LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI LINGKUNGAN

MODUL 3

Kelompok 2
Anggota Kelompok/NIM : Cantika Dina Feza/104223047
Anggota Kelompok/NIM : Alvina Damayanti/104223049

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI LINGKUNGAN

PROGRAM STUDI TEKNIK LINGKUNGAN
FAKULTAS PERENCANAAN INFRASTRUKTUR
UNIVERSITAS PERTAMINA
2023/2024
PENGAMATAN MIKROORGANISME
 Alvina Damayanti, Cantika Dina Feza*
Program Studi Teknik Lingkungan, Fakultas Perencanaan Infrastruktur, Universitas
Pertamina
*corresponding author: felisaalxndr06@gmail.com

Abstrak : Pada percobaan praktikum kali ini yang berjudul “Pengamatan Mikroorganisme”. Pengamatan secara
visual merupakan aspek penting dalam mempelajari mikroba. Dalam upaya pengamatan secara visual
diperlukan alat bantu berupa mikroskop. Pemahaman dan ketrampilan dalam menggunakan mikroskop menjadi
tuntutan penting dalam dunia mikrobiologi. Mikrobiologi merupakan salah satu kompleks terbesar dari ilmu
biologi yang mempelajari tentang kehidupan mikroba beserta interaksinya yang berukuran mikroskopis, yaitu
beberapa mikron atau bahkan lebih kecil. Peranan mikroorganisme di bidang lingkungan diantaranya adalah
sebagai biosensor terhadap adanya polutan di alam. Pada praktikum ini digunakan mikroba Baccillus Subtilis,
Rhizopus sp, dan Staphylococcus Aureus. Praktikum ini bertujuan untuk menentukan morfologi bakteri dengan
mewarnai latar belakang nya dalam metode pewarnaan sederhana asam, menentukan morfologi bakteri dengan
mewarnai sel bakteri nya dalam metode pewarnaan sederhana basa, menentukan morfologi sel dan jenis gram
bakteri, menentukan bentuk spora dan sel vegetatif bakteri, serta menentukan struktur jamur mikroskopis. Hasil
yang telah didapatkan pada praktikum kali ini yaitu pewarnaan sederhana asam menghasilkan bentuk baccil
berwarna putih, pewarnaan basa menghasilkan bentuk coccus dan berwarna biru, pewarnaan gram menghasilkan
bentuk baccil, berwarna ungu dan memiliki gram positif, pewarnaan spora menghasilkan warna sel vegetatif
merah, warna spora hijau, dan endospora berwarna hijau didalam merah, serta pengamatan pada jamur
mikroskopis menghasilkan bakteri Sporangiophore dan Sporangiospore.

Kata Kunci : Bacillus Subtilis, Mikroba, Mikroskopis, Rhizopus sp, Staphylococcus Aureus.

Abstract : In this practical experiment entitled "Observation of Microorganisms". Visual

observation is an important aspect in studying microbes. In order to make visual
observations, tools in the form of a microscope are needed. Understanding and skills in using
a microscope are important demands in the world of microbiology. Microbiology is one of
the largest complexes of biological science that studies microbial life and its microscopic
interactions, namely several microns or even smaller. The role of microorganisms in the
environmental sector includes as biosensors for the presence of pollutants in nature. In this
practicum, the microbes Bacillus Subtilis, Rhizopus sp, and Staphylococcus Aureus were
used. This practicum aims to determine the morphology of bacteria by coloring the
background using a simple acid staining method, determining the morphology of bacteria by
coloring the bacterial cells using a simple alkaline staining method, determining cell
morphology and gram type of bacteria, determining the shape of bacterial spores and
vegetative cells, and determining microscopic fungal structure. The results that have been
obtained in this practicum are simple acid staining which produces a white baccil shape,
alkaline staining produces a coccus shape and is blue, gram staining produces a baccil shape,
purple and gram positive, spore staining produces a red vegetative cell color, spore color
green, and endospores are green in red, and observations of microscopic fungi produce
Sporangiophore and Sporangiospore bacteria.
Keywords : : Bacillus Subtilis, Microbes, Microscopic, Rhizopus sp, Staphylococcus Aureus.
PENDAHULUAN

