Anda di halaman 1dari 36

XILANASE DAN SELULASE SEBAGAI

FEED DDITIVE
M. PALOHEIMO, J. PIIRONEN AND J. VEHMAANPER
Pengantar
Global ukuran pasar enzim pakan saat ini diperkirakan sekitar US $ 550-600000000,
phytase memiliki pangsa terbesar dari sekitar 50% dari ini dan polisakarida non-pati (NSP)
enzim berkontribusi terhadap sisa 50%, xilanase memiliki pangsa slighter lebih besar dari glucanases (James Laughton, komunikasi pribadi, Danisco Animal Nutrition, 30 Oktober 2008.
-glucanases dan xilanase telah digunakan sebagai aditif pakan untuk lebih dari 20 tahun dan
kemampuan mereka untuk meningkatkan rasio konversi pakan dan berat gain hewan
monogastrik (unggas dan babi) telah ditunjukkan dalam berbagai publikasi. Penggunaan enzim
ini telah dibatasi terutama untuk unggas dan babi, meskipun penelitian yang berfokus pada enzim
tambahan untuk ruminansia, ikan serta bulu dan hewan peliharaan hewan juga telah dilakukan
selama tahun terakhir (Dawson, 1993; Cowan, 1995; Twomey et al, 2003;. Brzozowski dan
Zakzewska-Czarnogrska, 2004; Valaja dkk., 2004; Farhangi dan Carter, 2007).
Pati, protein dan lipid dapat dengan mudah didegradasi oleh burung dan babi sistem
pencernaan sendiri, sedangkan bagian utama dari NSP (larut dan tidak larut) tetap utuh karena
kurangnya aktivitas enzim yang cocok dalam saluran pencernaan hewan.
Efek gizi positif yang dicapai dengan penambahan enzim dalam pakan diusulkan
disebabkan oleh beberapa mekanisme. Pertama, telah ditunjukkan bahwa efek anti-gizi 'sereal
kental' (barley, gandum, rye, gandum dan triticale) berhubungan dengan mengangkat viskositas
usus yang disebabkan oleh larut beta-glukan dan arabinoxylans ('pentosan') hadir pada mereka
sereal (Bedford dan Classen, 1992; Choct dan Annison, 1992; Bedford dan Morgan, 1996). Ini
menyimpan sejumlah cant signifikan dari air dan, karena viskositas tinggi yang dihasilkan,
penyerapan nutrisi menjadi terbatas. Dalam kondisi praktis ini dapat dipandang sebagai rasio
konversi pakan dikurangi (FCR) dan berat badan, serta basah kotoran pada unggas. Masalah ini
diatasi dengan penambahan -glucanases dan xilanase, sehingga meningkatkan kinerja hewan.
Laints benefi suplementasi enzim pada unggas terkait dengan viskositas digesta termasuk
pengurangan jumlah telur kotor dan ditingkatkan warna kuning telur.

Hasil dari beberapa penelitian menunjukkan bahwa enzim dapat meningkatkan kinerja
hewan juga dengan 'sereal non-kental' seperti jagung dan sorgum (Choct, 2006), atau pada babi,
di mana modus tindakan berbeda dari unggas karena perbedaan sistem pencernaan (Dierick dan
Decuypere, 1994). Sebagai akibatnya, itu secara luas diasumsikan bahwa kemampuan glucanases dan xilanase untuk menurunkan dinding sel tanaman mengarah untuk melepaskan
nutrisi dari biji-bijian endosperm dan lapisan aleuron sel. Oleh karena itu, mekanisme ini juga
dapat dianggap sebagai penting untuk meningkatkan nilai energi pakan.
Mekanisme yang diusulkan ketiga memiliki infl pengaruh positif pada gizi Nilai pakan
adalah efek prebiotik dicapai melalui rilis oligosakarida (Choct dan Cadogan, 2001).
Oligosakarida adalah karbohidrat cadangan, yang dimobilisasi dari organ penyimpanan seperti
benih dan umbi selama pengecambahan. Mereka dapat juga terbentuk selama degradasi
penyimpanan dan karbohidrat dinding sel oleh enzim tambahan. Kimia mereka didefinisakan
sebagai glikosida yang mengandung antara tiga dan sepuluh gugus gula. Pada hewan yang
oligosakarida yang berasal dari sel pencernaan dinding menahan serangan dari pencernaan
enzim, sehingga mampu mencapai usus besar, di mana mereka bekerja sebagai 'prebiotik'
mendukung proliferasi benefi resmi microfl ora seperti Bifi dobacterium dan Lactobacillus spp.,
Dan pada saat yang sama menekan pertumbuhan pathogen bakteri seperti Salmonella,
Clostridium, Campylobacter dan Escherichia coli (Thammarutwasik et al., 2009).
Selain nilai energi meningkat diperoleh melalui berbagai mekanisme, penggunaan NSP
enzim juga menyediakan ts benefi lainnya. Diet formulasi telah menjadi lebih fleksibel ketika
perbedaan dalam bahan pakan Kapasitas cerna kualitas atau hewan dapat dikontrol oleh
tambahan enzim. Juga, suplemen enzim memungkinkan penggunaan yang lebih besar dari bahan
baku nilai gizi yang lebih rendah. Ini termasuk oleh-produk, seperti dedak, yang biasanya kaya fi
bre. Selanjutnya, dengan meningkatkan kecernaan bahan baku NSP enzim dapat mengurangi
jumlah massa feses. Namun, yang paling terkenal manfaat lingkungan belum diperoleh NSP
enzim phytase tetapi dengan suplementasi.
Sebagai aturan sederhana, dapat disimpulkan bahwa -glucanases biasanya digunakan
dalam barley- dan diet berbasis oat, sedangkan xilanase secara tradisional dianjurkan untuk diet
berbasis gandum. Karena struktur kompleks sereal biji-bijian, telah menunjukkan bahwa
peningkatan kinerja dapat diperoleh dengan kombinasi yang tepat dari aktivitas enzim yang

berbeda (Dusterhoft et al., 1993). Dalam hal sereal, kombinasi xilanase / -glukanase yang
umum.
Dalam bab ini, gambaran -glucanases (selulase) dan xilanase dan produksi mereka akan
diberikan. Penekanan akan berada di enzim saat produk di pasar. Juga, pengembangan enzim
pakan yang diproduksi selama beberapa tahun terakhir dan kemungkinan tren masa depan akan
dibahas.
Substrat
Struktur umum dari selulosa dan -glukan
Selulosa adalah biopolimer yang paling berlimpah di Bumi, tanaman memproduksi
sekitar 180 miliar per tahun t global. Dinding sel tanaman biasanya terdiri dari sekitar 35-50%
selulosa, 20-35% hemiselulosa dan lignin 10-25% massa kering (Sticklen, 2008). Selulosa adalah
air-larut -glukan yang terdiri dari linear molekul hingga 15.000 residu D-anhydroglucopyranose
dihubungkan oleh - (1 4) obligasi. Anhydrocellobiose adalah unit pengulangan dari selulosa
yang gugus glukosa yang berdekatan diputar 180 sehubungan dengan segera mereka tetangga
(Gambar. 2.1). The brils microfi selulosa diselaraskan secara parallel untuk membuat daerah
kristalin dengan ikatan hidrogen maksimal. Daerah lainnya dari fi bril kurang terorganisir dan
bentuk paracrystalline (amorf) bagian. Seperti dijelaskan di bawah bawah selulase,
endoglukanase diyakini menyerang daerah amorf dan ujung rantai produksi yang berfungsi
sebagai substrat untuk yang exoglucanases (cellobiohydrolases). Ini yang terakhir menghasilkan
enzim selobiosa disakarida (Gambar. 2.1), yang dihidrolisis untuk dua monomer glukosa oleh glukosidase (Bhat dan Hazlewood, 2001; Zhang dan Lynd, 2004; Aro et al, 2005.; Sticklen,
2008).
Dalam mempeajari selulase, beberapa substrat Model selulosa dengan berbagai tingkat
kristalinitas digunakan. Bakteri mikro-kristal selulosa (BMCC) dari

Presentasi skema struktur selulosa (courtesy dari US Department of


Sistem energi Genome Program Manajemen Genome Informasi (GMIS)
Acetobacter xylinum adalah selulosa sangat kristal, sedangkan substrat Modelberasal dari
pulp kayu komersial dikelantang, seperti Avicel, kertas tapis (FP) dan Solka Floc, dianggap
sebagai campuran amorf dan Kristal selulosa. Asam fosfat-bengkak selulosa (PASC atau Walseth
selulosa) adalah dianggap amorf (dikutip dalam Zhang dan Lynd, 2004). Larut diganti selulosa
seperti hydroxylethyl selulosa (HEC) dan karboksimetil selulosa (CMC) terutama digunakan
dalam enzim tes aktivitas (Ghose, 1987). Kromogenik -glukosida seperti metil-umbelliferyllactoside (MULAC atau MUL) atau cellobioside (MUC) yang umum digunakan dalam
penelitian dan dapat membantu dalam membedakan antara berbagai kegiatan selulolitik (Tomme
et al., 1988a).
Sereal -glukan yang larut dicampur-linkage (1 3), (1 4) --D-glukan. (1 3)
-linkages memecah struktur seragam molekul -D-glucan dan membuatnya larut dan fleksibel.
Misalnya, -glukan dalam barley (Hordeum vulgare) sebagian besar terdiri dari - (1 4)
cellotriosyl -linked dan cellotetraosyl unit dihubungkan oleh - (1 3) obligasi (Buliga et al,
1986;. Wood et al., 1994; Planas, 2000).
Dalam jamur dan ragi, elastisitas dinding sel dan kekuatan disediakan oleh bercabang (1 3) -D-glukan dengan derajat polimerisasi sekitar 1500 unit glukosa dan memiliki -1,6 link

merantaikan. Ragi dan jamur memiliki kedua lebih pendek dan - amorf (1 6) -D-glucan,
yang bertindak seperti lem fleksibel antara sel polimer dinding (Lesage dan Bussey, 2006).
Dalam beberapa tes enzimatik, lichenin berasal dari lumut Islandia Cetraria islandica dan
memiliki struktur yang mirip dengan sereal -glukan telah bekas. Polimer ini terdiri dari
sebagian besar - (1 3) unit cellotriosyl -linked, unit cellopentaosyl terkait menjadi fitur yang
paling umum kedua (Planas, 2000; Tosh et al., 2004). Laminarin, polimer -1,3-glukan berasal
dari brown alga Laminaria digitata, umumnya digunakan dalam karakterisasi enzimatik dari glucanases; memiliki -1,6-linked cabang D-glucosyl diganti pada kira-kira setiap tujuh residu
glukosa, dan dengan demikian menyerupai sel jamur dinding (Kawai et al., 2005).
Struktur umum xilan
Polisakarida Hemicellulosic (termasuk xilan) ditemukan di semua terrestrial tanaman,
dari hutan, rumput dan sereal (Aspinall, 1959; Wilkie, 1979; Sjostrom, 1993). Mereka awalnya
Defi didefinisikan sebagai mereka polisakarida tanaman yang dapat dipisahkan dari selulosa
dengan ekstraksi dengan solusi alkali air. Hemiselulosa yang terkait erat dalam jaringan tanaman
dengan selulosa dan lignin, dan mereka paling sering adalah polisakarida struktural dalam
jaringan ini. Hemiselulosa terdiri dari kelompok kompleks dan beragam polimer yang heterogen
di komposisi mereka, memiliki rantai bercabang dan terdiri dari berbagai gula unit. Hemiselulosa
diberi nama sesuai dengan unit monomer gula utama di struktur tulang punggung mereka.
Dengan demikian, xylans adalah polimer dengan unit D-xylose dalam rantai utama dan mereka
dengan D-mannose, L-arabinosa dan D-galaktosa disebut sebagai mannans, arabinans dan
galaktan, masing-masing.
Xilan adalah komponen utama dari hemiselulosa dan, setelah selulosa, yang kedua
polisakarida paling melimpah di alam. Xylans account untuk 30-35% dari bahan dinding sel
tanaman tahunan (rumput dan sereal), 15-30% dari kayu keras dan 7-10% dari kayu lunak
(Wilkie, 1979; Ladisch et al, 1983.; Sjostrom, 1993). Karena keberadaan cant signifikan dari
xylans pada tanaman itu berfungsi sebagai konstituen utama pakan ternak.
Rantai utama xylan terdiri dari 1,4--D-xylopyranose terkait unit (Aspinall, 1959; Wilkie,
1979, Sjostrom, 1993). Tingkat rata-rata polimerisasi tergantung pada sumber, tetapi rantai xilan
jelas lebih pendek dari rantai selulosa, rata-rata sekitar 200 residu di kayu xylan dan lebih dari
120 residu di xilan kayu lunak (Sjostrom, 1993). Di mayoritas xylans ada berbagai kelompok
substituen yang melekat unit xilosa. Kelompok-kelompok ini menentukan kelarutan, viskositas

