Kromatografi lapis tipis Dari Wikipedia, ensiklopedia bebas Langsung ke: navigasi, cari Kromatografi lapis tipis TLC

black ink.jpg Pemisahan tinta hitam pada pelat KLT Akronim TLC Klasifikasi Kromatografi Lain teknik Terkait Agarose gel elektroforesis SDS-PAGE Kromatografi lapis tipis (TLC) adalah teknik kromatografi yang digunakan untuk memisahkan campuran [1] kromatografi lapis tipis dilakukan pada selembar kaca, plastik, atau aluminium foil, yang dilapisi dengan lapisan tipis bahan adsorben, biasanya silika gel., aluminium oksida, atau selulosa (tinta kertas). Ini lapisan adsorben dikenal sebagai fase diam. Setelah sampel telah diterapkan di piring, campuran pelarut atau pelarut (dikenal sebagai fase gerak) ditarik piring melalui kapiler. Karena analit yang berbeda naik pelat TLC pada tingkat yang berbeda, pemisahan dicapai. [2] Kromatografi lapis tipis dapat digunakan untuk memantau kemajuan reaksi, mengidentifikasi senyawa hadir dalam campuran tertentu, dan menentukan kemurnian zat. Contoh-contoh spesifik dari aplikasi ini meliputi: menganalisa ceramides dan asam lemak, deteksi pestisida atau insektisida dalam makanan dan air, menganalisis komposisi zat warna dari serat dalam forensik, pengujian kemurnian radiokimia radiofarmasi, atau identifikasi tanaman obat dan konstituen mereka [3] Sejumlah perangkat tambahan dapat dibuat dengan metode asli untuk mengotomatisasi langkahlangkah yang berbeda, untuk meningkatkan resolusi dicapai dengan TLC dan memungkinkan kuantisasi lebih akurat. Metode ini disebut sebagai HPTLC, atau "high performance TLC". Isi 1 pelat persiapan 2 Teknik 2.1 Pemisahan proses 3 Analisis 4 Aplikasi 5 Referensi Piring persiapan Pelat TLC biasanya tersedia secara komersial, dengan ukuran partikel berkisar standar untuk meningkatkan reproduktifitas. Mereka dibuat dengan cara mencampurkan adsorben, seperti gel silika,

dengan sejumlah kecil pengikat lembam seperti kalsium sulfat (gipsum) dan air. Campuran ini menyebar sebagai bubur tebal pada lembar pembawa tidak aktif, biasanya kaca, aluminium foil tebal, atau plastik. Pelat yang dihasilkan dikeringkan dan diaktifkan dengan pemanasan dalam oven selama tiga puluh menit pada 110 C. Ketebalan lapisan adsorben biasanya sekitar 0,1-0,25 mm untuk tujuan analitis dan sekitar 0,5 -. 2,0 mm untuk KLT preparatif [4] Teknik Pengembangan piring TLC, tempat ungu memisahkan menjadi titik merah dan biru. Kromatogram dari 10 minyak esensial diwarnai dengan pereaksi vanillin. Proses ini mirip dengan kromatografi kertas dengan keuntungan dari berjalan lebih cepat, pemisahan yang lebih baik, dan pilihan antara fasa diam yang berbeda. Karena kesederhanaan dan kecepatan TLC sering digunakan untuk reaksi kimia pemantauan dan analisis kualitatif produk reaksi. Untuk menjalankan kromatografi lapis tipis, prosedur berikut dilakukan: [5] Tempat kecil larutan yang mengandung sampel diterapkan ke piring, sekitar 1,5 sentimeter dari tepi bawah. Pelarut dibiarkan menguap sepenuhnya off, jika pemisahan yang sangat miskin atau tidak akan tercapai. Jika non-volatile pelarut yang digunakan untuk menerapkan sampel, piring perlu dikeringkan dalam ruang vakum. Sejumlah kecil suatu pelarut yang tepat (elutant) dituangkan ke dalam gelas kaca atau wadah transparan lainnya yang sesuai (chamber pemisahan) dengan kedalaman kurang dari 1 sentimeter. Sebuah strip kertas saring (alias "sumbu") dimasukkan ke dalam kamar, sehingga bagian bawahnya menyentuh pelarut, dan kertas terbentang di dinding ruang dan mencapai hampir ke puncak wadah. Wadah ditutup dengan penutup kaca atau tutup lain dan dibiarkan selama beberapa menit untuk membiarkan uap pelarut naik kertas saring dan menjenuhkan udara di ruangan. (Kegagalan untuk jenuh ruangan akan mengakibatkan pemisahan miskin dan non-direproduksi hasil). Pelat TLC kemudian ditempatkan dalam ruang sehingga tempat (s) dari sampel tidak menyentuh permukaan elutant di ruangan itu, dan tutupnya ditutup. Bergerak pelarut piring dengan aksi kapiler, memenuhi campuran sampel dan membawa itu piring (elutes sampel). Ketika bagian depan pelarut mencapai tidak lebih tinggi dari bagian atas kertas saring dalam ruangan, piring harus dihapus (kelanjutan elusi akan memberikan hasil yang menyesatkan) dan dikeringkan. Pemisahan proses Berbeda senyawa dalam campuran sampel pada tingkat yang berbeda karena perbedaan dalam daya tarik mereka ke fase diam, dan karena perbedaan kelarutan dalam pelarut. Dengan mengubah pelarut, atau mungkin menggunakan campuran, pemisahan komponen (diukur dengan nilai Rf) dapat disesuaikan. Juga, pemisahan dicapai dengan pelat KLT dapat digunakan untuk memperkirakan pemisahan kolom kromatografi. [6] Pemisahan senyawa didasarkan pada persaingan zat terlarut dan fase gerak untuk tempat mengikat fase diam. Misalnya, jika fase silika gel biasa digunakan sebagai fase diam dapat dianggap polar. Mengingat

