Hitung Jumlah

Kuman ( HJK )
Anisa Putri (1011201016 )
Fereno Amilado (1011201143 )
Here starts the
Siti Zahra Fadhilah (1011201103 )
lesson!
 Peran Air dan Mikroorganisme
di dalam Air
 Air merupakan senyawa kimia yang sangat penting bagi kehidupan umat manusia maupun makhluk
lainnya. Fungsinya bagi kehidupan tersebut tidak akan dapat digantikan oleh senyawa lainnya.
Tubuh manusia terdiri dari 60 – 70% air dan hampir semua kegiatan yang dilakukan manusia
membutuhkan air, mulai dari membersihkan diri (mandi), membersihkan ruang tempat tinggalnya,
menyiapkan makanan dan minuman sampai dengan aktivitas-aktivitas lainnya.

 Air menyediakan habitat bagi berbagai jenis mikroorganisme. Sejumlah bakteri seperti E.coli
dianggap bakteri pengganggu dalam air karena menimbulkan masalah bau, warna dan rasa, di
samping itu juga membentuk endapan persenyawaan yang sulit larut sehingga dapat menyumbat
aliran air. Algae dapat menimbulkan perubahan bau, warna serta rasa yang tidak enak.

1
Untuk menentukan
jumlah bakteri dapat • Jumlah bakteri secara
keseluruhan (total cell count;

digunakan beberapa dihitung semua bakteri yang hidup

maupun yang mati

cara : • Jumlah bakteri yang hidup (viable

count); dihitung bakteri yang
hidup saja

2
Menghitung Langsung secara mikroskopik

 Digunakan object glass khusus (Petroff-Hauser) berbentuk persegi. Jumlah cairan

yang terdapat antara object glass dan kaca penutup memiliki volume tertentu,
sehingga satuan isi yang terdapat dalam persegi juga tertentu.

 Hanya cairan yang mengandung bakteri dalam jumlah tinggi yang dapat
menggunakan cara ini. Perhitungan langsung dengan menggunakan mata dan alat
bantu hitung.

3
“Menghitung dengan cara kekeruhan”

 Menggunakan spektrofotometri atau

nefelometer. Cahaya yang diabsorbsi
menghitung banyaknya sel bakteri

4
Perhitungan Standar plate count/hitungan
cawan/angka lempeng total :

Jumlah Kuman 1. Metode Hitung Cawan Total

( Total Plate Count)

atau Bakteri 2. Metode Permukaan

(Surface/Pour Plate)

5
 Pengambilan Sampel
● Pengambilan spesimen air harus dilakukan secara steril guna memastikan tidak
terdapatnya organisme yang mengkontaminasi.
● Setelah sampel air diambil, jangan lupa diberi label (tanggal, jam, tempat
pengambilan)
● Pengumpulan sampel dengan cara membeli air minum isi ulang yang dijual di depot air
minum isi ulang. Selanjutnya dilakukan uji penduga, uji penguat serta uji pelengkap.
Kemudian nilai MPN dihitung berdasarkan jumlah tabung positif pada uji penguat
dengan pertolongan tabel MPN dan perhitungan dengan rumus Thomas.
● Sampel yang sudah di dapat, dilakukan uji Hitung Jumlah Kuman menggunakan media
PCA dengan pengenceran.

6
 Cara Penanganan dan Pengiriman
●
Spesimen
Pengiriman spesimen sebaiknya dilaksanakan secara cepat dalam waktu
kurang dari 24 jam. Sebelum dikirim, sampel air disimpan dalam
refrigerator (kulkas).
● Bila perjalanan diperkirakan akan memakan waktu lebih dari 3 jam,
maka spesimen harus dikirim dalam suasana dingin, pada suhu 4 – 10oC.

