PENGENALAN METODE

ANALISIS
KROMATOGRAFI

1
Kromatografi ?
Kromatografi merupakan metode
pemisahan di mana komponen-komponen
yang akan dipisahkan terdistribusi di
antara dua fase, yaitu fasa diam
(stationary phase) dan fase gerak (mobile
phase) IUPAC 1993
Dapat diaplikasikan untuk senyawa
organik dan anorganik

2
Prinsip-prinsip dasar Pemisahan
Analit yang dipisahkan dari suatu
campuran dilewatkan melalui stationary
phase (fasa diam) menggunakan mobile
phase (fasa gerak)
Fasa gerak = pelarut
Fasa diam = bahan packing kolom

3
Prinsip-prinsip dasar Pemisahan
Pemisahan terjadi karena analit pada fasa
gerak berinteraksi dengan fasa diam
dengan kecepatan yang berbeda

4
 Prinsip-
prinsip dasar
Pemisahan
Contoh: Kolom
Kromatografi elusi
Dua zat (A & B)
diinjeksikan dalam
kolom melalui fase
gerak (pelarut)
atau eluen yang
dipompa secara
kontinu
5
Prinsip-prinsip dasar Pemisahan
Pemisahan tergantung pada partisi zat
terlarut (solut) diantara fasa gerak dan
fasa diam
Interaksi ini digambarkan dengan
koefisien partisi K
K = cs/cm
dengan:
cs = konsentrasi fasa diam (molar)
cm = konsentrasi fasa gerak (molar)
6
Jenis-jenis Kromatografi

Chromatography
Planar Column
Liquid Gas Supercritical Fluid
Partition Gas - Liquid

Bonded Phase Gas Bonded Phase

Adsorption Gas - Solid

Ion Exchange

Size Exclusion

7
DASAR PEMISAHAN DALAM KROMATOGRAFI

Fasa Diam
Fasa Diam

Kromatografi Adsorpsi Kromatografi Partisi

Fasa Diam

Kromatografi Pertukaran Ion Kromatografi Eksklusi

Klasifikasi metode kromatografi kolom

9
 Kromatogram
E A

Waktu sebuah puncak

Kromatogram muncul (waktu retensi)
D

B
C

Sampel

Kromatogram
B
C
E Ukuran relatif dari
A
sebuah puncak (luas
Kelimpahan

area atau tinggi)

proporsional dengan
kelimpahan relatif
D
dari senyawa dalam
0 5 10 15 20 sampel tsb 10
Waktu (menit)
Term Kromatografi

11
 Term Kromatografi
1. Waktu retensi (tR) = Waktu yang dibutuhkan
sebuah analit melewati kolom dari setelah injeksi
sampai mencapai detektor
2. Dead time (tM) = Waktu untuk spesies yang tidak
tertahan untuk mencapai detektor
3. Kecepatan fasa gerak (u) = L/tM; Kecepatan linear
rata-rata dari gerakan molekul-molekul dalam fasa
geraknya
L = Panjang kolom
4. Kecepatan linear migrasi solut (v ) = L/tR

12
Term Kromatografi
5. Faktor Kapasitas (kA) = suatu term yang
digunakan untuk menggambarkan laju migrasi
analit pada kolom
K AVS
k'A
dengan:
VM
KA = tetapan distribusi spesies A (KA = CAs/CAM )
VS = volume fasa diam
VM = volume fasa gerak

13
Term Kromatografi
Faktor kapasitas dapat ditentukan secara
lansung dari kromatogram menggunakan
tR tM
k'A
tM

14
Term Kromatografi
Interpretasi faktor retensi:
Jika kA < 1; Elusi terlalu cepat untuk
penentuan waktu retensi yang akurat
Jika kA > 10; Elusi terlalu lambat
Range yang disukai untuk kA diantara 1 dan 5

15
Term Kromatografi
6. Faktor Selektivitas (a) = KB /KA
KB adalah tetapan distribusi dari spesies yang
ditahan lebih lama (sehingga a >1)
Faktor selektivitas dapat juga didefiniskan
dalam term faktor retensi dan waktu
retensi:
k 'B (tR ) B tM
a
k ' A (tR ) A tM
16
Term Kromatografi

7. Plate Height (H) and Plat Teoritis (N)

Untuk menggambarkan effisiensi kolom
kromatografi
Effisiensi kolom naik dengan naiknya N
N = L/H

17
Term Kromatografi
Teori Plat digunakan untuk menggambarkan
migrasi solut melalui suatu kolom dan bentuk
Gaussian dari sebuah puncak
Jika bentuk puncak kromatografi diasumsikan Gaussian,
plate height dapat didefinisikan dalam term statistik yang
melibatkan standar deviasi ()

2
H
L
20
 Perhitungan N dari sebuah
Kromatogram
W = panjang alas
segitiga (dalam
satuan waktu)
tM = waktu retensi solut
yg tidak tertahan
tR = waktu retensi solut 2
tR
N 16
W
23
Band Broadening
(Pelebaran Pita Kromatogram)
1. Difusi Eddy
2. Difusi Longitudinal
3. Transfer Massa

(Pembahasan ke-3nya lihat text book)

24
 Term Kromatografi
Resolusi Kolom (RS) merupakan ukuran kuantitatif
kemampuan sebuah kolom untuk memisahkan dua analit:

2[(t R ) B (t R ) A ]
RS
W A WB
Utk meningkatkan resolusi, panjang kolom ditambah (L)
Keterbatasan: waktu lebih lama dan pita2 lebih lebar
Umumnya merupakan kompromi antara resolusi dan
kecepatan analisis

25
Summary Term yang penting

27
Summary Term yang penting

28
Variabel yg mempengaruhi Effisiensi
pemisahan dalam Kolom Kromatografi
Secara umum Effisiensi Pemisahan : Effisiensi maka
N dan H
1. Ukuran Partikel Packing (ukuran , N dan H)
2. Viskositas Fasa Gerak (viskositas , N dan H)
3. Temperature (T , k' , tetapi a tetap)
4. Kecepatan Linear Fasa gerak; u = L/tM (u
proportional dengan 1/tM dan L = konstan)
5. Panjang Kolom (L , N, tetapi H = konstan, dan
effisiensi pemisahan )
29
Variabel yang mempengaruhi
Effisiensi Kolom
Liquid Chromatography

Laju alir Fasa gerak

- Optimum laju alir pada
H minimum
H lebih kecil untuk HPLC
daripada untuk GC
(lebih effisien), tetapi Gas Chromatography
prakteknya kolom GC
lebih panjang daripada
HPLC sehingga N
untuk GC lebih besar.

30
Variabel yang mempengaruhi
Effisiensi Kolom
Ukuran partikel packing kolom
Semakin kecil partikel packing, semakin besar
effisiensi kolom.

31
 Masalah umum
ELUSI
Umumya sulit untuk
menemukan suatu
kondisi dimana
semua puncak dapat
terpisah baik dan
memungkinkan
kuantifikasi yang
dapat dipercaya
Solusi
Running pada
beberapa kondisi
Elusi yang terprogram
(merubah kondisi
selama running) 32