Identifikasi dan Aplikasi Senyawa Menggunakan

Liquid Chromatography-Mass Spectroscopy

(LC-MS) dan Nuclear Magnetic Resonance (NMR )

Dosen : Prof (ris). Dr. Muhammad Hanafi, M.Sc.

Oleh :
Yulius Evan Christian (5420220007)
Dessy Aulia Rachma (5420220010)
Ade Irma (5420220024)
Program Magister Ilmu Kefarmasian
Universitas Pancasila
Jakarta
2020
 Liquid Chromatography Mass Spectrometry (LCMS)

Liquid Chromatography Mass Spectrometry (LC-MS) adalah

teknik analisis yang menggabungkan kemampuan pemisahan
fisik dari kromatografi cair dengan spesifisitas deteksi
spektrometri massa. Kromatografi cair memisahkan komponen-
komponen sampel dan kemudian ion bermuatan dideteksi oleh
spektrometer massa. Data LC-MS dapat digunakan untuk
memberikan informasi tentang berat molekul, struktur, identitas
dan kuantitas komponen sampel tertentu
Spektroskopi massa merupakan suatu instrument yang dapat
menyeleksi molekul-molekul gas bermuatan berdasarkan massa
atau beratnya. Umumnya spectrum massa diperoleh dengan
mengubah senyawa suatu sample menjadi ion-ion yang bergerak
cepat yang dipisahkan berdasarkan perbandingan massa
terhadap muatan.
Proses ionisasi menghasilkan partikel-partikel bermuatan positif,
dimana massa terdistribusi adalah spesifik terhadap senyawa.
Selain untuk penentuan stuktur molekul, spektum massa dipakai
untuk penentuan analisis kuantitatif.
INSTRUMEN LCMS
 INSTRUMEN LCMS
HPLC
Kerja HPLC pada prinsipnya adalah pemisahan analit-analit berdasarkan
kepolarannya, alatnya terdiri atas kolom (sebagai fasa diam) dan larutan tertentu
sebagai fasa geraknya. Yang paling membedakan HPLC dengan kromatografi
lainnya adalah pada HPLC digunakan tekanan tinggi untuk mendorong fasa gerak.
Campuran analit akan terpisah berdasarkan kepolarannya dan kecepatannya untuk
sampai ke detektor (waktu retensinya) akan berbeda, hal ini akan teramati pada
spektrum yang puncak-puncaknya terpisah (Himawan 2010).
Dengan bantuan pompa fasa gerak cair dialirkan melalui kolom ke detektor.
Cuplikan dimasukkan ke dalam aliran fasa gerak dengan cara penyuntikan. Di
dalam kolom terjadi pemisahan komponen-komponen campuran, karena
perbedaan kekuatan interaksi antara larutan terhadap fasa diam. Larutan yang
kurang kuat interaksinya dengan fasa diam akan keluar dari kolom lebih dulu.
Sebaliknya, larutan yang kuat berinteraksi dengan fasa diam maka larutan tersebut
akan keluar kolom, kemudian dideteksi oleh detektor dan direkam dalam bentuk
kromatogram (Isnawati 2013).
 
 SUMBER ION
Sumber ion adalah bagian Spektroskopi Massa yang berfungsi
untuk mengionkan material analit. Ion kemudian di transfer oleh
medan listrik dan medan magnet ke massa analizer. Karena ion
sangat reaktif, pembentukan dan pemanipulasian harus di
lakukan di ruang vacum. Pada umumnya, ionisasi di pengaruhi
oleh energi sinar yang tinggi dari electron, dan pemisahan
electron di capai dengan meningkatkan dan memfokuskan sinar
ion, yang kemudian di bengkokkan oleh medan magnet
eksternal. Ion–ion kamudian di deteksi sehingga menghasilkan
informasi dan di analisis dalam komputer.
 Electrospray (ESI)

