Makalah Kimia Medisinal

Hubungan Aktivitas Turunan Tokoferol Terhadap Mekanisme Non-

Antioksidan dalam Potensi Antiprion

Disusun Oleh:

Aulia Yulfa Brilian M0615006

Ranita Kumalasari Susanto M0615037
Shabrina Azmatun Nadhilah M0615042
Umi Hanik Pujiastuti M0615044
Wening Pratitis M0615048

S1 FARMASI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS SEBELAS MARET
SURAKARTA
2017
 KATA PENGANTAR

Segala puji kami panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa karena berkat rahmat
dan karunia-Nya, kami dapat menyelesaikan tugas makalah yang berjudul “Hubungan
Aktivitas Turunan Tokoferol Terhadap Mekanisme Non-Antioksidan dalam Potensi
Antiprion”. Makalah ini dibuat dalam rangka memenuhi nilai tugas mata kuliah Kimia
Medisinal dan untuk menambah pengetahuan mahasiswa terhadap pengembangan obat.
Kami sangat berharap makalah ini dapat berguna dalam menambah wawasan serta
pengetahuan bagi mahasiswa Farmasi UNS pada khususnya dan mahasiswa seluruh
Indonesia pada umumnya. Kami juga menyadari sepenuhnya bahwa di dalam tugas ini
terdapat kekurangan-kekurangan dan jauh dari kesempurnaan. Untuk itu kami berharap
adanya kritik, saran dan usulan demi perbaikan di masa yang akan datang. Semoga
makalah sederhana ini dapat dipahami dan memberikan manfaat bagi pembaca.

Surakarta, 19 Mei 2017

Penyusun
 DAFTAR ISI

Kata Pengantar ............................................................................................. 2

BAB I Pendahuluan ..................................................................................... 4

A. Latar Belakang ...................................................................... 4

B. Rumusan Masalah ................................................................ 6
C. Tujuan .................................................................................. 6

BAB II Isi .................................................................................................. 7

A. Metodologi .......................................................................... 7
B. Pembahasan ......................................................................... 8

BAB III Penutup ........................................................................................ 14

A. Kesimpulan .......................................................................... 14
B. Saran ..................................................................................... 14
Daftar Pustaka ............................................................................................ 15
 BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Vitamin merupakan subtansi esensial untuk proses metabolisme normal dalam

tubuh. Vitamin E adalah salah satu vitamin yang larut dalam lemak dan berfungsi sebagai
antioksidan. Secara struktur kimiawi vitamin E memiliki 8 isomer, yaitu 8 8
dikelompokkan dalam 4 tokoferol (α, β, γ, δ) dan 4 tokotrienol (α, β, γ, δ) Tokoferol
adalah anggota senyawa alami dan sintetis, menjadi d-α-tocopherol atau vitamin E
anggota yang paling populer, dan secara khusus diserap dan diakumulasikan pada
manusia (Brigelius Flohe dan Treber, 1999). Suplemen vitamin E di alam yang terbanyak
adalah dalam bentuk α-tokoferol (Winarsi, 2007).

Vitamin E terdiri dari dua bagian senyawa, yang memiliki perbedaan

kejenuhan pada sisi rantai. Tokoferol memiliki rantai samping jenuh yang penuh,
sedangkan rantai samping tocotrienols berisi tiga ikatan rangkap. Empat yang paling
umum pada cincin homolog kromanol berbeda dalam metilasi pada dua lokasi pada cincin
kromanol. Meskipun semua anggota vitamin E terdapat sejumlah kesamaan, α-tocopherol
adalah satu-satunya yang dipertahankan oleh tubuh manusia dan digunakan oleh satu-
satunya reseptor vitamin E yang diketahui, yaitu ATTP (protein transport α-tocopheol),
yang bertanggung jawab untuk mengatur konsentrasi fisiologis tocopherol dan
tocotrienols (Marquardt dkk., 2013).

Tokoferol mengandung cincin aromatik tersubstitusi dan rantai panjang

isoprenoid sebgai rantai samping (Lehninger, 1982). Struktur kimia vitamin E terdiri atas
rantai samping gugus merupakan nucleus methylated 6 chromanol (3,4-dihydro – 2H -1-
benzopyran-6-ol ) kemudian 3 uit isoprenoid dan ikatan ester atau hidroksi bebas pada C-
6 dari nukleus chromanol ( Mustacich dkk, 2007).
 Molekul ini mengandung dua elemen struktur utama, kepala kromanol
(benzo dihidropi yang mengandung gugus alkohol), dan ekor phytyl yang terdiri dari
pengulangan unit isoprenoid jenuh. D-α-tocopherol memiliki fungsi antioksidan, dengan
mengais radikal peroksil, dan mampu melindungi lipid, hadir dalam fase lemak bahan
makanan, dan juga selaput sel hidup, dari oksidasi otomatis. Namun, seperti senyawa
lipofilik lainnya, d-α-tocopherol tidak larut dalam air dan sangat sensitif terhadap
berbagai faktor lingkungan, seperti cahaya, oksigen, alkali dan suhu (Teixeira dkk, 2017).

