TUGAS PENENTUAN STRUKTUR MOLEKUL

APLIKASI METODE ANALISIS 2D-NMR HOMOANULAR (COSY, TOCSY):

PRINSIP-ANALISIS-APLIKASI

Dosen Pengampu:

Ismiyarto, S.Si., M.Si., Ph.D.

Disusun oleh:

Priyosetyoko
24030120420007

MAGISTER KIMIA

FAKULTAS SAINS DAN MATEMATIKA

UNIVERSITAS DIPONEGORO

2021
 A. Prinsip Analisis 2D-NMR

Prinsip-prinsip yang mendasari pembangkitan spektrum dua dimensi adalah yang

pertama disajikan dalam kuliah pada tahun 1971, meskipun beberapa tahun kemudian
pendekatan menemukan aplikasi yang lebih luas. Selama tahun 1980-an, dunia NMR, dan
akibatnya pendekatan ahli kimia untuk penentuan struktural, direvolusi oleh pengembangan
banyak teknik dua dimensi, dan saat ini banyak dimensi yang lebih tinggi metode (3D dan
4D) juga ada. Metode ini menggunakan tiga atau lebih dimensi telah menemukan aplikasi
terbesar di tangan spektroskopi NMR biologis mempelajari makromolekul (bidang khusus
dalam dirinya sendiri) dan, saat ini, cenderung untuk digunakan lebih jarang dalam apa yang
dapat dianggap arus utama organik kimia. Oleh karena itu, metode-metode ini berada di luar
bidang dan dibahas dalam teks yang didedikasikan untuk NMR biomolekuler. Bab ini
dimulai dengan memperkenalkan prinsip-prinsip yang terletak di jantung semua dua dimensi
metode. Teknik itu sendiri, diringkas secara singkat dalam Tabel 5.1, dimulai dengan
Spektroskopi Korelasi dasar (COSY), yang memetakan inti yang berbagi skalar bersama
kopling dalam molekul, membuat proton-proton COSY salah satu teknik keras dalam
penjelasan struktur organik. Kemudian di bab ini, beberapa varian dari COSY dasar
eksperimen yang menampilkan sejumlah karakteristik bermanfaat disajikan dan karenanya
juga menemukan aplikasi luas. Dua bagian terakhir mencakup teknik yang agak berbeda.
Pertama, Spektroskopi Korelasi Total (TOCSY), memberikan alternatif untuk COSY
pendekatan untuk membangun korelasi dalam molekul. Ini memberikan transfer yang efisien
dari informasi di sepanjang jaringan putaran yang digabungkan, fitur yang bisa sangat kuat di
analisis spektrum yang lebih kompleks. Metode terakhir menetapkan korelasi antara putaran
seperti kelimpahan alami yang rendah. Ini dapat digunakan, misalnya, untuk secara langsung
mengidentifikasi pusat karbon tetangga dan dalam bentuk ini mungkin merupakan
eksperimen pamungkas untuk mendefinisikan kerangka molekuler, meskipun, sayangnya, itu
juga tentang yang paling tidak sensitif Claridge (2016).

