Analisis Histopatologi

Histopatologi adalah cabang biologi yang mempelajari kondisi dan fungsi jaringan dalam
hubungannya dengan penyakit.Histopatologi sangat penting dalam kaitan dengan diagnosis
penyakit karena salah satu pertimbangan dalam penegakan diagnosis adalah melalui hasil
pengamatan terhadap jaringan yang diduga terganggu.
Histopatologi dapat dilakukan dengan mengambil sampel jaringan (misalnya seperti
dalam penentuan kanker payudara) atau dengan mengamati jaringan setelah kematian
terjadi.Dengan membandingkan kondisi jaringan sehat terhadap jaringan sampel dapat diketahui
apakah suatu penyakit yang diduga benar-benar menyerang atau tidak.Ilmu ini dipelajari dalam
semua bidang patologi, baik manusia, hewan, maupun tumbuhan.
Tinjauan Umum Kerusakan Jaringan/Organ akibat Bahan Toksik
Hiperplasia
Hiperplasia (atau "hypergenesis") adalah istilah umum yang mengacu pada
perkembangan sel-sel dalam suatu organ atau jaringan (misalnya terus-menerus membagi
sel).Hyperplasia merupakan penambahan ukuran organ/ jaringan yang terjadi akibat rangsang
tertentu, apabila rangsang hilang dapat normal kembali.
Hiperplasia dapat mengakibatkan pembesaran organ, pembentukan tumor jinak, atau
mungkin hanya terlihat pada analisis histologis dengan mikroskop. Hiperplasia berbeda dari
hipertrofi dalam bahwa perubahan adaptif hipertrofi sel adalah peningkatan ukuran sel,
sedangkan hiperplasia meliputi peningkatan jumlah sel.

Gambar 1. Hyperplasia
(sumber : http://www.uams.edu)

Hiperplasia dianggap fisiologis (normal) respon terhadap rangsangan tertentu, dan sel-sel
pertumbuhan yang hiperplastik tetap tunduk pada regulasi normal mekanisme kontrol.Hal ini
berlawanan dengan neoplasia (proses kanker dan beberapa tumor jinak), di mana sel-sel yang
abnormal secara genetika berkembang biak dalam cara non-fisiologis.
Hipoplasia
Hipoplasia merupakan efek kegagalan/pengurangan proses pertumbuhan berupa
penyusutan ukuran (morfologi) organ/ jaringan setelah proses pemaparan gangguan. Hypoplasia
adalah pengembangan suatu jaringan atau organ.Meskipun istilah ini tidak selalu digunakan
secara tepat, dengan benar mengacu pada suatu yang tidak memadai atau di bawah jumlah
normal sel. Hypoplasia mirip dengan aplasia, tetapi tidak terlalu parah.Secara teknis berlawanan
dengan hiperplasia (pengembangan/pertambahan sel).Hipoplasia adalah suatu kondisi bawaan,
sementara hiperplasia umumnya mengacu pada pertumbuhan sel yang berlebihan di kemudian
hari.
Necrosis
Nekrosis (dari bahasa Yunani , "mati") adalah kematian dini sel dan jaringan
hidup.Nekrosis ini disebabkan oleh faktor eksternal, seperti infeksi, racun atau trauma.Hal ini
berbeda dengan apoptosis, yang merupakan penyebab alami selular kematian.Walaupun
apoptosis sering memberikan efek yang menguntungkan bagi organisme, nekrosis hampir selalu
merugikan, dan dapat berakibat fatal.
Sel-sel yang mati karena nekrosis biasanya tidak mengirimkan sinyal kimia yang sama
untuk sistem kekebalan sel-sel yang mengalami apoptosis. Hal ini untuk mencegah phagocytes
terdekat dari lokasi dan menyelimuti sel-sel mati, yang mengarah ke terbentuknya sel jaringan
yang mati dan puing-puing pada atau di dekat lokasi kematian sel.
Nekrosis sel dapat didorong oleh sejumlah sumber-sumber eksternal, termasuk cedera,
infeksi, kanker, infark, racun, dan peradangan.Sebagai contoh, suatu infark (penyumbatan aliran
darah ke jaringan otot) menyebabkan nekrosis dari jaringan otot karena kekurangan oksigen ke
sel yang terkena dampak, seperti terjadi pada infark miokard - serangan jantung.Laba-laba
tertentu (coklat pertapa) dan ular (ular, Bothrops) venoms dapat menyebabkan nekrosis dari
jaringan di dekat luka gigitan.

Secara khusus, mengandung sel-sel kecil yang disebut organel lisosom, yang mampu
mencerna bahan selular. Kerusakan pada membran lisosom dapat memicu pelepasan enzim,
menghancurkan bagian-bagian lain dari sel. Lebih buruk lagi, ketika enzim ini dilepaskan dari
non-sel mati, mereka dapat memicu reaksi berantai lebih lanjut kematian sel. Jika jumlah yang
cukup susunan jaringan necrosis itu disebut gangren. Perawatan yang tepat dan perawatan luka
atau gigitan binatang memainkan peran kunci dalam mencegah jenis ini nekrosis meluas.Selama
biopsi bedah, nekrosis ini reaksi berantai dihentikan oleh fiksasi atau beku.
Nekrosis biasanya dimulai dengan pembengkakan sel, kromatin pencernaan, gangguan
membran plasma dan membran organel.Nekrosis dicirikan oleh DNA luas hidrolisis, vacuolation
dari retikulum endoplasma, organel mental, dan lisis sel. Pelepasan konten intraselular setelah
pecah membran plasma adalah penyebab peradangan pada nekrosis.

Atrofia
A. Pengertian Atrofia
Kata berasal dari bahasa Yunani Jatropha atrofi yang berarti "tanpa nutrisi." Dalam istilah
biologis merupakan penurunan signifikan dalam ukuran sel dan organ di mana hal ini terjadi,
karena hilangnya massa sel. Atrofik menunjukkan penurunan fungsi sel tetapi tidak mati.
Athropy merupakan suatu keadaaan yang tidak wajar dimana jumlah dan volume sel berada di
bawah normal dan garis luar sel menjadi tidak dapat dibedakan bahkan sering kali nucleus
menjadi kecil bahkan hilang sama sekali sehingga dapat mengakibatkan kematian sel (Takashima
dan Hibiya, 1995).
Metabolisme sel yang sempurna tidak hanya tergantung pada kontribusi yang efektif
nutrisi, tetapi juga penggunaan yang benar dari mereka, ini hanya mungkin bila sel-sel hidup
dalam lingkungan yang sesuai untuk struktur morfologis dan fungsional. Struktur morfologis sel
dikondisikan oleh lingkungan di mana mereka hidup, itulah mengapa beberapa bentuk sel-sel
dalam tubuh kita bereaksi terhadap masalah hidup adaptasi untuk kondisi-kondisi eksternal
diferensiasi sel didefinisikan dengan baik merupakan manifestasi luar dari suatu adaptasi, yang
terkumpul selama jutaan generasi.

