PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK SARANG SEMUT (MYRMECODIA

PENDENS) DAN KOMBINASI METHOTREXATE DENGAN

CYCLOPHOSPAMIDE TERHADAP DERAJAT NEKROSIS SEL
ADENOCARSINOMA MAMMAE
Studi Eksperimental Pada Mencit C3H yang Diinokulasi Adenokarsinoma
Mammae

Usulan Karya Tulis Ilmiah

untuk memenuhi sebagian persyaratan mencapai gelar Sarjana Kedokteran

Diajukan Oleh:

Hesti Paramitha Tanjung Sahertianti

30101407205

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS ISLAM SULTAN AGUNG
SEMARANG
2018

i
 Karya Tulis Ilmiah

PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK SARANG SEMUT (Myrmecodia

pendens) DAN KOMBINASI METHOTREXATE DENGAN
CYCLOPHOSPHAMIDE TERHADAP DERAJAT NEKROSIS SEL
ADENOCARSINOMA MAMMAE
Studi Eksperimental Pada Mencit C3H yang Diinokulasi Sel
Adenokarsinoma Mammae

Diajukan oleh :

Hesti Paramitha Tanjung Sahertianti

30101407205

Telah disetujui oleh :

Pembimbing I

dr. H. Sumarno, M. Si, Med, Sp. PA. Semarang, 14 Februari 2018

Pembimbing II

dr. H. M. Agus Suprijono, M. Kes. Semarang, 14 Februari 2018

ii
 PRAKATA

Assalamu’alaikum Wr.Wb.

Puji syukur kehadirat Allah SWT atas anugerah, hidayah dan

rahmatNya sehingga Skripsi dengan judul “Pengaruh Pemberian Ekstrak Sarang

Semut (Myrmecodia Pendens) dan Kombinasi Methotrexate Dengan

Cyclophospamide Terhadap Derajat Nekrosis Sel Adenocarcinoma Mammae.

Studi Eksperimental Mencit C3H yang Diinokulasi Adenocarcinoma Mammae

dapat terselesaikan.

Skripsi ini disusun sebagai salah satu syarat untuk mencapai gelar

sarjana kedokteran di Fakultas Kedokteran Universitas Islam Sultan Agung

Semarang. Pada kesempatan ini penulis ingin menyampaikan terima kasih yang

sedalam-dalamnya kepada:

1. Dr. dr. Setyo Trisnadi, Sp.KF selaku Dekan Fakultas Kedokteran Universitas

Islam Sultan Agung Semarang.

2. dr. H. Sumarno, M.Si.Med, Sp.PA , dan, dr. H. M. Agus Suprijono, M.Kes

selaku dosen pembimbing I dan II yang telah dengan sabar meluangkan

waktu dan pikiran untuk mengarahkan dan membimbing penulis hingga

terselesaikannya Karya Tulis Ilmiah ini.

3. Dr. dr. Hj. Chodidjah, M.Kes. PA, dan dr. Istiqomah, Sp.KF.,MH, selaku

dosen penguji yang telah dengan sabar meluangkan waktu dan pikiran untuk

mengarahkan dan membimbing penulis hingga terselesaikannya Karya Tulis

Ilmiah ini.

iii
4. Bapak Heru Muntajiono, Ibu dr. Fatchroyati Susana, dr. Okky Alfian

Fatchrojiono, Aditya Darma Hutama S.T, Herza Kusuma Darma F, penulis

menyampaikan rasa terima kasih yang tulus dan ikhlas atas cinta, kasih

sayang, dukungan serta doa yang tiada henti.

5. Seluruh staf Laboratorium Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran Universitas

Indonesia dan Laboratorium Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran

Universitas Islam Sultan Agung yang telah membantu dalam penelitian ini.

6. Seluruh staf Laboratorium Biokimia Fakultas Kedokteran Universitas Islam

Sultan Agung yang telah membantu dalam penelitian ini.

7. Sahabat dan teman seperjuangan Skripsi: Rizka Hidya Tiffani, Verdita

Mustika H, Fikri Hanif G, Fatikhatul Malikhah M P, Rizal Hnjani P.

8. Sahabat yang telah mendukung penulis : Amel, Duhita, Astri, Tyas, Intan,

Khadela, Sigit, Deta, Musfira, Dea, Chusna, Almira, Mauris, Rakha, Septi,

Yuana, Fibula, Tiffany, Desti.

9. Semua pihak yang mendukung terselesaikannya Skripsi ini yang tidak dapat

disebutkan satu persatu.

Sebagai akhir kata dari penulis, penulis hanya bisa berharap semoga

Skripsi ini dapat bermanfaat bagi kita semua.

Wassalamu’alaikum Wr. Wb

Semarang,

Penulis

Hesti Paramitha Tanjung Sahertianti

iv
 DAFTAR ISI

Halaman Sampul ........................................................................................ i

Halaman Pengesahan .................................................................................. ii
Prakata ........................................................................................................ iii
Daftar Isi ..................................................................................................... v
Daftar Singkatan ......................................................................................... viii
Daftar Gambar ............................................................................................ ix
Daftar Tabel ................................................................................................ x
Daftar Lampiran ......................................................................................... xi
Intisari ........................................................................................................ xii
BAB I PENDAHULUAN .......................................................................... 1
1.1 Latar Belakang ............................................................................ 1
1.2 Perumusan Masalah .................................................................... 3
1.3 Tujuan ......................................................................................... 4
1.3.1 Tujuan Umum .................................................................. 4
1.3.2 Tujuan Khusus .................................................................. 4
1.4 Manfaat ....................................................................................... 4
1.4.1 Manfaat Teoritis ............................................................... 4
1.4.2 Manfaat Praktis ................................................................. 5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ................................................................ 6
2.1 Derajat Nekrosis Sel Adenocarcinoma Mammae ........................ 6
2.1.1 Mekanisme Nekrosis Sel .................................................. 6
2.1.2 Gambaran Morfologi Nekrosis Sel .................................... 7
2.1.3 Faktor-Faktor yang Mempengaruhi Nekrosis Sel ............. 8
2.1.4 Adenocarcinoma mammae ................................................ 9
2.2 Sarang Semut ............................................................................... 16
2.3 Hewan Coba................................................................................. 18

v
 2.4 Methotrexate ................................................................................ 19
2.5 Cyclophosphamide ...................................................................... 20
2.6 Pengaruh pemberian ekstrak sarang semut yang dikombinasikan
dengan ethotrexate dan Cyclophosphamide terhadap derajat
nekrosis sel adenocarcinoma mammae mencit C3H .................... 21
2.7 Kerangka Teori ............................................................................ 26
2.8 Kerangka Konsep ........................................................................ 27
2.9 Hipotesis ..................................................................................... 27
BAB III METODE PENELITIAN ............................................................. 28
3.1 Jenis Penelitian dan Rancangan Penelitian .................................. 28
3.2. Variabel dan Definisi Operasional.............................................. 28
3.2.1. Variabel ............................................................................ 28
3.2.2. Definisi Operasional ......................................................... 28
3.3. Populasi dan Sampel ................................................................... 30
3.3.1. Populasi ............................................................................ 30
3.3.2. Sampel .............................................................................. 31
3.3.3. Kriteria Inklusi dan Eksklusi ............................................ 31
3.4. Instrument dan Bahan Penelitian ................................................ 32
3.4.1. Instrumen .......................................................................... 32
3.4.2. Bahan Penelitian ............................................................... 33
3.5. Cara Penelitian ............................................................................ 34
3.5.1. Pengumpulan dan Penyiapan Ekstrak Sarang Semut ....... 34
3.5.2. Ekstraksi ........................................................................... 34
3.5.3. Perhitungan Dosis Ekstrak Sarang Semut ........................ 35
3.5.4. Prosedur Transplantasi Jaringan Tumor pada Mencit ...... 35
3.5.5. Perhitungan Dosis Methotrexate ...................................... 36
3.5.6. Perhitungan Dosis Cyclophosphamide ............................. 37
3.5.7. Cara Perlakuan .................................................................. 37

vi
 3.5.8. Prosedur Pembuatan Preparat Jaringan dengan
Pewarnaan Hematoksilin Eosin (HE) ............................... 39
3.6. Tempat dan waktu....................................................................... 41
3.6.1. Tempat ............................................................................. 41
3.6.2. Waktu ............................................................................... 42
3.7. Analisis Data ............................................................................... 42
3.8. Alur Penelitian ............................................................................ 43
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................... 44

4.1 Hasil .......................................................................................... 44

4.2 Pembahasan .............................................................................. 48

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ..................................................... 52

5.1 Kesimpulan ................................................................................ 52

5.2 Saran .......................................................................................... 53

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 54

LAMPIRAN ................................................................................................ 57

vii
 DAFTAR SINGKATAN

ACS : American Cancer Society dan American College of Surgeons

AJCC : American Joint Committee On
ATP : Adenosine triphosphate
BRCA 1 : Breast Cancer Antigen-1
BRCA 2 : Breast Cancer Antigen-2
DNA : Deoxyribonucleic acid
LCIS : Lobular carcinoma in situ
MTV : Mammary Tumor Virus
ROS : Reactive Oxygen Species
TP53 : Tumor Protein 53
UICC : Union International Against Cancer
WHO : World Health Organization

viii
 DAFTAR GAMBAR

2.2.1. Gambar Sarang Semut ...................................................................... 16

4.1 Gambar Derajat nekrosis sel adenocarcinoma mammae ...................... 45

ix
 DAFTAR TABEL

Tabel 4.1 Deskripsi derajat nekrosis sel adenocarcinoma mammae antar

kelompok ................................................................................... 45

Tabel 4.2. Data Hasil Uji Shapiro Wilk dan Levene Test .......................... 46

Tabel 4.3 Hasil Uji Kruskal Wallis ............................................................. 47

Tabel 4.4 Hasil uji Mann Whitney .............................................................. 47

x
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1.Data Derajat Nekrosis Selmasing-masing Kelompok ............. 57

Lampiran 2.Deskripsi Statistik Derajat Nekrosis Sel Adenocarcinoma

Mammae antar Kelompok ....................................................... 58

Lampiran 3.Normalitas Data dan Homogenitas Varian Derajat Nekrosis

Sel Adenocarcinoma Mammae antar Kelompok ..................... 58

Lampiran 4.Uji Beda Derajat Nekrosis Sel Adenocarcinoma Mammae

antar Keempat Kelompok dengan Uji Kruskal Wallis ............. 59

Lampiran 5.Uji Beda Derajat Nekrosis Sel Adenocarcinoma Mammae

antar Dua Kelompok dengan Uji Mann Whitney ..................... 60

Lampiran 6.Gambar-Gambar Penelitian ..................................................... 64

Lampiran 7. Hasil Penelitian Gambaran Histopatologi Derajat Nekrosis

Sel ............................................................................................. 66

Lampiran 8.Ethical Clearance ..................................................................... 68

Lampiran 9.Surat Keterangan Penelitian dari Laboratorium Patologi

Anatomi FK UNISSULA ......................................................... 69

Lampiran 10.Surat Keterangan Penelitian dari Laboratorium Patologi

Anatomi FK Universitas Indonesia .......................................... 70

Lampiran 11. Surat Keterangan Pembuatan Ekstrak Tanaman Sarang

Semut dari Laboratorium Biokomia UNISSULA .................... 71

xi
 INTISARI

Pengobatan pada keganasan payudara sebagian besar dilakukan secara

konvensional menggunakan kombinasi obat-obatan kemoterapi. Tanaman sarang
semut (Myrmecodia pendens) dikenal bersifat imunostimulator sehingga poten
untuk dikembangkan sebagai kombinasi obat-obatan kemoterapi. Tujuan
penelitian mengetahui pengaruh pemberian kombinasi ekstrak sarang semut
dengan methotrexate dan cyclophosphamide terhadap nekrosis sel
adenokarsinoma mammae pada mencit C3H.
Penelitian eksperimental dengan randomized post test only control group
design. Subjek uji 24 ekor mencit betina C3H model kanker payudara dibagi 4
kelompok. Kelompok KI tidak diberi perlakuan, kelompok KII diberi ekstrak
sarang semut 8mg/hr, kelompok KIII diberi methotrexate dan cyclophosphamide,
kelompok KIV diberi ekstrak sarang semut, methotrexate dan cyclophosphamide.
Nekrosis sel adenokarsinoma mammae diamati dengan cara menghitung luas area
kanker yang mengalami nekrosis secara mikroskopis pada lima (5) lapang
pandang. Nekrosis sel adenokarsinoma mammae dianalisis dengan uji Kruskal
Wallis dilanjutkan dengan uji Mann Whitney.
Nekrosis sel adenokarsinoma mammae kelompok KI: 0,17±0,15;
kelompok KII: 0,47±0,10; kelompok KIII: 1,80±0,13; dan kelompok KIV:
2,40±0,22. Perbedaan nekrosis sel adenokarsinoma mammae antar keempat
kelompok bermakna (Kruskal Wallis, p<0,05). Perbandingan nekrosis sel
adenokarsinoma mammae antar dua kelompok semuanya juga bermakna (Mann
Whitney, p<0,05).
Kesimpulan: pemberian ekstrak sarang dengan methrotexate dan
cyclophosphamide berpengaruh paling efektif terhadap nekrosis sel
adenokarsinoma mammae daripada pemberian ekstrak sarang semut secara
tunggal, dan kombinasi methrotexate dengan cyclophosphamide.
Kata kunci: Nekrosis Adenokarsinoma Mammae, Ekstrak Sarang Semut.