COSY adalah singkatan dari Correlation Spectroscopy, dan merupakan teknik

pertama dua dimensi yang dajukan oleh jeener tahun 1971. Poin pertama yang harus
diklarifikasi ketika membahas teknik dua dimensi adalah fakta bahwa dua dimensi mengacu
pada dua dimensi frekuensi, sedangkan yang disebut metode 1D memiliki, tentu saja, hanya
satu. Dalam kedua kasus, juga akan ada dimensi yang mewakili sinyal intensitas, meskipun
ini biasanya tidak pernah disertakan ketika menggambarkan dimensi suatu percobaan. Dua
dimensi frekuensi dapat mewakili kombinasi bahan kimia apa pun pergeseran atau kopling
skalar. Baru-baru ini, metode telah dikembangkan di mana ide representasi dua dimensi telah
diadaptasi untuk memasukkan satu frekuensi dan satu 'lainnya' dimensi. Misalnya, metode
HPLC-NMR hibrida mampu menghasilkan plot 2D dengan spektrum NMR 1D biasa yang
terdiri dari satu dimensi dan kromatografi waktu retensi di sisi lain. Demikian juga, adalah
mungkin untuk menyebarkan spektrum zat terlarut sesuai dengan sifat difusinya, dalam hal
ini dimensi kedua mewakili koefisien self-diffusion. Spektrum dua dimensi konvensional
menemukan kegunaan yang begitu luas dalam penelitian kimia karena mereka memetakan
interaksi di dalam, atau terkadang di antara, molekul yang kita minati. Interaksi yang dapat
diselidiki dapat dipecah menjadi tiga kategori yang berbeda, yang berhubungan dengan
fenomena fisik yang sangat berbeda: kopling melalui-ikatan, melalui-ruang kopling dan
pertukaran kimia. Yang pertama dipertimbangkan dalam hal ini dan berikut ini bab di bawah
pembagian homonuklear (antara inti seperti, mis.1H-H) dan heteronuklir (antara tidak seperti
inti, mis. 1H-13C) kopling, dan percobaan yang dipertimbangkan adalah: terutama ditujukan
untuk identifikasi dan penyambungan berikutnya bersama-sama dari ment dalam sebuah
molekul. Kopling melalui-ruang memberikan dasar untuk Overhauser nuklir efek, yang
paling sering digunakan untuk menyimpulkan stereokimia molekuler dan konformasi.

Dalam percobaan dua dimensi, ada dua sumbu koordinat. Umumnya, sumbu ini juga
mewakili rentang pergeseran kimia. Sinyal disajikan sebagai fungsi dari masing-masing
rentang pergeseran kimia ini. Data diplot sebagai grid; satu sumbu mewakili satu rentang
pergeseran kimia, sumbu kedua mewakili rentang pergeseran kimia kedua, dan dimensi
ketiga merupakan besarnya (intensitas) dari sinyal yang diamati. Hasilnya adalah bentuk plot
kontur di mana kontur garis sesuai dengan intensitas sinyal. Dalam eksperimen NMR
berdenyut normal, pulsa eksitasi 90° segera diikuti oleh data fase akuisisi di mana FID
direkam dan data disimpan di komputer. Dalam percobaan yang menggunakan kompleks
urutan pulsa, seperti DEPT, fase evolusi disertakan sebelum akuisisi data. Selama fase
evolusi, vektor magnetisasi nuklir diizinkan untuk presesi, dan informasi dapat dipertukarkan
antara inti magnetik. Dengan kata lain, nukleus tertentu dapat dikodekan dengan informasi
tentang keadaan spin inti lain yang mungkin berada di dekatnya. Dari sekian banyak jenis
eksperimen dua dimensi, dua menemukan aplikasi yang paling sering. Satu di antaranya
adalah spektroskopi korelasi HIH, yang lebih dikenal dengan singkatannya, COSY. Dalam
percobaan, kisaran pergeseran kimia dari spektrum proton diplot pada kedua sumbu. Kedua
teknik penting adalah spektroskopi korelasi heteronuklear, lebih dikenal sebagai HETCOR
teknik. Dalam percobaan HETCOR, rentang pergeseran kimia dari spektrum proton diplot
pada satu sumbu, sedangkan kisaran pergeseran kimia dari 13 Spektrum C untuk sampel yang
sama diplot pada sumbu kedua. Kitchin. (2004).

Bagaimana menghasilkan dimensi kedua

Tidak peduli apa sifat interaksi yang akan dipetakan, semuanya dua dimensi urutan
memiliki format dasar yang sama dan dapat dibagi lagi menjadi empat unit yang terdefinisi
dengan baik disebut periode persiapan, evolusi, pencampuran dan deteksi. Persiapan dan
periode pencampuran biasanya terdiri dari pulsa atau sekelompok pulsa dan/atau waktu tetap
periode, rincian yang tepat yang bervariasi tergantung pada sifat percobaan. Periode deteksi
sepenuhnya analog dengan periode deteksi satu dimensi apa pun percobaan di mana
spektrometer mengumpulkan FID dari putaran tereksitasi. Periode evolusi menyediakan
kunci untuk generasi dimensi kedua. Sebelum melanjutkan, ingat secara singkat apa yang
terjadi selama akuisisi FID satu dimensi dan proses yang menghasilkan spektrum domain
frekuensi tunggal. Proses deteksi melibatkan pengambilan sampel (digitalisasi) FID berosilasi
pada interval waktu reguler yang ditentukan.

