran
Kafrelsheikh, di mana lima anak ayam dibius (injeksi natrium
pentobarbital intraperitoneal (50 mg/kg) untuk meminimalkan
penderitaan selama penyembelihan) dan disembelih setelah
ditimbang pada awal percobaan. Bursa, limpa, dan kelenjar
timusnya ditimbang. Anak ayam broiler yang tersisa (120 ekor)
dipelihara di ruangan bersih yang dilengkapi dengan serbuk
gergaji dan berventilasi baik di Lembaga Penelitian Kesehatan
Hewan cabang Kafrelsheikh tempat percobaan dilakukan.
Anak ayam diberi pakan dan air tambahan secara ad libitum,
dan dipelihara dalam manajemen higienis dan sanitasi yang
baik dengan pencahayaan terang/gelap 23/1 jam/hari. Anak
ayam (rata-rata berat badan = 40–50 g/ekor), setelah 3 hari
masa aklimatisasi dibagi rata menjadi (metode ranking), 4
kelompok tiap kelompok terdiri dari 3 ulangan (10 anak ayam/
ulangan), dimana percobaannya
Halaman 11 dari 14
dimulai pada umur 4 hari. Kelompok kontrol negatif
(kelompok pertama) diberi makanan [40] tanpa bahan
tambahan (basal) atau infeksi (Tabel10). Kontrol positif
(kelompok kedua) diberi makanan tanpa bahan tambahan
apa pun tetapi diinfeksiE.coli.Kelompok ketiga diberi
makan agrimos® (2 kg/ton) makanan tambahan tetapi
tanpa infeksi. Kelompok keempat diberi makan agrimos® (
2 kg/ton) makanan tambahan dan terinfeksi. Semua
kelompok ayam diberi vaksinasi ND dan IBD masing-
masing pada hari ke 7 dan 12. Analisis kimia pakan
ditentukan menurut AOAC [41].Berat badan individu
burung dicatat pada awal percobaan. Semua parameter
kinerja (BB, pertambahan berat badan (WG), dan FCR)
dihitung menurut Vohra dan Roudybush [42], Castell dan
Tiews [43],dan Tacon [44], masing-masing. Asupan pakan
untuk setiap kandang dicatat setiap minggu dengan
pengamatan gejala, PM, dan kematian anak ayam selama
periode percobaan.
Burung yang dikorbankan (Lima burung dari masing-masing
kelompok dibius dengan injeksi natrium pentobarbital (50 mg/kg)
intraperitoneal untuk meminimalkan penderitaan selama
penyembelihan) dari kelompok eksperimen digunakan untuk
pengumpulan sampel. Unggas hidup yang tersisa tercekik di
dalam kantong yang kuat karena tercekiknya CO2. Semua unggas
(125), unggas yang mati dan yang disembelih, serta sisa sampel
dan bahan alas tidur, dikuburkan dalam lubang pemakaman yang
dibangun dengan baik dan dikontrol secara higienis.
Infeksi eksperimental
Pada awal percobaan, semua anak ayam dalam dua
kelompok percobaan yang terinfeksi terinfeksiE.coli HAI
78melalui rute oral (1 ml mengandung 3 × 108). Strain ini
dipasok dari Lembaga Penelitian Kesehatan Hewan,
Lab Regional Kafrelsheikh, Departemen Penyakit
Unggas dan Kelinci).E.coliHAI78diisolasi dari unggas dan
mengandung gen virulensi yaitu a
Fadldkk. Penelitian Kedokteran Hewan BMC (2020) 16:204 Halaman 12 dari 14

Tabel 10Program pemberian makan eksperimental Respon imun terhadap penyakit Newcastle (ND)
Komposisi fisik Diet dasar (0–3) minggu Diet dasar (3–6) minggu HI, titer dilakukan terhadap ND [46].Virus penyakit
Jagung kuning 55 61.35 Newcastle dan serum kontrol positif disediakan oleh
Bungkil kedelai 48% 32 30.6
Institut Penelitian Kesehatan Hewan, Kafrelsheikh.