Sejak ditemukan pada tahun 1922, tokoferol dikaitkan dengan tindakan

menguntungkan. Efek bermanfaat tokoferol atau vitamin E, dikaitkan pada kondisi
degeneratif otak terutama untuk efek antioksidannya. Efek antioksidan dari tocopherol
telah terbukti dimediasi oleh penghambatan pemberian protein kinase C (PKC) (Muyrers
dkk., 2010). Senyawa α, β, γ, δ tokoferol memiliki kapasitas antioksidan yang sama.
Namun baru-baru ini telah diketahui bahwa beberapa efek dari tokoferol adalah karena
sifat non-antioksidan (Ricciarelli dkk., 2001).
B. Rumusan Masalah
1. Bagaimana hubungan aktivitas turunan tokoferol terhadap mekanisme non-
antioksidan dalam potensi antiprion?

C. Tujuan
1. Untuk mengetahui hubungan aktivitas turunan tokoferol terhadap mekanisme
antioksidan dalam potensi antiprion.
 BAB II

ISI

A. Metodologi

Turunan tokoferol, rapamycin dan penghambat pensinyalan dilarutkan menjadi

100% dimetil sulfoksida (DMSO) sebagai larutan stok dari 10mM, 10μM, 5mM, 5μM dan
25mM, , dan disimpan di aliquot beku di -20 ◦C. Untuk deteksi PrP di Western blots,
digunakan MAB W226. Antibodi Phospho-mTOR (Ser2448) antibodi # 2971, Phospho-
mTOR (Ser2481) # 2974, Phospho-p70, antibodi S6 Kinase (Thr389) (108D2) # 9234 dan
Phospho-p70 S6 antibodi Kinase (Thr421 / Ser424) # 9204.
Sel neuroblastoma tikus telah terinfeksi RML strain prawn scrapie tikus
disesuaikan dan subcloned. Sel scN2a dikultur dalam medium MEM yang mengandung
10% FCS, 2mM l-glutamin dan penisilin-streptomisin. Uji inhibisi PrPSc dengan turunan
tokopherol termasuk α-tokoferol suksinat dan rapamycin diilakukan persis seperti yang
dijelaskan sebelumnya . Secara singkat, disesuaikan setelah menentukan konsentrasi
protein protein lisat pada individu (BCA Protein Assay Kit, Pierce, Rockford, IL, USA).
Kemudian lisat dicerna pada suhu 37 ° C selama 30 menit dengan 20 g / mL proteinase K.
Reaksi diakhiri dengan 2mM fenilmetilulfonil fluorida (PMSF) sebelum disentrifugasi
pada suhu 4 ◦C selama 45 menit. Pada 100.000 x g di ultracentrifuge (Beckman Coulter,
Fullerton, CA, USA). Pelet didenaturasi dalam buffer 2 × Lämmli selama 5 menit di 99 ◦C.
Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamidegel-electrophoresis (SDS-PAGE) dan
immunoblotting dilakukan sesuai dengan teknik standar. Kuantifikasi konsentrasi
penghambatan dilakukan oleh densitometri (NIH ImageJ) dari empat bagian Barat dari
empat percobaan independen untuk setiap senyawa yang diuji. Semua percobaan dilakukan
minimal 4 kali.
Untuk bioassay infektivitas, sebanyak 10 cm dari sel tablet ScN2a diuji dengan
1μM quinacrine atau 10μM TS selama 1 minggu dengan pertukaran medium dan senyawa
setiap hari. Setelah 6 hari, pengujian dihentikan dan sel-sel dibagi 3 dengan splitting
mingguan. Sebelum pemisahan terakhir, dua pelat yang sama disejajarkan, satu diambil
untuk kontrol blot Barat, yang lain untuk menyiapkan inokulum: sel dihitung dan sel 2,5 ×
106 diindikasikan dan dilumasi ke dalam tabung; tabung ini kemudian dikenai lima
 pembekuan (nitrogen cair) dan pencairan (37 ◦C) siklus; selanjutnya, suspensi selanjutnya
dipecah oleh aspirasi melalui alat pengukur yang meningkat dalam semprit. Kemudian lisat
sel disuspensikan menjadi ca. 150μL dan dari kolam ini, 30μL diinokulasi secara
intraserebral ke dalam tikus indikator tga20. Langkah-langkah diambil untuk
meminimalkan rasa sakit atau ketidaknyamanan selama waktu antara inokulasi dan
perkembangan gejala scrapie. Tikus diamati terus menerus dan diperiksa setiap minggu
karakteristik gejala onset. Setelah stabil, pengujian tikus diakhiri dan kontrol WB untuk
PK-resistant PrPSc dilakukan untuk mengkonfirmasi diagnosis.

