DASAR-DASAR

PEMERIKSAAN
MIKROBIOLOGI
METODE IDENTIFIKASI
DAN DIAGNOSIS
MIKROBIOLOGI

PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS :
Pemeriksaan Lab.dilakukan u/
menget.penye- bab penyakit, menilai
perkembangan penyakit stlh
pengobatan,atau u/meyakinkan kebenaran
penyebab penyakit yg diduga berdasarkan
gejala klinisnya yg khas.
Untuk mengetahui penyebab penyakit
infeksi, dilakukan penanaman (kultur).
Hasil pemeriksaan kultur akan digunakan
sbg pedoman dalam pengobatan,perawatan,
dan tindakan lain pd penderita.
Krn pemeriksaan Lab. Penting, maka
pengambilan dan penanganan specimen
harus benar.

Pemeriksaan Lab dpt dilakukan

berbagai cara sbb :
PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS :
Bbrp jenis penyakit dpt didiagnosa ckp
dgn menemukan bibit penyakit pd
specimen segar, misalnya : penyakit yg
disebabkan o/ Protozoa ,cacing dan jamur.
Sementara penyakit yg disebabkan o/
bakteri, umumnya tdk ckp hanya dgn
pem.mikroskopis ,krn morphologi bakteri
tdk memiliki ciri khas u/ membedakan
antar bakteri.

Bahan dan Alat yg dibutuhkan u/

pemeriksaan MIKROSKOPIS :

Specimen, koloni bakteri, suspensi bakteri.

Larutan Garam Fisiologi steril
Objeck Glass dan Deck Glass
Mikroskop
Minyak imersi
Xylol
Zat Warna/cat pewarnaan
Botol semprot aquades
Lampu spiritus
Ose/jarum ent
Pinset anatomi
Bak Pengecatan
Tissu, kapas putih dan Centrifuge.

Pemeriksaan Jenis Bakteri :

Pemeriksaan jenis bakteri disini,hanya
mengamati secara mikroskopis dgn
menggnkn mikroskop.
Untuk pengamatan yg lbh baik,mk hrs
dilkkan pengecatan/pewarnaan pd bakteri.
Pemeriksaan mikroskopis hanya akan
menget. Morphologi,sifat pewarnaan dan
gerak bakteri
Sebelum pengecatan dan pengamatan
bakteri maka harus membuat sediaan lbh
dulu.

CARA MEMBUAT SEDIAAN :

Ambil objeck glass,bersihkan dgn tisu
kering.
Bila menggunakan spesimen yg purulen,
atau koloni bakteri , maka harus ditambah
garam fisiologi steril, bila spesimen cair
(suspensi) bakteri, tidak butuh garam
fisiologi, dan bila specimen cair (urin),
centrifuge,endapan yang diambil.
Letakkan objeck glass diatas meja
porselen, ambil specimen seujung ose,bila
perlu tambah garam fisiologi 1 ose, ratakan
diatas kaca objek setipis mungkin.

* Keringkan diudara(angin-anginkan).
* Lakukan Fiksasi ,lalukan diatas api
3kali.
Fungsi fiksasi adalah : merekatkan
specimen pd objek glass dan
membunuh kuman.
Fiksasi ada juga dgn cara merendam
dalam methanol.
Sediaan siap untuk diwarnai/ di Cat.

Macam-macam pewarnaan bakteri :

Pewarnaan negatip : u/melihat
simpai/kapsul bakteri dan u/ melihat bakteri
bentuk spiral.
Pewarnaan Tunggal: menggnkn 1 mcm
zat warna.(methylen blue ).
Pewarnaan Ganda/majemuk :
* Pewarnaan Gram * Pewarnaan
Tahan Asam atau BTA.
Pewarnaan Khusus :
* Pewarnaan Gray : u/ melihat
Flagel
* Pewarnaan Klein : u/
melihat endospora.

* Pewarnaan Neisser :u/ mlihat

bakteri diphteri
* Pewarnaan
Giemsa
: U/ melihat
Pewarnaan
Castaneda
: u/parasit,
dan sel darah.
Rickettsia.

Cara Pewarnaan Gram :

Siapkan sediaan yg sdh difiksasi, Gram Colour
(A, B,C,& D ), 3 Zat warna & 1 Decolorisasi.
Sediaan yg telah difiksasi diletakkan diatas
bak pewarnaan.
Ambil Gram A (Gentian Violet),tetes kan
diatas sediaan, hingga tergenang,biarkan 2
menit.

* Cuci dgn air mengalir tiriskan.

* Teteskan Gram B ( Lugol )
Cuci dgn
airdetik
mengalir, tiriskan.
biarkan
30
Bubuhkan Gram C (Alkohol Aceton 5% )/Deco
lorisasi, sampai warna hitam tengguli luntur.
Cuci dgn air mengalir dan tiriskan.
Bubuhkan Gram D
(Safranain/Fuchsin),biarkan selama 1 menit.
Cuci dgn air mengalir,tiriskan,keringkan dan
siap diamati dibawah mikroskop dgn lensa
objektip 100X,ditambah setetes imersi Oil.

* Gram Positip akan tmpk bakteri

bwarna Ungu.
**Cara
Gram
Negatip
tampak
bakteri
Pewarnaan Tahan Asam :
bwarna
Merah
*Pewarnaan Tahan Asam dikenal dgn BTA =
Basil Tahan Asam./Zeihl Neelson Colour.( 2 zat
warna dan 1 Decolorisasi ).
* Sediaan yg sdh difiksasi diletakkan diatas
bak pewarnaan.
* Teteskan Zn 1 (Carbol Fuchsin) diatas sediaan
hingga tergenang,panaskan diatas nyala api

sampai menguap tidak mendidih selama 5

menit.
* Cuci
dgn air
tiriskan.
Teteskan
Zn mengalir
2 (Alkoholdan
Asam
3 %), sampai
warna merah hilang.(Decolorisasi).
Cuci dgn air mengalir, tiriskan.
Bubuhkan Zn 3(Methylen Blue/Malachyt
Green) ,biarkan 1 menit.
Cuci dgn air mengalir, tiriskan dan
keringkan.
Siap diamati dibwh mikroskop dgn
perbesaran lensa objektip 100 X, tambah
imersi oil.

* Bacil Tahan Asam Positip bila

ditemukan bakte
ri bentuk bacil berwarna Merah.
Dalam pemeriksaan mikroskopis, tdk
dilakukan identifikasi, sehingga tdk
akan diket. Bakteri apa, tetapi akan
dilaporkan morphologi bakteri yg dpt
diamati dibawah mikroskop, misalnya :
Ditemukan bakteri bentuk Coccus dgn
formasi dua-dua bersifat Gram negatip
intracelluler jumlah banyak/ LPB, dan
jml lekosit banyak /LPB.

Pemeriksaan Kultur, Biokimia dan

Tes Sensitivity thd Antibiotik :
Lanjut ke Kultur
resistensi/Sensitivity tes !!!!