Semua variasi dari karakter morfologi sel, dapat mempengaruhi sel-sel tunggal atau
kelompok mereka, maka modifikasi dari jaringan penuh. Semua stimulus yang dapat bekerja
pada sebuah rangsangan sel benar-benar fungsional ketika mereka melampaui batas-batas
fisiologis dapat melukai sel untuk membalikkan proses kehidupan, atau menyebabkan perubahan
yang signifikan regresif.
B. Jenis Atrofia
Penampilan mikroskopik tiga jenis utama atrofi: atrofi sederhana, atrofi numerik dan
degeneratif atrofi. Sederhana atrofi adalah penurunan volume komponen seluler yang mengarah
pada penyusutan atau menyusut dari jaringan dan organ.Atrophia lebih umum, lebih
terdiferensiasi mempengaruhi sel. Hal ini dapat diamati selama berkepanjangan cepat di hampir
semua jaringan tubuh dan terutama di jaringan otot.
Atrophia numerik terjadi ketika hilangnya unsur-unsur selular menyebabkan penurunan
volume organ: pengurangan volumetrik progresif dan proporsional dengan jumlah sel dan
jaringan normal mempengaruhi unsur-unsur labil. Dalam atrophia degeneratif dapat dilihat
perubahan besar ke sitoplasma dan inti sel-sel jaringan dan organ. Proses ini dapat menyebabkan
nekrosis. Dalam semua kasus atrofi, sitoplasma adalah yang paling terpengaruh hampir selalu
merupakan pengurangan kuantitatif yang kedua, sampai titik itu, setelah atrofik jaringan di
bawah mikroskop, bisa dibedakan diskret densifikasi selular yang disebabkan oleh penurunan
volume sel seragam.
Perubahan-perubahan ini disertai dengan perubahan mendalam dalam sitoplasma:
kekeruhan, adanya butiran pigmen (pigmentasi aus) dan numerik penurunan beberapa organel
seperti mitokondria.
C. Pseudohypertrophy
Dalam beberapa kasus di mana sel-sel spesifik organ dalam keadaan atrofi, disertai
dengan peningkatan volume interstisial jaringan.Pada otot lumpuh oleh cedera pada sistem saraf
dapat dilihat, kadang-kadang sebuah kotak pseudohypertrophy, karena peningkatan jaringan
adiposa atrofik otot sela antara kumpulan.Otot-otot yang kuat dan menebal, tetapi kenyataannya
adalah tidak memiliki kekuatan dan kelembutan yang kurang matang.

D. Non-patologis Atrofia
Pertimbangan dari semua atrofi dan patologi tubuh di mana mereka terjadi tidak dapat
dilakukan dalam beberapa kasus ada penurunan volume dan jumlah sel dalam suatu jaringan atau
organ. Pengaturan atrofikmengakibatkan hilangnya organ yang terpengaruh, hal ini karena telah
dilakukan adaptasi fungsional. Seperti tercatat di awal, struktur dan morfologi fungsional dari
sel-sel berhubungan erat dengan lingkungan dimana mereka tinggal, jadi jika sel-sel tubuh
berhenti menyediakan sebuah kegunaan, maka sel ini akan mati.
E. Patologis Atrofia
Tergantung pada penyebab yang menghasilkan mereka dapat disajikan sebagai berikut:
* Atropi kekurangan pangan
* Atropi dari kegagalan peredaran
* Atropi oleh faktor fisik
* Atrophies fungsional
Nutrisi yang tidak mencukupi mengakibatkan kerugian secara keseluruhan berat badan
karena atrofi.Terjadi penurunan jumlah sel, terutama volume sel. Kerugian yang proporsional
sama dialami oleh semua organ. Jenis atrofi, serta diproduksi oleh kekurangan makanan juga
dapat disebabkan oleh penyakit yang mempengaruhi metabolisme tubuh mekanisme, atau
kesalahan pencernaan atau memperlambat metabolisme.Terdapat masalah-masalah di mana
kegagalan peredaran darah yang disebabkan oleh trombosis dari cabang arteri atau dengan
kompresi arteri, atau ligasi, dapat mengakibatkan berhentinya pertumbuhan jaringan di daerah
yang dipasok oleh arteri yang terluka, namun hal ini akan sembuh jika aliran darah segera pulih
Pembuatan Preparat Histologi
Analisis histologis merupakan teknik pengamatan sel serta jaringan tubuh ikan yang
sering digunakan.Analisis ini bertujuan untuk menghasilkan sediaan histologis yang dapat
diwarnai dengan pewarna khusus sehingga dapat diamati secara langsung dengan menggunakan
mikroskop cahaya. Tahapan analisis histologis pada ikan meliputi :
1. Pengambilan jaringan ikan.

