LAPORAN PRAKTIKUM

Mata Kuliah : Penyehatan Makanan dan Minuman

Materi Praktikum : Total Plate Count
Hari / Tanggal : Kamis, 21 Maret 2019
Waktu : 08.00 - selesai
Tempat : Laboratorium Mikrobiologi
Klompok : I
Pembimbing : Iin Indayani, S.KM

I. Pendahuluan
Prinsip dari Total Plate Count adalah menumbuhkan sel mikroorganisme
yang masih hidup pada media agar, sehingga mikroorganisme akan berkembang
biak dan membentuk koloni yang dapat dilihat langsung dan dihitung dengan
mata tanpa menggunakan mikroskop. Pada meyode ini teknik penegen ceran
merupakan hal yang harus dikuasai. Sebelum mikroorganisme ditumbuhkan di
dalam media, terlebih dahulu dilakukan pengenceran sampel menggunakan
larutan fisiologis.
II. Tujuan
Untuk menghitung jumlah koloni yang terdapat pada es
III. Alat dan Bahan
Alat :
1.Tabung Reaksi 6 buah 9. Gelas Beaker 300 ml (1 bh) 17. Pipet Steril yang
(ukuran 10 ml) berukuran 10 ml, 1 ml dan
Pipet yang tidak steril 10
2. Rak Tabung 10. Kamera/Hp ml dan ball pipet

3. Lampu Spritus 11. Timbangan Analitik

4. Inkubator 12. Autoclave

5. Plate / petri dispossible 13. Gelas Arloji & Sendok

6. Kompor Listrik 14. Kulkas

7. Gelas Ukur 15. Sarung Tangan

8. Erlenmayer 250 ml (2 bh) 16. Koloni Counter

Bahan :
1. Sampel Es lilin 3. Aquades 5. Alumunium foil 7. Koran 9. Korek
kacang ijo
2. Nutrient Agar 4. Kapas 6. Garam Fisiologis 8. Kertas 10. Spidol

IV. Cara Kerja

 Pembuatan NaCl 0,85% (Perkelompok)
Dalam melarutkan NaCl 0,85% diperlukan 144 ml yang dibulatkan menjadi
150 ml (Erlenmayer 90 ml dan 6 tabung masing-masing 9 ml).
Dari NaCl 0,85% dilarutkan dengan 100 aquades, jadi :
0,85 % 100 ml

X = 1, 275 gram

(dilarutkan dengan 150 ml aquades) dibeaker glass 300 ml

X 150 ml
Dipindahkan ke Erlenmayer 250 ml sebanyak 90 ml kemudian ditutup dengan
kapas dan alumunium foil. Setelah itu memipet 9 ml dari Beaker Glass dibawa
ke tabung reaksi sebanyak 6 buah lalu tutup dengan kapas, ikat dengan karet,
dan bungkus dengan alumunium foil ( tabung reaksi 10 ml ).
 Pembuatan NA (Nutrient Agar)
Dibutuhkan 150 ml dari 7 x 20 = 140 ml ( Erlenmayer dan 6 tabung reaksi )
dibulatkan menjadi 150 ml.
28 gram 100 ml

X = 4,2 gram

X 150 ml
 Ditimbang 4,2 gram NA dilarutkan 150 ml aquades di Erlemayer 250 ml, lalu
dipanaskan menggunakan kompor listrik (indikator larut sempurna yaitu
mendidih), setelah itu tutup dengan kapas dan bungkus dengan alumunium foil.

 Penyeterilan Alat dan Bahan (Persiapan)

1) Potong koran lebar kira-kira 3x dari diameter pipet, tinggi melebihi
sedikit dari tinggi pipet ukur / pipet tetes.
2) Putar koran hingga menyelimuti seluruh bagian pipet tetes.
Alat : Pipet steril 10 ml dan 1 ml di suhu 1500 C selama 1 jam incubator.
Bahan : Kumpulkan Erlenmayer dan 6 tabung reaksi 10 ml ( tabung reaksi
yang sudah terikat dan tertutupi oleh alumunium foil) dan NA yang
telah dpanaskan lalu disteril dengan suhu 1210 C selama 15 menit di
Autoclaf. Lalu ditunggu sekama 1 x 24 jam dan media dimasukkan
ke kulkas.