Kondisi Nyquist untuk periode akuisisi yang sesuai. Data yang terkumpul kemudian
dijadikan subjek ke transformasi Fourier untuk menghasilkan spektrum domain frekuensi
yang dibutuhkan. Di lain kata-kata, persyaratan umum untuk membuat dimensi frekuensi
adalah pengambilan sampel biasa magnetisasi karena bervariasi dalam beberapa cara sebagai
fungsi waktu. Memperluas ide ini, seseorang dapat menyimpulkan bahwa untuk
menghasilkan spektrum dengan dua domain frekuensi, f1 dan f2, itu perlu untuk sampel data
sebagai fungsi dari dua variabel waktu yang terpisah, t1 dan t2. Jelas sekali domain dan
karenanya satu domain frekuensi berasal dari periode deteksi biasa (t2 di dalam Gambar 1).

Gambar 1. Skema umum untuk setiap percobaan dua dimensi. P, Persiapan; E, evolusi; M,
pencampuran dan D, deteksi.

Untuk mengilustrasikan prosedur yang diperlukan, pertimbangkan urutan pulsa sederhana di

mana kedua unit persiapan dan pencampuran Gambar 1 masing-masing 90 pulsa (Gbr. 2)
yang bekerja pada sampel yang hanya mengandung resonansi proton tunggal yang tidak
berpasangan, katakanlah kloroform, dengan pergeseran kimia offset Hz.
 Gambar 2. Ilustrasi dua dimensi barisan di mana P dan M adalah 90 pulsa. Ini juga urutan
dasar COSY.

Melihat kejadian dengan model vektor (Gbr. 3), inisial 90x pulsa menempatkan
magnetisasi kesetimbangan di bidang xy sepanjang sumbu +y, setelah yang akan berproses
(atau berkembang) sesuai dengan offset pergeseran kimia ini. Setelah jangka waktu tertentu
T1, vektor bergerak melalui sudut 360 t derajat dan kemudian tunduk pada yang kedua detak.
Untuk menghargai pengaruh pulsa ini, akan lebih mudah untuk mempertimbangkan vektor
sebagai terdiri dari dua komponen ortogonal, satu di sepanjang sumbu y asli (M0 cos 360 t1)
dan yang lain sepanjang sumbu x (M0 sin 360 t1). 90 kedua pulsa menempatkan komponen y
sepanjang sumbu –z sementara komponen x tidak terpengaruh dan tetap berpresesi di bidang
transversal dan menghasilkan FID yang terdeteksi. Transformasi Fourier dari FID ini karena
itu akan menghasilkan spektrum yang mengandung resonansi tunggal yang intensitasnya
tergantung pada faktor sin 360 t. Melakukan percobaan ini dengan t1 1 xset ke nol berarti dua
90 pulsa akan menambah menghasilkan bersih 180 x pulsa, yang hanya sesuai dengan inversi
keseimbangan vektor. Karena tidak ada magnetisasi transversal, tidak ada sinyal untuk
dideteksi, danspektrum hanya berisi noise. Sekarang bayangkan mengulangi percobaan
beberapa kali dengan t interval meningkat dengan jumlah yang seragam setiap kali dan FID
yang dihasilkan disimpan secara terpisah. Sebagai 1 meningkat dari nol, intensitas sinyal
yang dihasilkan juga meningkat karena x-magnetisasi memiliki waktu untuk berkembang
selama periode evolusi, mencapai maksimum ketika telah berevolusi melalui sudut 90 .
Peningkatan lebih lanjut dalam t1 menyebabkan x-komponen berkurang, melewati nol,
kemudian menjadi negatif dan seterusnya sesuai untuk modulasi sinus. Tundukkan masing-
masing t yang diperoleh FID ke transformasi Fourier menghasilkan serangkaian spektrum
yang mengandung resonansi tunggal yang intensitas (atau amplitudo) bervariasi sebagai
fungsi waktu menurut sin 360 t1 202 cos 360 t 1 (Gbr. 5.4). Dengan nilai t yang lebih
panjang, efek relaksasi mengurangi intensitas magnetisasi transversal menurut T, jadi
intensitas sinyal menunjukkan peluruhan yang stabil (eksponensial) di samping amplitudo
modulasi. Oleh karena itu, intensitas resonansi sebagai fungsi waktu menyatakan FID lain
untuk t domain waktu (disebut sebagai interferogram) yang telah dihasilkan secara artifisial
atau tidak langsung (Gbr. 5.5). Frekuensi modulasi amplitudo sesuai dengan pergeseran kimia
offset resonansi dalam bingkai berputar, dan kami katakanlah magnetisasi telah diberi label
frekuensi sebagai fungsi dari t1. Mengalami ini data domain waktu ke transformasi Fourier,
sekali lagi diharapkan ini menghasilkan resonansi tunggal dengan pergeseran kimia v Hz f1
di domain frekuensi, seperti untuk f2 domain. Generalisasi proses ini membutuhkan
pemantauan intensitas setiap titik data di f2 domain sebagai fungsi dari t.

