Temu Teknis Nasional Tenaga Fungsional Pertanian 2006

PEMISAHAN SPERMA PEMBAWA KROMOSOM X DAN Y SAPI

DENGAN KOLOM MEDIA PEMISAH ALBUMIN

ENOK MARDIYAH
Balai Penelitian Ternak Po . Box 221 Bogor 16002

RINGKASAN

Salah satu usaha dalam pengembangan bioteknologi inseininasi buatan (IB) adalah melalui pemisahan sperma
pembawa sifat (kromosom) X dan Y . Sperma yang berkromosom X jika bertemu sel telur berkromosom X
akan menghasilkan suatu individu yang mengandung kromosom XX, embrio berkelamin betina . Sedangkan
sperma berkromosom Y bertemu dengan sel telur berkromosom X akan menghasilkan individu yang
berkromosom XY, embrio berkelamin jantan . Berdasarkan perbedaan seks kromosom pada sperma ini
diketahui balnva sperma X dan Y mempunyai sifat-sifat yang berbeda . Sperma X bentuknya lebih besar dan
gerakannya (motilitas) lebih lambat, sementara sperma Y bentuknya lebih kecil dan gerakannya lebih cepat .
Pemisahan sperma pembawa kromosom X dan Y dengan metoda kolom albumin didasarkan atas perbedaan
motilitas sperma dimana sperma berkromosom Y mampu bergerak lebih cepat . Dari basil pengamatan,
menunjukkan masing-masing untuk konsentrasi albumin 10 % pada fraksi atas dan 30 % pada fraksi bawah,
mampu mengubah rasio perolehan sperma normal X :Y (51,50 : 48,50 %) mcnjadi 73,20 : 26,80 % pada fraksi
atas dan 31,14 : 68,86 % pada fraksi bawah . Berdasarkan sifat tersebut sperma dapat dipisahkan, sehingga
diharapkan dapat meningkalan peluang diemperoleh jenis kelamin ternak yang sesuai dengan keinginan.

Kata kunci : IB, kromosom, motilitas, albumin, sperma, fraksi .

PENDAHULUAN umumnya berbentuk oval, nucleusnya pipih

berisi kromatin padat (GARNET DAN HAFEZ,
Salah satu bagian penting untuk 2000) . Menurut WANG et al ., (1988),
mendapatkan kualitas dan kuantitas
akrosom merupakan lapisan yang menutup
spermatozoa sebelum di laksanakannya
ujung arterior nukleus sperma, mengandung
program lB diantaranya adalah dengan enzim hidrolitik untuk menembus dinding
memilih bibit pejantan, teknik penampungan
ovum saat fertilisasi . Salisbury dan
dan teknologi pengolahan semen yang baik .
VANDEMARK (1985), membagi ekor sperma
Melalui teknik IB materi genetik jantan
atas empat bagian yaitu leher, bagian tengah,
unggul dapat diwariskan, schingga dapat
bagian utama dan ujung ekor . Karena sel
menghasilkan keturunan yang unggul dan
telur merupakan sel haploid hanya
dapat ditingkatkan keberadaannya . Menurut
mengandung kromosom jenis kelamin X,
Toelihere (198Ia), sekitar 90 % dari volume
maka hanya ada dua kemungkinan
semen sapi terdiri atas plasma semen . Hal
kombinasi dari garnet dalam suatu fertilisasi
ini menyebabkan sifat lisik dan kimia semen
yaitu 50% jantan dan 50% betina . Jenis
sebagian besar ditentukan oleh plasma
kelamin tersebut ditentukan oleh kromosom
semen . Fungsi utama plasma semen adalah pada sperma (KRYZANIAK DAN HAFEZ,
sebagai media pembawa sperma kedalam 1987) . Skematik dari proses tersebut lihat
saluran reproduksi hewan betina, sebagai
Gambar 1 .
sumber makanan, sumber energi baik secara
Berbagai usaha (penelitian) telah
langsung seperti fruktosa, dan sorbitol, atau
dilakukan dalam pemisahan sperma
tidak langsung seperti gliscrilfosforikolin
pembawa kromosom X dan Y, antara lain
(Toelihere, 1981a) . Sperma sapi mempunyai
pengendapan sperma dalam media (susu
ukuran panjang 70 pm (Salisbury dan
bubuk, glisin, sodium sitrat, gliserol, kuning
VANDEMARK, 1985) . GARNER DAN HAFEZ
telur), kecepatan pengendapan, sentrifugasi
(2000) membagi sperma terdiri dari bagian
gradient densitas, manipulasi hormon
kepala, akrosom dan ekor . K epala sperma antigen H-Y, pemfokusan isoelektrik
berukuran panjang 7,9-10,3 pm, lebar 4,3-
pemisahan dengan kandungan DNA, filtrasi
5,5 pill dan tebal 1,2-2,4 µm (SALISBURY
DAN VANDEMARK, 1985) . Kepala sperma