 Pengujian Es
Dipipet Dipipet Dipipet Dipipet Dipipet Dipipet
10 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml

90 ml 9 ml 9 ml 9 ml 9 ml 9 ml 9 ml
NaCl NaCl NaCl NaCl NaCl NaCl NaCl

Sampel Es NaCl 0,85 % KONTROL

(10-1 ) ( 10-2) (10-3) (10-4) (10-5) (10-6)

*Ket : pekerjaan menggunakan lampu bunsen

 
BUNSEN

1) Ambil pipet steril yang dimana mahasiswa telah dilengkapi APD.

2) Buka Koran, lihat atasnya mana yang menghadap angka biar mudah
melihat saat pemipetan.
 3) Pasang ball pipet, lalu buka seluruh koran tanpa memegang bawah
maupun tengah dari pipet steril.
4) Fiksasi menggunakan bunsen dengan cara dilewati.
5) Ambil 10 ml dari sampel fiksasi, kemudian taruh di erlenmayer berisi
NaCl 90 ml.
6) Ambil 1 ml menggunakan pipet tetes 10 ml lalu pipet 10 ml lalu fiksasi
dari NaCl Erlenmayer (10-1) ke tabung reaksi (10-2) dan fiksasi kembali.
7) Lanjutkan seterusnya.
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6
KONTROL

Dipipet Dipipet Dipipet Dipipet Dipipet Dipipet Dipipet

1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1m 1 ml

Petrdish Petrdish Petrdish Petrdish Petrdish Petrdish Petrdish

Tuangkan Nutrient Agar ke Setiap Cawan Petri 20 ml atau sampai garis

pembatas

*Ket : pekerjaan menggunakan lampu Bunsen

 
BUNSEN

(Nb : Panaskan NA yang beku tanpa membuka kapas)

 Pada Saat Memindahkan ke Cawan Petri
1) Ambil pipet steril (1 ml), mahasiswa sudah dilengkapi dengan APD.
2) Buka Koran, lihat atasnya saja dan mana yang menghadap angka biar
mudah terlihat.
3) Pasang ball pipet, lalu nuka seluruh korn tanpa memegang pipet steril
baik bawah maupun tengahnya.
 4) Fiksasi menggunakan Bunsen dengan cara dilewati.
5) Ambil terlebih dahulu di control guna meminimalisir mikroorganisme,
fiksasi lalu teteskan ke cawan petri control.
6) NA yang panas tuang segera menggunakan sarung tangan guna
meminimalisir mikroorganisme yang masuk ke cawan petri. Tuang (20
ml) atau tertutup permukaan cawan petri.
7) Lanjutkan seterusnya dari 10-1 sampai 10-6 dan tuangkan.
8) Lalu dimasukkan ke inkubator dengan suhu 370 C dan ditunggu selama 1
x 24 jam

 Cara Kerja Penghitungan Colony

1) Ambil cawan petri di dalam incubator.
2) Nyalakan alat dan siapkan spidol untuk menghitung.
3) Buka tutup petri cawan lalu hadapkan terbalik pada cahaya colony
counter
4) Hitung atau titikkan kolony menurut spidol.
5) Jika sudah rapikan alat dan bahan serta bersihkan.

V. Hasil dan Pembahasan

Hasil
Kontrol : 0 10-3 :0 10-6 :0
10-1 :5 10-4 :0
10-2 :1 10-5 :2

Dari hasil yang didapatkan bahwa kolony setiap cawan petri 10 -1 sampai
10-6 dibawah 30 dengan nilai kontrolnya memenuhi syarat yaitu 0
(Ket : ≥ 30 ≤ 300) dan (kontrol > 10 tidak digunakan)
 Pembahasan
Adapun pembahasan yang dapat disampaikan dari hasil yaitu es lilin kacang
ijo memenuhi syarat untuk dikonsumsi.

VI. Simpulan
Dari hasil praktikum yang telah dilakukan, sampel es lilin kacang ijo yang
telah kami beli di warung koloninya tidak melebihi dari ≤ 30. Hal ini dtunjang
dari proses pembuatan yang steril dan pengujian yang sesuai prosedur / SOP di
laboratorium.

LEMBAR PENGESAHAN
Denpasar, 30 Maret 2019
Mengetahui Mahasiswa

Iin Indayani, S.KM I Made Dwitya Nata

NIP. 198303282010122004 NIM. P07133217005