MAKALAH

ANALISIS KUALITATIF DAN KUANTITATIF METANIL YELLOW

PADA MIE KUNING BASAH DI PASAR DEMANGAN DENGAN
METODE KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DAN
SPEKTROFOTOMETRI UV/VIS

Oleh:
ASYROF SYAHIROH
11613148

PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS ISLAM INDONESIA
YOGYAKARTA
NOVEMBER 2015

DAFTAR ISI
DAFTAR ISI.......................................................................................................

DAFTAR GAMBAR..........................................................................................

ii

DAFTAR TABEL................................................................................................

iii

DAFTAR RUMUS..............................................................................................

iv

DAFTAR LAMPIRAN.......................................................................................

INTISARI............................................................................................................

vi

ABSTRACT..........................................................................................................

vii

BAB 1 PENDAHULUAN.................................................................................

1.1 Latar Belakang Masalah................................................................................

1.2 Perumusan Masalah......................................................................................
1.3 Tujuan Penelitian...........................................................................................
1.4 Manfaat Penelitian........................................................................................

1
3
3
4

BAB II STUDI PUSTAKA...............................................................................

2.1 Tinjauan Pustaka..........................................................................................

2.1.1 Pangan.................................................................................................

2.1.2 Bahan Tambahan Pangan....................................................................

2.1.3 Pewarna makanan...............................................................................

2.1.4 Metanil yellow....................................................................................

10

2.1.5 Mie kuning basah................................................................................

12

2.1.6 Spektrofotometri UV-VIS...................................................................

14

2.1.7 Validasi metode...................................................................................

16

2.2 Landasan Teori.............................................................................................

21

2.3 Hipotesis.......................................................................................................

22

BAB III METODE PENELITIAN..................................................................

23

3.1 Bahan dan Alat.............................................................................................

23

3.1.1 Bahan..................................................................................................

23

3.1.2 Alat......................................................................................................

23

3.2 Cara Penelitian.............................................................................................

23

3.2.1 Pembuatan larutan metanil yellow 500 ppm.......................................

23

3.2.2 Penentuan panjang gelombang metanil yellow...................................

23

3.2.3 Pembuatan kurva baku metanil yellow...............................................

24

3.2.4 Validasi metode...................................................................................

24

3.2.4.1 Menghitung linieritas..............................................................

24

3.2.4.2 Penetapan batas deteksi dan kuantifikasi................................

24

3.2.4.3 Presisi......................................................................................

25

3.2.4.4 Akurasi....................................................................................

25

3.2.5 Lokasi pengambilan sampel................................................................

26

3.2.6 Populasi dan sampel penelitian ..........................................................

26

3.2.6.1 Populasi..................................................................................

26

3.2.6.2 Sampel penelitian...................................................................

26

3.2.7 Analisis kualitatif dengan KLT menggunakan benang wol................

27

3.2.7.1 Preparasi larutan pengembang................................................

27

3.2.7.2 Preparasi plat kromatografi lapis tipis....................................

27

3.2.7.3 Preparasi sampel uji mie kuning basah ..................................

27

3.2.8 Analisis kuantitatif dengan spektrofotometer UV-VIS.......................

28

3.2.8.1 Preparasi uji sampel mie kuning basah ..................................

28

3.3 Analisis Hasil...............................................................................................

29

3.4 Skema Penelitian..........................................................................................

30

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN...........................................................

31

4.1 Validasi metode............................................................................................

32

4.1.1 Linieritas.............................................................................................

32

4.1.2 Penetapan batas deteksi dan batas kuantifikasi...................................

33

4.1.3 Presisi..................................................................................................

33

4.1.4 Akurasi................................................................................................

34

4.2 Analisis kualtitatif dengan kromatografi lapis tipis menggunakan

benang wol...................................................................................................

35

4.3 Analisis kuantitatif penetapan kadar metanil yellow...................................

37

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN............................................................

39

5.1 Kesimpulan..................................................................................................

39

5.2 Saran.............................................................................................................

40

DAFTAR PUSTAKA.........................................................................................

41

LAMPIRAN.......................................................................................................

43

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1

Struktur kimia metanil yellow....................................................

11

Gambar 2.2

Instrument spektrofotometer UV/VIS........................................

15

Gambar 3.1 Alur penelitian............................................................................

30

Gambar 4.1

Panjang gelombang metanil yellow............................................

31

Gambar 4.2

Grafik kurva baku mtanil yellow................................................

32

Gambar 4.3

Hasil Elusi Mie Kuning Basah...................................................

36

DAFTAR TABEL

Tabel 2.1

Jenis pewarna sintesis yang diizinkan di Indonesia.........................

Tabel 2.2

Jenis pewarna sintetis yang berbahaya............................................

10

Tabel 2.3

Monografi bahan metanil yellow.....................................................

11

Tabel 2.4

Kriteria uji mie basah.......................................................................

13

Tabel 2.5

Spektrum panjang gelombang spektrofotometer.............................

14

Tabel 2.6

Parameter validasi yang diperiksa untuk tiap kategori....................

17

Tabel 2.7

Kriteria penerimaan akurasi menurut AOAC..................................

18

Tabel 2.8

Kriteria penerimaan presisi menurut AOAC...................................

19

Tabel 4.1

Batas deteksi uji spektrofotometer...................................................

33

Tabel 4.2

Hasil dan perhitungan presisi...........................................................

34

Tabel 4.3

Hasil dan perhitungan akurasi.........................................................

35

Tabel 4.4

Nilai Rf dan hRf kromatografi.........................................................

37

Tabel 4.5

Kadar metanil yellow dalam mie kuning basah...............................

37

DAFTAR RUMUS

Rumus 2.1

Recovery........................................................................................

19

Rumus 2.2

SD dan RSD .................................................................................

19

Rumus 2.3

LOD dan LOQ .............................................................................

20

Rumus 3.4

Rf..................................................................................................

28

BAB 1
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang Masalah
Di zaman modern ini banyak terjadi penyalahgunaan zat tambahan pangan
yang dilakukan oleh para produsen makanan yang bertujuan untuk menarik perhatian
konsumen. Bahan tambahan pangan adalah bahan yang biasanya bukan merupakan
komponen khas makanan, mempunyai atau tidak mempunyai gizi, yang sengaja
ditambahkan ke dalam makanan dengan tujuan pada saat pembuatan, pengolahan,
penyiapan, perlakuan, pengepakan, pengemasan dan penyimpanan, makanan
diharapkan dalam kondisi baik(1).
Pewarna adalah salah satu bahan tambahan pangan. Pewarna makanan yang
baik adalah pewarna yang tidak membahayakan bagi tubuh dan yang diizinkan
tercampur pada makanan seperti pewarna alami dan pewarna kimia khusus untuk
makanan yang tidak melebihi batas penggunaannya. Pewarna yang tidak
diperbolehkan adalah pewarna yang dapat membahayakan bagi tubuh dan yang tidak
diizinkan tercampur pada makanan seperti pewarna sintetis pabrik yang biasanya
digunakan sebagai pewarna baju ataupun kayu. Semakin banyak makanan yang
beredar dengan berbagai warna, produsen yang tidak bertanggung jawab biasanya
lebih

memilih

untuk menggunakan

bahan pewarna

sintetis karena

lebih

menguntungkan untuk produksi makanannya tanpa memperhatikan bahaya yang

ditimbulkan bagi konsumen. Salah satu contoh pewarna sintetis berbahaya adalah
metanil yellow(1). Permenkes No. 239/Menkes/Per/V/85 tentang zat warna tertentu
yang dinyatakan sebagai bahan berbahaya menyatakan bahwa, metanil yellow masuk
dalam bahan tambahan pangan yang dilarang tercampur dalam suatu makanan(2).
Metanil yellow merupakan zat pewarna industri tekstil yang pada umumnya
menggunakan zat anorganik. Badan Pengawas Obat dan Makanan menyatakan bahwa
metanil yellow sering disalahgunakan pada produk makanan dan minuman industri
rumah tangga seperti kerupuk, sirup, minuman kemasan, tahu dan mie kuning
basah(3,4).