Pusat Penelitian dan Pengembangan Peternakan 225

 Temu Teknis Nasional Tenaga Fungsional Permntan 2006

dengan sephadex dan kolom albumin A. 2. Alat Pemisah & Evaluasi sperms
(HAFEZ DAN HAFEZ, 2000) .
I . Mikroskop cahaya binokuler, fase
Tujuan kegiatan, diharapkan
kontras .
penggunaan kolom albumin dapat
2 . Gelas ukur, erlenmeyer + beaker gelas
bermanfaat untuk memisahkan sperma
berbagai ukuran .
pembawa kromosom X dan Y dalam
3 . Objek gelas + bilik hitung, penutup
menunjang program IB dilapangan terutama
gelas, pemanas Bunsen .
dalam pengembangan inovasi teknologi
4 . Timbangan elektronik .
reproduksi ternak .
5 . Counter, mikrometer .
6. Kolom pemisah atau spuit 10 ml 0 1,5
MATERI DAN METODA
cm + standar pemegang tabung .
Alat-alat dan bahan 7 . Sentrifugasi + tabung .
A.1. Alat Penampungan sperms
B. 1 . Bahan dan Pembuatan media
1. Satu set vagina buatan . albumin 10% dan 30%
2. Termos untuk air hangat .
Bahan untuk pemisah sperma berupa
3. Termos untuk air panas .
bagian cair albumin telur ayam kampung
4. Tabung penampung.
dengan pelarut tris sitrat-kuning telur
5. Vaselin atau Jelly .
sebagai media pengencer. Untuk mendapat-
6. Thermometer yang berkapasitas 0-100°C . kan konsentrasi media albumin 10% dan
7. Gelas piala 800 ml .
30% lihat pada Tabel 1 .
8. Serbet dan kertas tissu .

Tabel 1 . Bahan dan pembuatan media albumin

Jumlah
Bahan Konsentrasi Konsentrasi
medium 10% medium 30%
Tris hydroxyl methyl amine 2,422 gr 2,422 gr
Asam sitrat 1,340 gr 1,340 gr
Fruktosa 1000 mgr 1000 mgr
Streptomycin 100 .000 ugr 100 .000 ugr
Penicilin 100 .000 iu 100 .000 iu
Kolesterol 40 mg 40 mg
Kuning telur 20 ml 20 ml
Putih telur 10 ml 30 ml
Arc uadest 70 ml 50 ml
Sumber : Laboratorium Reproduksi Balai Penelitian Ternak

2 . NaCI formalin untuk pengamatan tudung

.B .2 . Bahan evaluasi/pengamatan akrosom utuh dan perhitungan konsetrasi
sperms sperma .
1 . Zat warna eosin nigrosin untuk 3 . Aquadest, alkohol 70%, minyak imersi .
mengamati persentase sperma hidup dan 4 . Bahan pengencer sperma, dapat dilihat
mati serta pengamatan morfometrik pada Tabel 2 .
sperma .

