Oseana, Volume xxxvm, NomOI 4, Tahun 2013: 17- 25 ISSN 0216-1877

PENGGUNAAN Agrobacterium tumefaciens SEBAGAI

PERANTARA DALAM TRANSFORMASI GENETIK PA.DA
RUM PUT LAUT
Oleb

Trl Handayaoil)

ABSTRACI'

Agrobacterium tumefaciens-MEDIATED TRANSFER IN SEA WEED GENETIC

TRANSFORMA TION. The major problem in the cultivation of seaweed is the availability of
quality seeds. Quality of seeds included growth, disease resistance and high yield The seeds can
be obtained by conventional or genetic engineering techniques. Genetic transformation using
Agrobacterium tumefaciens - mediated can be used in seaweed. The technique hasadventage, i.e.
low cost, low gene copy number and reproducible. The technique has been used in transformation
ofseaweedKappapbycus alvarezii. Several gene have been transformed into Kappapbycus alvarezii
using Agrobacterium tumefaciens - mediated, i.e. gus, lysozyme (bacterial infection resistance
gene), Citrate synthase (environmental stress resistance gene), metallothionien II (heavy metal
resistance gene), superoxide dismutase (environmentalstress resistance gene) and alginate (gene
for increasing the yield of alginate).

PENDAHULUAN komoditas ekspor karena permintaan pasar

Makroalgae atau yang lebih umum
disebut sebagai rumput laut banyak memiliki
manfuat baik untuk keperluan industri (makanan,
kosmetik.,farmasi, tekstil, dan fotografi) maupun
nOD industri (dimakan secara langsung dan
produk olaban rumab tangga). Pentingnya
rumput laut untuk keperluan industri
dikarenakan kandungan fitokoloidnya yang
bernilai ekonomis penting. Fitokoloid tersebut
antara lain karagenan, alginat, dan agar.
Pemanfaatannya yang cukup luas
menyebabkan permintaan rumput laut ini terus
meagalami peningkatan. Rumput laut ini menjadi
delapan kali lebih banyak dari jenis lainnya
(Sulistijo, 2002). Sampai sekarang, kenaikan
permintaan tidak seimbang dengan kenaikan
produksinya. Upaya peningkatan produksi
dilakukan dengan memperluas penanaman
rumput laut pada daerab pantai yang cocok
untuk budidaya atau dengan divertifikasi
teknologi budidaya. Namun demikian, upaya
tersebut tidak cukup untuk memenuhi
kebutuhan rumput Iaut. Kendala yang paling
besar adalab penyediaan bibit unggul rumput
laut yang membawa sifat-sifat penting dalam
budidaya, antara lain pertumbuhan cepat, tahan