xii
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Adenocarcinoma mammae atau yang lebih terkenal dengan sebutan

kanker payudara adalah suatu tumor yang tergolong ganas berkembang dan

tumbuh dalam jaringan payudara. Kanker sendiri mengalami pertumbuhan

dan perkembangan sel-sel jaringan payudara secara berlebihan yang tidak

terkontrol. Adenocarcinoma mammae sendiri merupakan suatu masalah

kesehatan baik pada negara maju dan juga negara berkembang (WHO,

2011).Sebagian besar pengobatan terhadap keganasan payudara dilakukan

dengan cara konvensional, yaitu dengan menggunakan kombinasi dari obat-

obatan kemoterapi. Pengobatan kemoterapi menggunakan satu regimen saja

pada pengobatan keganasan payudara atau adenocarsinoma mamae

biasanya sering memberikan hasil yang kurang baik daripada diberikan

secara kombinasi. Sangat dibutuhkan penggunaan imunostimulator yang

bekerja untuk meningkatkan kemampuan sel imun tubuh sebagai

pertahanan terhadap sel kanker (Utami, 2008). Pengobatan dengan

menggunakan kemoterapi saat ini dapat disertai dengan menggunakan

kombinasi obat obatan herbal yang dapat memberikan efek terapetik yang

lebih baik dan dapat juga mengurangi dari efek samping terhadap penderita

kanker. Pengobatan dengan sarang semut yang merupakan salah satu obat

herbal yang dapat kita temui di Indonesia. Dalam pengujian dengan

1
 2

menggunakan uji kimia, dapat diketahui tanaman sarang semut

mengandung senyawa yaitu Flavonoid dan juga Tannin. Senyawa aktif dari

flavonoid sendiri dikenal sebagai antikanker dan juga antioksidan (Utami,

2013). Masih belum ada yang membuktikan dengan penelitian

mengkombinasikan obat-obat kemoterapi dengan tanaman sarang semut

sehingga masih harus kita kaji dengan menggunakan penelitian dengan

mengkombinasikan kemoterapi dengan tanaman sarang semut.

Salah satu obat dari kemoterapi yaitu Methotrexate, Methotrexate

sendiri merupakan obat antimetabolit yang berperan sebagai analog 4-

amino, N10-metil asam folat (Nafrialdi, 2003). Obat Methotrexate

berperan sebagai penghambat enzim dihirofolat reduktase. Dihirofolat

reduktase sendiri merupakan enzim yang akan mengkatalisis dihidrofolat

menjadi tetrahidrofolat pada saat sintesis asam folat. Antagonis folat

berperan sebagai penghambat dari sintesis DNA dan RNA, khususnya

untuk sel-sel yang membelah dengan sangat cepat. Oleh karena itu obat ini

sering digunakan untuk pengobatan kemoterapi antikanker (Bruton,

2006).Selain dari penggunaan Methotrexate pengguaan Cyclophosphamide

juga berperan dalam pengobatan kanker. Cyclophosphamide adalah salah

satu agent alkylating yang berasal dari kelompok oxazophorin dan gologan

nnitrogen mustard. Fungsi utama dari Cyclophosphamide sendiri adalah

agen dari pengobatan kemoterapi yang berperan aktif terhadap berbagai

macam kanker. Cyclophosphamide juga dapat digunakan sebagai obat

tunggal atau juga dapat digunakan sebagai pengkombinasian obat agen lain.
 3

Pemakaian obat dari Cyclophosphamide dapat memberikan pengaruh

terhadap sel-sel tersebut yaitu kematian sel-sel yang juga diikuti dari

pelepasan dari agen-agen sitokin yang mempengaruhi fungsi sebagai agen

mediator inflamasi yaitu IL-6, IL-1α, IL-1β, TNF-α. (Lisdawati V, 2010).

Insidensi Adenocarcinoma mamae di Indonesia sendiri jarang terjadi

yaitu sebesar 16 per 100.000 perempuan dan 26 per 100.000 perempuan

untuk insiden carcinoma cervix. Berdasarkan hasil survei YKP Jakarta

untuk insiden adenocarcinoma mamae sebesar 10 dari 10.000 penduduk

Indonesia. Sekitar 70% pasien berobat ke dokter atau rumah sakit dalam

keadaan sudah stadium lanjut. Kurangnya pengetahuan serta mahalnya

biaya pengobatan bagi masyarakat terlebih lagi bagi masyarakat dengan

ekonomi yang rendah, hal ini dapat menyebabkan tidak tuntasnya

pengobatan akibatnya resiko kekambuhan pada kasus Adenocarcinoma

mamae pun meningkat (Retnani, 2011).

Pada penelitian eksperiment kali ini peneliti ingin mengetahui

pengaruh dari pemberian ekstark sarang semut (Myrmecodia pendens),

Metrothrexate, dan cyclophosphamide terhadap derajat nekrosis tumor

mencit C3H yang diinokulasi adenokarsinoma mammae.

1.2. Perumusan Masalah

Apakah terdapat pengaruh pemberian ekstrak sarang semut

(Myrmecodia Pendens) dan kombinasi Methotrexate dengan

Cyclophospamide terhadap derajat nekrosis sel adenocarcinoma mammae?

 4

1.3. Tujuan

1.3.1 Tujuan Umum

Untuk mengetahui pengaruh dari pemberian ekstrak sarang semut

(myrmecodia pendens), Metrothrexate, dan Cyclophosphamide terhadap

derajat nekrosis tumor pada mencitC3H yang diinokulasi adenocarcinoma

mammae.

1.3.2 Tujuan Khusus

1.3.2.1. Mengamati derajat nekrosis sel adenokarsinoma mammae pada

mencit yang telah diinokulasi jaringan sel adenocarsinoma mammae yang

diberi ekstrak sarang semut (Myrmecodiapedens) dengan dosis 8 mg/hari

selama 21 hari, methotreksat dengan dosis 0,13 mg/7 hari selama 21 hari,

dan cyclophospamide 0,13 mg/hari selama 21 hari.

1.3.2.2. Mengamati derajat nekrosis sel adenokarsinoma mammae pada

mencit C3H yang tanpa diberi ekstrak sarang semut (Mymecodia pedens)

dengan dosis 8 mg/hari selama 21 hari, dan diberi methotreksat dengan

dosis 0,13 mg/7 hari selama 21 hari, dan cyclophospamide 0,13mg/hari

selama 21 hari.

1.4. Manfaat

1.4.1 Manfaat Teoritis

Dapat memberikan pemahaman mengenai pengaruh pemberian

ekstrak semut(Myrmecodia Pendens), Metrothrexate, dan

 5

Cyclophosphamide terhadap derajat nekrosis tumor mencit C3H yang

diinokulasi adenocarcinoma mammae.

1.4.2 Manfaat Praktis

Dapat memberikan informasi untuk masyarakat umum mengenai

manfaat dari pemberian sarang semut sebagai tambahan alternatif pada

terapi adenocarcinoma mamae

 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Derajat Nekrosis Sel Adenocarcinoma Mammae

Nekrosis merupakan kematian sel dan kematian jaringan pada tubuh

yang masih hidup akibat cedera yang bersifat irreversible dan ditandai

dengan pembengkakan sel, denaturasi protein sitoplasma, dan kerusakan

organela sel (Kumar et al., 2007). Nekrosis dapat dikenali karena sel atau

jaringan menunjukkan perubahan secara makroskopis maupun mikroskopis.

Secara makroskopis jaringan nekrosis akan tampak keruh (opaque), tidak

cerah dan berwarna putih abu-abu. Sedangkan secara mikroskopis jaringan

nekrosis seluruhnya berwarna kemerahan, tidak mengambil zat warna

hematoksilin, sering pucat (Pringgoutomo, 2002).

2.1.1 Mekanisme Nekrosis Sel

Nekrosis merupakan kematian sel akibat cedera (jejas) yang bersifat

irreversible. Ketika sel mengalami gangguan, maka sel akan berusaha

beradaptasi dengan jalan hipertrofi, hiperplasia, atrofi, dan metaplasia

supaya dapat mengembalikan keseimbangan tubuh. Ketika sel tidak mampu

beradaptasi, sel tersebut akan mengalami jejas atau cedera. Jejas tersebut

dapat kembali normal apabila penyebab jejas hilang (reversible). Tetapi

ketika jejas tersebut berlangsung kontinue maka jejas akan bersifat

irreversible (tidak dapat kembali normal) dan selanjutnya akan terjadi

kematian sel (Kumar et al., 2007).

6
 7

Rangkaian biokimiawi kejadian yang disebabkan oleh jejas sel yang

telah dibahas terdahulu sebagai kelanjutan dari onset sampai pencernaan

akhir sel yang mengalami jejas secara letal oleh enzim lisosomal. Terdapat

dua fenomena yang menandai keadaan irreversibel. Pertama,

ketidakmampuan memperbaiki disfungsi mitokondria (kekurangan

fosforilasi oksidatif dan pembentukan ATP), bahkan setelah resolusi jejas

misalnya restorasi aliran darah. Kedua, terjadinya gangguan fungsi

membran yang besar. Deplesi ATP sendiri memungkinkan kejadian letal,

secara eksperimental memungkikan dalam perubahan morfologik dan

deplesi ATP, dari kematian sel yang tidak dapat dihindari.

2.1.2 Gambaran Morfologi Nekrosis Sel

Gambaran morfologik nekrosis merupakan hasil dua proses penting

yang terjadi bersamaan, (1) digesti enzimatik sel dan (2) denaturasi protein.

Enzim hidrolitik dapat berasal dari sel yang mati itu sendiri, yang disebut

autolisis, atau dari lisosom sel radang penginvasi, yang disebut heterolisis.

Proses tersebut memerlukan waktu berjam-jam untuk timbul sehingga tidak

ada perubahan yang bisa dideteksi dalam sel, misalnya infark miokardial

menyebabkan kematian mendadak. Gambaran histologik klasik nekrosis

tidak muncul dalam 4 sampai 12 jam setelah jejas irreversibel yang terjadi.

Saat sel-sel mati mengalami perubahan dini, massa jaringan nekrotik

dapat memperlihatkan pola morfologik berbeda, bergantung apakah

katabolisme enzimatik atau denaturasi protein menonjol.Apabila denaturasi

merupakan pola primer maka disebut nekrosis kogulatif.Pada keadaan

 8

digesti enzimatik yang dominan hasilnya adalah nekrosis liquefaktif,

sedangkan pada keadaan khusus dapat terjadi nekrosis kaseosa atau

nekrosis lemak (Kumar et al., 2007).

2.1.3 Faktor-Faktor yang Mempengaruhi Nekrosis Sel

1. Agen fisik

Trauma, suhu ekstrim, tenaga listrik, cahaya matahari, dan radiasi

dapat menimbulkan kerusakan inti sehingga menyebabkan nekrosis.

2. Agen kimia

Natrium dan glukosa merupakan zat kimia yang biasa terdapat pada

tubuh. Apabila konsentrasinya tinggi, zat ini dapat menimbulkan nekrosis

akibat gangguan keseimbangan osmotik sel. Beberapa zat tertentu juga

dapat menimbulkan nekrosis ketika konsentrasinya rendah.

3. Agen biologik

Toksin bakteri dapat menyebabkan kerusakan pada dinding pembuluh

darah dan trombosis. Toksin ini berasal dari bakteri yang virulensinya

tinggi baik endogen maupun eksogen. Virus dan parasit juga dapat

mengeluarkan berbagai enzim dan toksik yang dapat mempengaruhi

jaringan dan menyebabkan nekrosis.

4. Hipersensitivitas

Hipersensitivitas (kerentanan) pada seorang individu berbeda-beda.

Dapat timbul secara genetik maupun di dapat dan menimbulkan reaksi

imunologik yang kemudian berakhir pada nekrosis. Sebagai contoh adalah

seseorang yang hipersensitif terhadap obat sulfat apabila mengonsumsi obat

 9

sulfat dapan timbul nekrosis pada epitel tubulus ginjal (Pringgoutomo,

2002).

2.1.4 Adenocarcinoma mammae

2.1.4.1. Definisi

Adecocarcinoma merupakan penyakit yang terjadi melalui suatu

proses tranformasi. Adenocarcinoma sendiri dapat menyerang semua

jaringan pada tubuh manusia, salah satunya payudara (Bratawidjaja, 2010).

