EVALUASI PENGAWET

DALAM ANTACID
MUHAMMAD RIZKI 201510410311052 AYU I. ABDJULU` 201510410311084

ISNAINI AGUSTIN 201510410311054 AMELIA HAQ 201510410311093

ALIEF SA’AYUN M.S. 201510410311068 DWI RETNO NUR S. 201510410311101

BAIQ RIZKY LESTARI 201510410311075

FA R M ASI B
Pendahuluan
Menurut FI edisi IV, emulssi adalah system dua fase yang salah satu cairannya
terdispersi dalam cairan yang lain, dalam bentuk tetesan kecil. Stabilitas emulsi dapat
dipertahankan dengan menambahkan zat ketiga yang disebut dengan emulgator
(emulsifying agent). (FI IV : 6)
Komponen emulsi dapat digolongkan menjadi dua macam yaitu komponen
dasar adalah pembentuk emulsi terdiri atas fase dispers (zat cair yang terbagi-bagi
menjadi butiran kecil ke dalam zat cair/air), fase continue (zat cair dalam emulsi yang
berfungsi sebagai bahan dasar dari emulsi tersebut). Emulgator (bagian dari emulsi untuk
menstabilkan emulsi) dan komponen tambahan adalah bahan tambahan yang
ditambahkan pada emulsi untuk memperoleh hasil yang lebih baik seperti corigen
saporis, odoris, coloris, presekuative (pengawet), antioksidan.
Tipe emulsi berdasarkan macam zat cair yang berfungsi sebagai fase internal
ataupun eksternal, maka emulsi digolongkan menjadi dua macam yaitu :
1. Emulsi tipe O/W (oil in water) atau M/A (minyak dalam air) adalah emulsi yang terdiri
dari butiran minyak yang tersebar ke dalam air minyak, minyak sebagai fase internal
dan air sebagai fase eksternal.
2. Emulsi tipe W/O (water in oil) atau A/M (air dalam minyak) adalah emulsi yang terdiri
dari butiran air yang tersebar ke dalam minyak, air sebagai fase internal dan minyak
sebagai fase eksternal.
Next....
Kelebihan dari sediaan emulsi yaitu dapat membentuk sediaan yang saling tidak bercampur
menjadi dapat bersatu dan menjadi sediaan yang homogen, dapat menutupi rasa yang tidak enak pada obat.
Sedangkan kekurangan sediaan emulsi yaitu kurang praktis dan stabilitas rendah di bandingkan tablet,
takaran dosis kurang teliti.
Syarat sediaan emulsi yang baik harus :
• Stabil dan homogeny
• Fase dalam mempunyai ukuran partikel kecil dan sama besar mendekati ukuran partikel koloid.
• Tidak terjadi cracking atau creaming
• Warna, baud an rasa menarik
Persyaratan menurut Farmakope :
• Zat pengawet : emulsi sebaiknya mengandung pengawet yang cocok (FI III : 9)
• Penyimpanan : Kecuali dinyatakan lain, simpan dalam wadah tertutup baik, ditempat yang sejuk (FI III :
9)
• Penandaan : Pada etiket harus tertulis “Kocok Dahulu”.
Bahan & Metode
Bahan Kimia dan Pereaksi:
Media dehidrasi mikroba, agar kasein dari kedelai dan agar
Sabouraud dekstrosa diperoleh dari HiMedia, Mumbai. Larutan NaCl
0,9% yang digunakan untuk memanen mikroorganisme dari media diatas
diperoleh dari Merck Ltd. Aqua bidestillata digunakan untuk melarutkan
media dehidrasi dan untuk menyiapkan larutan NaCl 0,9%. Sampel
komersil Antasida, Sirup Batuk dan Larutan Opthalmik yang
menggunakan pengawet Sorbitol, Sodium Sitrat dan Benzalkonium
Klorida masing-masing dikumpulkan secara acak dari pasar lokal.
Next...
Mikroorganisme Penguji:
Bakteri gram negatif Escherichia coli ATCC-8739, dan
Pseudomonas aeruginosa ATCC-9027; Bakteri gram positif
Staphylococcus aureus ATCC6538; ragi Candida albicans ATCC-10231 dan
jamur Aspergillus niger ATCC-16404 digunakan sebagai mikroorganisme
penguji dalam uji efektivitas pengawet seperti yang ditentukan dalam
Pharmacope. Semua mikroba standar dikumpulkan dari American Type
Culture Collection (ATCC) yang diawetkan sebagai liofilisasi dan gliserol.
Next...
Penyiapan Media Mikroba:
Tujuan utama media mikroba adalah untuk mendukung pertumbuhan
mikroorganisme yang cepat yang digunakan dalam uji efektivitas
pengawet. Media kasein dari kedelai digunakan untuk
perkembangbiakan bakteri, yang mengandung bahan; kasein dari
pankreas (15,0 g / l), peptik tepung kedelai (5,0 g / l), natrium klorida
(5,0 g / l) dan agar (15,0 g / l). Di sisi lain media Agar Sabouraud
desxtrose dari bahan; peptones (10,0 g / l), dekstrosa monohidrat (40,0
g / l) dan agar (15,0 g / l) digunakan untuk perkembangbiakan ragi dan
jamur. Media dehidrasi dilarutkan dalam aqua bidestillata dan pH
disesuaikan sesuai petunjuk pada wadah media dehidrasi. Media
disterilkan di autoklaf pada suhu 121oC dan 15 psi selama 15 menit.
Media steril diuji pertumbuhan untuk perkembangbiakan terbaik bagi
mikroba penguji.
Persiapan Inokulum &
Standarisasi
◦ Strain mikroba yang efektif dan sepenuhnya dicirikan diperlukan untuk
pengujian efektivitas antimikroba. Strain mikroba segar yang diawetkan pada
stok gliserol dihidupkan kembali dan kemudian dikultur pada kedelai agar
mencerna agar-agar pada pertumbuhan bakteri dan kemiringan desulfurana
Sabouraud pada pertumbuhan jamur.

