Angka Lempeng Total

1. ALAT

1. Cawan petri ( D = 90 mm, tebal = 15 mm ),

2. tabung reaksi,
3. labu Erlenmeyer,
4. gelas ukur,
5. pipet ukur 10 ml dan 1 ml,
6. vortex mixer,
7. laminar air flow cabinet,
8. neraca,
9. oven,
10. autoclave,
11. inkubator

2. BAHAN

Cara pembuatan bahan pengenceran

1. Timbang media ALT untuk volume 200ml, kemudian larutkan dengan aquades didihkan
selama 1 menit di atas hot plate
2. tutup mediadalam Erlenmeyer dengan kapas dan kasa lalu dilapisi kertas dan direkatkan
dengan karet
3. timbang pepton untuk volume 150mL kemudian dilarutkan dengan aquades
4. setelah larut pipet air pepton ke dalam 3 tabung reaksi masing-masing sebanyak 9mL tutup
tabung reaksi dengan kapas dan kasa. Pengencer  yang ada di dalam Erlenmeyer ditutup
dengan sumbat kassa dilapisi kertas diikat dengan karet
5. media dalam Erlenmeyer dan pengencer dalam Erlenmeyer serta tabung reaksi berisi
pengencer disterilkan di autoklaf pada suhu 121 0Celcius selama 15 sampai 20 menit setelah
selesai biarkan tekanan dan suhu autoklaf. kembali ke posisi awal
6. buka autoklaf media dan pengencer siap digunakan

3. CARA KERJA

1. Siapkan sampel serta pengencer

2. Beri label pada cawan Petri steril dan juga pada tabung reaksi yang berisi pengecer air
pepton
3. Pipet 1 ml pengencer dalam Erlenmeyer ke dalam cawan Petri
4. Memakai pipet yang sama, pipet sampel secara aseptik sebanyak 10mL ke dalam
Erlenmeyer steril. Lalu tambahkan secara aseptik 90mL pengencer kocok hingga homogen
5. Pipet 3mL dari pengenceran. Masukkan 1mL ke dalam tabung reaksi yang diberi label lalu
dihomogenkan memakai vortex mixer
6. Pipet media ALT 15-20 ml ke dalam semua cawan Petri secara aseptik
7. Cawan Petri diputar putar secara perlahan untuk menghomogenkan isinya
8. Biarkan medua dalam cawan memadat
9. Semua cawan diinkubasikan di inkubator pada suhu 37°C selama 48 jam dalam posisi cawan
dibalik

Angka Kapang Khamir

1. Angka Lempeng Total berdasarkan MA.85/MIK/06

2. Disiapkan LB 90 ml dalam erlemeyer
3. Ditimbang sampel 10 gram - Dimasukkan sampel kedalam LB 90 ml dan di homogenkan 21
4. Disiapkan 6 buah cawan petri untuk pengenceran 10‾ 1 sampai pengenceran 10‾ 3 (duplo)
5. Dibuat 2 media masing- masing berisi 9 ml LB didalam tabung reaksi untuk pengenceran
10‾ 2 dan 10‾ 3
6. Dipipet 1 ml dari LB 90 ml ke dalam cawan petri pengenceran 10‾ 1 dan 1 ml dipipet
kedalam tabung reaksi pengenceran 10 ‾ 2 kemudian divortex dan dipipet 1 ml dari tabung
reaksi pengenceran 10‾ 2 kedalam cawan petri 10‾ 2 .
7. Dan dari tabung reaksi pengenceran 10‾ 2 dipipet 1 ml kedalam tabung reaksi
pengenceran 10 ‾ 3 kemudian divortex dan dipipet 1 ml kedalam cawan petri 10 ‾ 3
(masing-masing tiap pengencer dibuat duplo).
8. Dan kemudian kedalam cawan petri dituangkan ± 20 ml media MLA (± TTC 1%). Segera
cawan digoyang dan diputar sedemikian rupa sehingga memadat dan cawan petri
diinkubasi pada suhu 35-37ºC selama 24-48 jam dengan posisi terbalik.
9. Diamati setiap 24 jam koloni yang tumbuh dalam cawan petri dan dihitung jumlah
koloninya yang tumbuh pada cawan petri tersebut.