Adenocarcinoma mamae merupakan jaringan epitel pada kelenjar

payudara yang dipengaruhi oleh faktor genetik dan fakor hormonal

terutama yang sangat berperan ialah hormon esterogen. Jalur perangsangan

hormon esterogen dapat meregulasi dari pertumbuhan jaringan kelenjar

payudara melalui pengaruh pada siklus sel, motiilitas, dan apoptosis sel.

Faktor genetik yang mempengaruhi adenocarcinoma mamae yaitu mutasi

pada BRCA1 dan BRCA2, gen ini termasuk gen dari penekan tumor yang

memfasilitasi perbaikan dari DNA (Arrick, 2008)

Adenocarcinoma mamae salah satu penyebab kematian yang besar

pada wanita umur 45 sampai 64 tahun. Adenocarcinoma dapat ditemukan

pada saat insitu atau juga dapat berupa neoplasma maligna (Corwn, 2010). .

Adenokarsinoma mammae memerlukan waktu kurang lebih 7 tahun untuk

tumbuh dari satu sel menjadi massa sel yang cukup besar untuk dapat

dipalpasi kira-kira berdiameter 1 cm. Pada ukuran, 25% sudah mengalami

metastasis (Price, 2010).

2.1.4.2. Anatomi Payudara

 10

Payudara terdiri atas dua jaringan, yaitu jaringan glandular (kelenjar)

dan jaringan stromal (penopang). Jaringan kelenjar meliputi kelenjar susu

(lobus) dan salurannya (ductus). Sedangkan jaringan penopang meliputi

jaringan lemak dan jaringan ikat. Selain itu, payudara juga memiliki aliran

limfe dimanaaliran limfe pada payudara sering dikaitkan dengan timbulnya

kanker maupun penyebaran (metastase) dari kanker payudara (Haryono

dkk, 2011).

Glandula mamaria sebagian besar terletak pada fascia superficialis

dan dapat bergerak kesemua arah, ujung lateralnya terletak di pinggir

bawah musculus pectoralis mayor dan sampai ke axilla. Letak dari papilla

mammae yaitu dari setengah bagian bawah mammae dan menonjol tetapi

posisinya terhadap dinding thorak sangat bervariasi dan tergantung pada

derajat perkembangan kelenjar. Daerah kulit yang berpigmen yang

mengelilingi dasar papilla dinamakan areola. Kelenjar areola yang ada

dibawahnya menyebabkan tonjolan-tonjolan kecil pada areola (Snell,

2006).

Untuk mempermudah menyatakan letak suatu kelainan pada

payudara, (Hoskins et, al 2005) membagi payudara menjadi lima regio,

yaitu :

1. Kuadran atas bagian medial (inner upper quadrant)

2. Kuadran atas bagian lateral (outer upper quadrant)

3. Kuadran bawah bagian medial (inner lower quadrant)

4. Kuadran bawah bagian lateral (outer lower quadrant)

 11

5. Regio puting susu (nipple)

2.1.4.3. Patogenesis

Patogenesis dari Adenocarcinoma mammae diperankan oleh tiga

faktor utama diantaranya adalah :

1. Perubahan Genetik

Protoonkogen serta gen penekan tumor didalam epitel payudara

berperan dalam proses transformasi onkogenik. Protoonkogen ERBB2

(HER2/NEU) yang ekspresinya berlebihan adalah salah satu mutasi yang

paling banyak dipelajari. Selain itu, amplifikasi gen RAS dan MYC juga

mengambil peranan dalam sebagian Adenocarcinoma mammae. Gen

penekan tumor yakni TP53 dan RB1 juga mengalami mutasi pada kasus

Adenocarcinoma mammae.

2. Pengaruh hormon

Ketidakseimbangan hormon dalam kasus ini yaitu estrogen yang

berperan penting dalam kejadian Adenocarcinoma mammae. Tumor

ovarium yang mengeluarkan pajanan estrogen juga dapat menyebabkan

Adenocarcinoma mammae pada perempuan pasca menopause. Estrogen

merangsang faktor pertumbuhan sel epitel payudara baik yang normal

maupun sel Adenocarcinoma. Sel Adenocarcinoma mammae mengeluarkan

transforming growth factor α, platelet-derived growth-factor, dan faktor

pertumbuhan fibroblas yang merupakan promotor pertumbuhan dan akan

berinteraksi dengan reseptor estrogen dan progesteron yang terdapat pada

 12

epitel payudara dan akan menciptakan suatu sistem perkembangan tumor

(Kumar et al., 2007).

3. Faktor Lingkungan

Faktor lingkungan yang terpenting dalam perkembangan

Adenocarcinoma mammae adalah adanya pajanan radiasi serta estrogen

eksogen yang biasanya didapatkan wanita melalui kontrasepsi hormonal.

2.1.4.4. Faktor Risiko

Penyebab kanker payudara hingga kini masih belum diketahui secara

pasti. Penyebab kanker payudara termasuk multifaktorial, yaitu banyak

faktor yang terkait satu sama lain. Banyak penelitian yang menunjukkan

adanya beberapa faktor yang berhubungan dengan peningkatan risiko

terjadinya kanker payudara. Faktor-faktor tersebut meliputi :

1. Genetik

Pada kanker payudara ditemukan dua gen yang bertanggung jawab

pada kasus kanker payudara familial 5-10% secara keseluruhan, yaitu gen

BRCA1 yang berlokasi pada kromosom 17 (17q21) dan gen BRCA2 yang

berlokasi pada kromosom 13 (13q12–13) (ACS, 2014).Selain itu, gen lain

yang berperan penting pada peningkatan faktor risiko kanker payudara

adalah gen BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN dan CHEK2 (National Breast

and Ovarian Cancer Centre, 2009).

2. Siklus mestruasi

Wanita yang memiliki siklus menstruasi lebih karena mendapat

menstruasi pada usia dini yaitu sebelum usia 12 tahun dan / atau menopause
 13

pada usia lebih dari 55 tahun mempunyai risiko lebih tinggi mendapat

kanker payudara. Peningkatan ini berkaitan dengan lamanya terkena

paparan hormon estrogen (ACS, 2009). Usia dini di awal menstruasi

meningkatkan risiko 4% per tahun, sedangkan usia menopause yang

terlambat 3% per tahun (Cuzick, J., 2008).

3. Riwayat keluarga

Risiko terjadinya kanker payudara meningkat hingga empat kali lipat

sehubungan dengan derajat kekerabatan garis pertama dalam keluarga,

misalnya ibu, saudara perempuan dan anak perempuan yang mengalami

kanker payudara. Dalam hal ini usia juga mempengaruhi risiko. Apabila

usia anggota keluarga yang terdiagnosis awal kanker payudara <40 tahun

akan berisiko sekitar tiga kali lipat, dua kali lipat pada usia 40-50 tahun,

dan 1,5 kali lipat pada usia >50 tahun (Cuzick, J., 2008).

4. Tidak menyusui

Beberapa penelitian menunjukkan bahwa menyusui selama satu tahun

atau lebih dapat mengurangi risiko seorang wanita dari kanker payudara.

Risiko kanker payudara berkurang hingga 4,3% untuk setiap 12 bulan

menyusui. Hal ini dikarenakan menyusui dapat menghambat menstruasi

dan mengurangi kadar estrogen (ACS, 2013).

5. Usia kehamilan pertama

Wanita yang telah memiliki anak (wanita parous) memiliki risiko 30%

lebih rendah terkena kanker payudara dibandingkan wanita yang tidak

memiliki anak (wanita nulipara). Wanita yang memiliki anak pertama di

 14

usia muda yaitu sebelum usia 25 tahun akan mengurangi risiko hingga

43% lebih rendah dibandingkan wanita yang memiliki anak pertama

setelah 30 tahun (National Breast and Ovarian Cancer Centre, 2009).

6. Jenis kelamin

Wanita lebih beresiko menderita kanker payudara dibandingkan pria.

Prevalensi kanker payudara pada pria hanya 1% dari seluruh kanker

payudara yang terjadi. Hal ini dikarenakan wanita memiliki lebih banyak

hormon estrogen dan progesteorn dibanding pria. Hormon tersebut dapat

mendorong pertumbuhan sel kanker payudara (ACS, 2013).

7. Faktor usia

Resiko kanker payudara meningkat seiring dengan bertambahnya

usia.Meskipun kanker payudara dapat terjadi pada wanita usia muda,

namun secara umum terjadi pada usia lanjut. Wanita berusia 30 tahun-an

risikonya kira-kira 1 dari 250 kasus, sedangkan untuk wanita pada usia 70

tahun-an adalah sekitar 1 dari 30 kasus. Sekitar 75% dari kasus kanker

payudara yang terdiagnosis terjadi setelah usia menopause (National

Breast and Ovarian Cancer Centre, 2009).

8. Penggunaan kontrasepsi oral

Pengunaan kontrasepsi oral pada jangka waktu lama dapat

meningkatkan risiko kanker payudara 10%-30%. Namun wanita yang telah

berhenti menggunakan kontrasepsi oral selama 10 tahun atau lebih

memiliki resiko yang sama dengan wanita yang tidak pernah

menggunakan pil. (ACS, 2013).

 15

9. Faktor gaya hidup

Faktor-faktor yang berhubungan dengan gaya hidup juga berpengaruh

pada meningkatnya risiko kanker payudara, meliputi pestisida, konsumsi

alkohol, kegemukan, diet tinggi lemak, kurangnya olahraga fisik serta

merokok.

2.1.4.5. Klasifikasi

Menurut American Joint Committee on Cancer Staging in Breast

Crarcinoma, klasifikasi Adenocarcinoma mammae adalah :

Stadium 0 : Karsinoma ductus in situ (DCIS) (termasuk penyakit Paget

pada putting payudara) dan karsinoma lobules in situ (LCIS).

Stadium I : Karsinoma invasive dengan ukuran 2 cm atau kurang serta

kelenjar getah bening negative.

Stadium IIA : Karsinoma invasive dengan ukuran 2 cm atau kurang disertai

metastasis ke kelenjar-kelenjar getah bening atau karsinoma

invasive lebih dari 2 cm, tetapi kurang dari 5 cm dengan

kelenjar getah bening negative.

Stadium IIB : Karsinoma invasive berukuran garis tengah lebih dari 2 cm,

tetapi kurang dari 5 cm dengan kelenjar-kelenjar getah

bening positif atau karsinoma invasive berukuran lebih dari 5

cm tanpa keterlibatan kelenjar getah bening.

Stadium IIIA : Karsinoma invasive ukuran berapapun dengan kelenjar getah

bening terfiksasi (yaitu invasi ekstranodus yang meluas

diantara kelenjar getah bening atau menginvasi ke dalam

 16

struktur lain) atau karsinoma berukuran garis tengah 5 cm

dengan metastasis kelenjar getah bening nonfiksasi.

Stadium IIIB : Karsinoma inflamasi, karsinoma yang menginvasi dinding

dada, karsinoma yang menginvasi kulit, karsinoma dengan

nodus kulit satelit, atau setiap karsinoma dengan metastasis

ke kelenjar-kelenjar getah bening mamaria interna ipsilateral.

Stadium IV : Metastasis ke tempat jauh

(Robbins et al., 2007).

2.2 Sarang Semut

2.2.1. Gambar Sarang Semut

Sarang Semut atau Myrmecodia sp termasuk dalam tumbuhan yang

hidup dengan cara menempel pada tumbuhan lain, tetapi sarang semut tidak

bergantung hidup dengan cara parasit pada inangnya. Sarang semut atau

Myrmecodia sendiri termasuk dalam subfamiy Hydnophytinae dan

berasosiasi terhadap semut.

Secara singkat taksonomi sarang semut sebagai berikut :

Kingdom : Plantae

Divisi : Tracheophyta

Kelas : Magnoliopsida
 17

Subkelas : Lamiidae

Ordo : Rubiales

Family : Rubiceae

Subfamily : Hydnophytinae

Genus : Myrmecodia

Spesies : Myrmecodia pedens

(Utami, 2013)
Tumbuhan sarang semut sendiri mempunyai ciri fisik batang yang

menggelembung dan berongga – rongga yang merupakan tempat tinggal

semut, meskipun tidak terdapat semut didalam batang dari tumbuhan sarang

semut tetap mempunyai rongga.

Tumbuhan sarang semut sendiri banyak terdapat di Semenanjung

Malaysia, Jawa, Filipina, Kalimantan, Sumatera, Papua, Kamboja, Cape

York sampai di Kepulauan Solomon. Tumbuhan sarang semut sendiri

banyak ditemukan pada daerah padang rumput tetapi jarang terdapat di

daerah dengan hutan hujan tropis dataran rendah, pada daerah hutan dan

daerah pertanian dengan area terbuka dengan ketinggian 600m diatas

permukaan laut banyak terdapat tumbuhan sarang semut.

