UJI EFEKTIVITAS NEUROPROTEKTIF EKSTRAK DAUN

PEPAYA (Carica papaya L.) PADA GAMBARAN HISTOLOGI

CEREBRUM MENCIT (Mus musculus L.) YANG DIINDUKSI
TRIMETILTIN

Usulan penelitian untuk Skripsi

Oleh

Siti Masnunah
1508305039

PROGRAM STUDI BIOLOGI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS UDAYANA
2018
 HALAMAN JUDUL

UJI EFEKTIVITAS NEUROPROTEKTIF EKSTRAK DAUN

PEPAYA (Carica papaya L.) PADA GAMBARAN HISTOLOGI
CEREBRUM MENCIT (Mus musculus L.) YANG DIINDUKSI
TRIMETILTIN

Usulan penelitian untuk Skripsi

Oleh
Siti Masnunah
1508305039

PROGRAM STUDI BIOLOGI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS UDAYANA
2018

i
 LEMBAR PENGESAHAN

Usulan Penelitian

UJI EFEKTIVITAS NEUROPROTEKTIF EKSTRAK DAUN

PEPAYA (Carica papaya L.) PADA GAMBARAN HISTOLOGI
CEREBRUM MENCIT (Mus musculus L.) YANG DIINDUKSI
TRIMETILTIN

Oleh
Siti Masnunah
1508305039

Telah diseminarkan dan disetujui pada tanggal 10 Desember 2018

Pembimbing I Pembimbing II

Dr. Dra. Ngurah Intan Wiratmini, M.Si. Dr. Dra. Ni Made Rai Suarni, M.Si.
NIP. 196802281994122001 NIP. 196704241993032001

Mengesahkan,
Koordinator Program Studi Biologi
FMIPA Universitas Udayana

Dr. I Ketut Ginantra, S.Pd., M.Si.

NIP. 1971106121999031001

ii
 KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan ke hadapan Tuhan Yang Maha Esa karena
berkat hidayah dan rahmat-Nya, Usulan Penelitian yang berjudul “Uji Efektivitas
Neuroprotektif Ekstrak Daun Pepaya (Carica papaya L.) Pada Gambaran
Histologi Cerebrum Mencit (Mus musculus L.) Yang Diinduksi Trimetiltin”
dapat diselesaikan pada waktunya.
Penulis mengucapkan terima kasih kepada semua pihak yang telah
mendukung dan membantu penyusunan usulan penelitian, diantaranya:
1. Ibu Dr. Dra. Ngurah Intan Wiratmini, M.Si. dan Dr. Dra. Ni Made Rai
Suarni, M.Si. selaku dosen pembimbing yang dengan sabar memberikan
bimbingan, dukungan, dan bantuan selama penyusunan usulan penelitian.
2. Dra. Inna Narayani, M.Sc., Dr. Drs. Anak Agung Ketut Darmadi, M.Si.,
dan Dr. Iriani Setyawati, S.Si. M.Si. selaku dosen penguji yang telah
memberikan kritik, saran, serta dukungan selama seminar Usulan
Penelitian berlangsung.
3. Bapak I Ketut Muksin S.Si., M.Si. selaku koordinator seminar usulan
penelitian yang telah memberikan dukungan dan saran.
4. Ibu Dra. Ni Nyoman Wirasiti, M.Repro sebagai dosen Pembimbing
Akademik yang telah memberikan bimbingan dan dukungan.
5. Bapak Dr. I Ketut Ginantra, S.Pd., M.Si. selaku Ketua Program Studi
Biologi FMIPA Universitas Udayana yang telah memfasilitasi dan
mendukung kegiatan seminar Usulan Penelitian.
6. Orang tua serta seluruh teman di Program Studi Biologi atas dukungan,
saran, dan motivasi yang telah diberikan selama penyusunan Usulan
Penelitian.
Usulan penelitian ini tentunya masih memiliki banyak kekurangan
sehingga kritik dan saran yang membangun sangat diperlukan untuk
kesempurnaan tulisan ini.
Bukit Jimbaran, Desember 2018
Penulis

iii
 ABSTRAK

Trimetiltin klorida (TMT) merupakan senyawa organotin yang bersifat

neurotoksik dan dapat menyebabkan kematian saraf pada otak manusia dan
hewan. Patologi yang ditimbulkan oleh TMT adalah gangguan neurodegeneratif
berupa kematian sel saraf dan gangguan kognitif. Penelitian ini bertujuan untuk
mengetahui gambaran histologi hipokampus dan korteks serebri mencit (Mus
musculus L.) hasil induksi Trimetiltin yang diberi ekstrak daun pepaya (Carica
papaya L.) serta untuk mengetahui dosis optimum ekstrak daun pepaya yang
bersifat neuroprotektif. Penelitian menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL)
dengan lima perlakuan yang terdiri dari satu kontrol positif (diinduksi TMT tanpa
pemberian ekstrak), satu kontrol negatif (tanpa induksi TMT dan pemberian
ekstrak), dan tiga perlakuan yang diinduksi TMT serta diberi perlakuan ekstrak
daun pepaya dosis 500 mg/kg, 1000 mg/kg, dan 2000 mg/kg berat badan. Setiap
perlakuan dilakukan 5 pengulangan sehingga penelitian menggunakan 25 ekor
mencit. Ekstrak daun pepaya diberikan melalui oral mulai hari ke-3 setelah
induksi TMT sampai hari ke 28. Mencit akan dibedah pada hari ke-29 dan diambil
organ otaknya. Organ ditimbang kemudian dipreparasi histologi dengan metode
parafin dan pewarnaan Hematoksilin-Eosin. Parameter yang diamati yaitu bobot
cerebrum, nekrosis sel neuroglia dan sel piramidal pada histologi hipokampus,
serta nekrosis sel neuroglia dan nekrosis sel piramidal pada histologi korteks
serebri. Data yang diperoleh dianalisis secara statistik dengan uji One Way Anova
menggunakan aplikasi SPSS versi 22.

Kata Kunci: daun pepaya, TMT, neuroprotektif, nekrosis, cerebrum, hipokampus

iv
 DAFTAR ISI

Halaman
HALAMAN JUDUL ............................................................................................... i
LEMBAR PENGESAHAN .................................................................................... ii
KATA PENGANTAR ........................................................................................... iii
ABSTRAK ............................................................................................................. iv
DAFTAR ISI ............................................................................................................v
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ vii
I. PENDAHULUAN ...............................................................................................1
1.1. Latar Belakang ..............................................................................................1
1.2. Rumusan Masalah .........................................................................................4
1.3. Tujuan Penelitian...........................................................................................5
1.4. Hipotesis Penelitian .......................................................................................5
1.5. Manfaat Penelitian.........................................................................................5
II. TINJAUAN PUSTAKA ......................................................................................6
2.1 Demensia .......................................................................................................6
2.2 Histofisiologi Otak ........................................................................................7
2.2.1 Korteks Serebri ..................................................................................... 7
2.2.2 Hipokampus.......................................................................................... 9
2.3 Histologi Sistem Saraf Pusat .......................................................................10
2.3.1 Neuron ................................................................................................ 10
2.3.2 Sel Glia dan Sel Piramidal.................................................................. 11
2.4 Nekrosis Sel .................................................................................................12
2.5 Trimetiltin Klorida (TMT) ..........................................................................13
2.6 Pepaya (Carica papaya L.)..........................................................................14
III. METODE PENELITIAN .................................................................................17
3.1 Waktu dan Tempat Penelitian ......................................................................17
3.2 Cara Kerja ....................................................................................................17
3.2.1 Pembuatan Ekstrak Daun Pepaya ....................................................... 17

v
 3.2.2 Pembuatan Larutan Trimetiltin (TMT) .............................................. 17
3.2.3 Penentuan Jumlah dan Aklimatisasi Hewan Coba ............................. 18
3.2.4 Pemberian Perlakuan .......................................................................... 18
3.2.5 Preparasi Sayatan Histologi ................................................................ 19
3.2.6 Pengamatan Histologi ......................................................................... 21
3.3 Variabel Penelitian .......................................................................................21
3.4 Rancangan penelitian ...................................................................................22
3.5 Metode Pengolahan Data .............................................................................22
3.6 Jadwal Penelitian ..........................................................................................23
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................24
LAMPIRAN ...........................................................................................................30

vi
 DAFTAR GAMBAR

Halaman
1. Histologi Korteks Serebri ......................................................................................... 8
2. Histologi Hipokampus Manusia.............................................................................. 10
3. Neuron pada Sumsum Tulang Belakang ................................................................. 11
4. Histologi Sel Glia dan Sel Piramidal ...................................................................... 12
5. Tahap-tahap Nekrosis ............................................................................................. 13
6. Struktur Kimia Trimetiltin Klorida (TMT) ............................................................. 14
7. Tanaman Pepaya (Carica papaya L.) ..................................................................... 15

vii
 I. PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Ikan kerapu sunu, Plectropomus leopardus (Lacepède, 1802)

merupakan salah satu jenis keanekaragaman hayati laut Indonesia.