Mie kuning basah merupakan makanan yang banyak digemari oleh anak anak
dan orang dewasa. Mie kuning basah biasanya digunakan untuk pelengkap makanan
dan untuk menambah variasi makanan. Metanil yellow yang berwarna kuning sering
disalahgunakan agar warna mie kuning basah terlihat lebih menarik (5). Kadar metanil
yellow yang rendah dapat menimbulkan efek toksik apabila masuk ke dalam tubuh
manusia seperti mual, muntah, sakit perut, diare, demam, dan lemah, dalam jumlah
kadar yang tinggi efek toksik dapat dijumpai pada berbagai organ, antara lain hati,
ginjal, paru-paru, jantung, otak, limpa, dan jaringan otot bahkan menyebabkan tumor
dan kanker maka perlu diketahui nilai kadarnya(6).
Analisis metanil yellow perlu dilakukan untuk menjamin kemanan. Analisis
metanil yellow dapat dilakukan secara kualitatif dan kuantitatif. Analisis kualitatif
dapat dilakukan dengan metode kromatografi kertas dan kromatografi lapis tipis (7).
Analisis kuantitatif dapat dilakukan dengan cara spektrofotometri, Kromatografi
Lapis Tipis (KLT) densitometri dan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT).
Metode tersebut dapat digunakan untuk penentuan kadar jenis pewarna. Metode KLT
densitometri dan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) membutuhkan biaya
cukup mahal, lebih rumit, dan membutuhkan waktu cukup lama(8).
Standar Nasional Indonesia (SNI) Nomor 01-2895 Tahun 1992 telah
merumuskan metode acuan untuk cara uji pewarna tambahan makanan, yaitu uji
kualitatif dengan metode kromatografi kertas menggunakan benang wol(9). Metode
kromatografi kertas memiliki kekurangan yaitu memiliki resolusi yang rendah dan
waktu elusi yang panjang. Pada penelitian kali ini uji kualitatif dilakukan dengan
metode kromatografi lapis tipis menggunakan benang wol. Kromatografi lapis tipis
memiliki kelebihan yaitu memiliki resolusi yang tinggi, waktu elusi yang relatif lebih
pendek dan lebih sederhana(10).
Uji kuantitatif dilakukan dengan metode spektrofotometri UV-VIS. Metode
ini dipilih karena dapat memisahkan zat pewarna dengan baik serta memiliki biaya
oprasional, pemeliharaan yang terjangkau dan tidak terlalu mahal jika dibandingkan
dengan metode lainnya. Pada penelitian sebelumnya metanil yellow telah dilakukan
pada sampel es lilin menggunakan metode spektrofotometri UV-VIS. Penelitian yang

dilakukan berbeda dengan acuan yaitu sampel yang digunakan adalah mie kuning
basah. sehingga perlu dilakukan validasi metode karena tidak menggunakan metode
baku dan dilakukan dengan menggunakan sampel yang berbeda. Validasi metode juga
merupakan salah satu hal yang ikut menentukan hasil dari suatu analisis. Pada analisis
metanil yellow dalam mie kuning basah parameter validasi yang digunakan yaitu
parameter validasi yang dipersyaratkan oleh Association of Official Analytical
Chemist (AOAC). Parameter validasi metode yang dilakukan yaitu linieritas, batas
deteksi (LOD), batas kuantifikasi (LOQ), presisi dan akurasi(12).

1.

1.2 Perumusan Masalah

Apakah parameter validasi metode analisis kuantitatif metanil yellow pada
mie kuning basah yang dilakukan memenuhi kriteria Association of Official

2.

Analytical Chemists (AOAC)?

Apakah terdapat kandungan metanil yellow sebagai zat pewarna pada mie
kuning basah yang beredar di pasar Demangan Kecamatan Gondokusuman

3.

Yogyakarta?
Berapakah kadar metanil yellow yang terdapat dalam mie kuning basah?
1.3 Tujuan Penelitian
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui parameter validasi metode

analisis kuantitatif pada mie kuning basah yang dilakukan memenuhi kriteria
Association of Official Analytical Chemists (AOAC), untuk mengetahui kandungan
metanil yellow pada mie kuning basah yang beredar di pasar Demangan Kecamatan
Gondokusuman Yogyakrta serta untuk mengetahui kadar metanil yellow dalam mie
kuning basah.

1.

1.4 Manfaat Penelitian

Dapat mengetahui parameter validasi metode analisis yang dilakukan

2.

memenuhi kriteria Association of Official Analytical Chemists (AOAC).

Dapat mengetahui kandungan metanil yellow sebagai zat pewarna berbahaya
secara kualitatif.

3.

Dapat mengetahui kadar metanil yellow dalam mie kuning basah yang beredar
di Pasar Demnagan Kecamatan Gondokusuman Yogyakarta.

BAB II
STUDI PUSTAKA
2.1 Tinjauan Pustaka
2.1.1

Pangan
Pangan adalah segala sesuatu yang berasal dari sumber hayati dan air, baik

yang diolah maupun yang tidak diolah, yang diperuntukkan sebagai makanan atau
minuman bagi konsumsi manusia, termasuk didalamnya adalah tambahan pangan,
bahan baku pangan, dan bahan lain yang digunakan dalam penyiapan, pengolahan,
dan atau pembuatan makanan atau minuman(13). Berdasarkan cara perolehannya,
pangan dapat dibedakan menjadi 3 yaitu
(1)

Pangan segar
Pangan segar adalah pangan yang belum mengalami pengolahan. Pangan
segar dapat dikonsumsi langsung atau tidak langsung, yakni dijadikan bahan
baku pengolahan pangan.

(2)

Pangan olahan
Pangan olahan adalah makanan atau minuman hasil proses pengolahan dengan
cara atau metode tertentu, dengan atau tanpa bahan tambahan.

(3)

Pangan olahan tertentu

Pangan olahan tertentu adalah pangan olahan yang di peruntukkan bagi
kelompok tertentu dalam upaya memelihara dan meningkatkan kualitas
kesehatan(14).

2.1.2

Bahan Tambahan Pangan

Bahan tambahan pangan (BTP) adalah bahan atau campuran bahan yang

secara alami bukan merupakan bagian dari bahan baku pangan, tetapi ditambahkan ke
dalam pangan untuk mempengaruhi sifat atau bentuk bahan pangan. BTP
ditambahkan untuk memperbaiki karakter pangan agar kualitasnya meningkat (15).
Berdasarkan fungsinya, menurut Permenkes No. 033 tahun 2012 tentang bahan
tambahan pangan, pengelompokkan BTP yang diizinkan digunakan pada makanan

dapat digolongkan sebagai : pewarna, pemanis buatan, pengawet, antioksidan,

antikempal, penyedap dan penguat rasa serta aroma, pengatur keasaman, pengemulsi,
pemantap dan pengental, pengeras, sekuestran, enzim dan penambah gizi(16). Bahan
tambahan pangan dapat berupa ekstrak bahan alami atau hasil sintesis kimia. Bahan
yang berasal dari alam umumnya tidak berbahaya, sementara bahan tambahan pangan
artifisial atau sintetik mempunyai risiko terhadap kesehatan jika di salahgunakan
pemakaiannya. Salah satunya yaitu penambahan bahan pewarna pada makanan yang
dilakukan untuk memberi kesan menarik bagi konsumen, menyeragamkan warna
makanan, menstabilkan warna, menutupi perubahan warna selama proses pengolahan,
dan mengatasi perubahan warna selama penyimpanan. Pemerintah telah mengatur
penggunaan pewarna ini, namun masih banyak produsen pangan yang menggunakan
bahan pewarna yang berbahaya bagi kesehatan, misalnya pewarna untuk tekstil atau
cat yang umumnya mempunyai warna lebih cerah, lebih stabil selama penyimpanan,
dan harga lebih murah. Produk pangan yang mengandung bahan tambahan pangan
harus memenuhi persyaratan sesuai ketentuan perundang-undangan(13,14).
2.1.3

Pewarna Makanan
Zat pewarna makanan merupakan suatu benda berwarna yang memiliki

afinitas kimia terhadap benda yang diwarnainya. Warna dari suatu produk makanan
ataupun minuman merupakan salah satu ciri yang sangat penting. Warna merupakan
kriteria dasar untuk menentukan kualitas makanan. Zat pewarna dibagi menjadi dua
kelompok yaitu uncertified color (zat pewarna alami) dan certified color (zat pewarna
sintetik)(15).
(1). Uncertified color additive ( zat pewarna tambahan alami)
Zat pewarna yang termasuk dalam uncertified color ini adalah zat pewarna
alami (ekstrak pigmen dari tumbuh-tumbuhan) dan zat pewarna mineral, walaupun
ada juga beberapa zat pewarna seperti karoten dan kantaxantin yang telah dapat
dibuat secara sintetik. Untuk penggunaannya sesuai prosedur sertifikasi dan termasuk
daftar yang tetap. Zat pewarna alami menghasilkan karakteristik warna yang lebih

pudar dan kurang stabil bila dibandingkan dengan zat pewarna sintetis. Oleh karena
itu zat ini tidak digunakan sesering zat pewarna sintetis. Contoh : daun suji untuk
warna hijau, daun jambu/daun jati untuk warna merah dan kunyit untuk warna
kuning(15).
(2). Certified color (zat pewarna sintetik)
Seiring dengan berkembangnya ilmu pengetahuan, zat warna hasil rekayasa
teknologi pun semakin berkembang. Oleh karena itu berbagai zat warna sintetik
diciptakan untuk berbagai jenis keperluan misalnya untuk tekstil, kulit, peralatan
rumah tangga dan sebagainya. Zat pewarna sintetis seharusnya telah melalui suatu
pengujian secara intensif untuk menjamin keamanannya. Karakteristik dari zat
pewarna sintetis adalah warnanya lebih cerah dan memiliki variasi warna yang lebih
banyak bila dibandingkan dengan zat pewarna alami. Disamping itu penggunaan zat
pewarna sintetis pada makanan bila dihitung berdasarkan harga per unit dan efisiensi
produksi akan jauh lebih murah bila dibandingkan dengan zat pewarna alami.
Contohnya : rhodamin B, methanyl yellow (15).
Pengawasan dilakukan oleh Direktorat Pengawasan Makanan dan Minuman
pada tingkat pusat oleh Kantor Wilayah Departemen Kesehatan, Balai Pemeriksaan
Obat dan Makanan, serta Kantor Departemen Kesehatan tingkat daerah. Menurut
Permenkes No. 033 tahun 2012 tentang bahan tambahan pangan yang dapat dilihat
pada tabel 2.1 akan diuraikan jenis-jenis zat pewarna yang diizinkan oleh pemerintah
beserta nomor indeks warna dan batas penggunaan maksimum(16).