A. LATAR BELAKANG

Pengamatan secara visual merupakan aspek penting dalam mempelajari

mikroba. Dalam upaya pengamatan secara visual diperlukan alat bantu berupa
mikroskop. Pemahaman dan ketrampilan dalam menggunakan mikroskop menjadi
tuntutan penting dalam dunia mikrobiologi.
Mikrobiologi merupakan salah satu kompleks terbesar dari ilmu biologi yang
mempelajari tentang kehidupan mikroba beserta interaksinya yang berukuran
mikroskopis, yaitu beberapa mikron atau bahkan lebih kecil. Mikroorganisme
umumnya dapat ditemukan di dalam tubuh manusia, hewan, tumbuhan, serta
lingkungan. Peranan mikroorganisme di bidang lingkungan diantaranya adalah
sebagai biosensor terhadap adanya polutan di alam. Sedangkan dalam bidang
kehutanan, mikroorganisme turut berperan penting yaitu sebagai pengurai serasah
menjadi unsur hara yang dapat dimanfaatkan kembali oleh tanaman.
Pada praktikum ini digunakan mikroba Baccillus Subtilis, Rhizopus sp, dan
Staphylococcus Aureus. Metode-metode yang ada pada pengamatan mikroorganisme
dalam percobaan yaitu, metode pewarnaan sederhana asam, metode pewarnaan
sederhana basa, metode pewarnaan gram, metode pewarnaan spora, dan pengamatan
jamur Mikroskopis.

B. Rumusan Masalah
1. Bagaimana morfologi bakteri dengan mewarnai latar belakang nya dalam metode
pewarnaan sederhana asam?
2. Bagaimana morfologi bakteri dengan mewarnai sel bakteri nya dalam metode
pewarnaan sederhana basa?
3. Bagaimana morfologi sel dan jenis gram bakteri?
4. Bagaimana bentuk spora dan sel vegetatif bakteri?
5. Bagaimana struktur jamur mikroskopis?

C. Tujuan
1. Menentukan morfologi bakteri dengan mewarnai latar belakang nya dalam metode
pewarnaan sederhana asam.
2. Menentukan morfologi bakteri dengan mewarnai sel bakteri nya dalam metode
pewarnaan sederhana basa.
3. Menentukan morfologi sel dan jenis gram bakteri.
4. Menentukan bentuk spora dan sel vegetatif bakteri.
5. Menentukan struktur jamur mikroskopis.
D. TEORI DASAR