Gluten jagung 62% 4.42 0
Minyak bunga matahari 4.4 4.4 KolonisasiE.coli
Metionin 0,16 0,08 Penumpahan ituE. kumparandalam tinja dan
Dikalsium fosfat 1.85 1.4 kolonisasinya pada organ dicatat dan dikonfirmasi
Batu gamping 1.25 1.3 dengan isolasi ulangE.colidari unggas yang terinfeksi.
Kolin 60% 0,22 0,17
Beratnya organ kekebalan tubuh
garam biasa 0,4 0,4
Lima ekor anak ayam umur zero-day dan lima ekor anak ayam dari
premixA 0,3 0,3 masing-masing kelompok ditimbang kemudian disembelih pada
Komposisi kimia % umur 15 dan 35 hari. Setiap organ termasuk timus, limpa, dan
SAYA Kkal/kg 3218.5 3229.7 bursa Fabricius diisolasi dan ditimbang. Berat organ kekebalan
Protein mentah 23.02 20.03 yang ditargetkan dihitung seperti yang dijelaskan oleh Keil et al. [
47] mengikuti persamaan di bawah ini:
Kalsium 1 .9
Berat Organ Kekebalan Tubuh/Berat Badan = Berat Organ
Fosfor yang tersedia 0,45 0,35
(gram)/Berat Badan (gram) × 100.
lisin 1.1 1
Metionin + sistein 0,9 . 72 Nekropsi dan histopatologi
Kolin 1300mg/1kg 1000mg/1kg Bagian hati, usus, bursa, kelenjar timus, dan limpa diambil
APremix yang digunakan (Multivita Co.) terdiri dari retinol 12.000.000 IU, setelah nekropsi dan segera difiksasi dalam formalin
kolekalsiferol 2.200.000 IU, tokoferol 10.000 mg, menadione 2000 mg, thiamin buffer 10% dan diproses untuk evaluasi histopatologi,
1000 mg, riboflavin 5000 mg, piridoksal 1500 mg, cobalamin 10 mg, Niacin 30.000
mg, Biotin 50 mg, Asam folat 1000 mg, Asam pantotenat 10.000 mg, Besi 30.000 menggunakan bagian penyisipan parafin rutin. Bagian
mg, Mangan 60.000 mg, Tembaga 4000 mg, Seng 50.000 mg, Yodium 1000 mg, dengan ketebalan 3 μm dipotong dan diwarnai
Kobalt 100 mg, Selenium 100 mg, kalsium karbonat (CaCO3) pembawa hingga
3000 g
menggunakan H&E menurut Bancroft dan Gamble [48].

ciri khas dari Avian PatogenikE.coliHAI78
(APEC).E.coliHAI78ditandai dengan antibiotik (320 μg
ciprofloxacin/ml kaldu) dan disiapkan menurut
McFarland [45]. Seluruh kelompok (30 ekor/kelompok)
diberi vaksinasi ND dan IBD masing-masing pada hari
ke 7 dan 12.
Pengumpulan sampel dan pengukuran parameter
serum
Pada hari ke 35, sampel darah (5 ml darah/burung)
dikumpulkan dari 5 unggas/kelompok yang dipilih secara acak
setelah disembelih (unggas dianestesi dengan injeksi natrium
pentobarbital (50 mg/kg) intraperitoneal untuk meminimalkan
penderitaan selama penyembelihan). Pemilihan ini tidak
didasarkan pada efek yang telah ditentukan sebelumnya.
Setelah pembekuan darah, serum dipisahkan (sentrifugasi
pada 3000 rpm selama 15 menit) dan disimpan dalam freezer (
−20HaiC) sampai analisis. Para peneliti tidak buta selama
pengumpulan data. Blinding digunakan selama analisis.
Analisis komputasi tidak dilakukan secara membabi buta.