Pusal Penelitian dan Pengembangan Peternakan

226
 Tennu Teknis Nastonal Tenaga Fungsional Pertanian 2006
Tabel 2 . Bahan pengencer sperma
Bahan
Tris hydroxyl methyl amine
Asam sitrat
Fruktosa
Streptomycin
Penicilin
Kolesterol
Kuning telur
Aquadest
Sumber : Laboratorium Reproduksi Balai Penelitian Ternak
Semen sapi
Sapi jantan dewasa Frishian Holand
(FH) dengan umur dibawah 3 tahun, berat
badan berkisar 400-500 kg . Ternak
dikandangkan dengan ukuran 2 x 3 m . Pakan
berupa rumput gajah dan air minum
diberikan secara ad libitum, , diberi
konsentrat sebagai bahan tambahan
secukupnya. Semen ditampung dengan alat
vagina buatan dua kali seminggu .
Metoda pengamatan
Langkah-langkah dalam pengamatan
meliputi beberapa tahapan, seperti terlihat
pada gambar 2 .
A . Penyiapan kolom albumin
Albumin yang tclah dilarutkan dalam
Tris sitrat-kuning telur, dimasukkan kedalam
tabung pemisah . Untuk lapisan bawah
sebanyak 2 ml dengan konsentrasi 30 % dan
untuk lapisan atas sebanyak 2 ml dengan
konsentrasi 10 % . Diusahakan agar kedua
lapisan jangan sampai tercampur .
B . Penyiapan dan evaluasi semen
Semen sapi ditampung dengan
menggunakan vagina buatan, hasil
tampungan langsung dievaluasi . Evaluasi
meliputi : volume, konsistensi, warna,
gerakan massa, persentase hidup,
konsentrasi dan tudung akrosom .
C. Pemisahan dan penentuan persentase
sperma pembawa komosom X dan Y .
C .1 . Pemisahan sperma
Semen sapi yang sudah dievalusi dan
mempunyai kualitas yang baik diencerkan
dengan tris sitrat-kuning telur dengan
Pusat Penelitian dan Pengembangan Peternakan
Jumlah
2,422 gr
1,340 gr
1000 mgr
100 .000 ugr
100 .000 iu
40 mg
20 ml
80 ml
perbandingan I : 1 . Sampel semen sebanyak
I ml dimasukkan dalam spuit yang berisi
media pemisah tetes demi tetes dan
dibiarkan selama 15 menit pada suhu ruang
(27-28 °C) . Setelah 15 menit, 2 ml pertama
ditampung kedalam tabung sentrifuge yang
telah diisi masing-masing 4 ml larutan tris
sitrat pencuci sebagai fraksi bawah, I ml
berikutnya dibuang, kemudian 2 ml
berikutnya ditampung sebagai fraksi atas .
Hasil pena mpungan selanjutnya disentrifus
selama 5 menit dengan kecepatan 1500 rpm .
Supernatan dibuang, sehingga didapat
endapan yang telah bersih dari media
pemisahan . Endapan sperma lalu ditambah
dengan 0,5 ml larutan pengencer, kemudian
diukur volumenya dan dievaluasi secara
mikroskopik .
C. 2. Penentuan persentase sperma
pembawa kromosom X dan V
Untuk mengukur persentase sperma
pembawa kromosom X dan Y dilakukan
dengan evaluasi morfometrik : mengukur
luas kepala sperma dengan membuat
preparat ulas (pewarna eosin negrosin) .
Pengukuran bagian terpanjang dan bagian
terlebar kepala sperma, dilakukan dengan
mikroskop cahaya yang dilengkapi
mikrometer pada pembesaran 10 x 100 .
Jumlah sperma yang dihitung dari tiap-tiap
fraksi adalah 50 sperma . Luas kepala sperma
dihitung menggunakan metoda Integral
Riemann (PURCELL DAN VARBERG, 1987) .
Untuk mengetahui hubungan antara ukuran
panjang dan lebar dengan luas kepala
sperma, digunakan analisis regresi (STEEL
DAN TORIE, 1995), dengan rumus
LKS = (0,8988 x P x L)-1,63
Keterangan : LKS = Luas Kepala Sperma
227
 Tenuw Teknis Nasional Tenaga Fungsional Pertanian 2006
0,8988 = Faktor koreksi dari data
integral untuk menentukan luas kepala
sperma dari setiap satuan ukuran dan metoda
regresi untuk menetukan hubungan ukuran
panjang dan lebar dengan luas kepala
sperma.
1,63 = Nilai konstanta regresi
P = Bagian terpanjang dari kepala sperma
L = Bagian terlebar dari kepala sperma
HASIL DAN PEMBAHASAN
Semen sapi ditampung dengan
menggunakan vagina buatan dan semen
basil ejakulasi ke dua diambil untuk
pemisahan . Volume semen pada setiap