Keberadaannya tersebar luas, tidak saja di seluruh wilayah perairan laut

Indonesia, namun juga di Pasifik Barat hingga Pasifik Timur (Heemstra &

Randall, 1993). Ikan kerapu sunu juga merupakan salah satu komoditas

perikanan laut yang bernilai ekonomis tinggi (Phillips & Yuan, 1998;

Sugama & Priono, 2003; Andamari et al., 2005; Davies et al., 2013). Oleh

karenanya, tingkat eksploitasi terhadap ikan tersebut cenderung

meningkat (Harrison et al., 2012). Dalam jangka waktu panjang,

eksploitasi yang berlebih terhadap ikan kerapu sunu dikhawatirkan akan

mengakibatkan penurunan populasinya di alam, yang pada akhirnya

akan berdampak pada kelangkaan, bahkan kepunahan jenis ikan tersebut.

Agar tetap dapat menjaga keseimbangan kerapu Sunu di alam

perlu diadakanya budidadaya massal sehingga juga dapat memberi

pasokan untuk kebutuhan pasar. Menurut Koeshendrajana & Hartono

(2006) ikan kerapu sunu merupakan salah satu jenis ikan kerapu yang

sangat potensial untuk dikembangkan sebagai komoditas budidaya di

Indonesia. Usaha budidaya kerapu Sunu telah dirintis di beberapa Negara

seperti Jepang (Masuma et al., 1993), Australia (Rimmer et al., 1997),

Taiwan (Lin et al., 2014), termasuk di Indonesia (Suwirya, 2005).

 Budidaya kerapu Sunu memiliki sejumlah kendala antara lain

tingginya tingkat mortalitas yang umumnya terjadi pada stadia larva. Hal

tersebut, menurut Ahmad (1998), mengakibatkan produksi benih

kerapu sunu yang dihasilkan dari usaha budidaya masih relatif rendah dan

tingkat keberhasilannya juga masih fluktuatif. Bila dibandingkan dengan

jenis ikan laut yang sudah berhasil dibudidayakan, pemeliharaan larva ikan

kerapu secara umum relatif lebih sulit (Kohno et al., 1997), bahkan

tingkat kesulitan pemeliharaan larva ikan kerapu sunu jauh lebih tinggi

dibandingkan dengan pemeliharaan jenis ikan kerapu lainnya.

Ada beberapa faktor yang berpengaruh terhadap keberhasilan

produksi benih ikan laut. Pakan merupakan salah satu kunci dalam

pemeliharaan larva (Ma et al., 2013). Zooplankton rotifera Brachionus sp.

Artemia merupakan jenis pakan alami yang biasa digunakan sebagai pakan

awal bagi larva ikan laut (Lubzens & Zmora, 2003). Rotifer dan Artemia

yang telah umum digunakan sebagai pakan alami memiliki beberapa kekurangan,

antara lain Rotifer sangat bergantung pada asupan fitoplankton yang diberikan

sebagai sumber makanan utama. Sedangkan kultur fitoplankton sangat

tergantung pada kondisi lingkungan, bila terjadi kekurangan asupan makanan

sejumlah besar Rotifer akan kehilangan kandungan nutrisi hingga terjadi

kematian (Markridis and Olsen, 1999). Sedang untuk Artemia, kendalanya

terdapat pada pengadaan benih yang harus diimport dalam bentuk kista dan

tidak dapat dibudidayakan secara alami (Sugama dkk., 2001). Alternative lain

yang dapat dikembangkan sebagai pakan alami adalah copepoda. Copepoda

merupakan hewan air yang hidup lautan bebas dan beberapa di air tawar

(Humes, 1994). Salah satu jenis Crustacean ini memegang peranan penting dalam

ekosistem perairan, karena merupakan sumber makan bagi sebagian besar larva

ikan (Costello, 2000).

Kandungan protein Copepoda berkisar antara 24 - 82%, lebih besar bila

dibandingkan dengan Rotifer yang memiliki kandungan protein berkisar 28 – 63%

dari berat kering (Bamstedt, 1986; Kusmiyati dkk., 2002). Toledo et al., (1999)

melaporkan walaupun kandungan EPA (Eicosapentaenoic Acid) (asam lemak

esensial) pada copepoda dan rotifer hampir sama yaitu masing-masing 9,25 %

area dan 8,26 % area, tetapi kandungan DHA (Docosahexaenoic Acid) Copepoda

lebih besar dari rotifer, yaitu masing masing 24,41 % area dan 0,17 % area,

sehingga nilai DHA/EPA pada Copepoda lebih tinggi dari rotifer. Tingginya nilai

DHA/EPA akan menghasilkan perbaikan pertumbuhan, kelangsungan hidup dan

mengurangi terjadinya abnormalitas pada larva ikan (Sargent et al., 1997).

Dari 10 ordo yang ada, yang paling umum digunakan dalam budidaya

pakan alami ada tiga, yaitu Calanoida, Harpacticoida and Cyclopoida (Huys and

Boxshall, 1991). Calanoida Dan Harpacticoida menjadi ordo yang dominan

ditemui pada berbagai kondisi perairan, kemampuan beradaptasi pada berbagai

kondisi lingkungan sehingga dapat meningkatkan keberhasilan dalam kompetisi

dengan spesies lain. Calanoida Dan Harpacticoida sebagai jenis yang berpotensi

besar untuk digunakan sebagai pakan alami (Bregmans and Janssens, 1998).

Beberapa penelitian mengenai penggunaan kopepoda sebagai pakan

alami telah dilakukan seperti pada larva ikan kerapu bebek Cromileptes
 altivelis (Ismi et al., 2000), kerapu macan Epinephelus fuscoguttatus

(Sumiarsa et al., 2005) dan cobia Rachycentron canadum (Prijono et al.,

2008), nener Bandeng Chanos chanos dengan Acartia sp. (Dion, 2017) dan

diketahui pemberian kopepoda memberi dampak terhadap pertumbuhan

dan meningkatkan kelulushidupan pada stadia larva masing – masing jenis

ikan yang di cobakan. Sejumlah uraian tersebut menunjukkan bahwa

kopepoda memiliki potensi yang besar untuk digunakan sebagai pengganti

pakan alami yang telah ada seperti Rotifer dan Artemia, namun penelitian

tentang jenis yang paling efektif diaplikasikan terhadap larva ikan belum

banyak dilakukan. Penelitian ini mencoba mengaplikasikan beberapa jenis

kopepoda (Acartia sp., Oithona sp. dan Tisbe sp.) dan kombinasinya

untuk digunakan sebagai pakan alami larva kerapu sunu untuk melihat

adanya perbedaan pertumbuhan dan perkembangan pada larva kerapu

Sunu.

1.2. Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang yang tersebut di atas maka

permasalahan yang diajukan dalam penelitian ini adalah:

1. Bagaimana pengaruh pemberian kopepoda jenis Acartia sp. sebagai

pakan alami terhadap pertumbuhan larva ikan kerapu sunu?

2. Bagaimana pengaruh anggota kopepoda Oithona sp. sebagai pakan

alami terhadap pertubuhan larva ikan kerapu sunu?

3. Bagaimana pengaruh anggota kopepoda Tisbe sp. sebagai pakan

alami terhadap pada pertubuhan larva ikan kerapu sunu?
 4. Bagaimana pengaruh pemberian kombinasi kopepoda Acartia sp.,
Oithona sp. dan Tisbe sp. pada pertubuhan larva ikan kerapu sunu?