Aktivitas serum CAT, SOD, ALT, dan AST serta konsentrasi
MDA, total protein, dan albumin diukur dengan menggunakan
peralatan komersial yang diperoleh dari Perusahaan
BIODIAGNOS-TIC.
Q-PCR (reaksi berantai polimerase waktu nyata)
Pengumpulan sampel
Pada hari ke 35, sampel hati dikumpulkan dengan nitrogen cair dari 4
ekor burung yang dipilih secara acak/kelompok ke dalam tabung
Eppendorf bersih dan disimpan pada suhu -80 °C sampai digunakan.
Q-PCR (reaksi berantai polimerase waktu nyata)
Sampel hati dikumpulkan (35 hari) dengan nitrogen cair dari 4 burung/
kelompok ke dalam tabung Eppendorf yang bersih dan disimpan pada
suhu −80 °C sampai digunakan.
Total RNA dari sampel hati diekstraksi menggunakan
kit ekstraksi RNA total RED yang mudah (iNtRON
Biotechnology, Inc.) sesuai dengan instruksi pabrik.
Integritas RNA diverifikasi dengan menggunakan
elektroforesis gel agarosa. CDNA untai pertama
disintesis dengan RNA total menggunakan kit sintesis
cDNA Intron-Power (Kat. no. 25011).
Primer spesifik digunakan untuk mengamplifikasi gen
ayam yang dipilih (Gallus gallus)dengan GAPDH sebagai
urutan gen-primer housekeeping (standar internal) (Tabel
11). Pengujian qRT-PCR dilakukan menggunakan sistem Q-
PCR Stratagene MX300P (Agilent Technologies),
menggunakan master mix (S) Real MODTM Green FAST
qPCR mengikuti rekomendasi pabrikan. Perangkat Lunak
MxPro QPCR digunakan untuk pengumpulan data.
Fadldkk. Penelitian Kedokteran Hewan BMC (2020) 16:204 Halaman 13 dari 14

Tabel 11Primer yang digunakan untuk analisis qPCR Kafrelsheikh, Mesir.3Unit Biokimia, Penyakit Defisiensi Gizi dan
Toksikologi, Kesehatan Hewan Res. Inst. (ARC), kafrelsheikh, Mesir.
Dasar Urutan Referensi
4Unit Farmakologi, Kesehatan Hewan Res. Inst. (ARC), Kafrelsheikh, Mesir.
TNF-α untuk: 5'-GAGCTGTGGGGAGAACAAAAGG Tabatabaei dkk. 5Unit Patologi, Res Kesehatan Hewan. Inst. (ARC), Kafrelsheikh, Mesir.
A-3' [49] 6Departemen Biologi Molekuler Fakultas Kedokteran Hewan. Med., Universitas Kairo,
Pdt.: 5'-TTGGCCCCTTGAAGAGGACCTG-3' Kairo, Mesir.7Unit Penyakit Unggas, Kesehatan Hewan Res. Inst. (ARC), Kafrelsheikh,
Mesir.
NF-ϰB untuk: 5'-CAAGGCAGCAAATAGACGAG-3'
Pdt.: 5'-GTTGAGAGTTAGCAGTGAGGCA-3'
Diterima: 15 Desember 2019 Diterima: 11 Juni 2020

GAPDH Untuk- 5'CCTCTCTGGCAAAGTCCAAG3'

Rev- 5'CAACATCAAATGGGCAGATG3'
Referensi
TNF-α: Faktor nekrosis tumor-alfa, NF-ϰB: Faktor nuklir-kappa B, GAPDH: 1. Wang Y, Dong Z, Song D, Zhou H, Wang W, Miao H, Wang L, Li A. Pengaruh probiotik
Gliseraldehida-3 fosfat dehidrogenase dan prebiotik mikroenkapsulasi terhadap kinerja pertumbuhan, kemampuan
antioksidan, fungsi kekebalan tubuh, dan mikroflora sekum pada ayam broiler.

Tingkat ekspresi gen relatif dievaluasi Imunol Pertanian Pangan. 2018;29(1):859–69.