Pengamatan secara visual merupakan aspek penting dalam mempelajari

mikroba. Dalam upaya pengamatan secara visual diperlukan alat bantu berupa
mikroskop. Pemahaman dan ketrampilan dalam menggunakan mikroskop menjadi
tuntutan penting dalam dunia mikrobiologi. Mikrobiologi merupakan salah satu
kompleks terbesar dari ilmu biologi yang mempelajari tentang kehidupan mikroba
beserta interaksinya yang berukuran mikroskopis, yaitu beberapa mikron atau bahkan
lebih kecil. Mikroorganisme umumnya dapat ditemukan di dalam tubuh manusia,
hewan, tumbuhan, serta lingkungan. Peranan mikroorganisme di bidang lingkungan
diantaranya adalah sebagai biosensor terhadap adanya polutan di alam (Prayitno,
2017). Sedangkan dalam bidang kehutanan, mikroorganisme turut berperan penting
yaitu sebagai pengurai serasah menjadi unsur hara yang dapat dimanfaatkan kembali
oleh tanaman (Lambui, 2017).
Mikroskop cahaya merupakan salah satu alat yang berperan sangat penting
untuk mengamati sebuah objek yang berukuran mikroskopis yang menggunakan
sumber cahaya untuk mengirimkan gambar ke mata. Pada mikroskop cahaya,
bayangan akhir mempunyai sifat yang sama seperti bayangan, semu, terbalik, dan
lebih lagi diperbesar (Pramudita, 2012). Mikroskop cahaya ini terdiri dari dua bagian
yaitu optik dan non-optik. Mikroskop cahaya bekerja dengan cara membiaskan
cahaya lampu dengan lensa kondenser, yang dimana sinarnya akan mengenai
spesimen dan diteruskan oleh lensa objektif. Lensa objektif merupakan bagian
terpenting dari mikroskop yang berfungsi untuk mengetahui perbesaran mikroskop.
Sinar yang diteruskan oleh lensa objektif ditangkap oleh lensa okuler, kemudian
diteruskan pada mata.
Pada praktikum ini digunakan mikroba Baccillus Subtilis, Rhizopus sp, dan
Staphylococcus Aureus. Bacillus subtilis merupakan bakteri gram positif yang dapat
membentuk endospora berbentuk oval di bagian sentral sel. Bakteri ini mampu
mempertahankan zat warna Kristal Violet yang akan menghasilkan warna ungu ketika
ditetesi dengan larutan KOH (Aini et al. 2013). Staphylococcus aureus adalah bakteri
gram positif, yang memiliki diameter dari 0,5 hingga 1,5 mikrometer, non motil, dan
anaerob fakultatif yang biasanya berbentuk klister (UTA, 2019). Bakteri ini adalah
bagian dari flora manusia, yang pada umumnya ditemukan pada hidung dan kulit
manusia. Isolat Rhizopus spp. berhasil diisolasi dari kedelai sebagai salah satu bahan
pakan konsentrat setelah ditumbuhkan dan dimurnikan pada media PDA yang
diinkubasi selama 4 hari. Rhizopus spp. merupakan jamur kosmopolitan yang sering
ditemukan di tanah, berbagai substrat organik seperti buah dan sayuran serta produk
hasil fermentasi (Endrawati & Kusumaningtyas, 2017). Faktor yang menyebabkan
jamur ini dapat mudah ditemukan keberadaannya adalah karena dalam
pertumbuhannya tidak memerlukan nutrisi yang spesifik, namun di penelitian ini
Rhizopus spp. hanya ditemukan pada kedelai dari beberapa bahan pakan konsentrat
yang telah diisolasi. Hal ini diduga disebabkan oleh tidak adanya kontaminasi pada
bahan pakan yang lain dan atau faktor kelembapan pada bahan pakan konsentrat
tersebut (Park et al. 2016). Jamur tingkat rendah seperti Rhizopus spp. umumnya
memerlukan lingkungan dengan tingkat kelembapan relatif yang tinggi yaitu (Rh) ≥
90% untuk dapat tumbuh. Salah satu enzim yang dihasilkan oleh Rhizopus spp.
adalah enzim β-glukanase (Celestino et al., 2006).
 Prinsip dasar dari teknik pewarnaan adalah ikatan ion antara senyawa aktif
dari pewarna dan komponen seluler bakteri. Jika pewarna bermuatan positif disebut
pewarna basa. Sebaliknya, pewarna bermuatan negatif disebut pewarna asam. pH
yang mendekati netral, sel bakteri memiliki muatan yang cenderung negatif. Sehingga
jika diberi pewarna yang memiliki ion negatif, bakteri tidak akan terwarnai dan jika
diberi pewarna yang memiliki ion positif maka akan terjadi ikatan ion antara sel
bakteri dan zat aktif pewarna yang akan menghasilkan bakteri yang terwarnai. Teknik
pewarnaan bakteri memiliki beberapa cara, diantaranya pewarnaan sederhana dan
pewarnaan diferensial. Pewarnaan sederhana merupakan teknik pewarnaan yang
paling sering digunakan karena dapat diterapkan pada semua jenis sel bakteri dan
hanya menggunakan satu jenis pewarna (Moyes et al., 2009). Salah satu pewarna
tunggal atau sederhana yang sering digunakan pada bakteri adalah Methylene Blue.
Pewarna Methylene Blue bersifat toksik, dapat menyebabkan mutasi genetik, iritasi
saluran pencernaan, sianosis jika terhirup, iritasi pada kulit dan berpengaruh pada
reproduksi (Fathoni dan Rusmini, 2016). Teknik pewarnaan sederhana pada bakteri
digunakan dalam diagnosis penyakit salah satunya adalah penyakit infeksi. Penyakit
infeksi merupakan penyebab utama angka morbiditas dan mortalitas di dunia.
Staphylococcus aureus dan Escherichia coli adalah penyebab utama berbagai penyakit
infeksi pada manusia dan hewan.
Metode pewarnaan diferensial, yang biasanya membutuhkan lebih dari satu
pewarnaan dan beberapa langkah, karena memungkinkan diferensiasi jenis sel atau
struktur sel. Salah satu contoh pewarnaan diferensial adalah pewarnaan Gram. Pada
tahun 1884, dokter Hans Christian Gram mempelajari penyebab penyakit pernapasan
seperti pneumonia. Dia mengembangkan prosedur pewarnaan yang
memungkinkannya mengidentifikasi bakteri di jaringan paru-paru yang diambil dari
pasien yang meninggal sebagai agen etiologi dari jenis pneumonia yang fatal.
Meskipun tidak banyak membantu pengobatan untuk penyakit ini, metode pewarnaan
Gram membuatnya lebih mudah untuk mendiagnosis penyebab kematian seseorang
pada otopsi. Sifat diferensial pewarnaan Gram didasarkan pada kemampuan beberapa
sel bakteri untuk mempertahankan pewarnaan primer (kristal violet) dengan menolak
proses dekolorisasi.
METODE PENELITIAN