Tabel 2.1 Jenis pewarna sintetis yang diijinkan di Indonesia(16)

Pewarna

Biru Berlian Brilliant blue FCF: Cl

Nomor
Indeks
Warna
(C.I.No.)
42090

Batas
Penggunaan
Maksimum
100
mg/kg,
produk
akhir
(total
campuran
pewarna
300
mg/kg)

Eritrosin

Food red 2

45430

100
mg/kg
produk
akhir
(total
campuran
pewarna
3
mg/kg)

Hijau FCF

Erithrosin : Cl

42053

100
mg/kg,
produk
akhir
(total
campuran
pewarna
300
mg/kg)

Hijau S

Food red 14 Fast green

FCF

44090

300
mg/kg,
tunggal
atau campuran
dengan pewarna
lain

Indigotin

Food green 3

73015

100
mg/kg,
produk
akhir
(total
campuran
pewarna
300
mg/kg)

Ponceau 4R

Green 4 Indigotin :
Cl.Food

16255

50 mg/kg produk
akhir
(total
campuran
pewarna
300
mg/kg)

Kuinolon

Quinoline yellow Cl. Food

Yellow13

15980

50 mg/kg produk
akhir
(total
campuran
pewarna
300
mg/kg)

Kuning
FCF

Sunset yellow FCF Cl.

Food yellow 3

15985

100
mg/kg,
produk
akhir
(total
campuran
pewarna
300
mg/kg)

Nomor
Indeks
Warna

Batas
Penggunaan
Maksimum

Pewarna

(C.I.No.)
14720

Karmoisin

Carmoisine; CI
Food Red 3;
Azorubine;

Merah

Allura red AC;

CI Food Red 17;
FD& C Red No.
40;

16035

100 mg/kg, tunggal

atau campuran dengan
pewarna lain

Coklat HT

Chocolate
Brown HT; CI

20285

100 mg/kg, tunggal

atau campuran dengan
pewarna lain

Tartazin

Tartrazine; CI
Food Yellow 4;

19140

100 mg/kg, tunggal

atau campuran dengan

Alura

100 mg/kg, tunggal

atau campuran dengan
pewarna lain

FD& C Yellow
No. 5;

pewarna lain

Berdasarkan Peraturan Menteri Kesehatan Nomor 239/Men.Kes/Per/V/85

tentang zat warna tertentu yang dinyatakan sebagai bahan berbahaya yang dapat
dilihat pada tabel 2.2 akan diuraikan jenis-jenis zat pewarna yang tidak diizinkan
oleh pemerintah untuk dicampur pada makanan beserta nomor indeks warna. Metanil
yellow termasuk dalam pewarna yang dilarang tercampur pada makanan dengan
nomor indeks 13065(2).

Tabel 2.2 Jenis zat pewarna sinetis berbahaya(2)

Nama

Nomor Indeks Warna

(C. I. No.)

Auramine (C.I Basic Yellow 2)

41000

Alkanet

75520

Butter Yellow (C.I. Solvent Yellow 2)

11020

Black 7984 (Food Vlack 2)

27755

Burn Unber (Pigment Brown 7)

77491

Chrysoidine (C.I. Basic Orange 2)

11270

Chrysoine S (C.I Food Yellow 8)

14270

Citrus Red No. 2

12156

Fast Red E (C. I Food Red 4)

16045

Fast Yellow AB (C. I Food Yellow 2)

13015

Indanthrene Blue RS (C. I Food Blue 4)

69800

Magenta ( C. I Basic Violet 14)

42510

Metanil Yellow (Ext. D&C Yellow No. 1)

13065

Oil Orange SS (C. I Solvent Orange 2)

12100

Oil Orange XO (C. I Solvent Orange 7)

12140

Oil Orange AB (C. I Solvent Yellow 5)

11380

Oil Yellow AB (C. I Solvent Yellow 6)

11390

Orange G (C. I Food Orange 4)

16230

Ponceau SX (C. I Food Red 1)

15980

Rhodamin B (C.I Food Red 15)

45170

2.1.4

Metanil Yellow
Metanil yellow atau kuning metanil merupakan zat warna sintetis berbentuk

serbuk, padat, berwarna kuning kecoklatan, bersifat larut dalam air dan alkohol, agak
larut dalam benzen dan eter, serta sedikit larut dalam aseton. Metanil yellow dibuat
dari asam metanilat dan difenilamin. Kedua bahan ini bersifat toksik. Metanil yellow
biasa digunakan untuk mewarnai wol, nilon, kulit, kertas, cat, alumunium, kayu, dan
bulu(17). Metanil yellow, merupakan zat pewarna industri tekstil yang dilarang untuk
produk makanan, yang pada umumnya mengandung persenyawaan logam berat

seperti aluminium, besi, tembaga dan lainnya. Metanil yellow mengandung logam
berat dikarenakan pada saat proses pembuatan zat pewarna sintetik ini biasanya
melalui perlakuan pemberian asam sulfat atau asam nitrat yang sering kali
terkontaminasi oleh arsen atau logam berat lain yang bersifat racun(17).
Zat warna sintetis memiliki rumus kimia C18H14N3O3SNa dengan penampakan
fisik berwarna oranye sampai warna kuning. Struktur dapat dilihat pada gambar 2.1
dan monografi bahan pada tabel 2.3.

Gambar 2.1 Struktur kimia metanil yellow(18)

Tabel 2.3 Monografi bahan(18)
No.

Keterangan

Penjelasan

1.

BM

2.

Rumus Molekul

3.

Merck Index

14.5928

4.
5.
6.

pH
Titik Leleh
Golongan

1.2 - 2.3
>250 C
Azo

7.

Kelarutan

Larut dalam air, alkohol, sedikit larut dalam

Sinonim

benzen, dan agak larut dalam aseton

C.I. Acid yellow 36; tropaeolin G; 3-[[4-

8.

375,38 g/mol
C18H14N3O3SNa

(phenylamino) phenyl] azo] benzenesulfonic

acid monosodium salt; D & Cyellow No. 1;
sodium 3-[(4anilino) phenylazo]
Metanil yellow merupakan pewarna golongan azo. Pewarna azo stabil dalam
berbagai rentang pH, stabil pada pemanasan, dan tidak memudar bila terpapar cahaya
atau oksigen. Ikatan azo terletak pada gugus N=N.
Beberapa perwarna azo telah dilarang digunakan pada pangan, efek toksik
dari metanil yellow bukan disebabkan oleh pewarna itu sendiri melainkan akibat

adanya degradasi pewarna yang bersangkutan yang tidak larut dalam minyak dan
lemak. Selain itu, senyawa ini bersifat iritan sehingga jika tertelan dapat
menyebabkan iritasi saluran cerna dan senyawa ini dapat pula menyebabkan mual,
muntah, sakit perut, diare, bahkan menyebabkan kanker(19). Metanil yellow yang
masuk ke dalam tubuh, zat akan diserap didalam usus kemudian masuk kedalam hati,
didalam hati zat pewrana metanil yellow sebagian ada yang diserap kemudian
dieksresikan melalui urin dan ada pula yang tertinggal dan tidak dapat dimetabolisme,
efek jangka panjang dengan jumlah kadar metanil yellow yang tinggi maka akan
menyebabkan kanker dan tumor(20).
Laporan tahunan yang dilakukan oleh Badan

POM

pada tahun 2012

mendapatkan zat warna methanil yellow pada beberapa sampel makanan dan
minuman yang diujikan. Di Indonesia pewarna ini sering disalah gunakan untuk
mewarnai berbagai jenis pangan antara lain kerupuk, mie kuning, tahu, dan pangan
jajanan yang berwarna kuning, seperti gorengan(21).
2.1.5

Mie Kuning Basah

Mie merupakan produk makanan yang sering dikonsumsi oleh masyarakat

Indonesia. Definisi mie adalah produk makanan yang dibuat dari tepung gandum atau
tepung terigu dengan atau tanpa penambahan bahan makanan lain dan bahan
tambahan makanan yang diijinkan, bentuk khas mie dan siap untuk dihidangkan
setelah dimasak. Menurut Astawan 2006, mie basah yang baik adalah mie yang
secara kimiawi mempunyai nilai kimia yang sesuai dengan persyaratan yang
ditetapkan oleh Departemen Perindustrian melalui SII 2046-90. Persyaratan tersebut
dilihat pada data tabel 2.4(22).
Tabel 2.4 Kriteria uji mie basah(22)
Kriteria uji

Satuan

Persyaratan

1. Keadaan :
a. Bau
b. Warna
c. Rasa

Normal
Normal
Normal

2.
3.
4.
5.