I) Bidang Sumberdaya Laut, Pusat Penelitian Oseanografi UPI

17
penyakit, kandungan karagenan yang tinggi
serta toleran terhadap kondisi lingkungan yang
kurang menguntungkan (pencemaran
lingkungan dan perubahan kualitas air secara
drastis).
Penyediaan bibit unggul dapat
dilakukan dengan beberapa cara baik seeara
konvensional maupun menggunakan teknik
yang lebih maju. Penyediaan bibit unggul secara
konvensional adalah dengan cara pengambilan
bibit rumput laut dari alam secara langsung. Cara
ini sangat tidak dianjurkan, karena akan merusak
alam dan mengganggu keseimbangan
lingkungan. Cara konvensionallainnya adalah
dengan mengambil sebagian basil panen untuk
dijadikan sebagai bibit kembali. Cara ini sangat
praktis dan murab, namun bibit yang akan
dihasilkan berikutnya akan terus mengalami
penunman kualitas.
Penyediaan bibit ungguJ rumput laut
menggunakan teknik yang Iebih modern dapat
dilakukan dengan cara seleksi dan teknik
rekayasa genetik. Penggunaan metode seleksi
memiliki peluang yang sangat besar untuk
mendapatkan bibit unggul rumput laut, Namun
metode ini memiliki beberapa kelemahan yaitu
membutuhkan waktu yang sangat lama, biaya
besar dan kondisi lingkungan yang sangat baik
untuk proses seleksi. Sedangkan teknik
rekayasa genetik memberikan kemungkinan bagi
kita untuk memperoleb bibit unggul rumput Iaut
yang mem.ilik:isifat-sifat yang diharapkan. Salah
satu teknik rekayasa genetika yang dapat
digunakan adalah transformasi gen secara tidak
langsung dengan perantara bakteri
Agrobacterium tumefaciens. Dalam tulisan ini
akan memaparkan informasi mengenai
penggunaanA. tumefaciens dalam transformasi
genetik pada rumput taut.
Agrobllcterillm tllmejllCiens
Agrobacterium adalah bakteri Gram
negatifyang hidup bebas dalam tanah. Bakteri
ini hidup optimum pada suhu 28-30"C, tidak
18
membentuk spora (endospora) (Bucbanan &
Gibbons, 1974), dan dapat menimbulkan
penyakit pada tumbuhan yang terinfeksi. Dalam
budidaya pertanian, penyakit ini tergolong
penting dan sebagian besar terjadi pada
tanaman dikotil (Draper et al. 1993). Menurut
Miller &Bassler (2001) terdapat dua spesies
Agrobacterium yang bersifat patogen yaitu A.
tumefaciens sebagai penyebab penyakit tumor
(crown gall) dan A. rhizogenes sebagai
penyebab penyakit akar rambut (hairy rool)
pada berbagai tanaman dikotil yang peka.
Escobar & Dandekar (2003) menyebutkan ada
beberapa spesies Agrobacterium yang
menyebabkan penyakit pada tanaman, antara
lain: A. tumefaciens (crown gall disease), A.
rhizogenes (hairy root disease), A. rubi (cane
gall disease) danA. vitis (crown gall ojgrape).
Transfer gen dengan perantaraAgrobacterium
tumefaciens umumnya digunakan dalam
produksi tanaman transgenik. Namun demikian,
teknik inijuga dapat diaplikasikan dalam transfer
gen pada rumput laut. Penggunaan A.
tumefaciens dalam transfer gen pada rumput laut
pertama kalidilaporkan oleh Cheney et al. (200 1).
Bakteri ini bersifat patogen yang dapat
melakukan transformasi genetikkesel inangnya,
hingga menyebabkan tumor (crown gall).
Selama ini interaksi antara Agrobacterium
dengan sel tanaman merupakan suatu fenomeoa
alami transpor T-DNA dari Agrobacterium tipe
liar ke dalam inti sel tanaman (Songstad et al.
1995). Ketika Agrobacterium menginfeksi
tanaman, bagian dari molekul DNAnya yang
disebut T-DNA terintegrasi pada DNA
krcmosontaaaman (Loedin,1994).
Transformasi menggunakan Agro-
bacterium memiliki beberapa keuntungan
antara lain relatiflebih murah, jumlah salinan
gen sedikit dan teknik pengulangan percobaan
memberikan basil serupa (reproducible) (Hiei
et al. 1997). Terdapat tiga kompooeo utama pada
Agrobacterium yang berperan dalam transfer
DNAke dalam sel tanaman (Sheng & Citovsky,
1996). Ketigakomponen tersebut adalah T-DNA,
virulence (Vir: A, B, C, D, E, o,H) dan gen
chromosomal virulence (chv), yang terdiri atas
chvA, chvB, pscA dan att (Broek &
Vanderleyden, 1995; Tzfira & Citovsky, 2(03).