dan lainnya sifat fisiko-kimia xilan. Tingkat dan sifat dari kelompok substituen bervariasi
tergantung pada, misalnya, sumber botani, jaringan, usia dan waktu panen tanaman (Ulasan di
Wilkie, 1979). Kayu keras biasanya berisi O-asetil-4-O-methylglucurono--Dxylan dan kayu
lunak arabino-4-O-methylglucuronoxylan, sedangkan xylan yang di dinding sel tanaman
tahunan, sereal dan rumput biasanya arabinoxylan. Ada dua jenis utama dari arabinoxylan, yang
ditemukan dari endospermic dan jaringan non-endospermic. Namun, di kedua arabinoxylans ini,
Kelompok L-arabinosa secara langsung terkait dengan tulang punggung D-xilan, untuk posisi 3
(lebih biasa) atau 2, dan selalu ditemukan dalam bentuk furanose (Aspinall, 1959; Wilkie, 1979).
The arabinoxylan non-endospermic mengandung, diSelain a-L-arabinofuranose, beberapa asam
glukuronat dan / atau 4-O-metil D-glukuronat asam dan asetil dan galaktosa sebagai sisikelompok. Sidegroups ini melekat pada posisi 3 dan 2 dari residu xylose (Aspinall, 1959). The
xylans endospermic ditemukan dalam sereal sangat bercabang dan mereka dapat akan dua kali
lipat digantikan oleh -L-arabinofuranose di kedua posisi 3 dan 2 (Wilkie, 1979). Substitusi
asam uronic telah dicatat jarang di arabinoxylan endospermic (Wilkie, 1979). Kedua
endospermic dan nonendospermic xylans mungkin mengandung asam ferulat dan p-coumaric
acid yang, saat ini, melekat pada struktur arabinofuranose. Rantai xilan mungkin silang satu
sama lain dengan diesterifi ed residu asam diferulic. Gambar 2.2 menunjukkan representasi
skematik arabinoxylan structural unit. Sejak xilosa dan arabinosa keduanya gula pentosa,
arabinoxylans adalah pentosan sering diistilahkan.
beta-Glucan dan xilan dalam pakan
Dinding sel biji-bijian sereal dan biji lainnya terdiri dari hemiselulosa, seperti
arabinoxylans, dan -glukan, selulosa, zat pektin, lignin, fenolat dan protein (Selvendran et al.,
1987). Kimia, polisakarida dari tanaman dikotil seperti kacang-kacangan atau biji minyak adalah
jauh lebih kompleks kelompok daripada monokotil, dan struktur kimianya masih belum baik defi
ned. Meskipun banyak upaya untuk mengembangkan persiapan enzim untuk dicotyledons dapat
ditemukan, persiapan enzim di pasar masih terutama difokuskan pada peningkatan biji-bijian
sereal.

Presentasi Skema unit struktural arabinoxylan. Hanya substituen utama kelompok, Larabinofuranosidase, ditandai. Xyl, D-Xylopyranose; Araf, L-arabinofuranosidase (diadaptasi
dari Andersson et al., 1992).
Arabinoxylans dan dicampur-linked -glukan adalah dinding sel dominan polisakarida
penyimpanan dalam biji-bijian sereal, di mana mereka berada di dalam sel dinding endosperm
tepung dan lapisan aleuron, pada khususnya. Ini adalah sebagian fraksi berharga dari biji-bijian
sereal dan karena itu telah dikenakan penelitian yang luas dalam banyak aplikasi. Rasio pentosan
(xilan) ke -glukan bervariasi dari 1: 3 untuk jelai ke lebih dari 10: 1 untuk gandum dan triticale
(Henry, 1985).
Arabinoxylans mendominasi gandum dan gandum hitam, sedangkan campuran-linked (1
3), (1 4) --D-glukan mendominasi dalam barley dan gandum. Sebagian besar -glukan
adalah terletak di dinding sel endospermic, tetapi lapisan aleuron juga kaya -glukan. betaGlucan diisolasi dari barley terdiri dari rantai linear dengan sekitar 30% (1 3) -linked dan 70%
(1 4) -linked -D-glucopyranosyl (ditinjau oleh Hesselman, 1983). Struktur barley -glucan
diilustrasikan pada Gambar. 2.3.
Proporsi total polisakarida dinding sel dalam sereal dipengaruhi oleh faktor genetik,
faktor iklim, tahap kematangan, penggunaan pupuk nitrogen dan waktu penyimpanan
pascapanen (ditinjau oleh Jeroch dan Dnicke, 1995).
Kelarutan polisakarida dinding sel bervariasi dari biji-bijian untuk biji-bijian. Ini,
ditambah dengan ukuran molekul fraksi larut, merupakan faktor penting karena polisakarida larut
dikenal untuk mengurangi kinerja hewan, terutama di broiler. Jumlah -glukan dalam fraksi yang
larut dalam air.

Presentasi skema jelai dicampur-linked - (1 3), (1 4) struktur -D-glucan. GLC, glukosa


(diadaptasi dari Bielecki dan Galas, 1991).
dari barley lebih dari empat kali lipat dari pentosan, sementara di rye, pentosan kadarnya
lebih dari tiga kali orang-orang dari -glukan (Henry, 1985). Dalam barley pada Rata-rata 54%
dari total -glukan larut dan gandum 80% (AMAN dan Graham, 1987). Dalam gandum dan
gandum hitam sepertiga atau lebih dari arabinoxylan adalah larut dalam air (Chesson, 1995).
Juga, perlakuan panas, seperti pelet dari pakan, dikenal untuk meningkatkan kelarutan
polisakarida.
Enzim
Kelas Enzim
NSP enzim dalam pakan secara tradisional telah diklasifikasikan menurut IUB Enzim
Nomenklatur (Bairoch, 2000) dan milik glikosil yang hidrolase (EC 3.2.1.x). Kation klasifi ini
didasarkan pada kedua jenis reaksi dan kota spesifik substrat, misalnya -glucanases hydrolysing
-glukan, seperti yang ditemukan di barley, dan xilanase bertindak atas xilan. Sebagian besar
hidrolase glikosil adalah endo-enzim bertindak, memotong di tengah rantai polimer dan
mengurangi kekentalan cepat.
Barley -glukan 1,3-1,4-, yang -glucan utama dalam pakan ternak, terutama terdiri dari
cellotriosyl dan cellotetraosyl residu dihubungkan oleh ikatan -1,3-glikosidik (Kayu et al.,
1994). The enzimatik depolimerisasi dari -glukan dikatalisis oleh setidaknya kelas enzim
berikut: endo-1,4--D-glucan 4-glucanohydrolase (selulase; EC 3.2.1.4), endo-1,3--D-glucan 3glucanohydrolase (laminarinase; EC 3.2.1.39), endo-1,3 (4) --glukanase (EC 3.2.1.6) dan endo-1,3-1,4-D-glucan 4-glucanohydrolase (lichenase; EC 3.2.1.73) (Bairoch, 2000; Planas, 2000).
Endo-1,4--glukanase (EC 3.2.1.4) menghidrolisis (1 4) --D-glukosida hubungan
dalam selulosa, lichenin dan sereal -D-glukan. 1,3 (4) --glukanase (EC 3.2.1.6) mengkatalisis

endohydrolysis dari (1 3) - atau (1 4) -linkages di -D-glukan ketika residu glukosa yang


mengurangi kelompok yang terlibat dalam hubungan untuk dihidrolisis adalah dirinya diganti
pada C-3. Laminarinase (EC 3.2.1.39) hidrolisis laminarin, paramylon dan pachyman dan
memiliki tindakan yang sangat terbatas pada campuran-link (1 3), (1 4) --D-glukan.
Lichenase (EC 3.2.1.73) bekerja pada lichenin dan sereal -D-glukan, tetapi tidak pada -Dglukan yang hanya berisi 1,3- atau 1,4-obligasi. Aktivitas enzim utama depolymerizing xylan,
endo 1,4--xilanase catalysing yang endohydrolysis dari (1 4) keterkaitan --D-silosidik,
ditunjuk sebagai EC 3.2.1.8 dalam sistem IUB (Bairoch, 2000). IUB ini kation klasifi tidak refl
dll fitur struktural enzim dan karena itu Pendekatan lain telah diambil untuk mengklasifikasikan
enzim (Henrissat, 1991). Ini berdasarkan kali lipat atau urutan kesamaan antara enzim dan telah
sangat difasilitasi oleh akumulasi data pada urutan gen dan tiga dimensi struktur. Database CAZy
(enzim-Karbohidrat Active) dipertahankan pada http://www.cazy.org dan saat ini daftar 115
glikosida keluarga hidrolase. The -glukan-menghidrolisa enzim yang tersedia secara komersial
milik keluarga GH 5 (EC 3.2.1.4, EC 3.2.1.73), GH 7 (EC 3.2.1.4), GH 12 (EC 3.2.1.4), GH 45
(EC 3.2.1.4) dan GH 16 (EC 3.2.1.39, EC 3.2.1.6, EC 3.2.1.73); database CAZy menunjukkan
entri -glukanase dalam sepuluh tambahan keluarga glikosida hidrolase. Menurut Collins et al.
(2005), yang xilanase milik GH keluarga 5, 7, 8, 10, 11 dan 43 dan, di samping itu, keluarga GH
16, 52 dan 62 mengandung enzim bi-fungsional yang memiliki Setidaknya satu domain xilanase.
Sebagian besar xilanase ditandai, bagaimanapun, milik keluarga 10 dan 11 (mantan keluarga F
dan G, masing-masing) (Gilkes et al., 1991; Henrissat dan Bairoch, 1993). Selain itu, database
CAZy tidak mengklasifikasikan urutan dengan aktivitas xilanase (EC 3.2.1.8) ke GH keluarga 7.
Keluarga glikosida hidrolase dikelompokkan dalam klan berdasarkan terkait struktur tiga
dimensi, dan di kasi klasifi ini keluarga 5 dan 10 adalah anggota GH-A klan, keluarga 7 dan 16
dari klan GH-B dan GH 11 dan GH12 milik GH-C. Klan GH-A memiliki struktur tiga dimensi
dari ( / ) 8 per barel, sedangkan klan GH-B dan GH-C memiliki struktur gulungan -jelly
(http://www.cazy.org).
Modul Karbohidrat Mengikat
Kebanyakan selulase dan banyak hemicellulases membawa N-terminal atau terminal-C
karbohidrat mengikat modul (CBM). CBMs awalnya disebut cellulosebinding domain (DBM)
karena mereka pertama teridentifi kasi dari selulase dan terbukti memiliki mengikat nity affi
terhadap selulosa (Tomme et al., 1995). CBMs meningkatkan asosiasi enzim dengan substrat

yang tidak larut tetapi tidak penting untuk hidrolisis substrat larut (Ulasan di Tomme dkk., 1995;
Boraston et al., 2004). Pada saat penulisan, CBMs telah dikelompokkan ke dalam 59 keluarga
berdasarkan urutan asam amino mereka kesamaan (CAZy keluarga modul karbohidrat mengikat:
http // www.cazy.org / fam.acc_CBM.html) dan menjadi tujuh 'lipat keluarga'; di samping itu,
mereka dibagi menjadi tiga jenis menurut kesamaan dalam lipatan struktural dan persamaan
struktural dan fungsional di sehubungan dengan mereka mengikat ligan (Boraston et al., 2004).
Umumnya, CBMs berkisar dari sekitar 36-200 asam amino dalam ukuran dan dapat ditemukan
baik di N- atau C-terminus, pada kedua ujungnya dan / atau di tengah enzim (Meissner et al.,
2000). Enzim juga dapat mencakup lebih dari satu CBM dan, dalam kasus beberapa CBMs,
mereka dapat bahkan memiliki sama atau berbeda jenis mengikat kota spesifik (Meissner et al.,
2000).
Semua Trichoderma reesei 'empat besar' selulase (CBHI / Cel7A, CBHII / Cel6A, EGI /
Cel7B dan EGII / Cel5A; lihat bagian pada selulase, bawah) serta sebagai mannanase (Man5A;
Stlbrand et al, 1995.) dan beberapa enzim kecil lainnya terlibat dalam depolimerisasi selulosa
membawa keluarga 1-jenis CBM. Modul keluarga ini ditemukan hampir secara eksklusif di
jamur. Domain mengikat relatif kecil, 36-38 asam amino panjang dan membentuk struktur tiga
dimensi yang memiliki permukaan datar di satu sisi, yang diyakini mengikat selulosa (Linder et
al., 1995; Bourne dan Henrissat, 2001). Pada saat penulisan, 369 CBM keluarga 1 entri
tercantum dalam database CAZy (http://www.cazy.org).
Modul katalitik dan CBMs biasanya terpisah satu sama lain dengan urutan linker, dan
modul yang dalam banyak kasus mampu melipat dan fungsi independen (Ulasan di Gilkes et al,
1991;. Gilbert dan Hazlewood, 1993). The linker memiliki dua peran yang disarankan: (i)
berfungsi sebagai spacer antara dua domain fungsional; atau (ii) sebagai mediator dalam
interaksi yang mungkin dari domain (Teeri et al., 1992). Urutan linker panjangnya bervariasi (659 amino asam) dan tidak ada identitas urutan yang jelas antara linker dari berbagai organisme.
Namun, sebagian besar linker kaya prolin, glisin, serin dan treonin, dan beberapa dari mereka
mengandung berjalan pengulangan berturut-turut urutan pendek. The linker di disekresikan fi
protein jamur lamentous adalah sering berat O-glikosilasi, yang telah diusulkan sebagai
melindungi enzim terikat dari proteolitik (Teeri et al., 1992).
CBM memiliki insignifi aktivitas katalitik tidak bisa tapi, seperti telah disebutkan,
memfasilitasi hidrolisis substrat asli polimer; ketika selulase dengan dan tanpa CBM yang

