LAPORAN

PRAKTIK KERJA LAPANGAN

KARAKTERISASI SEL PUNCA DEWASA (ADULT STEM CELL)

DENGAN METODE IMUNOSITOKIMIA DI PUSAT PENELITIAN DAN
PENGEMBANGAN SEL PUNCA UNIVERSITAS AIRLANGGA

Oleh:
WINDY SEFTIARINI
081611433006

PROGRAM STUDI S-1 BIOLOGI

DEPARTEMEN BIOLOGI

FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI

UNIVERSITAS AIRLANGGA

2019
 LEMBAR PENGESAHAN

Judul : Karakterisasi Sel Punca Dewasa (Adult Stem Cell) dengan

Metode Imunositokimia di Pusat Penelitian dan Pengembangan
Sel Punca Universitas Airlangga

Nama : Windy Seftiarini

NIM : 081611433006

Podi : S1 Biologi

Pembimbing Instansi Pembimbing Prodi

Prof. Dr. Fedik Abdul Rantam drh. Prof. Drs. Win Darmanto M.Si.,Ph.D.

NIP. 195910031987011001 NIP. 196106161987011001

Mengetahui

Ketua Departemen Biologi

Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Airlangga

Dr. Sucipto Hariyanto, DEA.

NIP. 195609021986011002
 KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis haturkan kepada Allah SWT yang telah melimpahkan

rahmat, karunia, dan hidayah-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan kegiatan

Praktik Kerja Lapangan dan penyusunan Laporan Praktik Kerja Lapangan dengan

Judul laporan “Karakterisasi Sel Punca Dewasa (Adult Stem Cell) dengan Metode

Imunositokimia di Pusat Penelitian dan Pengembangan Sel Punca Universitas

Airlangga”

Penulis menyadari sepenuhnya bahwa penulisan dan penyusunan laporan

ini dapat berjalan baik dan lancar karena adanya pengarahan, bimbingan, dan

bantuan berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis ingin menyampaikan ucapan

terima kasih kepada :

1. Dr. Sucipto Hariyanto, DEA. selaku Ketua Departemen Biologi Fakultas Sains

dan Teknologi Universitas Airlangga.

2. Dra. Alfiah Hayati, M. Kes. selaku dosen PJMK PKL Prodi Biologi Fakultas

Sains dan Teknologi Universitas Airlangga.

3. Prof. Drs. Win Darmanto, M. Si., Ph.D. selaku Dosen pembimbing Fakultas yang

telah memberikan arahan selama penulisan laporan Praktik Kerja Lapangan.

4. Dr. Purwati, dr., Sp.PD, K-PTI, FINASIM selaku Ketua Instansi beserta

pembimbing Instansi yang telah membimbing penulis selama melaksanakan

kegiatan Praktik Kerja Lapangan.

5. Helen Susilowati, S.KM., M.Si selaku koordinator PKL di instansi yang telah

mengarahkan alur kegiatan selama pelaksanaan Praktik Kerja Lapangan.

6. Seluruh staff Instansi Pusat Penelitian Dan Pengembangan Stem Cell

Universitas Airlangga yang telah membantu terlaksananya Praktik Kerja

Lapangan ini.

7. Orang tua yang selalu mendukung dan mendoakan penulis sehingga dapat

menjalankan kegiatan Praktik Kerja Lapangan dan berhasil menyelesaikan

laporan Praktik Kerja Lapangan dengan baik.

Penulis menyadari bahwa laporan ini masih jauh dari sempurna, sehingga

kritik dan saran yang membangun sangat penulis harapkan untuk kebaikan di

masa yang akan datang, dan semoga laporan ini bermanfaat bagi pembaca.

Surabaya, 11 Maret 2019

Penulis

Windy Seftiarini
 DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ........................................................................................................ i

HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................ .............ii

KATA PENGANTAR ....................................................................................................iii

DAFTAR ISI .................................................................................................................. v

DAFTAR GAMBAR .................................................................................................... vii

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang .......................................................................................................... 1

1.2 Rumusan Masala............................................................................................................2

1.3 Tujuan....................................................................................................................... 2

1.4 Manfaat...............................................................................................................3

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1Profil Institusi Pusat Penelitian dan Pengembangan Stem Cell UNAIR ....................... 4

2.1.1 Sejarah Institusi ...................................................................................................... 4

2.1.2 Visi dan Misi .......................................................................................................... 5

2.1.3 Tujuan Institusi....................................................................................................... 6

2.1.4 Strategi Pencapaian ................................................................................................ 7