B. Pembahasan
 Pada jurnal ini diberitahukan tentang hubungan aktivitas struktur-antiprion yang
mengejutkan dari turunan tokoferol (lihat Tabel 1). α-Tokoferol menunjukkan aktivitas
antiprion yang dapat diandalkan dengan konsentrasi yang agak tinggi yaitu 300 μM
(konsentrasi efektif dimana 50% PrPSc dikurangi dengan Western blot dibandingkan
dengan kondisi yang tidak diobati [EC50]) sedangkan untuk β-tokoferol sebuah efek
antiprion tidak terdeteksi. Zat yang terkait γ– dan δ- tokoferol menunjukkan efek
antiprion pada EC50 79 ± 26 μM or 11 ± 1,3 μM. α-, β-, δ-, dan γ-tokoferol dilarutkan
sebagai larutan stok DMSO 100% sebelum menipiskannya ke dalam medium kultur sel
dilakukan pembaharuan medium 3 kali dalam waktu 1 minggu. Hebatnya, perubahan pola
metilasi cincin kroman tocopherol membuat perbedaan lipid 40 kali lipat antara aktivitas
antiprion antara α-, β-, δ-, dan γ-Tokoferol. Perbedaan aktivitas antiprion ini
menunjukkan bahwa efek antiprion tidak terkait dengan efek antioksidan karena α-, δ -,
dan γ-tokoferol memiliki potensi antioksidan yang sama.

Turunan turunan tokoferol α-tokoferol suksinat (TS) menunjukkan potensi

antiprion tertinggi dengan EC50 7 ± 1,2 μM, dan akhirnya dipilih untuk eksperimen
selanjutnya. Ketika diobati atau yang tidak diobati dengan TS sel-sel ScN2a
permukaannya akan berwarna ketika terjadi reaktivitas imun PrPP, tidak ada perbedaan
yang ditemukan yang menunjukkan bahwa pengobatan TS tidak menyebabkan penukaran
PrP atau internalisasi permukaan PrP (data tidak ditunjukkan). Karena kematian sel yang
disebabkan oleh TS hanya diamati pada konsentrasi> 25 μM, kita juga dapat
menghilangkan efek proapoptosis TS sebagai alasan aktivitas antiprionnya.

Efek antioksidan dari tocopherol tergantung pada ketersediaan gugus hidroksil

alkoholik pada posisi 6 cincin krom yang akhirnya teroksidasi. Namun, pada TS, apabila
gugus ini diesterifikasi dengan demikian TS akan kehilangan sifat antioksidan dengan
sendirinya. Sifat antioksidan dapat diperoleh kembali melalui hidrolisis ester untuk
menghasilkan α- tokoferol. Pada jurnal ini dikatakan bahwa efek antiprion dari tokoferol
bergantung pada struktur yang independen pada sifat antioksidannya karena dua alasan:

(1) Perbedaan aktivitas antiprion pada α-, β-, γ-, dan δ-tokoferol tidak terkait
dengan kemampuan antioksidan.
(2) α-tokoferol ester, α-tokoferol nikotinat dan α-tokoferol asetat tidak
menunjukkan potensi antiprion (Tabel 1),