lRANSFORMASI GEN MELALUI
Agrobacterium tumefaciens
Kemampuan bakteri mentransfonnasi sel
tanaman berhubungan dengan adanya plasmid
penginduksi tumor (Ti) atau penginduksi akar
(Ri) dalam Agrobacterium (Sbeng & Citovsky,
1996; Gelvin, 2000). Interaksi antara
Agrobacterium dan sel tanaman didahului
dengan mekanisme secara kimiawi yaitu sel
tanaman yang luka menghasilkan suatu
metabolit yang berperan sebagai isyarat bagi
Agrobaeterium. Metabolit tersebut dapat
berupa senyawa gula, asam, asam amino atau
senyawa fenol (Winans, 1992). Adanya senyawa
tersebut menginduksi Agrobacterium untuk
bergerak aktifmenujuke sel sasaran. Gerakan
yang bersifat kemotaksis ini dipandu oleh
senyawa yang disekresikan oleh sel tanaman
rentan yang luka. lnteraksi dilanjutkan dengan
adanya kontak antara Agrobaeterium dengan
sel tanaman sasaran. Untuk memperkuatkontak
tersebut Agrobaeterium mengeluarkan suatu
metabolit yaitu a-I-2-glukan. Beberapa gen
dalam kromosom Agrobacterium diketahui
merupakan penyandi enzim yang berperan dalam
sintesis berbagai senyawa glukan, yaitu chvA,
chvB, dan exoC. Gen lain pada kromosom yang
berperan seperti ketiga gen tersebut adalah eel.
Produk eel berperan penting dalam sintesis
senyawa selulosa fibril (Douglas et al. 1985;
Gelvin, 20(0).
lnduksi faktor virulensi (vir) yang akan
mengatur proses pemotongan dan transfer T-
DNA ke sel tanaman. Beberapa metabolit yang
disekresi oleh tanaman, akan menginduksi faktor
virulensi. Metabolit tersebut adalah
asetosiringon, hidroksi asetosiringon, koniferil
19
alkohol dan etilpiruvat (Wmans, 1992). Aktivasi
gen vir dimulai dengan penerimaan sinyal oleh
VirA. VirA merupakan protein sensor trans-
membran yang berfungsi mendeteksi molekul
sinyal berupa senyawa fenolik seperti
asetosiringon. Beberapa jenis monosakarida
juga berfungsi sebagai sinyal. Deteksi
monosakarida dimungkinkan oleh adanya
interaksi dan asosiasi antara protein VuA
dengan CbvE yang berfungsi sebagai protein
pengikat gula (glukosa/galaktosa) pad a
periplasma (de la Riva et al. 1998). Proses
penerimaan sinyal ini dijelaskan pada Gambar
1.Protein dari VrrA ini akan menginduksi VrrG
melalui fosforilasi, yang selanjutnya VlTGakan
mengaktifkan ekspresi berbagai Vir lainnya
Gambar 1. VirA sebagai protein sensor trans-
membran mendeteksi signal berupa
senyawa fenol (asetosiringon) dan
monosakarida (gula). Deteksi
senyawa fenol dapat dilakukan
secara langsung oleh Vir A,
sedangkan deteksi monosakarisa
(gula) terjadi oleh adanya asosiasi
antara VirA dan ChvE. VirA akan
menginduksi VirG melalui proses
fosforilasi. VirG akan mengaktifkan
ekspresi Vir lainnya(McCullens &
Binns, 2006).
(Winans, 1992). Induksi protein-protein Vir
dikontrol oleh komponen sistem VirAlG (Rosen
& Ron, 2011). Proses transformasi genetik
menggunakan perantara Agrobacterium
tumefaciens dijelaskan pada Gam bar 2.
Protein yang dihasilkan oleh gen Vir
berperan untuk memotong dan men transfer T-
DNA ke inang. Proses perpindahan T-DN A ke
sel taoaman diawali dengan pemotongan utas
T-DNAdari plasmidTi. Protein VrrDl dan VrrD2
yang memiliki aktivitas endonuklease akan
mengenali sekuen batas T-DNA dan memotong
utas DNA pada posisi tersebut dan melepaskan
utas tunggal T-DNA. Setelah pemotongan,
protein VirD2 tetap terikat secara kovalen pada
ujung 5' utas T-DNA (batas kanan). Asosiasi
Gambar 2. Proses transformasi genetik menggunakan perantara Agrobacterium tumefaciens
20
VirD2 melindungi T-DNA dari aktivitas
eksonuklease pada ujung 5' T-DNA dan juga
berfungsi membedakan ujung 5' T-DNA (batas
kanan) sebagai ujung yang akan ditransfer
terlebih dahulu ke sel tanaman. Sintesis utas T-
DNA dimulai dari batas kanan T-DNA dan
berlangsung dalam arah 5' ke 3'. Kompleks utas
tunggal T-DNA-VirD2 diselubungi oleh VrrE2.
Proses pemotongan T-DNA dan pembentukan
kompleks T-DNA-VrrD2dijelaskao pada Gambar
2.AsosiasikompleksT-DNA-VrrD2dengao VrrE2
mencegah serangan nuklease dan berfungsi
membentangkan utas kompleks T-DNA
sehingga bentuknya menjadi lebih ramping dan
mudah melintasi kanal membran (de la Riva et
al. ]998).
 Protein yang dihasilkan oleh gen Vir
berperan untuk memotong dan mentransfer T-
DNA ke inang. Proses perpindaban T-DNA ke
sel tanaman diawali dengan pemotongan utas
T-DNAdari plasmid Ti, Protein VrrDI dan VirD2
yang memiliki aktivitas endonuklease akan
mengenali sekuen batas T-DNAdan memotong
utas DNA pada posisi tersebut dan melepaskan
utas tunggal T-DNA. Setelah pemotongan,
protein VrrD2 tetap terikat secara kovalen pada
ujung 5' utas T-DNA (batas kanan). Asosiasi
VirD2 melindungi T-DNA dari aktivitas
eksonuklease pada ujung 5' T-DNA dan juga
berfungsi membedakan ujung 5' T-DNA (hatas
kanan) sebagai ujung yang akan ditransfer
terlebih dabuJu ke sel tanaman. Sintesis utas T-
DNA dimulai dari batas kanan T-DNA dan
berlangsung dalam arab 5' ke 3'. Kompleks utas
tunggal T-DNA-VrrD2 diselubungi oleh VirE2.
Proses pemotongan T-DNA dan pembentukan
kompleks T-DNA-VuD2 dijelaskan pada
Gambar 2. Asosiasi kompleks T-DNA-VirD2
dengan VrrE2 mencegab serangan nuklease dan
berfungsi membentangkan utas kompleks T-
DNA sehingga bentuknya menjadi lebih ramping
dan mudah melintasi kanal membran (de la Riva
et al. 1998).
Gambar 2 mengilustrasikan proses
transforroasi genetik menggunakan perantara
Agrobacterium tumefaciens, terdiri 8 tahap
utama: (1) pengenalan dan pelekatan
Agrobacterium pada sel inang, (2) pengindraan
sinyal tanaman yang spesifik oleh dua
komponen sistem transduksi sinyal pada
Agrobacterium yaitu VuA/VrrG, (3) aktivasi gen
vir yang memulai proses transfer T-DNA, (4)
salinan T-DNA yang akan dipindahkan ke inang
diproduksi oleh kerja protein VrrDIID2, (5) T-
DNAdihantarkan dalam bentuk kompleks VrrD2-
DNA, bersama-sama dengan beberapa protein
vir lainnya ke dalam sitoplasma sel inang, (6) Vir
E2 berasosiasi dengan utas T-DNA dan bergerak
menuju sitoplasma sel inang, (7) kompleks T-
DNA dimasuk:kan ke dalam inti sel inang melalui
21
proses impor aktif dan (8) di dalam inti, T-DNA
dibawa menuju ke titik tempat integrasi DNA
pada kromoson, kemudian protein-protein
pengawal T-DNA terlepas dan DNA akhirnya
terintegrasi ke dalam genom inang(Tztira &
Citovsky, 2(02).
Transpor kompleks T-DNA dan protein
Vir lainnya (VrrE2 dan Virf), dari bakteri menuju
ke sel inang melalui sistem sekresi tipe Iv. Sistem
sekresi tipe IV adalah kanal penghubung
bakteri-inang yang tersusun atas protein VrrD4
dan 11jenis protein ViTB (Tzfira & Citovsky,
2002; Judd et al. 2005). Protein-protein VrrB
membentuk kanal membran dan juga berfungsi
sebagai ATPase yang menyediakan energi
untuk pembentukan kanal maupun proses
ekspor T-DNA. VirD4 berperan menunjang
interaksi kompleks T-DNA-VlrD2 dengan
komponen sekresi VirB (Gelvin, 2003). VirD2
pada kompleks T-DNA akan mengarahkan
pergerakan kompleks menuju leeprotein VrrD4
pada kanal sekresi dan akhirnya menuju ke
sitoplasma sel inang. Kanal membran oleh VrrB
komplek dijelaskan pada Gambar 3.
Kompleks T-DNAditargetkan menuju ke
nukleus melintasi membran inti. Sinyal lokasi
inti atau nuclear location signals (NLS) yang
terdapat pada protein VirD2 dan VirE2
mengarahkan kompleks menuju ke inti sel.
Protein VirF juga diduga berperan dalam
penargetan T-DNA ke nukleus (de la Riva et al.
1998). Penghantaran kompleks T-DNAmenuju
nukleus dibantu oleh perangkat transpor
intraseluJer yang dimiliki oleh sel inang. Dynein
dan mikrotubula pada sel tanaman targetdiduga
memfasilitasi transpor T-DNA melintasi
sitoplasma. Kompleks T-DNA masuk ke dalam
inti sel melalui kompleks pori nukleus atau
nuclear-pore complex (NPC)(Tztira & Citovsky,
2(06). Proses masuknya T-DNA ke dalam inti
sel melibatkan kerja sama antara faktor-faktor
inang seperti karyopherin a (KAPa) dan protein
interaksi VirE2 1 atau VirE2-interacling
 T-pilus

Core

Substrate
recruitment/
energization

Gambar 3. Proses transpor komplek T-DNA dan protein Vir dari bakteri menuju
sel inang melalui kanal membran yang tersusun oleh kompleks antara
Vir B 1-11 dan VrrD4 (McCullens & Binns, 2(06).

protein 1 (VIPI); dengan faktor-faktor asal
bakteri seperti VirD2, VirE2 dan VIl"E3(Tzfira et
al.2002).
Integrasi T-DNA ke dalam genom inang
merupakan tahap paling menentukan dalam
transformasi genctik. Mekanisme molekuler
yang mendasari integrasi T-DNAmasih belum
jelas. Integrasi T-DNA diduga terjadi melalui
rekombinasi yang difasilitasi oleh perangkat
perbaikan DNA sel inang. Utas tunggal T-DNA
diubah menjadi molekul intermediat berutas
ganda. Molekul intermediat tersebut akan
dikenali sebagai fragmen DNA yang putus, dan
kemudian akan digabungkan kembali ke dalam
genom inang (Tzfira & Citovsky, 2(06).
Hal penting dalam proses transfonnasi
meialuiA. tumefaciens ini adalah transferT-DNA
ke inti tanaman target yang diinduksi oleh
ekspresi gen-gen vir serta ekspresi gen-gen
yang tertransformasi (Liu et a/. 1992). Selain itu,
integrasi T-DNA yang membawa transgen ke
dalam genom resipien, akan mengaLami sedikit
pengaturan kembali secara intra dan
intermolelcu1er, untuk memulihkan sistem

22
transkripsi dan translasi genom tanaman
resipiennya. Transformasi melalui
Agrobacterium lebih menjamin kestabilan
genom tanaman resipien (Sheng & Citovsky,
1996).
APLIKASI Agrobacterium tumefaciens
DALAM TRANSFORMASI
Penggunaan Agrobacterium
tumefaciens sebagai perantara dalam
transformasi gen pada rumput laut pertama kali
dilaporkan oleh Cheney et 01. (2001). Namun
aplikasi Agrobacterium tumefaciens ke rumput
laut masih belum banyak. Penggunaan metode
ini lebih umum digunakan pada tanaman tingkat
tinggi. Beberapa penelitian telab membuktikan
babwa A. tumefaciens ini dapat digunakan
sebagai perantara dalam transfer gen pada
rumput laut.
Penggunaan A. tumefaciens dalam
transformasi gen pada rumput laut sudah mulai
banyak dilakukan di Indonesia. Handayani
(2013) menggunakan A. tumefaciens untuk
mentransfer gen lisozim ke genom Kappaphycus
alvarezii strain eoklat.Selain pada gen lisozim,
transformasi genetik dengan menggunakan A.
tumefaciensini juga dilak:ukan pada transfer gen
lain seperti Sitrat sintase (Daud, 2013). Gen lain
yang sedang ditransformasikan ke K. alvarezii
adalah metalotionin II, SOD (superoxide
dismutase) dan alginat,
Transfer gen lisozim bertujuan untuk
mendapatkan bibit rumput laut yang tahan
terhadap infeksi bakteri penyebab penyakit ice-
ice. Transfer gen lisozim ini dilakukan dibawab
kendali promotor CaMV (cauliflower mosaic
ViniS) dan terminator NOS (NopalineSynthase)
(Handayani, 2013).Gen sitrat sintse
ditransformasikan ke talus rumput laut dengan
tujuan untuk mendapatkan bibit yang laban
terhadap stres lingkungan (Daud,
20 13).Sedangkan genmetalotionin llmemiliki
kemampuan toleransi terhadap perairan dengan
kandungan logam berat tinggi.
23
FAKTOR PENENTU KEBERHASlLAN
TRANSFORMASI
Keberhasilan transformasi genetik
dengan menggunakan perantara A.
tumefaciensdiduga ditentukan oleh beberapa
faktor, antara lain:
a. Lama Infeksi
Infeksi merupakan proses kontak
langsung antara Agrobacterium tumefaciens
dengan thalus rumput laut sehingga terjadi
proses perpindahan T-DNA dari A. tumefaciens
ke genom rumput laut. Lama infeksi dapat
dilaknkan selama 1(}'60 menit(Handayani,2013).
Sampai saat ini, penelitian mengenai pengaruh
lama infeksi terbadap keberbasilan transformasi
beJum banyalc dilakukan, sehingga informasi ini
masih sedikit dan tidak menutup kemungkinan
akan diperoleh lama infeksi yang optimal.
b. Lama Ko-kultivasi
Ko-kultivasi memiliki arti mengkultur
seeara bersama antara rumput laut dan
Agrobacterium tumefaciens dalam satu media
kultur tertentu. Ko-kultivasi d:ilakukan diruang
gelap dan dapat dilakukan selama 1-3 had,
disesuaikan dengan kondisi rumput laut yang
akan ditransformasi (Handayani, 2013). Namun
demikian, lama ko-kultivasi yang kurang dari
sehari memungkinkan juga untuk dilakukan.
Pemilihan kondisi ruang gelap bertujuan
menjaga A. tumefaciensagar tetap hidup, karena
bakteri ini hidup dan tumbuh di kondisi gelap.
c. KonsentrasiAgrobacterium tumefaciens
Konsentrasi A. tumefaciens yang
dimaksud disini adalab nilai optical density
(OD) dengan menggunakan spektrofotometer.
Nilai OD A. tumefaciens yang telab dilakukan
adalab 0,5-1,0 (Handayani, 2013). Nilai OD yang
kecil «0,5) meyebabkan penurunan persentase
transformasi. Sedangkan nilai OD yang besar
(>1,0) menyebabkan infeksi herlebih sehingga
thalus rum put laut yang ditransformasi
mengalami kematian.
d. Konsentrast asetosiriogoo
Asetosiringone merupakan senyawa
fenolik yang mampu dideteksi oleh protein trans-
membran pada VirA. Protein dari VirA ini akan
menginduksi VirG melalui fosforilasi, yang
selanjutnya VirG akan mengaktifkan ekspresi
berbagai Vir lainnya (Winans, 1992) dan
akhimya terjadi proses perpindahan T-DNAdari
A. tumefaciens ke genom rumput laut.
Penambahan asetosiringone ini bertujuan untuk
menginduksi proses infeksi yang dilakukan oleh
A. tumefaciens. Konsentrasi asetosiringone
yang umum digunakan sekitar 100 j.1M
(Handayanj,2013).
PENUTUP
Agrobacterium tumefaciens dapat
digunakan sebagai perantara dalam transfonnasi
genetik pada rumput laut khususnya pada
Kappaphycus alvarezii. Gen-gen yang telah
berhasil ditransformasikan dengan perantaraA.
tumefaciens ini antara lain lisozim, sitrat sintase
dan metalotionin. Sedangkan gen yang sedang
dalam tahap penelitian adalah superoxide
dismutase dan alginate. Hal ini menjadi
tantangan bagi kita untuk lebib mengoptimalkan
keberhasilao transformasi genetik pada rumput
laut dengan menggunakan perantara A.
tumefaciens.
DAFfAR PUSTAKA
BroekA. V &J. Vanderleyden. 1995. Tberoleof
bacterial motility, chemotaxis, and
attachment in bacteria-plant interactions.
Mol Plant Microbe In. 8 (6): 800-810.
Buchanan R. E. &N. E. Gibbons. 1974. Bcrgeys
manual of determination bacteriology
Eight edition. The Williams and Wilkins
co.
24
Cheney D.P, B. Metz,& J. Stiller. 2001.
Agrobacterium-mediated genetic
transformation in the macrosoopicmarine
red algae Porphyra yezoensis. J Phycol.
37: 11-12.
Daud, R. F. 2013. Introduksi gen sitrat sintase
ke dalam rumput laut Kappaphycus
alvarezii menggunakan Agrobacterium
tumefaciens. Tesis, Institut Pertanian
Bogor.
de la Riva G A, J. Gonzalez-Cabrera, R. Vazquez-
Padron, & C. Ayro-pardo. 1998.
Agrobacterium tumefaciens: a natural
tool for plant transformation. Electron J
Biotechnol. 1(3): 1-16.
Douglas C. r., R. J. Stanloni, R. A. Rubin, & E.
W. Nester. 1985. Identification and
genetic analysis of an Agrobacterium
tumefaciens chromosomal virulence
region. J Bacteriol. 161: 850-860.
Draper J, R. Scott, P.Armitage, & R. Walden.
1993. Plant genetic transformation and
gene expression. A laboratory manual
hand book. Blackwel Sci. Publ.
Escobar M. A. & A. M. Dandekar. 2003.
Agrobacterium tumefaciens as an agent
of disease. Trends Plant Sci. 8 (8): 380-
386.
Gelvin S. B. 2000. Agrobacterium and plant
genes involved in T-DNA transfer and
integration. Annu Rev Plant Physiol Mol
BioI. 51: 223-256.
Handayani T. 2013. Konstruksi vektor biner
dantransformasi gen lisozim pada rumput
laut Kappaphycus alvarezii
menggunakan perantaraA. tumefaciens.
Tesis. lnstitut Pertanian Bogor,
Hiei Y.,T. Komari, T. Kobu. 1997.Transformation
of rice mediated by Agrobacterium
tumefaciens. Plant Mol BioI. 35: 205-218.
Judd P.K, D. Mahli, &A. Das. 2005. Moleculer
characterization of the Agrobacterium
tumefaciens DNA transfer protein VirB6.
Microbiology. 151: 3483-3492.
Liu C. N., Q. X. Li,& S. B. Gelvin. 1992.Multiple
copies of virG enhance the transient
transformation of celery, carrot and rice
tissue by Agrobacterium tumefaciens.
Plant Mol BioI. 20 (6): 1071-1087.
Loeidin I. H. S. 1994. Transfonnasi genetikpada
tanaman: beberapa teknik dan aspek
penting. Hayati. I (2): 66-67.
McCullen C. A. & A. N. Binns. 2006.
Agrobacterium tumefaciens and plant
cell interaction and activities required for
interkingdom macromolecular transfer.
Annu. Rev. Cell. Dev. BioI. 22: 101-127.
Miller M. B. &B. L. Bassler. 2001. Quorum
sensing in bacteria. Ann Rev Microbial.
55: 165-199.
RosenR &E. Z. Ron. 2011. Proteomicsofaplant
pathogen: Agrobacterium tumefaciens.
Proteomics. II: 3134-3142.
Sheng J. & V. Citovsky. 1996. Agrobacterium-
plant cell DNA transport: have virulence
protein, will travel. The Plant Cell. 8:
1688-1710.
25
Songstad D. D., D. A. Somers, & R J. Grusbacb.
1995. Advanced in altcrnatif DNA
delifery techniques. Plant Cell Tissue
Organ Cult. 40: 1-15.
Sulistijo. 2002. Penelitian budidaya rumput laut
(algae makro/seaweed) di Indonesia.
Pidato Pengukuhan Ahli Peneliti Utama
Bidang Akuakultur, Pusat Penclitian
Oseanografi, Lcmbaga Ilmu
Pengetahuan Indonesia. Jakarta.
Tzfira T. & V. Citovsky. 2002. Partners-in-
infection: host proteins involved in the
transformation of plant cells by
Agrobacterium. Trends Cell BioI. 12 (3):
121-129.
Tzfira T. & V. Citovsky. 2003. The
Agrobactcrium-plant cell interaction:
taking biology lessons from a bug. Plant
Physiol. 133:943-947.
Tzfira T. & V. Citovsky. 2006. Agrobacterium-
mediated genetic transformation of
plants: biology and biotechnology. Curr
OpinPlantBiotechnol. 17: 147-154.
Tzfira T., M. Vaidya & V. Citovsky. 2002.
Increasing plant susceptibility to
Agrobocterlum infection by
overexpression of the Arabidopsis
nuclear protein VIP 1. Cell BioI. 99 (16):
10435-10440.
Winans S. C. 1992.Two-way chemical signaling
in Agrobacterium-plant interactions.
Microbiol Rev. 56 (I): 12-31.