A. Alat dan Bahan

Alat yang diperlukan ketika pengamatan mikroorganisme menggunakan
metode pewarnaan sederhana asam, pewarnaan sederhana basa, dan pewarnaan
gram adalah jarum ose, kaca objek, penutup kaca, pembakar bunsen, dan
mikroskop. Alat yang diperlukan ketika pengamatan mikroorganisme
menggunakan metode pewarnaan spora adalah jarum ose, kaca objek, penangas
air, penutup kaca, pembakar bunsen, dan mikroskop. Alat yang diperlukan ketika
pengamatan jamur Mikroskopis adalah jarum ose, kaca objek, kaca penutup,
cawan petri, penangas air, pembakar bunsen, inkubator, dan mikroskop.

Bahan yang diperlukan untuk pengamatan mikroorganisme menggunakan

metode pewarnaan sederhana asam adalah akuades, Nigrosin atau Eosin, dan
kultur bakteri. Bahan yang diperlukan untuk pengamatan mikroorganisme
menggunakan metode pewarnaan sederhana basa adalah akuades, Metilen Blue,
dan kultur bakteri. Bahan yang diperlukan untuk pengamatan mikroorganisme
dengan metode pewarnaan gram adalah akuades, Kristal Violet, Safranin, Iodine,
kultur bakteri, dan alkohol 96%. Bahan yang diperlukan untuk pengamatan
mikroorganisme dengan metode pewarnaan spora adalah akuades, Malachite
Green, Safranin, dan kultur Bacillus sp. Bahan yang diperlukan untuk pengamatan
jamur Mikroskopis adalah akuades, media PDA, dan kultur Rhizopus sp.

B. Cara Kerja
1. Pewarnaan Sederhana Asam
Satu tetes Nigrosin atau Eosin diletakkan pada kaca objek. Dilakukan 1
atau 2 kali pengambilan kultur bakteri Staphylococcus Aureus menggunakan
jarum ose lalu dilarutkan dengan pewarna. Kemudian, campuran bakteri dan
pewarna pada kaca objek dihapuskan lalu dibiarkan mengering dan jangan
dipanaskan. Diamati dengan mikroskop.

2. Pewarnaan Sederhana Basa

Satu tetes akuades diletakkan dikaca objek. Kemudian, dilakukan 1
atau 2 kali pengambilan kultur bakteri Staphylococcus Aureus menggunakan
jarum ose. Kaca objek digerakkan dengan di fiksasi diatas pembakar bunsen
sampai kering lalu ditetesi dengan salah satu jenis pewarna sampai menutupi
apusan sambil diletakkan diatas penangas air. Pada praktikum sebelum nya,
jenis pewarna yang dipakai adalah Metilen Blue. Metilen Blue didiamkan
selama 1-2 menit kemudian dicuci dengan akuades menggunakan botol
semprot dan dikeringkan dengan dihisap menggunakan tissue, jangan di lap.
Lalu, diamati dengan mikroskop.