Disimpulkan bahwa itu adalah seluruh senyawa TS dapat memberikan efek

antiprion daripada produk α-tokoferol terhidrolisis.
 Pada Gambar A digunakan lisat sel ScN2 dilakukan uji antagonis antiprion dengan
metode western blot antara Rapamicyn dan α tokoperol suksinat (TS) dengan konsentrasi
tertentu. Hasil yang diperoleh yaitu rapamicyn pada konsentrasi terendah yaitu 1nM
mampu memberikan efek antagonis antiprion yang lebih baik dibandingkan dengan TS
pada konsentrasi 10µM.
 Pada gambar B digunakan lisat sel ScN2 dilakukan uji antagonis antiprion dengan metode
western blot antara PKC inhibitor GF (GF) dan rapamicyn dengan konsentrasi tertentu.
Hasil yang diperoleh yaitu Rapamycin itu tidak dapat memberikan efek antagonis
antiprion terhadap GF's. Hal ini menunjukkan bahwa efek antiprion melalui inhibition
PKC tidak berpengaruh pada mTOR.
 Pada gambar C digunakan lisat sel ScN2 dilakukan uji antagonis antiprion dengan metode
western blot antara quinacrine (Q) dan Rapamicyn dengan konsentrasi tertentu. Hasil
yang diperoleh yaitu Rapamycin itu tidak dapat memberikan efek antagonis antiprion
terhadap quinacrine. Hal ini menunjukkan bahwa efek antiprion melalui quinacrine tidak
berpengaruh terhadap mTOR.
 Pada gambar D digunakan lisat sel ScN2 dilakukan uji antagonis antiprion dengan metode
western blot antara α tokoferol Suksinat (TS) dan wortmannin (WM) dengan konsentrasi
tertentu. Hasil yang diperoleh yaitu wortmannin tidak dapat memberikan efek antagonis
antiprion terhadap TS. Hal ini menunjukkan bahwa efek antiprion TS tidak dipengaruhi
oleh PI3K signaling.
Berdasarkan hasil diatas dapat diketahui bahwa Rapamicyn dengan α tokoperol suksinat
(TS) dapat memberikan efek antagonis antiprion yang lebih baik dibandingkan yang
lainnya dengan menggunakan metode western blot.

Dilakukan uji tersebut untuk mengetahui pengaruh dari beberapa inhibitor

intraseluler sinyal bisa mengantagonis efek antiprion α tokoperol suksinat (TS). Dari hasil
yang dapat diketahui hanya rapamycin,inhibitor atau mTOR signaling yang dapat
mengantagonis efek antiprion TS pada substokiometri, yaitu pada konsentrasi nM
Rapamicyn dapat mengantagonis efek antiprion TS (Gambar 1A). Tidak semua inhibitor
itu spesifik misalnya : signaling PD 98059 (ERK inhibisi), tyrphostin (sinyal EGF), dan
wortmannin (sinyal PI3; gambar. 1 D). ERK inhibition itu paling tidak efektif digunakan
dibandingkan dengan yang lainnya karena dalam jurnal ini hanya dilakukan uji dalam 6
hari,sedangkan ERK inhibition dilakukan dalam 17 hari. Wortmannin, merupakan
inhibitor poten phosphoinositide 3-siklin (PI3Ks) pada tingkat konsentrasi nM yang akan
menunjukkan efek antiprion. Fenretinide atau insulin dapat mengantagonis TS-induksi
efek antiprion.
Dari hasil dapat diketahui rapamycin's-TS dapat menetralisir efek yang
ditimbulkan, pada konsentrasi 1 nM cukup untuk menghambat mTOR. Inhibitor PKC
sinyal, GF109203 (bisindol maleimide) dapat menunjukkan Efek antiprion sendiri
(gambar. 1B). Hasil yang diperoleh sangat menarik karena tokoferol menunjukkan dapat
menghambat sinyal PKC. Efek antiprion PKC dapat menghambat GF109203, namun
tidak bisa diantagonis oleh rapamycin (gambar. 1B), hal ini menunjukkan bahwa efek
antiprion TS yang tidak cocok jika dimediasi dengan PKC. Dua senyawa poten lainnya
antiprion, quinacrine (gambar. 1 c) dan poten anti-PrP rekombinan antibodi fragmen juga
tidak bisa diantagonis oleh rapamycin. Hal ini menunjukkan bahwa yang efek antagonis
spesifik pada TS-mediasi memberikan efek antiprion. Rapamycin dapat menghambat
mammalian target of rapampicyn (mTOR), pusat regulator pertumbuhan sel, dan dapat
menyebabkan defosforilasi mTOR. Sementara TS tidak memiliki efek yang signifikan
pada fosforilasi maupun mTOR atau s6 kinase di sel scn2a.
Dalam paper ini, bioassay yang dilakukan dengan sel-sel ScN2a yang diberi TS.
Sel yang telah diobati dengan 10 MTS selama seminggu, dan dibiarkan tidak diobati
selama 3 minggu. Tidak ada PrP imunoreaktivitas muncul kembali pada leptate sel ScN2a
PK-dicerna. Sedangkan sel diobati dengan zat kontrol Quinacrine dalam kondisi yang
sama menunjukkan pembersihan prion yang lengkap, pada gambar B. Percobaan ini
menunjukkan bahwa potensi antiprion absolut TS lebih lemah dari pada Kuinakrin
dengan dosis maksimal. Protein kinase C inhibition sama-sama menyebabkan terjadinya
penurunan PrPSc. Hasil yang ditunjukkan mekanisme efek non-antioksidan dari TS di
luarnya PKC melibatkan komponen jalur pensinyalan mTOR. Lebih lanjut