Pada sampel ikan yang masih kecil dapat langsung fiksasi tanpa dipotong. Pada ikan yang
berukuran besar diambil jaringan tertentu yang akan diamati dan dimasukkan ke dalam
larutan fiksasi.
2. Fiksasi.
Larva atau ikan berukukan kecil difiksasi dengan larutan PFA 4% dalam medium Phosphate
buffered saline (PBS). Sampel dimasukkan ke dalam botol yang sudah berisi larutan fiksatif
dengan perbandingan antara sampel dengan larutan adalah 1:20. kemudian disimpan selama
24 jam dalam refrigerator. Setelah 24 jam kemudian sampel diambil dan dicuci dengan PBS
selama 5 menit sebanyak 3 kali untuk menghilangkan sisa-sisa PFA sebelum ke tahap
selanjutnya. Ikan yang berukuran relatif besar difiksasi dengan larutan Bouins selama 1
minggu dalam suhu kamar. Selanjutnya sampel dicuci dalam larutan alkohol 70% hingga
warna kuning hilang, kemudian sampel disimpan dalam alkohol 70% hingga pemrosesan
lebih lanjut. Sampel yang berukuran besar harus melaui prosedur dekalsifikasi dalam larutan 5
% trichloroacetid acid selama 24 jam untuk melunakkan struktur tulangnya.
3. Dehidrasi.
Sampel yang sudah difiksasi kemudian dimasukkan berturut-turut ke dalam larutan sebagai
berikut: Alkohol 70%, Alkohol 80%, Alkohol 90%, Alkohol Absolut I, Alkohol Absolut II,
masing-masing selama 45 menit, kemudian dilanjutkan ke proses penjernihan.
4. Penjernihan (clearing).
Sampel dari proses dehidrasi dimasukkan ke dalam larutan alkohol:xylol 1:1 dan 1:3 selama
30 menit. kemudian Xylol I dan Xylol II masing-masing selama 30 menit.
5. Infiltrasi.
Sampel yang sudah dijernihkan dalam xylol diinfiltrasi secara bertahap dalam campuran
xylol:paraffin 3:1; 1:1 dan 1:3 masing-masing selama 30 menit, dilanjutkan dengan paraffin
murni sebanyak 2x60 menit. Seluruh rangkaian infiltrasi dilakukan dalam inkubator pada
temperatur 58-60 0C.
6. Penanaman sampel (Embedding).
Parafin dicairkan di dalam inkubator pada temperatur 60 0C. Cetakan berukuran 2 x 2 x 2 cm
diisi dengan paraffin cair, bagian bawah cetakan didinginkan di atas blok es sehingga paraffin
pada dasar cetakan agak memadat. Sampel diletakkan di atas paraffin yang agak memadat
tersebut sesuai dengan orientasi irisan yang direncanakan, kemudian ditempelkan holder yang
telah diberi label sesuai dengan kode sampel. Cetakan paraffin selanjutnya dibiarkan dalam
temperatur ruang agar parafinnya memadat.
7. Pengirisan (Sectioning) dan peletakan pada gelas obyek.

Water bath disiapkan dengan suhu 40-50 0C dan disiapkan wadah berisi air dingin. Kemudian
blok yang sudah didinginkan dipasang di mikrotom yang sudah diatur pada ketebalan 4-7 m.
Putaran mikrotom dibuat konstan sampai blok yang berisi sampel jaringan teriris. Setelah itu
irisan dipindahkan ke dalam baskom yang berisi air dingin, kemudian ditempelkan pada gelas
obyek yang sudah dilapisi gelatin dan diberi kode sama dengan blok yang di iris. Selanjutnya
dicelupkan ke dalam air hangat dalam water bath agar irisan mengembang.Kemudian
ditiriskan untuk dilakukan pewarnaan.