ESI menjadi sumber ion yang kuat yang mampu berinteraksi dengan LC
dan aplikasinya pada sejumlah kelas penting molekul biologis. ESI
bekerja dengan baik dengan molekul yang agak polar sehingga cocok
untuk analisis banyak metabolit, xenobiotik, dan peptida . Sampel cairan
dipompa melalui kapiler logam yang dipertahankan pada 3 hingga 5 kV
dan dinebuliskan di ujung kapiler untuk membentuk semprotan halus
tetesan bermuatan. Tetesan diuapkan dengan cepat dengan penerapan
panas dan nitrogen kering, dan muatan listrik sisa pada tetesan
dipindahkan ke analit. Analit terionisasi kemudian dipindahkan ke
vakum tinggi dari spektrometer massa melalui serangkaian lubang kecil
dan dengan tegangan. Sumber ion dan optik ion selanjutnya dapat
dioperasikan untuk mendeteksi ion positif atau negatif.
 Atmospheric Pressure Chemical Ionization (APCI)
Dalam ionisasi kimia tekanan atmosfer (APCI), seperti halnya ESI, cairan
dipompa melalui kapiler dan nebulised di ujungnya. Pelepasan terjadi di
dekat ujung kapiler, awalnya gas pengion dan molekul pelarut dalam
sumber ion. Ion-ion ini kemudian bereaksi dengan analit dan
mengionisasinya melalui transfer muatan. Teknik ini berguna untuk
molekul kecil yang stabil secara termal yang tidak terionisasi dengan baik
oleh ESI.Sebagai contoh, steroid bebas tidak terionisasi dengan baik
menggunakan ESI karena merupakan molekul netral dan relatif non-polar,
tidak memiliki gugus fungsional. Oleh karena itu APCI telah digunakan
untuk meningkatkan sensitivitas analisis LC-MS dari steroid bebas.Tidak
seperti ESI, pengisian ganda bukanlah fitur APCI dan ion bermuatan
tunggal mendominasi. Sumber ion tunggal yang mampu beralih antara
APCI dan ESI tersedia. Teknik ini juga telah diterapkan pada lipid dan
vitamin larut lemak.
 Atmospheric Pressure Photo-Ionization (APPI)

Foto-ionisasi tekanan atmosfer (APPI) menggunakan foton

untuk merangsang dan mengionisasi molekul setelah nebulisasi.
Energi foton dipilih untuk meminimalkan ionisasi pelarut dan
gas sumber ion secara bersamaan. Teknik ini juga memberikan
ion bermuatan tunggal dan telah digunakan untuk analisis
senyawa netral seperti steroid.
 Matrix Assisted Laser Adsorption (MALDI)
Matrix dibantu laser desorpsi/ionisasi spektrometer massa
(MALDI-MS) merupakan alat analisis untuk peptida, protein,
dan sebagian besar biomolekul lainnya (oligonukleotida,
karbohidrat, produk alami, dan lipid). Transfer energi yang
efisien dan diarahkan selama desorpsi matrik dibantu induksi
laser memberikan hasil ion yang tinggi untuk analit utuh dan
memungkinkan untuk pengukuran senyawa dengan sensitifitas
sampai sub pikomol, dapat juga untuk analisis sampel heterogen
biologis kompleks seperti mencerna proteolitik.
 Penganalisis Massa (mass analyzer)
Mass Analyzer memisahkan ion berdasarkan perbandingan
massa dengan muatan. Dua hukum dinamika muatan partikel
dalam medan magnet dan medan listrik dalam vakum, yaitu:
Hukum Lorentz dan hukum kedua Newton. Banyak massa
analyzer yang dapat digunakan di antaranya:
 Time-of-Flight (TOF)

Alat analisa time-of-flight (TOF) beroperasi dengan mempercepat

ion melalui tegangan tinggi. Kecepatan ion, dan waktu yang
dibutuhkan untuk melakukan perjalanan menuruni tabung untuk
mencapai detektor, bergantung pada nilai m/z, keluaran detektor
sebagai fungsi waktu dapat diubah menjadi spektrum massa.
Penganalisis TOF dapat memperoleh spektrum dengan sangat cepat
dengan sensitivitas tinggi. TOF juga memiliki akurasi massa yang
tinggi, yang memungkinkan rumus molekul ditentukan untuk
molekul kecil
   Quadrupole mass filter