◦ Kemiringan Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus

aureus diinkubasi pada suhu 30-35℃selama 24 jam. Lendir Candida albicans
diinkubasi pada suhu 20-25℃ selama 48 jam sedangkan; Kemiringan
Aspergillus niger diinkubasi pada suhu 20-25℃ selama 5 hari.

◦ Setelah periode inkubasi disterilkan larutan NaCl 0,9% digunakan untuk

memanen kultur bakteri dan jamur dari agar-agar melalui goyang yang tepat
dan kemudian suspensi mikroorganisme diencerkan dengan larutan NaCl
steril 0,9% untuk menghasilkan mikrobial sebanyak 1 × 108 cfu / ml 6.
Jumlah cfu ditentukan dengan metode pour-plate dilusi
Metodologi Uji Tantangan
◦ Uji coba untuk efektivitas pengawetan dilakukan dengan menggunakan
mikroorganisme Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus
aureus, Candida albicans dan Aspergillus niger.
◦ Diambil 20 ml semua formulasi yang diuji (Antasida, sirup obat batuk dan
larutan asam) dalam tabung steril (kapasitas 100 ml) untuk setiap
mikroorganisme yang diuji.
◦ Setiap tabung produk diinokulasi dengan salah satu inokulum tersusun dan
standar sedemikian rupa sehingga setelah inokulasi konsentrasi akhir
mikroorganisme tetap antara 1 × 105 dan 1 × 106 cfu / ml dan volume
inokulum tidak melebihi 1 persen dari volume produk.
◦ Semua tabung inokulasi diinkubasi pada suhu 20-25℃ selama 28 hari dan
dihitung secara berkala ditentukan dengan metode pour-plate pada 0, 7, 14,
dan 28 hari setelah inokulasi.
◦ Uji efektivitas pengawet dilakukan dengan mengikuti protokol standar yang
dijelaskan di Farmakope India dan Farmakope Amerika Serikat.
Hasil
Pertumbuhan mikroba yang di ujikan secara berkala
diamati pada hari ke 0, 7, 14 dan 28 dengan menghitung
unit pembentuk koloni (cfu) mikroorganisme dengan
metode pour-plate setelah inokulasi. Dari konsentrasi
yang dihitung cfu / ml yang ada pada awal pengujian,
pengurangan log dalam cfu / ml untuk masing-masing
mikroorganisme pada interval waktu yang dihitung pada
hari (0, 7, 14, dan 28 ).
Antasida
Pengujian sampel Antacid dengan mikroba yang diuji,
pertumbuhan jumlah Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa,
Staphylococcus aureus, Candida albicans dan Aspergillus niger
ditemukan pada hari nol. Jumlah mikroorganisme yang di uji terus
menurun dari jumlah awal saat diamati pada hari ke 7, 14 dan 28 .
Selain itu, jumlah Candida albicans dan Aspergillus niger ditemukan
nihil pada 28 hari. Hasil uji tantangan untuk sampel Antasida
disebutkan pada Tabel 2. Uji mikroba sampel Antasida (kontrol
negatif) menunjukkan tidak adanya pertumbuhan salah satu mikroba
yang diuji.
 TABEL 2: PENGUJIAN EFEKTIVITAS ANTIMIKROBA ANTACID