Gambar 3. Aksi COSY urutan Gambar 5.2 pada satu, resonansi proton tidak berpasangan.

Gambar 4. Modulasi amplitudo resonansi singlet sebagai fungsi dari periode evolusi t. Lebih
lama nilai t1 1 , intensitas sinyal adalah berkurang dengan relaksasi spin.

Teknik NMR Resolusi Tinggi dalam Kimia Organik

Transformasi Fourier terhadap t, domain frekuensi lengkap lainnya dihasilkan, yang,

dalam kombinasi dengan domain konvensional, menghasilkan dua dimensi spektrum
menampilkan resonansi tunggal pada Hz di kedua dimensi. Perhatikan bahwa pelabelan
sumbu frekuensi sebagai f11 dan f berikut dari urutan domain waktu yang sesuai dalam
urutan pulsa, yaitu, t21 diikuti oleh t. Yang baru buatan (t1) domain waktu telah diambil
sampelnya secara terpisah dengan merekam FID untuk setiap t titik waktu dan menyimpan
masing-masing secara terpisah, analog dengan pengambilan sampel t titik data dijelaskan
sebelumnya. Akuisisi berulang FID dengan peningkatan sistematis t periode waktu yang
merupakan dasar untuk pembangkitan semua set data dua dimensi. Memang, ide sederhana
ini dapat diperluas untuk menghasilkan spektrum tiga dimensi hanya dengan memiliki tiga
periode waktu yang bertambah secara independen, satu terdeteksi 'langsung' dan dua 'secara
tidak langsung'; meskipun detail teknisnya mungkin sedikit rumit, prinsipnya cukup
sederhana. Filosofi di balik pendekatan multi-dimensi adalah bahwa satu sinyal dimodulasi
sebagai fungsi dari satu variabel waktu (katakanlah t) terdeteksi pada beberapa titik kemudian
sebagai fungsi dari yang lain (t dalam kasus percobaan 2D). Ini deskripsi umum berlaku sama
untuk spektrum yang mengandung banyak resonansi. Mengulangi percobaan di atas untuk
sampel yang hanya berisi dua putaran tidak berpasangan dengan offset A dan x2 Hz
menghasilkan spektrum dengan dua singlet 2D yang frekuensinya di keduanya dimensi sesuai
hanya dengan offset pergeseran kimia masing-masing dari resonansi.

Gambar 5. Variasi di puncak intensitas termodulasi amplitudo resonansi menghasilkan FID

(interferogram) untuk t domain.