Menggunakan medan listrik yang bergerak-gerak untuk

menstabilkan ion yang melewati medan rasio frekuensi (rf)
quadrupole di buat 4 tangkai parallel. Hanya ion dalam batas
mass atau muatan tertentu, tetapi nilai potensial terhadap muatan
di biarkan tersapu dengan cepat. Quadrupole pertama bertindak
sebagai massa filter dan quadrupole ke dua bertindak sebagai sel
penumbuk dimana ion di pecah menjadi fragmen-fragmen.
Fragmen yang di filter oleh quadrupole ke tiga yang selanjutnya
dibiarkan melewati detektor menghasilkan rumus fragmen
Spektroskopi Masa/Spektroskopi Masa.
 Penganalisis Massa
Penganalisis Quadrupole
Alat analisa quadrupole terdiri dari satu set empat batang logam
paralel .
 Kombinasi tegangan (frekuensi radio) konstan dan bervariasi
memungkinkan transmisi pita sempit nilai m / z di sepanjang sumbu
batang. Dengan memvariasikan tegangan dengan waktu, dimungkinkan
untuk memindai di berbagai rentang m / z nilai, menghasilkan spektrum
massa. Kebanyakan penganalisis quadrupole beroperasi pada <4000 m / z
dan kecepatan pindai hingga 1000 m / z per detik atau lebih adalah hal
biasa. Mereka biasanya beroperasi pada resolusi massa satuan yang berarti
bahwa akurasi massa jarang lebih baik dari 0,1 m / z.

Sebagai alternatif untuk pemindaian, quadrupoles dapat diatur untuk

memantau nilai m / z tertentu, kemudian diatur untuk memantau nilai m /
z lainnya, dan seterusnya. Ini dicapai dengan menginjak voltase. Teknik
ini berguna dalam meningkatkan batas deteksi analit target karena lebih
banyak waktu detektor dapat digunakan untuk mendeteksi ion tertentu
dari pada memindai ion yang tidak diproduksi oleh analit.
 
 Ion Trap Analysers

• Ion Trap Analysers menggunakan tiga elektroda hiperbolik untuk

menjebak ion dalam ruang tiga dimensi menggunakan tegangan
dan radio frequency voltages. Ion kemudian dikeluarkan secara
berurutan dari perangkap berdasarkan nilai m/z-nya untuk
membuat spektrum massa. Sebagai alternatif, ion spesifik dapat
diisolasi dalam perangkap dengan penerapan tegangan yang
menarik sementara ion lain dikeluarkan. Gas inert juga dapat
dimasukkan ke dalam trap untuk menyebabkan fragmentasi. Fitur
yang menarik dari penganalisis perangkap ion ini adalah
kemampuan untuk memecah dan mengisolasi ion beberapa kali
berturut-turut sebelum spektrum massa akhir diperoleh.
 Ion Cyclotron Resonance (ICR)