Tumbuhan sarang semut saat masih muda dikenal dengan sebutan

umbi yang pada dasarnya berbentuk bulat, pada saat menua tumbuhan akan

berbentuk lonjong memanjang atau memendek. Umbi sarang semut

mempunyai system jaringan berlubang yang bentuknya sangat khas (Utami,

2013).
 18

2.2.2. Kandungan Kimia

Dari hasil uji kimia didapatkan tumbuhan sarang semut mengandung

tannin dan flavonoid.

2.2.2.1. Tannin

Tanin adalah suatu astringen, polifend suatu tanaman yang

mempunyai rasa pahit dan dapat mengikat serta mengendapkan protein.

Pada sebagian masyarakat tannin digunakan sebagai penyamakan kulit,

tetapi tannin juga dapat berfungsi untuk pengobatan contohnya untuk wasir,

diare, dan hemostatik (Utami, 2013).

2.2.2.2. Flavonoid

Flavonoid terdapat pada tanaman herbal yang mempunyai efek yang

dapat memblok reseptor growth factor, dan menginhibisi Mitogen Activated

Protein Kinase (MAPK). Flavonoid juga dapat menginduksi terjadinya

apoptosis melalui jalur TNF-α (Tazulakhova, 2001). Flavonoid sendiri

merupakan suatu antioksidan alam yang dapat bertindak sebagai pereduksi

radikal hidroksil, superoksida dan radikal peroksil (Harun, 2002).

2.3 Hewan Coba

Taksonomi hewan coba yang digunakan dalam penelitian iniadalah

mencit strain C3H, taksonominya menurut Sharp dan Marie (1998) sebagai

berikut :

Kingdom : Animalia

Phylum : Chordata

Class : Mammalia
 19

Ordo : Rodentia

Subordo : Myomorpha

Family : Muridae

Genus : Mus

Species : Mus musculus

Strain : Mus musculus strain C3H

Mencit strain C3H adalah hasil perkawinan silang antara mencit strain

Bagg albino dan DBA jantan dengan angka insidensi tinggi tumor

payudara. Mencit C3H dipilih karena mencit C3H mempunyai homozigot

Mammary Tumor Virus (MTV) yang ditularkan lewat air susu induk

mencit, oleh karena itu pada percobaan ini akan dipilih mencit yang tidak

disapih. Pemilihan mencit ini juga didasarkan karena mencit jenis ini

dijadikan model skrining obat anti kanker potensial (Sijabat, 2009).

2.4 Methotrexate

Methotrexate termasuk dalam analog 4 – amino, N10 – metil asam

folat. Methotrexate sering digunakan untuk kemoterapi antikanker. Obat ini

juga mempunyai manfaat untuk leukimia, koriokarsinoma dan tumor solid.

Untuk penyakit autoimun sendiri seperti dermatomyositis, penyakit Crohn,

arthritis rheumatoid, psoriasis, dan Wegener’s granulamatosis juga dapat

digunakan untuk pengobatan dari penyakit tersebut (Nafrialdi, 2003).

Methotrexate mempunyai efek samping yaitu GI stress dan

hepatotoksik. Pada pemberian jangka panjang dosis rendah, dilaporkan

 20

terjadinya sirosis dan fibrosis hati 30-40% pasien. Obat ini bekerja pada

fase S siklus sel (Nafrialdi, 2003).

Methotrexate tersedia dalam bentuk tablet 2 , 5 mg, 5mg untuk

peroral dan bubuk untuk suntikan vial 25, 50,100, dan 250mg (Katzung B,

2010). Untuk adenokarsinoma mammae, pemberian Methotrexate peroral

diberikan dengan dosis 50 mg dosis tunggal tiap minggu (Vlaming, 2011).

Untuk tingkat keberhasilan pengobatan dengan menggunakan

Methotrexate pemberian dosis terbagi daripada dosis tunggal, akan tetapi

untuk dosis tunggal efek samping yang terjadi rendah sekitar 30% dari

pasien akan mengalami efek samping dengan dosis tunggal dan 40%

dengan dosis terbagi (Habana, 2012).

2.5 Cyclophosphamide

Cyclophosphamide adalah salah satu agent alkylating yang berasal

dari kelompok oxazophorin dan gologan nnitrogen mustard.

Cyclophosphamide sendiri bekerja pada sel yang sedag aktif membelah,

maka efeknya juga terutama mengenai jaringan dengan proliferasi tinggi

yaitu sel-sel ganas, sistem gastrointestinal, dan hematopoetik. Pemakaian

obat dari Cyclophosphamide dapat memberikan pengaruh terhadap sel-sel

tersebut yaitu kematian sel-sel yang juga diikuti dari pelepasan dari agen-

agen sitokin yang mempengaruhi fungsi sebagai agen mediator inflamasi

yaitu IL-6, IL-1α, IL-1β, TNF-α. (Lisdawati V, 2010).

Adanya sitokin – sitokin tersebut yang berperan dalam mediator

inflamasi yang akan merangsang dari peningkatan kadar enzim. Kadar

 21

enzim yang mengalami peningkatan ialah cyclooxigenase (COX), baik dari

COX-1 maupun COX-2 (Lisdawati V, 2010).

Cyclophosphamidetersedia dalam bentuk tablet 2, 5 mg, 5 mg untuk

peroral dan bubuk untuk suntikan dalam vial 100 mg, 200 mg, 500 mg dan

1,2 g (Katzung B, 2010).

2.6 Pengaruh pemberian ekstrak sarang semut yang dikombinasikan

dengan ethotrexate dan Cyclophosphamide terhadap derajat nekrosis

sel adenocarcinoma mammae mencit C3H

Perubahan morfologi sel yang abnormal mengakibatkan terjadinya

keganasan. Sel abnormal tersebut mempunyai kemampuan mempengaruhi

makrofag yang sangat tinggi. Peningkatan proliferasi dapat mengakibatkan

terjadinya peningkatan jumlah sel, penurunan apoptosis juga berperan

dalam meningkatkan jumlah sel. Proliferasi sel dirangsang oleh faktor

pertumbuhan intrinsik, jejas, kematian, kerusakan sel mediator biokimiawi

dan lingkungan. Kekurangan inhibitor atau kelebihan stimulus tersebut

dapat menyebabkan pertumbuhan sel yang tak terkontrol dan terjadinya

kanker (Sudiana, 2008; Kumar, 2007).

Ekstrak sarang semut diketahui mempunyai banyak kandungan yang

fungsinya berkaitan dengan pengobatan. Kandungan ekstrak sarang semut

tersebut diantaranya yaitu flavonoid dan tannin. Tannin diketahui banyak

diaplikasikan dalam bidang pengobatan, misalnya pengobatan diare,

hemostatik (menghentikan perdarahan) dan wasir. Flavonoid diketahui

berperan dalam pengobatan kanker.

 22

Flavonoid dalam menginhibisi protein kinase yaitu dengan mengikat

sisi dari protein kinase yang seharusnya diikat oleh ATP sehingga

mencegah ikatan ATP dengan protein kinase (flavonoid sebagai kompetitif

inhibitor) sehingga mampu menghambat protein kinase yang digunakan

untuk proses mutasi sel. Selain itu, jika protein kinase dihambat proses

fisologis sel pun terhambat sehingga sel melakukan apoptosis atau

membuat program bunuh diri (Hoffman dan Herber, 2012; Subroto dan

Saputro, 2006; Kumar, 2008).

Flavonoid dalam pengobatan herbal juga dilaporkan memiliki

kemampuan untuk menghambat aktivasi nuclear Factor Kappa B (NF-kB).

Suatu transcription factor yang berperan penting dalam regulasi molekul

pembentukan sitokin. Pada penelitian yang dilakukan Tazulakhova dari

Moscow, dilaporkan bahwa flavonoid alamiah dapat menstimulasi produksi

Interferon- γ(IFN- γ) dalam suatu populasi immunosit(Sumarno, 2010).

Di Gamaleya Institute of Microbiology and Epidemiology, Moscow,

Russia dan Chittaranjan National Cancer Institute, Kolkata, India beberapa

peneliti – yang meneliti efek kandungan polifenol pada herbal medicine –

mengemukakan bahwa poliphenol alamiah dapat menstimulasi produksi

Interferon-γ (IFN- γ) dalam suatu populasi immunosit, yang sangat penting

dalam memacu aktivasi CTL’s dan sel NK pada sistem perondaan imun

terhadap sel-sel kanker. Sel imun yang berperan besar dalam perondaan

imun terhadap kanker adalah CTL, Sel-NK (Natural Killer). Setelah sel

kanker dikenal sebagai sel asing, sel imun tersebut akan menghancurkan sel
 23

kanker. Sel CTL dan sel NK melakukan cara sitotoksisitas yang sama yaitu

dengan mengeluarkan perforin dan granzyme, di mana perforin ini sebagai

pore forming untuk memasukkan granzyme ke dalam sitosol. Akibat

aktifitas sel-sel efektor immune tersebut maka sel-sel target akan mengalami

nekrosis (Trere D et al., 2013).

Flavonoid menunjukan aksi sinergis dalam mengurangi pembentukan

sel kanker melalui sifat imunomodulatornya. Imunomodulator merupakan

senyawa yang mampu mempengaruhi secara positif reaksi biologis dari

tubuh terhadap tumor. Imunomodulator dapat menstimulasi berbagai sel-sel

yang berperan dalam respon imun, antara lain limfosit T, sel NK, dan

makrofag.

Makrofag berperan dalam pertahanan melawan sel tumor baik

bertindak sebagai APC dalam mengolah dan mempresentasikan antigen

tumor keapada sel T helper, maupun bertindak langsung sebagai efektor

dengan melisiskan sel tumor. Seperti juga NK, mekanisme pengenalan sel

tumor sasaran oleh makrofag juga belum jelas. Sedangkan kemampuan

untuk berikatan dengan sel tumor terjadi karena sel makrofag juga memiliki

reseptor Fc dari IgG, sehingga dapat bekerjasama dengan IgG dalam

melisiskan sel tumor. Penyebab terjadinya lisisnya tumor disebabkan

pengaruh enzim lisosomal, metabolit yang reaktif terhadap oksigen dan NO.

Makrofag aktif juga mensekresi sitokin antara lain IL-2 dan Tumor Necrosis

Factor (TNF). IL-2 berperan memacu proliferasi dan aktivasi sel CD4+, sel

T CD8+ serta sel NK. TNF-a sesuai dengan namanya mampu membunuh
 24

sel tumor melalu cara 1) TNF-a berkaitan dengan reseptor FAS permukaan

dari sel tumor dan memicu apoptosis, 2) TNF-a dapat menyebabkan

nekrosis dari sel tumor dengan cara memobilisasi berbagai repon imun

tubuh. Tumor nekrosis faktor (TNF, cachectin dan TNF-a) adalah sitokin

proinflamasi kuat terlibat dalam berbagai kondisi peradangan, termasuk

autoimunitas (Sumarno. 2010).

Imunomodulator merupakan senyawa yang mampu mempengaruhi

secara positif reaksi biologis dari tubuh terhadap tumor. Imunomodulator

berperan untuk menghambat mitogen dan menstimulasi proliferasi

peripheralblood mononuclear cells (PBMC), produksi Ig, IL-2 dan

interferon gama (IFN-). IFN- adalah sitokin utama yang mengaktivasi

fagositosis sel mononuklear terhadap tumor. IFN- juga sangat penting

untuk menstimulasi komponen immunosurveillance yaitu sel NK, sel T

sitotoksik, dan makrofag yang berperan terhadap proses killing dan

apoptosis pada sel-sel kanker (flavonoid sebagai kompetitif inhibitor)

(Hoffman dan Herber, 2012; Subroto dan Saputro, Abbas, Lichtman,

&Pober, 2005).

Methotrexate adalah analog 4-amoino, N10-metil asam folat. Obat ini

banyak digunakan untuk koriokarsinoma, korioadenoma destruens dan mola

hidatidosa (Tanu, 2008). Struktur methotrexat ini mirip dengan asam folat.

Methotrexat menghambat kerja enzim dihidrofolat reduktase sehingga

terjadi penghambatan pembentukan tetrahidrofolat dari asam folat, juga

menghambat enzim lain yang berperan pada sintesis nukleotida, sehingga

 25

methotreksat dapat menimbulkan gangguan pada sel karena mengurangi

sintesis DNA dan RNA (Jasaputra, 2010).

Cyclophosphamide merupakan agen alkylating yang dapat berikatan

dengan alkali pada DNA. Cyclophosphamide bekerja degan meningkatkan

kadar COX-2 dan PGE-2. Fungsi dari pemberian cyclophosphamide

menyebabkan kematian pada sel-sel yang membelah dengan cepat dan

diikuti dengan pelepasan sitokin – sitokin yang berfungsi sebagai mediator

seperti TNF-α, IL-6, IL-1 (Lisdawati V, 2010).