dibandingkan, aktivitas mereka pada substrat larut seperti CMC atau HEC sebagian besar tetap
tidak berubah, sedangkan kurangnya CBM sebuah mengurangi hidrolisis amorf atau kristal
selulosa untuk sekitar setengah (Suurnkki et al, 2000;.. Voutilainen et al, 2007; Szijrt et al,
2008.). Sebagai Konsekuensinya, karena titik persimpangan antara linker dan katalitik yang inti
rentan terhadap pembelahan proteolitik (Tomme et al., 1988b), hilangnya CBM dapat melarikan
diri pemberitahuan jika aktivitas enzimatik dari persiapan selulase dipantau hanya dengan
pengujian substrat larut.
Terlepas dari pentingnya jelas dari CBMs untuk hidrolisis selulosa, itu Sangat menarik
untuk dicatat bahwa beberapa jamur telah berevolusi untuk pelabuhan selulase utama bahwa
dalam CBMs bentuk kurangnya asli mereka, misalnya Albomyces Melanocarpus (Cel7A, Cel7B
dan Cel45A; Haakana et al., 2004) dan Thermoascus aurantiacus (Cel7A, Cel5A;. Hong et al,
2003a, b).
Selulase
Selulase jamur dan -glucanases
Hidrolisis hanya terbatas atau pengurangan viskositas, daripada hidrolisis lengkap untuk
gula sederhana, diperlukan dari enzim NSP digunakan dalam meningkatkan hewan makan.
Beberapa kelas glucanase mampu membelah obligasi di -glukan ke sejauh diperlukan. Selulase
adalah kelompok enzim yang menghidrolisis selulosa atau - (1,4) -glukan. Enzim milik kelas ini
adalah cellobiohydrolases (EC 3.2.1.91), endoglukanase (EC 3.2.1.4) dan -glucosidases atau
cellobiases (EC 3.2.1.21); yang terakhir biasanya termasuk dalam kompleks selulase meskipun
enzim terutama bekerja pada selobiosa disakarida. Cellobiohydrolases tindakan pada bagian
kristal selulosa, sedangkan endoglukanase diyakini membelah di daerah amorf dari polimer.
Cellobiohydrolases tersedia secara komersial (selulosa 1,4--cellobiosidases) dan
endoglukanase terutama asal jamur. The cellobiohydrolases dapat dibagi menjadi CBHI / Cel7
dan CBHII / Cel6 kelas (sebutan Cel mengacu selulase; Henrissat et al., 1998). Mereka memiliki
exo-aktivitas, menghidrolisa yang rantai selulosa di ujung dengan terutama selobiosa sebagai
produk akhir. CBHI / Cel7 bertindak di ujung mengurangi polimer sedangkan CBHII / Cel6
memotong di non-mengurangi akhir. Sebenarnya, IUB kode EC 3.2.1.91 berlaku hanya untuk
CBHII / Cel6, sebagai nomor mengacu pada selulosa 1,4--cellobiosidases melepaskan selobiosa
dari non-mengurangi akhir (Bairoch, 2000).

Perbedaan dalam modus dari aksi cellobiohydrolases Cel7 dan endoglukanase yang refl
ected dalam struktur tiga dimensi mereka, cellobiohydrolases lipat untuk -sandwich dengan
loop diperpanjang membentuk panjang, selulosa mengikat terowongan, sedangkan T. reesei dan
H. insolens Cel7 / Egis memiliki substrat mengikat sumbing atau alur terbuka (Divne dkk., 1994;
Kleywegt et al., 1997).
Genom jamur memiliki banyak jumlah yang lebih tinggi dari endoglukanase (EC 3.2.1.4)
dari cellobiohydrolases. Penjelasan dari genom T. reesei, yang organisme patokan untuk selulase,
baik sebagai donor serta Platform produksi, mengungkapkan delapan entri untuk endoglukanase
(Martinez et al., 2008). The endoglukanase Trichoderma saat relevan komersial adalah EGI /
Cel7B, EGII / Cel5A dan EGIII / Cel12A. The EGV / Cel45A dan GH 61 endoglukanase
(Karkehabadi et al., 2008) belum, untuk yang terbaik dari kami pengetahuan, terlibat dalam
penggunaan industri. Trichoderma reesei EGI / Cel7B dan EGII / Cel5A adalah endoglukanase
utama disekresi ke dalam media kultur jamur dan merupakan sekitar 20% dari total selulase
(McFarland et al., 2007). Kedua enzim memiliki aktivitas terhadap selulosa larut (CMC dan
HEC) dan barley -glukan (Pere et al, 1995;. Suurnkki et al, 2000.); Menariknya, aktivitas c
spesifik dari inti katalitik sebenarnya sedikit lebih tinggi pada ini substrat dibandingkan dengan
enzim utuh membawa domain mengikat (lihat bagian pada DBM, di atas). EGI / Cel7B memiliki
luas substrat kota spesifik, dan juga memiliki signifi tidak bisa xilanase dan beberapa aktivitas
mananase (Bailey et al., 1993), yang dapat membantu dalam pengolahan pakan. Studi ekspresi
awal ragi di akhir 1980-an menunjukkan bahwa EGI / Cel7B memiliki aktivitas tinggi pada
barley -glukan dan lichenin dari EGII / Cel5A kloning selanjutnya (Penttil et al., 1987a),
meskipun penelitian kemudian menunjukkan bahwa kedua memiliki aktivitas c spesifik yang
lebih tinggi pada barley -glukan (Ajithkumar et al., 2006). EGI / Cel7B endoglukanase
memiliki menemukan aplikasi dalam pakan juga sebagai ed genetik modifi (GM) atau
rekombinan produk (Tabel 2.1).
Ketika diuji dengan barley -glukan sebagai substrat, pH optimum ragi-menyatakan EGI
sekitar 6,0 dan 60C suhu optimal (Zurbriggen et al, 1991;.. Karlsson et al, 2002); Trichoderma
diproduksi EGI memiliki pH optimal pada -glukan dalam kisaran 5,0-7,0 dan aktivitas optimal
pada 65C (Jari Piironen, komunikasi pribadi, 2009). Utama -glukanase Kegiatan dalam
persiapan Trichoderma komersial memiliki MW jelas dari 56 kDa dan pI 4,3 (Vahjen dan Simon,
1999), yang dalam perjanjian dengan nilai 55 kDa dan pI 4,7 untuk EGI T. reesei dilaporkan oleh

Pere et al. (1995); dukungan lebih lanjut untuk identifi kasi ini berasal dari aktivitas xilanase dari
56 enzim kDa dalam persiapan Trichoderma diuji (lihat di atas; Vahjen dan Simon, 1999).
Sebuah Trichoderma komersial -glukanase dan xilanase persiapan, Roxazyme G2, dipelihara
aktivitas -glukanase cukup baik ketika ditantang dengan suhu pelet dari 75 C. dan 85C,
mempertahankan 58% dan 25% dari aktivitas masing-masing (Wu et al., 2002), menunjukkan
beberapa tingkat thermostability intrinsik.

Jamur filamen lain yang telah banyak digunakan di enzim industri, terutama sebagai
sumber starch- dan pektin-memodifikasi enzim, adalah Aspergillus niger dan Aspergillus oryzae.
Persiapan dengan -glukanase dan kegiatan xilanase dari A. niger telah terdaftar untuk pakan
aplikasi (Tabel 2.1). Analisis sampel komersial mentah mengungkapkan tujuh protein dengan
aktivitas -glukanase dalam analisis zymogram dengan lichenin sebagai substrat, dengan dua
kegiatan utama massa molekul dari 38 kDa dan 28 kDa. PH optimum dari persiapan mentah 5.0,
dengan kegiatan tunggal memiliki kegiatan relatif tertinggi di kisaran 4,0-6,0 (Vahjen dan Simon,
1999). A. niger tidak diketahui untuk kegiatan selulolitik potensial yang, dan beberapa selulase
telah dikloning dari mikroba ini dalam studi individu - Ini milik keluarga GH 5 dan GH 12 (de

Vries dan Visser, 2001). Namun, urutan genom penjelasan menunjukkan delapan gen selulase di
keluarga GH 5, 6 dan 7, dan empat gen untuk exo-1,3--glucanases dalam keluarga
GH 5 (Pel et al., 2007).
Selulase jamur lain yang digunakan dalam pakan termasuk endoglukanase berasal dari
Humicola insolens, Talaromyces emersonii dan Penicillium funiculosum (Tabel 2.1). H. insolens
menghasilkan satu set lengkap selulase, setidaknya tujuh, yang optimal aktif pada kisaran pH
5,0-9,0 (Schlein, 1997). Analisa H. komersial mentah insolens sampel mengungkapkan
sembilan band enzim dengan Kegiatan -glukanase dalam analisis zymogram lichenin, dengan
dua kegiatan utama massa molekul dari 102 kDa dan 56 kDa. PH optimum persiapan mentah 5,5,
dengan enzim tunggal memiliki kegiatan yang optimal dalam berkisar 4,5-6,5 (Vahjen dan
Simon, 1999). The endoglukanase utama komponen Novozymes 'H. insolens DSM 1800
regangan EGI (GH 7), yang terdiri 50% dari persiapan enzim kasar, diikuti oleh 10% dari EGV
(GH 45) (Schlein, 1997; Tolan dan Foody, 1999). EGI adalah yang paling efi sien pada substrat
larut dan EGV pada selulosa amorf; EGI dalam bentuk asli tidak pelabuhan CBM, sedangkan
EGV memiliki domain C-terminal-mengikat (Schlein, 1997). Sebuah H. komersial insolens glukanase dan xilanase persiapan, Ronozyme W, kehilangan semua aktivitas -glukanase
ketika terkena suhu pelet dari 85C, tapi tetap 39% pada suhu yang lebih rendah dari 75 C. (Wu
et al., 2002).
Talaromyces emersonii (anamorph Penicillium emersonii, sinonim Geosmithia emersonii;
Salar dan Aneja, 2007) adalah cukup termofilik askomiset memproduksi berbagai glukanmemodifikasi enzim, banyak yang secara intrinsik termostabil (Murray et al, 2001;.. McCarthy et
al, 2005). Beberapa purifi ed enzim aktif pada barley -glukan dan 1,3-1,4- lichenin. Para penulis
purifi ed a 40,7 kDa endoglukanase memiliki karakteristik dari 1,3-1,4--glukanase (EC
3.2.1.73) (Murray et al., 2001) dan tiga endoglukanase dari 22,9 kDa (EGV), 26,9 kDa (EGVI)
dan 33,8 kDa (EGVII), yang EGVI dan EGVII aktif di laminarin dan karena itu
ditentukan sebagai milik kelas EC 3.2.1.6 (McCarthy et al., 2003). Itu 40,7 kDa -glukanase
memiliki aktivitas optimal pada -glukan pada pH 5.0 dan 80 C. Bank data yang dipublikasikan
menunjukkan bahwa endoglukanase urutan dari ini jamur milik keluarga GH 5 (kode aksesi
AX254752 dan AF440003), GH 7 (AX254754) dan GH 45 (AX254756).
Adisseo memasarkan produk funiculosum P., RovabioTM Excel, yang mengandung
beberapa NSP-kegiatan, termasuk -glukanase (Tabel 2.1;. Guais et al, 2008). Kegiatan P.