Gambar 6. Spektrum dua dimensi yang dihasilkan dari urutan untuk sampel yang
mengandung putaran tunggal yang tidak berpasangan. Satu puncak hasil dengan pergeseran
Hz di keduanya ukuran.
Gambar 7. Skema umum untuk koleksi dua dimensi Himpunan data. Percobaan diulangi
berkali-kali dengan t Titik bertambah pada setiap tahap dan FID yang dihasilkan disimpan
secara terpisah. Mengikuti Fourier ganda transformasi terhadap t pertama dan kemudian t1,
dua dimensi hasil spektrum.

Gambar 8. Representasi skematis dari (a) dua dimensi dan (b) tiga dimensi eksperimen. 3D
percobaan dikumpulkan oleh secara mandiri memvariasikan t interval untuk menghasilkan f1
dan f2.
Gambar 9. Dua dimensi spektrum yang dihasilkan dari urutan dari Gambar 2 untuk sampel
yang mengandung dua spin/putaran tidak berpasangan, A dan X, dari offset VA dan VX.

Prinsip dan Cara Analisis Metode COSY

(H,C-COSY), atau yang sering disebut teknik hetonuclear chemical shift correlation
(HETCOR), dan overhauser effect spectroscopy. Teknik COSY meliputi H,H-COSY
konvensional atau normal dan beberapa teknik lain yang sering digunakan saat ini seperti
double quantum filtered correlation spectroscopy (DQF-COSY), double quantum correlation
spectroscopy (DQ-COSY), dan total correlation spectroscopy (TOCSY). Teknik HETCOR
meliputi H,C-COSY normal, heteronuclear multiple quantum correlation (HMQC) dan
heteronuclear multiple bond correlation (HMBC). Teknik overhauser effect terdiri dari
nuclear overhauser effect spectroscopy (NOESY) dan teknik rotating frame overhauser effect
spectroscopy (ROESY). Selain teknik-teknik tersebut, terdapat juga teknik incredible natural
abundance double quantum trasfer (INADEQUATE) dua dimensi dan gabungan teknik
HMQC-TOCSY yang sering digunakan untuk senyawa kompleks atau senyawa glikosida.

Teknik H-H COSY atau sering disebut juga dengan istilah COSY meliputi suatu
teknik H-H COSY normal, DQF-COSY, DQ-COSY, dan TOCSY. Rekaman spektrum H-H
COSY normal, DQF-COSY, DQ-COSY pada dasarnya memberikan informasi korelasi
proton-proton geminal (2J) maupun visinal (3J) dalam suatu molekul. Sementara itu spektrum
TOCSY memberikan informasi korelasi proton yang berjarak tiga ikatan atau lebih. Teknik
TOCSY ini dikenal dengan nama korelasi berantai (relayed correlation).

Spektrum COSY baik H-H COSY normal maupun DQF-COSY atau DQ-COSY
diplot dalam dua sumbu yaitu vertikal dan horizontal, di mana setiap sumbu dikalibrasi
berdasarkan harga pergeseran kimia proton (1H). Spektrum COSY menunjukkan spots pada
posisi diagonal maupun di luar diagonal (offdiagonal). Spots tersebut terbentuk sebagai
akibat dari adanya korelasi inti 1H sehingga sering disebut juga sebagai puncak korelasi atau
puncak silang. Spot diagonal dimulai dari sudut kanan atas sampai sudut kiri bawah. Melalui
penarikan garis secara vertikal ataupun horizontal yang dimulai dari setiap spot diagonal
maka akan dengan mudah teramati bahwa setiap spot diagonal akan berhubungan dengan
puncak yang sama pada setiap sumbu koordinat. Puncak yang penting dalam spektrum COSY
adalah puncak-puncak yang akan memberikan spot pada posisi di luar diagonal (offdiagonal)
yang selanjutnya disebut offdiagonal spot. Perlu dicatat bahwa pada spektrum H-H COSY
normal seringkali terdapat spots lain di samping spot yang akan diamati. Spots ekstra ini
mempunyai intensitas yang lebih lemah daripada spot yang diamati. Hal ini disebabkan
karena metode H-H COSY seringkali dapat mendeteksi interaksi antara inti yang berjarak
lebih dari tiga ikatan (gandengan jarak jauh). Di samping gandengan jarak jauh, inti be-
berapa atom yang terpisah tetapi berdekatan secara ruang juga akan menghasilkan off-
diagonal spots. Untuk mengatasi masalah tersebut,maka saat ini teknik COSY yang sering
digunakan adalah DQF-COSY atau DQ-COSY. Penggunaan kedua teknik ini atau salah
satunya adalah untuk menghilangkan atau menyaring transisi kuantum tunggal sehingga yang
tersisa hanya kuantum ganda (double quantum). Teknik ini akan memilih sistem korelasi dari
dua spin inti (minimum sistem AB atau AX) sehingga spins inti yang tidak saling
menggandeng akan dihilangkan. Dengan demikian spektrum DQF-COSY atau DQ-COSY
akan terlihat lebih sederhana dibandingkan dengan spektrum H-H COSY normal dari
senyawa yang sama.