 26

2.7 Kerangka Teori

Ekstrak Tanaman Sarang Semut

Cyclophosphamide Methotrexate

Alkylating Tanin Flavonoid

Neoplasmatic asam folat
Agent
immunesurvillance

Ikatan Alkil
dan DNA sintesis DNA & RNA
TNF

TNF
Anti VEGF
Proliferasi
endotel
Proliferasi endotel

Jumlah Pembuluh
Darah Jumlah pembuluh darah

- Agen Fisik
- Agen Kimia Derajat Nekrosis Sel Adenocarcinoma
- Agen Biologi Mammae
- Hipersensitivitas
 27

2.8 Kerangka Konsep

Ekstrak Sarang semut dan

Derajat Nekrosis Sel
kombinasi Methotrexsate
Adenokarsinoma mammae
dan Cylophosphamide

2.9 Hipotesis

Ada pengaruh pemberian ekstrak sarang semut (Myrmecodia pendens) dengan

kombinasi Methotrexate dan Cylophosphamide terhadap Derajat Nekrosis Sel

Adenokarsinoma mammae
 28

BAB III
METODE PENELITIAN

3.1. Jenis Penelitian dan Rancangan Penelitian

Jenis penelitian yang dilakukan merupakan penelitian eksperimental

laboratorium dengan metode penelitian “Randomized post test only control

group design”.

3.2. Variabel dan Definisi Operasional

3.2.1. Variabel

3.2.1.1. Variabel bebas

Ekstrak sarang semut (Myrmecodia pendens).

Kombinasi Methotrexate dan Cyclophosphamide

3.2.1.2. Variabel tergantung

Derajat nekrosis sel Adenocarcinoma mamma

3.2.2. Definisi Operasional

3.2.2.1. Ektrak sarang semut

Ektrak sarang semut adalah ekstrak yang dibuat menggunakan

metode sokletasi dari 1000g serbuk kering sarang semut dan dilarutkan

dengan pelarut ethanol 95% sebanyak 2 liter. Dihasilkan 8,5g ekstrak

sarang semut . Dosis optimal 8mg/hari diberikan dalam 0,2 ml aquadest

secara peroral dengan sonde setiap hari selama 21 hari mencit betina C3H.

Skala : Nominal
 29

3.2.2.2. Pemberian Methotrexate

Methotrexate merupakan obat yang berfingsi sebagai penghambat

27
pertumbuhan sel-sel tertentu dari tubuh, terutama pada sel yang sedang

aktif membelah dengan cepat seperti pada sel keganasan Pemberian

Methotrexate adalah pemberian methotrexate pada mencit C3H diberikan 7

hari sekali dalam 3 minggu dengan dosis 0,13 mg setiap kali pemberian

menggunakan sonde diberikan dalam 0,2 ml aquadest secara peroral .

Skala : Nominall

3.2.2.3. Pemberian Cyclophosphamide

Cyclophosphamide merupakan obat kemoterapi yang berfungsi dalam

menghentikan pertumbuhan sel kanker. Cyclophosphamide sebagai obat

antineoplastic yang termasuk golongan Nitrogen mustard Alkylating agen

dosis 25mg dan 50 mg tablet atau dengan injeksi 100-2000 mg (Muryanto,

2007). Pemberian Cyclophosphamide adalah pemberian cyclophosphamide

pada mencit C3H diberikan 7 hari sekali dalam 3 minggu dengan dosis 0,13

mg setiap kali pemberian menggunakan sonde diberikan dalam 0,2 ml

aquadest secara peroral.

Skala : Nominal

3.2.2.4. Derajat nekrosis Adenocarcinoma mammae

Derajat nekrosis Adenocarcinoma mammae merupakan skrining

derajat sel kanker Adenocarcinoma mammae yang diamati dengan

menghitung luas area kanker yang mengalami nekrosis secara mikroskopis

pada lima (5) lapang pandang (4 di sudut dan 1 di tengah) dengan

 30

pembesaran 400x untuk tiap preparat pada masing-masing kelompok.

Kondisi sel mengalami nekrosis jika terjadi perubahan pada inti dan

sitoplasma. Inti mengecil dan berwarna biru (lebih gelap), mirip sel

limfosit, akibat penggumpalan kromatin inti (piknosis).Inti juga mungkin

pecah (karyorhexis) dan bahkan menghilang (karyolisis), dan tampilan

asidofilik pada sitoplasma. Berikut ini skor derajat nekrosis yang

digunakan: (Gummay, 2011):

- Nilai 0. Tidak ditemukan nekrosis pada sediaan yang diberikan.

- Nilai 1. Ditemukan nekrosis kurang dari 50% dari seluruh permukaan

tumor.

- Nilai 3. Ditemukan nekorsis lebih dari 50% dari seluruh permukaan

tumor.

Skala : ordinal

3.3. Populasi dan Sampel

3.3.1. Populasi

3.3.1.1. Populasi target

Mencit galur C3H jenis kelamin betina

3.3.1.2. Populasi terjangkau

Mencit galur C3H betina yang telah diinokulasi jaringan tumor dan

dikembangkan di Laboratorium Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran

Universitas Indonesia.
 31

3.3.2. Sampel

3.3.2.1. Besar sampel

Besar sampel pada penelitian eksperimental ini berdasarkan WHO (2006)

yaitu setiap kelompok minimal 5 ekor. Dengan jumlah 4 kelompok, setiap

kelompok dengan jumlah hewan coba adalah 6 ekor, maka besar sampel

secara keseluruhan adalah 24 ekor. 6 ekor sebagai kontrol dan 18 ekor

lainnya diberi perlakuan.

Perhitungan besar sampel dihitung dengan rumus Frederer (Kiki,2014)

sebagai berikut:

(t-1)(n-1) > 15

(4-1)(n-1) > 15

3n-3 > 15

3n > 18

n >6

Keterangan :

T : Jumlah kelompok uji

N : Besar sampel per kelompok

Besar sampel ideal menurut hitungan rumus Frederer diatas adalah 6 ekor

mencit atau lebih. Dengan demikian jumlah tikus secara keseluruhan adalah

24 ekor.

3.3.3. Kriteria Inklusi dan Eksklusi

3.3.3.1. Kriteria inklusi

1. Mencit betina C3H yang diinokulasi tumbuh tumor.

 32

2. Sehat : sehat dari pengamatan luar meliputi aktif bergerak, tidak cacat,

nafsu makan normal dan tidak terdapat luka luar.

3. Umur 3 bulan

4. Berat 20-25 gram

3.3.3.2. Kriteria eksklusi

1. Tidak tumbuh tumor setelah dilakukan inokulasi.

2. Selama inokulasi dan perlakuan mencit tampak sakit (gerak tidak aktif).

3.4. Instrument dan Bahan Penelitian

3.4.1. Instrumen

3.4.1.1. Alat untuk pembuatan ekstrak tanaman inggu

1. Soklet kapasitas 50 mg

2. Labu rotaryevaporator

3. Oven

3.4.1.2. Kandang mencit

3.4.1.3. Alat untuk inokulasi jaringan tumor pada mencit

1. Cawan petri ukuran 6 dan 15 cm

2. Cawan ukuran 10 cm

3. Spuit 1 cc

4. Jarum suntik trocar

5. Gunting lurus 10 cm

6. Gunting bengkok 10 cm

7. Pinset anatomi 10 cm

8. Alat fiksasi
 33

3.4.1.4. Metrotrexate

3.4.1.5. Cyclophosphamide

3.4.1.6. Alat untuk pembuatan sediaan penelitian dengan pewarnaan

hematoksilin-eosin

1. Digital Tissue Processor LeicaR

2. Tissue Bloking LeicaR EG-1160

3. Inkubator suhu 560 C MemmertR

4. Mikrotom LeicaR RM-2135

5. Kaca objek dan kaca penutup

3.4.1.7. Alat pengamatan sediaan Multi Head Microscope OlympusR

3.4.2. Bahan Penelitian

3.4.2.1. Bahan untuk pembuatan ekstrak sarang semut

1. Sarang Semut

2. Etanol 96% 2 liter

3. Aquadest

3.4.2.2. Bahan untuk inokulasi tumor pada mencit

1. Alkohol 70%

2. Larutan garam fisiologik

3. Es batu

4. Mencit donor bertumor

5. Mencit resipien

3.4.2.3. Bahan untuk pemeriksaan histopatologi rutin

1. Formalin buffer 10%

 34

2. Alkohol 50%, 70%, 80%, 96%, absolute, xylol

3. Parafin cair (Histoplast)

4. Albumin

5. Bahan pengecatan hematoksilin-eosin (HE)

6. Canada balsam dan Entelan

3.5. Cara Penelitian

3.5.1. Pengumpulan dan Penyiapan Ekstrak Sarang Semut

Pada penelitian ini digunakan bagian umbi dari tanaman sarang

semut. Umbi yang diperoleh kemudian dikupas dari kulitnya, diiris tipis 3-5

mm, dan dibiarkan mengering di udara luar sehingga didapatkan umbi yang

kering dan mudah dipatahkan. Irisan Umbi kering tersebut digiling dengan

menggunakan blender hingga menjadi serbuk halus yang lolos pengayak

No 30 (Subroto, 2006).

3.5.2. Ekstraksi

Ekstraksi dilakukan dengan metode sokletasi dengan cara serbuk

sarang semut dimasukkan ke alam kantong dari kertas saring yang diatur

sedemikian rupa hingga dapat dimasukkan ke dalam tabung soxhlet.

Soxhletasi menggunakan etanol 96% dengan volume 1, 5 kali sirkulasi dan

pada suhu 70o-80oC sampai pelarut tidak berwarna. Ekstrak yang didapat

dipekatkan dengan rotary evaporator pada suhu 70oC sampai didapat

ekstrak kental yang dianggap mempunyai konsentrasi 100% (Departemen

Kesehatan Republik Indonesia & Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan

Makanan, 2000).
 35

3.5.3. Perhitungan Dosis Ekstrak Sarang Semut

Faktor konversi dosis pada manusia yang beratnya 70 kg untuk

mencit dengan berat badan 20 gram adalah : 0,0026 (Laurence dan

Bacharach, 2009).

Perhitungan :

Ekstrak sarang semut 1500-3000 mg

Dosis ekstrak sarang semut untuk mencit 20 gram adalah

= 3000 × 0,0026

= 7,8 mg/hari dibulatkan menjadi 8 mg/hari

Untuk penetapan dosis ekstrak sarang semut selanjutnya

menggunakan setengahnya dan kelipatan dua, maka didapatkan dosis

berturut-turut ialah 4 mg/hari, 8 mg/hari, 16 mg/hari

3.5.4. Prosedur Transplantasi Jaringan Tumor pada Mencit

1. Mencit donor dimatikan dengan anestesi eter, kemudian

diletakkan terlentang pada tatakan/alas fiksasi dan keempat

kakinya difiksasi dengan jarum.

2. Kulit di bagian yang bertumor diusap dengan alkohol 70%,

kemudian dibuat sayatan dengan gunting lurus, untuk

mengeluarkan tumor.

3. Tumor diletakkan di cawan petri kecil yang telah terlebih dahulu

dicuci dengan garam fisiologis dan diletakkan di atas es.

4. Amati bentuk dan keadaan tumor, kemudian ambil/potong

jaringan tumor yang masih baik yaitu bagian yang tanpa

nekrosis (biasanya di daerah tepi jika tumor besar) sebanyak

 36

kira-kira yang dapat menghasilkan bubur tumor paling sedikit 1

ml dan taruh di cawan petri kecil lainnya. Bersihkan dari

jaringan ikat (simpai), jaringan nekrotik dan darah, kemudian

cacah/potong-potong sampai halus dengan gunting hingga

akhirnya terbentuk bubur tumor yang pertikelnya dapat

melewati jarum trokar. Tambahkan garam fisiologis lebih

kurang sama banyak dengan volume tumor.

5. Bubur tumor disuntikkan subkutan di aksila kanan mencit

dengan dosis 0,2 ml menggunakan spuit insulin dengan

ketepatan 10-1.

6. Sisa tumor yang padat dimasukkan ke dalam botol formalin

untuk dibuat sediaan mikroskopik.

7. Masing-masing mencit diberi nomor pada telinganya dan

dimasukkan ke dalam kandang berbeda yang diberi label berisi:

jenis kelompok perlakuan dan tanggal inokulasi.

3.5.5. Perhitungan Dosis Methotrexate

Faktor konversi dosis pada manusia yang beratnya 70 kg untuk

mencit dengan berat badan 20 gram adalah : 0,0026 (Laurence dan

Bacharach, 2009). Dosis untuk manusia dewasa adalah 50mg/7hari.

Perhitungan :

Dosis Methotrexate untuk mencit 20 gram adalah

= 50 mg × 0,0026

= 0,13mg
 37

Untuk pemberian Methotrexate dengan dosis 0,13 mg diberikan tiap 7 hari.

