DISUSUN OLEH

DANI WIGANI

ERLINA

SUNDARI
 PENGERTIAN
Spektrofotometri ilmu yang mempelajari tentang penggunaan
Spektrofotometer
Spektrofotometer spektrometer + fotometer
Spektrometer menghasilkan sinar dari spektrum dengan panjang
gelombang tertentu
Fotometer Alat pengukur intensitas cahaya yang ditransmisikan atau
diabsorpsikan
Spektrofotometer Alat untuk mengukur energi secara relatif jika energi
tersebut ditransmisikan, direfleksikan atau diemisikan.
Spektrofotometer UV Alat untuk mengukur energi secara relatif jika
energi tersebut ditransmisikan, direfleksikan atau diemisikan dengan
menggunakan panjang gelombang 100-400 nm atau 595299 kJ/mol
 FUNGSI SPEKTROFOTOMETER UV

untuk mengukur atau menganalisa kadar suatu sample

Sample yang yang dapat dianalisis dengan spektrofotometer UV
biasanya sample atau senyawa yang mempunyai gugus
kromofor
Gugus kromofor adalah gugus molekul yang mengandung
system elektronik yang dapat menyerap energy pada daerah UV.
Spektrofotometer UV juga banyak digunakan untuk
menganalisa Senyawa organic.
Fungsi Seperti digunakan untuk menganalisa sample berbentuk
Protein, Amino Acid (Aromatik), Glucose determination, Enzyme
Activity (Hexokinase).
 STRUKTUR KROMOFOR

Group Stucture nm

Karbonil >C=O 280

Azo -N=N- 262

Nitro -N=O 270

Thioketon -C=S 330

Nitrit -NO2 230

Diena terkonjugasi -C=C-C=C- 233

Triena terkonjugasi -C=C-C=C-C=C- 268

Tetraena terkonjugasi -C=C-C=C-C=C-C=C- 315

Benzene 261
Karakteristik Spektrofotometer UV
 Monokro Sel
Sumber
mator sample
radiasi Detec
tor
Read
Out
 Sumber Radiasi
Sumber radiasi berfungsi sebagai sumber
sinar polikromatis dengan berbagai
macam rentang panjang gelombang
Sumber radiasi UV:
Lampu hydrogen
Lampu deutorium
Radiasi yang dihasilkan mempunyai
panjang gelombang 180-350 nm
 Monokromator berfungsi untuk memecah
radiasi polikromatis dengan pita energi yang
lebar yang dihasilkan sumber radiasi menjadi
radiasi dengan pita energi yang lebih sempit
atau menjadi radiasi monokromatis
Komponen komponen monokromator :
1. Celah untuk masuknya radiasi polikromatis
dari sumber radiasi.
2. Lensa/cermin untuk menyerap cahaya
3. Pendispersi cahaya yang berupa prisma atau
grating yang dapat memecah radiasi menjadi
komponen-komponen panjang gelombang.
4. Lensa/cermin pemfokus cahaya
5. Celah keluar
 Sel sampel berfungsi sebagai tempat meletakan
sampel yang berada pada wadah sample (cuvet)
Untuk Spektofotometer UV Cuvet terbuat dari
kuarsa atau silica. Tebal cuvet bervariasi dari 1-
10 cm.
Cuvet ditempatkan setelah monokromator
supaya kemungkinan terjadinya
dekomposis/fluorescence oleh panjang
gelombang berenergi tinggi yang masih ada
didalam radiasi polikromatis dapat
diminimalkanngan radiasi akibat pantulan/
refraksi dapat
Posisi permukaan cuvet tegak lurus
datangnya radiasi sehingga kehilangan radiasi
akibat pantulan/ refraksi dapat dikurangi
 Fungsinya adalah mengabsorpsi foton yang
menumbuknya dan mengubahnya menjadi kuantitas
yang dapat diukur seperti arus listrik atau Perubahan
suhu.
Syarat detector:
Sensitivitas tinggi sehingga daya radiasi yang kecil dapat
terdeteksi.
Waktu response yang singkat
Stabil.
Sinyal elektronik yang dihasilkan mudah diperkuat
sehingga dapat dipakai untuk mengoperasikan alat
pembaca hasil pengukuran
Contoh: Photoelectric detector (Jumlah arus listrik yang
dibangkitkan berbanding lurus dengan daya radiasi foton
yang terabsorpsi)
 Read out merupakan
suatu sistem baca yang
menangkap besarnya
isyarat listrik yang berasal
dari detektor.
 Nyalakan PC dan boot sistem operasi PC. Jika printer telah terhubung ke system
maka nyalakan printer. Apabila alat jika alat terhubung dengan PC.
Periksa bahwa tidak terdapat sampel didalam cell compartment
Periksa posisi setiap switch,harus pada posisi off atau posisi semula
Nyalakan alat spektrofotometer
Sebelum melakukan analisa sample seting blank alat spektrofotometer dengan cara isi
kuvet dengan larutan blanko (aquades)
Diseting/diatur panjang gelombang untuk kalibrasi.
->keterangan: 0%T itu diukur saat kuvet dalam keadaan kosong. 100%T itu diukur saat
kuvet dalam keadaan terisi larutan
Kuvet berisi larutan blanko dimasukkan ke spektrofotometer
Lalu tekan tombol 0 ABS 100%T, tunggu sampai keluar kondisi setting blank (dalam
bentuk teks).
Jika alat sudah selesai disetting siapkan sample yang akan diuji.
Masukkan sample pada cuvvet yang telah disediakan.
Letakkan cell-cell berisi pelarut pada refeernce dan sampel beam atur agar absorbsinya
0 atau 100% Y.
Letakkan cell berisi sampel yang akan diukur pada sampel beam dan baca hasilnya pada
display.
Apabila alat terhubung dengan PC Data absorbansi dan spektrum akan terbaca
dikomputer, yang berbentuk grafik hubungan antara panjang gelombang dengan
absorbansi.