3. Pewarnaan Gram
Metode ini dilakukan dengan cara satu akuades diletakkan di kaca
objek. Dilakukan 1 atau 2 kali pengambilan kultur bakteri Staphylococcus
Aureus menggunakan jarum ose. Kemudian kaca objek digerakkan dengan di
fiksasi diatas pembakar bunsen. Setelah itu, Kristal Violet ditetesi sampai
 menutupi semua apusan sambil diletakkan diatas penangas air dan dibiarkan
selama selama 1-2 menit. Warna dasar tersebut dicuci dengan air mengalir lalu
ditetesi larutan Iodine dan didiamkan selama 1-2 menit. Kemudian larutan
dicuci dengan alkohol 96% selama 30 detik. Setelah itu, warna pembanding
ditetesi Safranin sampai menutupi apusan dan didamkan selama 1-2 menit.
Lalu, warna pembanding tersebut dicuci dengan air mengalir dan dikeringkan
dengan teknik dihisap menggunakan tissue bukan di lap.

4. Pewarnaan Spora
Metode ini dilakukan dengan cara satu tetes akuades diletakkan dikaca
objek. Dilakukan 1 atau 2 kali pengambilan kultur bakteri Bacillus Subtilis
menggunakan jarum ose. Kemudian kaca objek digerakkan dengan di fiksasi
ditas pembakar bunsen. Setelah itu, Malachite Green ditetesi sampai menutupi
semua apusan sambil diletakkan diatas penangas air dan dibiarkan selama
selama 3-5 menit. Pewarna jangan sampai menguap, sehingga perlu terus
ditetesi. Preparat dicuci dengan air mengalir dan dikeringkan dengan tissue
lalu apusan ditetesi dengan Safranin dan didiamkan selama 30 detik sampai 1
menit. Kemudian apusan dicuci dengan air lalu dikeringkan dengan tissue dan
diamati di mikroskop.

5. Pengamatan Jamur Mikroskopis

Metode ini dilakukan dengan cara media PDA dicairkan diatas
penangas air. Lalu, tissue atau kertas yang dibasahi akuades diletakkan
didalam cawan petri. Satu tetes media PDA diletakkan diatas kaca objek, lalu
didiamkan hingga mengeras. Kaca objek diletakkan di cawan petri, lalu bagian
tengahnya dibelah tapi jangan sampai terpotong dengan jarum ose steril.
Jamur diinokulasi dibagian media yang dibelah, lalu kaca penutup ditutup.
Cawan petri ditutup dan dibungkus dengan plastik wrapping dan diinkubasi
selama 3-5 hari pada suhu 37°C.
HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil
Tabel 1. Karakteristik Koloni Bakteri Tunggal.

1. Metode
Pewarnaan
Sederhana
Asam

Gambar 1.1 Hasil Metode Pewarnaan Sederhana Asam.

Deskripsi bakteri :
Bentuk: Coccus
Warna : Putih
2. Metode
Pewarnaan
Sederhana
Basa

Gambar 1.2 Hasil Metode Pewarnaan Sederhana Basa.

Deskripsi bakteri :
Bentuk : Coccus
Warna : Biru
3. Metode
Pewarnaan
Gram

Gambar 1.3 Hasil Metode Pewarnaan Gram.

Deskripsi:
Bentuk : Bacil
Warna : Ungu
Gram : positif
Jenis Bakteri : Staphylococcus Auerus
 4. Metode
Pewarnaan
Spora

Gambar 1.4 Hasil Metode Pewarnaan Spora.

Deskripsi:
Warna Sel Vegetatif : Merah
Warna Spora : Hijau
Warna Endospora : Hijau didalam merah
Jenis Bakteri : Bacillus Subtilis
5. Pengamatan
Jaringan
Mikroskopis

Gambar 1.5 Hasil Pengamatan Jaringan

Mikroskopis.
Deskripsi:
Jenis Bakteri : Rhizopus Oryzae
Bakteri yang Terdapat dalam
Gambar : Sporangiophore dan
Sporangiospore