• ICR adalah perangkap ion yang menggunakan medan magnet

untuk menangkap ion ke dalam orbit di dalamnya. Dalam
analisis ini tidak ada pemisahan yang terjadi karena tidak
semua ion dapat terjebak di dalam sehingga medan listrik
eksternal diterapkan untuk membantu menghasilkan sinyal .
• Frekuensi orbit tergantung pada muatan dan massa ion, bukan
dari kecepatan. Jika medan magnet tetap konstan, muatan
untuk rasio massa dari masing-masing ion dapat ditentukan
dengan mengukur kecepatan sudut. Muatan dari ion-ion yang
berlawanan memiliki kecepatan sudut yang sama, yang
membedakan hanyalah mengorbit dalam arah yang
berlawanan.
Kehadiran lebih dari satu komponen secara simultan dalam sumber ion
dapat mengakibatkan persaingan dalam proses ionisasi dan penurunan
selanjutnya dalam sinyal MS yaitu sinyal komponen dalam campuran akan
lebih kecil dari pada sinyal komponen murni pada konsentrasi yang sama.
Fenomena ini disebut penekanan ion dan dapat menjadi batasan sensitivitas
ultimat dari uji LC-MS apa pun. Garam dan komponen lain dalam sampel
plasma, serum dan urin merupakan batasan khusus dalam metode injeksi
langsung. Buffer dan aditif fase gerak lainnya juga merupakan sumber
penekanan. perubahan tingkat metabolit endogen) dapat menyebabkan
variasi penekanan antara sampel yang berbeda, sehingga hasil kuantitatif
tidak dapat diandalkan. Kecuali standar internal isotop stabil digunakan,
strategi persiapan sampel harus digunakan untuk meminimalkan sumber
penekanan variabel ini. Penyebab penekanan ion dan strategi untuk
mengevaluasi dan meminimalkan dampaknya terhadap hasil telah ditinjau.
 Secara umum prosedur Spektrometri Massa :
1.Sampel  di masukkan dalam instrument MS dan mengalami
penguapan.
2.Komponen dari sample diionisasikan, dapat digunakan  berbagai
metode, salah satunya  mengenai nya dengan sinar berelectron,
sehingga menghasilkan partikel bermuatan ( ion).
3.Ion di pisahkan berdasarkan rasio massa atau muatan dalam analizer
oleh medan elektromagnetik.
4. Ion-ion dideteksi, metode yang di gunakan biasanya kuantitatif.
5. Sinyal ion diproses menjadi  spectra massa.

Teknik yang di gunakan dalam MS adalah dengan analisa kualitatif dan

kuantitatif. Analisis kualitatif mengidentifikasi suatu senyawa yang
tidak diketahui, dengan mengkalibrasi terhadap senyawa yang telah
diketahui. Anilisis kuantitatif dapat dipergunakan untuk analisis
campuran, baik senyawa organik ataupun anorganik yang bertekanan
uap rendah.
CARA KERJA SPEKTROSKOPI MASSA
Secara keseluruhan, tahap-tahap proses yang terjadi dalam spektroskopi massa
dapat dibagi menjadi injeksi, ionisasi, akselerasi, defleksi (pembelokan), dan
deteksi.
• Injeksi
Injeksi merupakan proses pemasukan sampel ke dalaminstrumen spektroskopi
massa. Sampel yang diperlukan sanat sedikit (kurang dari 1 mL).
• Ionisasi
Sampel yang telah dimasukkan kemudian dipanaskan melebihi titik didihnya,
sehingga beralih fasa menjadi gas. Sampel yang telah berbentuk gas
dimasukkan dalam ruang ionisasi. Partikel sampel (atom maupun molekul)
kemudian ditembak dengan elektron berenergi tinggi (70 eV). Adanya
penembakan itu membuat partikel sampel terbombardir, sehingga salah satu
elektronnya terpental keluar. Dengan demikian, partikel tersebut menjadi
bermuatan positif. Senyawa yang tembombardir masih dapat dibombardir lebih
lanjut untuk membentuk pecahan (fragmen) yang lebih kecil. Maka dari itu,
satu senyawa dapat terpecah (terfragmentasi) menjadi beberapa kation.
Kebanyakan fragmen ion positif tersebut bermuatan +1. Sangat sulit untuk
melepas lagi satu elektron dari suatu ion positif.
• Akselerasi
Ion bermuatan positif didorong sehingga melewati celah kecil. Akselerasi
bertujuan supaya ion positif melaju dengan kecepatan tinggi ke tahap
selanjutnya.

• Defleksi (pembelokan)
Ion positif yang bergerak cepat tersebut selanjutnya dibelokkan dengan
medan magnet. Pembelokan ini menyebabkan adanya pemisahan fragmen
ion sesuai dengan rasio massa per muatannya. Pada gambar di atas, ada
jarak yang jelas antara kation yang paling ringan dan paling berat.