funiculosum -glukanase, sebagai diuji dengan barley -glukan sebagai substrat, memiliki
spektrum yang luas pH memiliki lebih dari 80% dari aktivitas antara pH 3.0 dan 5.0, dan
aktivitas tertinggi dalam pengujian adalah pada suhu berkisar 60-65C, menurun dengan cepat
pada suhu yang lebih tinggi. Stabilitas enzimatik sebagaimana ditentukan in vitro oleh prainkubasi persiapan pada berbagai suhu selama 2 jam menunjukkan bahwa aktivitas -glukanase
itu dipulihkan hingga 50C (Karboune et al., 2009). Analisis proteomik dari persiapan enzim
mengungkapkan beberapa selulase, daftar homolog, misalnya, GH 5 endoglukanase dan GH 74
xyloglucanase (Guais et al., 2008).
Informasi yang kurang tersedia dari keluarga GH 12 (T. reesei EGIII) dan lainnya GH 45
endoglukanase (Thielavia terrestris Cel45A dan Melanocarpus albomyces Cel45A; Haakana et
al., 2004). Ini telah menemukan digunakan dalam industri tekstil industri yang disebut sebagai
selulase netral, tetapi harus pengetahuan kita belum diterapkan dalam pengolahan pakan
(Haakana et al., 2004).
Meskipun Trichoderma EGV / Cel45A saham homologi dengan tiga lainnya baik ditandai
GH 45 selulase (H. insolens, T. terrestris dan M. albomyces), enzimatik yang karakteristik
berbeda jauh dari mereka dan memiliki aktivitas yang sangat kecil, misalnya, pada CMC
(Karlsson et al., 2002). Sebuah gen (LAM1) untuk -glukanase (laminarinase) dari keluarga GH
16 (EC 3.2.1.6) telah ditemukan di T. reesei dalam ekspresi skrining dalam ragi (Saloheimo,
2004). Informasi tentang pengembangan pakan termostabil -glucanases adalah
terbatas. Sebuah intrinsik termostabil endo--1,4-glukanase milik keluarga GH 5 telah dikloning
dari termofilik fi jamur lamentous Thermoascus aurantiacus (Wu et al, 2002;. Hong et al, 2003a;.
Yang relevan nomor aksesi gen yang AX812161 dan AY055121, masing-masing). Ini enzim
(Cel5A), dinyatakan dalam Saccharomyces cerevisiae, menunjukkan optimal aktivitas di 4,0-6,0
pH range dan paling aktif di CMC di 70 C. Saya t ditahan aktivitas penuh setelah 1 jam
inkubasi pada 70 C dan lebih dari 80% setelah 2 jam (Hong et al., 2003a). Cel5A purifi ed dari
host asli dipertahankan 96% dan 91% dari Kegiatan barley--glukanase setelah pelet di 75 C.
dan 85C, masing-masing. Ini baik dibandingkan dengan patokan komersial -glukanase
(Bacillus, Trichoderma dan Humicola) persiapan yang digunakan dalam percobaan, di mana
0-46% dari aktivitas awal tetap setelah pelet di 85C (Wu et al., 2002). Termostabilitas T. ini
aurantiacus Cel5A juga terlihat dari tinggi titik 77.5C mencair pada pH 7,0.

Kelompok Tuohy telah ditandai beberapa intrinsik termostabil glucanases dari


Talaromyces emersonii, dari mana 40,7 kDa 1,3-1,4- -glukanase (lihat di atas) menunjukkan
suhu uji optimum pada 80 C pada pH 5.0, dan paruh 136 menit dan 25 menit pada 70 C dan
80 C, masing-masing (Murray et al., 2001). Hasil pelet tidak ditemukan dalam literatur.
Bakteri -Glucanases Dan Selulase
Satu-satunya yang tersedia secara komersial pakan bakteri -glucanases berasal,
Rupanya, dari genus Bacillus (Tabel 2.1; Vahjen dan Simon, 1999; Zhang dan Lynd, 2004).
Sebagian besar ditandai Bacillus -glucanases milik keluarga GH 16, dan memiliki aktivitas 1,31,4--glukanase tinggi (EC 3.2.1.73) menunjukkan substrat kota spesifik yang ketat untuk
pembelahan -1,4 glikosidik obligasi dalam 3-O-tersubstitusi unit glukopiranosa (Olsen et al,
1991;. Planas, 2000). Persiapan enzim Ronozyme berasal dari B. amyloliquefaciens dilaporkan
memiliki 1,3 (4) --glukanase (EC 3.2.1.6) aktivitas (Wu et al., 2002). Mutan industri Bacillus
spp. (B. subtilis, B. amyloliquefaciens dan B. licheniformis) telah melayani sebagai tuan rumah
untuk produksi enzim ini (Vahjen dan Simon, 1999; Schallmey et al., 2004).
Beberapa keluarga GH 5 endoglukanase juga telah ditemukan pada bakteri dan dalam
genus Bacillus, sedangkan tidak ada keluarga GH 7 selulase telah teridentifi kasi pada organisme
prokariotik dan hanya beberapa untuk keluarga GH 45 (Robson dan Chambliss, 1989; Cantarel et
al., 2009). Berbeda Bacillus spp. GH 5 endoglukanase berbagi identitas sekitar 60% di tingkat
urutan (Schlein, 2000). Modul dari keluarga CBM 3 karbohidrat mengikat, CBM 4, CBM 5,
CBM 17 dan CBM 28 telah ditugaskan untuk selulase ini, dan tandem pengaturan telah
dijelaskan untuk Bacillus sp. 1139 Cel5 endoglukanase (Boraston et al., 2004).
Pekerjaan rekayasa protein awal telah dilakukan dengan Bacillus beta-glucanase (EC
3.2.1.73) untuk meningkatkan termostabilitas dengan membangun hybrid enzim dari Bacillus
macerans homolog dan B. amyloliquefaciens (1 3), (1 4) --glucanases. Salah satu mutan,
H (A16-M), memiliki 16 amino asam dari matang N-terminus dari B. amyloliquefaciens urutan
dan polipeptida yang tersisa adalah enzim macerans B. (Olsen et al., 1991). Ini protein-rekayasa
hybrid -glukanase memiliki spesifik aktivitas c 44% lebih tinggi, pH optimum yang lebih
rendah dan dipertahankan> 80% aktivitas optimal pada 80 C, 5-15C lebih tinggi dari molekul
induk. Dalam tes pelet varian ini bertahan sekitar 76% dari aktivitas di 80 C, ketika hanya 54%
dari kontrol A. niger -glukanase itu pulih (Vahjen dan Simon, 1999). Tiga dimensi Struktur ini

bakteri -1,3-1,4-glukanase dan bahwa dari erat terkait B. macerans telah dipecahkan, dan
mereka menanggung sebagian kemiripan dengan jamur yang Cel7 / EGI endoglukanase (Keitel
et al, 1993;. Hahn et al, 1995;. Kleywegt et al., 1997).
Bakteri anaerob yang hidup di saluran pencernaan ruminansia memiliki sebuah sistem
selulase yang sama sekali berbeda dibandingkan dengan jamur aerobik dan bakteri. Mereka
mensintesis kompleks multi-komponen enzim dan mengikat modul, cellulosome tersebut.
Katalitik domain milik terutama untuk keluarga GH 5, GH 9 dan GH 48, sedangkan keluarga GH
6 dan 7 GH belum pernah dijelaskan. Arsitektur cellulosome terdiri dari scaffoldins membawa
cohesins dan dockerins yang berinteraksi satu sama lain dalam semacam plug-andsocket
pengaturan, membawa domain selulase katalitik dan CBMs ke kompleks dan melampirkan
cellulosome ke permukaan sel (untuk tinjauan, lihat Bayer et al., 2004). Cellulosomes atau
subunit mereka belum menemukan digunakan dalam, misalnya, umpan atau aplikasi industri
lainnya, mungkin karena kompleksitas sistem dan kesulitan-diffi dalam memproduksi tingkat
komersial komponen.
Xilanase
Gambaran umum
Xilanase (endo-1,4--xilanase, EC 3.2.1.8; baru-baru Ulasan di Collins et al., 2005;
Polizeli et al., 2005) membelah tulang punggung xilan secara acak, sehingga di non-diganti atau
bercabang xylooligosaccharides. Berkenaan dengan memberi makan aplikasi, hanya hidrolisis
parsial xilan diperlukan untuk pengurangan viskositas dan penambahan demikian xilanase untuk
pakan sudah sangat efektif. Namun, untuk hidrolisis lengkap dari struktur yang kompleks xilan,
tindakan sinergis dari beberapa hemicellulases diperlukan (Coughlan et al., 1993). Sisichaincleaving 'aksesori' enzim menghapus kelompok substituen dan 1,4--Dxylosidase (EC
3.2.1.37) memotong xylobiose dan xylooligosaccharides ke xylose monomer (Coughlan et al,
1993;. Sunnah dan Antranikian, 1997; Shallom dan Shoham, 2003). Enzim aksesori total
hidrolisis arabinoxylan termasuk -L-arabinofuranosidase (EC 3.2.1.55), esterase acetylxylan
dan feruloylesterase (EC 3.1.1.72 dan 3.1.1.73 EC, masing-masing) dan -Dglucuronidase
(EC 3.2.1.139). Hidrolisis oleh xilanase dari xylans sereal rilis oligosakarida yang terdiri dari
xylose atau xilosa dan arabinosa residu.

Xilanase diproduksi oleh hidup bebas dan usus mikroorganisme dan memiliki juga telah
ditemukan dari ganggang, protozoa, siput, krustasea dan biji terrestrial tanaman (Woodward,
1984; Sunnah dan Antranikian, 1997;. Dornez et al, 2009). Sebagian besar xilanase disekresikan
enzim dan mereka hampir secara eksklusif protein subunit tunggal. Karena menggunakan
industri mereka, sejumlah besar xilanase telah diisolasi dari mikroba selama 20-25 terakhir dan
mereka tahun enzim, karakteristik dan produksi telah banyak Ulasan (misalnya Sunnah dan
Antranikian, 1997; Kulkarni et al., 1999; Mohon dkk., 2001; Bhat dan Hazlewood, 2001; Collins
et al., 2005; Subramaniyan dan Prema, 2002; Polizeli et al., 2005). Secara umum,
mikroorganisme sering menghasilkan beberapa xilanase dengan kota spesifik yang berbeda
(ditinjau, misalnya, di Wong et al., 1988; Sunnah dan Antranikian, 1997; Subramaniyan dan
Prema, 2002). Juga, xilanase ada di beberapa berbeda bentuk iso-enzimatik di ltrates budaya fi
karena, misalnya, diferensial glikosilasi, proteolisis, auto-agregasi atau agregasi dengan
polisakarida lainnya. Adanya beberapa yang berbeda xilanase dalam satu organisme telah
diusulkan sebagai penting untuk berdayaguna hidrolisis substrat kompleks.
Kebanyakan xilanase mikroba bertindak pada suhu mesofilik (40-60 C) dan pada pH
netral atau sedikit asam (4,0-6,0). Secara umum, xilanase jamur lebih asam dibandingkan dengan
xilanase bakteri. Xilanase dengan lebih ekstrim sifat juga telah diisolasi yang cocok untuk
aplikasi yang memerlukan thermostability tinggi (Collins et al., 2005). Seperti thermostability
sangat penting dalam beberapa aplikasi industri, xilanase bertindak / menolak suhu tinggi juga
telah dikembangkan dengan menggunakan pendekatan mutagenetic (lihat di bawah).
Xilanase dapat dihambat oleh inhibitor xilanase alami, sensitivitas untuk inhibitor ini
bervariasi tergantung pada xilanase (Goesaert et al., 2004). Tiga jenis inhibitor seperti telah
digambarkan sebagai hadir dalam sereal (Srensen dan Sibbesen, 2006;. Dornez et al, 2009 dan
referensi di dalamnya). The TAXI-jenis inhibitor (Triticum aestivum inhibitor xilanase) adalah
protein sekitar 40 kDa dan dibagi menjadi TAXI-I dan subkelompok TAXI-II. Ini yang TAXIjenis inhibitor yang spesifik c untuk GH keluarga 11 xilanase. Kedua kelompok terdiri dari
sekitar 29 kDa XIP-jenis inhibitor (protein inhibitor xilanase atau 'kitinase-seperti' inhibitor
sereal). Mereka mampu menghambat kedua keluarga GH 10 dan 11 xilanase karena dua situs
mengikat independen (Payan et al., 2004). Kelompok ketiga terdiri dari TL-XI inhibitor
(taumatin-seperti xilanase inhibitor). Kelompok ini belum ditandai dengan baik. Mengenai pakan