dua senyawa yang berbeda dalam polaritas, senyawa polar yang lebih memiliki interaksi kuat dengan silika dan karena itu lebih mampu untuk menghilangkan fase gerak dari tempat mengikat. Akibatnya, senyawa kurang polar bergerak lebih tinggi piring (menghasilkan nilai Rf yang lebih tinggi). Jika fase mobile berubah menjadi lebih polar pelarut atau campuran pelarut, itu lebih mampu menghilangkan zat terlarut dari tempat silika mengikat dan semua senyawa pada pelat TLC akan bergerak lebih tinggi piring. Hal ini umumnya mengatakan bahwa "yang kuat" pelarut (elutants) mendorong senyawa dianalisis piring, sementara "lemah" elutants hampir tidak memindahkan mereka. Urutan kekuatan / kelemahan tergantung pada lapisan (fase diam) dari pelat TLC. Untuk pelat silika gel dilapisi TLC, peningkatan kekuatan elutant dengan urutan sebagai berikut: Perfluoroalkane (terlemah), Hexane, Pentana, Karbon tetraklorida, Benzene / Toluena, Dichloromethane, Dietil eter, etilasetat, asetonitril, Aseton, 2Propanol/n-Butanol , Air, Methanol, trietilamina, asam asetat, asam format (terkuat). Untuk piring dilapisi C18 order terbalik. Praktis hal ini berarti bahwa jika Anda menggunakan campuran etil asetat dan heksana sebagai fase gerak, menambahkan hasil asetat lebih etil nilai Rf yang lebih tinggi untuk semua senyawa pada pelat TLC. Mengubah polaritas fase gerak biasanya tidak akan menghasilkan urutan terbalik dari menjalankan senyawa pada pelat TLC. Sebuah seri eluotropic dapat digunakan sebagai panduan dalam memilih fase gerak. Jika urutan terbalik dari menjalankan senyawa yang diinginkan, fase stasioner apolar harus digunakan, seperti C18-difungsikan silika. Analisa Sebagai bahan kimia yang terpisah mungkin tidak berwarna, beberapa metode yang ada untuk memvisualisasikan tempat: Seringkali sejumlah kecil senyawa neon, biasanya mangan-diaktifkan seng silikat, ditambahkan ke adsorben yang memungkinkan visualisasi dari tempat bawah blacklight (UV254). Lapisan adsorben sehingga akan berpendar hijau muda dengan sendirinya, tapi tempat analit memuaskan fluoresensi ini. Uap yodium adalah reagen warna umum tidak spesifik Reagen warna tertentu ada di mana lempeng TLC adalah dicelupkan atau yang disemprotkan ke piring [7] Kalium permanganat - oksidasi Yodium Brom Dalam kasus lipid, kromatogram dapat ditransfer ke membran PVDF dan kemudian mengalami analisis lebih lanjut, untuk spektrometri massa misalnya, teknik yang dikenal sebagai Far-Timur blotting. Setelah terlihat, nilai Rf, atau faktor keterbelakangan, dari tempat masing-masing dapat ditentukan dengan membagi jarak produk bepergian dengan jarak depan pelarut perjalanan menggunakan situs bercak awal sebagai referensi. Nilai-nilai ini tergantung pada pelarut yang digunakan dan jenis pelat TLC dan tidak konstanta fisik. Aplikasi Dalam kimia organik, reaksi yang kualitatif dipantau dengan TLC. Tempat sampel dengan tabung kapiler ditempatkan di piring: tempat dari bahan awal, tempat dari campuran reaksi, dan "co-spot" dengan