Eksperimen tetap dilakukan untuk menggambarkan spesifiknya Target seluler

mTOR membantu replikasi prion; potensi sasaran sinyal mTOR beragam dan melibatkan
proses seperti sintesis protein, transkripsi, autophagy, aktin dan biogenesis ribosom. Dari
paper ini juga ditunjukkan bahwa TS bertindak sebagai konformasi protein.
 Untuk tocopherol atau vitamin E, hampir tidak ada efek samping atau intoksikasi
sehingga cocok digunakan dalam terapi yang aman. Menentukan keefektifan efek
farmakologis yang dihasilkan untuk pengobatan kelainan neurodegeneratif pada manusia
dari percobaan kultur sel adalah mempertimbangkan banyaknya variabel yang menambah
saat perubahan dari in vitro ke terapi in vivo. Dari percobaan in vitro antiprion dari
quinacrine terbukti tidak efisien untuk pengobatan.

Tercapai di otak, mungkin karena terbentuknya drugresistant Prion. Untuk

melawan pembentukan obat resisten Prion, strategi farmakologis yang serupa dengan
yang diterapkan di terapi antimikroba dapat diterapkan secara tunggal maupun kombinasi
untuk terjadinya resistan terhadap obat. Untuk menyusun koktail antiprion, turunan
tokoferol, Khususnya yang sangat aktif seperti -tokoferol suksinat atau golongan -
tokoferol bisa menjadi komponen yang berguna.
 BAB IV

PENUTUP

I. KESIMPULAN

Dapat diketahui hubungan aktivitas turunan tokoferol terhadap

mekanisme antioksidan dalam potensi antiprion dimana efek antiprion dari
tokoferol bergantung pada struktur yang independen pada sifat antioksidannya
karena dua alasan: Perbedaan aktivitas antiprion pada α-, β-, γ-, dan δ-tokoferol
tidak terkait dengan kemampuan antioksidan. serta α-tokoferol ester, α-tokoferol
nikotinat dan α-tokoferol asetat tidak menunjukkan potensi antiprion

II. SARAN
 DAFTAR PUSTAKA

Brigelius Flohé, R dan Traber, M.G. 1999. Vitamin E: function and metabolism. Journal
FASEB. 13 (10).

Lehninger, A. L., 1982. Dasar-Dasar Biokimia jilid 1 (diterjemahkan oleh: Maggy

Thenawijaya ). Jakarta : Erlangga.

Marquardt, D., Williams, J.A., Kucerka, N., Atkinson, J., Wassall, S. R., Katsaras,
J., dan Harroun, T.A. 2013. Tocopherol Activity Correlates with Its
Location in a Membrane: A new Prespective on The Antioxidant Vitamin
E. Journal of The American Chemical Society, Vol 135: 7523-7533.

Mustacich, D.J, Anh T. Vo, Valerie, D.E, Katie, P, Laura, S, Scott, W. L dan Maret, G.
T. 2007. Regulatory Mechanisms to Control Tissue α-Tocopherol. Free Radic
Biol Med Journal. 43 (4).

Muyrers, J., Klingenstein, R., Stitz, L., dan Korth, C. Structure Activity Relationship
of Tocopherol Derivatives Suggesting a Novel Non- Antioxidant
Mechanism in Antiprion Potency. Neuroscience Letters, Vol 469: 122-126.

Ricciarelli, R., Zing, J.M., dan Azzi, A. 2001. Vitamin E: Protective Role of Janus
Molecule. Journal FASEB, Vol 15: 2314-2325.

Teixeira, M.C, Severino, Andreani, T, Boonme, P, Santini, A, Silva, A.M, Souto, E.B.
2017. d-α-tocopherol nanoemulsions: Size properties, rheological behavior,
surface tension, osmolarity and cytotoxicity. Journal Saudia Pharm. 25 (2): 231-
235

Winarsi, H., 2007. Antioksidan Alami dan Radikal Bebas: Potensi dan Aplikasinya dalam
Kesehatan. Yogyakarta: Kanisius. hal. 37