2. Tayeri V, Seidavi A, Asadpour L, Phillips CJ. Perbandingan pengaruh antibiotik,
menggunakan metode 2 − ΔΔct [50]. probiotik, sinbiotik dan prebiotik terhadap performa dan karakteristik
karkas ayam broiler. Komunitas Dokter Hewan Res. 2018;42(3):195–207.

Analisis statistik 3. Tavaniello S, Maiorano G, Stadnicka K, Mucci R, Bogucka J, Bednarczyk M. Prebiotik

Hasil yang diperoleh dianalisis secara statistik dengan
menggunakan oneway ANOVASPSSversi 16.
Singkatan
AGP:Promotor Pertumbuhan Antibiotik; ALT: Alanin transaminase; APLIKASI:
Protein fase akut; AST: Aspartat aminotransferase; BB: Berat badan;
CAT: Katalase; DNA: Asam deoksiribonukleat;E.coli: Escherichia coli;FCR: Rasio
konversi pakan; HI: Penghambatan Hemaglutinasi; IBDV: Penyakit bursal
menular; Q-PCR: Reaksi Rantai Polimerase Waktu Nyata; MDA: Peroksidasi lipid;
MOS: Mannan oligosakarida; ND: Penyakit Newcastle;
NDV: virus penyakit tetelo; NF: Faktor nuklir; PM: Postmortem; RNA: Asam
ribonukleat; SOD: Superoksida dismutase; TNF: Faktor nekrosis tumor
Ucapan Terima Kasih
Kami mengucapkan terima kasih kepada Prof. Rawhya Emran, Dep. Patologi, Unit Patologi
Molekuler, Balai Penelitian Kesehatan Hewan atas dukungannya yang sangat berharga.
Kontribusi penulis
Semua penulis memberikan kontribusi yang sama terhadap pekerjaan ini ketika
mereka merancang, melakukan percobaan dan menulis naskah. Semua penulis
telah membaca dan menyetujui naskah. SF dan AS mengukur biokimia serum. GE
menindaklanjuti isolasiE.coli,kolonisasi dan reisolasiE.coli.OS merancang formulasi
diet dan mengukur parameter kinerja pertumbuhan. AA memeriksa perubahan
patologis. AP mengukur Q-PCR untuk sampel yang dikumpulkan. HAM
menindaklanjuti respon imun terhadap penyakit Newcastle, tanda-tanda klinis dan
kematian. SF membuat interpretasi hasil.
Pendanaan
Penelitian ini tidak menerima dukungan finansial khusus dari lembaga
pendanaan di sektor publik, komersial, atau nirlaba.
Ketersediaan data dan bahan
Kumpulan data yang digunakan dan/atau dianalisis selama penelitian ini tersedia dari
penulis terkait berdasarkan permintaan yang masuk akal.
Persetujuan etika dan persetujuan untuk berpartisipasi
Penelitian saat ini telah disetujui oleh Komite Etik untuk pengambilan sampel unggas
hidup di Institut Penelitian Kesehatan Hewan, Mesir (Nomor Lisensi AHRI 42102017),
sesuai dengan hukum setempat di Mesir.
Persetujuan untuk publikasi Tak
dapat diterapkan.
Kepentingan yang bersaing
Para penulis menyatakan bahwa mereka tidak memiliki kepentingan bersaing.
Detail penulis
1Departemen Biokimia, Fakultas Kedokteran Hewan – Universitas Matrouh,
Matrouh, Mesir.2Unit Mikrobiologi, Kesehatan Hewan Res. Inst. (BUSUR),
yang ditawarkan pada ayam broiler memberikan efek positif pada sifat kualitas
daging terlepas dari rute pengiriman. Ilmu Unggas. 2018;97(8):2979–87.