dan makanan aplikasi akan benefi resmi bahwa xilanase dalam produk tidak akan dihambat oleh
inhibitor xilanase alami. Xilanase tersebut sudah pernah dikembangkan (lihat di bawah).
Aktivitas xilanase dari sampel enzim dapat quantifi ed dengan mengukur pelepasan
mengurangi gula, oleh dicelup (atau label) fragmen silan dari xilan yang substrat, dengan
menentukan penurunan viskositas dan dengan analisis produk setelah reaksi enzimatik dengan
HPLC. Metode dan substrat umumnya digunakan dalam analisis xilanase tercantum dalam
review oleh Bhat dan Hazlewood (2001).
GH keluarga 10 dan 11 xilanase
Xilanase, sebagaimana telah disebutkan di atas, ed klasifi ke keluarga enzim berdasarkan
struktur utama mereka dan klaster hidrofobik analisis mereka modul katalitik (database enzim
karbohidrat-aktif; http // www.cazy. org /; Coutinho dan Henrissat, 1999). Mayoritas xilanase
termasuk dalam produk pakan saat ini adalah anggota dari keluarga GH 10 dan 11 (Tabel 2.1).
Keluarga 11 xilanase umumnya memiliki massa molekul rendah dan lebih tinggi pI
dibandingkan dengan keluarga 10 xilanase (Collins et al., 2005). Keluarga 11 xilanase yang
molekul yang terutama terdiri dari -sheet (struktur '-jelly gulungan') baik-dikemas, dan
struktur mereka secara keseluruhan telah digambarkan sebagai menyerupai 'tangan
kanan'(Trrnen et al., 1993). Lipatan tersier dalam keluarga 10 xilanase adalah ( / ) 8 barrel
dan mereka memiliki 'salad bowl'-seperti bentuk (Biely et al., 1997). Kedua keluarga 10 dan 11
xilanase yang mempertahankan enzim dan mereka bertindak melalui ganda mekanisme
perpindahan di mana dua residu Glu katalitik bertindak sebagai proton donor dan nukleofil.
Namun, mereka berbeda satu sama lain dengan hormat ke kota-kota umum spesifik mereka:
keluarga 11 xilanase secara eksklusif aktif di substrat yang mengandung D-xylose, sedangkan
keluarga 10 xilanase adalah katalis lebih fleksibel, karena struktur fleksibel lebih fl mereka
(Biely et al., 1997). Oleh karena itu, keluarga GH 10 xilanase umumnya mampu menghidrolisis
diganti xilan ke tingkat yang lebih tinggi dan untuk membelah hubungan dekat dengan kelompok
substituent dibandingkan dengan keluarga GH 11 xilanase. Untuk lebih detail tentang modus
tindakan, mekanisme katalitik dan produk yang dikeluarkan oleh endoxylanases berbeda, lihat,
misalnya, review oleh Bhat dan Hazlewood (2001).

Struktur multi-domain dari xilanase


The xilanase utama dalam produk komersial sebagian besar enzim dengan satu Struktur
domain katalitik atau mereka memiliki inti katalitik dan CBM terminal domain (lihat di bawah).
Namun, sejumlah dari berbagai jenis struktur dasar telah mengindentifikasi ed dari xilanase
ditandai to date. Xilanase dapat memiliki tidak hanya satu tapi dua modul katalitik dan, di
samping itu, mereka dapat berisi satu atau beberapa modul non-katalitik, NCMS (Coutinho dan
Henrissat, 1999; Henrissat dan Davies, 2000). Kedua modul katalitik dapat memiliki xilanase
Kegiatan (misalnya Zhu et al., 1994) atau mereka dapat menunjukkan dua jenis kegiatan,
misalnya bahwa xilanase dan - (1,3-1,4) -glucanase (misalnya Zhang dan Flint, 1992; Flint
dkk., 1993; Morris et al., 1999). Mayoritas identifi ed NCMS yang CBMs; Namun, beberapa
xilanase juga mengandung dockerin modul yang mengikat enzim untuk cellulosome itu, modul
homolog dengan nodulasi yang protein pada bakteri xing nitrogen-fi dan modul berkarakter
(Ulasan di Kulkarni et al., 1999). Struktur multi-domain telah diusulkan sebagai menyediakan ts
benefi dalam hidrolisis substrat, melalui efek sinergis antara modul mengikat (s) dan catalytic
inti atau antara berbeda domain katalitik (misalnya Fernandes et al, 1999;.. Bolam et al, 2001).
Ini struktur multi-domain umum di xilanase termofilik dari anaerobic bakteri (Meissner et al.,
2000).
Kebanyakan CBMs teridentifi kasi dari xilanase mengikat selulosa, tapi CBMs dengan
kota spesifik untuk xylan juga telah teridentifi kasi (Irwin et al, 1994;.. Hitam et al, 1995; Dupont
dkk., 1998; Charnock dkk., 2000; Meissner et al., 2000).
Xilanase Dalam Persiapan Pakan Komersial
Xilanase dalam persiapan komersial yang berasal dari kedua bakteri dan sumber jamur
(lihat Tabel 2.1). Menurut kedua sumber publik dan daftar enzim komersial yang disediakan oleh
Asosiasi Produsen dan Formulator Enzim Produk (AMFEP, 2009; http://www.amfep.org/) yang
xilanase komersial di produk pakan yang diproduksi oleh kedua klasik dan genetik modifi strain
ed. Terkenal sistem ekspresi bakteri, Bacillus dan fi jamur Aspergillus lamentous, Humicola,
Penicillium dan Trichoderma, digunakan untuk produksi xilanase (lihat di bawah).
Bacillus subtilis regangan adalah donor untuk xilanase bakteri termasuk dalam setidaknya
satu produk pakan (Tabel 2.1). Xilanase telah ditandai dari besar jumlah spesies Bacillus (untuk
ulasan, lihat misalnya Sunnah dan Antranikian, 1997; Beg et al., 2001). PH dan suhu optimal dari

xilanase ini bervariasi dari sedikit asam (5,5) ke basa (9,0-10,0) dan dari 50 hingga 75 C,
masing-masing, tergantung pada organisme sumber. Beberapa xilanase yang berasal dari spesies
Bacillus termofilik yang stabil pada suhu tinggi. B. subtilis 168 menghasilkan dua xilanase, 23
kDa keluarga 11 XynA dan keluarga 44 kDa 5 XynC (Wolf et al, 1995;.. St John et al, 2006).
Tidak ada keluarga 10 glikosil hidrolase homolog telah ditemukan dari B. subtilis 168 Data
genom (St John et al., 2006). XynA telah dilaporkan aktivitas xilan-merendahkan utama dalam
B. subtilis 168 (Wolf et al., 1995). Tidak pelabuhan CBM a. Optimal Suhu reaksi B. subtilis
XynA telah diangkat 55-65 C dengan menggunakan pendekatan evolusi diarahkan (Miyazaki et
al., 2006). Juga, B. subtilis 168 XynA telah dikembangkan dengan memodifikasi enzim oleh
diarahkan situs- Pendekatan mutagenesis untuk melawan inhibitor xilanase. B. subtilis XynA
mutan

telah berhasil dibuat yang tahan terhadap TAXI atau taksi-dan XIPItype hambatan

(Srensen dan Sibbesen, 2006;. Bourgois et al, 2007). Itu


Kegiatan c spesifik yang terbaik tanpa hambatan TAXI mutan agak menurun (14%)
dibandingkan dengan tipe liar XynA (Bourgois et al., 2007). Namun, Itu aktivitas spesifik yang
terbaik tanpa hambatan TAXI mutan agak menurun (14%) dibandingkan dengan tipe liar XynA
(Bourgois et al., 2007). Namun, kegiatan khusus dari taksi-dan mutan XIPI-tanpa hambatan yang
sangat berkurang (74-86%) dibandingkan dengan tipe liar xilanase. B. subtilis XynA mutan tahan
terhadap inhibitor alami xilanase (s), BS3 ditunjuk, termasuk dalam setidaknya dua produk kue
komersial (Grindamyl H640 dan POWERBake 900; Olempska-Beer, 2004). Xilanase ini berbeda
dengan hanya dua asam amino substitusi dibandingkan dengan tipe liar XynA (Olempska-Beer,
2004).
Sebagian besar xilanase dalam produk pakan tersedia secara komersial adalah dari asal
jamur (Tabel 2.1). Organisme donor dan / atau produksi termasuk Tricho derma, Talaromyces,
Aspergillus, Humicola, Penicillium dan Thermomyces jenis. Kebanyakan xilanase jamur enzim
mesofilik tetapi ada, Namun, beberapa perwakilan lebih termostabil, misalnya, Talaromyces dan
spesies Thermomyces, seperti yang akan dibahas di bagian bawah.
Trichoderma reesei adalah salah satu organisme yang paling terkenal memproduksi
tinggi jumlah selulase dan hemicellulases. Organisme ini juga telah dan digunakan untuk
produksi xilanase pakan. Empat xilanase yang berbeda telah (. Tenkanen et al, 1992, 2003.; Xu et
al, 1998) ditandai dari T. reesei.19 kDa Xyn1 (pI 5,5) dan 20 kDa Xyn2 (pI 9,0) adalah
endoxylanases milik GH keluarga 11. 32 kDa Xyn3 (pI 9,1) adalah keluarga 10 endoxylanase.

The Xyn4 (pI 7,0) adalah exo-acting enzim 43 kDa yang dimiliki untuk keluarga 5. Xyn4 jelas
memiliki aktivitas c spesifik rendah terhadap xilan substrat dibandingkan dengan xilanase T.
reesei lainnya, dan telah terbukti menunjukkan sinergi dengan Xyn1 dan Xyn2. Tak satu pun dari
ditandai T. reesei xilanase mengandung domain CBM atau domain. Selain empat di atas xilanase,
T. reesei endoglukanase I (Cel7B / EGI) aktif terhadap xilan (Biely et al., 1991). PH optimal dari
Xyn1 dan Xyn2 yang 4,0-4,5 dan 5,0-5,5, masing-masing. Xyn3 adalah yang paling netral dari
xilanase T. reesei, dengan pH optimum 6,0-6,5, dan Xyn4 adalah yang paling asam, memiliki pH
optimum 3,5-4,0. Xyn1 dan Xyn2 adalah xilanase utama dalam wildtype T. supernatan budaya
reesei di budidaya laboratorium standar. Dari ini, Xyn2 memiliki aktivitas spesifik c lebih tinggi
dan sifat stabilitas yang lebih baik dibandingkan dengan Xyn1 (Tenkanen et al., 1992). Xyn2
disertakan sebagai memiliki aktivitas xilanase utama dalam setidaknya beberapa dari yang
pertama generasi rekombinan pakan produk xilanase.
Semua xilanase T. reesei adalah enzim mesofilik, memiliki suhu mereka optima pada
sekitar 50 C. Mereka tidak stabil pada suhu tinggi dan dengan demikian yang tidak cocok untuk
suhu pelleting tinggi. T. reesei Xyn2 mutan xilanase dengan peningkatan thermostability telah,
bagaimanapun, telah berhasil dihasilkan oleh mutagenesis ditargetkan (Fenel et al, 2004;.. Xiong
et al, 2004). Pada saat penulisan, salah satu produk pakan xilanase komersial dilaporkan
termasuk seperti xilanase mutan (Tabel 2.1). Termostabilitas dari mutan ini, bernama Y5,
meningkat sekitar 15 C dengan rekayasa disulfi de jembatan ke wilayah N-terminal Xyn2
(Fenel et al., 2004). Ditotal, mutan Y5 xilanase berisi tiga perubahan dalam urutan asam amino
dibandingkan dengan tipe liar Xyn2, dan satu asam amino tambahan dimasukkan ke urutan.
Seperti yang akan dibahas di bawah, A. niger dan A. oryzae banyak digunakan sebagai
organisme produksi untuk enzim industri, dan juga untuk xilanase pakan (Tabel 2.1). Sifat fisik
telah dianalisis untuk sejumlah besar Aspergillusderived xilanase (Ulasan di de Vries dan Visser,
2001). Menurut baru-baru ini Data urutan genom (Pel et al., 2007), A. niger membawa satu
keluarga kDa 36 10 xilanase dan empat keluarga 11 xilanase (atau calon xilanase) gen, dengan
massa molekul teoritis 22,6 kDa (XynA), 24,1 kDa (XynB), 24,9 kDa (calon xilanase) dan 27,9
kDa (calon xilanase). Jumlah gen xilanase tampaknya tergantung pada spesies Aspergillus,
karena lebih xilanase (atau calon xilanase) gen dapat ditemukan dari genom tiga lainnya
sequencing Aspergilli, yaitu enam dari Aspergillus nidulans (tiga GH 10, dua GH 11 dan satu GH
5), sembilan dari A. fumigatus (empat GH 10, GH 11 tiga dan dua GH 7) dan sembilan dari A.