• Deteksi
Setelah ion-ion dipisahkan berdasarkan massa per matan (m/z), maka
selanjutnya adalah dideteksi beratnya. Sebuah alat pencatat (recorder)
berfungsi untuk mencatat massa kation yang berhasil dipisahkan. Detektor
hanya bisa mendeteksi ion. Dengan demikian, partikel netral tidak akan
terdeteksi.
 Keunggulan spektroskopi
massa
Keuntungan utama yang dimiliki Spektroskopi Massa adalah penggunaan tandem
Spektroskopi Massa-Spektroskopi Massa. Detektor dapat diprogram untuk
memilih ion tertentu pada fragmen. Proses ini pada dasarnya adalah teknik
seleksi, namun sebenarnya lebih kompleks. Kuantitas yang diukur adalah jumlah
molekul fragmen dipilih oleh operator. Selama tidak ada gangguan atau
penindasan ion, pemisahan LC bisa sangat cepat. Dengan menggunakan
Spektroskopi Massa waktu analisis bisa hanya 1 menit atau kurang, dibandingkan
dengan lebih dari 10 menit dengan deteksi UV.
• Dapat diaplikasikan untuk hampir semua senyawa volatile
• Dapat menghasilkan spektrum massa
• Fragmentasi menyediakan informasi struktur
• Perpustakaan spektrum massa dapat dicari "sidik jari" massa EI spectral
• Cepat dan mudah
 Keterbatasan spektroskopi
massa
Spektrometri massa kini tidak digunakan dalam pengendalian mutu rutin tapi
ditempatkan dalam suatu lingkungan penelitian dan pengembangan yang
digunakan untuk mengatasi masalah-masalah spesifik yang berasal dari proses
rutin atau dalam pnegembangan proses intrumentasi ini mahal dan
membutuhkan dukungan personel yang sangat terlatih dan pemeliharaan yang
teratur.
• Sampel harus secara termal mudah menguap dan stabil
• Molekul Ion mungkin lemah atau tidak ada untuk banyak senyawa.
• Hanya dapat menganalisis senyawa dengan berat molekul rendah (<1000
Amu)
• Informasi strukturalnya terbatas
• Untuk peptida massa fingerprint: protein harus murni, dan masalah dengan
adanya kontaminasi
 KEGUNAAN
SPEKTROSKOPI MASSA
1. Mengetahui komposisi unsur dari bahan yang dianalisa sehingga
diketahui berat dan rumus molekulnya
2. Mengetahui unsur senyawa baik senyawa organic maupun anorganik
3.  Untuk analisis kualitatif maupun kuantitatif suatu kompleks
4.  Untuk penentuan struktur dari komponen permukaan padatan
5.  Untuk menentukan perbandingan isotop atom dalam suatu sampel
6. Untuk menentukan struktur molekul  ketika kita mendapatkan molekul
tersebut dalam bentuk gas
7. Untuk mengidentifikasi suatu senyawa yang tidak diketahui, dengan
mengkalibrasi terhadap senyawa yang telah dikenal
8. Struktur dan massa fragmen memberi petunjuk mengenai struktur induk
 Aplikasi LCMS

Identifikasi Dan Studi Pola Fragmentasi Jamu Terkonfirmasi

Fenilbutazon Menggunakan Liquid Chromatography Mass
Spectroscopy (LCMS)