Bagaimana Membaca Spektrum COSY

a. Spektrum H-H COSY 2-Nitropropana

Untuk mengetahui jenis informasi yang diberikan oleh sebuah spektrum COSY maka
sebaiknya dimulai dengan spektrum dari senyawa sederhana seperti 2-nitropropana. Pada
senyawa ini, diharapkan dapat diamati gandengan antara proton dari dua gugus metil dengan
proton pada posisi metin (CH). Seperti telah dijelaskan sebelumnya, spektrum COSY diplot
dalam dua sumbu yaitu vertikal dan horizontal serta setiap sumbu dikalibrasi berdasarkan
harga pergeseran kimia proton (1H) dalam ppm. Pada spektrum 2-nitropropana (Gambar 30)
dapat ditarik garis secara horizontal mulai dari spot pada δ 1,56 ppm (ditandai dengan huruf
A) yang merupakan spot dari proton-proton metil. Garis horizontal ini bertemu dengan
sebuah offdiagonal spot pada posisi kiri atas dalam spektrum COSY yang berhubungan
dengan proton metin pada δ 4.66 ppm (tanda B). Suatu garis vertikal yang ditarik dari off-
diagonal spot tersebut akan bertemu dengan spot pada posisi diagonal yang merupakan
proton metin (B). Adanya offdiagonal spot tersebut yang merupakan korelasi antara spot
proton metil dengan proton metin, mengonfirmasi bahwa proton metil bergandengan dengan
proton metin seperti yang diharapkan. Hasil yang sama juga akan teramati apabila ditarik
garis vertikal dari spot pada δ 1.56 ppm (A) dan garis horizontal dari spot pada δ 4.66 ppm
(B). Kedua garis tersebut akan bertemu pada offdiagonal spot yang kedua pada posisi kanan
bawah dalam spektrum COSY.

Gambar 10. Spektrum H-H COSY 2-nitropropana

b. Spektrum H-H COSY Asam Glutamat

Spektrum COSY asam glutamat juga dapat dikelompokkan pada spektrum COSY
sederhana. Jika kita menarik garis vertikal dari spot diagonal kanan atas pada δ 2,12 ppm
yang merupakan milik dari proton metilen H2-3 maka garis tersebut akan bertemu dengan
dua offdiagonal spots, yaitu pertama spot pada δ 2,52 ppm yang berhubungan dengan spot
diagonal milik dari proton metilen H2-4 dan spot kedua yaitu pada δ 3,89 ppm yang
berhubungan dengan spot diagonal milik dari proton metin H-2. Dengan demikian, dapat
disimpulkan bahwa proton metilen pada C-3 bergandengan dengan proton metilen pada C-4
dan proton metin pada C-2. Hasil yang sama diperoleh jika ditarik garis horizontal dari spot
diagonal kanan atas pada δ 2,12 ppm.