oryzae genom (empat GH 10, GH 11 empat dan satu GH 7) (Pel et al., 2007). Rekombinan A.
niger xilanase A (reAnxA diproduksi di Pichia pastoris) dan xilanase B (berlebihan yang A.
niger) adalah enzim mesofilik dan asam dengan optimal suhu 50 C dan pH optima of 5.0 dan
5.5, masing-masing (Levasseur et al, 2005;.. Liu et al, 2006). Dari Aspergillus Awamori
(subspesies A. niger), tiga endo-xilanase protein (EndoI, II dan III) telah diisolasi dan
dikarakterisasi (Kormelink et al., 1993). Ini juga semua asam (pH optimal antara 4,0 dan 5,5) dan
mesofilik (suhu optimal antara 45 dan 55oC). Massa molekul dari xilanase ini adalah 39 kDa
untuk EndoI (pI 5,7-6,7), 23 kDa untuk EndoII (pI 3.7) dan 26 kDa untuk EndoIII (pI 4,2).
Ketiga xylobiose dirilis dan xylotriose dari substrat xilan tetapi EndoI juga merilis xylose.
Xilanase EndoI dan EndoII memiliki aktivitas c spesifik yang lebih baik terhadap larut oat dieja
xilan dibandingkan dengan EndoIII. Menurut massa, pI dan hidrolisis pola molekul mereka,
EndoI merupakan GH 10 xilanase dan EndoII dan EndoIII mewakili GH 11 xilanase. Dua
xilanase niger A. dengan massa molekul mirip dengan di atas xilanase, 24 kDa endoxylanase A
dari GH 11 (pI 3,5) dan 36 kDa endoxylanase B dari GH 10, juga telah diisolasi menggunakan
kromatografi afinitas dengan inhitors endoxylanase bergerak (Gebruers et al., 2005). Penulis ini
menunjukkan bahwa endoxylanase A (urutan asam amino N-terminal yang sesuai dengan yang
dijelaskan di atas 22,6 kDa XynA) adalah sensitif terhadap TAXI dan XIPI inhibitor gandum,
sedangkan endoxylanase B (dua sekuens peptida yang sesuai dengan yang diuraikan di atas 36
kDa GH10 xilanase) hanya dihambat oleh XIP. Endoxylanase A adalah sangat aktif dalam roti
pengambilan sedangkan endoxylanase B tidak.
Dua xilanase besar telah ditandai dari H. insolens persiapan enzim komersial, Ultrafl o
, yang digunakan dalam wort dan bir infiltrasi (Dusterhoft et al., 1997), menunjukkan bahwa
setidaknya dua yang berbeda xilanase juga hadir dalam produk enzim pakan komersial berasal
dari Humicola CMO (organisme ed klasik modifi) galur (AMFEP, 2009). Kedua purifi atas ed H.
insolens xilanase merupakan sekitar 85% dari aktivitas xilanase dalam Ultrafl o persiapan enzim
. Enzim purifi ed ini, bernama Xyl1 dan Xyl2, memiliki massa molekul 6 dan 21 kDa dan PI
dari 9,0 dan 7,7, masing-masing. Mereka berdua memiliki pH optimum 6,0-6,5 dan suhu dari 5560 C. Xyl1 dan Xyl2 xilanase tidak sangat termostabil dan tidak aktif pada suhu di atas 50 C.
Xyl2, bagaimanapun, ditemukan sangat efektif berkaitan dengan sereal arabinoxylan. The
Humicola xilanase termasuk dalam produk pakan transgenik komersial Bio-Feed Plus (Tabel 2.1)
digambarkan sebagai mengandung H. utama insolens endo-xilanase (Cowan et al., 1993). The

xilanase utama dalam kasus ini, kemungkinan besar, sesuai dengan yang Xyl2 atas meskipun H.
insolens urutan protein xilanase termasuk dalam database publik disebut sebagai Xyl1 (Dalboege
dan Hansen, 1994). Yang lebih termostabil Humicola diturunkan xilanase telah ditandai dari
spesies lain Humicola, Humicola grisea var. thermoidea (Monti et al., 1991). Ini 23,0-25,5 kDa
H. keluarga grisea 11 xilanase memiliki paruh 20 menit pada 60 C.
Tiga xilanase telah ditandai dari P. funiculosum (Furniss et al., 2002, 2005). 22 kDa
XynB (pI 5.0) dan 23,6 kDa XynC (pI 3,7) milik keluarga 11, 36 kDa XynD (pI 4,6) untuk
keluarga 10. Semua P. funiculosum xilanase bersifat asam, dengan pH optimum mereka di
wilayah 3,7-5,2. XynB dan XynD xilanase mengandung keluarga 1 CBM, sedangkan XynC tidak
termasuk a CBM. Selain di atas 'benar' xilanase, keluarga 48 kDa GH 7 cellobiohydrolase dari P.
funiculosum, bernama XynA (pI 3,6), juga telah terbukti ef fi sien memecah substrat xilan
(Furniss et al., 2005). Namun, spesifik kegiatan fi c dari XynB dan XynD jelas lebih tinggi
dengan terhadap kedua arabinoxylans gandum larut dan tidak larut dibandingkan dengan XynA.
XynA, XynB dan XynD juga ditampilkan untuk bertindak pada substrat selulosa (misalnya
barley (1 3), (1 4) --glukan), yang XynD menunjukkan aktivitas terbesar pada substrat
(Furniss et al., 2005). Semua funiculosum xilanase P. berada dihambat oleh protein xilanase
inhibitor dari gandum, tetapi untuk derajat yang berbeda: XynB dihambat secara signifikan
hanya dengan TAXI-I, XynC itu sangat dihambat oleh XIP-I, TAXI-I dan TAXI-II, dan XynD
hanya dihambat oleh XIP-I (Furniss etal., 2002, 2005). Hasil dari analisis enzim pakan
RovabioTM Excel persiapan dengan menggunakan teknologi proteomik telah diterbitkan (Guais
et al., 2008). Ini analisis con fi rms keberadaan dalam produk komersial atas tiga xilanase dan
xilanase / cellobiohydrolase XynA.
Jamur termofilik, T. emersonii dan Thermomyces lanuginosus (sebelumnya dikenal
sebagai Humicola lanuginosa) telah terbukti menghasilkan xilanase termostabil, dan xilanase (s)
yang berasal dari organisme ini juga termasuk dalam produk pakan komersial (Tabel 2.1).
Sebuah review oleh Coughlan et al. (1993) melaporkan karakterisasi awal dari 13 T. emersonii
xilanase atau xilanase isoform dengan massa molekul yang berbeda. Semua xilanase ini atau
bentuk xilanase bersifat asam (pH optimal 3,5-4,7) dan memiliki relatif tinggi optima suhu (6780 C). Pemurnian dan karakterisasi dua T. emersonii xilanase, XylII dan XylIII, dijelaskan
secara lebih rinci oleh Tuohy dkk. (1993). Kedua xilanase yang tidak biasa dalam sifat mereka
sebagai mereka secara istimewa menghidrolisisnya xylans tersubstitusi dan aktif terhadap aril

beta-D-xylosides dan Xylo-oligosakarida. Mereka menunjukkan sedikit atau tidak ada tindakan
terhadap arabinoxylan dari jerami gandum, mungkin karena mereka ditampilkan untuk meminta
sekuens panjang (unit setidaknya 24 xylose) dari arabinose bebas backbone xilan untuk aktivitas
mereka. XylII (pI 5,3) disarankan sebagai dimer dari dua subunit setiap memiliki massa molekul
~ 75 kDa, sedangkan XylIII (pI 4.2) adalah monomer dengan massa ~ 54 kDa. Kedua xilanase
ini bersifat asam dan termofilik, pH dan suhu optima ditentukan untuk XylII menjadi 4,2 dan 78
C dan mereka untuk XylIII 3,5 dan 67 C. Dua homolog (tapi tidak identik dengan satu sama
lain) keluarga 10 xilanase dari T. emersonii strain dijelaskan secara lebih rinci dalam yang WO01
permohonan paten / 42.433 (Danisco A / C) dan US patent 7514110 (BASF Aktiengesellschaft).
Baik di atas T. emersonii xilanase termasuk keluarga 1 CBM. Massa molekul mereka dihitung
adalah 38,5 (pI 4,5) dan 41,6 kDa (pI 3.3). Kedua xilanase memiliki pH optimum asam (3.0 dan
4,0-5,0) dan enzim termostabil, dengan optimal suhu mereka menjadi sekitar 80 C. T. emersonii
TX-1 xilanase di WO01 / 42433 juga digambarkan sebagai menjadi resisten terhadap inhibitor
alami xilanase, properti yang benefi resmi dalam aplikasi pakan.
Strain T. lanuginosus menghasilkan keluarga 11 xilanase (23-29 kDa, pI 3,7-4,1) yang
adalah yang paling xilanase termostabil asal jamur (Ulasan di Singh et al., 2003). Beberapa
lanuginosus isolat T. telah dilaporkan sebagai memproduksi xilanase tunggal yang memiliki suhu
optimum mereka dan pH pada kisaran 60-75 C dan 6,0-7,0, masing-masing, dan relatif stabil
pada 50-80 C dan pada rentang pH yang luas (3,0-12,0). Properti ini membuat mereka sangat
menarik untuk digunakan dalam pakan dan aplikasi industri lainnya.Dari ditandai, diterbitkan T.
lanuginosus xilanase, 23,6 kDa xilanase dari SSBP isolat yang paling termostabil, memiliki
paruh 337 min pada 70 C (Lin et al., 1999).
Produksi enzim
Pabrik sel
Pengantar
Enzim pakan, seperti enzim industri lainnya, yang saat ini diproduksi pada besar skala
besar di bioreaktor terendam atau deep-tank. Host produksi mikroba, baik bakteri seperti Bacillus
spp. (B. subtilis, B. amyloliquefaciens atau B. licheniformis) atau fi jamur lamentous, misalnya
A. niger, A. oryzae, H. insolens dan T. reesei. Sejarah host ini berasal dari penggunaannya dalam

industri pengolahan pati (Bacillus dan Aspergillus), untuk deterjen protease (Bacillus) atau untuk
produksi selulase (Trichoderma, Humicola). Host ini secara alami mengeluarkan array besar
enzim, yang non-patogenik dan mudah untuk menumbuhkan pada skala industri. Alat ada untuk
rekayasa genetika dari semua host ini, dan genom perwakilan telah dipublikasikan untuk paling
dari mereka (Kunst et al, 1997;. Veith et al, 2004;.. Machida et al, 2005; Pel et al., 2007;
Martinez et al., 2008). Hak kekayaan intelektual (HKI) melindungi Transformasi DNA,
penggunaan promotor kuat tertentu dan heterolog atau produksi protein fusi masih dapat
menghalangi eksploitasi komersial dari gen teknologi di host tertentu dan di negara-negara
tertentu, terutama di Amerika Serikat, di mana istilah paten digunakan untuk menjadi 17 tahun
dari hibah daripada dari tanggal fi ling.
New host jamur rekombinan baru-baru ini dikembangkan, misalnya Chrysosporium
lucknowense (atau C1) oleh diad International, Inc., dengan jelas t benefi dari jangkauan yang
lebih luas dari suhu budidaya dan pilihan pH dan morfologi menguntungkan (Gusakov et al.,
2007). Ragi methylotrophic Pichia pastoris juga tersedia untuk penelitian dan eksploitasi
komersial dari Invitrogen Corporation (http://www.invitrogen.com) dan Penelitian Korporasi
Technologies (http://www.rctech.com), untuk organisasi dan perusahaan yang tidak memiliki
akses ke platform produksi milik lainnya (Teng et al., 2007).
Host produksi dapat dibagi menjadi dua kategori berdasarkan terutama pada aspek
regulasi: tipe liar atau klasik (CMO) dan strain ed genetik modify (GMO). Strain klasik biasanya
berasal dari isolat alami dengan yang diinginkan karakteristik dan telah dikenakan beberapa
putaran mutagenesis dan skrining untuk produktivitas enzim yang tinggi selama beberapa dekade
(Bailey dan Nevalainen, 1981; Tolan dan Foody, 1999; Veith et al., 2004). Mereka biasanya
menghasilkan campuran enzim dengan beberapa kegiatan, dan profi le dapat modifi ed oleh
berarti pembangunan saring dan optimasi proses. Tingkat produksi dikutip dalam kisaran literatur
20-25 g Total disekresikan protein l-1 dengan akhir budidaya kaldu budaya dengan protein enzim
Bacillus ke 40-100 g-l 1 dengan platform produksi jamur (Durand et al, 1988;. Cherry dan
Fidantsef, 2003; Maurer, 2004). Bacillus menghasilkan enzim dalam waktu yang relatif singkat
mungkin 48 jam, sedangkan host jamur biasanya dibudidayakan selama beberapa hari; sehingga
ekonomi kedua sistem sebanding.
Ada beberapa keterbatasan dalam penggunaan strain klasik sebagai satu-satunya metode
pembuatan enzim - misalnya: (i) keragaman enzim terbatas enzim asli dari tuan rumah; (ii)

