MIGRASI METODE HPLC

KE UPLC

UKURAN PARTIKEL KUNCI PERKEMBANGAN LC

HPLC VS UPLC
(kecepatan, sensitivitas, resolusi)

Mengapa konversi HPLC ke

UPLC dibutuhkan ???

1. Run time pendek tetapi resolusi

dapat dipertahankan (bahkan
ditingkatkan)

2. TIDAK ADA

HAL YANG HARUS DIPERHATIKAN

DALAM KONVERSI HPLC KE UPLC
Pemilihan kolom UPLC
- sifat kimia partikel packing kolom
- dimensi kolom
konversi volume inj. Sampel
Konversi flow rate

Pemilihan kolom berdasarkan sifat kimia

Berdasarkan dimensi kolom

Diameter :
- umumnya 2.1 mm
Panjang kolom :
- Jika tujuannya kecepatan running : mulai
dari 50 mm
- Jika tujuan utama resolusi : mulai dari
100 mm

Menyesuaikan volume
injeksi

Mengatur Flow Rate

1. konversi flow rate yang
proporsional berdasarkan luas
penampang kolom
2. konversi tabel gradien
3. konversi flow rate untuk ukuran
partikel lebih kecil

Tabel Profil Gradient pada

HPLC

1. konversi flow rate berdasarkan

luas penampang kolom

2. konversi tabel gradien

hitung durasi gradien dalam satuan
colom volume (cv)
Hitung colom volume tiap segmen
Hitung waktu yang dibutuhkan untuk
mencapai colom volume tiap segmen

1. hitung durasi gradien

Optimasi Flow Rate

0.6 ml/menit untuk molekul analit
yang kecil
rata2 600 dalton
0.1 ml/menit untuk molekul analit
besar
contohnya peptida2 ( >2000 dalton)

Konversi gradien step time

Tabel Profil Gradien setelah optimasi

Sistem dan Hasil original

Sistem dan Hasil UPLC

Resolusi dan
sensitivitas
tetap sama
namun
runtime UPLC
lebih cepat

Aqcuity Calculator

Calculator hplc (browser)