Laporan Tetap Praktikum Dasar-Dasar Mikrobiologi Akuatik: Retno Setia Ningsi 05061282227026

LAPORAN TETAP
PRAKTIKUM DASAR-DASAR MIKROBIOLOGI AKUATIK
Retno Setia Ningsi

05061282227026
PROGRAM STUDI TEKNOLOGI HASIL PERIKANAN

JURUSAN PERIKANAN
FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS SRIWIJAYA
2022
HALAMAN PENGESAHAN
LAPORAN TETAP
PRAKTIKUM DASAR-DASAR MIKROBIOLOGI AKUATIK
Sebagai Salah Satu Syarat untuk Mengikuti Ujian Akhir dan Lulus Dalam
Praktikum Dasar-Dasar Mikrobiologi Akuatik
Retno Setia Ningsi

05061282227026
Indralaya, Desember 2022
Mengetahui,
Asisten l Asisten ll
Anggun Mutiara Riski Amelia

NIM. 05061182126006 NIM. 05061282126019
Dosen Koordinator Pratikum

Karakterisasi Bahan Baku Hasil Perikanan
Gama Dian Nugroho, S. Pi., M. Sc

NIP. 198803282020121010
i Universitas Sriwijaya
KATA PENGANTAR
Segala puji syukur dipanjatkan kehadirat Allah swt. yang telah memberikan
rahmat dan hidayah-Nya sehingga saya dapat menyelesaikan Bundelan Laporan
Tetap Praktikum Dasar-Dasar Mikrobiologi Akuatik ini dengan tepat waktu.
Bundelan Laporan ini berguna sebagai salah syarat untuk mengikuti Ujian Akhir
Semester Praktikum Dasar-Dasar Mikrobiologi Akuatik dan juga untuk lulus dari
praktikum ini. Dengan kemampuan yang sangat terbatas, bundelan laporan ini
tentunya masih sangat jauh dari kata sempurna, baik dalam pengetikan maupun
isinya. Terimakasih kepada Bapak Gama Dian Nugroho, S. Pi., M. Sc selaku
dosen pengampu praktikum Dasar-Dasar Mikrobiologi Akuatik dan juga kepada
kak Anggun Mutiara dan kak Riski Amelia selaku asisten dosen yang telah
membantu saya selama praktikum Dasar-Dasar Mikrobiologi Akuatik ini. Semoga
bundelan laporan ini dapat memberikan informasi serta dapat bermanfaat untuk
pengembangan wawasan dan peningkatan ilmu pengetahuan bagi pembaca
ataupun kami sendiri sebagai penulis.
Indralaya, Desember 2022
Retno Setia Ningsi
ii Universitas Sriwijaya
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL
HALAMAN PENGESAHAN .............................................................................. i
KATA PENGANTAR ......................................................................................... ii
DAFTAR ISI ....................................................................................................... iii
DAFTAR TABEL .............................................................................................. vii
INSTRUMENTASI LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
BAB 1 PENDAHULUAN ......................................................................................2
1.1. Latar Belakang ................................................................................................ 2
1.2. Tujuan ........................................................................................................... 3
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA .............................................................................4
2.1. Alat-Alat Laboratorium ................................................................................... 4
2.2. Bahan Kimia Laboratorium Mikrobiologi ...................................................... 5
2.3. NaOH ...........................................................................................................6
2.4. Alkohol ............................................................................................................7
2.5. Colony Counter ................................................................................................8
2.6. Erlenmeyer .......................................................................................................9
BAB 3 PELAKSANAAN PRAKTIKUM ............................................................10
3.1. Waktu dan Tempat ........................................................................................ 10
3.2. Alat dan Bahan .............................................................................................. 10
3.3. Prosedur Kerja ............................................................................................... 10
BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................................11
4.1. Hasil .............................................................................................................. 11
4.2. Pembahasan ................................................................................................... 15
BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN .................................................................16
5.1. Kesimpulan ................................................................................................... 16
5.2. Saran ............................................................................................................ 16
STERILISASI ALAT
BAB 1 PENDAHULUAN ....................................................................................18
1.1. Latar Belakang .............................................................................................. 18
1.2. Tujuan ......................................................................................................... 19
iii Universitas Sriwijaya

BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ...........................................................................20
2.1. Pengertian Sterilisasi ..................................................................................... 20
2.2. Macam-Macam Alat Sterilisasi ..................................................................... 21
2.3. Sterilisasi Fisika ............................................................................................ 22
2.4. Sterilisasi Kimia ............................................................................................ 23
2.5. Sterilisasi Mekanik .........................................................................................24
2.6. Autoclave ....................................................................................................... 25
3.1. Waktu dan Tempat ........................................................................................ 26
3.2. Alat dan Bahan .............................................................................................. 26
3.3. Prosedur Kerja ............................................................................................... 26
BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN..................................................................27
4.1. Hasil .............................................................................................................. 27
4.2. Pembahasan .................................................................................................... 28
5.1. Kesimpulan ................................................................................................... 29
5.2. Saran ...............................................................................................................29
METODE ISOLASI KULTUR JAMUR
BAB 1 PENDAHULUAN ....................................................................................31
1.1. Latar Belakang .............................................................................................. 31
1.2. Tujuan ......................................................................................................... 32
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ...........................................................................33
2.1. Isolasi Kultur Jamur ...................................................................................... 33
2.2. Metode Gores ................................................................................................ 34
2.3. Metode Tuang dan Sebar .............................................................................. 35
2.4. Tempe ......................................................................................................... 36
2.5. Ikan Asin ....................................................................................................... 37
BAB 3 PELAKSANAAN PRAKTIKUM ........................................................... 38
3.1. Waktu dan Tempat ........................................................................................ 38
3.2. Alat dan Bahan ............................................................................................... 38
3.3. Prosedur Kerja ............................................................................................... 38
BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................................39
iv Universitas Sriwijaya
4.1. Hasil .............................................................................................................. 39
4.2. Pembahasan .................................................................................................... 40
5.1. Kesimpulan ................................................................................................... 41
5.2. Saran ............................................................................................................ 41
ISOLASI DAN KULTUR BAKTERI
BAB 1 PENDAHULUAN .....................................................................................43
1.1. Latar Belakang .............................................................................................. 43
1.2. Tujuan ......................................................................................................... 44
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA .........................................................................45
2.1. Isolasi dan Kultur Bakteri ............................................................................. 45
2.2. Metode Gores ................................................................................................ 46
2.3. Metode Tuang dan Sebar .............................................................................. 47
2.4. Air Mineral .....................................................................................................48
2.5. Air Comberan ................................................................................................ 49
3.1. Waktu dan Tempat ........................................................................................ 50
3.2. Alat dan Bahan ................................................................................................50
3.3. Prosedur Kerja ............................................................................................... 50
4.1. Hasil .............................................................................................................. 51
4.2. Pembahasan ................................................................................................... 52
BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN..................................................................53
5.1. Kesimpulan ................................................................................................... 53
5.2. Saran ...............................................................................................................53
PERHITUNGAN COLONY BAKTERI
BAB 1 PENDAHULUAN .....................................................................................55
1.1. Latar Belakang .............................................................................................. 55
1.2. Tujuan ..........................................................................................................56
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA .........................................................................57
2.1. PCA (Plate Count Agar) ............................................................................... 57
2.2. Karakteristik Bakteri ..................................................................................... 58
v Universitas Sriwijaya
2.3. Colony counter .............................................................................................. 59
3.1. Waktu dan Tempat ........................................................................................ 60
3.2. Alat dan Bahan ............................................................................................... 60
3.3. Prosedur Kerja ............................................................................................... 60
4.1. Hasil .............................................................................................................. 61
4.2. Pembahasan ................................................................................................... 62
BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN..................................................................63
5.1. Kesimpulan ................................................................................................... 63
5.2. Saran .............................................................................................................. 63
DAFTAR PUSTAKA
vi Universitas Sriwijaya
DAFTAR TABEL
Tabel 4.1.1. Peralatan yang Umum digunakan di Laboratorium .................... 10

Tabel 4.1.2. Peralatan yang Biasa digunakan untuk Sterilisasi ....................... 26
Tabel 4.1.3. Hasil Praktikum Metode Isolasi dan Kultur Jamur ..................... 39
Tabel 4.1.4. Hasil Praktikum Metode Isolasi dan Kultur Bakteri ................... 51
Tabel 4.1.5. Hasil Perhitungan Colony Bakteri ............................................... 61
vii Universitas Sriwijaya

INSTRUMENTASI LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
BAB 1
PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang

Suatu ilmu mikrobiologi adalah salah satu cabang ilmu biologi yang akan
mempelajari tentang mikroorganisme atau jenis organisme yang ukurannya terlalu
kecil untuk dapat dilihat dengan mata biasa atau sering disebut mikroba. Secara
umum ruang lingkup dari mikrobiologi merupakan mempelajari jenis bakteri,
fungi, virus, protozoa, dan alga. Mikrobiologi ini dimulai sejak ditemukannya
mikroskop oleh seorang Robert Hooke pada tahun 1665 yang melakukan
pengamatan terhadap fungi. Selanjutnya dengan memanfaatkan alat mikroskop
yang sudah dimodifikasi, morfologi bakteri dapat digambarkan oleh Antoni Van
Leeuwenhoek pada tahun 1667. Setelah itu mikrobiologi menjadi bidang yang
sangat penting dalam biologi setelah louis pasteur dan dapat melakukan dan
menjalankan proses fermentasi anggur (wine) dan melakukan pembuatan serum
rabies. Dan Laboratorium (disingkat lab) merupakan suatu bangunan ataupun
ruangan yang didalamnya dilengkapi dengan peralatan dan bahan-bahan yang
berdasarkan metode keilmuan tertentu untuk melakukan percobaan pengujian,
kalibrasi, dan atau produksi dengan bahan yang tertentu saja (Maulana, 2017).
Ruangan laboratorium dapat dibedakan sesuai dengan bidang keilmuan yang
dipelajari, misalnya laboratorium mikrobiologi yang akan berkecimpung dan
mempelajari jasad-jasad renik atau makhluk-makhluk hidup yang kecil.
Laboratorium mikrobiologi memiliki banyak alat yang perlu untuk kita ketahui
fungsinya, prinsip dan cara penggunaannya. Misalnya saja alat mikroskop yang
yang sering digunakan dilaboratorium mikrobiologi. Dengan pertolongan
mikroskop kita dapat mengamati mikroba yang tidak dapat dilihat dengan mata
telanjang. Mikroskop berfungsi untuk membesarkan benda yang dilihat sehingga
membantu untuk mengamati benda yang renik. Selain mikroskop pada
laboratorium mikrobiologi masih ada sejumlah alat khususnya seperti autoklaf,
oven, jarum ose, dan alat alat spenangas air, inkubator dan lain sebagainya baik
manual maupun otomatis. Sebelum praktikum dimulai kita perlu mengetahui jenis
alat- alat yang akan digunakan pada saat praktikum tersebut (Syarif 2017).
2 Universitas Sriwijaya
3
Selain beberapa hal itu, kita juga perlu mengetahui prosedur penggunaannya,
cara pembersihan dan fungsi dari masing-masing alat tersebut. Setelah itu, suatu
faktor utama lain yang dan harus diperhatikan pada saat melakukan praktikum
dilaboratorium mikrobiologi yaitu keselamatan kerja. Selain memahami terhadap
substansi, ketertiban dan kedisiplinan dilaboratorium mikrobiologi juga
keselamatan kerja sangat diperlukan agar terhindar dari kecelakaan kerja. Hal ini
perlu diperhatikan untuk dapat menghindari kontaminasi baik pribadi, pekerjaan
serta lingkungan kerja. Oleh karena itu, setiap mahasiswa harus menguasai
pengetahuan dasar dan prinsip kerja dari instrumen. Keberadaan instrumen ini
sangat penting guna untuk menunjang pemeriksaan mikrobiologi pada suatu
spesiman. Tanpa adanya instrumen yang baik maka tidak akan bisa melakukan
aktivitas atau pun pemerikasaan mikrobiologi. Pemanfaatan instrumen harus
sesuai dengan metode uji dan prosedur standar operasi instrumen sehingga
pemeriksaan dapat berlangsung dengan efektif dan cepat (Andriani, 2016).
1.2. Tujuan
Tujuan praktikum ini adalah untuk memperkenalkan instrumen yang
biasa digunakan untuk kegiatan mikrobiologis baik fungsi maupun
penggunaannya.
Universitas Sriwijaya
BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Alat-Alat Laboratorium Mikrobiologi

Mikrobiologi adalah sebuah cabang ilmu yang mempelajari makhluk hidup
yaitu jenis mikroorganisme. Objek kajiannya biasanya adalah semua makhluk
hidup yang perlu dilihat dengan mikroskop, misalnya bakteri, fungi, alga,
protozoa, dan archaea. Didalam pekerjaan mikrobiologi sering kali tidak terlepas
dari alat alat yang berada diruang laboratorium. Peralatan yang digunakan
didalam laborarotium mikrobiologi hampir sama dengan peralatan- peralatan yang
umumnya digunakan dilaboratorium kimia, yaitu berupa alat-alat gelas antara
lain: tabung reaksi, cawan petri, pipet ukur dan pipet volumetrik, labu ukur, labu
erlenmeyer, gelas piala, pH meter, gelas arloji, termometer, botol tetes, pembakar
spritus, kaki tiga dengan kawat asbes, dan rak tabung reaksi. Di samping
peralatan gelas tersebut, pada laboratorium mikrobiologi masih ada sejumlah alat
yang khusus antara lain: autoklaf, oven, mikroskop, jarum ose (inokulum), jarum
preparat, gelas objek, kaca penutup, keranjang kawat untuk sterilisasi, inkubator
untuk membiakkan mikroorganisme dengan suhu tertentu (Ahmad Yani 2016).
Pengenalan alat-alat laboratorium mikrobiologi meliputi macam-macam
alat, mengetahui nama alat, memahami bentuk, fungsi, serta cara kerja alat-alat
tersebut. Selain untuk menghindari kecelakaan dan bahaya saat dilaboratorium,
memahami cara kerja dan fungsi dari masing-masing alat juga dapat membantu
melaksanakan jalannya praktikum dengan sempurna. Setiap alat yang dirancang
dan dibuat dengan bahan yang berbeda antara satu sama lain dan mempunyai
fungsi yang berbeda. Sebagian besar peralatan untuk percobaan didalam
laboratorium terbuat dari gelas. Meskipun peralatan-peralatan tersebut yang telah
siap dipakai, tetapi didalam pemasangan alat untuk suatu percobaan yang kadang
kala dengan yang diperlukan sambungan dan dengan gelas ataupun dengan yang
membuat peralatan yang khusus dan yang sesuai dengan kebutuhan yang
diperlukan, seperti nya spektrofotometer untuk mengukur kepekatan suspensi atau
mengukur larutan, penangas air yang perlu untuk mencairkan medium, dan tabung
durhamuntuk melakukan penelitian suatu produk hasil fermentasi (Andre, 2015).
5
2.2. Bahan Kimia Laboratorium Mikrobiologi