B. Pembahasan
Pewarnaan pada bakteri dibedakan menjadi empat, yaitu pewarnaan
sederhana, pewarnaan gram, pewarnaan negatif dan pewarnaan spora. Pewarnaan
sederhana merupakan teknik pewarnaan yang paling banyak digunakan pada
praktikum mikrobiologi. Disebut sederhana karena hanya menggunakan satu jenis zat
untuk mewarnai mikroba yang akan diamati. Zat warna yang di gunakan adalah
Methylen blue, Crystal violet, basic fuchin atau safranin ( Sutedjo, 1991 ). Pewarnaan
sederhana bertujuan untuk memberikan kontras antara bakteri dan latar belakang dan
mengetahui informasi tentang bentuk dan ukuran sel bakteri.
Perwarnaan sederhana asam bertujuan untuk melihat bakteri dengan mewarnai
bakteri nya. Pada percobaan pewarnaan sederhana asam yang telah dilakukan
didapatkan hasil bakteri berbentuk coccus dan berwarna putih dikarenakan
pewarnaan sederhana yang menggunakan bakteri Staphylococcus Aureus. Pewarnaan
sederhana basa bertujuan untuk melihat bakteri dengan mewarnai sel bakteri nya,
Pada percobaan pewarnaan sederhana basa yang telah dilakukan didapatkan hasil
bakteri berbentuk coccus dan berwarna biru dikarenakan pewarnaan sederhana yang
menggunakan bakteri Staphylococcus Aureus yang ditetesi warna zat metilen blue.
Bakteri adalah mikroba yang memiliki bentuk bervariasi seperti coccus, bacillus,
dan spiral. Dan pada umumnya, bakteri tidak memiliki pigmen sehingga bakteri
tidak berwarna. Untuk itu perlu dilakukan pewarnaan agar bakteri tampak jelas bila
diamati dengan mikroskop (Dwidjoseputro, 1994). Kebanyakan bakteri mudah
bereaksi dengan pewarna-pewarna sederhana karena sitoplasmanya bersifat basofilik
(suka akan basa) sedangkan zat-zat warna yang digunakan untuk pewarnaan
sederhana umumnya bersifat alkalin (komponen kromoforiknya bermuatan positif)
( Pelczar, 2007 ).
Pewarnaan Gram atau metode Gram adalah suatu metode empiris untuk
membedakan spesies bakteri menjadi dua kelompok besar, yakni gram positif dan
gram negatif, berdasarkan sifat kimia dan fisik dinding sel mereka. Pada percobaan
yang telah dilakukan, didapatkan gram positif yang berbentuk baccil berwarna ungu
yang disebabkan bakteri Staphylococcus Aureus yang ditetesi warna Kristal Violet
kemudian dicuci dengan Iodine dan alkohol 96% serta ditetesi dengan Safranin.
Bakteri gram positif akan mempertahankan zat warna metil ungu gelap setelah dicuci
dengan alkohol. Bakteri jenis ini akan berwarna biru atau ungu di bawah mikroskop,
sedangkan bakteri gram negative akan berwarna merah muda. Perbedaan klasifikasi
antara kedua jenis bakteri ini terutama didasarkan pada perbedaan struktur dinding sel
bakteri (Aditya,2010). Bakteri gram positif memiliki selapis dinding sel berupa
peptidoglikan yang tebal. Setelah pewarnaan dengan kristal violet, pori-
pori dinding sel menyempit akibat dekolorisasi oleh alkohol sehingga dinding sel
tetap menahan warna biru (Fitria, 2009). Kristal violet dapat digunakan sebagai
pewarna utama (primer) yang digunakan sebagai pewarna histologi dan metode
klasifikasi bakteri gram menghasilkan warna ungu pada pewarnaan gram. Sekali
sitoplasma terwarnai, maka sel-sel organisme seperti mikrobakteri menahan zat warna
tersebut dengan erat, artinya tidak terpucatkan sekalipun oleh zat yang bersifat keras
seperti alkohol. Alkohol asam ini merupakan pemucat yang sangat intensif dan jangan
dikelirukan dengan alkohol-aseton yang banyak digunakan dalam prosedur pewarnaan
Gram (Hadioetomo, 1993).
Tujuan dari pewarnaan spora adalah untuk mengidentifikasi bakteri yang
mampu menghasilkan spora. Spora akan lebih tahan dalam kondisi yang ekstrim
misalnya dalam kondisi kering, panas dan adanya senyawa kimia yang bersifat racun
terhadap bakteri tersebut. Cat yang digunakan untuk mewarnai spora adalah malachite
green. Spora yang berhasil diwarnai akan mengikat kuat cat warna tersebut sehingga
ketika ditutup kembali dengan cat warna lain (Safranin) spora akan tetap
mempertahankan warna awalnya. Hasil pewarnaan spora menunjukkan spora akan
 berwarna hijau sedangkan sel vegetatif akan berwarna merah. Seperti pada percobaan
yang telah dilakukan, pewarnaan spora mendapatkan hasil bakteri yang warna sel
vegetatif nya merah, warna spora nya hijau, warna endospora nya hijau didalam
merah. Warna tersebut dikarenakan jenis bakteri yang dipakai adalah Bacillus
Subtilis. Pewarnaan spora memerlukan pemanasan agar zat warna dapat meresap ke
dalam spora. Zat warna pertama mengandung hijau malakit (malachite green) yang
akan mewarnai endospora menjadi hijau dan safranin sebagai zat warna kedua akan
mewarnai sel vegetatif menjadi merah. Zat warna ini tidak berikatan erat dengan
dinding sel dan sitoplasma sehingga mudah terlepas sewaktu pencucian dengan air.
Sebaliknya, air tidak dapat menembus dinding endospora sehingga spora tetap
bewarna hijau sewaktu pencucian dengan air (Lay, 1994).