1.3. Tujuan Penelitian

Tujuan penelitian ini adalah sebagai berikut :

1. Mengetahui pengaruh pemberian kopepoda jenis Acartia sp. sebagai
pakan alami terhadap pertumbuhan larva ikan kerapu sunu?
2. Mengetahui pengaruh anggota kopepoda Oithona sp. sebagai pakan alami
terhadap pertubuhan larva ikan kerapu sunu?
3. Mengetahui pengaruh anggota kopepoda Tisbe sp. sebagai pakan alami
terhadap pada pertubuhan larva ikan kerapu sunu?
4. Mengetahui pengaruh pemberian kombinasi kopepoda Acartia sp., Oithona
sp. dan Tisbe sp. pada pertubuhan larva ikan kerapu sunu?

1.4. Hipotesis Penelitian

Hipotesis pada penelitian ini yaitu pemberian kombinasi kopepoda ke tiga

jenis yang digunakan memberikan pengaruh paling baik pada pertumbuhan larva
kerapu sunu.

1.5. Manfaat Penelitian

Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi tentang

pemanfaatan kopepoda dalam budidaya perikanan dan jenis kopepoda yang paling
efektif untuk diaplikasikan pada larva ikan kerapu sunu.
 II. TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Demensia

Demensia adalah sindrom yang berkaitan dengan penurunan kognitif yang

dapat menyebabkan terganggunya aktivitas dan kehidupan penderita. Perubahan
kognitif dan fungsional pada demensia biasanya disertai dengan perubahan
perilaku dan kepribadian. Akan tetapi, hal ini belum bisa dijadikan kriteria utama
penderita demensia karena hingga kini spesifisitas diagnostik masih belum
memadai (Chertkow et al., 2013). Insiden demensia meningkat seiring
bertambahnya usia sehingga menjadi fenomena yang semakin umum bersamaan
dengan bertambah tuanya populasi manusia (Cunningham et al., 2015).
Demensia menggambarkan berbagai penyakit dan kondisi ketika sel-sel
saraf di otak mati atau tidak lagi berfungsi secara normal tanpa disertai gangguan
kesadaran. Demensia bersifat kronik/progresif dan mempengaruhi fungsi-fungsi
dasar tubuh seperti daya ingat, daya fikir, daya orientasi, daya pemahaman,
berhitung, kemampuan belajar, bahasa, dan kemampuan menilai (Hales dan
Brewer, 2010). Fungsi otak cukup banyak terpengaruh sehingga kemampuan
kognitif dalam mengenali berkurang, akibatnya penderita tidak mampu
melakukan kegiatan sehari-hari (Dementia helpsheet, 2017).
Demensia dapat disebabkan oleh berbagai proses patofisiologi yang
mendasarinya. Beberapa yang umum diantaranya adalah penyakit Alzheimer
(Alzheimer Disease/AD; 50-75%), diikuti oleh demensia vaskular (VaD; 20%),
demensia dengan badan Lewy (DLB; 5%) dan demensia lobus frontotemporal
(Frontotemporal Lobus Dementia/FTLD; 5%). Penyebab lainnya diantaranya
termasuk penyakit Huntington, penyakit Creutzfeldt-Jakob, HIV/AIDS, dan
sebagainya (Cunningham et al., 2015).
2.2 Histofisiologi Otak

Otak terdiri atas otak besar (serebrum), otak kecil (serebelum), dan batang
otak. Otak dibagi menjadi dua belahan yakni belahan otak kanan dan belahan otak
kiri (Hetty dan Dwiastuti, 2017).

2.2.1 Korteks Serebri

Cerebrum adalah bagian terbesar dari otak yang terdiri dari dua hemisfer,
yaitu hemisfer kanan dan hemisfer kiri. Masing-masing hemisfer terdiri dari
empat lobus. Bagian lobus yang menonjol disebut girus dan bagian lekukan yang
menyerupai parit disebut sulkus. Keempat lobus tersebut masing-masing adalah
lobus frontal, lobus parietal, lobus oksipital, dan lobus temporal (Ellis, 2006).
Cerebrum merupakan bagian terbesar sistem saraf pusat. Bagian luar
cerebrum dibentuk oleh massa berwarna gelap (kelabu/substansi grisea) yang
membentuk korteks dan di lapisan sebelah dalam oleh massa yang berwarna putih
(substansi alba). Tonjolan dan lekukan pada cerebrum menyebabkan luas
permukaan otak menjadi lebih besar jika dibandingkan dengan otak yang
permukaannya rata (Wibowo, 2011).
Korteks serebri merupakan suatu struktur yang mempunyai banyak
lipatan. Ada berbagai jenis sel yang membentuk korteks serebri yang tersebar
dalam lapisan-lapisan dengan satu atau lebih jenis sel utama pada setiap lapisan
(Eroschenko, 2003). Ada banyak jenis atau tipe sel penting di korteks serebri.
Salah satu yang penting dan mudah dikenal adalah sel piramid (pyramidal cell)
yang menghubungkan korteks dengan bagian otak yang lain. Korteks menjadi
tempat kedudukan badan sel saraf sehingga semakin luas permukaan korteks
maka akan semakin banyak badan sel saraf (Wibowo, 2011).
 Gambar 1. Histologi Korteks Serebri
(Junqueira et al., 1988)

Secara histologis menurut Jusuf dan Antarianto (2009), serebrum terdiri

atas 6 lapisan yaitu :
1. Lapis molekular, terdiri atas serat-serat yang berasal dari sel-sel lapis lebih
dalam. Sel yang terdapat pada lapisan ini adalah sel neuroglia.
2. Lapis granular luar, terdiri atas badan-badan sel saraf kecil berbentuk
segitiga/piramid yang berukuran 10-50 mikrometer. Dendritnya mengarah ke
lapisan molekular dan bercabang-cabang, sementara aksonnya mengarah ke
lapisan di bawahnya. Sel lainnya yang terdapat pada lapisan ini adalah sel
stelata (sel granular) yang berukuran kecil (8 mikrometer) dan berbentuk
poligonal.
3. Lapis sel-sel piramid luar, terdiri atas sel-sel piramid yang ukurannya makin ke
dalam semakin bertambah besar. Dendritnya mengarah ke lapisan molekular
sementara aksonnya menuju ke arah substansia alba.
4. Lapis granular dalam, terdiri atas sel-sel granula bercabang (stelata) halus dan
sel-sel piramid.
5. Lapis piramid dalam atau lapis ganglion terdiri atas sel-sel piramid besar dan
sedang. Disamping itu juga terdapat sel stelata dan sel Martinotti. Sel
Martinotti merupakan sel saraf multipolar berukuran kecil dengan dendrit yang
pendek mengarah ke lapisan di atasnya, sedangkan aksonnya berjalan ke arah
lateral.
6. Lapis sel-sel multiform atau polimorf, terdiri atas sel-sel dengan macam-macam
bentuk. Kebanyakan sel yang terdapat disini adalah sel fusiform dengan
dendritnya yang panjang mengarah ke arah lapisan di atasnya.

2.2.2 Hipokampus

Hipokampus merupakan perluasan dari tepi korteks serebri (Huerta dan

Lisman, 1993). Hipokampus dikenal sebagai zona berupa lapisan tunggal yang
dibatasi oleh korteks yang dipenuhi neuron. Struktur tepi korteks disebut sistem
limbik yang termasuk di dalamnya hipokampus, korteks, korteks olfaktori, dan
amigdala (Jackson et al., 2006). Hipokampus terlibat pada proses-proses memori
jangka pendek (Juwono, 1996).
Hipokampus adalah bagian pertama yang akan mengalami kerusakan pada
otak penderita demensia Alzheimer. Kerusakan hipokampus juga dapat
disebabkan karena kekurangan oksigen (hipoksia), encephalitis, atau epilepsi. Jika
kerusakan meluas maka akan menyebabkan amnesia, yaitu ketidakmampuan
untuk membentuk dan menyimpan memori baru (Aboitiz et al., 2003).
Secara histologi, hipokampus dibagi menjadi 4 area berbeda, yaitu Cornu
Ammonis (CA)1, CA2, CA3, dan CA4 (Touretzky, 2015). CA1 memiliki sel
piramidal yang lebih kecil dan lebih bulat pada lapisan sel utamanya, yang secara
substansinya lebih tebal tetapi lebih tidak padat dibandingkan CA2 dan CA3. CA2
dapat dibedakan dari CA3 dari lebih sedikitnya masukan dari serabut mossy.
Area-area ini dibagi berdasarkan komposisi dan bentuk dari badan sel saraf yang
terletak di dalamnya. Bagian lain dari hipokampus yaitu Subiculum (Sub) dan
dentate gyrus (DG) (Arjadi dkk., 2014).
 Gambar 2. Histologi Hipokampus Manusia
(Touretzky, 2015)

2.3 Histologi Sistem Saraf Pusat

Sistem saraf dibentuk oleh jaringan saraf yang terdiri atas beberapa macam
sel. Komponen utamanya adalah sel saraf atau neuron didampingi oleh sel glia
sebagai sel penunjang.