Bahan laboratorium mikrobiologi disebut bahan atau media adalah segala
sesuatu yang diolah dan digunakan untuk pengujian, analisis, kalibrasi, dan/atau
produksi dalam skala terbatas, yang dibagi menjadi dua kategori yaitu: Bahan
khusus yaitu bahan yang penanganannya memerlukan perlakuan dan persyaratan
khusus, Bahan umum yaitu bahan yang penanganannya tidak memerlukan
perlakuan dan persyaratan khusus. Zat kimia atau bahan kimia yang juga biasa
dikenal sebagai zat murni merupakan suatu bentuk materi yang memiliki
komposisi kimia serta sifat yang karakteristik nya konstan. Dalam laboratorium
mikrobiologi ini, penyimpanan regent dan media merupakan penyimpanan strategi
rencana yang dilakukan dalam melakukan penyimpanan bahan dan zat yang benar
dan untuk mengurangi resiko kecelakaan di laboratorium. Pada bahan, pengurutan
secara alfabetis akan tepat jika dikelompokkan menurut sifat fisis dan sifat
kimianya terutama tingkat yang kebahayaannya tinggi untuk pengadministrasian.
Tempat penyimpanan bahan mikrobiologi harus bersih, kering, jauh dari sumber
panas atau memerlukan penyimpanan dalam suhu yang dingin dan dilengkapi
dengan ventilasi yang menuju ruang asap atau keluar ruangan (Yani, 2013).
Jenis bahan kimia yang tidak boleh disimpan dengan bahan kimia lain,
harus disimpan secara khusus dalam wadah sekunder yang telah terisolasi. Hal ini
bertujuan untuk mencegah terjadinya pencampuran dengan sumber bahaya lain
seperti api, gas beracun, ledakan atau degradasi kimia. Setiap bahan memiliki
sifat fisik dan kimia yang berbeda-beda satu dengan yang lain. Ada berbagai hal
yang harus diperhatikan dalam melakukan penyimpanan serta penataan bahan
kimia yaitu meliputi aspek pemisahan (segregation), tingkat resiko bahaya
(multiple hazards), pelabelan (labeling), fasilitas penyimpanan (storage facilities),
wadah sekunder (secondary containment), bahan kadaluarsa (outdate chemicals),
inventarisasi (inventory), serta informasi resiko bahaya (hazard information).
Beberapa prinsip yang perlu diperhatikan dalam penyimpanan bahan didalam
laboratorium yaitu seperti, aman yaitu bahan disimpan supaya aman dari
terjadinya pencurian, mudah dicari bertujuan untuk memudahkan mencari letak
dari suatu bahan yang diperlukan, perlu diberi tanda seperti dengan menggunakan
label pada setiap tempat penyimpanan dan perlengkapan (Gunawan, 2019).
6
2.3. NaoH
Natrium Hidroksida atau NaOH, atau terkadang disebut soda api merupakan
senyawa kimia dengan alkali tinggi. Sifat-sifat kimia membuatnya ideal untuk
digunakan dalam berbagai aplikasi yang berbeda. Natrium hidroksida adalah
bahan dasar populer yang digunakan di industri. Sekitar 56% Natrium hidroksida
yang dihasilkan digunakan oleh industri, 25% di antaranya digunakan oleh
industri kertas. Natrium hidroksida juga digunakan dalam pembuatan garam
Natrium dan detergen, regulasi pH, dan sintesis organik. Dengan ini digunakan
dalam proses produksi aluminium Bayer, secara massal natrium hidroksida paling
seringditangani sebagai larutan bera air. Karena lebih murah dan lebih mudah
untuk ditangani. Dan NaOH atau caustic soda digunakan dengan secara luas di
sektor industri dan rumah tangga. Pada industri, NaOH digunakan sebagai bahan
kimia basa yang untuk kebutuhan pembuatan bubur kertas dan kertas, tekstil, air
minum, proses pembuatan air aquadest dan aquabidest, sabun, deterjen, industri
pembuatan kaca, industri metalurgi dan pengolahan hasil tambang mineral logam,
& sebagainya Karena NaOH larut sempurna dalam air, maka senyawa kimia ini
dapat banyak digunakan sebagai pengendap (precipitant) dalam berbagai reaksi
kimia dan untuk kegiatan industri. NaOH merupakan basa kuat utama yang paling
sering ditangani sebagai sesuatu larutan yang berair (Kurt dan Bittner, 2017).
NaOH adalah senyawa basa yang terbentuk dari proses elektrolisa cairan
garam NaCl. Pada proses elektrolisa, ion klor dari senyawa NaCl yang larut dalam
air teroksidasi menjadi gas Cl2. Natrium hidroksida merupakan salah satu senyawa
kimia yang bersifat alkali/basa dan berfungsi untuk menghilangkan atau
membersihkan zat-zat dan kotoran-kotoran yang melekat pada serat sisal. pada
kutub anoda, kation H+ dari air tereduksi menjadi gas H2 di kutub katoda,
sehingga kation Na+ membentuk pasangan dengan anion OH– dari air, membentuk
senyawa NaOH di wadah elektrolisa. Di samping itu, al.Waktu perendaman alkali
natrium hidroksida juga dapat meningkatkan sifat mekanik serat dan
mempengaruhi komposisi kimia pada serat buah lontar. Selain itu, investigasi
variasi NaoH memiliki konsentrasi 1% sampai 10% natrium hidroksida pada serat
karena dapat memberikan pengaruh yang besar hidroksida dapat memberikan
dampak yang begitu signifikan terhadap sifat mekanik (Hamidi et al., 2014).
7
2.4. Alkohol
Alkohol adalah sejenis senyawa organik yang memiliki gugus hidroksil (-
OH) dan umumnya berbentuk ethyl alkohol ataupun etanol. Spesies alkohol yang
banyak digunakan adalah CH3CH2OH yang disebut metil alkohol (metanol),
C2H5OH yang diberi nama etil alkohol (etanol), dan C3H7OH yang disebut
isopropil alkohol (IPA) atau propanol-2. Dalam dunia perdagangan yang biasa
disebut alkohol adalah jenis dari etanol atau etil alkohol atau metil karbinol
dengan rumus kimia C2H5OH. Alkohol ini dikonsumsi secara umum dalam
bentuk minuman oleh mayoritas penduduk dunia dan telah menjadi permasalahan
global. Mengkonsumsi alkohol ini dapat mengakibatkan berbagai efek berbahaya
terhadap kesehatan, seperti kerusakan hati, gangguan kognitif, dan gangguan
perkembangan pada embrio. Selain itu, penyakit yang berhubungan dengan
mengkonsumsi alkohol kronis ini seperti diantaranya fatty liver disease, hepatitis,
fibroris, dan sirosis hepar, merupakan penyebab utama kematian bagi pecandu
alkohol. Apabila mengkonsumsi alkohol selama kehamilan, dapat menyebabkan
kelainan otak dan wajah mengalami kerusakan, keterlambatan pertumbuhan dan
kognitif, serta komplikasi neurologis dan prilaku (Retnoningrum et al., 2012).
Fetal alkohol spectrum disorders dapat digunakan sebagai istilah yang
komprehensif yang mencakup dalam keragaman fenotipe akibat paparan alkohol
prenatal. Alkohol atau yang sering disebut etanol merupakan zat psikoaktif yang
dapat menyebabkan ketergantungan bagi yang mengkonsumsinya. Prevalensi
gangguan yang diakibatkan bagi penggunaan alkohol adalah 0,8% dan prevalensi
ketergantungan alkohol adalah 0,7% pada pria maupun pada wanita. Suatu zat ini
dapat merusak organ tubuh melalui proses metabolismenya. Penggunaan suatu
alkohol dan rokok secara bersamaan ataupun aktif maupun pasif dapat
menyebabkan efek negative pada tubuh manusia. Zat alkohol yang merupakan
salah satu zat teratogen yang dapat menyebabkan terjadinya gangguan pada
kehamilan. Alkohol telah terbukti dapat menyebabkan kerusakan hepatoseluler
melalui mekanisme yang berhubungan dengan suatu metabolisme etanol didalam
suatu hepatosit dan malnutrisi. Apabila mengkonsumsi alkohol selama kehamilan,
dapat menyebabkan kelainan otak dan wajah mengalami kerusakan, serta
keterlambatanpertumbuhan dan kognitif pada jabang bayi dan ibu (Susanti.2014).
2.5. Colony Counter
Colony counter yang merupakan alat yang digunakan untuk melakukan
perhitungan jumlah sel serta dapat digunakan untuk konsentrasi sel yang rendah
yang dimana alat ini memiliki kelebihan yaitu dapat digunakan secara cepat. Alat
ini juga dapat digunakan untuk menghitung koloni bakteri yang ditimbulkan di
media yang disimpan dalam petridish. Prinsip kerja yang diterapkan pada alat ini
yaitu seletah menekan tombol “ON”, kemudian energi cahaya pada wolfugel disks
lalu letakkan cawan petri yang berisi bakteri. Atur alat penghitung pada posisi
(000) dan mulai menghitung dengan menggunakan jarum petunjuk sambil melihat
jumlah koloni pada layar hitung. Colony counter ini terbagi menjadi dua jenis
yaitu otomatis dan semi otomatis. Sama seperti alat pada umumnya yang memiliki
kelebihan dan juga kelemahan. Kelebihan dari alat penghitung ini yaitu berfungsi
untuk menghitung mikroba dan menghitung bakteri secara langsung selama
mengobservasi morfologi dari bakteri atau mikroba yang sedang tumbuh.
Kelemahannya yaitu membutuhkan waktu yang relatif lama untuk menghitung
koloni dikarenakan penghitungan dilakukan secara manual dan jika ada konsleting
pada alat tersebut hasil perhitungan akan menjadi tidak akurat (Sethi et al., 2012).
Pada colony counter, perhitungan jumlah koloni bakteri ini menggunakan
dengan sistem Arduino uno smd dengan minimum sistem probe sebagai
penghitung koloni bakteri. Alat penghitung koloni ini dapat bekerja dengan baik
dan memanfaatkan lup untuk memperbesar koloni bakteri yang terdapat pada
cawan petri. Penghitungan coloni ini menggunakan alat mata untuk melihat
koloni bakteri pada cawan petri, dengan bantuan lup (kaca pembesar) dan sumber
cahaya berupa LED. Colony counter yang ada pada umumnya masih bersifat
manual dan karena itu hanya mengandalkan daya ingat petugas yang ada
dilaboratorium. Proses perhitungan yang masih dangat manual seperti ini akan
dapat berdampak pada lambatnya proses penghitungan dan rendahnya kualitas
hasil yang didapat. Dengan adanya proses seperti ini maka dengan itu diperlukan
otomasisasi perhitungan dengan menggunakan alat yang seperti perancangan
berbasis mikrokontroler. Perhitungan jumlah koloni bakteri dengan menggunakan
metode pour plate, dengan metode ini yang diharapkan dapat meminimalisir
kesalahan human yang eror dalam perhitungan koloni (Wicaksono et al., 2018).
2.6. Erlenmeyer
Labu Erlenmeyer adalah wadah berbentuk kerucut dengan leher, sehingga
anda dapat memegang labunya atau mencantelkan sebuah penjepit atau
menggunakan stopper. Labu erlenmeyer digunakan untuk mengukur, mencampur
dan menyimpan cairan. Dan bentuknya membuat botol ini sangat stabil. Alat
laboratorium ini adalah salah satu alat yang paling umum digunakan dalam
laboratorium kimia. Kebanyakan labu erlenmeyer terbuat dari kaca borosilikat
sehingga erlenmeyer dapat dipanaskan dengan api atau autoclaved. Ukuran yang
paling umum dari Labu erlenmeyer adalah 250 ml dan 500 ml. Labu erlenmeyer
juga terdapat dalam ukuran 50 125, 250, 500, 1000 ml. Labu erlenmeyer dapat
disegel dengan gabus atau stopper atau tempat plastik atau film parafin atau watch
glass di atas mereka. Erlenmeyer adalah peralatan gelas (Glass ware equipment)
yang seringkali di gunakan untuk analisa dalam laboratorium. Bentuknya bulat
dan berbentuk kerucut dibagian atasnya. Disalah satu sisi, ada tanda untuk
menunjukkan ukuran volume isi, dan memiliki spot yang dapat diberi label
dengan pensil . leher dan mulut botol yang sempit pada erlenmeyer dan yang
bertujuan agar mudah di pegang, serta mengurangi penguapan dan dapat bisa di
tutup dengan mudah dan rapat. Sedangkan dasar permukaan yang rata Bisa
membuatnya dengan semakin fleksibel di letakan dimana saja (Mittal et al., 2016)
Labu erlenmeyer Kebanyakan terbuat dari kaca borosilikat sehingga mereka
dapat dipanaskan di atas api atau di autoklaf. Ukuran yang paling umum mungkin
adalah termos erlenmeyer 250 ml dan 500 ml. Namun ada juga Erlenmeyer yang
berukuran 50 ml, 125 ml, dan 1000 ml. Biasanya erlenmeyer tidak mempunyai
tutup. Untuk penutup dapat menyegel mereka dengan plastik atau gabus
penyumbat. Namun ada juga Erlenmeyer yang khusus di buat dengan penutup
yang juga terbuat kaca. Prinsip kerja pada labu Erlenmeyer yang di dengan tutup
asah digunakan untuk pencampuran reaksi dengan cara pengocokkan yang kuat
sedangkan labu erlenmeyer tanpa tutup asah yang biasanya digunakan untuk
titrasi dengan pengocokan lemah hingga sedang. Perawatannya adalah dengan
cara menggunakan lap halus saat mengangkat erlenmeyer dengan kompor listrik.
labu erlemenyer adalah suatu alat gelas laboratorium yang salah satu fungsinya
adalah untuk menjadi wadah dari bahan kimia yang cair (Tim Pengampu, 2015).
BAB 3
PELAKSANAAN PRAKTIKUM
3.1. Waktu dan Tempat

Praktikum Dasar-Dasar Mikrobiologi Akuatik dilaksanakan pada hari Jumat
tanggal 10 Oktober pada pukul 14.30.sampai dengan selesai, dilaksanakan secara
online melalui aplikasi tatap muka zoom.
3.2. Alat dan Bahan

Adapun alat dan bahan yang digunakan pada Praktikum Dasar-Dasar
Mikrobiologi Akuatik adalah pena,buku tulis dan handphone,sedangkan bahan
nya tidak ada
3.3. Prosedur Kerja

Adapun prosedur kerja yang dilakukan pada praktikum ini sebagai berikut.
1. Hal yang pertama kali yang harus dilakukan adalah dengan menonton video
yang telah dikirim oleh asisten praktikum melalui grup whatsapp
2. Kemudian membuka modul yang telah diberikan oleh asisten prsktikum
3. Memahami materi apa yang ada didalam video
4. Kemudian mencatat apa saja inti dari video tersebut yang merupakan
meteri untuk laporan pertama
5. Melaksanakan praktikum sesuai modul
BAB 4
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1. Hasil
Adapun hasil dari praktikum Instrumentasi Alat Laboratorium adalah sebagai
berikut.
Tabel 4.1.1. Peralatan yang Umum digunakan di Laboratorium Mikrobiologi
No Nama Alat Gambar Alat Fungsi
1 Erlenmeyer Wadah untuk mencampurkan larutan

tertentu serta sebagai wadah nitrat
dalam titrasi.
2 Gelas Kimia Untuk mengaduk, mencampurkan,

danmemanaskancairan
3 Pipet Tetes Alat pemindah Cairan dalam Jumlah

kecil,Hanya bisa memindahkan
cairan dalamjumlah tetesan
5 Tabung Wadah untuk mereaksikan bahan-

Reaksi bahan kimia
12
6 Pipet Mengambil larutan dengan

Volumetri volume tertentu sesuai dengan
table pada bagian pipet yang
mengembung
7 Labu Ukur Wadah untuk membuat dan

mengencerkan larutan
8 Mortal dan Alat untuk mengerusatau

Alu menghaluskan zat yang mash
berupa padatan atau kristal
10 Kaki Tiga Penahan kawat kasandan

penyangga ketika proses
pemanasan
11 PenjepitTabung Menjepit tabung

tabung,mengambilkertas saring
dan benda- benda lab lain saat
panas
13
12 Termomete r Untuk mengukur suhu suatu

larutandan desikat untuk
mendinginkan alatdan bahan
yang digunakan
13 Kaca Arloji Wadah bahan yangakan

ditimbang,penutp wadah saat
pross punguapan
14 Plat Tetes Wadah bahan untukpengujian

keasamansuatu larutan atau
mereaksikan larutan
15 Corong Untuk memindahkancairan

dari wadah satu ke wadah
lain,meletakkan kertas saring
pada proses penyaringan
16 Botol Semprot Sebagai wadahaquades
14
17 Kawat Kasa Menahan beaker ataulabu pada

pemanasanmenggunakan
Bunsen atau pemanasspiritus
18 Batang Membantu mencampurkan zat

Pengaduk yang dilarutan
19 Oven Memanaskan atau

Laboratorium mengeringkan peralatan
laboratorium atau objek-objek
lainnya
20 Colony Menghitung koloni bakteri

Counter yang ditumbuhkan di media
yang disimpandalam cawan
petridish
15
4.2. Pembahasan
Berdasarkan hasil praktikum yang telah dilakukan mengenai alat-alat
dilaboratorium mikrobiologi akuatik, setiap alat-alat memiliki fungsinya
masing masing. Dimana alat-alat dalam praktikum mikrobiologi umum dapat
dibagi menjadi alat-alat sterilisasi dan mikroskop. Tabung reaksi (test tube,
culture tube) merupakan wadah mereaksikan dua atau lebih larutan atau bahan
kimia. Wadah pengembangan mikroba, misalnya dalam pengujian jumlah bakteri.
Mikroskop cahaya, merupakan salah satu alat yang digunakan untuk melihat
mikroorganisme. Pada kedua video yang telah ditonton sebelumnya dijelaskan
peralatan laboratorium dibagi menjadi tiga, yaitu peralatan gelas, peralatan non
gelas, dan peralatan pemanas. Peralatan gelas biasanya digunakan untuk wadah,
mereaksikan zat, mengukur volume, dan lain-lain. Peralatan non gelas yang
dimana bahan penyusun non gelas yaitu logam, porselen/keramik, kayu dan
plastik. Alat dari kayu seperti rak tabung, rak pipet volumetri, rak buret, penjepit
tabung, dan lainnya. Alat plastik seperti pompa suntik (siringe), gelas kimia
plastik, gelas ukur plastik, botol semprot, selang plastik. Peralatan pemanas
seperti pembakar gas, kaki tiga, segitiga keramik, krusibel, dan cawan penguap.
Penataan alat di laboratorium setidaknya dibedakan menurut kriteria
masing masing alat tersebut. Peralatan laboratorium mikrobiologi dibagi menjadi
tiga kategori, kategori pertama adalah peralatan yang cara pengoperasian dan
perawatannya mudah, resiko penggunaan rendah, akurasi atau kecermatan
pengukurannya rendah, serta sistem kerja sederhana yang pengoperasiannya
cukup dengan menggunakan panduan. Kategori kedua adalah peralatang yang
carapengoperasian dan perawatannya sedang, resiko penggunaan sedang,
akurasi/kecermatan pengukurannya sedang, serta sistem kerja yang tidak begitu
rumit yang pengoperasiannya memerlukan pelatihan khusus atau tertentu.
Kategori ketiga adalah peralatan yang cara pengoperasian dan perawatannya
rumit, resiko penggunaan tinggi, akurasi/kecermatan pengukurannya tinggi, serta
sistem kerja rumit yang pengoperasiannya memerlukan pelatihan khusus atau
tertentu dan bersertifikat. Zat kimia atau bahan kimia, yang juga dikenal sebagai
zat murni adalah suatu bentuk materi yang memiliki komposisi kimia dan sifat
karakteristik konstan. Setiap bahan memiliki sifat fisik dan kimia yang berbeda.
BAB 5
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1. Kesimpulan
Adapun kesimpulan yang didapatkan dari praktikum instrumentasi alat
laboratorium ini adalah :
1. Isolasi mikroba adalah memisahkan suatu jenis mikrobia dengan jenis
mikroba lainnya dengan asal mikroba yang terdiri dari berbagai macam
spesies.
2. Fungi terbagi menjadi tiga antara lain khamir, kapang dan cendawan.
3. Beberapa cara yang dilakukan untuk mengisolasi mikroorganisme khususnya
jamur antara lain dengan metode Hansen, pengenceran- penaburan, metode
linder, dan micromanipulator method.
4. Jamur tidak mempunyai akar, batang, daun dan sistem pembuluh seperti pada
tumbuhan tingkat tinggi.
5. Jamur tidak mempunyai akar, batang, daun dan sistem pembuluh seperti pada
tumbuhan tingkat tinggi
5.2. Saran
Saran saya untuk praktikum Dasar-Dasar Mikrobiologi Akuatik ini ke
depannya adalah semoga pelaksanaan praktikumnya bisa dilakukan secara offline
dan paparan materinya agak lebih diperbanyak, dan untuk diberikan materi video
agar praktikan lebih antusias dalam jalannya praktikum.
STERILISASI ALAT
BAB 1
PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang

Dengan berkembangnya ilmu pengetahuan yang semakin tinggi maka
semakin tinggi pula rasa ingin tahu manusia terhadap hal-hal baru yang ada
dialam ini. Saat ini dengan ilmu pengetahuan manusia dapat melakukan berbagai
penelitian, baik penelitian yang berhubungan dengan manusia, penelitian tentang
hewan, penelitian tentang tumbuhan, bahkan penelitian tentang mikroorganisme
yang tidak dapat dilihat dengan mata telanjang. Ilmu yang mempelajari tentang
mikroorganisme disebut dengan mikrobiologi. Mikrobiologi adalah ilmu yang
mempelajari mikroba. Tujuan utama pengendalian mikroorganisme antara laian
mencegah penyebaran penyakit dan infeksi. Mikrobiologi adalah salah satu
cabang ilmu dari biologi dan memerlukan ilmu pendukung lain yaitu kimia, fisika,
dan biokimia. Mikrobiologi sering disebut ilmu praktik dari biokimia. Praktik ini
bertujuan untuk melihat dan meneliti suatu jenis mikroorganisme. Untuk melihat
dan meneliti mikroorganisme tersebut dibutuhkan alat-alat yang dapat menunjang
penelitian tersebut. Kita harus perlu mengenal alat-alat laboratorium mikrobiologi
dan serta cara atau teknik penggunaan alat-alat tersebut. (Machmud, 2012).
Berbagai jenis mikroorganisme yang dapat menyebabkan banyak kerusakan.
Pengendalian mikroorganisme ini ditujukan untuk dapat mencegah penyebaran
penyakit, membasmi mikroorganisme pada inang, serta mencegah pembusukan
dan kerusakan bahan. Mikroorganisme dapat dihambat dan dibunuh melalui
beberapa cara yaitu secara fisik dan kimia. Secara fisik dengan melalui suhu,
tekanan, radiasi, dan penyaringan, misalnya sterilisasi, pembakaran atau sanitasi.
Secara kimia dengan melalui perubahan komposisi molekul misalnya dengan
senyawa fenolik, alkohol, klor, iodium, dan etilen oksida. Pengenalan alat ini
secara umum mencakup spesifikasi alat, prinsip kerja, dan kegunaan dari masing-
masing alat. Pada dasarnya setiap alat memiliki nama yang dapat menunjukkan
karakteristik dari alat tersebut. Sebagai contoh penamaan pada alat-alat yang
berfungsi untuk mengukur biasanya diakhiri dengan kata “meter”, misalnya
thermometer yang biasanya digunakan untuk mengukur suhu (Khairani, 2015).
19
Kemampuan penggunaan alat laboratorium merupakan sikap yang dapat

ditunjukkan dalam bekerja dan berfikir untuk mendapatkan pengetahuan sains
pada kegiatan eksperimen yang dilakukan didalam laboratorium untuk mencapai
tujuan pembelajaran. Sterilisasi merupakan proses penghilangan ataupun
membunuh mikroorganisme benda dan peralatan dengan tujuan untuk menjaga
peralatan dilaboratorium tetap bersih atau steril, serta mencegah terjadinya
kontaminasi. beberapa metode yang biasa digunakan pada saat sterilisasi yaitu
antara lain metode fisik, misalnya sterilisasi dengan panas, meliputi penggunaan
panas lembab (autoklaf atau uap bertekanan dan uap langsung), dan penggunaan
panas kering (oven atau udara panas dan pembakaran) metode kimia, yaitu
menggunakan agen-agen kimia, misalnya metil bromida (Madigan 2014).
1.2. Tujuan
Tujuan praktikum ini adalah mengetahui metode sterilisasi dan penerapannya
di laboratorium mikrobiologi.
BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Pengertian Sterilisasi

Sterilisasi merupakan suatu proses yang penghilangan ataupun membunuh
mikroorganisme (protozoa, fungi, bakteri, mycoplasma, virus) dalam benda atau
peralatan dengan tujuan untuk menjaga peralatan didalam laboratorium tetap
bersih/steril, serta mencegah terjadinya kontaminasi. Sterilisasi adalah upaya
penghilangan semua mikroba baik itu spora peralatan laboratorium yang akan
dilakukan sterilisasi memerlukan bahan pengemas. Kemasan adalah suatu benda
yang digunakan sebagai wadah atau tempat yang dikemas dan tujuan untuk dapat
mencegah dan mengurangi kerusakan, melindungi bahan yang ada didalamnya
dari pencemaran serta gangguan fisik seperti gesekan, benturan dan getaran
Beberapa metode yang umum digunakan pada saat sterilisasi yaitu antara lain
metode fisik, misalnya sterilisasi dengan panas, meliputi penggunaan panas
lembab (autoklaf atau uap bertekanan dan uap langsung), dan penggunaan panas
kering (oven atau udara yang panas dan pembakaran) metode kimia, yaitu
menggunakan agen kimia, dan misalnya metil bromida (Williamson, 2016).
Sterilisasi secara kimia merupakan metode desinfeksi alat atau instrumen
yang harus dilakukan dengan cara meredamnya dalam larutan desinfektan.
Sterilisasi panas lembab dapat dilakukan dengan penggunaan autoklaf (uap
bertekanan) dan penggunaan uap yang langsung (tindalisasi atau sterilisasi fraksi).
Sterilisasi yang panas kering dapat dilakukan dengan cara oven (udara panas) dan
pembakaran. Sterilisasi pembakaran yang sangat berpengaruh terhadap sifat fisik,
kimia dan biologi tanah, dan dapat memiliki yang berpengaruh dengan yang akan
bertahan untuk jangka waktu yang lama. Sterilisasi kimia ini dilakukan dengan
cara menggunakan agen-agen kimia. Sterilisasi kimia ini dapat lebih selektif
dibanding metode fisika, sehingga dikenal dengan berbagai substansi kimia yang
bertindak sebagai bakterisida, sporisida, virisida, dan fungisida. Proses sterilisasi
yang sangat penting sekali adalah dilakukan dengan cara, seperti di rumah sakit
yang digunakan sebagai pencegahan infeksi nosokomial. Keberhasilan usaha
tersebut dan dipengaruhi oleh kualitas, kualitas mikrorganisme (Septiari, 2012).
21
2.2. Macam Macam Alat Sterilisasi

Berdasarkan prinsipnya sterilisasi dapat dilakukan dengan 3 cara yaitu secara
mekanik, kimia, dan fisik. Sterilisasi secara mekanik dengan filtrasi menggunakan
suatu saringan yang berpori sangat kecil (0,22 mikron atau 0,45 mikron) sehingga
mikroba tertahan pada saringan tersebut. Sistem pada filter, seperti pada saringan
lain adalah melakukan seleksi terhadap partikel-partikel yang lewat dalam hal ini
yaitu mikroba. Sterilisasi secara kimia biasanya dengan menggunakan senyawa
desinfektan seperti alkohol, sterilisasi kimia dilakukan dengan menggunakan agen
kimia. Sterilisasi ini dapat lebih selektif yang dibanding metode fisika, sehingga
dikenal berbagai substansi kimia yang bertindak sebagai bakterisida, sporisida,
virisida, dan fungisida. selain itu juga suhu dan kondisi operasi pengeringan dapat
diatur, kondisi cuaca yang tidak berpengaruh terhadap proses pengeringan
menggunakan pengering oven. Beberapa jenis barang yang tidak dapat
disterilisasikan dengan uap, paling baik disterilkan dengan panas kering, misalnya
petrolatum jelly, minyak mineral, lilin, wax, serbuk talk. Karena panas kering
kurang efisien dibanding panas lembab, pemaparan lama (Hadioetomo, 2018).
Sterilisasi dengan cara fisik dapat dilakukan dengan pemanasan dan
pemijaran. Pemanasan meliputi penggunaan panas lembab (autoklaf atau uap
bertekanan dan uap langsung), dan juga penggunaan panas kering (oven/udara
panas dan pembakaran). Pemijaran api langsung dengan membakar alat pada api
secara langsung, contoh alat jarum inokulum, pinset, batang L, sterilisasi panas
lembab bisa dilakukan dengan penggunaan autoklaf (uap bertekanan) dan
penggunaan uap langsung (tindalisasi atau sterilisasi fraksi). Selain pemanasan
kering, mikroorganisme dapat dibunuh oleh proses oksidasi. Pada umumnya suhu
yang lebih tinggi dan waktu pemaparan sangat dibutuhkan pada saat melakukan
proses dengan uap dibawah tekanan. Sterilisasi dengan panas kering
membutuhkan pemaparan pada suhu 150oC sampai 170C selama 1-4 jam.
Umumnya alat yang digunakan pada mikrobiologi adalah oven. Waktu dan suhu
yang umum digunakan pada oven 140C (285F) sampai 3 jam, karena suhunya
yang tinggi sterilisasi panas kering tidak dapat digunakan untuk alat-alat gelas
yang membutuhkan keakuratan. Suhu yang tinggi membunuh mikroorganisme
ditujukan untuk membunuh endospora, yaitu sel resisten (Muhammad, 2019).
22
2.3. Sterilisasi Fisika

Sterilisasi dengan cara fisika dapat dilakukan dengan pemanasan dan
penyinaran. Radiasi ionisasi digunakan untuk mensterilkan alat-alat berupa bahan
plastik seperti kateter, plastik spuit injeksi, dan sarung tangan sebelum digunakan.
Contoh radiasi ionisasi adalah metode pada penggunaan microwave, dengan
menggunakan panjang gelombang pendek dan sinar gamma high energy.
Pemijaran api langsung dengan membakar alat pada api secara langsung, contoh
alat: jarum inokulum, pinset, batang L, metode ini dilakukan dengan memanaskan
alat biasanya berupa ose diatas api bunsen sampai ujung ose memijar. Sterilisasi
kering yaitu sterilisasi dengan oven, kira-kira 60-1800oC. Sterilisasi panas kering
cocok untuk alat yang terbuat dari kaca, misalnya erlenmeyer, tabung reaksi,
Beberapa barang yang tidak dapat disterilisasikan dengan uap, paling baik
disterilkan dengan panas kering, misalnya petrolatum jelly, minyak mineral, lilin,
serbuk talk. Uap air panas konsep ini mirip dengan mengukus. Bahan yang
mengandung air lebih tepat menguntungkan metode ini agar supaya tidak terjadi
nya dehidrasi yang tinggi. Uap air panas bertekanan menggunakan autoklaf.
Penyinaran dengan UV Sinar Ultra Violet juga dapat digunakan untuk proses
sterilisasi. Pemijaran ini digunakan untuk mensterilkan spatula (Annis, 2013).
Sterilisasi dengan panas lembab pada umumnya dapat dilakukan dengan
penggunaan alat autoklaf atau uap bertekanan dan penggunaan uap langsung
(tindalisasi atau sterilisasi fraksi). Sterilisasi dengan panas kering biasanya paling
banyak dilakukan dengan menggunakan oven atau udara panas dan pembakaran.
Proses pembakaran dapat dilakukan hanya untuk alat-alat yang terbuat dari bahan
logam atau kaca dengan cara melewatkan alat-alat tersebut diatas api bunsen
namun tidak sampai memijar, misalnya melewatkan mulut tabung yang berisi
kultur bakteri diatas api bunsen. Sterilisasi pembakaran sangat berpengaruh
terhadap sifat fisik kimia dan biologi tanah, dan pembakaran memiliki pengaruh
yang akan bertahan untuk jangka waktu yang lama. Beberapa penelitian dapat
diketahui bahwa tanah memiliki berbagai macam syarat-syarat seperti pH tanah,
kandungan bahan organik, N total tanah biomassa mikrobia, jumlah dan
komposisi populasi mikrobia seperti fungi, bakteri, aktinomisetes dan keberadaan
mikrobia tertentu (spesies) dipengaruhi oleh pembakaran (Horikoshi, 2017).
23
2.4. Sterilisasi Kimia

Sterilisasi dengan cara kimia yang merupakan metode desinfeksi alat atau
instrumen yang dilakukan dengan cara meredamkan alat kedalam larutan
desinfektan. Biasanya sterilisasi ini menggunakan senyawa desinfektan antara lain
alkohol. Proses sterilisasi ini sangat penting sekali dilakukan, seperti di Rumah
Sakit yang dilakukan sebagai pencegahan infeksi nosokomial. Biasannya alat
yang di sterilisasikan adalah alat bedah yang di gunakan para dokter untuk oprasi.
Keberhasilan dari usaha tersebut akan dipengaruhi oleh kualitas, dan kuantitas
miroorganisme yang terdapat pada bahan, alat serta lingkungan kerja. Proses
sterilisasi baik secara kimia maupun dengan cara yang lain, sebelumnya alat dan
bahan yang akan disterilkan harus dilakukan proses dekontaminasi, pencucian,
dan pembiasan. Cara melakukan sterilisasi secara kimia dengan menggunakan
klorin adalah Meletakkan peralatan yang sudah dicuci dalam keadaan yang kering,
merendam seluruh alat dalam larutan klorin 0,5% selama sekitar 20 menit
membilas alat tersebut dengan air matang dan angin-anginkan sampai kering,
kemudian simpan ditempat DTT (Desinfeksi Tingkat Tinggi), setelah alat tersebut
kering, pindahkan ke wadah DTT dan di tutup sampai rapat (Hidayat, 2008).
Antiseptik kimia biasanya dibiarkan saja menguap seperti halnya alkohol.
Umumnya isopropil dari alkohol 70-90% dalah yang termurah namun merupakan
antiseptik yang sangat efisien dan efektif, namun isopropil ini tidak efektif
terhadap spora. Penambahan yodium pada alkohol akan meningkatkan daya
desinfeksi alkohol. Solusi yang terbaik untuk dapat membunuh spora adalah
dengan mecampurkan formaldehid dengan alkohol, tetapi solusi ini terlalu toksik
untuk dipakai sebagai antiseptik. Sterilisasi dengan cara ini dapat dilakukan
dengan menggunakan agen-agen kimia. Sterilisasi ini dapat lebih selektif
dibanding metode fisika, sehingga dikenal berbagai substansi kimia yang
bertindak sebagai bakterisida, sporisida, virisida dan fungisida. Formaldehida dan
metil bromida merupakan contoh agen-agen kimia yang umum digunakan untuk
sterilisasi tanah. Formaldehida berupa cairan yang larut air tak berwarna, dapat
membuat pedih atau iritasi terhadap mata dan membran mucous, digunakan
terutama untuk pengendalikan jenis fungi. Metil bromida yang digunakan berupa
gas (fumigasi), bersifat letal yang terhadap manusia dan hewan (Lestari, 2016).
24
2.5. Sterilisasi Mekanik