Proses fermentasi tempe mikrobia strain-strain anggota spesies Rhizopus yang

terlibat adalah Rhizopus oligosporus, R. oryzae, R. stolonifer (kapang roti), atau R.
arrhizus. R. oligosporus dan R. oryzae adalah strain anggota spesies Rhizopus yang
paling dominan dan merupakan komponen yang paling penting dalam fermentasi
tempe (Sine & Soetarto, 2018), hal ini karena R.oligosporus dan R. oryzae
mempunyai karakteristik yang sangat berperan dalam fermentasi tempe. Rhizopus
oligosporus dan Rhizopus oryzae memiliki konidia dengan warna abu-abu kecoklatan
(Sine & Soetarto. 2018). Ciri-ciri koloninya mempunyai miselium seperti kapas,
berwarna putih abu-abu menyebar menutupi cawan petri, warna koloni kapang bagian
atas putih tetapi terjadi pemusatan ketebalan pada bagian tengah dan pinggir koloni
lebih tipis. Warna bagian bawah koloni koloni kapang berwarna putih krem (Virgianti.
2015). Sporangia berbentuk bulat hingga semi bulat, dinding berduri berwarna coklat
gelap hingga coklat kehitaman. Kolumela berbentuk bulat tidak beraturan.
Khamidiospora berbentuk bulat berbentuk elips dan silendras (Sine & Soetarto 2018).
Para ahli bersepakat bahwa fakta membuktikan bahwa yang utama berperan dalam
proses fermentasi adalah Rhizopus oligosphorus (Babu dkk, 2009).

SIMPULAN

1. Dapat di identifikasi morfologi bakteri yang didapatkan dari metode pewarnaan

sederhana asam yaitu bakteri berbentuk Coccus dan berwarna putih dikarenakan
pewarnaan sederhana asam yang memakai bakteri Staphylococcus Aureus dan ditetesi
nigrosin/eosin.
2. Dapat di identifikasi morfologi bakteri yang didapatkan dari metode pewarnaan
sederhana basa yaitu bakteri berbentuk Coccus dan berwarna biru yang disebabkan
oleh bakteri Staphylococcus Aureus yang ditetesi pewarna Metilen Blue.
3. Dapat di identifikasi morfologi bakteri yang didapatkan dari metode pewarnaan gram
yaitu bakteri berbentuk Baccil berwarna ungu yang menandakan gram positif. Warna
ungu disebabkan oleh bakteri Staphylococcus Aureus yang ditetesi warna Kristal
Violet kemudian dicuci dengan Iodine dan alkohol 96% serta ditetesi dengan Safranin.
4. Dapat di identifikasi morfologi bakteri yang didapatkan dari metode pewarnaan spora
yaitu bakteri yang warna sel vegetatif nya merah, warna spora nya hijau, warna
endospora nya hijau didalam merah. Warna tersebut dikarenakan jenis bakteri yang
dipakai adalah Bacillus Subtilis.
 5. Dapat di identifikasi morfologi bakteri yang didapatkan saat pengamatan jamur
mikroskopis yaitu bakteri Sporangiophore dan Sporangiospore.
DAFTAR PUSTAKA

Aditya, Mushoffa. 2010. Teknik Pewarnaan Bakteri. Padang: Poltekkes Padang.