4. Sobolewska A, Elminowska-Wenda G, Bogucka J, Dankowiakowska A, Kuł
akowska A, Szczerba A, Stadnicka K, Szpinda M, Bednarczyk M. Pengaruh
injeksi in ovo dengan prebiotik DiNovo® terhadap perkembangan
parameter histomorfologi duodenum, massa tubuh dan produktivitas pada
kondisi produksi unggas skala besar. J Anim Sci Bioteknologi. 2017;8(1):45.
5. Cummings JH, Macfarlane GT. Efek gastrointestinal dari prebiotik. Br J Nutr.
2002;87(Lampiran 2):145–51 (Abstr.).https://doi.org/10.1079/BJN/2002530.
6. Pelicano ER, Souza PA, Souza HB, Figueiredo DF, Boiago MM, Carvalho SR, Bordon VF.
Perkembangan mukosa usus pada ayam broiler yang diberi pakan pemacu
pertumbuhan alami. Ilmu Unggas Braz J. 2005;7(4):221–9.https://doi.org/10. 1590/
S1516-635X2005000400005.
7. Pegas P, Wenk C, Dawson KA, Newman KE. Pengaruh mannaoligosakarida
makanan terhadap parameter cecal dan konsentrasi bakteri enterik dalam
ceca anak ayam broiler yang terjangkit salmonella. Ilmu Unggas.
2000;79(2):205–11.https://doi.org/10.1093/ps/79.2.205.
8. Xu ZR, Hu CH, Xia MS, Zhan XA, Wang MQ. Pengaruh fruktooligosakarida makanan
terhadap aktivitas enzim pencernaan, mikroflora usus dan morfologi ayam broiler
jantan. Ilmu Unggas. 2003;82(6):1030–6.https://doi. org/10.1093/ps/82.6.1030.
9. Hajati H, Rezaei M. Penerapan prebiotik pada produksi unggas. Ilmu Pengetahuan Int J
Poult. 2010;9(3):298–304.https://doi.org/10.3923/ijps.2010.298.304 Sumber: DOAJ.
10. Awaad MH, Atta AM, El-Ghany WA, Elmenawey M, Ahmed K, Hassan AA, Nada AA,
Abdelaleem GA. Pengaruh kombinasi spesifik mannanoligosakarida dan β-glukan
yang diekstraksi dari dinding sel ragi terhadap status kesehatan dan kinerja
pertumbuhan ayam broiler okhratoksikasi. J Am Sains. 2011;7(3):82–96 Tersedia di
jaringan gerbang penelitian.
11. Dawood MA, Koshio S, Fadl SE, Ahmed HA, El Asely A, Abdel-Daim MM,
Alkahtani S. Efek modulasi mannanoligosakarida pada status oksidatif,
parameter imun terpilih, dan toleransi terhadap stres salinitas rendah pada
ikan air tawar merah (Pagrus besar). Rep Akuakultur 2020;16:100278.
12. Remus A, Hauschild L, Andretta I, Kipper M, Lehnen CR, Sakomura NK. Sebuah meta-
analisis asupan pakan dan kinerja pertumbuhan ayam broiler yang ditantang oleh
bakteri. Ilmu Unggas. 2014;93(5):1149–58.https://doi. org/10.3382/ps.2013-03540.
13. Sohail MU, Ijaz A, Younus M, Shabbir MZ, Kamran Z, Ahmad S, Anwar H, Yousaf MS,
Ashraf K, Shahzad AH, Rehman H. Pengaruh suplementasi mannan oligosakarida
dan probiotik terhadap kinerja pertumbuhan, bobot relatif jeroan, dan populasi
bakteri usus terpilih pada ayam pedaging yang mengalami tekanan panas siklik. J
Appl Poult Res. 2013;22(3):485–91.https://doi.org/10. 3382/japr.2012-00682.
14. Manafi M, Hedayati M, Khalaji S, Kamely M. Penilaian campuran alami nonantibiotik
terhadap kinerja, biokimia darah, mikroflora usus, dan morfologi ayam pedaging
yang ditantang dengan Escherichia coli. Pendeta Bras Zootec. 2016;45(12):745–54.
https://doi.org/10.1590/s1806- 92902016001200003.