3.5.6. Perhitungan Dosis Cyclophosphamide

Faktor konversi dosis pada manusia yang beratnya 70 kg untuk

mencit dengan berat badan 20 gram adalah : 0,0026 (Laurence dan

Bacharach, 2009) .

Dosis untuk manusia dewasa adalah 50 mg/ hari

Perhitungan :

Dosis Cyclophosphamide untuk mencit 20 gram adalah

= 50 mg x 0,0026

= 0,13 mg / hari

Untuk pemberian cyclophosphamideuntuk mencit 20 gram adalah

0,13 mg/hari.

3.5.7. Cara Perlakuan

Mencit C3H yang dipilih secara acak sebanyak 24 ekor ditempatkan

pada kandang secara individual, diberi ransum pakan standart dan minum

secara ad libitum. Sebelum diberi perlakuan, mencit menjalani masa

adaptasi selama 1 minggu, lalu mencit C3H diinokulasi jaringan tumor.

Jaringan tumor diobservasi selama 4 hari, didapat dari mencit donor yang

ditransplantasikan ke mencit resipien. Pada mencit yang tampak benjolan

tumor, dikelompokkan menjadi 4 secara acak, setiap kelompok terdiri atas 6

ekor mencit. Masing-masing kelompok perlakuan dan kontrol mendapatkan

ransum pakan standart dan minum secara ad libitum. Pemberian ekstrak

 38

sarang semut per oral pada kelompok perlakuan dengan sonde sekali sehari

selama 21 hari. Pembagian kelompok perlakuan :

Kelompok I : Terdiri dari 6 ekor mencit bertumor yang diberi

pakan standar dan aquadest + kombinasi

methotrexate 0,13 mg/minggu dan

Cylophosphamide0,13 mg / hari selama 21 hari.

Kelompok II : Terdiri dari 6 ekor mencit bertumor yang diberi

pakan standar dan aquadest + perlakuan pemberian

ekstrak sarang semut 8 mg/ hari serta kombinasi

methotrexate 0,13 mg/minggu dan

Cylophosphamide 0,13 mg / hari selama 21 hari.

Kelompok III : Terdiri dari 6 ekor mencit bertumor yang diberi

pakan standar dan aquadest + perlakuan pemberian

ekstrak sarang semut 8 mg/ hari serta kombinasi

methotrexate 0,13 mg/minggu dan

Cylophosphamide 0,13 mg / hari selama 21 hari.

Kelompok IV : Terdiri dari 6 ekor mencit bertumor yang diberi

pakan standar dan aquadest + perlakuan pemberian

ekstrak sarang semut 8 mg/ hari serta kombinasi

methotrexate 0,13 mg/minggu dan

Cylophosphamide 0,13 mg / hari selama 21 hari.

Setelah perlakuan, dilakukan pembedahan pada mencit yang

sebelumnya telah dimatikan dengan anestesi eter. Pengambilan jaringan

Adenocarcinoma mammae dilakukan setelah mencit dibedah. Jaringan

 39

kanker dimasukkan dalam botol berisi buffer formalin 10%, lalu didehidrasi

dengan alkohol konsentrasi bertingkat, dan dibuat blok parafin sesuai

standar baku histologi, dipotong dengan mikrotom dan dibuat preparat pada

objek glass. Proses selanjutnya diwarnai dengan Hematoksilin Eosin.

Pembuatan preparat diambil masing-masing 1 mencit untuk setiap

kelompok.

Preparat yang sudah jadi dilihat hasilnya dengan mikroskop cahaya.

Penilaian derajat nekrosis dilakukan pada 5 lapangan pandang (1 ditengah

dan 4 di tepi) dengan pembesaran 100x dan 400x untuk satu preparat pada

setiapkelompok. Penilaian derajat nekrosis di sekeliling jaringan kanker

dinilai berdasarkan klasifikasi menurut Sarjadi (2001).

3.5.8. Prosedur Pembuatan Preparat Jaringan dengan Pewarnaan

Hematoksilin Eosin (HE)

Adapun cara pembuatan preparat jaringan dengan pewarnaan HE

menurut Sumarno dkk (2012) adalah sebagai berikut:

1. Sediaan jaringan yang didapat kemudian diukur secara

makroskopik lalu dipotong basah yakni pemotongan jaringan

tersebut dengan pemotongan langsung.

2. Setelah pemotongan basah dari jaringan tersebut, jaringan

difiksasi dengan larutan formalin buffer 10%.

3. Dibuat sayatan sejajar dengan pisau tajam berjarak 0,5 – 2 cm

agar fiksatif merata pada seluruh bagian jaringan luar dan

dalam.
 40

4. Kemudian hangatkan parafin cair, pinset dan penutup cetakan

5. Parafin cair dituangkan kedalam cetakan

6. Jaringan dari prosessing dimasukan kedalam cetakan yang telah

diisi parafin cair, tekan jaringan agar semakin menempel didasar

cetakan.

7. Tutup cetakan diambil, diletakkan diatas cetakan dan ditekan

dan pasang etiket dipinggir.

8. Biarkan membeku. Setelah beku keluarkan dari cetakan.

Rapikan sisi blog. Ganti etiket dengan yang permanen.

9. Sebelum pemotongan dengan mikrotom masukan kedalam

plastik yang disi air letekan di freezer + 15 menit atau diberi es

batu. Blok dijepit pada mikrotom kemudian dengan pisau

mikrotom. Kemiringan + 30°, tebal blok parafin + 2-5 mikron.

10. Hasil pemotongan (berupa pita/irisan tipis yang saling

bersambung) dimasukan kedalam waterbath yang diisi air yang

sudah dihangatkan 50° C, kemudian diambil dengan kaca objek

(meletakan potongan di waterbath tidak boleh terbalik).

11. Proses pengecatan

12. Deparafinisasi : preparat masuk ke Xylol I, II, dan III masing –

masing 3 menit. Setelah itu dilap pinggir jaringan dengan kain

kasa.

13. Rehidrasi : preparat masuk ke alcohol 100%, 95%, 80%, 70%

masing – masing 2 menit

 41

14. Preparat masuk keair mengalir 3 menit (air mengalir ditampung

dalam wadah sebelumnya celup kedalam dua mangkok air 3

celup).

15. Pengecatan inti 7 menit. Preparat masuk ke dalam Meyer

hematoksilin

16. Preparat masuk ke air mengalir 3 menit (air mengalir ditampung

dalam wadah)

17. Sebelumnya celup kedalam dua mangkok air 3 celup

18. Counter stain.

19. Preparat masuk ke larutan eosin 7 celup.

20. Preparat masuk ke air wadah I, II, dan III 3 celup.

21. Dehidrasi : preparat masuk ke dalam alcohol 70 %, 80 %, 95 %,

100 % 3 celup setelah itu dilap dengan kain kasa sekitar jaringan

dan tunggu sampai kering.

22. Clearing : preparat masuk ke xylol I dan II masing – masing 2

menit

23. Mounting.

24. Preparat diberi 1 tetes entelan dan ditutup dengan objek glass

3.6. Tempat dan waktu

3.6.1. Tempat

Tempat penelitian dan perlakuan pada hewan coba bertempat di

Laboratorium Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran Univeritas Indonesia

 42

selama 21 hari, pembuatan ekstrak sarang semut di lakukan di

Laboratorium Kimia Fakultas MIPA UNISSULA Semarang dan analisa

derajat nekrosis sel Adenocarcinoma mammae bertempat di Laboratorium

Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran UNISSULAyang akan dibaca oleh

dokter Spesialis Patologi Anatomi.

3.6.2.Waktu

Penelitian dilakukan pada bulan Oktober - November 2017

3.7. Analisis Hasil

Pengelolaan data menggunakan program SPSS for windows untuk mengetahui

apakah ada pengaruh pemberian ekstrak sarang semut (Myrmecodia pendens)

dan kombinasi Methotrexate dengan Cyclophospamide terhadap derajat

nekrosis sel tumor mencit C3H yang diinokulasi adenocarcinoma mammae.

uji normalitas data dengan Shapiro-Wilk dan uji homogenitas dengan Levene

Statistic. Jika data tidak berdistribusi normal, syarat uji Anova tidak terpenuhi,

maka dilakukan uji non parametrik yaitu uji Kruskall-Wallis yang didapatkan

nilai p < 0,05, sehingga paling tidak terdapat dua kelompok yang memiliki

perbedaan bermakna. Kemudian dilanjutkan dengan uji Mann-Whitney untuk

mengetahui kelompok mana yang memiliki perbedaan bermakna(Dahlan,

2004).
 43

3.8. Alur Penelitian

24 ekor mencit betina C3H bertumor

Randomisasi

Dibagi menjadi 4 kelompok (I, II, III dan IV)

I (Kontrol) II III IV
6 ekor 6 ekor 6 ekor 6 ekor
21 hari

Aquadest + pakan Aquadest + pakan Aquadest +

Minum aquadest +
standart + ekstrak stadart + kombinasi ekstrak sarang
pakan standart +
sarang semut methotrexate semut 8mg/hari,
placebo
8mg/hari 0,13mg/ minggu, kombinasi
cyclophosphamide methotrexate
1,56mg/ hari 0,13mg/minggu,
cyclophosphami
de 1,56mg/hari

Mencit dimatikan dengan anestesi eter

Pengambilan jaringan tumor dan pembuatan preparat histopatologi

Pembacaan derajat nekrosis sel Adenocarcinoma mammae

 BAB IV

HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN

4.1. Hasil Penelitian

Penelitian tentang pengaruh pemberian ekstrak sarang semut

(Myrmecodia pendens) dan kombinasi methotrexate dengan

cyclophospamide terhadap derajat nekrosis sel adenocarcinoma mammae ini

dilakukan pada 24 ekor mencit C3H yang diinokulasi adenocarcinoma

mammae. Penelitian dilakukan di Laboratorium Patologi Anatomi Fakultas

Kedokteran Universitas Indonesia sedangkan untuk pengamatan derajat

nekrosis sel adenocarcinoma mammae dilakukan di Laboratorium Patologi

Anatomi Fakultas Kedokteran UNISSULA Semarang.

Mencit yang telah bertumor dibagi menjadi empat kelompok secara

acak, satu kelompok kontrol dan tiga kelompok perlakuan masing-masing

kelompok terdiri dari 6 ekor. Kelompok I (kontrol) diberi aquadest dan

pakan standar, kelompok II diberi ekstrak sarang semut dosis 8 mg/hari,

kelompok III diberi kombinasi methotrexate 0,13 mg/minggu dan

cyclophosphamide 1,56 mg/hari, dan kelompok IV diberi kombinasi ekstrak

sarang semut dosis 8 mg/hari, methotrexate 0,13 mg/minggu, dan

cyclophosphamide 1,56 mg/hari. Perlakuan pada keempat kelompok

dilakukan selama 21 hari.

Pada hari ke-21 dilakukan pembedahan pada mencit yang sebelumnya

telah dimatikan dengan anestesi eter kemudian jaringan tumornya diambil

untuk dijadikan preparat histopatologi dan dilakukan pengamatan derajat

44
 45

nekrosis sel adenocarcinoma mammae. Derajat nekrosis sel

adenocarcinoma mammae pada masing-masing kelompok ditunjukkan pada

tabel 4.1.

Tabel 4.1 Deskripsi derajat nekrosis sel adenocarcinoma mammae antar

kelompok
Kelompok Rata-rata ± Simpangan Baku
I 0,17 ± 0,15
II 0,47 ± 0,10
III 1,80 ± 0,13
IV 2,40 ± 0,22

Tabel 4.1 menunjukkan bahwa derajat nekrosis sel adenocarcinoma

mammae pada kelompok kontrol adalah yang terendah yaitu 0,17 ± 0,15,

sedangkan derajat nekrosis sel adenocarcinoma mammae pada kelompok II

sebesar 0,47 ± 0,10, pada kelompok III sebesar 1,80 ± 0,13, dan pada

kelompok IV adalah yang tertinggi yaitu sebesar 2,40 ± 0,22. Tampak

bahwa derajat nekrosis pada keempat kelompok menunjukkan trend

meningkat dari mulai kelompok I sampai dengan kelompok IV, sebagaimana

yang dapat dilihat pada gambar 4.1.

3.0
Derajat nekrosis adenokarsinoma

2.5 2.40

2.0 1.80
mamme

1.5

1.0
.47
0.5
.17
0.0
Kelompok I Kelompok II Kelompok III Kelompok IV

Gambar 4.1 Derajat nekrosis sel adenocarcinoma mammae

 46

Derajat nekrosis sel adenocarcinoma mammae di kelompok perlakuan

(II, III, dan IV) tampak lebih tinggi daripada derajat nekrosis di kelompok

kontrol (I), diduga hal ini disebabkan karena aksi zat antikanker yang

terkandung dalam ekstrak sarang semut maupun agen kemoterapi. Efek

nekrosis adenocarcinoma mammae dari ekstrak sarang semut maupun

kombinasi methotrexate dan cyclophosphamide tersebut perlu dibuktikan

secara statistik.