Kadar air
Abu
Protein
Bahan Tambahan

%, b/b
%, b/b
%, b/b

Makanan :
a. Boraks
b. Pewarna
c. Formalin

20 35
Maksimum 3
Maksimum 8

Tidak boleh
Yang diizinkan
Tidak boleh

6. Pencemaran
logam:
a. Timbal (Pb)
b. Tembaga (Cu)
c. Seng (Zn)
d. Raksa (Hg)

mg/kg

Maksimum 1,0

mg/kg

Maksimum 10,0

mg/kg

Maksimum 40,0

mg/kg

Maksimum 0,05

Koloni/g

Maksimum 1,0 x 10

APM/g

Maksimum 10

Koloni/g

Maksimum 1,0 x 10

7. Pencemaran
mikroba :
a. Angka
lempeng total
b. Escherchia coli
c. Kapang

2.1.6

Spektrofotometri UV-VIS
Spektrofotometri adalah ilmu yang mempelajari tentang penggunaan

spektrofotometer. Spektrofotometer adalah alat yang terdiri dari spektrofotometer dan

fotometer. Spektrofotometer adalah alat yang digunakan untuk mengukur energi

secara relatif jika energi tersebut ditransmisikan, direfleksikan, atau diemisikan

sebagai fungsi dari panjang gelombang. Spektrofotometer menghasilkan sinar dari
spektrum dengan panjang gelombang tertentu, dan fotometer adalah alat pengukur
intensitas cahaya yang ditransmisikan atau yang diabsorpsi. Spektrofotometri UVVIS adalah anggota teknik analisis spektroskopik yang memakai sumber REM
(radiasi elektromagnetik) ultraviolet dekat (190-380 nm) dan sinar tampak (380-780
nm) dengan memakai instrumen spektrofotometer. Spektrofotometer UV-VIS adalah
alat yang digunakan untuk mengukur transmitansi, reflektansi dan absorbsi dari
cuplikan sebagai fungsi dari panjang gelombang. Warna yang diserap oleh suatu
senyawa merupakan warna komplementer dari warna yang teramati. Beberapa warna
yang diamati dan warna komplementernya terdapat pada tabel 2.5(23).
Tabel 2.5 Spektrum panjang gelombang spektrofotometer(23)
Panjang gelombang Warna terlihat
<400
400-450
450-490
490-550
550-580
580-650
650-700
>700

Ultraviolet
Violet
Biru
Hijau
Kuning
Jingga
Merah
Inframerah

Warna
komplementer
Kuning
Jingga
Merah
Ungu
Biru
Hijau

2.1.6.1 Prinsip Kerja

Cahaya yang berasal dari lampu deuterium maupun wolfram yang bersifat
polikromatis

di

teruskan

melalui

lensa

menuju

ke

monokromator

pada

spektrofotometer dan filter cahaya pada fotometer. Monokromator kemudian akan

mengubah cahaya polikromatis menjadi cahaya monokromatis (tunggal). Berkas
cahaya dengan panjang tertentu kemudian akan dilewatkan pada sampel yang
mengandung suatu zat dalam konsentrasi tertentu, oleh karena itu, terdapat cahaya

yang diserap (diabsorbsi) dan ada pula yang dilewatkan. Cahaya yang dilewatkan ini
kemudian diterima oleh detektor, kemudian detektor akan menghitung cahaya yang
diterima dan mengetahui cahaya yang diserap oleh sampel. Cahaya yang diserap
sebanding dengan konsentrasi zat yang terkandung dalam sampel sehingga akan
diketahui konsentrasi zat dalam sampel secara kuantitatif(23).
2.1.6.2 Instrumentasi
Instrumentasi spektrofotometer UV-VIS terdiri dari sumber cahaya yang dapat
berasal dari lampu deuterium untuk daerah UV atau lampu halogen kuarsa dan lampu
tungsten untuk daerah visible, wadah sampel, monokromator, detektor, dan rekorder
yang dapat dilihat pada gambar 2.2(23).

Gambar 2.2 Spektrofotometer UV-VIS(23)

Intrumentasi spektrofotometer UV-VIS memiliki fungsi masing masing yaitu :
1.
Sumber sinar polikromatis berfungsi sebagai sumber sinar polikromatis dengan
berbagai macam rentang panjang gelombang.
2.

Wadah sampel berfungsi sebagai tempat meletakan sampel. Kuvet biasanya

terbuat dari plastik atau kaca, namun kuvet yang terbuat dari kaca memiliki
kualitas yang lebih baik. Kuvet biasanya berbentuk persegi panjang dengan
lebar 1 cm.

3.

Monokromator berfungsi sebagai penyeleksi panjang gelombang yaitu

mengubah cahaya yang berasal dari sumber sinar polikromatis menjadi cahaya
monokromatis. Jenis monokromator yang saat ini banyak digunakan adalah
lensa prisma dan filter optik.

4.

Detektor berfungsi menangkap cahaya yang diteruskan dari sampel dan

mengubahnya menjadi arus listrik. Syarat-syarat sebuah detektor :

5.

Kepekaan yang tinggi

Respon konstan pada berbagai panjang gelombang.

Waktu respon cepat dan signal minimum tanpa radiasi.

Signal listrik yang dihasilkan harus sebanding dengan tenaga radiasi.

Recorder merupakan suatu sistem baca yang menangkap besarnya isyarat listrik
yang berasal dari detektor(23).

2.1.7

Validasi Metode

2.1.7.1 Definisi Validasi Metode

Validasi metode analisis merupakan suatu tindakan penilaian terhadap
parameter tertentu yang didasarkan pada percobaan laboratorium untuk membuktikan
bahwa parameter tersebut memenuhi persyaratan untuk digunakan. Validasi metode
perlu dilakukan hanya pada beberapa metode pengujian seperti metode pustaka dan
metode yang dikembangkan laboratorium.
2.1.7.2 Kategori Validasi
Validasi metode dilakukan untuk menjamin bahwa metode analisis yang
dilakukan akurat, spesifik, reprodusibel, dan tahan pada kisaran analit yang akan
dianalisis. Adapun untuk menentukan parameter validasi yang digunakan dalam
metode analisis tergantung dari kategori percobaan yang dilakukan. Kategori
percobaan tersebut dapat dibagi menjadi 4 kategori :
a. Kategori I. Metode kuantitatif komponen utama dari produk obat
bahan aktif (termasuk pengawet) dalam produk obat.
b. Kategori II. Penentuan zat pengotor (kontaminan) atau senyawa
degradasi yang terkandung dalam produk obat.
c. Kategori III. Metode yang digunakan untuk menentukan karakteristik
kinerja dari produk obat (misalnya penentuan disolusi dan pelepasan
obat).
d. Kategori IV. Pengujian identifikasi(24).

Parameter validasi yang diperlukan untuk masing-masing kategori dapat dilihat pada
tabel 2.6.
Tabel 2.6. Parameter validasi yang diperlukan untuk tiap kategori(25).
Parameter

Kategori

Validasi

Kategori

Kategori

II

II

III

IV

Uji Batas
Tidak
Ya
Ya
Tidak

Ya
-

Tidak
Tidak
Ya
Tidak
Tidak

Tidak
Tidak

Tidak
Tidak
Tidak

Akurasi
Presisi
Spesifisitas
Batas Deteksi
Batas

Ya
Ya
Ya
Ya
Ya

kuantitatif
Ya
Ya
Ya
Tidak
Ya

Kuantifikasi
Linieritas
Rentang
Robustness

Tidak
Tidak
Ya

Ya
Ya
Ya

Kategori Kategori

(ketahanan)
*mungkin diperlukan, tergantung pada uji spesifiknya.
2.1.7.3 Parameter Validasi
Parameter validasi terdiri atas akurasi, presisi, spesifitas, linearitas dan
rentang, batas deteksi dan batas kuantifikasi, ketangguhan, dan ketahanan(24).
1. Linearitas adalah kemampuan metode analisis yang memberikan respon
yang secara langsung proporsional terhadap konsentrasi analit dalam
sampel. Rentang metode adalah pernyataan batas terendah dan tertinggi
analit yang sudah ditunjukkan dapat ditetapkan dengan kecermatan,
2.

keseksamaan, dan linearitas yang dapat diterima.

Akurasi merupakan ukuran yang menunjukkan derajat kedekatan hasil
analisisi dengan kadar analit yang sebenarnya. Terkadang masalah dalam
menentukan akurasi adalah ketidaktahuan terhadap nilai yang sebenarnya.
Dalam beberapa tipe sampel dapat menggunakan sampel yang telah
diketahui nilainya dan mengecek metode pengukuran kita gunakan untuk
menganalisis sampel tersebut sehingga kita mengetahui akurasi dari
prosedur yang diujikan, metode ini disebut dengan CRM (Certified

Reference

Method).

Penentuan

akurasi

lain

adalah

dengan

membandingkan hasilnya dengan hasil yang dilakukan oleh laboratorium

lain. Akurasi juga dapat dinyatakan sebagai persen perolehan kembali
(recovery) analit yang ditambahkan. Kriteria penerimaan akurasi menurut
AOAC dapat dilihat pada tabel 2.7.
Tabel 2.7 Kriteria penerimaan akurasi menurut AOAC(24,26)
Konsentrasi

Rata-Rata
Recovery (%)

100%
10%
1%
0,1%
0,01%
10 g/g (ppm)
1 g/g
10 g/kg (ppb)

98-101%
95-102%
92-105%
90-108%
85-110%
80-115%
75-120%
70-125%

Persen recovery dapat ditentukan dengan rumus sebagai berikut :

Re cov ery (%)

3.