2.3.1 Neuron

Neuron merupakan sel struktural dan fungsional pada sistem saraf. Neuron
merespon stimulus saraf. Badan sel dan neuron disebut dengan soma (Kandel et
al., 2000).
Menurut Wibowo (2011), pada umumnya neuron terdiri atas 3 bagian,
yaitu:
1. Dendrit, bagian khusus yang menerima stimulus dari lingkungan sekitar, sel
epitel sensoris, atau neuron lain.
2. Badan sel, merupakan pusat dari keseluruhan suatu sel saraf yang juga peka
terhadap rangsangan. Dalam badan sel terdapat nukleus dan butir-butir Nissl
(Nissl bodies).
3. Axon (neurit) : sebuah penonjolan khusus untuk menimbulkan atau
meneruskan impuls ke sel yang lain (sel saraf, sel otot, atau sel kelenjar).
 Gambar 3. Neuron pada Sumsum Tulang Belakang
(Campbell et al., 1999)
2.3.2 Sel Glia dan Sel Piramidal

Sel glia atau neuroglia merupakan sel jaringan antara atau penunjang
sistem saraf, terdapat baik dalam saraf pusat maupun dalam saraf tepi.
Kebanyakan terkandung di dalam otak dan sumsum tulang belakang. Fungsi sel
glia antara lain melindungi dan menunjang neuron, menyelimuti akson, memberi
nutrisi kepada neuron, dan sebagai pertahanan. Sel glia dibedakan menjadi lima
macam yaitu astrosit, oligodendrosit, mikroglia, sel satelit, dan sel Schwann
(Yatim, 1990).
Astrosit merupakan sel glia yang ukurannya paling besar, hanya terdapat
dalam saraf pusat, dan memiliki banyak tonjolan yang bercabang-cabang seperti
akar pohon. Struktur tonjolan ini dapat membentuk suatu lapisan di bawah selaput
saraf pusat, dan melindungi sinapsis. Oligodendrosit merupakan sel terbesar
kedua setelah astrosit. Sel ini merupakan jenis sel glia yang jumlahnya paling
banyak, memiliki tonjolan yang lebih sedikit dari astrosit, dan hanya ditemukan
pada saraf pusat. Mikroglia merupakan sel glia yang sedikit jumlahya, memiliki
tonjolan pendek dan halus yang bercabang-cabang pendek. Sel satelit merupakan
sel antara yang khas terdapat dalam ganglion. Akson pada saraf tepi diselaputi
oleh myelin yang berasal dari sel Schwann (Yatim, 1990).
 Gambar 4. Histologi Sel Glia dan Sel Piramidal
(Junqueira dan Carneiro, 2003)
2.4 Nekrosis Sel

Nekrosis merupakan kematian sel sebagai akibat dari adanya kerusakan sel
akut atau trauma. Kematian sel terjadi secara tidak terkontrol, dapat menyebabkan
rusaknya sel, adanya respon peradangan, dan sangat berpotensi menyebabkan
masalah kesehatan yang serius. Tanda yang terlihat pada inti sel (nukleus) saat
mengalami nekrosis antara lain piknosis, karioreksis, dan kariolisis (Kevin, 2010).
Piknosis ditandai dengan inti sel menyusut hingga mengkerut, menunjukkan
penggumpalan, densitas kromatinnya meningkat, memiliki batas yang tidak
teratur, dan berwarna gelap. Karioreksis akan menyebabkan membran nukleus
robek dan inti sel hancur sehingga terjadi pemisahan kromatin terbentuk fragmen-
fragmen yang menyebabkan materi kromatin tersebar dalam sel. Kariolisis adalah
keadaan ketika inti sel sudah tercerna dan hilang sehingga tidak dapat diwarnai
lagi (Kevin, 2010).
 Gambar 5. Tahap-tahap Nekrosis
(Stevens et al., 2008)

2.5 Trimetiltin Klorida (TMT)

Trimetiltin klorida (TMT) merupakan racun yang kuat yang dapat

menyebabkan gangguan pendengaran, disorientasi, amnesia, agresivitas, kejang
parsial, nistagmus (mata bergerak tidak terkendali), ataksia (gangguan pergerakan
tubuh), dan neuropati sensorik ringan. TMT adalah senyawa kimia yang bersifat
neurotoksik dan dapat menyebabkan kematian neuron pada sistem limbik dan
hipokampus pada manusia dan hewan (Geloso et al., 2011).
Patologi yang ditimbulkan oleh TMT paling umum adalah gangguan
neurodegeneratif sel, yaitu kematian neuron dengan gangguan kognitif. TMT
menimbulkan kematian neuron dalam sistem limbik dan menyebabkan kerusakan
terutama di hipokampus, dengan demikian dapat berguna sebagai model
eksperimen terutama dalam penyelidikan penyakit seperti Alzheimer (Gasparova
et al., 2014).
Kerusakan sistem saraf yang disebabkan oleh induksi TMT berasal dari
reactive oxygen species (ROS) dan reactive nitrogen species (RNS). TMT
meningkatkan pembentukan 4-hydroxynonenal (4-HNE) yang diketahui sebagai
produk aldehid utama dari peroksidase lipid. Inilah yang menyebabkan perubahan
histopatologik pada otak akibat stress oksidatif (Huong et al., 2011). Lethal Dose
50 (LD50) trimetiltin klorida untuk Mus musculus dengan injeksi melalui
intraperitoneal adalah sebesar 3,83 mg/kg bb, apabila dikonversi maka akan
didapat LD50 TMT untuk manusia sebesar 1,5 g/kg bb (Tang et al., 2013).
Trimetiltin klorida memiliki rumus kimia C3H9ClSn dengan titik didih
148° C, Titik lebur 38,5C, dan massa molar 199,27 g / mol (Ghosh, 2018).
Struktur kimia dari senyawa ini menurut (National Library of Medicine, 2009)
adalah sebagai berikut.

Gambar 6. Struktur Kimia Trimetiltin Klorida (TMT)

(National Library of Medicine, 2009)

2.6 Pepaya (Carica papaya L.)

Pepaya (Carica papaya L.) merupakan tumbuhan yang berasal dari

Amerika tropis. Pusat penyebaran tanaman berada di daerah sekitar Meksiko
bagian selatan dan Nicaragua. Menurut Kalie (1999), dalam sistematika
(taksonomi) tumbuhan pepaya diklasifikasikan sebagai berikut:
Kingdom : Plantae (tumbuh-tumbuhan)
Divisi : Spermatophyta (tumbuhan berbiji)
Sub-divisi : Angiospermae (berbiji tertutup)
Kelas : Dicotyledonae (biji berkeping dua)
Ordo : Caricales
Famili : Caricaceae
Genus : Carica
Spesies : Carica papaya L.
Famili Caricaceae termasuk famili kecil dari tanaman dikotiledon. Genus
Carica adalah genus paling penting dalam famili Caricaceae yang terdiri atas 24
spesies, dan salah satunya adalah Carica papaya L. (Kalie,1999).
Tinggi pohon pepaya dapat mencapai delapan sampai sepuluh meter
dengan akar yang kuat dan batang tidak bercabang. Namun, cabang dapat
dibentuk dengan melakukan pemotongan pada pucuk. Batang tanaman berbentuk
bulat lurus berbuku-buku, berongga di bagian tengahnya, dan tidak berkayu. Daun
pepaya tersusun secara melingkar pada batang, lembar daunnya menjari dengan
warna permukaan atas berwarna hijau muda. Pepaya memiliki tiga jenis bunga,
yaitu bunga jantan (masculus), bunga betina (femineus), dan bunga sempurna atau
hermaprodit (Rukmana, 1995).
 Tanaman pepaya dapat tumbuh di dataran rendah hingga ketinggian seribu
meter di atas permukaan air laut dan pada umumnya tumbuh di lokasi yang cukup
tersedia air, curah hujan 1000-2000 mm per tahun dan merata sepanjang tahun.
Suhu optimal pertumbuhan tanaman berkisar antara 22-26oC, suhu minimum
15oC, dan suhu maksimum 43oC (Kalie,1999).