baik. Sebuah piring (3 oleh 7 cm) kecil TLC berlangsung beberapa menit untuk menjalankan. Analisis kualitatif, dan akan menunjukkan apakah bahan awal telah menghilang, yaitu reaksi selesai, jika produk apapun telah muncul, dan berapa banyak produk yang dihasilkan (meskipun ini mungkin dianggap remeh karena co-elusi). Sayangnya, TLC dari suhu rendah reaksi dapat memberikan hasil yang menyesatkan, karena sampel dipanaskan sampai suhu kamar dalam kapiler, yang dapat mengubah reaksi-sampel hangat dianalisis dengan TLC yang tidak sama dengan apa yang ada dalam labu suhu rendah . Salah satu reaksi tersebut adalah pengurangan DIBALH dari ester untuk aldehida. Sebagai contoh kromatografi dari ekstrak daun hijau (bayam misalnya untuk) dalam 7 tahap pembangunan. Karoten elutes cepat dan hanya terlihat sampai langkah 2. Klorofil A dan B berada setengah jalan di langkah terakhir dan lutein pewarnaan senyawa pertama kuning. Langkah 1 Langkah 2 Langkah 3 Langkah 4 Langkah 5 Langkah 6 Langkah 7 Dalam satu studi TLC telah diterapkan dalam pemutaran reaksi organik [8] misalnya dalam fine tuningsintesis BINAP dari 2-naftol. Dalam metode ini solusi alkohol dan katalis (misalnya (III) klorida besi) ditempatkan secara terpisah pada garis dasar, kemudian bereaksi dan kemudian langsung dianalisis. Referensi ^ HARRY W LEWIS, Christopher J. Moody. Eksperimental organik kimia: Prinsip dan Praktek (Illustrated edisi ed.). hlm 159-173. ISBN 978-0-632-02017-1. ^ Textbook Vogel Kimia Organik Praktis (Edisi 5) (Hardcover) by AI Vogel (Author), A.R. Tatchell (Author), B.S. Furnis (Author), A.J. Hannaford (Author), P.W.G. Smith ISBN 0-582-46236-3 ^ Reich, E., Schibli A. Kinerja tinggi kromatografi lapis tipis untuk analisis tanaman obat (ilustrasi edition). Thieme: New York, 2007. ISBN 3-13-141601-7 ^ Tabel menunjukkan nilai ketebalan pelat komersial reguler dan preparatif kromatografi lapis tipis ^ Kromatografi lapis tipis: Cara http://www.reachdevices.com/TLC.html ^ Fair, J. D., Kormos, C. M. J. Chromatogr. A 2008, 1211 (1-2), 49-54. (Doi: 10.1016/j.chroma.2008.09.085) ^ Lapis Tipis Kromatografi noda http://www.reachdevices.com/TLC_stains.html

^ TLC piring sebagai platform nyaman untuk bebas pelarut reaksi Jonathan M. Stoddard, Lien Nguyen, Hector Mata-Chavez dan Kelly Nguyen Chem. . Commun, 2007, 1240-1241, doi: 10.1039/b616311d