Muhammad Taupik, Endah Nurrohwinta Djuwarno,

Mohamad Adam Mustapa, Muhamad Handoyo Sahumena2
METODE PENELITIAN
Alat dan Bahan
• Seperangkat instrumen LC-MS (UPLC- MS qtof Waters),
lampu UV 254 nm dan 366 nm, (Camag UV Cabinet) vortex
mixer (Grant Bio), neraca analitik (Radwag AS R2), pipet
mikro 10-100 µl (Eppendorf), vial LC, perangkat gelas yang
biasa digunakan di laboratorium.
• Sebanyak 6 sampel jamu tradisional dalam bentuk serbuk yang
dijual di kota gorontalo. Sampel tersebut kemudian di beri
kode A,B,C,D,E dan F. Silika gel F254 (Merck), fenilbutazon
standar analisis (Sigma Aldrigch), asetonitril HPLC grade
(Merck), ultrapure water HPLC grade (Merck), n- heksan p.a
(Merck), etil asetat p. a (Merck).
Identifikasi Menggunkan Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
• Preparasi sampel (ekstraksi)
Sampel jamu A ditimbang 1 gram di masukkan kedalam gelas
kimia, lalu di tambahkan metanol 25 mL, kemudian
diekstraksi pada suhu 450C dengan kecepatan 150 rpm, saring
menggunakan kertas whatman dan tampung ekstrak cair dari
sampel jamu kemudian diuapkan. Lakukan perlakuan yang
sama untuk masing-masing sampel jamu B, C, D, E dan F.
Pengujian Kromatografi Lapis Tipis
Disiapkan baku pembanding fenilbutazon dan ekstrak jamu di
atas plat tetes kemudian diencerkan dengan pelarut yang sesuai.
Selanjutnya parasetamol dan ekstak jamu ditotolkan pada
lempeng KLT dan dielusi ke dalam chamber yang berisi eluen n-
heksan : etil asetat (4:1) hingga eluen mencapai batas tanda. Plat
KLT selanjutnya dikeringkan kemudian diamati nodanya di
bawah sinar UV 254 nm. Diamati noda yang tampak dari
senyawa pembanding dengan masing-masing ekstrak jamu
kemudian diperhatikan kesamaan posisi noda dan dihitung nilai
Rf-nya.
Idenitifikasi Menggunakan LC-MS
Pengkondisian Intrument dan Fase Gerak
Fase gerak terdiri dari pure ultra water dan asetonitril dibuat
dengan sistem elusi isokratik. Sebelum digunakan, air dan
asetonitril disaring masing-masing lalu didegassing selama lebih
kurang 15 menit. Sebelum sampel dipisahkan, dilakukan
pengaturan program untuk menjalankan alat LC-MS. Sampel
dipisahkan mengunakan kolom C18 (Acquity 2,1 x,50 mm, 1,7
µm) fase terbalik dan dielusi pada laju alir 200 µL/menit. Fase
gerak yang digunakan yaitu ultrapure water : asetonitril (90:10%
v/v). Volume injeksi sampel adalah 10µL. Digunakan sistem elusi
isokratik dan dideteksi menggunakan mode ion positif.
Pengujian LC-MS
Sebanyak 10 mg baku fenilbutazon ditimbang dengan menggunakan
timbangan analitik. Kemudian dilarutkan dengan menambah 10 ml metanol
sehingga didapat kosentrasi 1000 ppm, disaring, fitratnya digunakan sebagai
larutan induk. Dari larutan induk dengan konsentrasi 1000 ppm dibuat larutan
dengan konsentrasi 5,10,15,20,25 ppm. Larutan standar tersebut disaring dan
dimasukkan ke dalam vial LC. Kemudian diinjeksikan ke sistem dengan laju
alir fase gerak 200 µL/menit, lalu dilihat waktu retensi (Rt) pada
kromatogram dan Spektrum Fragmentasi pada data Spektra Spektroskopi
Massa.
Dilakukan penimbangan sebanyak 10 mg dari sampel A,C,D,E dan F yang
terbukti mengandung Fenilbutason menggunakan metode KLT dengan
menggunakan timbangan analitik. Kemudian dilarutkan dengan menambah
10 mL metanol sehingga didapat kosentrasi 1000 ppm, disaring, fitratnya
digunakan sebagai larutan induk. Dari larutan induk dengan konsentrasi 1000
ppm dibuat larutan dengan konsentrasi 10,15,20,25,30 ppm.
Kromatogram LCMS dari Fenilbutazon dan Sampel Jamu
Spektrum Massa dari Fenilbutazon dan Sampel Jamu
Spektrum Massa dari Fenilbutazon, 2-butylmalonaldehyde, 1,2-

diphenylhydrazin dan 3-H Indol.

