Pemanfaatan Kolagen dari Limbah

Tulang Ayam (Gallus gallus

domesticus) Untuk Aktivitas Anti
Aging secara In Vitro

Andi Bagus Rahmawan

(081711733013)
Friska Natalia Putri
(081711733031)
Siti Rahisya Mentari
(081711733043)
 ABSTRAK
Limbah tulang ayam meningkat seiring dengan
peningkatan konsumsi ayam. Namun, belum banyak
penelitian yang memanfaatkan limbah tulang sebagai
sumber kolagen. Penelitian ini bertujuan mengetahui
pengaruh ukuran kolagen terhadap aktivitas anti aging
berupa aktivitas antioksidan, antiglikasi, dan inhibitor
tirosinase secara in vitro dan mendapatkan teknik isolasi
kolagen anti aging optimum dari tulang ayam.
 METODE PENELITIAN

Peralatan Penelitian
● Alat-alat kaca, freeze-dryer, spektrofotometer, neraca analitik, dan cawan
alumunium.
● Untuk mengukur ukuran partikel (Particle Size Analyzer/PSA, Delsa Nano C, Beckman
Coulter)
● Untuk mengidentifikasi gugus fungsi (Fourier Tranform Infrared/FTIR, Tensor 37,
Bruker)
● Untuk menentukan absorbansi pada uji aktivitas antioksidan (Enzyme-linked
immunosorbent assay/ELISA Reader)
● Untuk menentukan intensitas fluoresensi pada uji aktivitas antiglikasi (Fluorometer,
FLUOstar Omega fluorometer)

● Akuades ● L-3,4-
Bahan
● Tulang Penelitian
ayam ● Etanol
● Fruktosa
● Sukrosa
dihidroksifenilal
● NaOH
● 2,2-difenil-1- anin (LDOPA)
● CH3COOH ● BSA (Bovine
pikrilhidrazil ● L-Tirosin
Serum Albumin)
(DPPH) ● Buffer pH 7,4.
Prosedur Penelitian

PREPARASI PENENTUAN AKTIVITAS

SAMPLE ANTIOKSIDAN,
ANTIGLIKASI, DAN
PENGHAMBATAN
TIROSINASE

PENENTUAN KADAR
AIR, PROTEIN DAN
LEMAK

PENGECILAN
UKURAN
KOLAGEN
ISOLASI KOLAGEN
 Preparasi
Sample Penentuan Kadar Air,
Protein dan Lemak

● Bersihkan tulang ayam (Gallus gallus domesticus) ● Penentuan kadar air menggunakan metode
lalu rebus hingga mendidih pemanasan langusung

Tulang ayam dipisahkan dari daging yang masih Penentuan kadar protein menggunakan metode
menempel Kjeldahl

Tulang ayam dihancurkan lalu dikeringkan Penentuan kadar lemak menggunakan metode
menggunakan C​ abinet Dryer selama 6 jam Soxhlet
dengan suhu 40 ˚C

Tulang ayam yang sudah kering diserbuki hingga

berukuran 60-100 mesh.
 Pengecilan Ukuran
Isolasi Kolagen
Kolagen

● Sampel tulang kering direndam menggunakan 3 ● Kolagen dilarutkan dalam aquades dengan rasio 1:2
variasi konsentrasi NaOH, yaitu 0,05 M; 0,10 M; dan (v/v).
0,20 M dengan rasio 1:10 (b/v) dengan durasi 48 jam
Pengubahan ukuran dengan bantuan pengaduk
Setelah itu tulang direndam dalam larutan CH3COOH magnet pada kecepatan 1000 rpm dengan variasi
1 M dengan rasio 1:10 (b/v) dengan durasi 24 jam waktu 6 dan 8 jam.

Hasil yang diperoleh disaring menggunakan kertas Hasil yang diperoleh kemudian diuji ukuran
saring Whatman No.1 kemudian dikeringkan dengan partikelnya menggunakan PSA.
freeze-dryer.
 Penentuan
Aktivitas Penentuan Aktivitas
Antioksidan Antiglikasi
● Sampel pada konsentrasi tertentu diambil ● Seluruh larutan diinkubasi dengan durasi waktu 40 jam dan
sebanyak 100 µL dan dimasukkan ke dalam menggunakan suhu 60 °C
microplate 96 well dan ditambahkan dengan
DPPH 0,3 mM sebanyak 100 µL Larutan diambil sebanyak 100 µL dan dimasukkan ke dalam 96-
well plate.
Sampel diinkubasi selama 30 menit di
ruangan yang gelap Jumlah relatif BSA yang terglikasi diukur menggunakan fluorometer
pada panjang gelombang eksitasi 370 nm dan emisi 440 nm
Absorbansi sampel diukur dengan
menggunakan ELISA reader pada panjang
gelombang 517 nm

Rumus untuk menghitung aktivitas antioksidan

Keterangan :
A0 = Absorbansi dari blanko
A1 = Absorbansi dari standar atau sampel
 Penentuan Aktivitas
Penghambatan Tirosinase

● Pertama-tama sampel dilarutkan dengan DMSO sebagai larutan stok.

Membuat variasi konsentrasi dengan melarutkan kolagen menggunakan buffer fosfat pH

6,5.

Sebanyak 70 μL larutan dimasukkan ke dalam 96-well plate, kemudian ditambahkan 30 μL

enzim tirosinase dan diinkubasi selama 5 menit.

Tambahkan sebanyak 110 μL L-tirosin 2 mM dan diinkubasi kembali pada suhu 37 °C

selama 30 menit

Absorbans diukur pada panjang gelombang 492 nm menggunakan Spektrofotometer

Microplate Reader
 SUMBER

Budiarti, Eka & Budiarti, Perlambang & Aristri, Manggar & Batubara,
Irmanida. (2019). Kolagen dari Limbah Tulang Ayam (Gallus
gallus domesticus) terhadap Aktivitas Anti Aging secara In Vitro.
ALCHEMY Jurnal Penelitian Kimia. 15. 44.
10.20961/alchemy.15.1.23046.44-56.
TERIMA
KASIH