ejakulat 1, 2, 3 dan 4 biasanya berbeda
terutama pada ejakulat 2 Iebih tinggi
dibandingkan ejakulat I dan 3, hal ini sesuai
dengan basil penelitian SITUMORANG dkk,
(2000) dan pengamatan E . MARDIYAfi dkk,
(2001) . Parameter makroskopis yang diamati
adalah volume, warna, dan konsistensi
sedangkan untuk parameter mikroskopis
adalah gerakan massa, konsentrasi,
persentase hidup, TAU, persentase sperma
pembawa kromosom X dan Y . Dari delapan
kali pengamatan volume semen segar
diperoleh basil rata-rata (Rataan ± SD)
adalah : 7,13 + 1,56 dengan kisaran 5,57-
8,69 ml . Perbedaan hasil volume pada setiap
ternak bisa berbeda-beda, diduga disebabkan
oleh perbedaan umur, pengaruh individu,
berat badan, kondisi dan bangsa ternak
seperti dilaporkan oleh (AMIN, 1998) dan
(TOELIHERE 1981b) . Hal ini dapat pula
disebabkan oleh faktor makanan, suhu,
frekuensi ejakulasi, libido dan psikis
(TOELIHERE, 1981) . Warna semen segar
yang diperoleh rata-rata berwarna krem
keputih-putihan, dengan konsistensi berkisar
agak kental sampai kental . Hal ini tergolong
baik dan sesuai dengan pendapat HAFEZ
(2000). Warna semen dapat juga
dipergunakan untuk memprediksi konsen-
trasi secara cepat . Dalam keadaan normal,
semakin kental semen, maka konsentrasi
sperma semakin tinggi .
Pengamatan konsistensi memperli-
hatkan adanya hubungan dengan konsentrasi
spermatozoa dan warna semen . Hasil
evaluasi menunjukkan konsistensi semen
dari agak kental sampai kental . Semakin
22 8
kental semen berarti konsentrasi sperma-
tozoa semakin tinggi dan warna semen
semakin pekat . Gerakan massa spermatozoa
merupakan cerminan dari motilitas atau
gerakan individu spermatozoa . Penilaian
gerakan massa yaitu : + (kurang aktif), ++
(aktif) dan +++ (sangat aktif) . Hasil
pengamatan diperoleh gerakan massa +++
sangat aktif , semakin banyak spermatozoa
yang bergerak kedepan motilitas semakin
besar dan pergerakannya semakin cepat,
gerakan massa semakin balk (TOELIHERE
1985) . Pada pengamatan ini perbandingan
persentase motilitas sperma segar (sebelum
pemisahan) dengan motilitas sperma setelah
mengalami pemisahan pada fraksi atas dan
fraksi bawah berturut-turut adalah 79,00 ;
72,50 ; 63,75%, sedikit mengalami
penurunan dan ini umum terjadi secara
alami karena daya hidup sperma yang
menurun, waktu prosesing semen dan daya
pergerakan sperma . Hasil pengamatan
semen segar sebelum dan sesudah
pemisahan diperlihatkan pada Tabel 3 .
Motilitas sperma pada fraksi atas
Iebih tinggi dibandingkan dengan fraksi
bawah hal ini mungkin dipengaruhi oleh
penggunaan energi saat pergerakan sperma
menempuh konsentrasi media albumin dari
fraksi atas ke bawah . Konsentrasi media
albumin pada fraksi bawah lebih tinggi
dibandingkan fraksi atas, sehingga sperma
Iebih banyak mengeluarkan energi untuk
menembus fraksi bawah dan motilitasnya
menurun bahkan pergerakannya lemah atau
tidak bergerak . Konsentrasi semen segar
sebelum pemisahan berkisar 1222-2018 juta
sperma per ml dengan rata-rata (Rataan ±
SD) 1620 + 398 juta per ml . Hal ini
mendekati rataan konsentrasi semen segar
yang dilaporkan oleh Hafez (2000), yaitu
berkisar antara 1000-2000 juta sperma per
ml semen . Konsentrasi semen setelah
mengalami proses pemisahan dengan kolom
albumin pada fraksi atas adalah 427,50 ±
189,89 dan fraksi bawah adalah 335,63 ±
130,40 juta sperma per ml . Total sperma
yang diperoleh rata-rata 11 .687,50 + 418
juta sperma per ejakulat dengan kisaran
11 .269,50-12 .105,50 juta sperma per
ejakulat, sedangkan total sperma pada fraksi
atas dan bawah masing-masing adalah
7244,00 ± 955,53 dan 473,07 ± 327,66 . Bila
Pusat Penelitian dan Pengembangan Peternakan
 Temu Teknis Nasional Tenaga Fungsional Pertanian 2006