C F C A
CA

(2.1)

Keterangan :
CF : konsentrasi total sampel hasil pengukuran
CA : konsentrasi sampel sebenarnya
C_A : konsentrasi analit yang ditambahkan
Presisi dari suatu metode analisis adalah derajat kesesuaian diantara
masing-masing hasil uji, jika prosedur analisis diterapkan berulang kali
pada sejumlah cuplikan yang diambil dari satu sampel homogen.
Presisi dinyatakan sebagai deviasi standar atau deviasi standar relatif
(koefisien variasi). Kriteria penerimaan presisi dapat dilihat pada tabel
2.8.
Tabel 2.8 Kriteria penerimaan presisi menurut AOAC
Konsentrasi
100%
10%
1%
0,1%

RSD
1%
1,5%
2%
3%

0,01%
4%
10 g/g
6%
1 g/g
7%
10 g/g
15%
Deviasi standar atau deviasi standar relative dapat ditentukan dengan
rumus sebagai berikut :
SD =

RSD (%) =

(2.2)

Keterangan:
xi : nilai dari masing-masing pengukuran sampel
x : rata-rata dari pengukuran sampel
n : jumlah sampel
4. Limit deteksi dari suatu metode analisis adalah nilai parameter uji batas,
yaitu konsentrasi analit terendah yang dapat dideteksi, tetapi tidak
dikuantifikasi pada kondisi percobaan yang dilakukan. Limit deteksi
dinyatakan dalam konsentrasi analit dalam sampel. Limit kuantifikasi
adalah konsentrasi analit terendah dalam sampel yang dapat ditentukan
dengan presisi dan akurasi yang dapatditerima pada kondisi eksperimen
yang ditentukan. Limit deteksi dan kuantifikasi seringkali bergantung
pada kemampuan instrumen. Batas deteksi dan batas kuantifikasi dapat
ditentukan dengan rumus berikut :

5.

(2.3)
Ketangguhan metode adalah derajat ketertiruan hasil uji yang diperoleh
darianalisis sampel yang sama dalam berbagai kondisi uji normal, seperti
laboratorium,analisis, instrumen, bahan pereaksi, suhu, hari yang berbeda,
dan lain-lain. Ketangguhan biasanya dinyatakan sebagai tidak adanya

6.

pengaruh perbedaan operasiatau lingkungan kerja pada hasil uji.

Ketahanan merupakan kapasitas metode untuk tetap tidak terpengaruh
olehadanya variasi parameter metode yang kecil. Ketahanan dievaluasi

dengan melakukanvariasi parameter-parameter metode seperti: persentase

pelarut organik, pH, kekuatanionik, suhu, dan sebagainya(24).

2.2

Landasan Teori

Metanil yellow, merupakan zat pewarna industri tekstil yang dilarang untuk
produk makanan. Badan Pengawas Obat dan Makanan menyatakan bahwa metanil
yellow sering disalahgunakan pada produk makanan industri rumah tangga seperti
kerupuk, sirup, minuman kemasan, tahu dan mie kuning basah. Salah satu alasan
produsen yang tidak bertanggung jawab memilih untuk menggunakan bahan pewarna
sintetis seperti metanil yellow karena lebih menguntungkan dari segi biaya untuk
produksi makanannya dari pada menggunakan pewarna alami, dalam kadar kecil
metanil yellow dapat menimbulkan efek toksik apabila masuk ke dalam tubuh
manusia seperti mual, muntah, sakit perut, diare, demam, dan lemah. Dalam jumlah
kadar yang tinggi efek toksik dapat dijumpai pada berbagai organ, antara lain hati,
ginjal, paru-paru, jantung, otak, limpa, dan jaringan otot dan menyebabkan tumor dan
kanker. Oleh sebab itu, melalui Permenkes No. 033 tahun 2012 tentang bahan
tambahan pangan, pemerintah melarang penggunaan metanil yellow pada produk
makanan.
Metode analisis yang digunakan untuk menganalisis kandungan metanil
yellow pada mie kuning basah dilakukan dengan menggunakan analisis kualitatif dan
analisis kuantitatif. Analisis kualitatif dilakukan dengan menggunakan benang wol
untuk menarik zat warna, dan pemisahan senyawa dilakukan dengan metode
kromatografi lapis tipis karena memiliki resolusi yang tinggi, waktu elusi yang relatif
lebih pendek dan lebih sederhana. Analisis kuantitatif metanil yellow dilakukan
dengan menggunakan metode spektrofotometri UV-Vis karena metanil yellow
memiliki gugus kromofor dan ausokrom. Kromofor adalah bagian yang bertanggung

jawab terhadap penyerapan warna dan terdiri dari ikatan rangkap terkonjugasi
sedangkan sedangkan ausokrom adalah gugus fungsi yang menempel pada kromofor.
Analisis metanil yellow yang dilakukan pada penelitian ini berbeda dengan
acuan yaitu sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah mie kuning basah
sehingga penelitian ini perlu dilakukan validasi agar metode tersebut dapat dipercaya
dan dapat dipertanggung jawabkan hasilnya.

Parameter validasi metode yang

dilakukan yaitu linieritas, batas deteksi (LOD), batas kuantifikasi (LOQ), presisi dan
akurasi.
2.3

Hipotesis

Berdasarkan landasan teori di atas dapat disimpulkan, hipotesis dari

penelitian ini adalah metode analisis kuantitatif pada mie kuning basah memenuhi
kriteria validasi menurut Association of Official Analytical Chemists (AOAC),
Kromatografi lapis tipis dapat memisahkan metanil yellow sebagai zat pewarna pada
mie kuning basah, dan metode spektrofotometri dapat digunakan untuk mendeteksi
kadar metanil yellow pada mie kuning basah.

BAB III
METODE PENELITIAN
3.1 Bahan dan Alat
3.1.1 Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain amoniak 10% (pro
analisis, Merck, Germany), asam asetat glasial, asam asetat 10% (pro analisis, Merck,
Germany), akuades, etanol (pro analisis, Merck, Germany), metanil yellow, methanol
(pro analisis, Merck, Germany), mie kuning basah dan n-butanol (pro analisis, Merck,
Germany).
3.1.2 Alat
Alat-alat yang diperlukan untuk penelitian berupa alat pemanas, benang wol
bebas lemak, cawan porselen (pirex), chamber, gelas beker, kertas whatman no. 42,
labu ukur 50 ml dan 100 ml (pirex), lumpang alu, pipa kapiler, mikro pipet
(Transferpette ), plat KLT, pipet tetes, pipet volume, spektrofotometer UV/Vis,
timbangan analitik (Metler Toledo XS 205, kepekaan 0,01 mg) dan waterbath.
3.2 Cara Penelitian
3.2.1 Pembuatan Larutan Metanil Yellow 500 ppm
Ditimbang 50 mg standar metanil yellow dan dimasukkan ke dalam labu ukur
100 ml, dilarutkan dengan akuades sampai tanda batas, dan dihomogenkan.
Diperoleh larutan standar 500 mg/L.
3.2.2 Penentuan Panjang Gelombang Maksimal Metanil Yellow
Dipipet 0,5 ml larutan metanil yellow pada 500 ppm dengan menggunakan
pipet ukur dan dimasukkan kedalam labu ukur 50 ml kemudian ditambahkan
akuades sampai tanda batas dan dihomogenkan. Larutan ini mengandung 5
ppm metanil yellow. Kemudian diukur panjang gelombang pada serapan
3.2.3

mulai dari 350-800 nm dengan menggunakan blanko akuades.

Pembuatan Kurva Baku Metanil Yellow
Dipipet 0,6 ml, 0,8 ml, 1,0 ml, 1,2 ml dan 1,4 ml larutan metanil yellow pada
500 ppm dengan menggunakan pipet ukur dan dimasukkan kedalam labu ukur
23

50 ml kemudian ditambahkan akuades sampai tanda batas dan dihomogenkan.

Larutan ini mengandung 6, 8, 10, 12, dan 14 ppm. Kemudian diukur
absorbansinya pada panjang gelombang 433 nm.
3.2.4 Validasi metode
3.2.4.1 Menghitung linieritas
Dibuat larutan dengan konsentrasi 6, 8, 10, 12 dan 14 ppm dari larutan stok
500 ppm dalam labu ukur 50 mL menggunakan pelarut akuades. Masingmasing larutan baku kerja dimasukkan ke dalam spektrofotometer UV-Vis dan
dibaca absorbansinya pada panjang gelombang maksimum metanil yellow
433 nm. Dibuat persamaan garis regresi. Dihitung nilai r (koefisien korelasi)
masing-masing senyawa berdasarkan persamaan regresi yang diperoleh. Uji
linieritas dilakukan dari persamaan baku y=bx+a.
3.2.4.2 Penetapan batas deteksi (LOD) dan batas kuantifikasi (LOQ)
Dipipet 0,6 ml, 0,8 ml, 1,0 ml, 1,2 ml dan 1,4 ml larutan metanil yellow pada
500 ppm dengan menggunakan pipet ukur dan dimasukkan ke dalam labu
ukur 50 ml kemudian ditambahkan akuades sampai tanda batas dan
dihomogenkan . larutan ini mengandung 6, 8, 10, 12, dan 14 ppm. Kemudian
absorbansi diukur pada panjang gelombang 433 nm. Pada penelitian ini
konsentrasi kurva baku terendah adalah 6 ppm kemudian dibaca pada panjang
gelombang 433 nm, jika absorbansinya di atas 0,200 maka dibuat konsentrasi
di bawah 6 ppm sampai diperoleh absorbansi 0,200. LOQ praktek dilakukan
dengan cara dipipet 0,45 ml dan 0,48 ml larutan metanil yellow pada 500 ppm
dan dimasukkan kedalam labu ukur 50 ml kemudian ditambahkan akuades
sampai tanda batas dan dihomogenkan. larutan ini mengandung 4,5 dan 4,8
ppm dibaca pada panjang gelombang 433 nm.
3.2.4.3 Presisi
Ketelitian metode ditentukan dengan standar 8 ppm yang dilakukan dengan
cara dipipet 0,8 ml larutan metanil yellow pada 500 ppm dengan pipet ukur
dan dimasukkan ke dalam labu ukur 50 ml kemudian ditambahkan akuades

sampai tanda batas dan dihomogenkan, dilakukan replikasi sebanyak enam

kali. Kemudian absorbansi diukur pada panjang gelombang 433 nm.
3.2.4.4 Akurasi
Keakuratan metode dilakukan dengan konsentrasi 80%, 100% dan 120% dari
lauran stok 500 ppm.
1.
Konsentrasi 80%
Ditimbang 10 gram mie kuning basah dan dilembutkan dengan cara
ditumbuk menggunakan lumpang alu. Kemudian sampel dilarutkan
dalam 30 ml larutan amoniak 2% didalam etanol 70% kemudian
disaring menggunakan kertas saring dan dimasukkan kedalam labu
ukur 50 ml. Di tambahkan 480 l larutan stok metanil yellow 500 ppm
dengan menggunakan mikropipet, dilarutkan dengan aquades hingga
tanda batas dan dihomogenkan. Dibaca absorbansinya pada pada
panjang gelombang 433 nm.
2.

