KROMATOGRAFI CAIRAN KINERJA TINGGI

KROMATOGRAFI CAIRAN KINERJA TINGGI ADALAH Atechique dan kimia analitik yang

digunakan untuk memisahkan identifikasi dan kuantifikasi setiap komponen dalam suatu
campuran. Seperti halnya bentuk-bentuk kromatogrphy lainnya dalam HPLC ada fase gerak. Yang
dipaksa oleh pompa untuk melewati sistem dan ada fase sationary yang disebut kolom. Yang terletak
di oven tempat suhunya bisa dikontrol.

Sampel dapat secara otomatis disuntikkan ke sistem HPLC dengan menggunakan sampler otomatis
HPLC. Atau bisa secara manual dimasukkan ke dalam injektor menggunakan jarum suntik. ini juga
merupakan detektor yang terpasang pada sistem HPLC. Yang mengukur analit setelah pemisahannya
di kolom. Pompa memaksa fase gerak melalui kolom dan detektor di bawah tekanan tinggi. Dalam
sistem HPLC, pompa vacum dan Pak Adagger terhubung ke pompa dan digunakan untuk
menghilangkan gas terlarut dari pelarut. Pompa mendorong setiap pelarut ke ruang pencampurandi
mana pencampuran terjadi di bawah tekanan yang lebih tinggi. HPLC umumnya menggunakan elusi
isokraktik atau gradien dan mode isokratis komposisi fase gerak tetap konstan di seluruh
prosedur. Sedangkan dalam mode gradien komposisi fase seluler diubah selama proses pemisahan.

Biologi dengan animasi

Pengenalan sampel dapat dilakukan dengan berbagai cara. Metode yang paling sederhana adalah
dengan menggunakan katup injeksi pada posisi beban, aliran pelarut bertekanan tinggi ke kolom
secara langsung. Loop dimuat pada tekanan atmosfer dari jarum suntik melalui sampel kelebihan port
jarum keluar loop melalui port ventilasi. Setelah memuat sampel, katup dialihkan ke posisi
injeksi. Aliran yang dikirimkan oleh pompa mengalir melalui loop yang memaksa sampel di depannya
mengalir ke colum. kemudian katup kembali ke posisi beban dan fase gerak memindahkan sampel
melalui kolom. Pemisahan ini didasarkan pada partisi yang berbeda dari komponen sampel antara fase
bergerak dan stasioner. Komponen yang memiliki lebih banyak afinitas terhadap fase gerak, akibatnya
lebih sedikit afinitas terhadap fase stasioner bergerak lebih cepat dan lolos terlebih dahulu dan
komponen yang memiliki lebih banyak afinitas terhadap fase satasi, akibatnya lebih banyak interaksi
bergerak lebih lambat dan terdilusi kemudian. Pemisahan ini dapat dilakukan sesuai dengan jenis
HPLC yang digunakan. Ada dua jenis utama fase balik HPLC dan fase noemal. Fasa cadangan
memiliki fase diam non polar dan fase gerak sedang. Satu fase stasioner yang umum adalah silika
yang telah dimodifikasi dengan menempelkan gugus alkil rantai lurus ke permukaannya seperti ITAT
sebagaimana akan gugus c18 atau gugus oktal c8. Dalam hal ini semakin hidrofobik analit semakin
ditahan pada fase diam. Semakin polar mereka , semakin mereka lebih suka fase seluler. Kemudian
kromatografi fase normal, fase diam adalah polar dan fase gerak adalah non polar. Metode ini
memisahkan analit berdasarkan afinitasnya untuk permukaan stasioner kutub seperti silika. Dalam hal
ini semakin kutub analit semakin ditahan pada fase stasioner. Semakin hidrofobik mereka, semakin
banyak yang akan memilih fase gerak. Sebagai co mpounds ellyioy dari kolom. Saat berinteraksi
dengan detektor, berbagai jenis detektor dapat digunakan seperti UV detektor ini yang menunjukkan
spektrum penyerapan di daerah ultraviolet atau terlihat. untuk deteksi UV lampu pelepasan deuterium
sebagai sumber cahaya digunakan dan empat komponen deteksi dan wilayah yang terlihat tungsten
adalah lampu yang digunakan. Kemudian UV detektor ini kita juga dapat menemukan celah masuk,
lensa, kisi prima atau difraksi, celah keluar, sel aliran dan detektor untuk pengukuran
penyerapan. cahaya dari lampu ditampilkan ke prim dan tersebar sesuai dengan panjang
gelombang. Ketika pengukuran dilakukan dengan panjang gelombang spesifict, sudut prims
disesuaikan sehingga cahaya gelombang ini dapat bersinar pada sel aliran s fanatik senyawa dari
kolom. Mereka memasuki sel aliran. Dimana elektron ikatan dan non-ikatan senyawa ini dapat
menyerap energi dalam bentuk ultraviolet atau cahaya tampak. Cara di mana data akhir ditampilkan
didasarkan pada komputer dalam perangkat lunak. Jumlah puncak yang ada dapat menunjukkan
berapa banyak komponen campuran. biasanya sumbu x kromatogram HPLC menunjukkan jumlah
waktu yang dibutuhkan analit untuk melewati kolom dan mencapai detektor, biasanya sumbu y atau
area puncak adalah cerminan dari jumlah analit spesifik yang ada.