Sterilisasi mekanik dengan penyaringan (filtrasi) yaitu teknik sterilisasi
dengan menggunakan suatu saringan yang berpori sangat kecil (0,22 mikron atau
0,45 mikron). Filtrasi adalah proses penyaringan untuk menghilangkan zat padat
yang tersuspensi dari air melalui media berpori. Filtrasi dapat juga diartikan
sebagai proses pemisahan liquid-liquid dengan cara melewatkan liquid tersebut
melalui media berpori atau bahan-bahan berpori untuk menyisihkan dan
menghilangkan sebanyak-banyaknya butiran-butiran halus zat padat yang
tersuspensi dari liquid. Cairan yang akan dilakukan sterilisasi dilewatkan ke suatu
saringan (ditekan dengan gaya sentrifugasi atau pompa vakum) sehingga mikroba
akan tertahan pada saringan tersebut. Sterilisasi secara mekanik ini adalah
sterilisasi bahan yang tidak tahan panas, seperti misalnya ekstrak tanaman, media
sintetik tertentu, dan antibiotik yang dilakukan dengan penyaringan. Dasar dari
metode ini semata-mata ialah proses mekanis ini juga yang membersihkan larutan
atau suspensi dari segala organisme hidup dengan cara melewatkannya pada suatu
saringan, misalnya bisa menggunakan saringan seitz (Raudah et al., 2017).
Prinsip kerja filtrasi dengan aliran vertikal dan filtrasi dengan aliran
horizontal. Filtrasi dengan aliran vertikal dapat dilakukan dengan membagi
limbah ke beberapa filter-bed (2 atau 3 unit) secara bergantian. Sedangkan filtrasi
dengan aliran horizontal dilakukan dengan cara mengalirkan limbah melewati
media filter secara horizontal. Didalam dunia mikrobiologi penyaringan secara
fisik paling banyak digunakan adalah dalam penggunaan filter khusus misalnya
filter berkefeld, filter chamberland, dan filter seitsz. Jenis filter yang dipakai
tergantung dari tujuan penyaringan dan benda yang akan disaring. Penyaringan
dapat dilakukan dengan mengalirkan gas ataupun cairan melalui suatu bahan
penyaring yang memiliki pori_pori cukup kecil untuk dapat menahan
mikroorganisme dengan ukuran tertentu. Alat saringan akan tercemar sedangkan
cairan atau gas yang melaluinya akan steril. Alat saring tertentu juga ada yang
mempergunakan bahan yang dapat mengabsorbsi mikroorganisme. Saringan
umumnya dipakai tidak dapat menahan jenis virus. Oleh karena itu, sehabis
penyaringan medium masih harus dipanaskan dalam autoklaf. Penyaringan
dilakukan untuk mensterilkan substansi yang peka terhadap panas (Putri, 2014)
25
2.6. Autoclave
Autoklaf merupakan salah satu jenis alat yang biasanya terdapat
dilaboratorium yang digunakan dalam teknik sterilisasi panas. Autoklaf adalah
alat pemanas tertutup yang memiliki fungsi untuk mensterilkan suatu benda
dengan menggunakan uap bersuhu dan bertekanan tinggi biasanya suhu yang
digunakan 121 0C dan bertekanan 15kg/cm2 yang dilakukan selama kurang lebih
15 menit. Penurunan tekanan pada autoklaf dilakukan dengan tujuan untuk
meningkatkan suhu didalam autoklaf dan tidak dimaksudkan untuk membunuh
mikroorganisme. Namun, dari suhu yang tinggi inilah yang akan dapat membunuh
suatu mikroorganisme. Autoklaf adalah suatu bejana yang dapat ditutup, yang di
isi dengan uap panas dengan tekanan tinggi. Suhu didalamnya dapat mencapai
115℃ hingga 125℃ dan tekanan uapnya mencapai 2 sampai 4 atm. Alat ini
ditujukan untuk membunuh endospora, yaitu sel resisten yang diproduksi oleh
bakteri, sel ini tahan terhadap pemanasan, kekeringan, dan antibiotik. Pada
beberapa spesies yang sama, endospora dapat bertahan pada kondisi lingkungan
yang dapat membunuh sel vegetatif bakteri tersebut. Endospora dapat dibunuh
pada suhu 100 oC, yang merupakan titik didih air pada tekanan atmosfer normal.
suhu 121 oC, endospora dapat dibunuh dalam waktu 5 menit (Nurhabibah, 2014).
Keunggulan dari autoklaf adalah dapat mensterilkan alat dan bahan hingga
tidak ada lagi organisme yang masih hidup. Untuk sterilisasi autoklaf memerlukan
waktu yang singka dan menggunakan suhu dan tekanan yang tinggi sehingga
memberikan kekuatan yang lebih besar untuk membunuh sel dibandingkan
dengan udara panas biasa. Alat ini memiliki kelebihan yaitu alat perebus yang
bertekanan tinggi. Prinsip kerjanya yaitu mensterilkan bahan dengan
menggunakan tekanan uap optimum untuk sterilisasi pada suhu 121C dan
tekanan 15kg/cm2 . Pada saat sumber panas dinyalakan, air didalam autoklaf lama
kelamaan akan mendidih dan uap air yang terbentuk mendesak udara yang
mengisi autoklaf. Setelah semua udara dalam autoklaf diganti dengan uap air,
katup uap/udara akan ditutup sehingga tekanan udara dalam autoklaf naik. Pada
saat tercapai tekanan dan suhu yang sesuai, maka proses sterilisasi dimulai dan
timer mulai menghitung mundur. Setelah proses sterilisasi selesai, sumber panas
akan dimatikan tunggu sampai tekanan kompartemen (Kurniawansyah, 2016)
BAB 3

Praktikum Dasar-Dasar Mikrobiologi Akuatik dilaksanakan pada hari Jumat
tanggal 21 Oktober 2022 pada pukul 14.30 WIB sampai dengan selesai,
dilaksanakan secara offline di laboratorium Mikrobiologi Akuatik.
3.2. Alat dan Bahan

Adapun alat dan bahan yang digunakan pada praktikum sterilisasi Alat adalah
alat autoklaf, oven laboratorium, busen, erlemenyer, cawan petri, jarum ose dan
bahannya kertas dan aluminium foil.
3.3. Prosedur Kerja

Adapun prosedur kerja yang dilakukan pada praktikum ini sebagai berikut:
1. Asisten praktikum memberikan modul dan penjelasan mengenai sterilisasi
peralatan beserta peralatan beserta fungsi dan penggunaannya pada grub chat
whatsApp
2. para praktikum diberikan arahan untuk membaca dan mencatat penjelasan
yang ada di modul yang telah di berikan
3. Lalu bungkus cawan petri dan jarum ose dengan kertas
4. Setelah itu masukkan alat yang ingin di sterilisasi ke dalam autoklaf
5. Tunggu selama 15 menit dengan suhu 121C dengan tekanan 1 atm
6. Setelah itu, praktikum mengerjakan tugas yang telah diberikan oleh asisten
praktikum
7. Setelah tugas selesai, praktikum membuat laporan hasil praktikum
BAB 4
4.1. Hasil
Adapun hasil dari praktikum adalah sebagai berikut.
Tabel 4.1.2. Peralatan yang Umum Digunakan di Laboratorium Mikrobiologi
No Nama Alat Gambar Alat Fungsi
Memanaskan atau mengeringkan

peralatan laboratorium atau
objek-objek lainnya. Peralatan
Oven
1 laboratorium itu termasuk gelas,
Laboratorium
zat-zat kimia, pelarut organik,
hingga bisa juga untuk mengukur
kadar air.
Digunakan untuk melakukan

sterilisasi pada wadah dan benda-
benda laboratorium yang
digunakan untuk
penelitian. Autoklaf digunakan
untuk mematikan bahan-bahan
2 Autoklaf
berbahaya pada limbah medis
sebelum dibuang. Autoklaf juga
dapat digunakan untuk
mensterilkan peralatan medis
yang digunakan di bidang
kedokteran.
Untuk memanaskan larutan dan

3 Busen
untuk sterilisasi dan pembakaran
28
4.2. Pembahasan
Pada praktikum ini yang berjudul Pengenalan Alat dan Sterilisasi tersebut
membahas mengenai alat-alat yang akan disterilisasi dan akan digunakan pada
praktikum Mikrobiologi dan juga metode Sterilisasi alat laboratorium. Dan dalam
melakukan suatu pengamatan terhadap objek mikrobiologi mengharuskan kita
untuk menggunakan peralatan yang steril agar hasil pengamatan yang kita lakukan
sesuai dengan apa yang diinginkan, dalam hal ini kontaminasi bakteri lain pada
hasil pengamatan sangat tidak diinginkan. Peralatan yang diumumnya disterilisasi
perlu diketahui mana alat yang terbuat dari bahan yang tahan dan tidak tahan
panas maupun bahan yang memiliki batas panas maksimal yang mampu
diterimanya. Hal ini bertujuan agar peralatan yang disterilkan tidak rusak,
misalnya saja untuk mensterilkan peralatan plastik dengan menggunakan
sterilisasi panas kering, sudah tentu yang terjadi adalah hal-hal yang tidak
diinginkan seperti rusaknya peralatan tersebut. Metode yang dipakai yaitu ada tiga
metode sterilisasi yaitu sterilisasi fisik, sterilisasi mekanik, dan sterilisasi kimiawi.
Metode sterilisasi kimiawi yaitu sterilisasi yang menggunakan zat-zat kimia.
Alat-alat medis yang memang bisa terkena air akan direndam ke dalam larutan
kimia yang bisa mematikan kuman, bakteri, dan virus. Bisa dibilang metode kimia
merupakan metode yang paling awal yang dilakukan dalam sterilisasi. Setelah
menggunakan metode kimiawi, terkadang masih banyak yang memutuskan untuk
melakukan metode lainnya sebagai pelengkap agar alat media semakin bersih.
Seperti metode panas uap atau metode panas basah yang menggunakan uap
bertekanan. Metode panas kering, yang penggunaannya dengan meradiasikan
panas ke seluruh ruangan menggunakan media sterilizer yang memiliki bentuk
menyerupai inframerah. Dan metode sinar UV yang dapat mensterilkan alat-alat
media, sterilisasi satu ruangan dirumah sakit, dan serta sterilisasi produksi air
mineral. Metode sterilisasi secara fisik yang terbagi menjadi dua macam yaitu
pemanasan dan penyinaran. Pemanasan dapat meliputi pemijaran, perebusan,
radiasi, dan lainnya. Metode sterilisasi secara mekanik yang hanya bisa digunakan
pada beberapa macam media saja, seperti cairan dan udara. Teknik sterilisasi yang
secara mekanik dengan menggunakan filter atau saringan yang berukuran mikron.
Dan ukuran yang sangat kecil disekitar 0,22 dan mikron hingga 0,45 mikron.
BAB 5
5.1. Kesimpulan
Kesimpulan yang didapatkan dari praktikum ini adalah sebagai berikut.
1. Sterilisasi merupakan proses penghilangan ataupun membunuh
mikroorganisme (protozoa, fungi, bakteri, mycoplasma, virus) dalam benda
atau peralatan dengan tujuan untuk menjaga peralatan didalam laboratorium
tetap bersih/steril, serta mencegah terjadinya kontaminasi
2. Berdasarkan prinsipnya sterilisasi dapat dilakukan dengan 3 cara yaitu secara
mekanik, kimia, dan fisik.
3. Sterilisasi mekanik dengan penyaringan (filtrasi) yaitu teknik sterilisasi
dengan menggunakan suatu saringan yang berpori sangat kecil (0,22 miron
atau 0,45 mikron).
4. Sterilisasi dengan cara kimia merupakan metode desinfeksi alat atau
instrumen yang dilakukan dengan cara meredamkan alat kedalam larutan
desinfektan.
5. Sterilisasi dengan cara fisika dapat dilakukan dengan pemanasan dan
penyinaran.
5.2. Saran
Semoga pada praktikum berikutnya akan menjadi praktikum yang lebih baik
lagi, teratur, tertib dan peserta yang mengikuti praktikum lebih aktif dalam
mencari materinya. Dan semoga juga secepatnya bisa mengikuti praktikum secara
offline ke laboratorium agar lebih bisa mengerti dan memahami materi yang
dipelajari dalam praktikum.
METODE ISOLASI DAN KULTUR JAMUR
BAB 1
PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang

Mikrobiologi merupakan ilmu biologi yang tentang organisme. Untuk
mempelajari sifat mikroorganisme, diperlukan suatu media pertumbuhan yang
mengandung nutrisi, sumber energi. Suatu media yang dapat menumbuhkan
mikroorganisme dengan baik diperlukan beberapa persyaratan antara lain: media
harus mempunyai pH yang sesuai, tidak mengandung zat-zat penghambat, yang
harus dalam keadaan steril, dan harus mengandung semua nutrisi yang mudah
digunakan mikroorganisme. Nutrisi yang dibutuhkan oleh mikroorganisme untuk
pertumbuhan meliputi karbon, nitrogen, unsur non logam seperti sulfur dan fosfor,
unsur logam seperti Ca, Zn, Na, K, Cu, Mn, Mg, dan Fe, vitamin, air, dan energi.
PDA (Potato Dextrose Agar) merupakan media umum untuk pertumbuhan jamur
di laboratorium karena memiliki pH yang rendah (pH 4,5 sampai 5,6). Nutrien
Agar (NA) adalah contoh media yang biasa digunakan untuk menumbuhkan
dalam suatu dan mengembangbiakan bakteri atau mikroorganisme (Rinto, 2014).
Media biakan yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme terbagi
menjadi beberapa bentuk seperti bentuk padat, semi-padat, dan cair. Media padat
didapatkan dengan penambahan agar berasal dari ganggang merah. Dalam media
pembiakkan agar digunakan sebagai pemadat karena tidak dapat diuraikan oleh
mikroba dan membeku pada suhu diatas 45oC. Kandungan dalam agar sebagai
bahan pemadat dalam yaitu 1,5-2,0%. Potato Dextrose Agar (PDA) yang
merupakan media yang digunakan untuk menumbuhkan dan mengembangbiakkan
yeast atau kapang. Nutrien agar (NA) yang merupakan media biakan yang terbuat
dari ekstrak beef, pepton, dan agar, sedangkan pada Potato Dextrose Agar (PDA)
dibuat dari kentang dan agar. Unsur karbohidrat yang sangat dibutuhkan oleh
bakteri karena karbohidrat ini yang merupakan substrat utama yang dalam
metabolisme bakteri. Hampir setengah berat kering bakteri merupakan unsur
karbon. Karbon yang dapat ditemukan dalam senyawa karbohidrat, sehingga
karbohidrat memiliki peran yang penting dalam mendukung pertumbuhan dan
perkembangbiakan jasad reknik. Dan karbon adalah unsur kimia (Radji, 2013).
32
Medium suatu pembiakkan yang merupakan suatu bahan yang terdiri atas
campuran zat makanan (nutrient) yang berfungsi sebagai tempat tumbuh
mikrobia. Selain untuk menumbuhkan mikrobia, juga dapat digunakan untuk
isolasi, memperbanyak, pengujian sifat-sifat fisiologis, dan perhitungan jumlah
mikrobia. Medium pembiakan penyubur terbuat dari medium pembiakan dasar
dengan penambahan zat-zat lain untuk mempersubur pertumbuhan bakteri
tertentu, yang pada medium biakkan dasar tidak dapat tumbuh dengan baik. Untuk
keperluan dalam medium, pembiakan dasar sering ditambahkan darah, serum,
cairan tubuh, eksrak hati, otak dan sebagainya. Medium yang didalamnya
ditumbuhi bakteri akan berarak dalam susunannya sesuai dengan kebutuhan jenis
yang bersangkutan. Beberapa jenis bakteri dapat hidup baik pada medium yang
sangat sederhana, yang hanya mengandung garam organik dan ditambah dengan
sumber karbon organik, seperti gula. Bakteri jenis lain memerlukan suatu medium
yang sangat kompleks, ditambahkan darah atau kompleks lain (Cahyani, 2016).
1.2. Tujuan
Tujuan praktikum ini adalah untuk mengetahui berbagai media tumbuh
bakteri dan jamur serta mempelajari pembuatan media tumbuh baik media alami
maupun media buatan.
BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Isolasi Kultur Jamur

Mikroorganisme pada suatu lingkungan alami merupakan populasi campuran
dari berbagai jenis mikroorganisme pada tanah, air, udara, makanan, maupun yang
terdapat pada tubuh hewan dan tumbuhan. Pemisahan mikroorganisme diperlukan
untuk mengetahui jenis, mempelajari kultural, morfologi dan fisiologi, serta
karakteristik mikroorganisme tersebut. Teknik pemisahan tersebut disebut isolasi
yang disertai dengan pemurnian. Isolasi merupakan serangkaian proses pemisahan
mikroorganisme supaya didapatkan kultur murni (isolat). Isolat tersebut kemudian
ditumbuhkan pada medium terpisah supaya dapat tumbuh dengan baik. Medium
pertumbuhan bakteri harus diperbarui setiap enam bulan supaya sumber nutrisi
bagi bakteri tetap terpenuhi sehingga bakteri terseut tidak mengalami kematian.
Jamur merupakan fungi bersel banyak, yang dapat digolongkan ke dalam dua
golongan besar, yaitu ragi (khamir) dan jamur (kapang). Kedua organism ini
tersebar secara luas di alam, baik yang bersifat saprofit maupun parasit bagi
tumbuhtumbuhan, hewan, dan manusia. Jamur atau fungi adalah organisme
heterotrofik, mereka memerlukan senyawa organik untuk nutrisi (Susi, 2015).
Banyak jamur mempunyai dinding penyekat (septa) dalam hifanya, sehingga
hifa mempunyai banyak sel dan disebut hifa bersepta. Jamur adalah organisme
eukariotik (mempunyai inti sel) tidak mempunyai klorofil, mempunyai spora,
struktur somatic atau talus sel tunggal uniseluler. Dalam beberapa kelas jamur,
benang-benang itu tidak mempunyai septa sehingga kelihatan sebagai satu sel
panjang yang mengandung banyak nucleus. Jamur yang memiliki kemampuan dan
fungsi yang berbeda-beda sesuai dengan lingkungan yang ditinggalinya. Salah
satu media yang biasa digunakan untuk tempat tumbuhnya adalah batang kayu.
Jamur yang tumbuh pada batang kayu memiliki kemampuan dalam menguraikan
substansi kayu. Jamur yang termasuk kedalam kelompok white rot yaitu jamur
yang mampu menguraikan lignin, selulosa yang terkandung di dalam kayu.
Sedangkan jamur yang termasuk ke dalam brown rot adalah jamur yang hanya
menguraikan atau yang memberikan selulosa dan hemiselulosa (Aswin. 2015).
34
2.2. Metode Gores