Konsentrasi 100%
Ditimbang 10 gram mie kuning basah dan dilembutkan dengan cara
ditumbuk menggunakan lumpang alu. Kemudian sampel dilarutkan
dalam 30 ml larutan amoniak 2% didalam etanol 70% kemudian
disaring menggunakan kertas saring dan dimasukkan kedalam labu
ukur 50 ml. Ditambahkan 600 l larutan stok metanil yellow 500 ppm
dengan menggunakan mikropipet, dilarutkan dengan akuades hingga
tanda batas dan dihomogenkan. Dibaca absorbansinya pada pada
panjang gelombang 433 nm.

3.

Konsentrasi 120%
Ditimbang 10 gram mie kuning basah dan dilembutkan dengan cara
ditumbuk menggunakan lumpang alu. Kemudian sampel dilarutkan
dalam 30 ml larutan amoniak 2% didalam etanol 70% kemudian
disaring dengan menggunakan kertas saring dan dimasukkan kedalam
labu ukur 50 ml. Di tambahkan 720 l larutan stok metanil yellow 500
ppm dengan menggunakan mikropipet, dilarutkan dengan akuades
hingga tanda batas dan dihomogenkan. Dibaca absorbansinya pada

pada panjang gelombang 433 nm. Masing masing konsentrasi diulang

tiga kali. Persen recovery (R%) dihitung.
3.2.5

Lokasi Pengambilan Sampel Uji

Penelitian ini dilakukan di Pasar Tradisional Demangan Kecamatan

Gondokusuman. Alasan pemilihan lokasi karena pasar tradisional menjual mie kuning
basah dan sangat laris terjual.
3.2.6

Populasi dan Sampel Penelitian

3.2.6.1 Populasi
Populasi dalam penelitian ini adalah mie kuning basah yang dijual di pasar
tradisional Demangan Kecamatan Gondokusuman Yogyakarta.
3.2.6.2 Sampel penelitian
Berdasarkan tujuan penelitian, maka sampel yang diambil dalam penelitian ini
adalah mie kuning basah yang diambil berdasarkan produsen mie kuning
basah yang berbeda. Peneliti menerapkan kriteria inklusi dan eksklusi untuk
memastikan mie kuning basah yang diambil dapat memenuhi kriteria
penelitian.
Adapun kriteria inklusi dalam penelitian ini adalah:
1. Mie kuning basah yang dijual di pasar tradisional Demangan Kecamatan
Gondokusuman.
2. Mie kuning basah yang tidak bermerk dan tidak bernomor registrasi
Adapun kriteria Eksklusi dalam penelitian ini adalah:
1. Mie kuning basah yang dijual dengan produsen yang sama
2. Mie kuning basah yang memiliki merk, nomor registrasi dan disimpan
dilemari pendingin.
3.2.7

Analisis Kualitatif Dengan Kromatografi Lapis Tipis Menggunakan

Benang Wol
3.2.7.1 Preparasi larutan pengembang
Fase gerak berupa n-butanol, asam asetat glasial, dan akuades (4:5:1)
dimasukkan kedalam gelas beker, diaduk hingga homogen. Dimasukkan ke

dalam chamber kromatografi, ditutup dan dibiarkan 1 jam, agar larutan

jenuh. Larutan siap untuk digunakan(9).
3.2.7.2 Preparasi plat KLT
Dibuat plat KLT berukuran 12 cm. standar pembanding dan larutan sampel
masing-masing ditotolkan pada plat dengan menggunakan pipa kapiler pada
jarak 1 cm dari bagian bawah plat. Kemudian dibiarkan beberapa saat hingga
mongering(9).
3.2.7.3 Preparasi sampel uji
Dimasukkan mie kuning basah 10 gram ke dalam gelas beker 100 ml
kemudian diasamkan dengan ditambahkan 5 ml. Asam asetat 10 % dengan
menggunakan pipet volume, kemudian dimasukkan dan direndam benang
wool ke dalam sampel sembari dipanaskan kemudian didiamkan dan ditunggu
sampai mendidih kurang lebih sepuluh menit. Benang wool diambil dan
dicuci dengan air dan dibilas dengan akuades, benang wool yang telah dibilas
tersebut ditambahkan 25 ml amoniak 10%, kemudian dipanaskan benang
wool sampai tertarik zat warna (hingga luntur) dan selanjutnya benang wool
dibuang, larutan yang diperoleh diuapkan di atas waterbath sampai kering.
Residu yang diperoleh ditambah beberapa tetes metanol dengan menggunakan
pipet tetes, untuk ditotolkan pada kertas kromatografi yang siap dipakai.
Dielusi dalam bejana dengan eluen sampai mencapai tanda batas, diangkat
dan dibiarkan hingga mengering. Warna yang terjadi diamati, dengan
membandingkan Rf (Retardation factor) antara Rf sampel dan Rf standar(9).
Perhitungan:
Rf =

(3.1)

3.2.8 Analisis kuantitatif dengan Spektrofotometer UV-VIS

3.2.8.1 Preparasi uji sampel
Mie kuning basah ditimbang 10 gram, kemudian dilarutkan dalam 30 ml
larutan ammonia 2% didalam etanol 70%. Dibiarkan selama 30 menit hingga
warna keluar. Disaring dengan menggunakan kertas whatman 42. Dimasukkan

ke dalam labu ukur 50 ml ditambahkan dengan akuades hingga tanda batas

dan dihomogenkan. Diukur serapannya pada panjang gelombang 433 nm dan
dianalisis hasilnya(11).

3.3 Analisis Hasil

Uji kualitatif menggunakan metode kromatografi lapis tipis dengan benang
wol, apabila mie kuning basah positif mengandung metanil yellow maka nilai Rf
sampel sejajar dengan nilai Rf standar metanil yellow dan pada sinar UV 254 metanil
yellow menghasilkan warna hijau dan UV 366 akan menghasilkan warna ungu.
Analisis hasil validasi metode bandingkan dengan nilai parameter validasi yang
direkomendasikan AOAC. Validasi metode yang dilakukan antara lain : linieritas,
batas deteksi dan batas kuantifikasi, akurasi (kecermatan), dilakukan perhitungan
persen perolehan kembali (recovery) analit yang ditambahkan, presisi (keterulangan)
yang dinyatakan dalam bentuk simpangan baku relatif (RSD). Uji kuantitatif
menggunakan metode spektrofotometri visibel, data yang diperoleh dari penelitian
mie kuning basah apabila positif mengandung metanil yellow maka kadar yang
diperoleh lebih besar dari LOQ, sampel tersebut tidak memenuhi persyaratan pewarna
makanan menurut Permenkes RI No. 239/Menkes/PER/V/1985.

3.4 Skema Penelitian

Sampel mie kuning
basah
Persiapan larutan standar

Preparasi sampel
Preparasi larutan
pengembang

Penentuan panjang
gelombang
Persiapan kurva kalibrasi

Validasi metode (Batas

deteksi dan Batas
kuantifikasi, presisi dan
akurasi

Analisa Hasil

Preparasi plat
KLT

Sampel negatif

Sampel positif

Tidak dilakukan
penetapan kadar

Preparasi sampel

Penentuan kadar

Analisa hasil

Gambar 3.1 Alur penelitian

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui parameter validasi metode analisis
yang dilakukan telah memenuhi kriteria Association of Official Analytical Chemists
(AOAC), untuk mengetahui kandungan metanil yellow pada mie kuning basah di
pasar Demangan Kecamatan Gondokusuman Yogyakarta, dan untuk mengetahui
kadar metanil yellow dalam mie kuning basah. Metanil yellow dibaca serapannya
pada spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang maksimum. Hasil
pembacaan panjang gelombang maksimum pada penelitian ini yang diketahui mulai
dari 350-800 nm adalah sebesar 433 nm. Spektrum pembacaan serapan untuk
menentukan panjang gelombang maksimum dapat dilihat pada gambar 4.1 dengan
puncak metanil yellow ditunjukkan dengan angka nomor 2. Panjang gelombang
maksimal yang digunakan untuk membaca serapan metanil yellow berdasarkan
literatur adalah 435 nm. Hal tersebut berbeda karena alat spektofotometer yang
digunakan setiap laboratorium berbeda sehingga dapat mempengaruhi perbedaan
lamda maksimum. Faktor lain yang menyebabkan panjang gelombang maksimum
berbeda adalah penggunaan larutan yang berbeda atau kualitas bahan (pro analisis
atau teknis).