Sebelum menetapkan jenis analisis statistik yang digunakan perlu

dilakukan uji normalitas data dan homogenitas varian pada data derajat

nekrosis sel adenocarcinoma mammae. Uji normalitas data yang digunakan

adalah uji Shapiro Wilk karena jumlah sampel kecil (<50) dan homogenitas

varian data diuji dengan uji Levene yang hasilnya ditunjukkan pada Tabel

4.2.

Tabel 4.2. Data Hasil Uji Shapiro Wilk dan Levene Test
Shapiro-Wilk Levene test
Kelompok
Sig. Keterangan Sig. Keterangan
I 0,212 Normal
II 0,001 Tidak normal Tidak
0,019
III 0,101 Normal homogen
IV 0,004 Tidak normal

Hasil uji normalitas pada tabel 4.2, menunjukkan ada dua kelompok

yang memiliki distribusi data normal yaitu kelompok I dan III (p>0,05)

sedangkan dua kelompok lainnya tidak berdistribusi normal (p<0,05).

Varian data juga tidak homogen (p=0,019), sehingga uji yang digunakan

adalah uji non parametrik Kruskal Wallis.

 47

Tabel 4.3 Hasil Uji Kruskal Wallis

Kelompok Mean ± SD Median (min – maks) P
I 0,17 ± 0,15 0,2 (0,0 – 0,4)
II 0,47 ± 0,10 0,4 (0,4 – 0,6)
0,000*
III 1,80 ± 0,13 1,8 (1,6 – 2,0)
IV 2,40 ± 0,22 2,4 (2,2 – 2,6)
Keterangan : * Signifikan p < 0,05
Uji Kruskal Wallis pada tabel 4.3 menghasilkan nilai sig (p) sebesar

0,000 (p < 0,05). Hasil statistik ini menunjukkan bahwa paling tidak

terdapat dua kelompok yang memiliki perbedaan derajat nekrosis sel

adenocarcinoma mammae yang bermakna, dan untuk mengetahui

kelompok mana saja yang menunjukkan perbedaan tersebut dilanjutkan

dengan uji Mann Whitney dengan hasil sebagai berikut:

Tabel 4.4 Hasil uji Mann Whitney

Kelompok I II III IV
I - 0,007* 0,003* 0,003*
II - 0,003* 0,003*
III - 0,003*
IV -
Keterangan : * = Signifikan p < 0,05
Tabel 4.3 menunjukkan bahwa perbedaan derajat nekrosis sel

adenocarcinoma mammae antar dua kelompok semuanya bermakna

(p<0,05). Derajat nekrosis sel adenocarcinoma mammae di kelompok II,

III, dan IV secara bermakna lebih tinggi daripada di kelompok I

menunjukkan bahwa ketiga jenis perlakuan dapat meningkatkan derajat

nekrosis sel adenocarcinoma mammae. Derajat nekrosis sel

adenocarcinoma mammae di kelompok III, dan IV secara bermakna lebih

tinggi daripada di kelompok II menunjukkan bahwa kombinasi

 48

methotrexate dan cyclophospamide serta kombinasi ekstrak sarang semut

dengan methotrexate dan cyclophospamide memiliki efikasi yang lebih

daripada ekstrak sarang semut secara tunggal dalam meningkatkan derajat

nekrosis sel adenocarcinoma mammae. Derajat nekrosis sel

adenocarcinoma mammae di kelompok IV secara bermakna lebih tinggi

daripada di kelompok III menunjukkan bahwa kombinasi ekstrak sarang

semut dengan methotrexate dan cyclophospamide memiliki efikasi yang

lebih daripada kombinasi methotrexate dan cyclophospamide dalam

meningkatkan derajat nekrosis sel adenocarcinoma mammae. Dapat

disimpulkan bahwa perlakuan yang paling efektif terhadap peningkatan

derajat nekrosis sel adenocarcinoma mammae adalah kombinasi dari tiga

bahan obat yaitu ekstrak sarang semut ditambah dengan methotrexate dan

cyclophospamide.

4.2 Pembahasan

Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa pemberian ekstrak sarang

semut baik secara tunggal maupun dikombinasikan dengan methotrexate

dan cyclophospamide dapat berpengaruh terhadap derajat nekrosis sel

adenocarcinoma mammae pada mencit betina C3H yang diinokulasi

adenocarcinoma mammae. Hasil penelitian tersebut di atas didukung

dengan hasil uji Mann Whitney yang menunjukkan ada perbedaan rata-rata

derajat nekrosis sel adenocarcinoma mammae yang bermakna antara

kelompok kontrol dengan ketiga kelompok perlakuan. Hal ini

menunjukkan bahwa ekstrak sarang semut, kombinasi methotrexate dan

 49

cyclophospamide, dan kombinasi ekstrak sarang semut dengan

methotrexate dan cyclophospamide mampu menyebabkan meningkatnya

derajat nekrosis sel adenocarcinoma mammae.

Ekstrak sarang semut dapat menyebabkan nekrosis sel

adenocarcinoma mammae karena mengandung flavonoid yang bersifat

antikanker serta antioksidan (Utami, 2013). Mekanisme nekrosis ekstrak

sarang semut terjadi dengan cara menghambat perbaikan pada kerusakan

mitokondria yang disebabkan oleh ROS dan deplesi ATP. Penghambatan

perbaikan mitokondria itu sendiri juga dapat menyebabkan ROS yang

menyebabkan kerusakan DNA dan deplesi ATP yang menyebabkan

penurunan aktivasi protease dan fosfolipase sehingga dapat berkontribusi

terhadap kematian (nekrosis) adenocarcinoma mammae (Robbins, 2007).

Mekanisme aksi lain dari flavonoid yang terkandung dalam ekstrak sarang

semut terhadap nekrosis adenocarcinoma mammae adalah melalui

penghambatan telomerase. Penghambatan aktivitas telomerase dapat

menyebabkan pemendekan telomer dan kerusakan sel, atau juga secara

tidak langsung memblok telomerasi yang memediasi keberlangsungan sel

dan meningkatkan kerusakan sel (Atta-ur-Rahman, 2014).

Flavonoid dalam ekstrak sarang semut juga dapat bertindak sebagai

immunomodulator dengan cara menstimulasi produksi IFN-γ pada

populasi immunosit (Sumarno, 2010). IFN-γ dibutuhkan untuk

menginduksi aktivasi Cytotoxic T cells (CTL) dan sel NK pada immune

surveillance system (perondaan imun) sel kanker. CTL dan sel NK

 50

mensekresi perforin sebagai pore forming untuk mendorong masuk

granzyme ke dalam sitosol sel kanker, sehingga sel-sel kanker dapat

mengalami nekrosis (Trere et al., 2013).

Penggunaan ekstrak sarang semut yang dikombinasikan dengan agen

kemoterapi (methotrexate dan cyclophospamide) memberikan efek paling

baik terhadap peningkatan derajat nekrosis sel adenocarcinoma mammae.

Methotrexate dan cyclophosphamide merupakan obat oral yang digunakan

dalam pengobatan kanker payudara dengan bioavailabilitas yang

signifikan (Colleoni, et al., 2002). Methotrexate bertindak sebagai

inhibitor aktivitas enzim dihidrofolat reduktase sehingga produksi

tetrahidrofolat oleh asam folat menjadi terganggu. Methorezate juga

menghambat enzim lain yang berperan pada sintesis nukleotida, sehingga

sintesis DNA dan RNA berkurang dan berakibat pada gangguan sel

(Jasaputra, 2010).

Mekanisme aksi dari cyclophosphamide terhadap nekrosis

adenokarsinoma mammae bekerja dengan menempel pada untai DNA sel

kanker. DNA merupakan adalah kode genetik yang mengendalikan setiap

fungsi sel kanker, sehingga saat cyclophosphamide menempel pada DNA,

senyawa tersebut membuat sel tidak dapat terbagi menjadi dua sel baru

(Inouei dan Tani, 2014).

Penelitian ini memberikan makna bahwa ekstrak sarang semut

berpengaruh lebih baik terhadap derajat nekrosis sel adenocarcinoma

mammae saat secara kombinasi dengan agen methotrexate dan

 51

cyclophosphamide. Beberapa mekanisme aksi yang berbeda antara ekstrak

sarang semut, methotrexate dan cyclophosphamide menghasilkan derajat

nekrosis sel adenocarcinoma mammae tertinggi. Dengan demikian hasil

penelitian ini diharapkan dapat menambah pengetahuan masyarakat

tentang pemanfaatan sarang semut sebagai obat kanker payudara. Namun

demikian uji keamanan penggunaan sarang semut sebagai kemoterapi

masih perlu diteliti karena jika kematian sel yang disebabkan oleh ekstrak

sarang semut melalui mekanisme nekrosis maka manfaat ekstrak sarang

semut sebagai antikanker masih perlu dipertimbangkan karena

dimungkinkan tidak hanya merusak jaringan yang terkena kanker saja

akan tetapi juga dapat merusak jaringan normal yang ada di sekitarnya

(Kusuma et al., 2010).

Penelitian ini memiliki keterbatasan yaitu tidak mengetahui apakah

benar hanya flavonoid yang berpengaruh terhadap derajat nekrosis

adenocarcinoma mammae, sementara di dalam ekstrak sarang semut juga

terdapat senyawa lain seperti luteolin, apigenin, rutin, α-tokoferol,

kaempferol, stigmasterol dan tannin (Taebe et al., 2012). Mekanisme aksi

masing-masing senyawa tersebut terhadap derajat nekrosis sel

adenocarcinoma mammae juga perlu diteliti.

.
 BAB V

SIMPULAN DAN SARAN

5.1 Simpulan

5.1.1 Terdapat pengaruh pemberian ekstrak sarang semut (myrmecodia

pendens), Metrothrexate, dan Cyclophosphamide terhadap derajat

nekrosis tumor pada mencitC3H yang diinokulasi adenocarcinoma

mammae.

5.1.2 Derajat nekrosis sel adenokarsinoma mammae pada mencit C3H

yang tidak diberi perlakuan adalah sebesar 0,17 ± 0,15. Derajat

nekrosis sel adenokarsinoma mammae pada mencit yang telah

diinokulasi jaringan sel adenocarsinoma mammae kemudian

diberi ekstrak sarang semut (Myrmecodiapedens) 8 mg/hari

selama 21 hari adalah sebesar 0,47 ± 0,10. Derajat nekrosis sel

adenokarsinoma mammae pada mencit C3H yang diberi

kombinasi methotreksat dengan dosis 0,13 mg/7 hari dan

cyclophospamide 0,13mg/hari selama 21 hari adalah sebesar 1,80

± 0,13. Derajat nekrosis sel adenocarsinoma mammae pada

mencit C3H yang diberi kombinasi ekstrak sarang semut 8

mg/hari ditambah dengan methotreksat 0,13 mg/7 hari dan

cyclophospamide 0,13 mg/hari selama 21 hari adalah sebesar 2,40

± 0,22.

52
 53

5.1.3 Terdapat perbedaan derajat nekrosis sel adenocarsinoma mammae

antara kelompok tanpa perlakukan dengan kelompok pemberian

ekstrak sarang semut, kombinasi methotrexate dan

cyclophosphamide, dan kombinasi sarang semut-methotrexate-

cyclophosphamide. Terdapat perbedaan derajat nekrosis sel

adenocarsinoma mammae antara kelompok pemberian ekstrak

sarang semut dengan kelompok kombinasi methotrexate dan

cyclophosphamide, dan kombinasi sarang semut-methotrexate-

cyclophosphamide. Terdapat perbedaan derajat nekrosis sel

adenocarsinoma mammae antara kelompok pemberian kombinasi

methotrexate dan cyclophosphamide dengan kelompok pemberian

kombinasi sarang semut-methotrexate-cyclophosphamide.

5.2 Saran

Saran yang diajukan terkait dengan hasil penelitian ini adalah:

5.2.1 Perlu dilakukan penelitian tentang pengaruh ekstrak sarang semut

terhadap kematian jaringan sel normal.

5.2.2 Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dengan mengisolasi

senyawa-senyawa aktif dari ekstrak sarang semut secara terpisah

dan meneliti efek masing-masing senyawa terhadap derajat

nekrosis sel adenocarcinoma mammae.

 DAFTAR PUSTAKA

American Cancer Society, 2013, Breast cancer, http://www.cancer.org/cancer

/breastcancer/index, Dikutip tanggal 8 Februari 2015.

Arrick, B.A., 2008, Breast Cancer, in: Mendelsohn, J., Howley, P.M., Israel,
M.A., Gray, J.W., Thompson, C.B., The Molecular Basis of Cancer, 3 rd
edition, Saunders Elsevier, Philadelphia, 423-428.

Atta-ur-Rahman. 2014. Studies in Natural Products Chemistry, Volume 42 First

Edition. United Kingdom: Elsevier. 245.