Metode cawan gores dalam isolasi bakteri bertujuan untuk membuat garis
sebanyak mungkin pada permukaan medium biakan menggunakan jarum ose.
Mikroba yang terlepas pada garis-garis goresan tersebut semakin lama semakin
sedikit, sehingga pada garis terakhir koloni yang terbentuk akan terpisah agak
jauh dan sebagai koloni tunggal. Koloni tunggal adalah koloni yang timbul dan
tumbuh secara terpisah dari satu sel atau beberapa sel. Pada umumnya koloni sel
memiliki ukuran kecil-kecil. Penggoresan yang sempurna akan menghasilkan
koloni yang terpisah, inokulum digoreskan di permukaan media agar nutrien
dalam cawan petri dish dengan jarum pindah. Di antara garis-garis goresan akan
terdapat sel-sel yang cukup terpisah sehingga dapat tumbuh menjadi koloni
Goresan sinambung umumnya digunakan bukan untuk mendapatkan koloni
tunggal, melainkan untuk peremajaan ke cawan atau medium baru, tipe goresan T
diguankan untuk mendapatkan koloni tunggal dengan membagi wilayah goresan
menjadi tiga, tipe goresan kuadran hampir sama dengan goresan T namun berbeda
pola goresan kuadran dibagi ke dalam 4 bagian atau wilayahnya (Atirillah, 2013).
Dasar metode ini yaitu dengan cara menggoreskan suspensi bahan yang
mengandung mikroba pada permukaan medium agar yang sesuai pada cawan
petri. Setelah inkubasi maka pada bekas goresan akan tumbuh koloni-koloni
terpisah yang mungkin berasal dari 1 sel mikroba. Penggoresan yang sempurna
akan menghasilkan koloni yang terpisah. Bakteri yang memiliki flagella seringkali
membentuk koloni yang menyebar terutama bila digunakan lempengan yang
basah. Untuk mencegah hal itu harus digunakan lempengan agar yang benar-benar
kering permukaannya. Untuk memperoleh hasil yang sesuai dan baik diperlukan
keterampilan, yang biasanya diperoleh dari pengalaman. Metode cawan gores
yang dilakukan dengan baik kebanyakan akan menyebabkan terisolasinya
mikroorganisme yang diinginkan. Dua macam kesalahan yang umum sekali
dilakukan adalah tidak memanfaatkan permukaan medium dengan sebaik-
baiknya untuk digores sehingga pengenceran mikroorganisme menjadi kurang
lanjut dan cenderung. Penggoresan yang sempurna akan menghasilkan koloni
yang terpisah. Bakteri yang memiliki flagella seringkali membentuk koloni yang
menyebar terutama bila digunakan medium yang sangat basah (Abdul, 2016).
35
2.3. Metode Tuang dan Sebar

Pemeriksaan angka kuman dengan metode tuang adalah suatu teknik untuk
menumbuhkan mikroorganisme di dalam media agar dengan cara mencampurkan
media yang masih cair dengan stok kultur bakteri, sehingga sel-sel tersebut
tersebar merata dan diam dengan baik di permukaan agar atau di dalam agar.
Dalam metode ini diperlukan pengenceran sebelum ditumbuhkan pada medium
agar di dalam cawan petri. Setelah diinkubasi akan terbentuk koloni pada cawan
tersebut dalam jumlah yang dapat dihitung. Metode pour plate merupakan metode
untuk memperoleh biakan murni dari populasi campuran mikroorganisme dengan
cara mengencerkan specimen yang kemudian dituangkan kedalam cawan steril
dan diikuti dengan menuangkan medium agar yang telah dicairkan dan
didinginkan (pada suhu ±500C). Tujuan dari metode ini adalah untuk
menentukan perkiriaan jumlah bakteri hidup dalam cairan atau spesimen. Hasil
perhitungan bakteri dinyatakan dalam koloni. Dalam metode ini memerlukan
perlakuan pengenceran sebelumditumbuhkan pada medium agar-agar di dalam
cawan petri, sehingga setelah inkubasi terbentuk colony cawan (Setiawan, 2012).
Metode spread plate (cawan sebar) adalah suatu teknik yang di dalam
menumbuhkan mikroorganisme di dalam media agar dengan cara pat menuangkan
stok kultur bakteri di atas media yang telah padat. Kedua teknik penanaman
tersebut memiliki keunggulan dan kekurangan masing-masing, keunggulan
metode tuang adalah dapat digunakan untuk memperoleh biakan murni,
sedangkan pada metode cawan sebar dapat digunakan untuk memperkirakan
jumlah bakteri dalam satua sel. Adapun kekurangan pada metode cawan tuang
adalah hasil perhitungan tidak menunjukkan jumlah sel mikroba yang sebenarnya,
karena beberapa sel yang berdekatan mungkin membentuk satu koloni, mikroba
yang ditumbuhkan harus dapat tumbuh pada medium padat dan membentuk, tidak
menjalar, waktu inkubasi sehingga pertumbuhan koloni dapat dihitung. Sementara
itu pada metode cawan sebar ini cukup sulit terutama saat meratakan suspensi
dengan batang bengkok, untuk menumbuhkan koloni secara merata, biakan justru
terkontaminasi. Isolasi dengan penyebaran serupa dengan isolasi bakteri pada
penuangan. Penyebaran suspensi sampel dilakukan dengan menyebarkan suspense
dengan batang drugalsky yang telah dipanaskan terlebih dahulu (Santi, 2013)
36
2.4. Tempe
Tempe adalah salah satu produk fermentasi yang umumnya berbahan baku
kedelai yang difermentasi dan mempunyai nilai gizi yang baik. Fermentasi pada
pembuatan tempe terjadi karena aktivitas kapang Rhizopus oligosporus.
Fermentasi pada tempe dapat menghilangkan bau langu dari kedelai yang
disebabkan oleh aktivitas dari enzim lipoksigenase. Fermentasi kedelai menjadi
tempe akan meningkatkan kandungan fosfor. Hal ini disebabkan oleh hasil kerja
enzim fitase yang dihasilkan kapang Rhizopus oligos porus yang mampu
menghidrolisis asam fitat menjadi inositol dan fhosfat yang bebas. Jenis kapang
yang terlibat dalam fermentasi tempe tidak memproduksi toksin, bahkan mampu
melindungi tempe dari aflatoksin. Tempe mengandung senyawa antibakteri yang
diproduksi oleh kapang tempe selama proses fermentasi. Proses fermentasi pada
tempe mampu untuk menghilangkan bau langu pada kedelai yang disebabkan oleh
aktivitas enzim lipoksigenase. Melalui fermentasi, maka komponen-komponen
nutrisi yang kompleks pada kedelai dapat dicerna oleh kapang dengan reaksi
enzimatis dan akan dihasilkan senyawa yang lebih sederhana lagi (Irma, 2012).
Kapang yang tumbuh pada tempe tersebut mampu menghasilkan beberapa
enzim seperti enzim protease yang berfungsi untuk mengurai protein menjadi
peptida yang lebih pendek dan asam amino bebas, enzim lipase yang berfungsi
untuk mengurai lemak menjadi asam-asam lemak. Fermentasi kedelai dalam
proses pembuatan tempe akan menyebabkan perubahan kimia maupun fisik pada
biji kedelai, sehingga menjadikan tempe lebih mudah dicerna oleh tubuh
dibandingkan dengan kedelai secara langsung karna sudah di lakukan proses.
Tempe juga memiliki berbagai sifat unggul diantaranya yaitu mengandung lemak
jenuh rendah, kadar vitamin B12 tinggi, mengandung antibiotik, dan berpengaruh
baik pada pertumbuhan badan. Selain itu asam-asam amino pada tempe lebih
mudah bahan, dicerna oleh tubuh jika dibandingkan dengan kacang kedelai.
Vitamin B12 yang terdapat pada tempe diproduksi oleh sejenis bakteri Klabsiella
peumoniae. Tempe bukan saja sebagai sumber protein, tetapi juga sebagai sumber
mineral makro dan mikro dalam jumlah yang cukup. Dalam kedelai terdapat
antioksidan faktor II 6,7,4 trihidroksi isoflavon yang mempunyai sifat antioksidan
yang paling kuat dibandingkan isoflavon lainnya dalam kedelai (Astuti, 2012).
37
2.5. Ikan Asin

Ikan asin adalah ikan yang telah diawetkan dengan cara penggaraman.
Pengawetan ini sebenarnya terdiri dari dua proses, yaitu proses penggaraman dan
pengeringan. Tujuan utama dari penggaraman sama dengan tujuan proses
pengawetan atau pengolahan lainnya, yaitu untuk memperpanjang daya tahan dan
daya simpan ikan. Ikan asin termasuk salah satu jenis makanan yang sangat
digemari oleh masyarakat Indonesia dan merupakan salah satu unsur penting
dalam peningkatan gizi yang relatif murah. Meskipun memiliki gizi yang cukup
tinggi, ikan asin sering dianggap makanan masyarakat golongan ekonomi lemah.
Tetapi saat ini ikan asin telah diterima oleh masyarakat golongan ekonomi yang
menengah keatas. Bahkan yang produk-produk ikan asin tertentu yang dapat
dikategorikan sebagai makanan yang sangat mewah. Ikan hasil adalah pengolahan
dan pengawetan yang umumnya sangat disukai oleh masyarakat karena produk
akhirnya mempunyai ciri-ciri khusus yakni perubahan sifat-sifat daging seperti
bau (odour), rasa (flavour), bentuk (appereance) dan tekstur (Kartini, 2012).
Ikan asin atau ikan kering merupakan hasil proses penggaraman dan
pengeringan. Ikan ini mempunyai kadar air rendah karena penyerapan oleh garam
dan penguapan oleh panas. Beberapa jenis ikan yang biasanya diawetkan menjadi
ikan asin atau ikan kering adalah ikan kakap, tenggiri, tongkol, kembung, layang,
teri, petek, mujair, Sebagai bahan pangan manusia telah mengetahui bahwa ikan
merupakan hewan yang mempunyai nutrisi tinggi dan dikenal sebagai sumber
protein, lemak dengan omega-3 yang bermanfaat untuk menurunkan resiko
cardiovascular disease (CvD), dan mineral. Kandungan protein ikan tidak kalah
dengan delapan kandungan protein yang berasal dari daging atau telur. Selain itu
ikan adalah salah satu sumber protein hewani yang harganya lebih murah
dibandingkan dengan sumber protein hewani lainnya seperti daging sapi dan
ayam. Ikan yang diketahui sangat bermanfaat bagi ibu-ibu hamil, bayi dalam
kandungan dan bayi. Makan ikan 2-3 kali dalam seminggu dapat menjaga
kesehatan anak-anak dan wanita serta keluarga secara keseluruhan. Protein yang
mengandung asam amino yang mempunyai daya cerna yang sangat tinggi dan
berkualitas yang tinggi, ikan asin adalah daging yang banyak garam, peptide dari
organ pencernaan ikan yang bermanfaat bagi kesehatan dan vitamin (Sinta,2012).
BAB 3

Praktikum Dasar-Dasar Mikrobiologi Akuatik dilaksanakan pada hari
Senin tanggal 21 Oktober pada pukul 14.30 sampai dengan selesai, dilaksanakan
secara ofline melalui di laboratorium Mikrobiologi Akuatik.
3.2. Alat dan Bahan

Adapun alat dan bahan yang digunakan pada Praktikum Dasar-Dasar
Mikrobiologi Akuatik yaitu tabung reaksi, cawan petri, erlemenyer, pipa ukur,
kaldu kentang 200gram, agar swallow original, plastik buah, aluminium foil,
tempe dan ikan asin.
3.3. Prosedur Kerja

1. Tuangkan 1 bungkus agar ke erlemenyer, satu erlemenyer satu bungkus agar
masukkan kaldu kentang kedalam tabung reaksi, dicampur dengan air
dimasukkan kedalam pipa ukur, lalu, tuang kaldu tersebut kedalam erlemenyer
yang telah diisi bubuk agar.
2. Mixed kaldu dan agar yang sudah ada di erlemenyer tutup atas erlemenyer
menggunakan kertas aluminium foil sampai bener-benar petri dibungkus
menggunakan kertas hingga benar-benar rapat
3. Masukkan ke dalam autoclave kemudian setelah itu dibawah ke laminar air
flow
4. Lalu, haluskan tempe dan ikan asin. Masukkan kaldu dan agar-agar kedalam
cawan petri dan masukkan juga sejumput ikan asin dan tempe yang telah di
haluskan tadi.
5. Langkah terakhir adalah masukkan cawan petri PDA ke inkubator.
BAB 4
4.1. Hasil
Adapun hasil dari praktikum instumentasi alat laboratorium ini adalah sebagai
berikut.
Tabel 4.1.1. Hasil Praktikum Metode Isolasi Kultur Jamur
No Nama Sampel Gambar
1 Tempe
2 Ikan Asin
40
4.2. Pembahasan
Pada praktikum kali ini kami mempelajari bagaimana cara melakukan proses
pembuatan media PDA yang akan digunakan untuk preparasi media kultur jamur
dan bakteri. Sebelum praktikum terlebih dahulu siapkan peralatan yang akan
digunakan. Untuk disini yang kami gunakan PDA (Potato Dextrose Agar)
menggunakan kaldu kentang. Pada proses pembuatan media PDA yaitu kaldu
kentang, pertama kali kentang dikupas kulitnya dan dicuci bersih setelah itu diiris
kecil-kecil, setelah kecil kentang direbus sampai air perebusannya mendidih baru
air perebusan atau kaldu kentangnya diambil untuk digunakan dalam praktikum.
Untuk sampel yang digunakan pada praktikum kali ini menggunakan sampel
tempe dan ikan asin yang sebagai PDA, kandungan hara media PDA memerlukan
penambahan dari luar berupa cairan gula sebagai suplemen tambahan karena
kandungan hara kentang yang kurang optimal untuk menunjang pertumbuhan
miselium. Dan pertumbuhan miselium ini dapat berlangsung optimal jika media
tanam nya mengandung suatu unsur hara yang sesuai dengan esensial yang
dibutuhkan miselium jamur tiram. Dan sifat umbi kentang yang tumbuh di dalam
tanah menyebabkan kentang yang banyak mengandung sumber kontaminan
sehingga sangat cocok untuk media pertumbuhan jamur dan isolasi kultur jamur
Setelah itu dilanjutkan dengan mencampurkan bahan dan media yang
digunakan sampai merata, dan melapisi atau membungkus beberapa alat seperti
cawan petri, dan keduanya dilakukan sterilisasi dengan menggunakan autoclave
dengan suhu 121C selama 15 menit. Setelah tahap sterilisasi selesai maka
dilanjutkan dengan tahap inkubasi yaitu tahap memasukkan media dan sampel ke
dalam alat yaitu cawan petri yang berjumlah ada empat buah cawan secara merata
dan cawan petri tersebut akan dibungkus dengan plastik buah untuk menghintari
akan terjadinya hal yang tidak diinginkan seperti terjadi kontaminasi. Setelah
selesai pembungkusan, keempat cawan petri tersebut dimasukkan atau didiamkan
di dalam inkubator selama lima hari karena untuk dapat mengetahui jumlah koloni
yang ada pada sampel yang digunakan, minimal waktu yang dibutuhkan adalah
lima hari, jika kurang. Setelah lima hari dan didiamkan di dalam inkubator, dan
sampel-sampel tersebut akan dikeluarkan dan dilakukan perhitungan koloninya
dengan cara mengguankan sebuah alat penghitung koloni yaitu colony conter.
BAB 5
5.1. Kesimpulan
Adapun kesimpulan yang didapatkan dari Praktikum Metode Isolasi dan
Kultur Jamur adalah sebagai berikut.
1. Mikroorganisme merupakan semua jenis makhluk yang berukuran kecil
hanya beberapa mikron atau lebih kecil lagi.
2. Media merupakan suatu bahan yang biasa digunakan untuk menumbuhkan
mikroorganisme.
3. PDA (Potato Dextrose Agar) adalah media yang digunakan untuk
pertumbuhan jamur contohnya seperti pada jenis jamur Aspergillus flavus.
4. Sifat umbi kentang yang tumbuh di dalam tanah menyebabkan kentang
banyak mengandung sumber kontaminan
5. Kandungan hara media PDA memerlukan penambahan dari luar berupa
cairan gula sebagai suplemen tambahan
5.2. Saran
Saran yang dapat diberikan pada Praktikum Preparasi Media Kultur Jamur
dan Bakteri untuk kedepannya diharapkan harus lebih baik lagi, harus
menyiapkan bahan dan peralatan terlebih dahulu agar tidak mengganggu
pelaksanaan praktikum, praktikan lain harus lebih efektif dalam melaksanakan
praktikum.
METODE ISOLASI DAN KULTUR BAKTERI
BAB 1
PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang

Dalam kehidupannya suatu mikroorganisme tidak hanya tumbuh dan berdiri
sendiri, namun juga mikroorganisme hidup dengan saling berdampingan dengan
mikroorganisme atau organisme lainnya. Semisalnya dalam satu wadah bisa saja
terdapat beberapa mikroorganisme yang tumbuh secara bersamaan, sehingga di
dalam wadah tersebut akan saling terkontaminasi oleh adanya mikroorganisme
yang lain. Untuk bisa mengetahui adanya suatu mikroorganisme tertentu dalam
suatu bahan maka kita dapat dilakukan isolasi. Isolasi ini merupakan suatu teknik
yang dilakukan dengan tujuan untuk mendapatkan kultur yang murni. Hal ini yang
berawal dari bahan yang mengandung mikroorganisme seperti bakteri yang masih
bercampur dengan yang lainnya, dan dilakukan penanaman dengan menggunakan
media yang spesifik untuk memacu pertumbuhan mikroorganisme yang kita
inginkan. Dan setelah mikroorganisme tersebut tumbuh maka akan didapatkanlah
kultur murni dari bakteri. Sehingga teknik isolasi ini bertujuan agar penanaman
mikroorganisme mendapatkan kultur yang sangat spesfik (Ibrahim et al., 2015).
Mikroorganisme dapat juga dijumpai dimana-mana dan disegala lingkungan
hidup manusia. Populasinya juga terdapat di tanah, lingkungan akuatik, berkisar
dari aliran sampai pada larutan dan atmosfer mikroorganisme yang terdapat pada
suatu lingkungan alami merupakan populasi campuran dari berbagai jenis, baik
mikroorganisme pada tanah, udara, air, makanan, maupun yang terdapat pada
tubuh hewan dan tumbuhan. Pemisahan bakteri dari suatu populasi campuran
yang diperlukan untuk mengetahui berbagai jenis, mempelajari kultur, morfologi,
fisiologi, dan karakteristik dari bakteri tersebut. Teknik pemisahan ini disebut
isolasi yang disertai dengan pemurnian. Tujuan pemisahan mikroorganisme dari
lingkungannya adalah untuk mengawetkan bakteri. Isolasi bakteri merupakan
suatu proses pengambilan bakteri dari medium atau lingkungan asalnya lalu
menumbuhkannya pada medium buatan sehingga akan diperoleh biakkan bakteri
murni cara dan metode yang dapat dilakukan untuk memperoleh mikroorganisme
yaitu dengan metode cawan gores dan metode cawan tuang (Muhammad, 2019).
44
Mikroorganisme hasil dari isolasi perlu diidentifikasi untuk mengetahui jenis

serta strainnya sehingga karakteristik dari mikroorganisme tersebut dapat
diketahui guna pemanfaatan kemampuannya. Sesudah mendapatkan kultur murni,
langkah selanjutnya adalah menentukan jenis mikroorganisme berdasarkan
karakteristiknya. Mikroorganisme dapat dikelompokkan berdasarkan keasaman
dalam gen yang dimiliki dan yang mencerminkan hubungan evolusi mereka
Pendekatan identifikasi yang digunakan untuk eksploirasi keanekaragaman
mikroba dari sampel lingkungan yang kompleks didasarkan pada cloning dan
sekuensing gen ribosomal RNA. Ini dapat memungkinkan untuk mengidentifikasi
mikroorganisme yang dapat memperkuat gen yang diisolasi dari koloni primer
universal yang diarahkan pada daerah di kedua ujung, untuk menghasilkan zat anti
bakteri yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri telah terbukti memiliki efek
antibakteri terhadap bakteri tertentu, yang sangat penting untuk meningkatkan
suatu produksi ternak atau mencegah kontaminasi pada bakteri (Sullivan, 2019).
1.2. Tujuan
Praktikum ini bertujuan untuk meningkatkan kemampuan mahasiswa
melakukan isolasi dan kultur yang bersumber dari lingkungan akuatik.
BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Isolasi Kultur Bakteri

Isolasi adalah cara yang dilakukan untuk memisahkan atau memindahkan
mikroba tertentu dari lingkungan hidupnya, sehingga akan diperoleh kultur murni
atau biakkan murni. Kultur murni ialah kultur yang sel mikrobanya barasal dari
pembelahan satu sel tunggal. Isolasi bakteri merupakan suatu proses pengambilan
bakteri dari medium atau lingkungan asalnya lalu menumbuhkannya pada
medium buatan sehingga dapat diperoleh biakkan bakteri yang murni. Teknik
kultur untuk mendapatkan biakkan murni terbagi menjadi tiga bagian. Teknik
ataupun cara, yaitu cara penuangannya, cara penggoresan, dan cara penyebaran.
Isolasi bakteri dengan cara penuangan dilakukan dengan menentukan perkiraan
jumlah bakteri hidup dalam suatu cairan. Hasil perhitungan dengan cara ini dapat
dinyatakan dalam bentuk koloni. Metode yang dapat dilakukan dengan cara untuk
memperoleh mikroorganisme yang murni dari suatu biakkan dan dengan cara
mencampurkan yaitu metode cawan gores dan cawan tuang (Hadioetomo, 2016).
Isolasi bakteri adalah proses pengambilan suatu bakteri dari medium atau
lingkungan asalnya, dan menumbuhkan pada medium buatan sehingga akan dapat
diperoleh biakkan atau kultur murni yang bakteri hasil isolasi. Populasi bakteri
yang dapat diisolasikan dan menjadi biakkan atau kultur murni yang terdiri dari
satu jenis bakteri yang dapat dipelajari morfologi, sifat, dan kemampuan
biokimianya. Untuk memindahkan bakteri dari satu tempat ke tempat lain harus
menggunakan prosedur aseptik. Aseptik dalam hal ini berarti bebas dari spesies,
yaitu kondisi yang bebas kontaminasi karena terdapat mikroorganisme lain yang
tidak dikehendaki. Teknik ini sangat penting apabila bekerja dengan bakteri,
selain melindungi laboratorium juga menghindari kontaminasi mikroorganisme
lain. Identifikasi dan determinasi suatu biakkan murni bakteri yang diperoleh dari
hasil isolasi dapat dilakukan dengan cara mengamati ciri-ciri morfologi koloni
tersebut serta pengujian fisiologi dan biokimianya. Bakteri dapat diidentifikasi
dengan mengetahui reaksi biokimianya. Dalam memindahkan bakteri dari satu
tempat ke tempat yang lain harus menggunakan prosedur aseptic (Waluyo, 2017).
46
2.2. Metode Gores

Metode cawan gores dalam isolasi bertujuan untuk membuat garis sebanyak
mungkin pada permukaan medium biakkan menggunakan jarum ose. Metode
cawan gores dalam isolasi bakteri bertujuan untuk membuat garis sebanyak
mungkin Teknik penanaman mikroba dengan goresan yang bertujuan untuk
mengisolasi mikroorganisme dalam campurannya atau meremajakan kultur ke
dalam medium baru. Cara gores umumnya digunakan untuk mengisolasi koloni
mikroba pada medium agar sehingga didapatkan koloni terpisah dan merupakan
biakkan murni. Cara ini dasarnya yang menggoreskan suspensi bahan yang
mengandung mikroba pada permukaan medium agar yang sesuai pada cawan
petri. Setelah inkubasi maka pada bekas goresan akan tumbuh koloni-koloni
terpisah yang mungkin berasal dari 1 sel, sehingga dapat dikulturkan lebih lanjut.
Mikroba yang terlepas pada garis-gairs goresan tersebut semakin lama semakin
sedikit, sehingga pada garis terakhir koloni yang terbentuk akan terpisah agak
jauh sebagai koloni tunggal. Koloni tunggal adalah koloni yang timbul tumbuh
secara terpisah dari satu sel. Koloni sel memiliki ukuran kecil (Irianto, 2012).
Metode cawan gores mempunyai dua keuntungan yaitu dapat menghemat
bahan dan waktu. Metode cawan gores yang dilakukan dengan baik akan
menyebabkan terisolasinya mikroorganisme yang diinginkan. Penggoresan yang
dilakukan dengan sempurna akan menghasilkan koloni yang terpisah. Bakteri
yang memiliki flagella seringkali membentuk koloni yang menyebar terutama bila
menggunakan medium yang basah. Pencegahan terjadinya penyebaran koloni
harus digunakan lempengan agar yang permukaannya benar-benar kering. Metode
ini dibagi menjadi beberapa tipe. Goresan sinambung yang umumnya digunakan
bukan untuk mendapatkan koloni tunggal, melainkan untuk mendapat peremajaan
ke cawan atau medium baru. Goresan T digunakan untuk mendapatkan koloni
tunggal dengan cara membagi wilayah goresan menjadi 3 Goresan kuadran yang
merupakan metode yang hampir sama dengan Goresan T, namun pada goresan
kuadran dibagi menjadi 4 bagian wilayah. Pembagian 4 wilayah diharapkan akan
memisahkan koloni bakteri dengan lebih baik sehingga diperoleh koloni tunggal
dengan tipe goresan kuadran yang dapat dilakukan dengan cara menggoreskan
secara zig-zag maupun dengan cara menggores putus-putus (Astuti, 2017).
47
2.3. Metode Tuang dan Sebar

Metode cawan tuang adalah salah satu teknik untuk menumbuhkan
mikroorganisme didalam media agar dengan cara mencampurkan media agar yang
masih cair dengan stok kultur bakteri. Dimana kelebihan metode cawan tuang ini
adalah mikroorganisme yang tumbuh pada media dapat tersebar merata pada
media agar metode ini cocok untuk isolasi mikroba yang bersifat anaerob.
Kekurangan metode cawan tuang ini adalah kurang cocok apabila digunakan
untuk isolasi mikroba yang bersifat aerob. Metode cawan tuang yang dapat
dilakukan dalam isolasi memiliki tujuan untuk mendapatkan dan menentukan
perkiraan jumlah koloni yang hidup di dalam suatu sampel sel dan isolasi
mikroorganisme. Hasil perhitungan dengan cara cawan tuang ini dinyatakan
dalam bentuk koloni tujuan dari teknik ini adalah untuk menyebarkan sel-sel
bakteri atau jamur yang tidak hanya pada permukaan medium agar melainkan sel
terendam dalam medium (didalam agar) sehingga akan didapatkan juga sel yang
tumbuh dipermukaan agar. Metode cawan ini dapat digunakan untuk memperoleh
koloni murni dari populasi yang campuran mikroorganisme (Hardiansyah 2015).
Metode cawan tebar atau teknik spread plate merupakan teknik isolasi
mikroba dengan cara menginokulasi kultur mikroba secara pulasan atau sebaran di
permukaan media agar yang telah memadat. Metode ini pada umumnya sama
dengan metode gores dengan menggunakan ose steril yang dicelupkan ke dalam
suspensi organisme yang diencerkan, lalu dibuat serangkaian goresan sejajar yang
tidak saling menutupi di atas permukaan medium yang telah memadat. Dalam
metode ini diperlukan dengan pengenceran sebelum ditumbuhkan pada medium
yang akan berada di dalam cawan petri. Setelah dilakukan inkubasi maka akan
terbentuk koloni pada cawan tersebut dan dalam jumlah yang dapat dihitung.
Kedua teknik penanaman memiliki keunggulan dan kekurangan masing-masing,
keunggulan metode tuang adalah dapat digunakan untuk memperoleh biakkan
murni, sedangkan pada metode sebar dapat digunakan untuk memperkirakan
jumlah bakteri dalam suatu sel. Kekurangan pada metode cawan tuang adalah
hasil perhitungan yang tidak menunjukkan jumlah sel mikroba yang sebenarnya,
dan sedangkan pada metode cawan tebar kekurangannya adalah sedikit kesulitan
saat meratakan suspensi dengan batang yang bengkok (Damayanti et al., 2020).
48
2.4. Air Mineral

Air merupakan senyawa kimia yang fungsinya sangat penting bagi kehidupan
umat manusia dan makhluk hidup lainnya. Air yang dibutuhkan manusia meliputi
air layak pakai yang bersih dan sehat untuk keperluan sehari-hari seperti
memasak, mencuci, dan mandi serta air yang layak konsumsi untuk keperluan
minum. Secara umum bagi tubuh manusia air bermanfaat sebagai zat yang
membersihkan tubuh pada saat mandi Namun, air juga dapat berperan sebagai
media penularan penyakit. Air merupakan media serta lingkungan yang baik
untuk kehidupan mikroorganisme patogen maupun non patogen, oleh karenanya
timbul pengertian apa yang disebut water borne disease. Air minum adalah air
yang melalui proses pengolahan atau tanpa proses pengolahan yang memenuhi
syarat kesehatan dapat langsung diminum. Air minum aman bagi kesehatan
apabila memenuhi persyaratan kimiawi, mikrobiologis, fisika, dan radioaktif.
Parameter wajib penentuan kualitas air minum secara mikrobiologi adalah dengan
total bakteri Coliform dan Esherichia. Diare merupakan salah satu penyakit yang
disebabkan air minum yang kualitas mikrobiologisnya buruk (Rumondor, 2014).
Air minum yang ideal seharusnya jernih dan tidak berwarna, tidak berasa,
serta tidak berbau. Air minum yang dikonsumsi harus higienis dengan kandungan
mikroba didalamnya tidak melewati ambang batas yang diperbolehkan. Air adalah
sebuah zat yang ada di alam yang dalam kondisi normal di atas permukaan bumi
berbentuk cair. Air minum seharusnya tidak mengandung kuman patogen dan
segala makhluk yang dapat membahayakan kesehatan manusia. Berdasarkan
penelitian air adalah tempat bagi kolonisasinya berbagai jenis mikroba seperti
bakteri, fungi maupun yeast. Waterborne didiare merupakan penyakit yang
penularannya terjadi melalui air yang terkontaminasi bakteri atau fungi patogen
dan ditularkan kepada manusia melalui mulut atau sistem pencernaanpenyakit
paling umum yang disebabkan oleh Waterborne didiare adalah diare yang
disebabkan karena adanya pencernaan bakteri jenis Coliform pada air (Pengujian
air secara mikrobiologi sangat diperlukan untuk mengukur kualitas proses sanitasi
dan mengetahui derajat kontaminasi cemaran mikroba dalam air terutama untuk
air yang digunakan sehari-hari. Air Minum Dalam Kemasan (AMDK) merupakan
salah satu air yang perlu diperhatikan kandungan mikrobanya (Amelia, 2019).
49
2.5. Air Comberan

Air comberan adalah genangan air kotor yang mengendap hasil buangan air
limbah rumah tangga, seperti buangan air dari kamar mandi dan dapur. Air
comberan identik dengan air yang kotor, keruh dan bau serta tempat yang
berkembangbiaknya nyamuk. Kotoran kotoran itu merupakan campuran dari zat-
zat bahan mineral dan organik dalam banyak bentuk, termasuk partikel-partikel
besar dan kecil, benda padat, sisa bahan larutan dalam keadaan terapung dan
dalam bentuk kolloid dan setengah koloid Air comberan yang masuk ke perairan
terbawa oleh air selokan atau air hujan. Bahan pencemar yang terbawa antara lain
feses, urin, sampah dari kertas, lemak, minyak, sisa-sisa makanan), pencucian
tanah dan mineral lainnya. Limbah yang dihasilkan dapat berupa limbah padat dan
limbah cair. Air comberan banyak sekali kuman dan bakteri yang tergenang oleh
airb Perhitungan jumlah koloni bakteri dan pengukuran nilai absorbansi limbah
cair menunjukkan hasil yang saling berhubungan. Limbah memberi peluang besar
untuk berkembangnya berbagai mikroorganisme yang sangat berbahaya bagi
manusia, seperti Eschericia coli dan bakteri yang sejenisnya (Novalind, 2017).
Limbah cair yang dihasilkan setiap harinya menimbulkan berbagai masalah
kesehatan seperti diare dan penyakit sejenisnya. Gangguan tersebur disebabkan
oleh bakteri patogen yang terdapat di dalam limbah cair tersebut. Permasalahan
ini juga dapat menjadi masalah yang serius saat musim kemarau, limbah cair yang
meluap ke badan jalan akan mengering dan memungkinkan bakteri patogen
tersebut akan Bersatu dengan debu yang sewaktu-waktu dapat menimbulkan
permasalahan lainnya. Untuk menghindari dan mengatasi permasalahan tersebut,
maka hal pertama yang harus dilakukan adalah mengetahui densitas bakteri pada
limbah air, agar nantinya lebih lanjut dapat diteliti mengenai jenis bakteri
dominan pada limbah cair tersebut, densitas bakteri sangat dipengaruhi oleh faktor
fisik dan kimiawi tempat bakteri tersebut hidup, diantaranya adalah faktor suhu,
pH, dan salinitas habitat bakteri. Setiap mikrobia termasuk bakteri mempunyai
suhu optimum ataupun maksimum dan minimum untuk pertumbuhan dan
perkembangannya. Jika suhu lingkungan lebih kecil dari suhu minimum atau lebih
besar dari suhu maksimum pertumbuhannya maka aktivitas enzim akan terhenti
bahkan suhu yang terlalu tinggi akan terjadi denaturasi enzim (Suriani, 2013).
BAB 3

Praktikum Metode Isolasi dan Kultur Bakteri dilaksanakan pada hari jumat
tanggal 21 Oktober 2022 pada pukul 14.30 WIB sampai dengan selesai,
dilaksanakan secara offline melalui dilaboratorium mikrobiologi akuatik.
3.2. Alat dan Bahan

Adapun alat dan bahan yang digunakan pada Praktikum Metode Isolasi dan
Kultur Bakteri adalah kaldu ikan 200gram, agar-agar swallow original, plastik
buah, aluminium foil, air comberan, dan air mineral.
3.3. Prosedur Kerja