 NH2

HN

Molecular Weight: 78.114

Molecular Weight: 109.144

Interpretasi Pola Fragmentasi

Fenilbutazon terdiri dari 2 jalur
(kotak Merah dan
Kotak hijau)
• James J Pitt. 2009. Principles and Applications of Liquid
Chromatography-Mass Spectrometry in Clinical Biochemistry.
VCGS Pathology, Murdoch Children’s Research Institute,
Royal Children’s Hospital
• http://
alyarisnanda20.blogspot.com/2016/02/spektroskopi-massa
• https://hanifahpsains.wordpress.com/spektroskopi-massa/
 Nuclear Magnetic Resonance (NMR)

• Nuclear Magnetic Resonance (NMR) adalah salah satu metode

analisis yang paling mudah digunakan pada kimia modern. NMR
digunakan untuk menentukan struktur dari komponen alami dan
sintetik yang baru, kemurnian dari komponen, dan arah reaksi
kimia sebagaimana hubungan komponen dalam larutan yang dapat
mengalami reaksi kimia.
• Spektrokopi NMR khususnya digunakan pada studi molekul
organik karena biasanya membentuk atom hidrogen dengan
jumlah yang sangat besar.
• Spektroskopi NMR merupakan alat yang dikembangkan dalam
biologi structural. Dasar dari spektroskopi NMR adalah
absorpsi radiasi elektromagnetik dengan frekuensi radio
oleh inti atom. Frekuensi radio yang digunakan berkisar dari
0,1 sampai dengan 100 MHz. Bahkan, baru-baru ini
ada spektrometer NMR yang menggunakan radio frekuensi
sampai 500 MHz.
Instrumen NMR
Bagian-Bagian Instrumen NMR
 Bagian pokok
spektrofotometer NMR
 NMR terdiri atas komponen-komponen utama berikut

1.Magnet ; kekuatan magnet menentukan akurasi dan kualitas suatu alat NMR. Ada
tiga jenis magnet yang dipakai :
• Magnet permanen
• Elektromagnet
• Magnet superkonduksi
Magnet
Akurasi dan kualitas suatu alat NMR tergantung pada kekuatan magnetnya.
Resolusiakan bertambah dengan kenaikkan kekuatan medannnya, bila medan
magnetnya homogen elektromagnet dan kumparan superkonduktor (selenoids).
Magnet permanen mempunyai kuat medan 7046-14002 G, ini sesuai dengan
frekuensioskilator antara 30-60 MHz. Termostat yang baik diperlukan karena
magnet bersifat peka terhadap temperatur. Elektromagnet memerlukan sistem
pendingin, elektromagnet yang banyak di pasaran mempunyai frekuensi 60, 90 dan
100 MHz untuk proton. NMR beresolusi tinggi dan bermagnet superkonduktor
dengan frekuensi proton 470 MHz. Pengaruh fluktuasi medan dapat diatasi dengan
sistem pengunci frekuensi, dapat berupa tipe pengunci eksternal atau internal.
2. Generator medan magnet penyapu
Suatu pasangan kumparan terletak sejajar terhadap permukaan
magnet, digunakan untuk mengubah medan magnet pada suatu
range yang sempit. Dengan memvariasikan arus searah melalui
kumparan ini, medan efektif dapat diubah-ubah. Perubahan medan
ini disinkronisasikan secara linier dengan perubahan waktu.
3. Sumber frekuensi radio
sinyal frekuensi oskilasi radio (transmiter) disalurkan pada
sepasang kumparan yang posisinya 90º terhadap jalar dan magnet.
Suatu oskilator yang tetap sebesar 60, 90 atau 100 MHz
digunakan dalam NMR beresolusi tinggi.
4. Detektor sinyal Sinyal frekuensi radio yang dihasilkan oleh inti
yang beresolusi dideteksi dengan kumparan yang mengitari
sampel dan tegak lurus terhadap sumber. Sinyal listrik yang
dihasilkan lemah dan biasanya dikuatkan dulu sebelum dicatat.
5. Perekaman (Rekorder)
Pencatat sinyal NMR disinkronisasikan dengan sapuan medan,
rekorder mengendalikan laju sapuan spektrum. Luas puncak dapat
digunakan untukmenentukan jumlah relatif inti yang mengabsorpsi.