diperhatikan perbandingan konsentrasi, total Persentase sperma hidup (% H) rata-

semen segar sebelum dan sesudah
pemisahan ada penurunan, hal ini disebab-
kan adanya sperma yang tertinggal di kolom
dan ada sebagian lagi yang terbuang pada
saat pembuangan media di antara fraksi atas
dan bawah . Konsentrasi sperma dan total
sperma pada fraksi atas lebih besar dari pada
fraksi bawah, hal ini menunjukkan bahwa
sperma yang bermigrasi dari fraksi atas ke
fraksi bawah semakin berkurang . Menurut
DIXON et al (1980) jumlah sperma yang
masuk kedalam suatu fraksi semen akan
berkurang sejalan dengan meningkatnya
konsentrasi Bovine Serum Albumin (BSA)
yang dapat meningkatkan viskositas
pengencer dan hanya sperma yang betul-
betul motil dapat menembus media .
Tabel 3 . Evaluasi semen secara makroskopis dan mikroskopis, sebelum dan sesudah pemisahan .
rata dari pengamatan ini cukup tinggi, yaitu
90,38% dengan kisaran 86,8-93,96% lebih
tinggi dari standar WHO (1992) yaitu 75%
sperma hidup . Persentase hidup mempunyai
keterkaitan dengan besarnya motilitas
spermatozoa, semakin besar motilitas,
persentase hidup spermatozoa juga semakin
tinggi . Persentase sperma hidup pada semen
segar, fraksi atas dan bawah berturut-turut
90,38 ; 84,13 dan 82,25% ada penurunan
terutama setelah mengalami pemisahan, hal
ini disebabkan ada sejumlah sperma yang
tidak dapat bertahan hidup pada saat
perlakuan . Demikian pula terjadi pada
perlakuan pemisahan dengan media albumin
ada sperma mati setelah menempuh jarak
dan terlalu banyak mengeluarkan energi saat
melalui media pemisah .