Pengurangan log (
Konsentr Jumlah mikrobra (cfu/ml) dari jumlah hari ke
Nama Organisme asi 0)
Inokulum 7 14 28
0 hari 7 hari 14 hari 28 hari
hari hari hari
Escherichia coli
7× 10⁸ 2× 10⁶ 8× 10⁴ 2× 10⁴ 8× 103 1.39 1.99 2.39
ATCC-8739
Pseudomonas
aeruginosa ATCC- 5× 10⁸ 3× 10⁶ 2× 10⁵ 4× 10⁴ 7× 102 1.18 1.87 3.63
9027
Staphylococcus
8× 10⁸ 4× 10⁶ 2× 10⁵ 3× 10⁴ 4× 103 1.30 2.12 2.99
aureus ATCC-6538
Candida albicans
9× 10⁸ 6× 10⁵ 4× 10⁴ 5× 10 Nil 1.17 2.07 5.77
ATCC-10231
Aspergillus niger
4× 10⁸ 5× 10⁵ 3× 10⁴ Nil Nil 1.22 5.69 5.69
ATCC-16404
Sirup Batuk
Uji tantangan mikroba pada Sirup Batuk
menunjukkan pertumbuhan intensif Escherichia coli,
Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida
albicans dan Aspergillus niger pada hari nol. Jumlah
mikroorganisme ini menurun secara signifikan pada 7, 14
dan 28 hari. Jumlah semua mikroorganisme yang diuji pada
14 hari setidaknya 1 log lebih rendah dari jumlah awal (nol
hari). Padahal, pada 28 hari jumlah mereka mengalami
penurunan lebih dari 3 reduksi log dari hitungan zero day.
Kontrol negatif tidak menunjukkan pertumbuhan semua
mikroorganisme yang diuji. Hasilnya digambarkan pada
Tabel 3.
Larutan opthalmic
Larutan opyhalmic menunjukkan pertumbuhan berat
Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa,
Staphylococcus aureus, Candida albicans dan Aspergillus
niger pada hari nol. Jumlah Escherichia coli dan
Pseudomonas aeruginosa ditemukan nihil pada 7, 14 dan
28 hari. Namun, jumlah Staphylococcus aureus, Candida
albicans dan Aspergillus niger mengalami penurunan
lebih dari 1 dan 3 reduksi log masing-masing pada 7 dan
14 hari. Pada 28 hari dihitung semua mikroorganisme
yang diuji ditemukan nihil. Kontrol negatif tidak
menunjukkan pertumbuhan mikroba. Hasil uji tantangan
untuk Ophthalmic Solution disajikan pada Tabel 4.
Normal Saline (Kontrol)
Normal Saline (0,9% b / v NaCl) digunakan
sebagai kontrol dalam penelitian eksperimental
ini. Saline normal ditantang dengan mikroba yang
diuji. Pertumbuhan berat semua mikroba yang
diuji diamati pada hari nol dan sedikit menurun
pada 7, 14 dan 28 hari (Gambar 1).
Pembahasan
◦ Produk farmasi cair mudah terkontaminasi mikroorganisme yang
mengakibatkan pembusukan produk dengan kehilangan sifat terapeutik dan
jika patogen, infeksi serius dapat terjadi. Untuk meminimalkan risiko
pembusukan produk farmasi oleh kontaminan mikroba, pengawet
antimikroba digabungkan dalam formulasi yang sebaiknya membunuh
kontaminan mikroba tingkat rendah yang diperkenalkan selama proses
pembuatan, penyimpanan atau penggunaan berulang beberapa wadah dosis
ganda.