Gambar 4.1 Panjang gelombang metanil yellow

31

4.1 Validasi Metode

Validasi metode analisis merupakan suatu tindakan penilaian terhadap
parameter tertentu yang didasarkan pada percobaan laboratorium untuk membuktikan
bahwa parameter tersebut memenuhi persyaratan untuk digunakan. Parameter validasi
yang digunakan dalam metode analisis ini mengacu Association of Official Analytical
Chemists (AOAC) dan masuk dalam kategori II sub kategori kuantitatif yaitu uji
kuantitatif untuk penentuan zat pengotor (kontaminan). Penelitian ini dilakukan
validasi metode dengan beberapa parameter antara lain linieritas, LOQ, presisi, serta
akurasi.
4.1.1

Linieritas
Linieritas merupakan kemampuan suatu metode untuk memperoleh hasil yang

secara langsung proposional dengan konsentrasi analit pada kisaran yang diberikan.
Koefisien korelasi (r) merupakan parameter linieritas yang menggambarkan
proposionalitas respon analitik terhadap konsentrasi yang diukur, linieritas dikatakan
baik jika nilai r > 0,99(12). Berdasarkan data kurva metanil yellow pada konsentrasi
antara 6 ppm sampai 14 ppm diperoleh persamaan regresi linier y = 0,04966x
0,00226 dengan nilai r 0,99967. Nilai koefisien korelasi yang diperoleh menunjukkan
hubungan yang proposional antara respon analitik dengan konsentrasi kadar yang
diukur. Hasil uji linieritas metanil yellow dapat dilihat pada gambar 4.2.

Gambar 4.2 Grafik kurva baku metanil yellow

4.1.2

Penetapan batas deteksi (Limit of Detection, LOD) dan batas kuantitasi

(Limit of Quantification, LOQ)
Batas deteksi (LOD) adalah konsentrasi terendah yang masih dapat terdeteksi

sedangkan batas kuantitasi (LOQ) adalah jumlah terkecil yang masih dapat diukur
dalam kondisi percobaan yang sama dan masih memenuhi kriteria cermat. Nilai LOD
dan LOQ menggambarkan sensitifitas suatu metode, semakin kecil nilai LOD dan
LOQ semakin sensitif metode tersebut, secara matematik perhitungan LOD dan LOQ
diperoleh melalui garis regresi linier dari kurva baku metanil yellow. Hasil
perhitungan nilai batas deteksi (LOD) diperoleh 0,2197 ppm dan nilai batas
kuantifikasi (LOQ) diperoleh 0,6659 ppm.
Metode spektrofotometer visibel yang digunakan memiliki keterbatasan yaitu
harus memberikan serapan antara 0,2 0,8 untuk memenuhi hukum Lambert-Beer.
Hasil LOD dan LOQ hitung sangatlah rendah dan tidak masuk dalam serapan 0,2
0,8 maka diperlukan untuk mengetahui nilai LOQ praktek. Pada penelitian ini
konsentrasi kurva baku terendah adalah 6 ppm kemudian dibaca pada panjang
gelombang 433 nm, jika absorbansinya di atas 0,200 maka dibuat konsentrasi di
bawah 6 ppm sampai diperoleh absorbansi 0,200. Hasil nilai LOQ praktek diperoleh
4,5 ppm dengan absorbansi 0,2083 yang dapat dilihat pada tabel 4.1.
Tabel 4.1 Batas LOQ dari uji spektrofotometer
No.
1.
2.
3.
4.
4.1.3

Konsentrasi

Absorbansi

4,3
4,4
4,5
4,8

0,1730
0,1898
0,2083
0,2345

Presisi
Presisi merupakan derajat penyesuaian antara beberapa hasil analisis yang

diukur dengan cara yang sama. Nilai presisi biasanya dinyatakan dalam bentuk nilai
RSD (Relative Standard Deviation). Pada penelitian ini pengujian presisi dilakukan
pada konsentrasi 8 ppm dengan replikasi sebanyak enam kali yang dapat dilihat pada

tabel 4.2. Metanil yellow memiliki nilai RSD 0,127%. Nilai tersebut memiliki nilai
RSD yang baik sesuai dengan ketentuan AOAC, yaitu kurang dari 6%.
Tabel 4.2 Hasil perhitungan presisi
Kadar metanil
No
1
2
3
4
5
6

yellow (ppm)
8
8
8
8
8
8

Absorbansi
0,3947
0,3958
0,3957
0,3948
0,3956
0,3949

Konsentrasi
(ppm)
7,9931
8,0164
8,0146
7,9965
8,0118
7,9986
SD = 0,0102
RSD (%) = 0,127%

4.1.4

Akurasi
Akurasi atau kecermatan adalah ukuran yang menunjukan derajat kedekatan

hasil analis dengan kadar analit yang sebenarnya. Akurasi dinyatakan sebagai persen
perolehan kembali (recovery) analit yang ditambahkan. Pada penelitian ini akurasi
ditentukan dengan menambahkan standar metanil yellow 80%, 100% dan 120% dari
kadar analit yang diperoleh dari sampel. Adapun hasil dan perhitungan recovery
terdapat pada tabel 4.3.

Tabel 4.3 Hasil dan perhitungan akurasi

Akurasi Replikasi

Kadar
(x)

Kadar

Kadar

Recovery

standar

sampel

(%)

(ppm)

(ppm)

Rata- rata
Recovery
(%)

80%

1
2
3

10,75
10,70
10,70

100%

1
2
3

12,03
11,94
11,91

120%

1
2
3

13,84
13,33
13,23

6,31

92,63%
91,64%
91,64%

91,97%

5,99

6,31

95,49%
93,98%
93,48%

94,31%

7,25

6,31

103,86%
96,82%
95,44%

98,70%

4,79

Pada tabel 4.4 recovery (%) metanil yellow yang diperoleh antara 91,97% 98,70%.

Nilai akurasi yang memenuhi kriteria yang direkomendasikan oleh

Association of Official Analytical Chemists (AOAC) adalah 85-115%(23). Hasil yang

diperoleh memenuhi kriteria AOAC sehingga memiliki nilai akurasi yang baik.
4.2 Analisis kualitatif Dengan Kromatografi Lapis Tipis Menggunakan Benang
Wol
Preparasi sampel mengacu pada SNI 01-2895-1992 Cara Uji Pewarna
Tambahan

Makanan

yang

dikembangkan

dengan

kromatografi

lapis

tipis

menggunakan benang wol. Sebelum digunakan, benang wol direndam pada n-hexana
untuk menghilangkan lemak yang terkandung dalam benang wol.
Mie kuning basah 10 gram dilembutkan kemudian ditambahkan asam asetat
agar mie dalam keadaan asam, kemudian dimasukkan benang wol untuk meyerap
warna pada mie kuning. Benang wol yang telah menyerap warna kemudian
dipanaskan dan ditambahkan amoniak agar pewarna yang menempel pada benang
wol luntur, kemudian residu yang didapat ditotolkan pada plat kromatografi. Plat
yang telah ditotol siap untuk dielusi sampai tanda batas, adapun hasil elusi yang
diperoleh seperti gambar 4.3. Fase gerak yang digunakan yaitu n-butanol, asam
asetat glasial, dan akuades (4:5:1), diaduk hingga homogen. Dimasukkan ke dalam
chamber kromatografi. Larutan siap untuk digunakan.

Gambar 4.3 Hasil elusi mie kuning basah

Keterangan: 1. Standar metanil yellow 2. Sampel 1 3. Sampel 2
Fase gerak yang digunakan adalah n-butanol : asam asetat glasial : akuades (4 : 5 : 1) dan fase diam
menggunakan silica GF 254. Hasil elusi dilihat secara visual

Pada gambar 4.3 terdapat tiga totolan yaitu totolan nomor 1 adalah standar
metanil yellow, nomor 2 adalah sampel 1 dan nomor 3 adalah sampel 2. Sampel 1
sama sekali tidak menimbulkan bercak yaitu negatif mengandung metanil yellow,
sedangkan sampel 2 terdapat bercak yang sejajar dengan standar metanil yellow
sehingga sampel 2 positif mengandung metanil yellow. Sampel 2 memiliki nilai Rf
dan hRf seperti pada tabel 4.4.

