PANDUAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI

BAGIAN MIKROBIOLOGI

FAKULTAS KEDOKTERAN

UNIVERSITAS SRIWIJAYA

2021
PETUNJUK UMUM

Praktikum Mikrobiologi Kedokteran meliputi berbagai jenis kuman, baik yang bersifat patogenik
maupun yang non-patogenik. Hendaknya mahasiswa selalu berhati hati agar supaya tidak
sampai terkontaminasi oleh bahan praktikum yang bersifat infeksius dan dapat menimbulkan
penyakit. Petunjuk dibawah ini dimaksudkan untuk memberikan perlindungan kepada
mahasiswa dan personil lainnya sesuai dengan Universal Precaution (semua bahan pemeriksaan
dianggap infeksius dan dapat menularkan penyakit, kecuali kalau dinyatakan lain ).

Peraturan Praktikum:

1. Sebelum pelaksanaan praktikum akan dilakukan asistensi & pretest..

2. Mahasiswa diharapkan hadir 15 menit sebelum praktikum dimulai, ganti sepatu dengan
sandal yang bersih sewaktu berkerja di laboratorium.
3. Gunakanlah jas laboratorium yang bersih sepanjang praktikum.
4. Mahasiswa membawa pensil warna untuk pembuatan laporan.
5. Dilarang makan, minum, merokok, atau melakukan tindakan lain yang dapat
membahayakan baik dirinya sendiri maupun orang lain.
6. Jika biakan kuman tertumpah kemeja praktikum, segera bersihkan dengan lisol 10%, lalu
biarkan selama 30-60 menit, baru dibersihkan dan dikeringkan ( disinfeksi ).
7. Jangan meletakkan benda benda-benda yang tidak ada hubungannya dengan praktikum
di atas meja praktikum ( tas, buku, dll )
8. Buanglah bahan terkontaminasi pada alat penampung yang tersedia.
9. Cucilah tangan setelah selesai praktikum
10. Meja praktikum dibersihkan pada akhir praktikum.
11. Jangan mengotori / membuang sampah sembarangan.
 PRAKTIKUM BLOK 8
PEWARNAAN GRAM

Bahan pemeriksaan yang mengandung bakteri harus diwarnai dahulu agar dapat dilihat
jelas dibawah mikroskop
Ada beberapa cara pewarnaan antara lain :
1. Pewarnaan sederhana
Dipergunakan hanya satu jenis zat warna misal biru methylene.
2. Pewarnaan diffrensial
Termasuk disini pewarnaan Gram dan Ziehl Neelsen
3. Pewarnaan Khusus
Ditujukan untuk melihat bagian-bagian bakteri seperti spora, flagella, kapsul dll.

Gambar 1. Bentuk Bakteri

Pewarnaan Gram adalah pewarnaan diferensial yang sangat berguna dan paling
banyak digunakan dalam laboratorium mikrobiologi, karena merupakan tahapan
penting dalam langkah awal identifikasi. Pewarnaan ini didasarkan pada tebal atau
tipisnya lapisan peptidoglikan di dinding sel dan banyak sedikitnya lapisan lemak pada
membran sel bakteri. Jenis bakteri perwarnaan gram dapat dibagi menjadi dua yaitu
gram positif dan gram negatif. Bakteri gram positif memiliki dinding sel yang lebih tebal
peptidoglikannya dan membran sel selapis. Sedangkan bakteri gram negatif mempunyai
dinding sel tipis peptidoglikannya yang berada di antara dua lapis membran sel.

Prinsip pewarnaan Gram

 Bakteri gram positif mengikat zat warna pertama (Carbol gentian violet) yang
berwarna ungu, dan bakteri gram negatif melepas zat warna pertama lalu mengikat zat
warna kedua yaitu safranin/water fuchsin yang berwarna merah.
Cara membuat sediaan untuk pewarnaan Gram

Berikut contoh bakteri berdasarkan sifat dinding selnya:

Gram Positif Gram Negatif
Staphylococcus aureus Neisseria gonorrhoeae
Staphylococcus epidermidis Klebsiella pneumonia
Streptococcus pyogenes Escherichia coli
Bacillus antraxis Pseudomonas aeruginosa
Lactobacillus sp Salmonella typhi
Clostridium tetani Vibrio cholera

Pelaksanaan Praktikum
A. Cara pembuatan sediaan
Alat dan bahan
1. Objek gelas
2. Pencil atau spidol permanen
3. Ose
4. Suspensi bakteri
5. Lampu spiritus
6. Tissue

Cara kerja :
1. Bersihkan Objek gelas, tulis identitas, dan buiat tanda diobjek gelas dimana akan
diletakkan bahan.
2. Sterilkan ose, dinginkan
3. Ambil satu ose suspensi biakan kuman lalu letakkan pada objek gelas, ratakan.
4. Sterilkan ose,setiap selesai dipakai .
5. Sediaan biarkan kering
6. Setelah kering sediaan difiksasi diatas nyala api sebayak 3 kali
7. Sediaan siap untuk diwarna

B.Cara Pewarnaan Gram

Alat dan bahan
1. Rak pewarnaan
2. Sediaan yang akan diwarnai
3. Zat warna Gram
 - Zat warna Carbol Gentian Violet 1 %.
- Gram Iodine/Lugol 2 %
- Alkohol 96 %
- Water fuchsin/safranin 1 %
4. Air
5. Bak pewarnaan

Cara Pewarnaan
1. Letakkan sedian diatas rak pewarnaan
2. Sediaan dituangi dengan Carbol gentian violet selama 1 menit
3. Cuci dengan air
4. Tuangi dengan gram Iodine selama 30 detik, cuci dengan air.
5. Dekolorisasi dengan alkohol 96 % sampai warna violet tidak luntur
6. Cuci dengan air
7. Counterstain dengan water fuchsin/safranin selama 1-2 menit.
8. Cuci dengan air, keringkan.
9. Sediaan dibaca dengan mikroskop perbesaran objektif 100 x

LEMBAR HASIL PRAKTIKUM

 BLOK 8 : MIKROBIOLOGI - PEWARNAAN GRAM
2 Agustus 2021

NAMA : NIM :
TANGGAL :

1. Langkah-langkah pewarnaan
Gram

2.
Bentuk :
Gram :
Contoh spesies:

3.
Bentuk :
Gram :
Contoh spesies: