LAPORAN AKHIR PRAKTIKUM

KIMIA BAHAN ALAM II

ISOLASI SENYAWA ALKALOID DARI BUAH MERICA ( Piper nigrum L.)

OLEH :

Nama : AGNA ANNISA RAHIM

No Bp : 1611011014
Kelompok/Shift : IV/Jumat Pagi
Rekan Kerja : 1. Dian Nofida
2. Tuti Andriani
3. Suci Almuvarhimmah R.
4. Monica Cyntia Vilara
5. Fairuzi Zafrano
6. Nurul Pertiwi

LABORATORIUM KIMIA BAHAN ALAM

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS ANDALAS

PADANG

2018

BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Tujuan

1. Mengetahui dan mepraktekkan cara mengisolasi golonga senyawa alkaloid

2. Mengetahui cara mengidentifikasi senyawa alkaloid hasil isolasi

1.2 Manfaat
Dengan mempelajari Isolasi Alkaloid Dari Buah Merica ( Piper nigrum) kita
dapat memperoleh manfaat :
1. Mengetahui macam senyawa yang terkandung di dalam Piper nigrum
2. Mengetahui manfaat senyawa yang terkandung di dalam Piper nigrum
3.Dapat mengisolasi dan mengidentifikasi senyawa alkaloid yang
terkandung di dalam Piper nigrum

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
 Gambar 2.1 Piper Nigrum

2.1 Tinjauan Botani

2.1.1 Klasifikasi

Kingdom : Plantae
Subkingdom : Tracheobionta
Super divisi : Spermatophyta
Divisi : Magnoliophyta
Kelas : Magnoliopsida
Sub Kelas : Magnoliidae
Ordo : Piperales
Famili : Piperaceae
Genus : piper
Spesies : Piper ningrum L (Sarjani,2017).

2.1.2 Morfologi

Tanaman Piper nigrum (lada hitam) adalah tanaman abadi yang

berbunga memanjat pohon dan merambat milik keluarga Piperaceae.
Tanaman cabai memiliki tinggi maksimal 13 kaki atau 4 meter dan akar
bisa keluar dari simpul daun jika tanaman merambat ke tanah. Tanaman
memiliki daun berbentuk hati. Buah lada yang berwarna hitam berukuran
kecil (diameter 3 hingga 4 mm) disebut drupe (buah berbiji), sedangkan
buah yang kering dari Piper nigrum dikenal sebagai lada. Buah lada yang
matang penuh berwarna merah gelap dan memiliki diameter sekitar 5 mm.
Setiap buah mengandung satu biji. Tanaman menghasilkan buah dari tahun
ke-4 atau tahun ke-5, dan terus menghasilkan buah hingga tujuh tahun
(Damanhouri,et al.,2010).
Lada (Piper ningrum) merupakan tanaman yang berkembangbiak
dengan biji, namun juga dapat dilakukan dengan penyetekkan untuk
mengembangkannya. Akar lada merupakan akar tunggang namun jika
berkembangbiak secara penyetekan maka berakar serabut. Ukurannya
kecil-kecil dan tidak panjang sebagaimana pada akar tunggang biasanya.
Sesuai dengan jenisnya, akar tanaman ini dibedakan menjadi dua, yakni
akar lekat dan akar tanah. Akar lekat adalah akar yang tumbuh pada setiap
ruas buku yang berada di permukaan tanah dan mempunyai panjang rata-
rata 2,5-3,5 cm. Dalam satu ruas buku bisa tumbuh sebanyak 10-15 helai
akar. Kemudian akar tanah adalah akar yang tumbuh pada batang tanaman
lada yang berada di dalam tanah. Batang tanaman lada di sebut juga batang
stolon yaitu batang dengan tumbuh tegak keatas namun juga batang pada
tanaman ini bercabang dan menjalar. Batang lada berbentuk agak pipih dan
beruas-ruas dengan panjang ruas 4-7cm, panjang batang bisa mencapai 15
m (Sarjani,2017).
Daun pada tanaman ini berupa daun tunggal dengan panjang 12 –
18 cm dan lebar 3 cm dengan tangkai panjang 4 cm. Daun tumbuhan
Piper ningrum berbentuk bulat telur (Ovatus), dengan ujung daun
meruncing (Acuminatus), pertulangan daun melengkung (Cervinervis)
ukuran daun biasanya mencapai panjang 12-18 cm dengan lebar 5-10 cm
dan tumbuh berselang-seling, sedangkan bunga pada tanaman lada
berbentuk majemuk dan tumbuh pada ketiak tangkai daun. Trubus (2016)
‘’Termasuk kedalam bunga polygamous (poligami, sautu tumbuhan
terdapat bunga jantan, bunga betina, dan bunga banci seperti pada pepaya),
kadang monocious (berumah satu) Bunga dan daun tumbuh bertolak
belakang. Daun pelindung spatula bulat memanjang dengan panjang 3-3,5
cm. Anther (kepala sari) reniform (berbentuk ginjal), ovary globose
(bulat), jumlah stigma (putik) 3-4’’. Bunga tanaman ini memiliki malai
100-150 bunga yang akan menjadi buah dan buah pada tanaman ini
berwarna hijau ketika masih muda dan akan menjadi merah jika sudah
matang. Memiliki biji berwarna kecoklatan hitam berdiameter 3-5 mm dan
dilindungi daging buah dengan ketebalan 2-3 cm (Damanhouri,et
al.,2010).

2.1.3 Habitat dan distribusi

 Spesies ini lebih memilih lingkungan yang panas dan lembab, yang
batasi tanaman ini dari penyebaran ke garis lintang yang lebih tinggi. Lada
hitam adalah tanaman ditemukan di daerah tropis yang lembab,
membutuhkan curah hujan yang cukup jatuh dan lembab. Iklim yang
panas dan lembab traktat submukosa sangat ideal untuk kultivasinya, dan
lada hitam dapat tumbuh dengan sukses antara 20 °Lintang Utara dan
Selatan. Lada hitam mentolerir suhu antara rentang 10 dan 40 ° C. Reologi
ekologis seperti itulah yang membatasi spesies ini menyebar dan
mendapatkan rentang geografis yang lebih luas (Yun,et al.,2012).
Secara geografis,Pantai Barat dari semenanjung India Peninsula
adalah pusat utama budidaya lada hitam, dan telah dimanfaatkan untuk
domestik sejak berabad – abad yang lalu. Sejak itu, budidaya lada hitam
telah diproduksi di negara lain di Asia Selatan dan Tenggara. Saat ini,
tanaman ini terutama dibudidayakan di daerah tropis di dunia, seperti
India, Vietnam, Malaysia, Indonesia, Cina, dan Brasil, dan, pada skala
yang lebih kecil yaitu di Sri Lanka dan di Hindia Barat . sebagian besar
didistribusikan di timur dan pantai barat Semenanjung India, sebelah timur
Pulau Sumatera, beberapa daerah di Melayu Kepulauan, dan daerah pesisir
tenggara Cina.Lada hitam mencakup area geografis yang sangat besar dan
memiliki diperluas ke hampir setiap negara di Selatan dan Selatan- Asia
timur, kecuali untuk Pakistan dan Bhutan (Yun,et al.,2012).

2.2 Kandungan Kimia

Buah lada hitam mengandung alkaloid dan minyak atsiri dengan komponen
felandren, dipenten, kariopilen, entoksilen, dan limonen (Depkes RI, 1980). Lada
hitam juga mengandung antara lain alkaloid piperin (5,3-9,2%), kavisin (sampai
1%) dan metil-pirolin; minyak atsiri (1,2-3,5%); lemak (6,5-7,5%); pati (36-37%)
dan serat kasar (±14%) (Loo, 1987). Buah lada putih mengandung alkaloid seperti
piperin, kavisin, dan metilpirolin, serta minyak atsiri, lemak dan pati. Kandungan
utama dalam lada adalah alkaloid piperin. Piperin memiliki rumus molekul
C17H19NO3 atau (E,E)-1-[5-(1,3-benzodioksol-5-il)-1-okso-2,4-pentadienil]
piperidin, diperoleh dalam bentuk prisma monosiklik dari alkohol dengan titik
lebur 130°C, 1 g piperin larut dalam 15 mL etanol, 36 mL eter dan hampir tidak
larut dalam air (Hikmawanti,2016)
Buah lada mengandung beberapa sumber vitamin yang berkhasiat sebagai
antioksidan seperti vitamin C dan vitamin A dan polifenol flavonoid antioksidan,
seperti: karoten, criptoxantin, zeaxantin dan likopen. Senyawa tersebut membantu
tubuh menghilangkan radikal bebas berbahaya dan melindungi dari kanker dan
penyakit. Minyak dan oleoresin lada menunjukkan aktivitas antioksidan yang
kuat dibandingkan dengan hidroksianisole butilate (BHA) dan butilate
hidroksitoluen (BHT).Piperin sebagai komponen utama alkaloid yang terkandung
di dalam lada, selain berperan sebagai antioksidan juga memiliki antivitas anti
hipertensi (Anonymous,2016).
Investigasi fitokimia P. nigrum mengungkapkan bahwa lada hitam
mengandung berbagai senyawa kimia bermanfaat. Piperine adalah senyawa aktif
farmakologi yang pertama yang diisolasi dari anggota yang berbeda keluarga
Piperaceae. Banyak peneliti mengisolasi berbagai jenis Senyawa dari Piper
nigrum yaitu Fenolat, flavonoid, alkaloid, amida dan steroid, lignan, neolignan,
terpenes, chalcones dll dan banyak senyawa lainnya. Beberapa senyawa yang
berhasil diisolasi tersebut adalah Brachyamide B, Dihydro-pipericide, (2E, 4E)
-N-Eicosadienoyl-pereridine, N-trans Feruloyltryamine, N-Formylpiperidine,
Guineensine, pentadienoyl sebagai piperidine, (2E, 4E) -Nisobuty-ldecadienamid,
isobutyl-eicosadienamide, Tricholein, Trichostachine, isobutyl-eicosatrienamide,
Isobutyl-octadienamide, Piperamide, Piperamine, Piperettine, Pipericide, Piperine,
Piperolein B, Sarmentine, Sarmentosine, Retrofractamide. Aktivitas farmakologis
yang berbeda dilaporkan karena kehadirannya dari fitokimia ini. Piperine
dilaporkan memiliki empat isomer yaitu; Piperine, Isopiperine, Chavicine dan
Isochavicine. Di antara semua terisolasi senyawa yang diisolasi dari P. nigrum.
Piperine, pipena, piperamide dan piperamine ditemukan memiliki aktivitas
farmakologis yang beragam (Damanhouri1,et al.,2010).

Piperin

Gambar 2.2 Konstituen kimia penting dari P. Nigrum (Damanhouri1,et

al.,2010).
 Lada dan oleo resinnya merupakan bahan berharga makanan olahan karena
mereka memiliki sifat penyedap yang berguna dan mencegah kontaminasi
mikroba dan biodeteriorasi. Jagella dan Grosch (1999) menyimpulkan bahwa a-
pinene, b-pinene, myrcene, a-phellandrene, limonene, linalool, methylpropanal, 2-
dan 3-metilbutanal, asam butirat, dan asam 3-metilbutyric adalah bau yang paling
penting ditemukan di P. nigrum. Gas kromatografi (GC) -mass spektrometri dan
analisis ekstraksi-distilasi P. nigrum menunjukkan bahwa senyawa vinil adalah
volatil yang paling dominan di merica dan komponen yang ditemukan dalam
warna putih dan hitam lada (keduanya dari P. nigrum) cukup mirip (Meghwal and
Goswami,2013).

(Meghwal and Goswami,2013).

2.3. Kegunaan Tradisional

Lada atau sering disebut merica (Piper nigrum L.) merupakan tanaman
rempah yang sangat disukai oleh para pedagang kuliner yang biasanya
dicampurkan pada masakan. Selain itu, lada dapat digunakan sebagai obat
tradisional dalam menyembuhkan berbagai macam penyakit. Terutama dalam
masyarakat yang masih serba terbatas dalam menjangkau pengobatan medis yang
begitu mahal dan canggih seperti saat ini. Lada mengandung serat dan vitamin.
Selain itu, lada juga mengandung senyawa metabolit sekunder yaitu senyawa
alkaloid berupa piperin (Anonymous,2016).
Piper nigrum digunakan dalam pengobatan penghilang rasa sakit,
menggigil, rematik, flu, nyeri otot, pilek, kelelahan, demam, sebagai tonik saraf,
untuk meningkatkan sirkulasi darah, meningkatkan aliran air liur, merangsang
nafsu makan, dan mendorong peristaltik. Baik lada hitam dan lada panjang (P.
longum), bersama dengan jahe, adalah bumbu 'Trikatu', formula Ayurvedic kuno
yang penting digunakan untuk tujuan pengobatan pencernaan. Efek dari lada
hitam karena adanya piperin adaah karminatif, diuretik, anti-asma, sialagogue dan
stimulan. Ia juga memiliki aktivitas antimikroba spektrum luas. Secara eksternal,
minyak lada hitam digunakan sebagai rubefacient dan anti-rematik, dan sebagai
agen berkumur untuk sakit tenggorokan. Beberapa dari penggunaan ini telah
didukung oleh hasil eksperimen, tetapi penelitian modern sekarang lebih banyak
difokuskan pada penggunaan lada dan piperin sebagai kemopereventif dan
antioksidan untuk pencegahan gangguan degeneratif dan penambah
bioavailabilitas untuk obat lain, termasuk obat herbal (Meghwal and
Goswami,2013).
Spesies Piper telah digunakan dalam pengobatan tradisional untuk demam
intermiten dan untuk mempromosikan sekresi empedu.Piper nigrum juga
direkomendasikan untuk neurologis, gangguan broncho-paru dan gastrointestinal,
(termasuk dispepsia, perut kembung, sembelit dan wasir. Pada tahun 1983
simposium di Bombay, India berjudul "Pendekatan Terapi untuk Malaria" yang
disponsori oleh Ciba Geigy, Ltd., lada hitam dibahas sebagai pengobatan yang
mungkin untuk malaria kronis. Telah dilaporkan bahwa lada panjang digunakan
untuk pasien dengan malaria kronis splenomegali (pembesaran limpa). Buah lada
hitam diberikan dalam jumlah yang meningkat dosis 3-30, dimulai dengan 3 dan
meningkat setiap hari oleh 3 buah. Kemudian Dosis berkurang dari 30 menjadi 3
buah, dengan mengurangi 3 buah setiap hari. Merica direbus dalam susu dan air
dan diminum sekali sehari di pagi hari. Minum ramuan ini dilaporkan
menyebabkan berhentinya parasit malaria perkalian dan regresi splenomegali.
Dalam pengobatan tradisional Cina, lada hitam telah digunakan untuk pengobatan
epilepsi. Berdasarkan aplikasi tradisional ini, obat antiepilepsi baru
disebutAntiepilepserine baru-baru ini telah disintesis oleh para peneliti
Cina.Antiepilepserine adalah relatif kimia piperine, alkaloid utama fitokimia yang
ditemukan pada tanaman famili Piperaceae. Pada pengobatan tradisional daerah
Timur, lada hitam telah digunakan sebagai tonik saraf. Lada hitam, dan trikatu
yang lebih rendah, telah digunakan dalam pengobatan asma dan bronkitis kronis
dalam pengobatan Ayurveda dan Unani. trikatu secara tradisional terkenal di
Indonesia pengobatan berbagai gangguan gastrointestinal, dan ketiganya bertindak
memperbaiki pencernaan ( Majeed and Prakash,2000).

2.4. Uji Bioaktivitas

2.4.1 Ekstrak
Ekstrak batang Piper nigrum disintesis dan kemudian aktivitas
antibakteri dari nanopartikel perak yang disintesis. Piper nigrum dievaluasi
terhadap patogen tanaman pertanian. nano-partikel perak ini menunjukkan
aktivitas antibakteri yang sangat baik melawan patogen tanaman. Penulis
menyimpulkan bahwa aktivitas antibakteri dari nano-partikel perak adalah
aplikasi yang bermanfaat dalam perbaikan tanaman dan perlindungan
dalam nanoteknologi pertanian Khan dan Siddiqui pada tahun 2007
mengevaluasi potensi antibakteri rebusan air dari Piper nigrum L. (lada
hitam), Laurus nobilis L. (daun salam), Pimpinella anisum L. (adas
manis), dan Coriandum sativum L. (ketumbar) terhadap isolat bakteri yang
berbeda dari mulut rongga dua ratus sukarelawan individu. Lada hitam
(Air rebusan) menunjukkan aktivitas antibakteri terkuat yang sebanding
dengan air rebusan dari Laurus nobilis dan Pimpinella anisum di
konsentrasi 10μL / disk. Ektrak metanol dari piper nigrum menunjukkan
peningkatan memori dan sifat antioksidan dengan dosis 50 dan 100 mg /
kg, secara oral, selama 21 hari dalam amiloid beta (1-42) diselidiki dalam
model penyakit Alzheimer di tikus. Efek meningkatkan memori dari
ekstrak dipelajari dengan cara in vivo, Sedangkan aktivitas antioksidan
dievaluasi dengan mengukur aktivitas glutathione peroksidase, katalase,
dismutase superoksida, dan dengan mengukur kandungan total
glutathione, malondialdehid, dan kadar protein karbonil di hippocampus.
Penelitian ini menunjukkan peran antioksidan antioksidan dari ekstrak
spesies Piper terhadap diet aterogenik yang memicu stres oksidatif pada
ginjal, jantung dan jaringan hati.Ekstrak alkohol lada dan piperin
menunjukkan aktivitas imunomodulator dan antitumor yang efektif.
Piperine juga dilaporkan dapat mengurangi kanker paru-paru dengan
mengubah peroksidasi lipid dan dengan aktivasi enzim perlindungan
antioksidan. Piperine memiliki aktivitas farmakologis yang berbeda
bersama dengan aktivitas anti-kanker. Piperine dilaporkan menghambat
transisi G1 / S dan proliferasi sel-sel endotel vena umbilikalis manusia
(HUVECs), migrasi HUVECs dan pembentukan in vitro tubulus dan
angiogenesis yang diinduksi oleh kolagen dan sel kanker payudara pada
embrio ayam (Damanhouri,et al.,2010).
Ektrak air buah lada hitam menginduksi efek spasmolitik pada
kontraksi uterus tikus yang disebabkan oleh KCl dan oksitosin. Dalam
penelitian ini,larutan De Jalon dengan kalsium rendah dan konsentrasi
potas-sium dan suhu rendah (29 ° C) digunakan untuk mengurangi
kontraksi rahim spontan. Ekstrak air lada hitam (0,125-2 mg / ml)
mengurangi kontraksi uterus yang disebabkan oleh KCl (60 mM) dan
oksitosin (10 mU / ml) dosis dependen (p <0,0001). Efek spasmolitik dari
ekstrak pada kontraksi yang diinduksi oleh KCl tidak dikurangi oleh L-
NAME (100 μM), phentolamine (1 μM) dan naloxone (1 μM). Namun,
propranolol (1 μM) mengurangi aktivitas ekstrak (p <0,01 – p <0,0001).
Dalam larutan Ca2 + -free De Jalon dengan potasium tinggi (60 mM),
ekstrak (0,0312-0,25 mg / ml) mengurangi kontraksi yang disebabkan oleh
konsentrasi kumulatif CaCl2 (0,1-0,5 mM) dosis dependen (p <0,05- p
<0,0001) . Hasil percobaan menunjukkan bahwa efek spasmolitik dari
ekstrak pada uterus tikus dimediasi melalui saluran kalsium tergantung
tegangan dan β-adrenoceptors juga bisa terlibat dalam tindakan ini. Hasil
perecobaan dapat mendukung penggunaan lada hitam dalam obat
tradisional untuk meredakan menorrhalgia (Naseri and Yahyavi,2007).
Ekstrak etanol daun lada hitam menunjukkan diameter 1 mm
penghambatan terhadap Bacillus sp. diikuti oleh Klebsiella sp., E.coliand
Staphylococcus aureus. Ekstrak air menunjukkan aktivitas inhibisi 0,7 mm
dengan Bacillus sp. diikuti oleh 0,6 mm dalam Staphylococcus aureus,
sedangkan 0,5 mm dalam E. coli dan Klebsiella sp. Dalam ekstrak
kloroform dan dietil eter, zona inhibisi mirip dengan S. aureus, tetapi zona
0,7 mm diamati terhadap E. coli di kloroform dan 0,9 mm zona terhadap
Klebsiella di dietil eter. Karena aktivitas itu terlihat tertinggi dalam ekstrak
etanol, ektrak lebih lanjut dianalisis dengan patogen manusia dan
organisme multi-resisten. Ekstrak etanol menunjukkan aktivitas tertinggi
terhadap Bacillus sp. dibandingkan dengan organisme lain (Kavitha and
Mani,2017).

2.4.2 metabolit sekunder

Lada putih (Piper ningrum L.) mengandung metabolit sekunder

berupa alkaloid yaitu piperin. Piperin (1-piperilpiperidin) C17H19O3N
merupakan senyawa alkaloid yang memiliki inti piperidin. Piperin dapat
membentuk kristal berwarna kuning dengan titik leleh 127-129,5 oC,
merupakan basa yang tidak optis aktif, dapat larut dalam alcohol, benzene,
eter dan sedikit larut dalam air. Hidrolisis piperin dapat dilakukan dengan
menggunakan larutan 10 % KOH-etanol menjadi asam piperat
(Anonymous,2016).
2.4.2.1 Efek anti-inflamasi, anti-oksidan, dan anti-degeneratif
Piperine secara signifikan memperlemah perubahan akut
awal pada proses inflamasi dan perubahan granulatif kronis, yang
bekerja secara parsial melalui sumbu adrenal hipofisis. Piperine
menurunkan zat reaktif asam thiobarbituric dan mempertahankan
superoksida dismutase, katalase, glutathione peroksidase,
glutathione-S-transferase, dan tingkat glutathione, mengurangi
stres oksidatif yang diinduksi oleh lemak tinggi. Piperine
membalikkan perubahan yang disebabkan streptozocin di otak dan
mengurangi glutathione peroksidase ginjal, dismutase superoksida,
aktivitas reduktase glutation jantung, dan peroksidasi lipid, tetapi
tidak membalikkan aktivitas enzim hati. Piperine menurunkan lipid
darah dan menghambat pengambilan kolesterol in vivo. Piperine
menghambat jalur ERK dan JNK pada sel dendrit murine, yang
mendukung penggunaannya yang terkenal terhadap beberapa
penyakit autoimun seperti arthritis dan diabetes. Piperine
menurunkan berat limpa, thymus, dan kelenjar getah bening
mesenterika tanpa diamati imunotoxic atau efek lainnya. Piperine
secara signifikan meningkatkan gangguan memori dan neuro-
degenerasi pada hippocampus tikus, mungkin karena penurunan
aktivitas enzim lipid per-oksidasi dan acetylcholinesterase
(Meghwal,et al.,2013)

2.4.2.2 Pengaruh pada pencernaan

Piperine menstimulasi sekresi asam lambung melalui
reseptor histamin H2 dan secara signifikan diantagonis oleh
simetidin. 8 minggu Diet piperine ditingkatkan aktivitas lipase usus
dan merangsang pencernaan. 4 minggu memakan makanan dari P.
nigrum dan piperine menyebabkan peningkatan aliran empedu.
sekresi asam uronat dalam empedu ditingkatkan oleh lada dan
piperin. Piperine mengurangi akumulasi cairan usus yang diinduksi
minyak. Administrasi P. nigrum menyebabkan peningkatan yang
signifikan dalam sekresi parietal dan pepsin, kehilangan kalium,
dan eksfoliasi sel lambung (Meghwal,et al.,2013)

2.4.2.3 Aktivitas anti-karsinogenik, anti-mutagenik

Piperin menghambat karsinogenesis kimiawi dengan
memodulasi glutathione S-transferase, sitokrom P-450, kandungan
sulfhidril yang larut dalam asam, dan kadar malondialdehyde.
Piperine menghambat demethylase 7-methoxycoumarin dalam sel
V79MZr2B1, menunjukkan itu adalah inhibitor ampuh aktivitas
tikus CYP4502B1. Piperine menetral CYP4502B1 toksisitas
dimediasi aflatoksin B1, menunjukkan efek kemopreventif
terhadap prokarsinogen yang diaktifkan oleh CYP4502B1.
Piperine menurunkan aktivitas enzim mitokondria dalam model
kanker paru-paru tikus, memodulasi peroksidasi lipid, dan
menambah sistem pertahanan anti-oksidan (Meghwal,et al.,2013)

2.4.2.4 Peningkatan bioavailabilitas

Piperine meningkatkan konsentrasi serum, penyerapan, dan
bioavailabilitas kurkumin. iperine meningkatkan kadar vasis dan
sparteine dalam darah, baik dengan mempromosikan penyerapan
cepat dari saluran pencernaan atau dengan metabolisme lintasan
pertama di hati, atau dengan kombinasidari dua.Piperine
meningkatkan penyerapan Q-gastro-usus coenzyme. Piperine
meningkatkan kadar serum b-karoten pada subjek yang
sehat.Piperine meningkatkan penyerapan b-karoten untuk
mengatasi defisiensi vitamin A (Meghwal,et al.,2013)

2.4.2.5 Efek hormonal

Infus piperin menginduksi sekresi katekolamin, terutama
epinefrin, dari medula tikus adrenal.Menurunkan kadar serum
tiroid thyroxin dan triiodothyronine, dengan penurunan bersamaan
dalam enzim 5'D hati dan aktivitas glukosa-6-fosfatase, sebanding
dengan obat antitiroid standar, proylthiouracil (Meghwal,et
al.,2013)
2.4.2.6 Aktifitas analgesik
Administrasi piperine dengan dosis 30, 50 dan 70 mg / kg
dibandingkan dengan di domethacin dengan dosis 20 mg / kg
menunjukkan aktifitas analgesik. Injeksi intra-peritoneal piperin
pada dosis 30 dan 50 mg / kg dan injeksi morfin intra-peritoneal
dengan dosis 5 mg / kg secara signifikan (P <0,01) meningkatkan
waktu reaksi tikus dalam uji film ekor. Kegiatan analgesik dari
kedua piperin dan morfin dalam uji ekor film dibalik pada pra-
perawatan hewan dengan nalokson pada dosis 5 mg / kg, Hasil ini
menunjukkan aktivitas analgesik piperin yang mungkin dimediasi
melalui jalur opioid (Damanhouri,et al.,2010).

2.4.2.7 Aktifitas antikonvulsan

Aktivitas antikonvulsan dari piperine dalam kejut listrik
maksimal (MES) dan pentylenetetrazol (PTZ) model kejang di
tikus diperiksa dan partisipasi lebih lanjut dari reseptor transien
potensi saluran kation subfamili V anggota 1 (TRPV1) reseptor
diakui dalam penghambatan kejang yang disebabkan oleh
 pentylenetetrazol dan model electroshock maksimal
(Damanhouri,et al.,2010).

2.4.2.8 Aktifitas antidepresan

Efek piperine yang seperti antidepresan dan
kemungkinannya mekanisme dievaluasi dalam model kortikosteron
yang diinduksi depresi pada tikus. Perilaku seperti depresi pada
tikus dikembangkan setelah 3 minggu suntikan kortikosteron. Hasil
ini menunjukkan bahwa piperine menghasilkan efek antidepresan
seperti pada model depresi yang diinduksi oleh kortikosteron pada
tikus (Damanhouri,et al.,2010).
Berbagai kegunaan dan aplikasi yang bermanfaat untuk
kesehatan P. nigrum dan P. longum telah dikenal dengan pengujian
pada sel, hewan, dan subyek manusia. Mereka telah ditemukan
memiliki banyak aplikasi terapeutik yang potensial seperti
imunomodulator, stimulan, hepattoprotective, anti-inflamasi,
antiamoebic, anti-oksidan, anti-karsinogenik, anti-kesuburan, anti-
ulkus, antijamur, antibakteri, antihyperlipidemic, dan antiasthmatic.
Piperine juga ditemukan telah meningkatkan bioavailabilitas
makanan, obat, anti-karsinogen, dan fitokimia serta untuk
mempromosikan pengaruh pada enzim-enzim yang
memetabolisme obat. Piperine menyebakan biotransformasi
metabolit dan mengurangi pergerakan makanan dan waktu
penyerapan dan juga melakukan percepatan metabolisme lipid dan
peroksidasi lipid (Meghwal,et al.,2013).

2.5 Metode Ekstraksi

Serbuk simplisia buah lada dibuat dari simplisia utuh yang diperoleh dari
BALITTRO dengan cara diblender dan kemudian diayak dengan menggunakan
ayakan mesh no.40 (Hikmawanti,2016).
2.5.1 Pembuatan Ekstrak Etanol
Serbuk simplisia sebanyak kurang lebih 50,0 g ditimbang seksama,
kemudian diekstraksi dengan alat sokhlet menggunakan pelarut etanol dengan
berbagai variasi konsentrasi 60%, 70%, dan 96%. Ekstraksi dilakukan sampai
tetesan siklus tidak berwarna lagi. Ekstrak cair yang diperoleh kemudian
dipekatkan menggunakan rotary evaporator pada suhu 50°C
(Hikmawanti,2016).
Peperin merupakan senyawa metabolit sekunder yang diperoleh dari
buah lada (Piper ningrum L.) dengan cara mengisolasi. Isolasi dalam
percobaan ini yaitu mengambil senyawa piperin yang terdapat dalam lada
 melalui ekstraksi soxhletasi dengan menggunakan pelarut organik seperti
etanol. Piperin merupakan senyawa polar begitupun dengan etanol sehingga
etanol mampu melarutkan piperin yang terdapat dalam lada sesuai dengan
prinsip like dissolved like. Berdasarkan Literatur bahwa piperin merupakan
senyawa alkaloid yang dapat larut dalam alkohol yaitu etanol, dimana antara
piperin dengan etanol mampu untu membentuk ikatan hydrogen
(Anonymous,2016).
2.5.1.1 Ekstraksi dengan diklorometana
10 g bubuk lada direfluks dengan 20 ml diklorometana selama 20
menit dalam labu alas bulat. Kondensor dipasang dan air dibiarkan
mengalir untuk mengembunkan uap diklorometana. Kemudian labu
didinginkan dan disaring melalui corong Buchner. Ekstrak diperlakukan
dengan aseton dan heksana (Shingate,et al.,2013).
2.5.1.2 Ekstraksi dengan Asam Acetic Glacial
Maserasi dingin bubuk lada hitam 25gm dilakukan dengan
menggunakan 300ml asam asetat glasial. Ekstrak diencerkan dengan
volume air yang sama dan dipartisi dengan kloroform dalam corong pisah.
Ekstrak kloroform dicuci dengan natrium bikarbonat 10% dan kemudian
dengan air. Ekstrak terkonsentrasi di Rota evaporator dan kemudian
dikeringkan pada natrium sulfat anhidrat. Pemurnian ekstrak dilakukan
dengan kromatografi kolom dengan menggunakan toluene: ethyl acetate
(7: 3) sebagai pelarut. Pengotor yang mengandung resin dicuci dengan
larutan natrium hidroksida dan kemudian dengan air untuk menghilangkan
kelebihan natrium hidroksida. Ekstrak direkristalisasi dengan
menggunakan dietil eter (Shingate,et al.,2013).

2.6 Cara pemurnian

Untuk mendapatkan senyawa dalam bentuk yang lebih murni, kristal yang
terisolasi direkristalisasi dengan melarutkan dalam diklorometana di mana
beberapa tetes n-Hexane diaplikasikan dan memungkinkan larutan untuk menetap
tanpa terganggu selama beberapa jam. Batang-seperti, kristal kuning muda
dibentuk yang dikumpulkan melalui penyaringan dan dimurnikan dengan
perlakuan dengan campuran pelarut (n-Hexane / 1% Diklorometana) untuk
menghilangkan komponen yang tidak diinginkan. Akhirnya, kristal yang
dihasilkan ditimbang untuk mengetahui hasil yang tepat (Khan,et al.,2017).
 BAB III

METODE KERJA

3.1 ALAT DAN BAHAN

Alat : Seperangkat alat sokletasi, rotary evaporator, pipet tetes, chamber, penotol,
via, corong, spatel

Bahan :Buah lada hitam (Piper ningrum) 10 g, metanol, kalium hidroksida, etil
asetat, kapa, kertas, saring, plat KLT, larutan penampak noda alkaloid
(Dragendorf)

3.2 CARA KERJA

a. Buah lada hitam kering, haluskan

b. Soklet dnegan metanol
c. Uapkan maserat dengan alat rotary evaporator hingga kental
d. Ekstrak kental ditambah 10 mL larutan KOH 10 %, saring dan diamkan 24
jam
e. Ambil kristal yang terbentuk, lakukan rekristalisasi dengan etil asetat dan
n-heksan
f. KLT senyawa hasil isolasi dengan fase diam silika gel 60 F254, fase gerak
n-heksan : etil asetat (2:3). Lihat noda di bawah sinar UV λ254 dan gunakan
penampak noda Dragendorf.

BAB IV
 HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 HASIL
Organoleptis
Warna : Kuning
Bau : Berbau Khas
Bentuk : Kristal
Rasa :-
Jumlah Isolat
Massa botol + sampel = g
Massa botol = g -
Massa sampel =g
Rendemen
Massa Buah lada hitam (Piper nigrum L) yang ditimbang adalah 25 g
Jadi :
% Randemen = Jumlah senyawa isolat / jumlah sampel x 100 %
% Randemen =
=

4.2. Pembahasan

Lada (Piper ningrum L.) merupakan salah satu jenis rempah yang
memiliki bau yang khas. Piperin merupakan salah satu senyawa yang terkandung
dalam lada putih. Piperin dapat diperoleh dengan isolasi yang berarti mengambil
senyawa piperin dalam lada dengan memisahkannya dari senyawa yang lain yang
terdapat dalam lada. Pada paktikum dilakukan isolasi senyawa alkaloid dari buah
lada hitam kering (Piper nigrum L.). Praktikum ini bertujuan untuk mengetahui
cara isolasi dan identifikasi senyawa alkaloid, yaitu piperin dari buah lada hitam.
Isolasi dapat dilakukan dengan cara maserasi, perkolasi, digestasi, infusi, dekokta,
dan sokletasi. Pada praktikum dilakukan isolasi menggunakan sokletasi karena
proses kerja lebih mudah dan hasil yang didapatkan lebih murni. Sokletasi
menggunakan pelarut methanol bertujuan untuk menarik senyawa polar dari
sampel. Alasan piperin direndam menggunakan metanol karena piperin sedikit
larut dalam air dan mudah larut dalam alkohol. Keuntungan metoda sokletasi
yaitu kerja lebih efisien karena alatnya tidak rumit, waktu yang dibutuhkan
sebentar, dan pelarut yang digunakan sedikit..
Sampel dihaluskan terlebih dahulu agar memudahkan dalam isolasi,
karena semakin kecil ukuran partikel, maka luas permukaan dari sampel akan
semakin luas, sehingga bagian sampel yang berkontak dengan pelarut semakin
banyak. Hasil sokletasi diuapkan dengan rotary evaporator bertujuan untuk
mendapatkan ekstrak kental. Rotary merupakan proses pemisahan senyawa dari
pelarutnya dengan penurunan tekanan uap sehingga titik didih pelarut lebih
rendah dari yang sebenarnya dan zat lebih mudah di uapkan.
Penambahkan KOH 10% bertujuan untuk mengikat basa yang ada pada
alkaloida yaitu dengan berikatan pada gugus nitrogen dari alkaloid tersebut
sehingga mempercepat terbentuknya kristal. Penambahan KOH 10%
menyebabkan piperin yang ada di dalam ekstrak akan bereaksi menjadi garam
asam piperat dan mengeleminasi senyawa pengotor yang ada di ekstrak tersebut .
Rekristalisasi dilakukan dengan dua pelarut yang berbeda kepolarannya.
Pemilihan sistem pelarut yang dipakai didasarkan atas prinsip like dissolves like
berarti untuk memisahkan sampel yang bersifat nonpolar digunakan sistem pelarut
yang bersifat non polar juga.
Pada praktikum ini, digunakan etil asetat untuk melarutkannya karena
sampel larut dalam etil asetat dan juga dibantu dengan pemanasan untuk
memudahkan larutnya kristal. Setelah itu dilakukan pendesakan dengan
menggunakan pelarut n-heksan yang bersifat non polar sedangkan etil asetat
bersifat semi polar. Perbandingan n-heksan dan etil asetat yang digunakan adalah
2:3. Rekristalisasi yang dilakukan hendaknya dilakukan secara berulang-ulang
agar di dapat hasil yang murni dan bebas dari pengotor.

BAB V
KESIMPULAN dan SARAN
5.1 Kesimpulan
  Buah lada hitam (Piper nigrum) mengandung senyawa alkaloid
utama (marker) piperin.
5.2 Saran
 Lakukan praktikum sesuai dengan prosedur kerja, teliti, hati-hati,
serta melengkapi alat dan bahan yang dibutuhkan.
 Bekerjasama dalam kelompok dan bersabar dalam menunggu hasil.
 Membaca literatur sehingga mengerti maksud dan tujuan dari proses
pengerjaan yang dilakukan.
 Dalam melakukan rekristalisasi, sebaiknya dilakukan berulang-
ulang agar diperoleh hasil atau kristal yang murni.

DAFTAR PUSTAKA
1. Damanhouri,A.Z., Ahmad,A. A Review on Therapeutic Potential of Piper
nigrum L. (Black Pepper): The King of Spices. Medicinal & Aromatic
Plants 2010; 3: 1-6

2. Sarjani,T.M., Mawardi, Pandia,S.K, Wulanda,D. Identifikasi Morfologi

Dan Anatomi Tipe Stomata Famili Piperaceae Di Kota Langsa. Jurnal IPA
dan Pembelajaran IPA (JIPI) 2017; 1(2 ): 182-191

3. Yun,C.H., Rui,F., Ribeiro,C.M., Le-he,T.,and Hua-song,W.,et al.

Modeling the Potential Geographic Distribution of Black Pepper (Piper
nigrum) in Asia Using GIS Tools. Journal of Integrative Agriculture
2012;11(4): 593-599

4. Meghwal, Murlidhar and Goswami T. K. Review Piper nigrum and

Piperine: An Update. Phytotherapy Research 2013; 27: 1121–1130

5. Majeed and Prakash L.The Medicinal Uses of Pepper. International

Pepper News 2000; 25 : 23-31

6. Naseri K.M, Yahyavi H. Spasmolytic Activity of Piper Nigrum Fruit

Aqueous Extract on Rat Non-Pregnant Uterus.Iranian Journal Of
Pharmacology & Therapeutics 2007; 6:35-40

7. Kavitha,S., Mani P. Anti-bacterial Activity of Extract of Piper nigrum

Leaf. BioThecnology : An Indian Journal 2017; 13:144-153

8. Shingate P.N., Dongre P.P., Kannur D.M.New Method Development For

Extraction And Isolation Of Piperine From Black Pepper. International
Journal of Pharmaceutical Sciences and Research 2013; 4(8): 3165-3170

9. Khan,R.Z., Moni1 F., Sharmin S., and Al-Mansur,A.M.,et al. New

Isolation of Bulk Amount of Piperine as Active Pharmaceutical Ingredient
(API) from Black Pepper and White Pepper (Piper nigrum L.).
Pharmacology & Pharmacy 2017;8:253-262

10. Anonymous. 2016. Isolasi Piperin dari Lada. 15 Mei 2018.

https://edoc.tips/download/isolasi-piperin-dari-lada_pdf

11. Hikmawanti,Ni Putu Ermi.,Hariyanti.,Cahya,Aulia.,Viransa,V.P. Kandungan

Piperin Dalam Ekstrak Buah Lada Hitam dan Buah Lada Putih (Piper
nigrum L.) yang Diekstraksi dengan Variasi Konsentrasi Etanol
Menggunakan Metode KLT-DENSITOMETRI. Media Farmasi. 2016 : 13
(173-185 ).
12. Wulandari, Heny., Zakiatulyaqin.,And Supriyanto. Isolasi dan Pengujian
Bakteri Endofit dari Tanaman Lada (Piper nigrum L.) sebagai Antagonis
Terhadap Patogen Hawar Beludru (Septobasidium sp.). J. Perkebunan &
Lahan Tropika. 2012 vol 2