Gambar 7. Tanaman Pepaya (Carica papaya L.)

(Feedipedia, 2012)

Daun pepaya mengandung alkaloid karpainin, karpain, pseudokarpain,

vitamin C dan E, kolin, dan karposid. Daun pepaya juga mengandung mineral
seperti kalium, kalsium, magnesium, tembaga, zat besi, zink, dan mangan. Selain
itu, daun pepaya mengandung senyawa karikaksantin, violaksantin, papain,
saponin, flavonoid, dan tanin (Milind dan Gurdita, 2011).
Ekstrak daun pepaya memiliki potensi sebagai antioksidan (Fitria et al.,
2013). Aktivitas ini diduga berasal dari metabolit sekunder seperti senyawa
alkaloid yang dominan memberi rasa pahit. Oleh karena kandungan metabolit
yang dapat dihasilkan oleh pepaya, maka tumbuhan ini dapat digunakan sebagai
salah satu sumber antioksidan eksogen bagi tubuh manusia (Andi, 2014).
Antioksidan adalah senyawa yang dapat secara signifikan mencegah atau
menunda proses oksidasi senyawa lain yang mudah teroksidasi walaupun dengan
konsentrasi rendah (Mandal et al., 2009). Antioksidan memberikan perlindungan
terhadap kerusakan oksidatif yang menyebabkan penurunan fungsi kognitif pada
penuaan normal dan pada penyakit Alzheimer (Harrison, 2012).
 III. METODE PENELITIAN

3.1 Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian akan dilaksanakan dari bulan Desember 2018 sampai Maret 2019.
Pemeliharaan dan pemberian perlakuan hewan coba dilakukan di ruang
pemeliharaan hewan coba Program Studi Biologi FMIPA Universitas Udayana.
Pembuatan ekstrak daun pepaya dilakukan di Laboratorium Biokimia dan
Laboratorium Sumberdaya Genetika dan Biologi Molekuler Program Studi
Biologi FMIPA Universitas Udayana. Pembedahan, penimbangan bobot
cerebrum, dan pembuatan preparat sayatan histologi hipokampus dan korteks
serebri dilakukan di Laboratorium Patologi Balai Besar Veteriner Denpasar-Bali.
Pengamatan preparat dilakukan di Laboratorium Struktur dan Perkembangan
Hewan Program Studi Biologi Universitas Udayana.

3.2 Cara Kerja

3.2.1 Pembuatan Ekstrak Daun Pepaya

Daun pepaya dipotong kecil-kecil dan dikeringanginkan. Selanjutnya daun

pepaya dihaluskan hingga menjadi serbuk dan ditimbang. Serbuk kemudian
dimasukkan ke dalam wadah dan dilakukan proses maserasi. Proses maserasi
dilakukan dengan cara memasukkan etanol 70% ke dalam wadah berisi serbuk
daun sebanyak 10 kali lipat dari berat serbuk (dalam mL), kemudian wadah
ditutup rapat dan disimpan di tempat gelap selama sekitar 3-7 hari. Kemudian
ekstrak disaring dan dimasukkan ke dalam botol. Selanjutnya ekstrak dievaporasi
sehingga didapatkan hasil ekstrak kasar.

3.2.2 Pembuatan Larutan Trimetiltin (TMT)

Larutan TMT dosis 1,2 mg/kg bb dibuat dengan cara 0,0048 mg TMT
dilarutkan dalam 10 ml minyak jagung. Dosis dan prosedur pembuatan larutan
TMT diperoleh berdasarkan penelitian Aspamufita dan Yuliani (2013).
3.2.3 Penentuan Jumlah dan Aklimatisasi Hewan Coba

Mencit dikelompokkan berdasarkan jumlah perlakuan yaitu terdapat lima

perlakuan dengan masing-masing ulangan sebanyak lima ekor. Menurut Shaw et
al., (2002), banyaknya ulangan ditentukan dengan rumus sebagai berikut:

(t-1) (r-1) ≥ 15

Keterangan :
t = treatment/perlakuan
r = replikasi/ulangan
Berdasarkan perhitungan tersebut diperoleh r ≥ 5 sehingga total jumlah
mencit yang digunakan adalah sebanyak 25 ekor yang terdiri dari 5 perlakuan
dengan 5 pengulangan.
Mencit yang digunakan merupakan mencit jantan yang masih sehat
dengan berat badan berkisar antara 20 g - 30 g. Sebelum diberikan perlakuan,
mencit jantan diaklimatisasi dan diadaptasi selama 7 hari di ruang pemeliharaan.
Kandang untuk pemeliharaan yaitu bak plastik berukuran 33x25x14 cm yang
ditutup dengan anyaman kawat pada bagian atasnya. Kandang tersebut dialasi
sekam kulit padi yang berfungsi untuk menyerap urin mencit. Mencit diberi pakan
standar berupa konsentrat CP 551 serta air minum secara ad libitum.

3.2.4 Pemberian Perlakuan

Pemberian TMT dilakukan sekali setelah aklimatisasi. Untuk satu ekor

mencit diberikan TMT dengan dosis 1,2 mg/kg bb yang dilarutkan ke dalam 0,5
ml minyak jagung. Pemberian TMT dengan cara injeksi melalui intraperitoneal
(Kristianingrum dkk., 2016).
Pemberian ekstrak daun pepaya pada mencit dilakukan melalui oral
menggunakan sonde (spuit yang ujung jarumnya telah ditumpulkan) sesuai
dengan metode gavage. Perlakuan ekstrak daun pepaya dilarutkan dengan natrium
karboksil metil selulosa (Na-CMC) 0,5% sebanyak 0,5 ml/ekor/hari. Ekstrak daun
pepaya diberikan ke mencit mulai hari ke-3 setelah induksi TMT sampai hari ke
28. Penentuan waktu dan dosis pemberian ekstrak daun pepaya ini diperoleh
berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Hassan et al., (2015) dan Utama
(2017).
Mencit akan dibedah pada hari ke-29 untuk diambil organ otaknya. Setelah
diambil, organ tersebut dicuci terlebih dahulu dengan larutan NaCl 0,9% untuk
menghilangkan sisa darah yang terdapat pada organ. Organ kemudian dikeringkan
dengan kertas saring dan ditimbang dengan timbangan analitik. Selanjutnya organ
dimasukkan ke dalam botol kecil yang berisi larutan NBF (Neutral Buffer
Formalin) 10% untuk diawetkan dan dipertahankan bentuk organ sebelum
dilakukan preparasi sayatan histologi (Nofantri dkk., 2017).