Baratawidjaja KG, Rengganis I., 2010, Imunologi Dasar, edisi 9, FK UI, Jakarta,
47-49

Brunton LC, Lazo JS, Parker KL. Goodman and Gilman’s The pharmacological
basis of therapeutics. Eleventh edition. USA: Mc Graw Hill; 2006: 1335-39.

Colleoni M., Rocca A., Sandri M. T., Zorzino L., Masci G., Nolè F., Peruzzotti
G., Robertson C., Orlando L., Cinieri S., de Braud F., Viale G., Goldhirsch
A. 2002. Low-dose oral methotrexate and cyclophosphamide in metastatic
breast cancer: antitumor activity and correlation with vascular endothelial
growth factor levels, Annals of Oncology, Volume 13, Issue 1, 73–80.

Corwin, Elizabet J. 2010, Buku Saku Patofisiologi, 750-752.

Departemen Kesehatan Republik Indonesia & Direktorat Jenderal Pengawasan

Obat dan Makanan (2000) Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan
Indonesia. Jakarta : Departemen Kesehatan RI, 7-38

Habana A, Dokras A, Giraldo JL, Jones EE. 2012. Cornual heterotopic pregnancy:
contemporary management options.Am J Obstet Gynecol 2000; 182: 1264-
70. Comment in Am J Obstet Gynecol 2001; 185: 522

Harun N. & Syari, W. 2002. Aktivitas antioksidan ekstrak daundewa dalam

menghambat sifat hepatotoksik halotan dengandosis sub anastesi pada
mencit. Jurnal Sains dan Teknologi Farmasi 7(2): 63-70.
Haryono, S.J., Sukasah, C., Swantari, N., 2011, Payudara, Dalam: Sjamsuhidayat,
R & De Jong, Wim., Buku Ajar Ilmu Bedah, 3th Edition, EGC, Jakarta,
140- 145

Hoskins, W. J., Robert. C. Y. et al., 2005, Breast Cancer, In: Principles and
Practice of Gynecologic Oncology, 4th Edition, Philadelphia: Lippincott
Williams & Wilkins, 1077-1155.

54
 55

Inoue, H., Tani, K. 2014. Multimodal immunogenic cancer cell death as a

consequence of anticancer cytotoxic treatments. Cell Death and
Differentiation 21; 39–49.
Jack Cuzick, 2008, Assessing Risk for Breast Cancer, Breast Cancer Research,
(4): S13.

Jasaputra, Diana Krisanti. "Imunomodulator pada Penyakit Alergi." Jurnal

Kedokteran Maranatha 4.2 (2010): pp-14.

Katzung, Bertram G. Farmakologi Dasar & Klinik Ed.10 EGC. Jakarta,

2010.564-567
Kumar, V., Contran R.S., & Robbins S.L., 2007, Phatologic Basic of Disease, 7th
Edition, WB. Saunders, Philadelphia, 35-9, 72-8.
Kusuma A.W, Nurulita N.A, Hartanti D., 2010, “Efek Sitotoksik Dan
Antiproliferatif Kuersetin Pada Sel Kanker Kolon WiDr”, Pharmacy,
Vol.07 No. 03 Desember 2010 43.

Laurence DR, Bacharach AL, 2009, Evaluation of Drug Activities:

Pharmacometrics, Vol 1 part 3 pp, London, New York:Academic press; hal.
315-456.

Lisdawati V.2007.Mahkota Dewa, toksisitas, efek anti oksidan, dan efek

antikanker berdasarkan uji penapisan farmakologi. Jakarta (INA): PT
Phaleria macrocarpa. (sitasi 14 Juni 2010).

Nafrialdi, Gan S, Tirza D, Handoko T. Antikanker dan imunosupresan. In:

Setiabudi R, Suyatma FD, Purwantyastuti, editors. Farmakologi dan terapi.
Jakarta: Gaya Baru; 2003: 686-713
National Breast and Ovarian Cancer Centre, 2009, Breast Cancer Risk Factors: A
Review of The Evidence, National Breast and Ovarian Cancer Centre,
Surry Hills, NSW.

Price, Sylvia A, Patofisologi. 2010 . Edisi 6. Volume 2 1303-1307.

Pringgoutomo, S., Himawan, S., Tjarta, A., 2002, Buku Ajar Patologi I (Umum),
Ed. 1, Sagung Seto, Jakarta, 8-33.

Retnani V., 2011, Pengaruh Suplementasi Ekstrak Daun Annona Muricata

Terhadap Kejadian Displasia Epitel Kelenjar Payudara Tikus Sprague
Dawley Yang Diinduksi 7, 12 Dimethylbenz[Α]Anthracene, The Effect Of
Annona Muricata Leaves Extract Supplementation On The Incidence Of
Mammary Glands Epithel Dysplasia In Sprague Dawley Rats Induced By
7, 12 Dimethylbenz[Α]Anthracene, Artikel Karya Tulis Ilmiah, 4.

Robbins dkk, Buku Ajar Patologi. 2007. Edisi 7. 793-796.

 56

Sijabat, Lanceria, 2009, Pengaruh Pemberian Ekstrak Sponge Halicloma SP

Terhadap Aktivitas Proliferasi Sel dengan Metode Hitung AgNOR pada
Sel Adenocarcinoma Mammae pada Mencit C3H, 17.
Snell, R. S., 2006, Anatomi Klinik untuk Mahasiswa Kedokteran, Edisi 6, EGC,
Jakarta, 350-360.

Subroto, M.A., Saputro H., 2006, Gempur Penyakit dengan Sarang Semut,
Jakarta: Penebar Swadaya, 23-30

Sudiana, 2008, Patobiologi Molekuler Kanker, Salemba Medika, Jakarta, Hal: 46.

Sumarno., Putra, A., Sundari., 2012, Pertemuan Ilmiah Bidang Imunohistokimia

& Western Blot, Unissula Press, Semarang, 29-50
Taebe, B., Randalinggi, E.A., Manggau, M.A., Usmar. 2012. Uji Efek
Hipoglikemik Kombinasi Ekstrak Etanol Propolis dan Ekstrak Etanol
Sarang Semut (Myrmecodia pendens Merr & Perry) pada Mencit (Mus
musculus). Majalah Farmasi dan Farmakologi. Vol. 16, No.3. 151 – 158.

Utami, Prapti, Mardiana, Lina. 2013. Umbi Ajaib Tumpas Penyakit 35-45
n mitokondria dan DNA, serta kadar ROS dan deplesi ATP.
 57

LAMPIRAN

Lampiran 1. Data Derajat Nekrosis Selmasing-masingKelompok

 58

Lampiran 2. Deskripsi Statistik Derajat Nekrosis Sel Adenocarcinoma

Mammae antar Kelompok
Means

Case Processing Summary

Cases

Included Excluded Total

N Percent N Percent N Percent

Nekrosis * Kelompok 24 100.0% 0 0.0% 24 100.0%

Report
Nekrosis

Kelompok Mean N Std. Deviation

Kelompok I .1667 6 .15055
Kelompok II .4667 6 .10328
Kelompok III 1.8000 6 .12649
Kelompok IV 2.4000 6 .21909
Total 1.2083 24 .95367

Lampiran 3. Normalitas Data dan Homogenitas Varian Derajat Nekrosis

Sel Adenocarcinoma Mammae antar Kelompok
Explore
Derajat Nekrosis

Case Processing Summary

Cases
Valid Missing Total
Kelompok N Percent N Percent N Percent
Nekrosis Kelompok I 6 100.0% 0 0.0% 6 100.0%
Kelompok II 6 100.0% 0 0.0% 6 100.0%
Kelompok III 6 100.0% 0 0.0% 6 100.0%
Kelompok IV 6 100.0% 0 0.0% 6 100.0%

Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Kelompok Statistic df Sig. Statistic df Sig.
Nekrosis Kelompok I .254 6 .200* .866 6 .212
Kelompok II .407 6 .002 .640 6 .001
Kelompok III .333 6 .036 .827 6 .101
Kelompok IV .319 6 .056 .683 6 .004
*. This is a lower bound of the true significance.
 59

a. Lilliefors Significance Correction

Test of Homogeneity of Variance

Levene Statistic df1 df2 Sig.
Nekrosis Based on Mean 4.160 3 20 .019
Based on Median 2.867 3 20 .062
Based on Median and with
2.867 3 14.952 .072
adjusted df
Based on trimmed mean 4.192 3 20 .019

Lampiran 4. Uji Beda Derajat Nekrosis Sel Adenocarcinoma Mammae antar

Keempat Kelompok dengan Uji Kruskal Wallis
NPar Tests
Kruskal-Wallis Test

Ranks

Kelompok N Mean Rank

Nekrosis Kelompok I 6 3.83

Kelompok II 6 9.17

Kelompok III 6 15.50

Kelompok IV 6 21.50

Total 24

Test Statisticsa,b

Nekrosis

Chi-Square 21.559
Df 3
Asymp. Sig. .000

a. Kruskal Wallis Test

b. Grouping Variable:
Kelompok
 60

Lampiran 5. Uji Beda Derajat Nekrosis Sel Adenocarcinoma Mammae antar

Dua Kelompok dengan Uji Mann Whitney
NPar Tests
Mann-Whitney Test

Ranks
Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks
Nekrosis Kelompok I 6 3.83 23.00
Kelompok II 6 9.17 55.00
Total 12

Test Statisticsa
Nekrosis
Mann-Whitney U 2.000
Wilcoxon W 23.000
Z -2.687
Asymp. Sig. (2-tailed) .007
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .009b
a. Grouping Variable: Kelompok
b. Not corrected for ties.

Mann-Whitney Test

Ranks
Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks
Nekrosis Kelompok I 6 3.50 21.00
Kelompok III 6 9.50 57.00
Total 12

Test Statisticsa
Nekrosis
Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 21.000
Z -2.961
Asymp. Sig. (2-tailed) .003
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .002b
a. Grouping Variable: Kelompok
b. Not corrected for ties.
 61

Mann-Whitney Test

Ranks
Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks
Nekrosis Kelompok I 6 3.50 21.00
Kelompok IV 6 9.50 57.00
Total 12

Test Statisticsa
Nekrosis
Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 21.000
Z -2.950
Asymp. Sig. (2-tailed) .003
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .002b
a. Grouping Variable: Kelompok
b. Not corrected for ties.

NPar Tests
Mann-Whitney Test

Ranks
Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks
Nekrosis Kelompok II 6 3.50 21.00
Kelompok III 6 9.50 57.00
Total 12

Test Statisticsa
Nekrosis
Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 21.000
Z -2.994
Asymp. Sig. (2-tailed) .003
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .002b
a. Grouping Variable: Kelompok
b. Not corrected for ties.
 62

NPar Tests
Mann-Whitney Test

Ranks
Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks
Nekrosis Kelompok II 6 3.50 21.00
Kelompok IV 6 9.50 57.00
Total 12

Test Statisticsa
Nekrosis
Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 21.000
Z -2.983
Asymp. Sig. (2-tailed) .003
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .002b
a. Grouping Variable: Kelompok
b. Not corrected for ties.

NPar Tests
Mann-Whitney Test

Ranks
Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks
Nekrosis Kelompok III 6 3.50 21.00
Kelompok IV 6 9.50 57.00
Total 12

Test Statisticsa
Nekrosis
Mann-Whitney U .000
Wilcoxon W 21.000
Z -2.978
Asymp. Sig. (2-tailed) .003
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .002b
a. Grouping Variable: Kelompok
b. Not corrected for ties.
63
 64

Lampiran 6. Gambar-Gambar Penelitian

Gambar 1. Inokulasi sel adenocarcinoma mammae

Gambar 2. Pengambilan jaringan tumor pada donor

Gambar 3. Pembuatan bubur tumor

 65

Gambar 4. Pengambilan jaringan kanker payudara dengan pembedahan

Gambar 5. Alat dan Bahan

 66

Lampiran 7. Hasil Penelitian Gambaran Histopatologi Derajat Nekrosis Sel

Gambar 1. Derajat Nekrosis sel Pewarnaan HE, Pembesaran 400x

Nekrosis

Gambar 2. Derajat Nekrosis sel, Pewarnaan HE, Pembesaran 400x

Nekrosis

Gambar 3. Derajat Nekrosis sel, Pewarnaan HE, Pembesaran 400x

 67

Nekrosis

Gambar 4. Derajat Nekrosis sel, Pewarnaan HE, Pembesaran 400x

Nekrosis
 68

Lampiran 8. Ethical Clearance

 69

Lampiran 9. Surat Keterangan Penelitian dari Laboratorium Patologi

Anatomi FK UNISSULA
 70

Lampiran 10. Surat Keterangan Penelitian dari Laboratorium Patologi

Anatomi FK Universitas Indonesia
 71

Lampiran 11. Surat Keterangan Pembuatan Ekstrak Tanaman Sarang

Semut dari Laboratorium Biokomia UNISSULA