Aini, F.N., S. Sukamto, D. Wahyuni, R.G Suhesti, dan Q. Ayyunin. (2013). Penghambatan
pertumbuhan Colletotrichum gloeosporioides oleh Trichoderma harzianum,
Trichoderma koningii, Bacillus subtilis dan Pseudomonas fluorescens. Jurnal Pelita
Perkebunan, 29(1), 44-52
Babu D, Bhakyaraj & Vidhyalaksmi.2009. Makanan Bergizi Berbiaya rendah “Tempe”.
Jurnal ilmu susu dan pangan.4(1): 22-27
Celestino KRS, Cunha RB, Felix CR. 2006. Characterization of a β-glucanase Produced by
Rhizopus microspores var. microspores, and its Potensial for Application in The
Brewing Industry. Journal BMC Biochemistry 7(23):1-9.
Dwidjoseputro. 1998. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: Penerbit Djambatan.
Endrawati D, Kusumaningtyas E. 2017. Beberapa Fungsi Rhizopus sp. dalam Meningkatkan
Nilai Nutrisi Bahan Pakan. WARTAZOA 27(2): 81-88
Fitria, Bayu. 2009. Pewarnaan Gram (Gram positif dan Gram Negatif). Semarang:
Universitas Diponegoro.
Gail E. Rowe, Ph.D. 2010. Differential Staining Techniques. Microbiology: A Laboratory
Experience. Professor of Biology, La Roche College. Online Journal of Milne Library.
Hadioetomo, R. S. 1993. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek. Jakarta : Gramedia.
Imam Fathoni dan Rusmini. 2016. Pemanfaatan Bentonit Teknis Sebagai Adsorben Zat
Warna. UNESA jourrnal of chemistry. 5(3), pp. 18–22
Lambui, O. & Jannah, M. (2017). Isolasi dan identifikasi bakteri tanah di hutan sekitar
Danau Kalimpa’a, kawasan Taman Nasional Lore Lindu, Sulawesi Tengah. Online
Journal of Natural Science 6(1), 73
Lay, B.W. 1994. Analisis Mikroba di Laboratorium. Raja Grafindo Persada, Jakarta.
Moyes, R. B., Reynolds, J. and Breakwell, D. P. 2009. Preliminary Staining of Bacteria:
Simple Stains. Current Protocols in Microbiology. pp. 1–5.
Park JH, Yun HM, Kim IH. 2016. The effect of feeding Rhizopus oligosporus on growth
performance, nutrient digestibility blood profile, fecal microbiota and fecal score in
weanling pigs. Turkish J Vet Anim Sci. 40:1- 7.
Pelczar, M.J.2007. Dasar-Dasar Mikrobiologi . Jakarta : UI Press.
Pramudita, S. D. (2012). Jurnal Mikroskop. Jurnal Universitas Muhammadiyah Prof Dr
Hamka.
Prayitno, T. A. & Hidayati, N. (2017). Pengantar mikrobiologi (Edisi 1). Media Nusa
Creative.
Sine, Y & Soetarto, Endang, S. 2018. Isolasi dan identifikasi kapang Rhizopus pada tempe
gude (Cajanus cajan L.): Savana Cendana. Jurnal pertanian lahan kering. 3 (4): 67
-68.
Sutedjo, M.1991. Mikrobiologi Tanah . Jakarta : Rhineka Cipta.
UTA. (2019, 9 Desember). Staphylococcus aureus Pathogen Safety Data Sheet- Infectious
Substances. University of Texas at Arlington.
Virgianti, DP. 2015. Uji Antagonis Jamur Tempe (Rhizopus Sp) terhadap Bakteri Patogen
Enterik. 32 (3) : 162 – 168.