3.2.5 Preparasi Sayatan Histologi

Preparasi sayatan histologi hipokampus dan korteks serebri mencit

menggunakan metode parafin dengan pewarnaan Hematoksilin dan Eosin dengan
tahapan-tahapan sebagai berikut (Peters, 2003):

a. Pemotongan Sampel

Pemotongan sampel atau trimming organ otak dilakukan dengan scapel

yang tajam. Organ dipegang dengan pinset dan dipotong pada posisi tegak lurus.
Organ dipotong secara melintang sedemikian rupa sehingga bagian hipokampus
dan korteks serebri yang dicari didapatkan. Selanjutnya potongan otak
dimasukkan ke dalam embedding cassete.

b. Proses Dehidrasi, Clearing (penjernihan), dan Infiltrasi Parafin

Potongan otak yang telah dimasukkan ke dalam embedding cassete

selanjutnya dimasukkan ke dalam Tissue Processor. Alat ini memiliki 10 wadah
berbentuk tabung berisi beberapa larutan secara berurutan yaitu buffer formalin
10% I, buffer formalin 10% II, alkohol 70%, alkohol 95%, alkohol absolut I,
alkohol absolut II, toluol I, toluol II, parafin I, parafin II. Organ dicelupkan ke
dalam masing-masing tabung berisi larutan selama 2 jam dan akan berpindah ke
tabung larutan berikutnya secara otomatis.
c. Penanaman Organ (Embedding)

Proses ini menggunakan alat yang disebut Tissue TEK. Plug Tissue TEK
dimasukkan ke dalam stop kontak listrik. Kemudian ditekan tombol power lalu
tombol exit dan ditunggu hingga pada layar digital tertera tulisan “warming up”
dan tombol cryo untuk menyalakan pendingin. Suhu pada alat Tissue TEK diatur
pada suhu 65˚C dan cryo dengan suhu -5˚C lalu ditunggu beberapa menit hingga
pada layar tertera tulisan “ready”. Organ diletakkan melintang diatas cetakan
keping L (Leukhart) lalu dituangkan parafin hingga menutupi seluruh organ. Blok
parafin dibiarkan dingin dan diletakkan di atas mesin pendingin cryo.

d. Pemotongan (Sectioning)

Proses pemotongan (sectioning) menggunakan mikrotom. Pertama

ketebalan pengirisan diatur dengan ukuran 5 µm. Blok parafin diletakkan pada
bagian holder. Pemotongan pertama digunakan pisau kasar terlebih dahulu
kemudian diganti dengan pisau pemotongan halus. Tuas pada mikrotom diputar
searah jarum jam hingga didapatkan pita irisan yang tipis. Satu lembar pita irisan
yang terbaik diambil dan dimasukkan secara perlahan dan hati-hati ke dalam
waterbath. Pita irisan dibiarkan beberapa saat kemudian diambil dengan
menggunakan gelas benda lalu disimpan dalam inkubator selama 30 menit pada
suhu 46 ˚C.

e. Pewarnaan

Preparat disusun rapi di dalam wadah kemudian direndam ke dalam

larutan xylol I selama 5 menit. Setelah 5 menit preparat dipindahkan ke larutan
xylol II, xylol III, alkohol 100% I, dan alkohol 100% II masing-masing selama 5
menit. Preparat kemudian dimasukkan ke dalam larutan aquades selama 1 menit
lalu direndam ke dalam pewarna Harris-Hematoksilin selama 15 menit. Setelah
pewarnaan, preparat dicelupkan ke dalam acid alkohol sebanyak 5-7 celupan,
kemudian ke dalam aquades I dan II masing-masing selama 1 menit dan 15 menit.
Selanjutnya dimasukkan ke dalam Eosin selama 2 menit. Selanjutnya dilakukan
tahap dealkoholisasi dengan memasukkan ke dalam alkohol 96% I, alkohol 96%,
alkohol 100% I, dan alkohol 100% II masing-masing selama 3 menit dan ke
dalam xylol I dan II masing-masing selama 5 menit. Preparat kemudian
dikeringanginkan beberapa menit.

f. Penempelan (Mounting)

Proses ini juga disebut dengan proses ‘covering’. Preparat ditetesi dengan
permount secukupnya menggunakan pipet tetes lalu ditutup menggunakan gelas
penutup. Saat penutupan diusakan agar tidak ada gelembung udara.

3.2.6 Pengamatan Histologi

Pengamatan preparat histologi hipokampus dan korteks serebri mencit

dilakukan di Laboratorium Struktur hewan Program Studi Biologi Universitas
Udayana menggunakan beberapa sarana seperti mikroskop, aplikasi Image Raster,
dan OptiLab. Gambaran histologi hipokampus dan korteks serebri diamati dengan
metode lapang pandang untuk mempermudah perolehan data. Tiap preparat pada
setiap perlakuan diamati sebanyak 5 lapang pandang. Setiap lapang pandang
dihitung jumlah sel neuroglia dan sel piramidal yang mengalami nekrosis atau
kematian.

3.3 Variabel Penelitian

Variabel yang terdapat dalam penelitian ini yaitu variabel bebas, variabel
terikat, dan variabel kontrol. Variabel bebas dalam penelitian ini adalah dosis
ekstrak daun pepaya yang digunakan yaitu 500 mg/kg, 1000 mg/kg, dan 2000
mg/kg berat badan. Variabel terikat adalah variabel yang muncul akibat perlakuan
yang diberikan. Variabel terikat dalam penelitian ini adalah bobot cerebrum,
nekrosis sel neuroglia dan sel piramidal pada histologi hipokampus, serta nekrosis
sel neuroglia dan nekrosis sel piramidal pada histologi korteks serebri. Variabel
kontrol meliputi jenis kelamin hewan coba, kesehatan fisik hewan coba,
pemeliharaan dan perawatan hewan coba, serta dosis Trimetiltin.

3.4 Rancangan penelitian

Penelitian ini adalah penelitian eksperimental menggunakan Rancangan

Acak Lengkap (RAL) dengan lima perlakuan yang terdiri dari satu kontrol positif
(diinduksi TMT tanpa pemberian ekstrak), satu kontrol negatif (tanpa induksi
TMT dan pemberian ekstrak), dan tiga perlakuan yang diberi perlakuan ekstrak
daun pepaya. Masing-masing perlakuan dilakukan 5 kali pengulangan (5 mencit).
Semua perlakuan diinduksi TMT sebesar 1,2 mg/kg berat badan kecuali kontrol
negatif (K-) yang hanya diberikan pakan dan air secara ad libitum. Kontrol positif
(K+) diinduksi TMT tanpa pemberian ekstrak. Perlakuan pertama (P1) dosis
ekstrak daun pepaya sebesar 500 mg/kg, perlakuan kedua (P2) sebesar 1000
mg/kg, dan perlakuan ketiga (P3) sebesar 2000 mg/kg berat badan.

3.5 Metode Pengolahan Data

Data histologi hipokampus dan korteks serebri yang diperoleh dari

penelitian ini dianalisis secara statistik menggunakan One Way Anova. Apabila
berbeda nyata, maka akan dilanjutkan dengan uji post-hoc Duncan. Data dianalisis
dengan uji statistik menggunakan aplikasi SPSS versi 22 (Ramadhani dkk., 2017).
 3.6 Jadwal Penelitian

Jadwal penelitian yang dilakukan peneliti dapat diuraikan pada tabel

berikut ini.
Tabel 1. Matriks Rencana Kegiatan Penelitian

Waktu
No Kegiatan 6 7 8 9 10 11 12 1 2 3 4 5
1. Studi Pustaka V V
Pembuatan Usulan
2.
Penelitian (UP) V V V V V
3. Seminar UP V
4. Penelitian V V V V
5. Pengolahan Data V V
6. Penulisan Skripsi V V
7. Seminar Hasil Penelitian V
8. Ujian Skripsi V
Keterangan: angka menunjukkan bulan
 DAFTAR PUSTAKA

Aboitiz, F., D. Morales dan J. Montiel. 2003. The evolutionary origin of the
mammalian isocortex: Towards an integrated developmental and
functional approach. Behavioral and Brain Sciences. 26 (5): 535–52.

Amaliawati, D. 2015. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Pepaya (Carica

Papaya (L). Var Kalina) Dengan Perlakuan Tanah Lempung. Institut
Pertanian Bogor. (Skripsi). Belum dipublikasikan.

Andi. 2014. Uji Efektivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Pepaya (Carica
papaya L.) Pada Sediaan Krim Terhadap DPPH (1,1-diphenyl-2-
picrylhydrazil). Universitas Tanjungpura. (Skripsi). Sudah dipublikasikan.

Arjadi, F., S. K. Soejono., L. S. Maurits dan M. Pangestu. 2014. Jumlah Sel

Piramidal CA3 Hipokampus Tikus Putih Jantan pada Berbagai Model
Stres Kerja Kronik. MKB. 46(4): 197-202.

Aspamufita, N. dan S. Yuliani. 2013. Efek Ekstrak Etanol Rimpang Temulawak

(Curcuma xanthorrhiza Roxb) Terhadap Memori Spasial Tikus Model
Demensia Yang Diinduksi Trimethyltin. Parmaciana. 3(2): 57-62.

A'yun, Q. dan A. N. Laily. 2015. Analisis Fitokimia Daun Pepaya (Carica papaya
L.) Di Balai Penelitian Tanaman Aneka Kacang dan Umbi, Kendalpayak,
Malang. Seminar Nasional Konservasi dan Pemanfaatan Sumber Daya
Alam 2015. UIN Malik Ibrahim. Malang.