◦ Dalam penelitian saat ini , kami menyelidiki pertumbuhan Escherichia coli,

Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida albicans dan
Aspergillus niger yang diinokulasi ke dalam tiga sampel antasida, sirup batuk
dan larutan oftalmik yang dikumpulkan dari pemegang tumpukan lokal.
Next...
◦ Serat batuk dan antasida mengandung sejumlah besar air yang membuat
mereka mudah terkontaminasi dengan mikroorganisme. Oleh karena itu,
pengawet ditambahkan pada sirup obat batuk dan antasida yang akan
mencegah dan meminimalkan pertumbuhan mikroba.
◦ Efektivitas paraben sebagai pengawet dalam suspensi antasida cair
dievaluasi dengan uji efektivitas pengawet dan lebih dari 4 reduksi log
strain bakteri diamati pada 7 hari sedangkan jumlah Candida albicans
dan Aspergillus niger ditemukan 2 dan 3 reduksi log lebih rendah dari
hitungan awal.
◦ Dalam percobaan ini sampel antasida yang mengandung sorbitol sebagai
pengawet ditantang dengan mikroorganisme pilihan. Jumlah
mikroorganisme yang ditambahkan secara signifikan menunjukkan lebih
dari 1 reduksi log pada 7 hari dari jumlah hari awal. Jumlah semua
mikroorganisme yang ditantang terus bertambah hingga 28 hari. Selain
itu, jumlah Candida albicans dan Aspergillus niger diamati nihil pada 28
hari.
Next...
◦ AbuTaha dkk. menilai dan membandingkan kerentanan sirup obat
batuk melalui tes efektivitas pengawet. Pertumbuhan
mikroorganisme menjadi sirup dibandingkan dengan menghitung
unit pembentuk koloni (cfu) dari subkultur sirup yang diinokulasi
pada interval nol, 3, 6, 24 dan 48 jam dan hasil yang sangat baik
ditemukan.
◦ Dalam penelitian ini, sampel sirup batuk memiliki sodium sitrat
ditantang dengan mikroorganisme dan hasil yang dipilih diamati dan
dibandingkan pada suhu nol, 7, 14, 28 hari. Jumlah tantangan jumlah
mikroba terus menurun dari nol menjadi 28 hari. Lebih dari 1 log dan
3 reduksi log dari semua mikroorganisme tertantang diamati masing-
masing pada 7 dan 28 hari.
◦ Sediaan mata seperti tetes mata harus steril. Namun, kontaminasi
kebetulan dari produk tersebut saat digunakan dapat mempengaruhi
kesehatan pasien.
Next...
◦ Diobservasi bahwa sampel pasar larutan oftalmik yang mengandung
benzalkonium chloride sebagai pengawet menunjukkan
pertumbuhan masif mikroba yang tertantang pada hari nol yang
secara signifikan menurun hingga 28 hari. Tidak ada pertumbuhan
Escherichia coli dan Pseudomonas aeruginosa yang diamati pada dan
setelah 7 hari.
◦ Sedangkan jumlah Staphylococcus aureus, Candida albicans dan
Aspergillus niger menunjukkan lebih dari 3 reduksi log pada 14 hari
dari jumlah awal (nol hari). Tidak ada pertumbuhan Staphylococcus
aureus, Candida albicans dan Aspergillus niger yang diamati pada 28
hari.
◦ Semua tiga sediaan farmasi cair yaitu antasida, sirup obat batuk dan
larutan oftalmik memiliki pengawet efisien yang efektif melawan
mikroorganisme yang diuji.
Kesimpulan...
◦ Kontaminasi mikroba pada sediaan farmasi dalam bentuk cair adalah
masalah yang sangat penting bagi industri dan dapat menjadi
penyebab utama kerugian produk. Hal tersebut dapat dicegah dengan
penambahan bahan pengawet antimikroba untuk menghindari
perubahan dan degradasi formulasi produk. Pengawet ideal harus
memiliki spektrum aktivitas yang luas terhadap mikroorganisme.
◦ Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengevaluasi dan
membandingkan efektivitas pengawet melalui uji mikroba pada
antasida, sirup obat batuk dan larutan ophtalmik yang dikumpulkan
secara acak dari berbagai industri.
◦ Sampel ini diuji dengan 3 bakteri dan 2 strain jamur dan hasilnya
dilihat secara berkala (0, 7, 14 dan 28 hari). Jumlah mikroba
ditemukan terus menurun dari hari pertama (nol hari) sampai 28 hari
pada ketiga sediaan cair yang telah teruji.
Next...
◦ Hasil penelitian menunjukkan bahwa bahan pengawet yaitu sorbitol,
natrium sitrat, benzalkonium klorida yang ditambahkan dalam
antasida, sirup obat batuk dan larutan ophtalik efektif dalam
melawan semua mikroorganisme yang telah diujikan. Namun,
benzalkonium klorida dalam larutan ophtalmik ternyata paling
efektif.