6. Tempat sampel dan kelengkapannya (Tempat sampel dan probe)

Tempat sampel merupakan tabung gelas berdiameter 5mm dan dapat
diisi cairan sampai 0,4 ml. Probe sampel terdiri atas tempat
kedudukan sampel, sumber frekuensi penyapu dan kumparan
detektor dengan sel pembanding. Detektor dan kumparan penerima
diorientasikan pada 90º. Probe sampel menggelilingi tabung sampel
pada ratusan rpm dengan sumbu longitudinal. Untuk NMR
beresolusi tinggi, sampel tidak boleh terlalu kental. Biasanya
digunakan konsentrasi larutan 2-15%. Pelarut yang baik unutk NMR
sebaiknya tidak mengandung proton seperti CS2, CCl4. Pelarut–
pelarut berdeuterium juga sering digunakan seperti CDCl3 atau
C6D6.
 Mekanisme kerja instrumen NMR
1. Tempat sampel terletak pada medan magnet elektromagnet
dengan medan RF yang tegak lurus terhadap medan magnet.
2. Medan magnet dari kumparan sweep generator disapukan
secara perlahan (menarik) ke daerah resonansi.
3. Pada resonansi terjadi suatu perubahan pada dipol magnetik inti
suatu voltase akan terinduksi ke kumparan penerima, yang lalu
diperkuat, dideteksi dan dicatat.
4. Spektrum yang dihasilkan merupakan gambaran antara energi transisi
resonansi terhadap intensitas.
5. Sampel di letakkan pada suatu tabung gelas yang berdinding tipis
dengan diameter luar 5 mm.
6. Turbin tiupan udara akan memutar sampel dengan kecepatan beberapa ratus putaran
tiap menit (rpm) untuk menjaga kehomogenan medan magnet yang mengenainya.
7. Pada spektrum terdapat juga puncak-puncak tambahan yang dihasilkan oleh
perputaran sampel, sebab pada frekuensi (kecepatan) putaran ini puncak-puncak
resonansi mengalami sedikit perubahan.
 Keuntungan dan Kekurangan
• Kelebihan dari alat ini adalah dapat mengidentifikasi adanya
senyawa organik dalam sampel.
• NMR merupakan cara paling akurat untuk mengukur
kekuatan dari sebuah medan magnet
• Dapat digunakan untuk analisa kualitatif maupun kuantitatif
terutama untuk senyawa organik
• Dapat digunakan pada suhu yang sangat rendah untuk logam
• Dapat mempelajari bentuk dan struktur molekul dari sampel
yang dianalisa
Kekurangan
• Hasil analisa kualitatif dan kuantitatif dari spektrum
NMR lebih banyak dilakukan terhadap sampel organik.
(mengandung atom C, H, O)
• Mahal dalam pngujiannya,
• Tidak dapat menggunakan pelarut CCl4 pelarut ini sangat nonpolar
sehingga mempunyai kapasitas pelarutan yang relatif rendah.
Misalnya tidak dapat melarutkan senyawa-senyawa yang bersifat
polar. Karena hal-hal tersebut maka terdapat beberapa pelarut yang
sering digunakan pada spektrometer NMR yakni pelarut yang
telah terdeuterasi, misalnya Deuterokloroform (CDCl3),
Heksadeterobenzena (C6D6), Aseton-d6 (CD3COCD3)
 Aplikasi Dalam Dunia Farmasi
1. Menentukan kemurnian obat-obatan.
2. Mengidentifikasi kontaminan dalam makanan, kosmetik,
atau obat-obatan
3. Membantu ahli kimia penelitian menemukan apakah reaksi
kimia telah terjadi di situs yang benar pada molekul.
4. Mengidentifikasi obat disita oleh polisi dan agen bea cukai.
5. Memeriksa struktur plastik, untuk memastikan mereka akan
memiliki sifat yang diinginkan.
APLIKASI NMR
TERIMA KASIH