1. Tuangkan 1 bungkus agar-agar ke erlemenyer, 1 erlemenyer 1 bungkus agar.
2. Masukkan kaldu ikan ke dalam tabung reaksi, dicampur dengan air sampai
200 ml, dan dimasukkan ke dakm pipa ukur,
3. Masukkan kaldu ikan ke dalam erlemenyer yang telah diisi bubuk agar-agar.
4. Mixxed kaldu + agar-agar yang sudah ada didalam erlemenyer. Lalu, tutup
atas erlemenyer menggunakan aluminium foil sampai benar-benar rapat,
untuk cawan petri dibungkus menggunakan aluminium kertas hingga benar-
benar rapat.
5. Setelah itu dimasukkan ke dalam autoclave untuk disterilisas, dengan suhu 21
C dengan waktu 15 menit. Setelah selesai disterilisasi, kemudian dibawa ke
laminar air flow.
6. Kemudian, siapakan air comberan dan air mineral. Lalu, masukkan kaldu dan
agar-agar tersebut kedalam cawan petri, masukkan sedikit saja.
7. Memasukkan beberapa tetes air comberan dan air mineral ke cawan petri
Setelah itu tutup cawan petri menggunakan plastik buah.
8. Langkah terakhir adalah masukkan cawan petri TSA ke inkubator.
BAB 4
4.1. Hasil
Hasil dari praktikum metode isolasi kultur bakteri adalah sebagai berikut:
Tabel 4.1.4. Hasil Metode Isolasi Kultur Bakteri
No Nama Sempel Gambar
1 Air Comberan
2 Air Mineral
52
4.2. Pembahasan
Pada praktikum isolasi dan kultur bakteri ini, praktikan dapat mengetahui apa
itu isolasi bakteri, apa saja media tumbuh pada bakteri, dan bagaimana cara
mengisolasi bakteri. Sebelumnya isolasi itu sendiri adalah cara untuk memisahkan
atau memindahkan mikroba tertentu dari lingkungannya, sehingga diperoleh
kultur murni atau biakkan murni. Kultur murni ialah kultur yang sel-sel
mikrobanya barasal dari pembelahan dari satu sel yang tunggal. Isolasi bakteri
merupakan suatu proses pengambilan bakteri dari medium atau lingkungan yang
asalnya lalu menumbuhkannya pada medium buatan sehingga dapat memperoleh
biakkan bakteri yang murni. Kultur bakteri ialah media kultur. Media yang
digunakan dalam isolasi bakteri ini adalah media TSA. TSA (Tryptic Soy Agar)
adalah media yang tumbuh sebagai bakteri yang umum dan digunakan untuk
menumbuhkan bakteri akuatik tawar. TSA merupakan media komersial yang
dipakai untuk media tumbuh bakteri. Kandungan dari TSA ini terdiri atas agar,
tryptone, soytone, dan sodium chloride. Secara umum kultur media bakteri harus
mengandung sumber karbon, nitrogen, sulfur, fosfat, dan vitamin atau bahan-
bahan yang dapat mendorong pertumbuhan bakteri ialah bakteri ekstrak daging.
Pada praktikum ini pembuatan media TSA yaitu dengan menggunakan kaldu
ikan. Sampel yang digunakan untuk isolasi bakteri adalah air comberan dan air
mineral. Metode isolasi yang dapat digunakan untuk isolasi bakteri adalah metode
gores (streak plate), metode tuang (pour plate), dan metode usap. Pada praktikum
ini, yang digunakan adalah metode tuang. Metode tuang adalah suatu teknik untuk
menumbuhkan mikroorganisme di dalam media agar. Metode tuang digunakan
untuk mengisolasi bakteri pada air comberan dan mengisolasi bakteri pada air
mineral. Metode tuang yang diterapkan untuk mengisolasi bakteri pada air
comberan dan air mineral dilakukan dengan cara menuangkan media TSA yaitu
kaldu ikan dan dicampurkan dengan beberapa sampel yaitu air comberan dan air
mineral di dalam cawan petri. Sebelumnya praktikan melakukan sterilisasi pada
cawan petri dengan menggunakan autoklaf selama 15 menit dengan suhu 121℃.
Bakteri yang telah diisolasi diletakkan pada wadah yang berisi media TSA yaitu
cawan petri dan tabung reaksi. Metode tuang dilakukan dengan sel-sel tersebut
yang tersebar merata dan diam dengan baik dipermukaan agar atau di dalam agar.
BAB 5
5.1. Kesimpulan
Adapun kesimpulan yang didapatkan pada praktikum ini adalah sebagai
berikut:
1. Isolasi bakteri merupakan suatu proses pengambilan bakteri dari medium atau
lingkungan asalnya lalu menumbuhkannya pada medium buatan sehingga
dapat diperoleh biakkan bakteri yang murni.
2. Metode yang dapat dilakukan untuk memperoleh mikroorganisme yang murni
dari suatu biakkan campuran yaitu metode cawan gores dan cawan tuang.
3. Cara gores umumnya digunakan untuk mengisolasi koloni mikroba pada
medium agar sehingga didapatkan koloni terpisah dan merupakan biakkan
murni.
4. Metode cawan tuang adalah salah satu teknik untuk menumbuhkan
mikroorganisme didalam media agar dengan cara mencampurkan media agar
yang masih cair dengan stok kultur bakteri.
5. Hasil perhitungan dengan cara cawan tuang ini dinyatakan dalam bentuk
koloni.
5.2. Saran
lagi, teratur, tertib, dan peserta praktikum lebih aktif lagi.
PERHITUNGAN COLONY BAKTERI
BAB 1
PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang

Mikrobiologi merupakan jenis ilmu yang membahas tentang mikroorganisme.
Terdapat banyak sekali jenis organisme yang tersebar luas diseluruh dunia, yang
dimana jenis organisme ataupun mikroba ini terbagi menjadi dua golongan yaitu
mikroba yang merugikan dan mikroba yang menguntungkan. Salah satu jenis
mikroba yang telah tersebar luas dan memiliki jumlah yang banyak adalah bakteri.
Mikroba merupakan makhluk hidup yang dapat hidup diberbagai lingkungan
seperti didaratan, lautan, udara serta di tempat-tempat yang ekstrim. Untuk dapat
melihat jenis mikroba kita harus menggunakan suatu alat yaitu mikroskop karena
mikroba merupakan organisme yang berukuran kecil. Suatu jenis mikroba dapat
melakukan simbiosis komensalisme dan parasitisme yang merupakan hubungan
kehidupan dengan organisme lain seperti hewan, tumbuhan, udara, air, dan tanah
sehingga mikroba jenis patogen ataupun mikroba yang merugikan seperti bakteri
dapat menginfeksi makhluk hidup yang lain baik manusia, hewan, maupun
tumbuhan. Mikroorganisme dapat juga dijumpai dimana-mana (Hasyimi, 2014).
Untuk menghitung jumlah bakteri yang tumbuh pada suatu media pembiakan
dapat menggunakan beberapa cara. Terdapat dua cara dasar untuk melakukan
penghitungan bakteri, yaitu secara langsung dan secara tidak langsung.
Perhitungan jumlah bakteri secara langsung digunakan untuk menentukan jumlah
bakteri keseluruhan baik yang mati maupun yang masih hidup. Sedangkan
perhitungan bakteri secara tidak langsung digunakan hanya untuk menentukan
jumlah bakteri yang masih hidup. Proses penghitungan sel bakteri juga dapat
dilakukan dengan beberapa metode baik secara langsung maupun tidak langsung,
diantaranya adalah metode hitung pada cawan petri atau biasa disebut standart
plate cound, metode pengamatan langsung dengan menggunakan kaca objek atau
juga metode hitung dengan menggunakan haemocytometer, serta metode ukur
kekeruhan atau biasa disebut dengan turbidimetri, khusus pada metode ini yaitu
menggunakan suatu alat yang disebut spektrofotometer. Mikroorganisme hidup
dengan saling berdampingan dengan mikroorganisme lainnya (Brady, 2018).
56
Perhitungan bakteri dengan menggunakan alat spektrofotometer merupakan

contoh perhitungan jumlah bakteri secara tidak langsung. Perhitungan ini sering
disebut perhitungan bakteri secara turbidimetri (kekeruhan). Metode ini
merupakan salah satu cara cepat yang digunakan untuk menghitung jumlah
bakteri dalam suatu larutan dan digunakan untuk uji antibakteri, dimana jumlah
bakterinya dihitung dengan membandingkan kekeruhan suspensi bakteri serta
menggunakan larutan standar McFarland. Penggunaan larutan standar McFarland
ini sebagai referensi untuk menyesuaikan kekeruhan bakteri suspensi sehingga
dapat mengetahui jumlah bakteri dalam kisaran yang dapat diberikan untuk
membekukan mikroba pengujian. Keakuratan jumlah bakteri standar dapat
dilakukan dengan metode hitungan cawan. kerja metode hitungan cawan adalah
jika sel mikroba yang masih hidup ditumbuhkan pada medium agar, maka sel
mikroba tersebut akan berkembang biak dan membentuk koloni yang dapat dilihat
secara langsung dengan mata tanpa menggunakan mikroskop (Rosmania ,2020).
1.2. Tujuan
Tujuan dari praktikum ini adalah mahasiswa bisa mengetahui berbagai macam
cara untuk menghitung jumlah sel dari biakkan suatu bakteri.
BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. PCA (Plate Count Agar)

Plate Count Agar merupakan suatu media pertumbuhan mikroorganisme
yang umumnya digunakan untuk melakukan perhitungan terhadap jumlah bakteri.
Metode. Total Plate Count (TPC) merupakan metode yang digunakan untuk
menghitung jumlah mikroba yang terdapat dalam satu sample Plate Count Agar
juga sering disebut Standard Methods Agar yang merupakan jenis media padat.
Metode ini biasanya menggunakan beberapa sampel seperti makanan, produk
susu, air limbah, dan beberapa sampel-sampel lainnya. Plate Count Agar
merupakan media yang mengandung agar sehingga ketika dalam keadaan dingin
media tersebut akan menjadi padat. Media ini terdiri dari beberapa kandungan
seperti dextrose, casein enzymic hydrolisate, yeast extract, vitamin dan agar.
Pembentukan suspensi dapat dilakukan dengan melarutkan media dengan aqua
destilata yang kemudian dilakukan sterilisasi dengan menggunakan autoklaf
selama 15 menit pada suhu 121oC. Dan pemanasan yang dilakukan untuk media
ini hanya dapat dilakukan sebanyak tiga kali pemanasan karena pemanasan secara
berulang lebih dari tiga kali akan mengurangi kualitas dari medium. (Wati, 2018).
Media Plate Count Agar (PCA) memiliki komposisi yang bervariasi, tetapi
secara umum media ini mengandung 0,5% trypton, 0,25% eksrak ragi, 0,1%
glukosa, 1,5% agar-agar. Beberapa kandungan ini yang digunakan sebagai sumber
energi bagi mikroorganisme untuk mendukung pertumbuhan dari bakteri. Plate
Count Agar (PCA) merupakan media pertumbuhan yang dapat ditumbuhi oleh
berbagai jenis mikroorganisme sehingga tergolong kedalam media yang bukan
selektif. PCA digunakan sebagai medium untuk mikroba aerob dengan inokulasi
diatas permukaan. Pembentukan suspensi dapat dilakukan dengan melarutkan
media dengan aqua destilata kemudian dilakukan sterilisasi dengan menggunakan
autoklaf selama 15 menit pada suhu 121C. Media ini baik untuk pertumbuhan
semua jenis mikroba karena didalam media ini terkandung komposisi casein
enzymic hydrolisate menyediakan asam amino.media pertumbuhan bakteri yang
biasanya digunakan untuk pemekrisaan kualitas bahan makanan. (Ruly, 2017).
58
2.2. Karakteristik Bakteri

Bakteri merupakan jenis organisme yang tersebar luas dan memiliki jumlah
yang banyak dibandingkan dengan organisme lainnya yang terdapat dibumi.
Bakteri adalah sebuah kelompok yang ber sel tunggal ciri -ciri bakteri yang dapat
membedakannya dengan makhluk hidup lain seperti bakteri merupakan organisme
bersifat uniseluler dan termasuk prokariot. Pada umumnya bakteri tidak memiliki
klorofil dan termasuk kedalam mikroba yang memiliki ukuran tubuh yang
bervariasi antara 0,2 s/d ratusan mikron namun memiliki ukuran rata-rata 1 s/d 5
mikron. Bakteri juga memiliki bentuk tubuh yang beraneka ragam dan dapat
hidup bebas atau parasit serta dapat hidup pada lingkungan eksrim seperti mata air
panas, kawah serta gambut yang dinding selnya tidak mengandung peptidoglikan
dan kosmopolit diberbagai lingkungan. Beberapa bakteri dapat dibedakan
berdasarkan cara menyerap zat warna yaitu bakteri gram positif dan bakteri gram
negative. Bakteri gram positif adalah bakteri yang melakukan penyerapan
terhadap zat warna pertama yaitu kristal violet yang menyebabkan berwarna ungu,
sedangkan bakteri gram negatif merupakan bakteri yang penyerapannya zat warna
kedua yaitu safarin dan menyebabkan bakteri berwarna merah (Marsari, 2014).
Selain memiliki bentuk yang bermacam-macam, bakteri juga memiliki
struktur yang terdiri atas inti sel yang tidak sempurna dan kromosom yang terdiri
atas lingkaran tertutup DNA. Beberapa macam bentuk bakteri yaitu: Bulat
(kokus), Batang (basil), Seperti koma (vibrio), dan Spiral. Pertumbuhan
organisme membutuhkan semua unsur dalam bahan organik dan ion yang
dibutuhkan untuk mengolah energi dan katalis. Beberapa komponen yang
dibutuhkan sel-sel bakteri untuk pertumbuhan, yaitu N (nitrogen), K (karbon),
Unsur non logam seperti sulfur dan fosfor, Unsur logam seperti Ca, Zn, K, Cu,
Mn, Mg, dan Fe, Vitamin, Air, dan membutuhkan Energi. Bakteri untuk tumbuh
juga membutuhkan kondisi fisik yang sangat diperlukan yaitu suhu, pH, tekanan
osmose, oksigen, dan kadar air. Berdasarkan suhu dari tempat hidupnya, bakteri
dapat dibagi menjadi beberapa golongan seperti psikofil yaitu bakteri yang
tumbuh pada suhu antara 0-20C. Bakteri termofilik merupakan bakteri yang
memiliki kondisi pertumbuhan optimum dan pada suhu yang tinggi, bakteri
temofilik yang mampu bertahan hidup pada suhu air panas (Soedarto, 2015).
59
2.3. Colony Counter

Colony counter merupakan suatu alat yang digunakan untuk melakukan
perhitungan jumlah sel serta dapat digunakan untuk konsentrasi sel yang rendah
yang dimana alat ini memiliki kelebihan yaitu dapat digunakan secara cepat. Alat
ini juga dapat digunakan untuk menghitung koloni bakteri yang ditimbulkan di
media yang disimpan dalam petridish. Prinsip kerja yang diterapkan pada alat ini
yaitu seletah menekan tombol “ON”, kemudian energi cahaya pada wolfugel disks
lalu letakkan cawan petri yang berisi bakteri. Atur alat penghitung pada posisi dan
mulai menghitung dengan menggunakan jarum petunjuk sambil melihat jumlah
koloni pada layar hitung. Colony counter ini terbagi menjadi dua jenis yaitu
otomatis dan semi otomatis. Sama seperti alat pada umumnya yang memiliki
kelebihan dan juga kelemahan. Kelebihan dari alat penghitung ini yaitu berfungsi
untuk menghitung mikroba dan menghitung bakteri secara langsung selama
mengobservasi morfologi dari bakteri atau mikroba yang sedang tumbuh.
meminimalisir kesalahan human error dalam penghitungan koloni. Kelemahannya
yaitu membutuhkan waktu yang relatif yang lama dan untuk menghitung koloni
dikarenakan penghitungan dilakukan secara manual dan jika ada konsleting pada
alat tersebut hasil perhitungan akan menjadi tidak akurat (Sethi et al, 2012).
Pada colony counter, perhitungan jumlah koloni bakteri menggunakan
dengan sistem Arduino uno smd dengan minimum sistem atmega 328 dan probe
sebagai penghitung koloni bakteri. Dan Alat penghitung koloni ini bekerja dengan
memanfaatkan lup untuk memperbesar koloni bakteri yang terdapat pada cawan
petri. Penghitungan menggunakan alat ini menggunakan mata untuk melihat
koloni bakteri pada cawan petri, dengan bantuan lup (kaca pembesar) dan sumber
cahaya berupa LED. Sampel yang terlihat nantinya akan dihitung dengan
menggunakan probe. Colony counter pada umumnya masih bersifat manual
karena hanya mengandalkan daya ingat petugas laboratorium. Proses perhitungan
yang masih manual seperti ini akan dapat berdampak pada lambatnya proses
penghitungan dan rendahnya kualitas hasil yang didapat. Dengan adanya proses
seperti ini maka diperlukan otomasisasi perhitungan dengan menggunakan alat
seperti perancangan berbasis mikrokontroler. Perhitungan jumlah koloni bakteri
dengan error dalam penghitungan koloni bakteri (Wicaksono et al., 2019).
BAB 3

Praktikum Perhitungan Jumlah Bakteri dilaksanakan pada hari Senin tanggal
24 Oktober 2022 pada pukul 12.00 WIB sampai dengan selesai, dilakukan secara
offline melalui di laboratorium mikrobiologi akuatik.
3.2. Alat dan Bahan

Adapun alat dan bahan yang digunakan pada saat Praktikum Perhitungan
colony counter adalah pipet tetes, inkubator, spektrofotometri, dan juga tabung
reaksi, adapun bahan yang digunakan yaitu sampel bakteri (tempe, ikan asin, air
mineral, air comberan) serta Potato Dextrose Agar (PDA) dan Trypticase Soy
Agar (TSA)
3.3. Prosedur Kerja

