PROSEDUR PEMBUATAN MEDIA CAIR EC.

BROTH
I. ALAT
1. Erlenmeyer 1000 ml
2. Erlenmeyer 500 ml
3. Batang Pengaduk
4. Timbangan digital
5. Kompor listrik
6. Tabung ukuran 1,8 x15 cm
7. Tabung ukuran 1,5 x 15 cm
8. Pipet volume 10 ml
9. Tabung durham
10. Autoclave
11. Rak tabung
II. BAHAN
1. Media EC.Broth
2. Aquadest
3. Kapas
4. Label

 Pembuatan media cair DS

 Timbang EC Broth sebanyak 74 gr.
 Masukkan kedalam Erlenmeyer 1000 ml.
 Tambahkan aquadest 1000 ml.
 Aduk rata dan panaskan diatas kompor listrik hingga larut (cairan
kuning bening), lalu dinginkan.
 Pipet larutan DS tersebut ke dalam tabung reaksi ukuran 1,8 x15 cm
yang sudah tabung durham, masing-masing 10 ml.
 Tutup semua tabung reaksi dengan kapas.
 Sterilkan media dengan Autoclave suhu 121˚C selama 15 menit.
 Setelah selesai proses sterilisasi, dinginkan dan simpan dalam suhu
kulkas.
 Pembuatan media cair SS
 Timbang EC Broth sebanyak 37 gr
 Masukkan kedalam Erlenmeyer 1000 ml
 Tambahkan aquadest 1000 ml
 Aduk rata dan panaskan diatas kompor listrik hingga larut (cairan
kuning bening),lalu dinginkan
 Pipet larutan SS tersebut ke dalam tabung reaksi ukuran 1,5 x 15 cm
yang sudah tabung durham, masing-masing 10 ml.
 Tutup semua tabung reaksi dengan kapas
 Sterilkan media dengan Autoclave suhu 121˚C selama 15 menit.
 Setelah selesai proses sterilisasi, dinginkan dan simpan dalam suhu
kulkas.
PROSEDUR OPERASIONAL AUTOCLAVE
 Isi autoclave dengan air sampai tanda batas
 Masukkan bahan-bahan yang akan disterilkan
 Tutup autoclave dengan rapat
 Buka katup udara dan nyalakan power
 Tunggu sampai air dalam autoclave mendidih (± 1 jam), lalu tutup katup
udara.
 Suhu dan tekanan autoclave akan perlahan-lahan naik.
 Pada saat suhu mencapai 121˚C, tahan tekanan selama 15 menit dengan cara
membuka dan menutup katup udara
 Setelah 15 menit, buka katup udara dan matikan power.
 Biarkan tekanan turun sampai tanda 0, setelah itu autoclave baru bisa
dibuka.
 Keluarkan bahan-bahan atau media yang disterilkan.
 Lalu simpan dalam kulkas.
 PROSEDUR PEMERIKSAAN COLIFORM (MPN)
MENGGUNAKAN MEDIA DS DAN SS

1. SAMPEL PEMERIKSAAN : AIR MINUM (DAM & PDAM)

 Siapkan media DS pada suhu ruang sebanyak 5 tabung dan SS 2 tabung

untuk tiap sampel, susun pada rak tabung (ragam 5 1 1)
 Tulis nomor/kode sampel pada label dan tempelkan pada tutup kapas.
 Dengan menggunakan pipet ukur steril 10 ml, isap masing-masing 10 ml
sampel dan masukkan ke media DS.
 Isap 1 ml sampel dan masukkan ke tabung SS (hanya 1 tabung)
 Isap 0,1 ml sampel dan masukkan ke tabung SS berikutnya (hanya 1
tabung).
 Inkubasi di incubator pada suhu 37 ˚C selama 2 x 24 jam.
 Setelah 2 x 24 jam, baca hasil pemeriksaan dan tulis berapa jumlah
tabung yang positif.
 Tabung dinyatakan positif apabila media tampak keruh dan ada gas pada
tabung durham.
 Index MPN per 100 ml sampel bisa dilihat pada tabel MPN ragam 5 1 1
menurut formula Thomas

2. SAMPEL PEMERIKSAAN : AIR BERSIH (SGL, SPT, AIR

SUNGAI)

 Siapkan media DS pada suhu ruang sebanyak 3 tabung dan SS 6 tabung

untuk tiap sampel, susun pada rak tabung (ragam 3 3 3)
 Tulis nomor/kode sampel pada label dan tempelkan pada tutup kapas.
 Dengan menggunakan pipet ukur steril 10 ml, isap masing-masing 10 ml
sampel dan masukkan ke media DS.
 Isap 1 ml sampel dan masukkan masing-masing ke tabung SS (hanya 3
tabung)
 Isap 0,1 ml sampel dan masukkan masing-masing ke tabung SS (hanya 3
tabung)
 Inkubasi di incubator pada suhu 37 ˚C selama 2 x 24 jam.
 Setelah 2 x 24 jam, baca hasil pemeriksaan dan tulis berapa jumlah
tabung yang positif.
 Tabung dinyatakan positif apabila media tampak keruh dan ada gas pada
tabung durham.
 Index MPN per 100 ml sampel bisa dilihat pada tabel MPN ragam 3 3 3
menurut formula Thomas