tingkat ekspresi dari kegiatan yang diinginkan dapat menjadi pembatas; (iii) strain dapat
mensekresikan kegiatan sisi-enzim yang berbahaya di aplikasi tertentu; atau (iv) host produksi
dapat menghasilkan berbahaya sekunder senyawa seperti asam atau racun. Dengan teknologi gen
adalah mungkin untuk keanekaragaman hayati layar di alam untuk enzim dengan karakteristik
yang optimal untuk aplikasi dalam pikiran dan memaksimalkan tingkat ekspresi gen yang
diinginkan oleh penyisipan beberapa salinan gen dan / atau dengan menempatkan gen yang
diinginkan di bawah kontrol promotor yang kuat. Gen yang mengkode enzim yang tidak
diinginkan atau yang terlibat dalam metabolisme senyawa berbahaya dapat dinonaktifkan atau
dihapus dari genom. Akibatnya adalah mungkin untuk menghasilkan hampir monocomponent
persiapan enzim dengan biaya rendah, beberapa yang kemudian dapat dicampur dengan optimal
rasio untuk kebutuhan pelanggan. Keuntungan dari teknologi gen yang terbaik dieksploitasi bila
dikombinasikan dengan kapasitas sekresi tinggi milik mutan tuan rumah klasik.
Kasus Trichoderma Reesei
T. reesei memberikan contoh yang baik dari pengembangan tuan produksi. Untuk terbaik
dari pengetahuan kita, semua industri T. reesei dan sebagian besar akademis strain berguna
berasal dari satu isolat tunggal, QM6a, terisolasi di Kepulauan Solomon selama Perang Dunia
Kedua (Mandels dan Reese, 1957; Nevalainen et al., 1994). Di masa lalu, T. reesei industri strain
memiliki tidak konsisten telah ditandai sebagai salah T. viride atau T. longibrachiatum, tapi
genetika molekuler alat memiliki verifi ed T. reesei sebagai berbeda dari kedua spesies dan
menjadi anamorph dari Hypocrea jecorina (Kuhls et al., 1996). Beberapa T. viride atau T.
longibrachiatum strain yang tercantum dalam Tabel 2.1 mungkin bisa benefi t dari pendekatan
molekuler taksonomi.
Gambar 2.4 memberikan garis besar T. reesei garis keturunan mutan yang berbeda
dikembangkan untuk titer selulase yang lebih tinggi di masa lalu, terutama di akhir 1970-an
dan awal 1980-an terinspirasi oleh pertama krisis minyak dan studi tentang lignocellulolytic
bioetanol. Pekerjaan ini sangat dipelopori oleh kelompok-kelompok di Rutgers Universitas di
Amerika Serikat, VTT di Finlandia, Cayla, CNSR dan IFP di Perancis dan di Kyowa Hakko
Kogyo di Jepang (Montenecourt et al, 1980;. Bailey dan Nevalainen, 1981; Kawamori et al.,
1986; Durand et al., 1988; Mntyl et al., 1998; Tolan dan Foody, 1999). Industri genetik modifi

ed T. reesei strain didasarkan pada beberapa garis keturunan ini, dan alat-alat untuk genetic
rekayasa dikembangkan pada pertengahan 1980-an (Penttil et al., 1987b).
Protein disekresikan paling menonjol di media kultur reesei T. adalah CBHI / Cel7A,
terdiri 60-80% dari total protein selulase (McFarland et al., 2007). Oleh karena itu, untuk
ekspresi maksimal gen dari bunga ditempatkan antara kuat cbh1 / promotor cel7A dan terminator
dan berubah ke dalam host. Kedua plasmid melingkar dan fragmen terisolasi dapat digunakan,
tetapi penghapusan urutan diperlukan untuk propagasi dalam hospes perantara.

Fig. 2.4. Silsilah berbagai tinggi-menghasilkan Trichoderma reesei mutan garis keturunan
(diadaptasi dari Nevalainen et al., 1994).
E. coli biasanya disukai untuk meminimalkan jumlah DNA asing dalam Tuan rumah
produksi. Gen terintegrasi secara acak ke dalam genom biasanya di 1-3 salinan, tetapi ditargetkan
pengganti juga dapat terjadi, terutama jika konstruk pelabuhan panjang yang memadai baik dari
5 'dan 3' mengapit daerah gen yang akan dihapus (Mntyl et al., 1998). Hasil dari heterolog
protein kultus diffi awalnya untuk mengekspresikan dalam host dapat ditingkatkan dengan
menggunakan asli N-terminal protein pembawa atau modul dan dengan menggunakan host
rendah-protease (Penttil, 1998). Pembangunan jalur sel disesuaikan memiliki gen untuk utama
kegiatan selulase atau xilanase dihapus dalam genom sangat memudahkan deteksi sinyal dari gen
yang diinginkan di kedua tes enzim dan SDSPAGE analisa. Penggunaan latar belakang
ketegangan tersebut juga mempercepat regangan pekerjaan pembangunan, karena sering ada

tidak ada kegiatan yang tidak diinginkan yang tersisa di host yang dapat berbahaya dalam
aplikasi dimaksudkan. Karena banyak dari novel enzim dikembangkan untuk aplikasi pakan
secara intrinsik termostabil (di Untuk bertahan hidup pada suhu pelet), thermolabile sisi-kegiatan
asli host produksi sekarang memiliki kurang penting dibandingkan sebelumnya di final
aplikasi.
Perkembangan biologi sistem alat seperti profil transkripsi dan proteomik memberikan
kemungkinan menarik untuk analisis dan rasional pengembangan platform produksi. Hal ini
memungkinkan pandangan global karena kemampuan untuk melihat jumlah ekspresi gen dan
produksi protein di bawah pertumbuhan yang berbeda kondisi dan fase. Hal ini memungkinkan
pemeriksaan yang komprehensif dari perbedaan antara perwakilan galur mutan yang berbeda.
Idealnya, analisis harus mengungkapkan mutasi uncharacterized bertanggung jawab atas
benefi fitur resmi dari mutan proprietary tinggi menghasilkan.
The tersedia untuk umum RutC-30 adalah mutan tiga langkah berasal dari QM6a
mengisolasi dan menyajikan garis keturunan yang berbeda dibandingkan dengan banyak garis
yang berasal dari QM9414 (Gambar. 2.4). Regangan ini dan saudaranya RL-P37 (Sheir-Neiss
dan Montenecourt, 1984) telah menjadi subyek penelitian untuk banyak kelompok penelitian,
karena mereka mampu menghasilkan titer wajar selulase. RutC-30 adalah glukosa de-ditekan
mutan membawa terpotong versi gen represor cre1 (Ilmen et al., 1996). Saudara regangan RLP37 telah digunakan sebagai strain acuan untuk digunakan dalam konversi biomassa untuk
gula difermentasi oleh selulase dan enzim terkait (Tolan dan Foody, 1999; Foreman dkk., 2003;
Diener et al., 2004). Sebuah studi rinci terbaru dari RutC-30 mutan dan leluhur terdekatnya
NG14 telah mengungkapkan mengejutkan tingginya angka kejadian mutagenik (> 200),
termasuk penghapusan besar, yang telah terakumulasi selama tiga langkah mutagenik mulai dari
alam liar mengisolasi QM6a, sebagaimana telah disarankan oleh studi kariotipe awal yang
dilakukan oleh kontur-dijepit homogen medan listrik (CHEF) gel elektroforesis (Mntyl et al,
1992;. Le Crom et al, 2009.). Tingginya jumlah random mutasi selama setiap langkah
menyajikan tantangan besar untuk analisis sistem biologi data dan menekankan pentingnya hatihati dipilih layar ketika mengembangkan strain menggunakan metode konvensional. Dengan
biaya sequencing setelah turun signifi kan, itu layak untuk urutan seluruh yang genom mutan
baru dipilih untuk menentukan di mana perubahan cant signifikan memiliki telah dibuat.

Baru-baru ini telah ditemukan bahwa T. reesei memiliki sebuah kawin MAT1-2 jenis,
yang memungkinkan sukses persimpangan dengan H. jecorina regangan membawa berlawanan
jenis kawin MAT1-1 (Seidl et al., 2009). Perkembangan lebih lanjut dalam perkembangan
seksual T. reesei / H. jecorina mudah-mudahan akan memungkinkan industry mikrobiologi untuk
menggabungkan karakteristik yang diinginkan dari galur mutan yang berbeda dalam satu strain
unggul, serta untuk menghilangkan akumulasi berbahaya mutasi.
Proses Produksi
Hampir semua mikroba menghasilkan enzim industri disekresikan, glukosa isomerase
menjadi pengecualian dari aturan, dan akibatnya enzim persiapan yang pada dasarnya
terkonsentrasi, bebas sel, media kultur menghabiskan. pakan yang modern enzim diproduksi di
bioreaktor besar, dengan volume tahap produksi mulai 50-250 m3; ukuran yang lebih kecil yang
paling cocok untuk bakteri budidaya, sedangkan volume yang lebih besar dapat digunakan untuk
ragi dan jamur. Ini adalah aseptik dan fermentasi aerobik, di mana suhu, pH, berbusa, aerasi dan
pencampuran secara hati-hati dipantau dan dikendalikan (Gambar. 2.5). strain produksi biasanya
dipertahankan sebagai kultur murni atau bekerja bank sel (WCB) di -80C atau lebih rendah, atau
sebagai persiapan beku-kering, dan dihidupkan kembali pada miring atau piring.

FIg. 2.5. Presentasi skematis dari bioreaktor utama dalam terendam-jenis enzim industri
produksi.
Benih budaya untuk bioreaktor produksi tumbuh dalam volume yang lebih besar berturutturut, mulai dari termos goyang dan satu atau dua biji tank sebelum inokulasi ke bioreaktor akhir.
Media produksi harus terdiri dari bahan baku murah yang tersedia dalam jumlah besar,
tidak musiman, adalah kualitas yang konsisten dan tidak beracun. Sumber karbon larut seperti
maltodekstrin, sirup glukosa, sukrosa atau laktosa lebih disukai, meskipun konstituen larut
seperti selulosa dapat digunakan, terutama dalam jumlah kecil sebagai inducers. Nitrogen
Sumber mungkin kompleks industri oleh-produk, misalnya jagung bubuk curam, butir
menghabiskan, tepung kedelai, dedak sereal, biji kapas atau ekstrak ragi. Makro garam biasanya
meliputi kalium, fosfat, sulfat dan magnesium, dan dalam beberapa kasus kalsium untuk
stabilisasi enzim. Sebuah panduan yang berguna untuk media formulasi dapat diminta dari
Pedagang Protein (Memphis, Tennessee, AMERIKA SERIKAT). Sebagai toleransi osmotik tuan
rumah produksi memungkinkan untuk hanya terbatas konsentrasi awal dari gula dan garam, yang
volumetrik tertinggi produktivitas biasanya dicapai dengan proses makan-batch, di mana nutrisi
terus ditambahkan ke media dari waktu ke waktu untuk mengisi mereka dikonsumsi oleh host
tumbuh. Karena kondisi budidaya biasanya meningkatkan cukup baik, skrining saring dan
optimasi proses dapat dilakukan di laboratorium dan skala pilot, di mana volume berkisar dari
beberapa ratus mililiter untuk beberapa meter kubik.
Dalam pengolahan hilir sel dan padatan dikeluarkan oleh sentrifugasi continuousflow,
menekan filter atau rotary drum yang vakum lters fi. Filter bantu seperti tanah diatom atau
kieselguhr dan flokulan dapat digunakan untuk memfasilitasi pemisahan. Medium menghabiskan
terkonsentrasi oleh, misalnya, filtrasi ultrafi dengan cut-off sekitar 10.000 Da untuk konsentrasi
enzim. Kromatografi metode yang jarang digunakan dalam enzim industri purifi kation, tetapi
selektif curah hujan atau kuantitatif kristalisasi enzim telah diterapkan pada skala besar dalam
kasus-kasus khusus, misalnya dengan glukosa isomerase (Visuri et al., 1990). Jika enzim target
termostabil, enzim tuan mesofilik mungkin akan tidak aktif dan dipicu oleh perlakuan panas.
Kebutuhan untuk menghapus tidak diinginkan sisi-kegiatan sebagian besar dapat dihindari
dengan penghapusan sebelumnya dari gen yang mengkode kegiatan seperti (seperti protease)
dari tuan rumah. Stabilisator (NaCl, gliserol, sorbitol, propilen glikol) dan pengawet (natrium