◦ Dari penelitian ini dapat disimpulkan bahwa bahan pengawet yang

ada di semua sediaan farmasi dalam bentuk cair yang telah diuji
efektif dalam mencegah kontaminasi produk selama penyimpanan
dan penggunaannya.
References...
◦ Zani F, Minutello A, Maggi L, Santi P and Mazza P: Evaluation of preservative
effectiveness in pharmaceutical products: the use of a wild strain of
Pseudomonas cepacia. Journal of Applied Microbiology 1997; 83:322−326.
◦ Orus P and Leranoz S: Current trends in cosmetic microbiology. International
Journal of Microbiology 2005; 8:77−79.
◦ Beringer P, DerMarderosian A, Felton L, et al: Remington-The science and
practice of pharmacy. Lippincott, Williams and Wilkins, Philadelphia, Twenty
First Edition 2006.
◦ AbuTaha AS, Al-Shahed QN, Sweileh WM, Sawalha AF, Zaid AAN and Zanat AOA:
Vulnerability of cough syrups marketed in Palestine to microbial challenge test.
Journal of Chemical and Pharmaceutical Research 2010; 2(5):115−121.
◦ Boukarim C, Jaoude SA, Bahnam R, Barada R and Kyriacos S: Preservatives in
liquid pharmaceutical preparations. Journal of Applied Research 2009; 9(1 &
2):14−17.
Next...
◦ Indian Pharmacopoeia, Indian Pharmacopoeia Commission,
Ghaziabad, India, 2010: 27−28.
◦ Souza MR and Ohara MT: The preservative efficacy testing method
for powdered eye shadows. Journal of Cosmetic Science 2003;
54:411−420.
◦ Cremieux A, Cupferman S and Lens C: Method for evaluation of the
efficacy of antimicrobial preservatives in cosmetic wet wipes.
International Journal of Cosmetic Science 2005; 27:223−236.
◦ Hugo BW and Russells AD: Pharmaceutical microbiology. Blackwell
Science, Oxford, Seventh Edition 2005.
◦ Rosenthall RA, Buck SL, Henry CL and Schlech BA: Evaluation of the
preserving efficacy of lubricant eye drops with a novel preservative
system. Journal of Ocular Pharmacology and Therapeutics 2006; 22:
440−448.
Next...
Spiegeleer BE, Wattyn GS, Meeren V, Vlamick K and Vooren L: The
importance of the cosolvent propylene glycol on the antimicrobial
preservative efficacy of a pharmaceutical formulation by DOE-ruggedness
testing. Pharmaceutical Development and Technology 2006; 11:275−284.
◦ United States Pharmacopoeia, United States Pharmacopoeial Convention,
Rockville, MD, 2011: 48−50.
◦ British Pharmacopoeia, The Stationary Office, London, 2012: A454−456.
◦ Chorilli M, Leonardi GR, Salgado HRN and Scarpa MV: Evaluation of
preservative effectiveness of liquid crystalline
◦ systems with retynil palmitate by the challenge test and D-value. Journal of
AOAC International 2011; 94(1): 118−127.
◦ Wilson CO and Gisvold O: Text book of organic medicinal and pharmaceutical
chemistry. Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, New York, 1998:
183−185.
Next...
◦ Farrington JK, Martz EL, Wells SJ, Ennis CC, Holder J, Levchuk JW, Avis
KE, Hoffman S, Hitchins AD and Madden JM: Ability of laboratory
methods to predict in-use efficacy of antimicrobial preservatives in
an experimental cosmetic. Applied and Environmental Microbiology
1994; 60:4553−4558.
◦ Hubgo PG, Onyekweli AO and Igwe I: Microbial contamination and
preservative capacity of some brands of cosmetic creams. Tropical
Journal of Pharmaceutical Research 2003; 2:229−234.
◦ Narang R, Narasimhan B, Judge V, Ohlan S and Ohlan R: Evaluation of
preservative effectiveness in an official antacid preparation. Acta
Pharmaceutica Sciencia 2009; 51:225−229.
◦ Morteza PH, Reza FM, Nasrin S, Ehsan N, Ali RS and Amini M:
Deterioration of parabens in preserved magnesium hydroxide oral
suspension. Journal of Applied Science 2007; 7: 3322-3325.
TERIMA KASIH