Tabel 4.4 Nilai Rf dan hRf kromatografi lapis tipis

Keterangan

Standar
Sampel 1
Sampel 1
Sampel 2
Sampel 2

Jarak titik

Jarak garis

pusat bercak

depan dari titik

dari titik awal

awal (cm)

(cm)
10
0
0
10
10

11
0
0
11
11

Nilai Rf
(cm)

Nilai hRf %

0,9
0
0
0,9
0,9

90
0
0
90
90

4.3 Analisis Kuantitatif (Penetapan Kadar Metanil Yellow pada Mie Kuning
Basah) dengan Spektrofotometri Visibel
Penetapan kadar metanil yellow pada mie kuning basah menggunakan metode
spektrofotometri visibel. Pembacaan absorbansi dilakukan pada panjang gelombang
maksimum yang sebelumnya telah dilakukan dengan standar metanil yellow. Panjang
gelombang maksimum standar metanil yellow adalah 433 nm. Kadar metanil yellow
dalam mie kuning basah dapat dilihat pada tabel 4.5.
Tabel 4.5 Kadar metanil yellow dalam mie kuning basah
Sample

Absorbansi

Konsentrasi (ppm)

Replikasi 1

0,3106

6,3006

Replikasi 2

0,3118

6,3236

Replikasi 3

0,3122

6,3319

Metanil yellow pada mie kuning basah sampel satu menunjukkan hasil negatif
sehingga tidak dilakukan penetapan kadar. Mie kuning basah sampel ke dua positif
mengandung metanil yellow dengan kadar rata rata 6,31 ppm atau setara dengan
31,539 mg/kg. Sampel ke dua tersebut tidak memenuhi persyaratan pewarna makanan
menurut Permenkes RI No. 239/Menkes/PER/V/1985 tentang tentang zat warna
tertentu yang dinyatakan sebagai bahan berbahaya, karena pewarna metanil yellow
termasuk ke dalam salah satu zat warna yang dilarang digunakan sebagai pewarna
makanan.
Pada penelitian ini memiliki keterbatasan karena hanya melakukan parameter
validasi linearitas, batas kuantifikasi, presisi, dan akurasi. Metanil yellow termasuk
kedalam kategori II sub kategori kuantitatif yaitu uji kuantitatif untuk penentuan zat
pengotor (kontaminan). Parameter validasi yang harus dilakukan pada kategori II
untuk uji kuantitatif adalah akurasi, presisi, spesifitas, batas kuantifikasi (LOQ),
liniearitas, rentang dan robustnest.

BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.2

Kesimpulan

Kesimpulan yang diperoleh dari penelitian ini adalah sebagai berikut:

1.
Parameter validasi metode analisis kuantitatif metanil yellow pada mie kuning
basah yang dilakukan telah memenuhi kriteria Association of Official
Analytical Chemists (AOAC). Nilai LOD dan LOQ praktek yaitu 4,5 ppm
dengan absorbansi 0,2083. Nilai RSD yang diperoleh adalah 0,127%. Nilai
tersebut memiliki nilai RSD yang baik sesuai dengan ketentuan AOAC, yaitu
kurang dari 6%. Nilai recovery metanil yellow yang diperoleh adalah 91,989%
- 98,612%, nilai akurasi yang memenuhi kriteria yang direkomendasikan
2.

sehingga memiliki akurasi yang baik.

Terdapat 2 mie kuning basah yang dianalisis dan hanya satu yang positif
mengandung metanil yellow yaitu pada sampel 2. Pada sampel 2 terdapat
bercak yang sejajar dengan standar metanil yellow dan memiliki nilai Rf 0,9

3.

dan hRf 90%.

Kadar metanil yellow pada mie kuning basah memiliki nilai 6,31 ppm atau
setara dengan 31,539 mg/kg.

5.2 Saran
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, peneliti menyarankan:
1.

Perlu dilakukan uji ketahanan metode, kekerasan metode untuk mengetahui

ada tidaknya pengaruh perbedaan oprasi lingkungan kerja pada hasil uji.
39

2.

Perlu dilakukan uji selektifitas sehingga diperoleh metode yang selektif dan
tidak terganggu zat lain yang terdapat dalam sampel.

3.

Perlu dilakukan akurasi dan presisi pada LOQ praktek.

4.

Perlu dilakukan validasi metode pada analisis kualitatif.

5.

Untuk memberikan warna yang menarik pada mie terdapat alternatif bahan
tambahan alami pengganti metanil yellow yaitu kunyit dan bahan pewarna
yang dizinkan.

6.

Perlu pengawasan pemerintah yang lebih baik, seperti penyuluhan kepada

produsen mie kuning basah untuk menggunakan bahan pewarna alami atau
pewarna yang diizinkan.

7.

Perlu dilakukan penelitian dengan menggunakan sampel-sampel mie kuning

basah yang beredar dipasaran yang memiliki tingkat warna kuning yang cerah.

DAFTAR PUSTAKA
(1)
(2)

Cahyadi, W, 2008, Analisis dan Aspek Kesehatan Bahan tambahan Pangan,

Bumi Aksara, Jakarta. 63-65p
Anonim, 1990, Ditjend POM No. 00386/C/SK/II/90 tentang Perubahan
Lampiran Per. Men. Kes. RI No: 239/Menkes/Per/85 tentang zat Warna

(3)
(4)
(5)
(6)

(7)
(8)
(9)
(10)
(11)
(12)
(13)
(14)
(15)
(16)
(17)

(18)
(19)

Tertentu yang Dinyatakan Sebagai Bahan berbahaya, Ditjend POM, Jakarta.

11p
Anonim, 2008, Zat Berbahaya dalam Makanan, diakses pada tanggal 10
Oktober 2015,2-3p
Anonim, 2008, Badan Pengawasan Obat dan Makanan tentang Keamanan
Pangan Jajanan Anak Sekolah (PJAS) serta Upaya Penanggulangannya.
Badan POM RI. Vol 9 No. 6, 4p
Astawan, M, 2006, Membuat Mie dan Bihun. Penebar Swadaya, Jakarta 1935p
Zakaria, F.R, 1996. Sintesis Senyawa Radikal dan Elektrofil Dalam dan
Komponen Pangan. Editor : Dewanti, R dan Yasni, S.Prosiding Seminar
Senyawa Radikal dan Sistem Pangan. Pusat Studi Pangan dan Gizi.IPB dan
Kedutaan Besar Perancis Jakarta. 77 -80p
Rahman, A, 2007, Metode Kromatografi Untuk Analsis Makanan, Yogyakarta,
Pustaka Pelajar 25p
Frankhauser, D.B, 2007, Spectrophotometer Use, diambil dari
http://biology.clc.uc.edu/fankhauser/Labs/Microbiology/Growth_Curve/Spectr
ophotometer.htm, diakses 1 Januari 2015.
SNI 2895-1992, tentang Zat Tambahan Pewarna Makanan,
http ://sisni.bsn.go.id./index.php/sni_main/sni/detail_sni/3285 Diakses Mei
2015, 1-11p
Khopkar, S, M. 2007. Konsep Dasar Kimia Analitik. Universitas Indonesia
Press Jakarta : 153-156p
Sumarlin L.O Identifikasi Pewarna Sintetis pada Produk Pangan yang Beredar
di Jakarta dan Ciputat. Program Studi Kimia FST UIN Syarif Hidayatullah
Jakarta.1-10p
Anonim, 2002, AOAC Guidelines For Single Laboratory Validation of
Chemical Methods For Dietaryu Suplement and Botanicals, Nature of
Determinaton 19-20p
Winarno, F. G, 2002, Kimia Pangan dan Gizi, Gramedika Pustaka Utama,
Jakarta 45p
Baliwati, 2004, Pengantar Pangan dan Gizi, Penebar Swadaya, Jakarta 40p
Sapartino, H, 2006, Bahan Tambahan Pangan. Kinisius : Yogyakarta 30-31p
Anonim, 2012, PER. Men. Kes. RI No. 033/2012 tentang Bahan Tambahan
Pangan, Ditjend. POM. Jakarta 7p
Fadila, 2013, Analisis Kualitatif dan Kuantitatif Kuning Metanil Pada sampel
Tahu dan Air RendamanTahu Menggunakan Kromatografi Lapis Tipis dan
Spektrofotometri Sinar Tampak (skripsi). Program studi farmasi, Universitas
Islam Bandung. 77p
Anonim, 1979, Farmakope Indonesia, Edisi III, Departement Kesehatan
Indonesia Jakarta 427-428.
Budiarto T.I, 1983, Kelainan Patologi pada Mencit dan Tikus Disebabkan Zat
Warna Rhodamine B dan Metanil Yellow. Buletin Penelitian Kesehatan Vol XI
No. 1, 55-56p

(20)

(21)
(22)
(23)
(24)
(25)
(26)

Gupta, S, 2003, Tumor Promoting By Metanil Yellow and Malachite Green

During Rat Hepatocarcinogenesis Is Associated with Dyes Regulated
Expression of Cell Cycle Regulatory Proteins, Teratogenesis, carcinogenesis
and mutagenic, 01: Cancer Researches Institut, India 301-312
BPOM RI. 2012. Laporan Tahunan 2012 Bdan Pengawasan Obat dan
Makanan RI. Jakarta : Badan POM RI 24p
Astawan, M, 2008. Membuat Mie dan Bihun. Penebar Swadaya, Jakarta 21p
Frankhauser, D.B, 2007, Spectrophotometer Use, diambil dari
http://biology.clc.uc.edu/fankhauser/Labs/Microbiology/Growth_Curve/Spectr
ophotometer.htm, diakses 1 Januari 2015. 3-5p
Gandjar,I,G, 2011. Kimia Farmasi Analisis, Yogyakarta: Pustaka Pelajar : 221222p
Anonim, 2013, Acuan Standar Metode Pengujian Badan Pengawas Obat dan
Makanan. 11p
Anonim, 2002, AOAC Guidelines for Single Laboratory Validation of
Chemical Methods for Dietary Supplements and Botanicals, available at
http://www.aoac.org/imis15_prod/AOAC_Docs/StandardsDevelopment/SLV_
Guidelines_Dietary_Supplements.pdf diakses Mei 2015