Gambar 11. Spektrum H,H-COSY Asam Glutamat

c. Spektrum H-H COSY Isopentil Asetat

 Dalam spektrum COSY isopentil asetat terlihat bahwa proton dua gugus metil yang
ekuivalen (ditandai dengan 1) berkorelasi dengan proton metin (ditandai dengan 2). Dapat
dilihat juga korelasi antara dua gugus metilen (ditandai dengan 3 dan 4) dan korelasi antara
proton metin (2) dengan metilen (3) tetangganya. Gugus metil pada bagian asetat (ditandai
dengan 6) tidak menunjukkan puncak-puncak offdiagonal karena proton metil asetil tidak
bergandengan dengan proton lain dalam molekul.

Gambar 12. Spektrum H-H COSY Isopentil Asetat

d. Spektrum H-H COSY Sitronelol

Spektrum COSY sitronelol lebih kompleks dari dua spektrum sebelumnya namun
dapat diidentifikasi beberapa interaksi penggandengan yang penting. Proton pada C-6 dapat
diamati dengan sangat jelas bergandengan dengan proton pada C-5. Pengujian kedekatan
kedua proton tersebut dalam spektrum juga mengatakan bahwa proton pada C-6
bergandengan melalui gandengan alilik (empat ikatan) dengan dua gugus metil pada C-8 dan
C-9. Proton pada C-1 bergandengan dengan dua proton yang tidak ekuivalen pada C-2 (δ 1.4
dan 1.6 ppm), proton pada C-2 tidak ekuivalen karena adanya suatu pusat kiral dalam
molekul yaitu pada posisi C-3. Pembelahan dari proton metil pada C-10 oleh proton metin
pada C-3 juga dapat diamati meskipun spot C-3 pada posisi diagonal terhalangi oleh spot
yang lain. Namun, dari spektrum COSY dapat ditentukan bahwa proton metin pada C-3
memiliki pergeseran kimia yang sama dengan salah satu gugus metil C-8 atau C-9 pada δ 1,6
ppm. Jadi, informasi yang bermanfaat tetap dapat diperoleh dari spektrum COSY dengan pola
yang kompleks.

Gambar 13. Spektrum H-H COSY Sitronelol

B. Prinsip dan Cara Analisis Metode TOCSY

Teknik TOCSY biasanya diperuntukan bagi penentuan struktur senyawa-senyawa

kompleks seperti senyawa glikosida dan senyawa peptida. Sama seperti pada spektrum
COSY, kedua sumbu pada spektrum TOCSY diplot dengan harga pergeseran kimia proton
(1H) dan spot diagonal berhubungan dengan spektrum satu dimensi (1D), sedangkan off-
diagonal spot menunjukkan korelasi antara proton-proton yang mempunyai sistem spin
dengan gandengan sama. Dengan kata lain, teknik TOCSY memberikan informasi korelasi
berantai antara proton-proton yang berada dalam lingkungan spin yang sama, sehingga jika
terdapat dua atau lebih bagian molekul yang menyusun suatu senyawa maka kita dapat
menentukan korelasi masing-masing proton dari bagian-bagian molekul tersebut. Untuk
mempermudah pemahaman teknik ini, kita coba melihat spektrum TOCSY suatu turunan
selobiosa, yaitu α-metil-3-O-metilselobiosa.
Spektrum TOCSY β-Laktosa

Sebagai tambahan untuk memahami teknik membaca spektrum TOCSY, berikut ini
kami akan menginterpretasi spektrum senyawa glikosida yang lain, yaitu β-laktosa. Senyawa
β-laktosa adalah suatu disakarida yang disusun oleh satu unit galaktosa dan glukosa di mana
galaktosa berikatan β-glikosidik pada 4-hidroksi dari glukosa. Jika kita melihat spektrum
TOCSY β-laktosa (Gambar 36) maka dapat diamati adanya tiga unit monosakarida yang
ditunjukkan oleh adanya tiga sinyal proton anomerik (H-1) masing-masing pada δ 4,43; 4,64;
dan 5,21 ppm. Hal ini disebabkan karena unit glukosa pada molekul ini dalam pelarut
nonorganik seperti D2O akan berada dalam campuran α- dan β-anomer. Jadi spektrum dalam
Gambar 35 menunjukkan sinyal-sinyal dari unit β-D-galaktosa, β-D-glukosa, dan α-D-
glukosa.