Sebelum pemisahan Setelah pemisahan

Penilaian
Nilai Nilai
(Rataan ± SD) (Rataan ± SD)
Makroskopis '~

Volume (ml) 7 .13 ± 1,56 -

Warna Krem keputih-putihan -
Konsistensi Agak kental - kental -
Fraksi atas Fraksi bawah
Mikroskopis

Gerakan Massa 2) +++ -

Motilitas (%) 79,00 ± 4,30 72,50 f 5,30 63,75 f 7,40
Konsentrasi sperma (juta/ml) 1620,00 ± 398 427,50 t 189,89 335,63 f 130,40
Sperma hidup (%) 90,38 f 3,58 84,13 t 4,50 82,25 t 5,70
Sperma dengan TAU (%) 81,87 t 13,29 82,87 f 10,45 88,25 t 4,50
Sperma pembawa kromosom X (%) 51,50 73,20 31,14
perma pembawa kromosom Y (%) 48,50 26,80 68,86
Keterangan
' tevaluasi semen gerakan massa dilakukan sebelum pemisahan .
2) nilai gerakan massa yaitu + = kurang aktif, ++ = aktif, +++ = sangat aktif

Keutuhan tudung akrosom (TAU) sperma
mengandung enzim, diperlukan untuk
kelangsungan hidup sperma dan keberha-
silan dalam membuahi atau memasuki
sitoplasma sel telur saat fertilisasi . Pen gama-
tan persentase TAU semen segar, fraksi atas
dan bawah yang diperoleh berturut-turut
adalah 81,87 ; 82,87 dan 88,25% tidak
menunjukkan perbedaan nyata, sedangkan
persentase sperma TAU pada fraksi bawah
lebih tinggi dari pada fraksi atas . Persentase
sperma TAU yang diperoleh lebih tinggi
dari pada SHARMA et al (1992) dan SAILI
(1999) yaitu 74,05 dan 74,51 %.
Pengamatan sperma terhadap perolehan
sperma berkromosom X dan Y melalui
evaluasi morfometrik sperma yaitu
mengukur panjang dan bagian terlebar dari
kepala sperma dan diamati dibawah
mikroskop cahaya dengan bantuan alat
micrometer . Untuk menentukan luas kepala
sperma sapi digunakan rumus metoda