Campbell, N. A., J. B. Reece dan L. G. Mitchell. 1999. Biologi Jilid 2, Edisi ke-2.
Erlangga. Jakarta.

Chertkow, H., H. H. Feldman., C. Jacova dan F. Massoud. 2013. Definitions of

dementia and predementia states in Alzheimer’s disease and vascular
cognitive impairment: consensus from the Canadian conference on
diagnosis of dementia. Alzheimer’s Research & Therapy. 5(1): S2. 1-8.

Cunningham, EL., Mc. B. Guinness., B. Herron dan A. P. Passmore. 2015.

Dementia. The Ulster Medical Journal. 84(2): 79-87.

Dementia helpsheet. 2017. Apa itu demensia. Tersedia dalam:

https://www.dementia.org.au/files/helpsheets/Helpsheet-
AboutDementia01-WhatIsDementia_indonesian.pdf (Diakses pada tanggal
10 Oktober 2018).

Ellis, H. 2006. Clinical Anatomy: Applied Anatomy for Student & Junior Doctors.
11th edition. Blackwell Publishing. USA.
Eroschenko, V. P. 2003. Atlas Histologi di Fiore dengan Korelasi Fungsional
Edisi 9. EGC. Jakarta.

Fawcett, D.W. 2002. Buku Ajar Histologi Edisi 12. EGC. Jakarta.

Feedipedia. 2012. Papaya (Carica papaya) fruits, leaves and by-products.

Tersedia dalam: https://www.feedipedia.org/node/522 (Diakses pada
tanggal 29 September 2018).

Fitria, N. A., N. C. Sidi., R. K. Safitri., A. N. Hasanah dan T. Risni. 2013. Tempe

Daun Pepaya Sebagai Alternatif Terapi Untuk Penderita Kanker. Jurnal
Teknosains Pangan. 2(4): 3-11.

Gasparova, Z., V. Stara., P. Janega dan E. Ujhazy. 2014. Pyridoindole

antioxidant-induced preservation of rat hippocampal pyramidal cell
number linked with reduction of oxidative stress yet without influence on
cognitive deterioration in Alzheimer-like neurodegeneration. Neuro
endocrinology letters. 35(6): 454-462.

Geloso, M. C., V. Corvino dan F. Michetti. 2011. Trimethyltin-induced

hippocampal degeneration as a tool to investigate neurodegenerative
processes. Neurochem Int. 58(7): 729-738.

Ghosh, S. 2018. Trimethyltin chloride. Tersedia dalam: https://alchetron.com/

Trimethyltin-chloride (Diakses pada tanggal 2 Oktober 2018).

Hales J. B. dan J. B. Brewer. 2010. Activity in the hippocampus and neocortical

working memory regions predicts successful associative memory for
temporally discontiguous events. Neuropsychologia. 48: 3351–3359

Halim, H. D. P. dan N. Ibrahim. 2013. Efek Neuroprotektif Ekstrak Akar

Acalypha indica 500 mg/kgBB Terhadap Perubahan Inti Sel Saraf
Hipokampus Pascahipoksia Serebri. eJournal Kedokteran Indonesia. 1(2):
113-117

Harrison, F. E. 2012. A critical review of vitamin C for the prevention of age-

related cognitive decline and Alzheimer’s disease. J Alzheimers Dis.
29(4): 711–726.

Hassan, A. I., M. A. M. Ghoneim dan R. Y. M. Ibrahim. 2015. Therapeutic role of

glucogalactan polysaccharide extracted from Agaricus bisporus on
trimethyltin chloride induced neuropathy in rats. African Journal of
Biotechnology. 14(24): 2052-2065.
Hetty, A. K. dan S. A. P. Dwiastuti. 2017. Histologi dan Anatomi Fisiologi
Manusia. Pusat Pendidikan Sumberdaya Manusia Badan Pengembangan
dan Pemberdayaan Sumberdaya Manusia Kesehatan (Kementerian
Kesehatan Republik Indonesia). Jakarta.

Hospital Authority. 2016. Demensia. Tersedia dalam:

https://www21.ha.org.hk/smartpatient/EM/MediaLibraries/EM/EMMedia/
Dementia-Indonesian.pdf?ext=.pdf (Diakses pada tanggal 22 September
2018)

Huerta P. T. dan J. E. Lisman. 1993. Heightened synaptic plasticity of

hippocampal CA1 neurons during a cholinergically induced rhythmic
state. Nature. 364 (6439): 723–725.

Huong, N. Q., Y. Nakamura., N. Kuramoto dan K. Ogita. 2011. Indomethacin

Ameliorates Trimethyltin-Induced Neuronal Damage in Vivo by
Attenuating Oxidative Stress in the Dentate Gyrus of Mice. Biological and
Pharmaceutical Bulletin. 34(12): 1856-1863.

Jackson, J. C., A. Johnson dan A. D. Redish. 2006. Hippocampal sharp waves

and reactivation during awake states depend on repeated sequential
experience. Journal Neurosci. 26 (48): 12415–26.

Juárez-Rojop, I. E., J. C. Díaz-Zagoya., J. L. Ble-Castillo., P. H. Miranda-Osorio.,

A. E. Castell-Rodríguez., C. A. Tovilla-Zárate., A. Rodríguez-Hernández.,
H. Aguilar-Mariscal., T. Ramón-Frías dan D. Y. Bermúdez-Ocaña. 2012.
Hypoglycemic effect of Carica papaya leaves in streptozotocin-induced
diabetic rats. BMC Complementary and Alternative Medicine. 12:236.

Junqueira, L. C., J. Carneiro dan R. O. Kelly. 1988. Histologi Dasar. Alih Bahasa
Jan Tambayong. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta.

Junqueira, L. C dan J. Carneiro. 2003. Basic Histology. Tenth Edition. McGraw-

Hill. New York.

Juwono, T. 1996. Pemeriksaan Klinik dan Neurologi dalam Praktik. EGC.

Jakarta.

Jusuf, A. A. dan R. D. Antarianto. 2009. Catatan Kuliah Aspek Histologis Dalam

Neurosains. Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Jakarta.

Kalie, M. 1999. Bertanam Pepaya. Penebar Swadaya. Jakarta.

Kandel, E. R., J.H. Schwartz dan T. M. Jessel. 2000. Nerve cells and behavior:
Principles of Neural Science. McGraw-Hill Professional. New York.
Kevin, T. 2010. Uji Toksisitas Akut Monocrotophos Dosis Bertingkat per Oral
Dilihat dari Gambaran Histopatologis Otak Besar Mencit Balb/c. Laporan
Akhir Karya Tulis Ilmiah tidak diterbitkan. Fakultas Kedokteran
Universitas Diponegoro. Semarang.

Kovendan, K., K. Murugan., C. Panneerselvam., N. Aarthi1., P. M. Kumar., J.

Subramaniam., D. Amerasan., K. Kalimuthu dan S. Vincent. 2012.
Antimalarial activity of Carica papaya (Family: Caricaceae) leaf extract
against Plasmodium falciparum. Asian Pacific Journal of Tropical
Disease. (2012): S306-S311

Kristianingrum, Y. K., S. Widyarini., Kurniasih., B. Sutrisno., C. R. Tabbu dan

Sugiyono. 2016. Gambaran Histopatologi Otak Tikus Akibat Injeksi
Trimetyltin sebagai Model Penyakit Alzheimer. Jurnal Sain Veteriner.
34(1): 84-91.

Kumar, A., S. Dogra dan A. Prakash. 2009. Neuroprotective Effects of Centella

asiatica against Intracerebroventricular Colchicine-Induced Cognitive
Impairment and Oxidative Stress. International Journal of Alzheimer’s
Disease. Vol.2009: 1-8

Maisarah, A. M., N. A. Buslima., A. Rahmat dan F. Othman. 2012. Antioxidant

analysis of different parts of Carica papaya. International Food Research
Journal. 20(3): 1043-1048.

Mandal, S., S. Yadav., R. K. Nema dan S. Yadav. 2009. Antioxidant: A Review.

Journal of Chemical and Pharmaceutical Research. 1(1): 102-104.