15. Jahanian R, Ashnagar M. Pengaruh suplementasi makanan
mannanoligosakarida terhadap kinerja, metabolit darah, nutrisi ileum
Fadldkk. Penelitian Kedokteran Hewan BMC (2020) 16:204
kecernaan, dan mikroflora usus pada ayam petelur yang terjangkit Escherichia coli. Ilmu
Unggas. 2015;94(9):2165–72.https://doi.org/10.3382/ps/pev180.
16. El-Far AH, Ahmed HA, Shaheen HM. Suplementasi makanan biji phoenix dactylifera
meningkatkan performa, respon imun, dan status antioksidan pada ayam pedaging.
Sel Med Oksidatif Panjang Umur. 2016;2016.https://doi.org/10. 1155/2016/5454963.
17. Mousa SM, Soliman MM, Bahakaim AS. Pengaruh oligosakarida mannan dan
β-glukan terhadap kinerja produktif dan beberapa parameter fisiologis
dan imunologi pertumbuhan anak ayam puyuh jepang. Unggas Mesir
Sci J. 2014;34(2):2019 EBSCO Industries, Inc. Semua hak dilindungi undang-undang.
18. Kabir SM. Avian colibacillosis dan salmonellosis: tinjauan lebih dekat terhadap epidemiologi,
patogenesis, diagnosis, pengendalian dan masalah kesehatan masyarakat. Kesehatan
Masyarakat Lingkungan Int J. 2010;7(1):89–114.
19. Sharma V, Jakhar KK, Nehra V, Kumar S. Studi biokimia pada ayam broiler yang
terinfeksi Escherichia coli eksperimental yang ditambah dengan ekstrak daun
Mimba (Azadirachta indica). Dunia Dokter Hewan. 2015;8(11):1340.
20. Darah DC, Radostits OM, Gay CC, Arundel CH, Ikede BO, Mckenzie RA, Trembley
RRM, Henderson JA. Dokter Hewan. edisi ke-8. Eastbourne: Masyarakat Buku
Bahasa Inggris dan Bailliere Tindall; 1994.
21. YalçinkayaSAYA,Güngör T, BaSAlan M, Erdem E. Mannan oligosakarida (MOS)
dariSaccharomyces cerevisiaepada ayam pedaging: Efek pada kinerja dan
biokimia darah. Turk J Dokter Hewan Anim Sci. 2008;32(1):43–8 Penelitian ini
didukung oleh Dana Penelitian Ilmiah Universitas K›r›kkale, Proyek No:
03/09–03-02.
22. Rokade JJ, Kagate M, Bhanja SK, Mehra M, Goel A, Vispute M, Mandal AB. Pengaruh
suplementasi mannan-oligosakarida (MOS) terhadap performa, imunitas dan
ekspresi gen HSP70 pada ayam broiler selama musim panas-kering. India J
Res Animasi. 2018;52(6):868–74.https://doi.org/10.18805/ijarB-3291.
23. Zhou M, Zeng D, Ni X, Tu T, Yin Z, Pan K, Jing B. Pengaruh Bacillus licheniformis pada
kinerja pertumbuhan dan ekspresi gen terkait metabolisme lipid pada ayam
broiler yang ditantang dengan enteritis nekrotik yang diinduksi Clostridium
perfringens . Lipid Kesehatan Dis. 2016;15(1):48. https://doi.org/10.1186/
s12944-016-0219-2.
24. Mishra B, Jha R. Stres oksidatif pada usus unggas: tantangan dan intervensi potensial. Ilmu
Pengetahuan Dokter Hewan Depan. 2019;6:60.
25. Abudabos AM, Alyemni AH, Zakaria HA. Pengaruh dua strain probiotik
terhadap kapasitas antioksidan, stres oksidatif, dan respon imun ayam
broiler yang terjangkit Salmonella. Braz J Poult Sci. 2016;18(1):175–80.
https://doi.org/10.1590/18069061-2015-0052.