Pusat Penelitian dan Pengembangan Peternakan 229

 Tenm Teknis Nasional Tenaga Fungsional Perianian 2006
integral Riemann (Purcell dan Varberg,
1987) . Rata-rata persentase sperma X dalam
semen segar adalah 51,5% dengan kisaran
46,52-56,48%, sedangkan rata-rata sperma
Y adalah 48,5% dengan kisaran 43,52-53,
48%, hal ini masih mendekati rasio normal
X : Y = 50 : 50% . Setelah mengalami
perlakuan pemisahan dengan media kolom
albumin rasio persentase sperma X : Y pada
fraksi atas yaitu 73,20 : 26,80% dan fraksi
bawah yaitu 31,14 : 68,86% .
Untuk rnendapatkan spermatozoa X
lebih banyak (73,20%) digunakan fraksi atas
dan untuk mendapatkan spermatozoa Y
lebih banyak (68,86%) digunakan fraksi
bawah . Hal ini didukung oleh penelitian
Dhalia (2005) yang melakukan penambahan
jumlah kolom media pemisah albumin dapat
meningkatkan persentase sperma Y pada
fraksi bawah dari 66% menjadi 71,33% .
Penelitian yang dilakukan ' oleh
PANCAHASTANA (1999) tentang pemisahan
spermatozoa dengan putih telur diperoleh
persentase spermatozoa Y pada lapisan atas
adalah 36,80 ± 8,06% . Dan untuk lapisan
hawah yaitu 77,20 f 4,09% . JASWANDI
(1992) melakukan pemisahan pada sperma
sapi dengan menggunakan BSA 6% (fraksi
atas 3 ml) dan 10% (fraksi bawah 3 ml)
menghasilkan inseminasi dengan fraksi
bawah mcmperoleh 62 .5% jantan dan 37,5
betina sedangkan pada fraksi atas diperoleh
22,2% jantan dan 77,8% betina . QUINLIVAN
et al., (1982) melaporkan bahwa pemisahan
sperma dengan metoda kolom albumin,
dapat meningkatkan perolehan sperma Y
men jadi 74% dari 25% sebelum pemisahan .
Hasil ini diikuti penurunan motilitas men'njadi
74% dari 85 . Hasil evaluasi semen segar
baik secara makroskopik dan mikroskopik
memberikan gambaran yang normal dan
berkualitas baik, selanjutnya dapat diproses
lebih lanjut untuk pembekuan semen dan
dapat dipergunakan untuk inseminasi
buatan .
RESIM PULAN
Spermatozoa X dan Y dapat
dipisahkan berdasarkan motilitas .
Dari hasil pengamatan menggunakan
konsentrasi albumin 10% pada fraksi atas
dan 30% pada fraksi bawah, mampu
230
mengubah rasio perolehan sperma normal X
Y 51,50 : 48,50% menjadi 73,20 :26,80%
pada fraksi atas dan 31,14 : 68,86% pada
fraksi bawah .
Pemisahan X dan Y sperma dengan
kolom albumin diharapkan dapat mening-
katkan peluang memperoleh jenis kelamin
ternak yang sesuai dengan keinginan .
DAFTAR BACAAN
AMIN, M .R ., (1998) . Efektivitas Plasma
Semen Sapi dan berbagai Pengencer
dalam Meningkatkan Kualitas Semen
Beku Kerbau Lumpur (Bubalus
bubalis) . Program Pasca Sarjana,
Institut Pertanian Bogor.
DIXON, K .E ., A . SONGY, Jr . D . M . THRASER
and J .L . KREIDER .1980 . Effect of
Bovine Serum Albumin on The
Isolation of Boar Spermatozoa and
Their Fertility . J. Theriogenology . 13
437 .
SITTI DHALIA, P .K ., (2005) . Pengaruh
Penambahan Jumlah Kolom Media
Pemisah Albumen dalam Meningkat-
kan Keberhasilan Pemisahan Sperma
X dan Y Sapi serta Kualitas Sperma
setelah Pembekuan, Skripsi . Program
Studi Biologi . Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam .
Universitas Pakuan Bogor .
E . MARDIYAH ., I . S UARIDA ., I .K . PUSTAKA
DAN R. HERNAWATI . 2001 .
Penampungan dan Evaluasi Mutu
Semen Sapi Dengan Vagina Buatan .
Prosiding Temu Teknis Fungsional
Non Peneliti . hal : 138-145 .
HENDRI . 1992 . Usaha Mengubah Rasio
Sperma X dan Y dengan Metoda
Kolom Menggunakan Larutan
Bovine Serum Albumin (BSA) dan
Penilaian Angka Kebuntingan serta
Perbandingan Jenis Kelamin Anak
pada Kambing . Tesis . Program
Pascasarjana . Institut Pertanian
Bogor . hlm . 62-63 .