Gambar 14. Spektrum TOCSY-2D β-metil-3-O-metilselobiosa

Untuk melihat korelasi berantai yang terjadi dalam ketiga unit monosakarida tadi,
dapat dimulai dari spot diagonal masing-masing proton anomeriknya. Sinyal proton pada δ
5,21 ppm adalah milik dari proton anomerik α-D-glukosa, sedangkan untuk sinyal proton
pada δ 4,64, dan 4,43 ppm adalah berturut-turut milik dari proton anomerik β-D-glukosa dan
β-D-galaktosa. Jika kita menarik garis horizontal dari ketiga spot diagonal proton anomerik
tersebut, yaitu masing-masing dari δ 5,21 (H-1 α-glu), 4,64 (H-1 β-glu) dan 4,43 ppm (H-1
gal) maka kita dapat melihat adanya korelasi dari semua proton dalam setiap molekul tersebut
kecuali korelasi berantai pada unit β-D-galaktosa. Untuk spot diagonal H-1 α-D-glukosa dan
β-D-glukosa masing-masing berkorelasi dengan H-2, H-3, H-4, H-5, dan H-6 dari proton
dalam unitnya masing-masing, sedangkan untuk korelasi dalam unit β-D-galaktosa, H-1
hanya berkorelasi berantai dengan H-2, H-3, dan H-4. Hal ini disebabkan karena proton pada
posisi C-4 dari β-D-galaktosa berposisi α-ekuatorial yang menyebabkan korelasi berantai
berhenti di sini karena kecilnya tetapan.

Ilustrasi Korelasi yang Terjadi pada Teknik HMQC dan HMBC

Teknik HMQC-TOCSY lebih banyak digunakan dalam penentuan struktur senyawa glikosida
atau peptida. Pada bagian ini kita akan membahas spektrum HMQC-TOCSY suatu bagian
karbohidrat dari saponin. Permasalahan yang umum dalam elusidasi struktur saponin adalah
penentuan korelasi antara resonansi proton dan karbon yang berada pada gula yang sama,
karena adanya sinyal-sinyal yang tumpang tindih pada δ 3,5–5 ppm dalam spektrum. Itu,
biasanya rekaman spektrum DQCOSY hanya dapat mengidentifikasi korelasi antara H-1 dan
H-2 dari residu gula, dan atau korelasi antara H-6 dan H-5 jika gula tersebut adalah ramnosa
(adanya gugus metil pada posisi 6) Jenie et al. (2014)
Aplikasi NMR 2D COSY dan TOCSY
DAFTAR PUSTAKA

Claridge, T. D. W. (2016). High-Resolution NMR Techniques in Organic Chemistry: Third

Edition. In High-Resolution NMR Techniques in Organic Chemistry: Third Edition.
https://doi.org/10.1016/C2015-0-04654-8

Jenie, U. A., Kardono, L. B. S., Hanafi, M., Rumampuk, R. J., & Darmawan, A. (2014).
Teknik Modern Spektroskopi NMR : Teori dan Aplikasi dalam Elusidasi Struktur Molekul
Organik. http://penerbit.lipi.go.id/data/naskah1431501339.pdf

Kitchin, C. R. (2004). Introduction to spectroscopy. In Optical Astronomical Spectroscopy.

https://doi.org/10.1887/0750303468/b293c1

Saurí, J., Marcó, N., Williamson, R. T., Martin, G. E., & Parella, T. (2015). Extending long-
range heteronuclear NMR connectivities by HSQMBC-COSY and HSQMBC-TOCSY
experiments. Journal of Magnetic Resonance, 258, 25–32.
https://doi.org/10.1016/j.jmr.2015.06.004