1. Ambil media yang sudah di siapkan didalam incubator
2. keluarkan media dari dalam inkubaor
3. Nyalakan colony counter
4. Letakkan cawan petri yang berisi koloni bakteri yang akan dihitung di atas
meja yang dilengkapi dengan skala dengan keadaan cawan petri yang sudah
dibalik.
5. Tandai koloni dengan mengarahkan pulpen ke meja skala
6. hitung koloni bakteri terpisah
7. Lihat koloni dengan bantuan kaca pembesar.
BAB 4
4.1. Hasil
Adapun hasil dari praktikum menghitung colony Bakteri adalah sebagai
berikut.
Tabel 4.1.5. Hasil Praktikum Menghitung Colony Bakteri
No Nama Sampel Gambar
1. Potato Dextrose Agar (PDA)
2. Trypticase Soy Agar (TSA)
62
4.2. Pembahasan
Berdasarkan praktikum perhitungan jumlah bakteri ini, kita dapat
mengetahui dan menggunakan alat penghitung bakteri yaitu colony counter.
Untuk melakukan perhitungan jumlah bakteri, terlebih dahulu menyiapkan
peralatan yang akan digunakan di dalam laboratorium. Sebagai media yang
digunakan dalam pembuatan sampel yaitu dengan menggunakan media TSA
Setelah itu dilanjutkan dengan pembuatan bahan atau sampel yang akan
digunakan dan dilakukan sterilisasi. Setelah tahap sterilisasi selesai maka
dilanjutkan dengan tahap inkubasi yaitu tahap memasukkan media dan sampel ke
dalam alat yaitu cawan petri dan dilanjutkan dengan memasukkan cawan petri
tersebut ke dalam alat inkubator dan didiamkan di dalam inkubator karena untuk
dapat mengetahui jumlah koloni yang ada pada sampel yang digunakan, minimal
waktu yang dibutuhkan, jika kurang dari waktu di dalam inkubator, dan sampel-
sampel tersebut itu dikeluarkan dan dilakukan .perhitungan koloninya dengan
menggunakan sebuah alat penghitung koloni yaitu colony counter. Secara umum
kultur media bakteri yang harus mengandung sumber karbon nitrogen, sulfur,
fosfat, vitamin atau bahan-bahan yang dapat mendorong bakteri akuatik tawar.
Untuk menggunakana alat penghitung koloni yakni colony counter, terlebih
dahulu kita akan menyiapkan alat tersebut. Alat colony counter dihubungkan stop
kontak dengan sumber tegangan dan nyalakan alat dengan menekan tombol
“ON”. Reset jumlah perhitungan hinnga menunjukkan angka “0”. Letakkan
cawan petri yang berisi koloni bakteri yang akan dihitung diatas meja yang
dilengkapi dengan skala Lihat koloni dengan bantuan lup/kaca pembesar. Tandai
koloni dengan mengarahkan pulpen ke meja skala dan yang dihitung koloni yang
terpisah. Hasil dari perhitungan koloni dengan alat colony counter didapatkan
hasil 20 kolonipada air comberan serta 17 koloni pada air mineral. Dan pada
media PDA didapatkan 11 koloni pada sampel temped an koloni pada sampel ikan
asil adalah 27 koloni. Berdasarkan hasil perhitungan colony counter didapatkan
jumlah Jika telah didapatkan jumlah perhitungan koloni dengan alat colony
counter, dan alat tersebut tidak akan digunakan lagi maka alat tersebut harus
dimatikan. Media yang digunakan dalam isolasi bakteri ini adalah media TSA.
TSA yang merupakan media komersial yang dipakai untuk media tumbuh bakteri.
BAB 5
5.1. Kesimpulan
Adapun kesimpulan yang didapatkan dari Praktikum Perhitungan Jumlah
Bakteri adalah sebagai berikut:
1. Plate Count Agar (PCA) merupakan suatu media pertumbuhan
mikroorganisme yang umumnya digunakan untuk melakukan perhitungan
terhadap jumlah bakteri.
2. Pada umumnya bakteri tidak memiliki klorofil dan termasuk kedalam
mikroba yang memiliki ukuran tubuh yang bervariasi antara 0,2 s/d ratusan
mikron namun memiliki ukuran rata-rata 1 s/d 5 mikron.
3. Colony counter merupakan alat yang dapat digunakan untuk menghitung
koloni bakteri yang ditimbulkan di media yang disimpan dalam petridish.
4. Pada media sampel air comberan didapatkan jumlah bakteri 20 dan untuk air
mineral didapat sebanyak 17.
5. Dan pada media sampel didapat jumlah bakteri 11 dan untuk sampel ikan
asin 27.
5.2. Saran
lagi, teratur, tertib, dan peserta praktikum lebih aktif lagi.
DAFTAR PUSTAKA
Abdul,2016.Mikrobia endofit: Manfaat dan cara mengisolasinya. Alam Kita.

12(1). 11-14
Ahmad Yani. 2016. Pengenalan Alat-Alat Laboratorium Mikrobiologi Untuk
Mengatasi Keselamatan Kerja dan Keberhasilan Praktikum. Jurnal
Mikrobiologi. Fakultas Farmasi Universitas Halu Olea.
Amelia, F. 2019. Identifikasi Dan Uji Aktivitas Antimikroba Bakteri Asam Laktat
Yang Diisolasi. Universitas Katolik Soegijapranata Semarang.
(Skripsi)
Andre. 2015. Manajemen Pengolahan Alat dan Bahan Di Laboratorium
Mikrobiologi. Jurnal Pengelolaan Laboratorium Pendidikan.
Laboratorium Mikrobiologi Departemen Biologi. Indonesia.
Andriyani. 2016. Manual Laboratorium Mikrobiologi. Jakarta: Rajawali Press.
Anis, 2013. Sterilisasi Fisika Kesehatan, Vol. 67, No. 6. Yogyakarta.
Astuti, 2017. Analisis Mikroba di Laboratorium. Jakarta: PT. Raja Grafindo

Persada.
Astuti,2012. Isolasi dan Seleksi Jamur Aphyllophorales Pengurai Lignin di Hutan
Bukit Bangkirai, Kalimantan Timur. Jurnal Berita Biologi, Vol 9, No
6. Bidang Mikrobiologi, Pusat Penelitian Biologi, Lembaga Ilmu
Pengetahuan Indonesia (LIPI), Bogor.
Aswin. 2015. Keragaman Jenis Jamur yang Menyerang Tanaman Mahoni
(Swietenia Macrophylla King.) di Kampus Universitas Hasanuddin
Makassar, Sulawesi Selatan. Jurnal Perennial. 14(1) : 9–16.
Atirillah, 2013. Media Alternatif Untuk Pertumbuhan Jamur Menggunakan
Sumber Karbohidrat yang Berbeda. Skripsi : Universitas
Muhammadiyah Surakarta
Brady, 2018. Identifikasi Dan Uji Aktivitas Antimikroba Bakteri Plate Count
Agar Yang Diisolasi. Universitas Katolik Soegijapranata Semarang.
(Skripsi)
Cahyani, 2016. Media Alternatif untuk Pertumbuhan Jamur. Program Studi

Pendidikan Biologi Fakultas Pertanian dan Ilmu Pendidikan
Universitas Muhammadiyah Surakarta: Surakarta
Damayanti, 2020. Media Pertumbuhan Mikroorganisme Jilid I. Jakarta: Erlangga.
Gunawan. 2019. Mikrobiologi Dasar dalam Praktek, Teknik dan Prosedur Dasar
Laboratorium. Jakarta: Gramedia Pustaka Utama
Hadioetomo, 2018. “Pengaruh Metode Sterilisasi Radiasi Sinar Gamma Co60
Dan Autoklaf Terhadap Bahan Pembawa, Viabilitas Spora Gigaspora
Margarita Dan Ketersediaan Fe, Mn, Dan Zn,” Vol. 41, No. 1, Pp. 1–8,
Hadioetomo, 2019. Aktivitas Antibakteri Isolat Actinomycetes Dari Sampel Pasir
Gunung Merapi Dengan Lama Fermentasi Yang Berbeda Terhadap
Bakteri Escherichia coli, Bioeksperimen, 1 (2), 53–59.
Hamidi. 2014. di Analisis Mikroba Laboratorium. Jakarta: PT. Raja Grafindo
Persada.
Hardiansyah 2015. Perhitungan Jumlah Bakteri di Laboratorium Mikrobiologi
Menggunakan Pengembangan Metode Spektrofotometri. Jurnal
Penelitian Sains. Sumatera Selatan: Universitas Sriwijaya.
Hasyimi, 2014. Perhitungan Jumlah Bakteri di Laboratorium Mikrobiologi
Menggunakan Pengembangan Metode Spektrofotometri. Jurnal Penelitian
Sains. Sumatera Selatan: Universitas Sriwijaya.
Hidayat, 2014. Mikrobiologi Umum. Bandung: Departemen Biologi FMIPA. ITB.
Horikoshi, 2017. Pengaruh Sinar Ultra Violet Terhdap Pertumbuhan Bakteri

Bacillus subtilis Sebagai Bakteri Kontaminan.
Ibrahim et al., 2015. Pola Resistensi Bakteri di Laboratorium Mikrobiologi Klinik
Fakultas Kedokteran, Skripsi, Fakultas Kedokteran, Universitas
Indonesia, Jakarta.
Indriyani. 2013. Pengenalan Alat-Alat Laboratorium. Jurnal Mikrobiologi

Irianto, 2012. Teknik Metode Dasar Mikrobiologi, Universitas Muhammadiyah
Malang Press, Malang.
Irma,2012. Identifikasi Spesies Jamur pada Rumah Makan di Kawasan Stasiun
Gubeng Surabaya, The Journal of Muhammadiyah Medical
Laboratory Technologist, 2(2). Diakses pada tanggal 25 juni 2018.
Kartini, 2012. Isolation, characterization and identification of Actinomycetes from
agriculture soils at Semongok, Sarawak, African Journal of
Biotechnology, 7 (20), 3697-3702.
Khairani, 2015. “Jurnal Praktikum Mikrobiologi Dasar Perkenalan Alat Dan
Sterilisasi,”
Khairani, 2015. “Sterilisasi – Laboratorium Mikrobiologi FK UII,”
Kurniawansyah , 2013. “50X Electrical Model Autoclave”. Panduan penggunaann

Autoklaf.
Kut Dan Bittner. 2017. Rancang Bangun Penghitung Jumlah Koloni Bakteri
Berbasis Arduino Uno. Jurnal Polsri. Bandung: Sekolah Tinggi Teknologi
Bandung
Lestari, 2016. Pedoman praktikum Mikrobiologi umum (Untuk Perguruan Tinggi).
Yogyakarta: UGM Press.
Machmud, 2012. “Sterilisasi dan Macam-macamnya”. Lembaga Sumber Daya
Informasi, IPB, Bogor.
Madigan, 2014 “Jurnal Praktikum Mikrobiologi Dasar Perkenalan Alat Dan

Sterilisasi,”
Marsari, 2014. Media Pertumbuhan Plate Count Agar Mikroorganisme Jilid I.
Jakarta: Erlangga.
Maulana. 2017. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: Djambatan. Mittai. 2016.
Mikrobiologi Dasar dalam Praktek, Teknik dan Prosedur Dasar
Laboratorium. Jakarta: Gramedia Pustaka Utama. Universitas
Sriwijaya
Muhammad, 2019. Isolasi, Populasi dan Karakterisasi Bakteri Pelarut Fosfat
Sulawesi Utara. Biologi,
Muhammad, 2019. Sterilisasi Alat Media. ANDI. Jakarta
Novalind, 2017. Identifikasi Morfologi dan Uji Aktivitas Antimikroba terhadap
Bakteri Escherichia Coli (Passiflora Sp.). Skripsi. Yogyakarta.
Program Studi Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Islam Indonesia.
Nurhabibah, 2014. Prinsip Kerja Autoklaf. Panduan Penggunaan Autoklaf.
Purwaningsih, S, 2003, Isolasi, Populasi dan Karakterisasi Bakteri Pelarut Fosfat
pada Tanah dari Taman Nasional Bogani Nani Wartabone, Sulawesi
Utara. Biologi.
Putri. 2014. Panci Tekan Sebagai Alat Sterilisasi Alternatif Pengganti Autoklaf.
Radji, 2013. Pemeriksaan Jamur Bilasan Bronkus pada Penderita Bekas
Tuberkulosa Paru. Universitas Sumatera Utara : 1–31.
Raudah. 2017. Mikrobiologi Umum. Penterjemah Tedjo Baskoro. Edisi.
Yogyakarta: UGM Press.
RetnoNingrum. 2012. Pengenalan Laboratorium IPA-BIOLOGI sekolah.
Bandung: Refika Aditama.
Rinto, 2014. Prevalensi Jamur pada Pemeriksaan Mikroskopis Sputum Pasien TB
di Instalasi Mikrobiologi RSUP Sanglah , Denpasar , Bali Periode
2011 – 2013. E-Jurnal Medika. 6(9) : 38–41.
Rosmania. 2020. Identifikasi Morfologi dan Uji Aktivitas Antimikroba terhadap
Karakteristik Bakteri Skripsi. Yogyakarta. Program Studi Kimia,
Fakultas MIPA, Universitas Islam Indonesia.
Ruly. 2017. Peranan Bakteri Actinomycetes dalam Industri Antibiotik, Journal
online Biosains, Jakarta
Rumondor, 2014. Isolasi Bakteri Asam Laktat Penghasil Bakteriosin. Fakultas
pertanian. Institut Pertanian Bogor. (skripsi) Sullivan 2019. Skrining
Mikroorganisme Penghasil Antibiotik, cermin dunia kedokteran,
Jakarta.
Santi, 2013. Isolasi Dan Identifikasi Jamur-Jamur Pendegradasi Amilosa Pada
Empelur Tanaman Sagu ( Metroxylon sagu Rottb.)’, 2(1), pp. 27–34.
Diakses pada tanggal 21 maret 2018
Septiari. 2012. Perbandingan Efektivitas Sterilisasi Alkohol 70%, Inframerah,
Otoklaf, dan Ozon terhadap Pertumbuhan Bakteri Bacillus subtilis. Jurnal
Sain Veteriner. 25(1).
Sethi. 2012. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: Djambatan.
Sethi. 2012. Inkubator Bakteri Dilengkapi Dengan Colony Counter (Inkubator
Bakteri). Politeknik Kesehatan Surabaya, Surabaya.
Setiawan, 2012. Seri panduan Teknik isolasi fungi. LIPIPress.Jakarta
Sinta,2012. Mikolobiologi kultur jamur Dasar . Jakarta: Yayasan Obor Indonesia
Soedarto. 2015. Skrining Mikroorganisme Penghasil Antibiotik, cermin dunia
kedokteran. Jakarta
Susi Susanti. 2014. Teknik Penyimpanan dan Pemeliharaan Mikroba. Balai
Penelitian Bioteknologi Tanaman Pangan, Bogor. Jurnal Buletin
AgroBio.
Susi, 2015. Isolasi, Identifikasi dan Uji Resistensi Antibiotika Mikroorganisme
dari Sputum Penderita Batuk Kronis. Jurnal Kedokteran Syiah
Kuala. 12(1) : 1–6.
Syarif. 2017 Penuntun Praktikum Mikrobiologi. Jakarta: Erlangga
Tim pengampu. 2015. Mikrobiologi dasar dalam praktek. Jakarta: Gramedia
Pustaka Utama
Waluyo, 2017. Peranan Bakteri Actinomycetes dalam Industri Antibiotik, Journal
online Biosains, Jakarta.
Wati. 2018. Evaluasi Kadar Bakteri Di Udara Dengan Menggunakan Media
Plate Count Agar (PCA) Berdasarkan Tinggi Secara Vertikal Departemen
Bedah Mulut RSGMP FKG USU Dengan Metode Total Plate Count
(TPC). Universitas Sumatera Utara.
Wicaksono. 2018. Mikrobiologi Dasar. Jakarta: Binarupa Aksara.
Wicaksono. 2019. Peranan Bakteri Actinomycetes dalam Industri Antibiotik,

Journal online Biosains. Jakarta.

Laporan Tetap Praktikum Dasar-Dasar Mikrobiologi Akuatik: Retno Setia Ningsi 05061282227026

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Laporan Tetap Praktikum Dasar-Dasar Mikrobiologi Akuatik: Retno Setia Ningsi 05061282227026

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

LAPORAN TETAP

PRAKTIKUM DASAR-DASAR MIKROBIOLOGI AKUATIK

Retno Setia Ningsi

PROGRAM STUDI TEKNOLOGI HASIL PERIKANAN

Retno Setia Ningsi

Indralaya, Desember 2022

Anggun Mutiara Riski Amelia

Dosen Koordinator Pratikum

Gama Dian Nugroho, S. Pi., M. Sc

Indralaya, Desember 2022

Retno Setia Ningsi

iii Universitas Sriwijaya

Tabel 4.1.1. Peralatan yang Umum digunakan di Laboratorium .................... 10

vii Universitas Sriwijaya

1.1. Latar Belakang

2.1. Alat-Alat Laboratorium Mikrobiologi

2.2. Bahan Kimia Laboratorium Mikrobiologi

3.1. Waktu dan Tempat

3.2. Alat dan Bahan

3.3. Prosedur Kerja

1 Erlenmeyer Wadah untuk mencampurkan larutan

2 Gelas Kimia Untuk mengaduk, mencampurkan,

3 Pipet Tetes Alat pemindah Cairan dalam Jumlah

5 Tabung Wadah untuk mereaksikan bahan-

6 Pipet Mengambil larutan dengan

7 Labu Ukur Wadah untuk membuat dan

8 Mortal dan Alat untuk mengerusatau

10 Kaki Tiga Penahan kawat kasandan

11 PenjepitTabung Menjepit tabung

12 Termomete r Untuk mengukur suhu suatu

13 Kaca Arloji Wadah bahan yangakan

14 Plat Tetes Wadah bahan untukpengujian

15 Corong Untuk memindahkancairan

16 Botol Semprot Sebagai wadahaquades

17 Kawat Kasa Menahan beaker ataulabu pada

18 Batang Membantu mencampurkan zat

19 Oven Memanaskan atau

20 Colony Menghitung koloni bakteri

1.1. Latar Belakang

Kemampuan penggunaan alat laboratorium merupakan sikap yang dapat

2.1. Pengertian Sterilisasi

2.2. Macam Macam Alat Sterilisasi

2.3. Sterilisasi Fisika

2.4. Sterilisasi Kimia

2.5. Sterilisasi Mekanik

3.1. Waktu dan Tempat

3.2. Alat dan Bahan

3.3. Prosedur Kerja

Memanaskan atau mengeringkan

Digunakan untuk melakukan

Untuk memanaskan larutan dan

1.1. Latar Belakang

2.1. Isolasi Kultur Jamur

2.2. Metode Gores

2.3. Metode Tuang dan Sebar

2.5. Ikan Asin

3.1. Waktu dan Tempat

3.2. Alat dan Bahan

3.3. Prosedur Kerja

1.1. Latar Belakang

Mikroorganisme hasil dari isolasi perlu diidentifikasi untuk mengetahui jenis

2.1. Isolasi Kultur Bakteri

2.2. Metode Gores