Milind, P. dan Gurditta. 2011. Basketful Benefits of Papaya. IRJP. 2(7): 6-12.

National Library of Medicine, 2009. Trimethyltin chloride. Tersedia dalam:

https://toxnet.nlm.nih.gov/cgi-bin/sis/search/a?dbs+hsdb:@term+@DOCN
O+6413 (Diakses pada tanggal 1 Oktober 2018).

Nofantri, L., I. K. Berata dan A. A. A. M. Adi. 2017. Studi Histopatologi Limpa

dan Otak Ayam Terinfeksi Penyakit Tetelo. Indonesia Medicus Veterinus.
6(5): 417-427.

Otsuki, N., N. H. Dang., E. Kumagai., A. Kondo., S. Iwata dan C. Morimoto.

2010. Aqueous extract of Carica papaya leaves exhibits anti-tumor
activity and immunomodulatory effects. Journal of Ethnopharmacology.
127(2010): 760–767.

Perretta, G., F. R. Righi dan S. Gozzo. 1993. Neuropathological and behavioral

toxicology of trimethyltin exposure. Annali dell'Istituto superiore di
sanita. 29(1): 167-174
Peters. S. R. 2003. The Art of Embeding Tissue for Frozen Section. Journal of
Histotechnology. 26(1): 11-19.

Prasetya, D. K. dan S. Yuliani. 2014. Aktivitas Ekstrak Rimpang Temulawak

(Curcuma Xanthorrhiza Roxb.) Pada Radial Arm Maze Dan Pasive
Avoidance Test Tikus Model Demensia. Pharmaҫiana. 4(2): 157-164.

Ramadhani, S. A., I. Supriatna, N. W. K. Karja dan A. Winarto. 2017.

Pengendalian Folikulogenesis Ovarium dengan Pemberian Ekstrak Biji
Kapas. Jurnal Sain Veteriner. 35(1): 71-80.

Rukmana, R. 1995. Pepaya Budidaya dan Pasca Panen. Kanisius. Yogyakarta.

Safwan., S. Yuliani dan S. Pramono. 2014. Uji Aktivitas Minyak Atsiri Rimpang
Kunyit (Curcuma Longa Linn) Pada Tikus Sprague Dawley Model
Demensia. (Kajian Penghambat Aktivitas Asetilkolinesterase). Kartika
Jurnal Ilmiah Farmasi. 2 (2): 20-26.

Savla, P., G. Das., P. Mondal., R. L. Gajbhiye., P. Jaisankar dan S. Ghosh. 2017.

Methanolic Extract of Papaya Leaves Shows Neuroprotective Effect.
ChemistrySelect 2017. (2): 9454–9457.

Setiawati, A., H. Immanuel dan M. T. Utami. 2016. The inhibition of Typhonium

flagelliforme Lodd. Blume leaf extract on COX-2 expression of WiDr
colon cancer cells. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine. 6(3):
251-255

Shaw, R., M. F. W. Festing., I. Peers dan L. Furlong. 2002. The Use of Factorial
Designs to Ptimize Animal Experiments and Reduce Animal Use. Institute
for Laboratory Animal Research Journal. 43: 223-232.
Shuto, M., K. Seko., N. Kuramoto., C. Sugiyama., K. Kawada., M. Yoneyama., R.
Nagashima dan K. Ogita. 2009. Activation of c-Jun N-Terminal Kinase
Cascades Is Involved in Part of the Neuronal Degeneration Induced by
Trimethyltin in Cortical Neurons of Mice. Journal of Pharmacological
Sciences. 109: 60–70.

Stevens, A., J. Lowe dan I. Scott. 2008. Core Pathology Third Edition. Mosby
Elsevier. Missouri.

Suriastini, N. W., Y. Turana., F. Witoelar., B. Supraptilah., T. Y. Wicaksono., dan

E. Dwi. 2016. Angka Prevalensi Demensia: Perlu Perhatian Kita Semua.
Policy Brief Maret 2016. SurveyMeter. Yogyakarta.

Tang, X., X. Wu., A. M. Dubois., G. Sui., B. Wu., G. Lai., Z. Gong., H. Gao., S.

Liu., Z. Zhong., Z. Lin., J. Olson dan X. Ren. 2013. Toxicity of
 Trimethyltin and Dimethyltin in Rats and Mice. Buletin of Environmental
Contamination and Toxicology. 5(90): 626-633.

Touretzky, D. S. 2015. Anatomy of the Hipocampus : Computational Models of

Neural Systems. Tersedia dalam: https://www.cs.cmu.edu/afs/cs/academic/
class/ 15883-f15/slides/hc-anatomy.pdf (Diakses pada tanggal 20 Oktober
2018).

Turana, Y. 2013. Simulasi Otak pada Kelompok Lansia di Komunitas. Buletin

Jendela Data dan Informasi Kesehatan. Hal. 19-24.

Utama, S. Y. A. 2017. Pengaruh Pemberian Ekstrak Daun Pepaya (Carica papaya

L.) Terhadap Peningkatan Jumlah dan Aktivitas Trombosit pada Mencit
dengan Trombositopenia. Universitas Airlangga. (Tesis). Belum
dipublikasikan.

Van-Marum, R. J. 2008. Current and future therapy in Alzheimer’s disease.

Fundamental & Clinical Pharmacology. 22: 265–274.

Wibowo, D. S. 2011. Neuroanatomi untuk Mahasiswa Kedokteran. Banyumedia

Publishing. Malang.

World Alzheimer Report. 2018. The state of the art of dementia research: New
frontiers. Alzheimer’s Disease International. London.

World Health Organization (WHO). 2017. Dementia : Key facts. Tersedia dalam:
http://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/dementia (Diakses pada
tanggal 24 Oktober 2018).

Yatim, W. 1990. Histologi. Tarsito. Bandung.

Yogiraj, V., P. K. Goyal., C. S. Chauhan., A. Goyal dan B. Vyas. 2014. Carica

papaya Linn: An Overview. IJ of Herbal Medicine. 2(5): 01-08.
 LAMPIRAN

 Ekstrak Daun Pepaya

Pelarut yang digunakan untuk membuat ekstrak daun papaya adalah Na-CMC
0,5% (natrium karboksimetilselulosa) dengan konsentrasi 0,5%. Larutan Na-CMC
0,5% dibuat dengan memasukkan 0,5 g Na-CMC kedalam 100 ml akuades.
Pemberian larutan suspensi dosis = 0,5 ml/ekor/hari
Jumlah mencit per kelompok perlakuan = 5 ekor
Lama pemberian = 25 hari
0,5 ml x 5 ekor tikus x 25 hari = 62,5 ml Na-CMC 0,5%
Sehingga banyak suspensi yang dibutuhkan pada masing-masing kelompok
perlakuan adalah 62,5 ml Na-CMC 0,5%
Berat Badan (BB) mencit = 20 g
Dosis Ekstrak = 500 mg/kg bb (setara dengan 0,5 mg/g bb)
Larutan = 0,5 ml/ekor/hari
Maka ekstrak yang dibutuhkan untuk 1 ekor mencit per hari dosis 500 mg/kg bb:
0,5 mg/g bb x 20 g = 10 mg
Pembuatan stok dosis 500 mg/kg bb:
10 mg x 5 ekor x 25 hari perlakuan = 1250 mg = 1,25 g ekstrak (Dosis 1), Dosis 2
(2,5 g), Dosis 3 (5 g)

 Larutan TMT
Pelarut yang digunakan adalah minyak jagung
Pemberian larutan suspensi dosis = 0,5 ml/ekor/hari
Jumlah mencit yang diberikan TMT = 20 ekor
Lama pemberian = 1 hari
0,5 ml x 20 ekor tikus x 1 hari = 10 ml minyak jagung
Sehingga banyak ml minyak jagung yang dibutuhkan pada penelitian ini adalah
10 ml
Berat Badan (BB) mencit = 20 g
Dosis TMT = 1,2 mg/kg bb = 0,0012 mg/g bb
Larutan = 0,5 ml/ekor/hari
Maka TMT yang dibutuhkan untuk 1 ekor mencit per hari:
0,0012 mg/g bb x 20 g = 0,0024 mg
Pembuatan stok dosis TMT :
0,0024 mg x 20 ekor x 1 hari perlakuan = 0,0048 mg TMT