Kris Cahyo Mulyatno ITD UA

Pewarnaan Hematoxilin Eosin (HE)

Pewarnaan ini digunakan untuk mewarnai jaringan. Prinsip: inti yang bersifat asam akan menarik zat/ larutan yang bersifat basa sehingga akan berwarna biru. Sitoplasma bersifat basa akan menarik zat /larutan yang bersifat asam sehingga berwarna merah. Pada pewarnaan HE, ada beberapa tahapan yaitu 1. Deparafinisasi Tujuan: untuk menghilangkan/ melarutkan parafin yang terdapat pada jaringan. Zat: xylol 2. Rehidrasi Tujuan: untuk memasukkan air ke dalam jaringan. Air akan mengisi rongga-rongga jaringan yang kosong. Zat: alkohol absolut, alkohol 90 %, alkohol 80 % 3. Pewarnaan I Tujuan: untuk memberi warna pada inti dan sitoplasma pada jaringan Zat: hematoxylin 4. Differensiasi Tujuan: untuk mengurangi warna biru pada inti dan menghilangkan warna bitu pada sitoplasma Zat: HCl 0,6% 5. Blueing

Kris Cahyo Mulyatno ITD UA

Tujuan: untuk memperjelas warna biru pada inti sel Zat: lithium carbonat 0,5% 6. Pewarnaan II Tujuan: untuk memberi warna merah pada sitoplasma sel Zat: eosin 7. Dehidrasi Tujuan: untuk menghilangkan air dari jaringan Zat: Alkohol 80 %, Alkohol 90 %, Alkohol 100 % (absolut) 8. Mounting Tujuan: untuk mengawetkan jaringan yang telah diwarnai Zat: entellan/ canada balsem Jaringan yang akan diwarnai HE, sebelumnya telah mengalami Processing Jaringan dan dipotong dengan menggunakan mikotrom. Ketebalan jaringan antara 4-6 m. Jaringan yang telah dipotong sesuai ukuran dilekatkan pada objek glass. Berikut langkah kerja sebelum pewarnaan HE (persiapan jaringan): 1. Siapkan alat dan bahan yang diperlukan 2. Keluarkan jaringan dari blok/kotak parafin 3. Potong jaringan dengan alat mikotrom dengan ketebalan antara 4-6 m 4. Ambil 1 slice potongan jaringan, masukkan ke dalam waterbath ( 30-40 C), untuk menghilangkan kerutan pada potongan dan mencairkan parafin. 5. Tempelkan dengan hati-hati potongan jaringan tersebut pada objek glass. 6. Teteskan 1-2 tetes albumin di atas potongan jaringan, lalu dengan menggunakan pinset, rapikan potongan (menghilangkan kerutan ) dengan

Kris Cahyo Mulyatno ITD UA

hati-hati, jangan sampai sobek. 7. Setelah itu, panaskan objek glass yang telah ditempeli jaringan dengan oven pada suhu 30-40 C, bila tidak ada oven, gunakan hotplate. Namun objak glass hanya di gosok-gosokkan agar tidak pecah. 8. Lakukan pewarnaan HE. No 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 TAHAPAN Deparafinisasi Rehidrasi ZAT WAKTU Xylol I 2-3 celup Xylol II 2-3 celup Alkohol 100 % 10 celup Alkohol 90% 10 celup Alkohol 80 % 10 celup AIR 1 menit Hematoxylin 1-5 menit AIR 1 menit HCl 0,6 % 1-2 celup AIR 1 menit Lithium Karbonat 0,5 % 3 menit AIR 1 menit Alkohol 95 % 1-2 celup Eosin 3 menit Alkohol 80% 10 celup Alkohol 90% 10 celup Alkohol 100% 10 celup Xylol I 2-3 celup Xylol II 2-3 celup Entelan 1-2 tetes

Pewarnaan Differensiasi Blueing

Pewarnaan Dehidrasi

Mounting

9. Setelah di beri entelan, tutup dengan cover glass dengan hati-hati agar tidak terdapat gelembung. 10. Jaringan yang telah diwarnai, akan awet lebih dari 5 tahun.