26. El-Kader HA, Alam SS, Nafeaa AA, Mahrous KF. Pengaruh suplementasi pakan
prebiotik mannanoligosakarida (bio-Mos®) terhadap status genotoksik dan
antioksidan pada puyuh jepang. Int J Pharm Sci Rev Res. 2014;27:289–95
Tersedia online diwww.globalresearchonline.net.
27. Sil GC, Das PM, Islam MR, Rahman MM. Masalah pengelolaan dan penyakit ayam
jantan di beberapa peternakan di Mymensingh, Bangladesh. Ilmu Pengetahuan Int J
Poult. 2002; 1(4):102–5 © Jaringan Informasi Ilmiah Asia 2002.
28. Eddie Ip WK, Takahashi K, Alan Ezekowitz R, Stuart LM. Lektin pengikat
mannose dan imunitas bawaan. Imunol Rev. 2009;230(1):9–21.https://
doi.org/10.1111/j.1600-065X.2009.00789.x.
29. Oliveira MC, Figueiredo-Lima DF, Faria Filho DE, Marques RH, Moraes VM. Pengaruh
mannanoligosakarida dan/atau enzim pada titer antibodi terhadap virus bursal
dan penyakit Newcastle yang menular. Kebun Binatang Dokter Hewan Arq Bras
Med. 2009;61(1):6–11.https://doi.org/10.1590/S0102-09352009000100002.
30. Sadeyen JR, Kaiser P, Stevens MP, Dziva F. Analisis respon imun yang disebabkan oleh
infeksi Escherichia coli patogen unggas pada kalkun dan hubungannya dengan
resistensi terhadap tantangan ulang homolog. Dokter Hewan Res. 2014;45(1): 19.
https://doi.org/10.1186/1297-9716-45-19.
31. Gottardo ET, Burin Junior ÁM, Lemke BV, Silva AM, Pasa B, Cassiano L, Muller Fernandes JI.
Respon imun pada Eimeria sp. dan E. coli menantang ayam pedaging yang dilengkapi
dengan asam amino. Ilmu Pengetahuan Dokter Hewan J Australia. 2017;49(3):175–84. https://
doi.org/10.4067/S0719-81322017000300175.
32. Huff GR, Huff WE, Balog JM, Rath NC. Efek imunosupresi deksametason pada
kompleks osteomielitis Turki pada infeksi saluran pernapasan Escherichia coli
eksperimental. Ilmu Unggas. 1998;77(5):654–61.https://doi. org/10.1093/ps/
77.5.654.
33. Wani BM, Darzi MM. Masood Saleem Mir SA, Shakeel I. evaluasi patologis dan
Farmakokimia ayam broiler yang terkena Colibacillosis secara alami di
Lembah Kashmir. Farmakol Int J. 2017;13(4):388–95.https://doi.org/
10.3923/ijp.2017.388.395.
34. Kumar A, Jindal N, Shukla CL, Asrani RK, Ledoux DR, Rottinghaus GE. Perubahan
patologis pada ayam broiler yang diberi pakan okratoksin a dan diinokulasi
Halaman 14 dari 14
dengan Escherichia coli. Burung Pathol. 2004;33(4):413–7.https://doi.org/10.1080/
03079450410001724021.
35. Petersen HH, Nielsen JP, Heegaard PM. Penerapan pengukuran protein fase
akut dalam kimia klinis veteriner. Dokter Hewan Res. 2004;35(2):163–87.
https://doi.org/10.1051/vetres:2004002.
36. Markazi A. Pengaruh Suplementasi Produk Sel Ragi Utuh pada Ayam Pasca-
coccidial dan Pasca-Salmonella Challenge (disertasi doktoral, the
Universitas Negeri Ohio). 2015.http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=
osu1437497725.