7
 Hitung Cawan Total
( Total Plate Count)
● Hitung cawan total/total plate count yaitu jumlah bakteri tanpa membedakan jenis
bakteri dengan mengencerkan sampel terlebih dahulu.
● Total plate count ditentukan berdasarkan penanaman bahan dalam jumlah dan
pengenceran tertentu ke dalam media yang umum. Setelah melalui masa inkubasi,
perhitungan koloni dilakukan. Dianggap bahwa tiap koloni berasal dari sebuah sel,
maka jumlah koloni dapat diperhitungkan sebagai jumlah sel yang terdapat di dalam
bahan yang dianalisis. Pengenceran yang baik untuk dihitung jumlah koloninya adalah
pada biakan yang ditumbuhi 30-300 koloni.

8
 Prosedur Pemeriksaan
 Siapkan peralatan kerja
 Bersihkan seluruh tempat kerja dengan desinfektan (alkohol 70%)
 Siapkan 5 buah tabung reaksi steril, kemudian isikan masing-masing tabung dengan 9
ml aquadest steril menggunakan pipet ukur 10 ml yang juga steril, kemudian berikan
label 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5 (pengenceran disesuaikan dengan kekeruhan
sampel air)
 Ambil sampel sebanyak 1 ml dengan pipet ukur 1 ml yang telah steril dan masukkan
kedalam tabung pertama, sedot sepul sebanyak kurang lebih 5 kali, kemudian
pindahkan dari tabung ini sebanyak 1 ml kedalam tabung kedua, 1 ml ke dalam
cawan petri 1a, dan 1 ml ke dalam cawan petri 1b

9
 Lanjutan
 Ambil pipet ukur 1 ml steril yang baru dan lakukan sedot sepul pada tabung kedua,
kemudian pindahkan 1 ml kedalam tabung ketiga, 1 ml kedalam cawan petri 2a, dan
1 ml kedalam cawan petri 2b. Demikian seterusnya hingga tabung kelima dan cawan
petri ke 5a dan 5b. Beri label petri sesuai dengan label pengenceran
 Siapkan 2 buah cawan petri untuk blanko, pada blanko aquadest masukkan 1 ml
aquadest yang digunakan untuk pengenceran, sedangkan untuk blanko agar hanya
berisi agar saja.
 Siapkan PCA yang telah cair (suhu 40 oC) dan tuangkan kurang lebih 20 ml ke dalam
12 cawan petri tadi secara aseptis, tunggu hingga agar membeku
 Masukkan kedalam inkubator suhu 37oC selama 24 jam
 Hitung jumlah koloni yang tumbuh pada tiap cawan petri

10
C on t o
h Ha s
Perco il
baan

11
 C on t o
h Has
Perco il
baan
NO PENGENCERAN KOLONI PETRI 1 KOLONI PETRI 2 RATA-RATA KOLONI
1 10-1 330 320 325
2 10-2 200 190 145
3 10-3 56 50 53
4 10-4 20 16 18
5 10-5 5 1 3
6 Kontrol aquadest 1 - 1

7 Kontrol agar - - -

PERBANDINGAN :
12
• Jika nilai perbandingan <2 maka semua pengenceran dihitung tetapi jika >2 maka
hanya dari pengenceran terpekat saja yang dihitung
• Karena hasil perbandingan >2, maka hasil hitung jumlah kuman pada air adalah :
• (145 – 1) 100 = 14400 = 1,44 x 104 koloni/mL
• PERMENKES RI No. 907 / Menkes / SK / VII / 2002 tentang Syarat- syarat dan
Pengawasan kualitas Air Minum

13
Metode Permukaan (Surface/Pour Plate)
● Agar steril dituang ke dalam cawan petri steril, biarkan membeku.
● Setelah memebeku sempurna, kemudian sebanyak 0,1 ml sampel yang telah diencerkan
dipipet pada permukaan agar tersebut, ratakan.
● Inkubasi dan Hitung koloni yang terbentuk.

14
Thank CREDITS:
This prese

You
template w ntation
as created
including i by Slidesg
co o,
infographic ns by Flaticon, and
s & image
s by Freep
ik.

15