benzoat, kalium sorbat, metil paraben) ditambahkan seperlunya untuk persiapan enzim cair,
kuantitas dan sejauh digunakan tergantung persiapan yang bersangkutan. Boron senyawa, dalam
kombinasi dengan poliol gliserol dan propilen glikol, dapat digunakan untuk menghambat
protease (Stoner et al., 2004).
Jika produk bubuk lebih disukai, media menghabiskan jelas dan terkonsentrasi harus
dikeringkan, misalnya dengan pengeringan semprot untuk menghasilkan instantized atau produk
pasir. Pengisi seperti dekstrin atau garam mungkin diperlukan sebagai pembawa untuk memulai
proses pengeringan. Butiran yang terbentuk dapat lebih dilapisi untuk ditingkatkan pengendalian
debu atau untuk mencegah inaktivasi dalam proses steam-pelet. Persiapan enzim dikeringkan
kemudian dicampur dengan bahan pengisi seperti tepung gandum atau pati jagung untuk
standarisasi produk secara kegiatan.
Enzim Pengembangan dan Masa Depan Tren
Yang pertama produk enzim pakan komersial di pasar diproduksi oleh CMO dengan
berbagai kegiatan-side. Beberapa fi produk pertama-generasi yang terutama dikembangkan untuk
aplikasi selain pakan. Multikomponen seperti produk masih dipasarkan dan digunakan saat ini
(Tabel 2.1) dan disukai oleh beberapa pelanggan karena penggunaan sejumlah CMO di mereka
produksi. Namun, penggunaan rekayasa genetika memiliki peningkatan enzim hasil produksi
enzim inti (s), membuat produk enzim keduanya lebih ekonomis untuk menggunakan dan lebih
baik defi ned, dan karenanya cocok untuk aplikasi di tangan. Penggunaan teknik genetika juga
memungkinkan produk yang lebih canggih pengembangan, yaitu pengembangan enzim yang
memenuhi spesifik c persyaratan aplikasi pakan. Enzim yang dihasilkan oleh host asli kegiatan
kecil, serta modifi ed enzim, dapat diproduksi dalam jumlah cant signifikan menggunakan strain
tuan rekombinan. Seperti sebuah prestasi adalah sering tidak mungkin menggunakan host klasik
dan teknik. Yang paling terkenal contoh keberhasilan penggunaan rekayasa genetika untuk
memperoleh bernilai tinggi produk untuk industri pakan adalah produksi phytase, saat ini banyak
digunakan di seluruh dunia.
Salah satu target utama untuk aplikasi pakan telah menuju lebih enzim tahan panas yang
dapat menahan suhu pelleting tinggi. Seperti itu produk xilanase disesuaikan yang sudah ada di
pasar (lihat di atas dan Tabel 2.1), dan pengembangan lebih lanjut dapat diharapkan. Informasi
tentang pengembangan dari termostabil -glucanases untuk pakan lebih terbatas (lihat di atas).
Lagi enzim termostabil dapat berasal dari alam, isolat tahan panas, atau dari mutagenesis dari

enzim mesofilik, atau dari kombinasi tahan panas mengisolasi dan mutagenesis. Sejumlah besar
termofilik enzim telah diisolasi dari sumber mikroba (Ulasan di Niehaus et al., 1999; Haki dan
Rakshit, 2003; Collins et al., 2005). Enzim dari archaea seringkali sangat termostabil dan bahkan
dapat menahan mendidih untuk waktu yang lama. Namun, hasil produksi rendah dari asli dan
rekombinan host telah membatasi eksploitasi komersial ini sangat xilanase termostabil dan
xilanase bakteri termostabil secara umum (misalnya Bergquist et al., 2002). Dengan
menggunakan desain dan evolusi strategi yang rasional, beberapa kation modifi sukses telah
dilaporkan yang telah meningkatkan thermostability dari xilanase mesofilik dengan 15-20 C
atau bahkan lebih (misalnya Palackal dkk., 2004; Xiong et al., 2004). Terlepas dari keberhasilan
itu, bagaimanapun, suhu kestabilan dari modifi ed xilanase mesofilik sering tetap lebih rendah
dibandingkan enzim termofilik yang diisolasi dari sumber asli, dan lebih rendah dari yang ideal
untuk digunakan dalam industri pakan.
Target lain baru-baru ini pembangunan enzim pakan telah xilanase tahan terhadap
inhibitor alami dalam biji-bijian. Xilanase tersebut sudah pernah maju dan tersedia secara
komersial untuk penggunaan makanan (lihat di atas). Kemungkinan bahwa enzim ini akan
dikembangkan lebih lanjut dan lebih dari inhibitorresistant ini mutan, berdasarkan tulang
punggung xilanase yang berbeda, juga akan memasukkan pasar untuk digunakan pakan. Salah
satu isu dengan xilanase tahan inhibitor saat ini bahwa aktivitas spesifik mereka lebih rendah
dibandingkan dengan enzim asli, yang mungkin dapat dibahas dalam mutan masa depan.
Peningkatan aktivitas spesifik enzim yang digunakan dalam aplikasi pakan akan juga
menjadi resmi benefi, hasil yang diberikan selama fermentasi tidak terpengaruh. Ini karena itu
akan memungkinkan dosis ekonomis ditingkatkan signifi kan, mungkin memungkinkan
degradasi dinding sel di aleuron yang dan lapisan luar dari biji-bijian sereal. Gambar
mikroskopis menunjukkan bahwa endosperm dinding sel gandum dapat terdegradasi oleh
kombinasi xilanase / -glukanase lebih mudah daripada yang dari lapisan aleuron, yang lebih
tebal dan karena itu tidak mudah didegradasi oleh enzim tambahan, seperti digambarkan dalam
Fig.2.6. Dalam rangka untuk membuat aleuron, atau bahkan NSP, dari lapisan luar lebih mudah
dicerna, laju dosis enzim harus meningkat secara substansial, yang tidak biasanya ed justifi
ekonomis. Selain itu, rekayasa selektivitas substrat enzim mungkin menghasilkan perbaikan
lebih lanjut (Moers et al., 2005, 2007).

Saat ini, persiapan enzim pakan komersial difokuskan pada peningkatan sereal gandum.
Di masa depan, lebih banyak produk enzim tambahan untuk diet kaya 'sereal non-kental' dan
kacang-kacangan dan biji minyak tanaman yang diharapkan. Struktur polisakarida substrat ini
biasanya sangat kompleks, yang menunjukkan bahwa kombinasi dari berbagai jenis aktivitas
enzim adalah diperlukan. Selain itu, bahkan lebih kompleks / substrat variabel (misalnya dengan
produk- baik dari produksi biofuel atau sumber volume bijak lain yang penting) mungkin
ditargetkan untuk digunakan pakan dan / atau hidrolisis lebih lengkap saat / masa depan substrat
mungkin ditemukan diperlukan atau menguntungkan. Enzim pakan saat ini produk sering
mengandung minor sisi-kegiatan yang menurunkan sisi-rantai NSP, misalnya kelompok
substituen xilan seperti arabinosa.

Fig. 2.6. Gambar mikroskopis dinding sel endospermic dan aleuron gandum sebelum (a) dan
setelah (b) pengobatan dengan persiapan Trichoderma xilanase / -glukanase.
Kegiatan ini akan paling

mungkin menjadi subjek penelitian lebih lanjut, untuk

pengetahuan kita mereka tidak memiliki pada saat ini dalam waktu dikembangkan dan
diproduksi untuk digunakan pakan. Produk dengan Kegiatan utama ganda disesuaikan dapat
dibuat dengan mencampur terpisah monocomponent produk, tetapi mereka juga dapat diperoleh
dengan overproducing multi-domain enzim asli atau protein fusi rekayasa yang memiliki dua
atau domain lebih terpisah dengan kegiatan yang berbeda (dan sinergis bertindak). Seperti itu

enzim multifungsi telah dibangun; misalnya, fusi protein yang Thermoanaerobacter ethanolicus
xilosidase-arabinosidase dan T. lanuginosus xilanase terkait acara ditingkatkan efi siensi pada
arabinoxylan dibandingkan dengan yang sesuai enzim bebas (Xue et al., 2009).
Salah satu bidang yang menarik untuk perbaikan lebih lanjut adalah pembentukan dan
pemanfaatan oligosakarida prebiotik untuk peternakan. Saat ini, oligosakarida dipelajari secara
ekstensif termasuk fructo-oligosacharides dan a-galacto-oligosakarida dari asal tanaman dan
mannooligosaccharides ragi yang diturunkan. Yang terakhir dikenal untuk bersaing dengan
dinding sel usus untuk situs pengikatan bakteri, misalnya E. coli dan Salmonella spp.
mengandung mannosespecificlectins pada permukaannya (Rehman et al., 2009). Mekanisme
terkait untuk fermentasi oligosakarida, bagaimanapun, memerlukan penelitian lebih lanjut untuk
sepenuhnya dipahami dan digunakan. Mengenai xilanase, telah menunjukkan bahwa yang Xylooligosakarida terbentuk selama degradasi xylans dapat dihidrolisis oleh Bifi dobacterium dan
Lactobacillus spp., yang mengakibatkan peningkatan dalam populasi bakteri resmi benefi dan
penurunan jumlah berbahaya contoh (Thammarutwasik et al., 2009). The arabinoxylans dan
mereka oligosakarida difermentasi untuk tingkat yang berbeda dan dengan spesies yang berbeda.
Sebagai contoh, sebuah polimer arabinoxylan dapat difermentasi oleh Bifi dobacterium longum
dan Bacteroides ovatus, sedangkan Bacteroides vulgatus dan Adolescentis Bifidibacterium
mampu memfermentasi oligosakarida bercabang benar tetapi tidak menunjukkan aktivitas
terhadap polimer arabinoxylan (van Laere et al., 1977). Jadi, dalam hal ini, kekhususan xilanase
mungkin berperan dalam menentukan populasi usus flora yang sebagai akibat dari identitas
oligomer dominan diproduksi.
Kebanyakan enzim pakan telah dikembangkan untuk digunakan pada babi dan unggas
diet. Produk untuk berbagai spesies target yang paling mungkin akan mengikuti waktu. Spesies
tersebut termasuk ruminansia, ikan, hewan peliharaan dan hewan bulu. Bahan baku yang
digunakan untuk hewan-hewan ini dan kondisi saluran usus berbeda secara signifikan dari babi
dan unggas dan, sebagai hasilnya, produk enzim dipertimbangkan juga mungkin berbeda dengan
mereka yang bekerja hari ini. Dalam waktu yang lebih jauh secara genetic tanaman modifi ed
lebih cocok untuk makan digunakan atau hewan dengan kemampuan yang lebih baik untuk
memanfaatkan bahan pakan mungkin dikembangkan. Laporan tentang ekspresi sukses dan
produksi xilanase (a domain katalitik dari xilanase jamur) dan selulase (hibrida 1,4--glukanase)
ke barley endosperm sudah tersedia (Patel et al, 2000;.. Xue et al, 2003).

Karena peraturan yang ketat dan persyaratan pengujian ekstensif, pengembangan dan
pendaftaran enzim pakan biasanya memakan waktu beberapa tahun. Ini telah tertunda atau
merupakan penghalang terhadap pembangunan dan / atau pengenalan pakan baru produk enzim.
Ini akan bermanfaat jika kerangka waktu dari pengembangan enzim produk ke pasar yang lebih
pendek. Penurunan jumlah percobaan hewan dan sedikit waktu untuk prosedur pendaftaran
dapat dicapai sejajar dengan pengembangan model sistem invitro, dan pelaksanaan sistem seperti
GRAS (Umumnya Dianggap Sebagai Safe) di Amerika Serikat dan QPS (Qualifi ed Praduga
Keselamatan) di Uni Eropa. Subjek ini dibahas lebih lanjut di bab lain dari buku ini.
Kesimpulan
Xilanase dan -glucanases akan tetap sebagai NSP utama enzim dalam pakan industri.
Beberapa rintangan menampilkan diri untuk kandidat baru. Sebagai tambahan kinerja pada
hewan, enzim perlu diproduksi di komersial tingkat kompetitif dan berhasil mencapai otorisasi
peraturan, yang biasanya membutuhkan proses yang luas dan memakan waktu. Akibatnya, di
saat ini dalam waktu enzim NSP komersial yang berasal dari hanya terbatas jumlah organisme
donor potensial. Saat ini, penelitian berfokus pada pengembangan enzim yang tahan terhadap
suhu tinggi, untuk alam inhibitor dan, pada saat yang sama, yang paling cocok untuk kondisi di
saluran pencernaan hewan sasaran. Hal ini dapat diharapkan bahwa, bersamaan dengan
meningkatkan pengetahuan tentang fisiologi dan enzim pencernaan mekanisme, lebih xilanase
disesuaikan, -glucanases dan enzim lain, baik secara tunggal atau dikombinasikan, akan muncul
di pasar.