HERMAN, R . DAN A . TJOKRONEGORO .1982 .
Pemisahan Sperma X dan Y dengan
Albumin Gradient untuk Inseminasi
Pusat Penelitian dan Pengembangan Peternakan
 Tennr Teknis Nasional Tenaga Fungsional Pertanian 2006
Buatan guna mempunyai anak Laki-
laki . Medika . 2(8) : 107-110 .
GARNER, D .L . AND E .S .E . HAFEZ, 2000 .
Spermatozoa and Seminal Plasma . In
Hafez and E .S .E . Hafez ed .
Reproduction in Farm Animals 7 5d ed.
B . Lea and Febiger, Philadelphia . pp .
96-99 .
HAFEZ, F .S .F . AND 13 . HAFEZ, 2000 . X and
Y Chromosome Bearing
Spermatozoa . In B . Hafez and E .S .E .
Hafez ed. Reproduction in Farm
Animals 7" ed. Lea and Febiger,
Philadelphia . pp . 390-393 .
JASWANDI . 1992 . Penggunaan Lapisan
Suspensi Bovine Serum Albumin 6
dan 10% Dalam Kolom Untuk
Memisahkan Sperma Sapi Pembawa
Kromosom X dan Y Guna Mengubah
Rasio Seks pada Pedet . .Tesis .
Program Pascasarjana . Institut
Pertanian Bogor. him . 28-33 .
KRYZANIAK, L .T . AND HAFEZ, 1987 . X and
Y Chromosome Bearing
Spermatozoa . In E .S .E . 1-lafez ed.
Reproduction in Farm Animals 5`" ed.
Lea and Febiger, Philadelphia . pp .
498-506 .
PARTODIHARDJO, S . 1987 . Ilmu Reproduksi
Hewan . Mutiara Sumber Widya .
Jakarta. him . 73 .
PURCELL, E .J . AND D . VARBERG, 1987 .
Kalkulus Jan Geonretri Analisis .
Terj . I .Y . Susila, B . Kartasasmita dan
Rawuh . Erlangga . Jakarta . him . 35-
38 .
QUINLIVAN . W .L .G ., K . PRECIADO, T .L .
LONG AND H . SULLIVAN . 1982 .
Separation of Human X and Y
Spermatozoa by Albumin Gradient
and Sephadex Chromatography . .1.
Fertility and Sterility. 37 : 104-149 .
SAILI, T . 1999 . Efektivitas Penggunaan
Albumen Sebagai Medium Separasi
dalam Upaya Mengubah Rasio
Alamiah Spermatozoa Pembawa
Kromosom X dan Y pada Sapi . Tesis .
Program Pascasarjana . Institut
Pcrtanian Bogor . him . 9-42 .
Pusat Penelitian (/(In Pengembangan Peternakan
SALISBURY, G .W . AND N .L . VANDEMARK,
1985 . Fisiologi Reproduksi dan
Inseminasi Buatan pada Sapi . Terj . R .
Djanuar . Gadjah Mada University
Press . Yogyakarta. Him . 447-480 .
SHARMA, M .L., G . MOHAN AND K .L . SAHNI .
1992 . A Study on Acrosomal
Damage on Cryopreservation of
Cross Bred Bull Semen Indian . J.
1'eterinary . 69 : 962-964 .
SITUMORANG, P ., E . TRIWULANINGSIH, A .
LUBIS ., T. SUGIARTI DAN CAROLINE
W . (2000) . Pengaruh Pemberian
beberapa Substrat yang didapat tinggi
pada Epididymis dan Antioxidant
terhadap Daya hidup Spermatozoa
yang disimpan dalam suhu 5 °C
(Chilling Semen) . Laporan Akhir
T .A . 2000 . Balai Penelitian Ternak .
STEEL, R .G .D . AND J .1-l . TORIE, 1995 .
Prinsip dan Prosedur Statistika. Terj .
B . Sumantri . P .T . Gramedi a Pustaka
Utama . Jakarta . him . 168 - 205 .
SUMNER, A .T. AND J .A . ROBINSON . 1976. A
Difference in Dry Mass Between the
Heads of X and Y Bearing Human
Spermatozoa . J. Reprod. Fert . 8 : 9-
14 .
TOELIHERE, M .R .1981 . Fisiologi Reproduksi
pada Ternak . Angkasa . Bandung . him
64-127 .
TOELIHERE, M .R . 1981a. Fisiologi
Reproduksi pada Ternak . Angkasa .
Bandung . him 46-62 .
TOELIHERE, M .R . 1981b . Inseminasi Buatan
pada Ternak . Angkasa . Bandung . him
92-115 .
WANG, C ., S .Y . CHAN . M . NG, W .W . So,
W .L . TsOI, T . LO AND A . LEUNG .
1988 . Diagnostic Value of Sperm
Function Tests and Routine Semen
Analysis in Fertile and Infertile Men .
J . Androl . Fert . 9 : 384-388 .
WORLD HEALTH ORGANIZATION (WHO) .
1992 . Laboratory mannual for the
Eaxamination of Human Semen and
Semen Cervical Mucus Interaction .
In Semen analysis . A . D . Agostini .
2003 . Geneva University Hospital .
231