TEKNIK DAN ANALISIS PENGAMBILAN

SAMPEL MAKANAN

NAMA KELOMPOK:
NUR EKI TASARI
MITHA TIARA
WINDA REVITA
DWIKI DARMAWAN
 A.ALAT DAN BAHAN
PENGAMBILAN SAMPEL MAKANAN
A. Alat yang digunakan
O Tabung reaksi/ Testube
O Petridish
O Timbangan kasar
O Sendok porselen/ Spatula
O Gelas kimia
O Inkubator
O Batang pengaduk
O Erlenmeyer
O Termometer
O Pipet Ukur
O Karet hisap
O Autoclave
O Lidi kapas
O Tabung tabung reaksi
O Lampu spiritus
O Plastik bening
 B. Bahan yang digunakan
O Buffer phospat pH 7,2
O PCA
O Aquades
O Alkohol
 B.TEKNIK DAN ANALISIS
PENGAMBILAN SAMPEL MAKANAN
1.Persiapan, perhitungan alat dan bahan (media)
O Hitung alat dan bahan yang akan digunakan
O Jika 3 sampel maka kalikan 3 dari jumlah masing masing
sampel yang dibutuhkan.
O Untuk 3 sampel uji siapkan 18 testube, 21 petridish dan
siapkan buffer phospat pH 7,2 sebanyak 165 mL, lalu
PDA sebanyak 315 mL.
O Siapkan kapas sebagai penutup mulut tabung reaksi
(testube).
O Buat lidi sepanjang tabung reaksi atau + 15cm dan bagian
atas lidi dibalut dengan kapas.
O Untuk 1 alat yang akan diusap, minimal 2 buah lidi
kapasnya.
2.Pembuatan media
O Hitung PCA yang akan ditimbang.
O Timbang PCA sebanyak 7,8 gram dengan
timbangan kasar.
O Ambil PCA dengan bantuan spatula.
O Larutkan dengan aquades sebanyak 350 mL,
ambil aquades dengan gelas ukur.
O Larutkan dalam gelas kimia dan homogenkan
dengan batang pengaduk.
O Pindahkan kedalam erlenmeyer 500 mL sambil
lakukan pembilasan.
O Panaskan media PCA sampai mendidih.
O Biarkan PCA sampai agak dingin.
O Masukkan PCA sebanyak 15 mL pada petridish
berlabel sampel, dan label 10-1-10-5.
O Masukkan buffer phospat pH 7,2 sebanyak 10
mL pada tabung reaksi berlabel sampel dan 9 mL
pada tabung reaksi berlabel 10-1-10-5.
(memasukkannya dengan cara dipipet
menggunakan pipet ukur dengan bantuan karet
hisap)
O Beri kapas pada mulut tabung reaksi, Cara
membuka kapas yaitu dengan menggunakan jari
manis dan jari kelingking.
3.Sterilisasi
Alat yang akan disterilisasi:
O Pipet ukur,
O Tabung reaksi
O Petridish
O Lidi kapas

4. Penanaman sampel
O Hidupkan lampu busen/ lampu spritus.
O Siapkan alat yang sudah disterilkan, susun tabung
reaksi pada raknya.
O Letakkan petridish didepan rak tabung reaksi.
O Ambil pipet ukur dan karet hisap (pegang pipet ukur
pada bagian atas) dan ambil tabung reaksi berlabel
sampel (dengan tangan kiri) lalu buka tutup kapasnya
(dengan jari manis dan kelingking.
O Ambil 1 mL larutan dalam tabung reaksi.
O Flambir mulut tabung reaksi.
O Buka petridish yang berlabel kontrol, buka sedikit
tutupnya dan keluarkan larutan dipipet ukur ke dalam
petridish.
O Buka lidi kapas dari balutan korannya kemudian ambil
piring.
O Bidangi piring dengan plastik bening, yang sebelumnya
plastik tersebut telah disterilkan dengan alkohol.
O Pegang lidi kapas dengan tangan kanan dan tabung
reaksi dengan tanga kiri.
O Masukkan lidi kapas ke dalam tabung reaksi dan peras
ke dinding tabung reaksi lalu flambir.
O Lidi kapas diusap pada permukaan piring sebanyak 3x.
O Ambil tabung reaksi yang berlabel sampel dan
masukkan kapas kedalam tabung reaksi lalu flambir.
(lidi kapas telah dipatahkan terlebih dahulu)
O Ambil lidi kapas ke-2, langsung usapkan pada
permukaan piring sebanyak 3x.
O Lalu ambil tabung reaksi yang berlabel sampel dan
masukkan lidi kapas dimana lidinya telah dipatahkan,
kemudian flambir.
O Lakukan penanaman dan pengenceran.
O Ambil tabung reaksi sampel dan pipet ukur yang steril.
O Buka tutup tabung reaksi dan keluarkan lidi kapas.
O Ambil cairan yang ada dalam tabung reaksi sebanyak
2mL dengan pipet ukur.
O 1mL masukkan kedalam petridish yang berlabel
sampeldan tutup, dan 1mL lagi masukkan kedalam tabung
reaksi yang berlabel 10-1.
O Homogenkan dengan cara sedot larutan dengan pipet ukur
lalu lepaskan. Lakukan sebanyak 3x.
O Pada tabung reaksi yang sama, pipet 2mL lalu flambir dan
tutup tabung reaksi.
O 1mL masukkan kedalam petridish yang berlabel 10 -1 dan
1mL lagi pada tabung reaksi yang berlabel 10-2.
O Lakukan perlakuan diatas pada petridish dan tabung
reaksi selanjutnya (sampai 10-5)
O Masukkan media agar kedalam petridish, masukkan
dalam suhu 45oC (dalam kondisi hangat). Cara
memasukkannya : buka petridish secukupnya dan tuang
15mL agar PCA (15mL=memenuhi permukaan petridish).
O Flambir.
O Homogenkan dengan cara diputar searah jarum
jam,
O Biarkan PCA beku.
O Inkubasi di inkubator dengan suhu 35-37oC
selama 1-2x24 jam -(petridish dalam keadaan
terbalik di inkubator).
O Pada sendok dan alat makan lain, usap alatnya
sama dengan usap alat piring. Yang membedakan
hanya pada bidang usapannya.
5. Pembacaan hasil / perhitungan
O Dihitung jumlah koloni yang tumbuh pada
petridish, koloni yang bergabung menjadi satu atau
yang membentuk satu deratan yang terlihat sebagai
garis tebal atau jumlah koloni meragukan dihitung
sebagai koloni kuman.
O Bila jumlah koloni pada petridish kontrol lebih dari
10 maka harus dihitung ulang, karna sterilisasi
dianggap kurang baik.
O Dilakukan perhitungan hanya pada petridish yang
menghasilkan jumlah antara 30- 300 dan bila
koloni pada petridish kontrol lebih kecil dari 10.
Jumlah koloni pada masing-masing petridish ini
harus lebih dahulu dikurangi dengan petridish
kontrol.
TERIMA KASIH 