37. Busa CM. Peran kedokteran hewan dalam kesehatan masyarakat: penggunaan antibiotik
pada makanan hewan dan manusia serta pengaruhnya terhadap evolusi resistensi
antibakteri. J Klinik Farmakol. 2001;41(6):595–9.https://doi.org/10.1177/
00912700122010474.
38. Pendarat TF, Cohen B, Wittum TE, Larson EL. Tinjauan penggunaan antibiotik pada
makanan hewan: perspektif, kebijakan, dan potensi. Perwakilan Kesehatan Masyarakat
2012; 127(1):4–22.https://doi.org/10.1177/003335491212700103.
39. Bajagai YS, Klieve AV, Dart PJ, Bryden WL. Probiotik dalam nutrisi hewan:
produksi, dampak dan regulasi. FAO; 2016. Tersedia di Google sarjana.
40. NRC. Persyaratan nutrisi ayam. edisi ke-9. Washington: Akademi Sains
Nasional; 1994. Tersedia di Google sarjana.
41.AOAC. Dalam: Horwitz w W, editor. Metode analisis resmi. edisi ke-13.
Washington: Pers Akademik; 2000. hal. 925.09. Tersedia di Google sarjana.
42. Vohra P, Roudybush T. Pengaruh berbagai kadar protein pakan terhadap
pertumbuhan dan produksi telur Coturnix coturnix japonica. Ilmu Unggas. 1971;
50(4):1081–4.https://doi.org/10.3382/ps.0501081.
43. Castell JD, Tiews K. Laporan EIFAC. Kelompok kerja IUNS dan ICES
tentang standraisasi metodologi penelitian nutrisi ikan. Hamburg,
Republik Federal Jerman, EIFAC. Teknologi. 1980;36:24 Tersedia di
Google sarjana.
44. Tacon A. Nutrisi dan pemberian pakan ikan dan udang budidaya manual
pelatihan. V61. 1. Nutrisi penting FAO; 1987. hal. 117–30. Tersedia di
Google sarjana.
45. McFarland J. Nephelometer: alat media yang digunakan untuk
memperkirakan jumlah bakteri dalam suspensi yang digunakan untuk
menghitung indeks opsonik dan untuk vaksin. J Am Asosiasi Med.
1907;14:1176–8. JAMA.1907;XLIX(14):1176–1178.https://doi.org/10.1001/
jama.1907. 25320140022001f.
46. Raja DJ, Segel BS. Karakterisasi biologis dan molekuler ND. Isolat lapangan virus
dengan perbandingan terhadap strain NDV referensi dan patogenisitas setelah
ayam atau embrio melewati isolat terpilih. Avian Dis. 1998;42:507–16. https://
doi.org/10.2307/1592677 https://www.jstor.org/stable/1592677.
47. Keil DE, Mehlmann T, Butterworth L, Peden-Adams MM. Paparan perfluorooctane
sulfonate saat kehamilan menekan fungsi kekebalan pada tikus B6C3F1. Ilmu
Toksikol. 2008;103(1):77–85.https://doi.org/10.1093/toxsci/kfn015.
48. Bancroft JD, Gamble M. Teori dan praktek teknik histologis. Ilmu
kesehatan Elsevier; 2008. Tersedia di Google sarjana.
49. Tabatabaei SM, Badalzadeh R, Mohammadnezhad GR, Reza BR. Pengaruh Ekstrak
Kayu Manis Terhadap Enzim Biokimia, Tingkat Ekspresi Gen TNF-α dan NF-κB Pada
Hati Ayam Broiler Yang DiinokulasiEscherichia coli. Bra Dokter Hewan Pesqui.
2015;35(9):781–7.
50. Livak KJ, Schmittgen TD. Analisis data ekspresi gen relatif menggunakan PCR
kuantitatif real-time dan metode 2− ΔΔCT. Metode. 2001;25(4): 402–8
Tersedia di Google sarjana.
Catatan Penerbit
Springer Nature tetap netral sehubungan dengan klaim yurisdiksi dalam peta
yang dipublikasikan dan afiliasi kelembagaan.