2.2 Stem Cell ................................................................................................................... 7

2.2.1 Pengertian Stem Cell...................................................................................................7

2.2.2 Sumber Stem Cell........................................................................................................9

2.2.3 Karakteristik Stem Cell..............................................................................................10

2.2.4 Jenis Stem Cell..........................................................................................................13

2.2.5 Pengolahan Stem Cell................................................................................................19

2.2.6 Potensi aplikasi klinis Stem Cell...............................................................25

BAB III. METODE PRAKTIK KERJA LAPANGAN

3.1 Tempat dan Waktu Praktik Kerja Lapangan............................................................. 28

3.2 Alat dan Bahan ........................................................................................................ 28

3.3 Prosedur Praktik Kerja Lapangan................................................................................28

3.4 Cara Kerja....................................................................................................................29

3.4.1 Prosedur Tahap Preparasi..........................................................................................30

3.4.2 Prosedur Memasuki Ruang Proses............................................................................35

3.4.3 Prosedur Isolasi Mesenchymal Stem Cell dari Jaringan Lemak Tikus......................37

3.4.4 Prosedur Isolasi Hematopoetic Stem Cell.................................................43

3.4.5 Prosedur Freezing Sel...............................................................................................46

3.4.6 Prosedur Thowing Sel...............................................................................................48

3.4.7 Prosedur Karakterisasi Mesenchymal Stem Cell..............................................50

3.4.8 Prosedur Splitting Sel..........................................................................................53

3.4.9 Prosedur Karakterisasi Hematopoetic Stem Cel..............................................55

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Pengamatan.........................................................................................................61

4.2 Pembahasan..................................................................................................................62

BAB V PENUTUP

5.1 Kesimpulan ............................................................................................................. 67

5.2 Saran ....................................................................................................................... 68

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................... 69

 DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Stem Cell mesenkimal yang tumbuh konfluen..................................................9

Gambar 2. Kemampuan diferensiasi setiap stem cell........................................................12

Gambar 3. Perkembangan awal embrio.................................................................13

Gambar 4. Tahapan hematopoiesis pada stem cell hematopoetik.........................16

Gambar 5. Tahapan diferensiasi pada stem cell mesenkimal................................19

Gambar 6. Pemisahan sel mononuklear dengan gradien densitas.........................21

Gambar 7. Aplikasi klinis stem cell untuk pengobatan regeneratif ......................26

Gambar 8. Dokumentasi prosedur preparasi alat................................................30

Gambar 9. Dokumentasi prosedur memasuki ruang laboratorium........................35

Gambar 10. Dokumentasi prosedur isolasi Mesenchymal Stem Cell.....................37

Gambar 11. Dokumentasi prosedur isolasi Hematopoetic Stem Cell.....................43

Gambar 12. Dokumentasi prosedur freezing sel....................................................46

Gambar 13. Dokumentasi prosedur Thawing sel...................................................48

Gambar 14. Prosedur Karakterisasi Mesenchymal Stem Cell................................50

Gambar 15. Dokumentasi prosedur splitting sel ...................................................53

Gambar 16. Prosedur Karakterisasi Hematopoetic Stem Cel.................................55

Gambar 17. Dokumentasi hasil Karakterisasi Mesenchymal Stem Cell.................61

Gambar 18. Dokumentasi Karakterisasi Hematopoetic Stem Cell (MSCs)...........62
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Dalam beberapa dekade terakhir ini penelitian dan pengetahuan tentang

stem cell (sel punca) terus meningkat pesat. Sel punca mempunyai potensi

regeneratif yang tinggi, karena dapat berdiferensiasi menjadi sel yang spesifik dan

mempunyai kemampuan untuk memperbaharui diri atau beregenerasi melalui

pembelahan sel. Dengan demikian sel punca berpeluang menjadi terapi modern

melalui pendekatan regeneratif yang memberi harapan kesembuhan berbagai jenis

penyakit yang sulit untuk disembuhkan seperti penyakit genetik, degeneratif,

trauma dan keganasan . Pada awalnya terapi sel punca banyak menggunakan sel

punca embrional yang menggunakan embrio sebagai sumber sel. Mengingat

adanya faktor keamanan dan masalah etik dalam pengambilan embrio sebagai

sumber sel, maka dikembangkan jenis sel punca baru yaitu sel punca dewasa

(Adult Stem Cells) dan induced Pluripotent Stem Cells (iPSC) atau sel punca

pluripoten.

Sel punca dewasa merupakan sel yang belum berdiferensiasi dan kadang-

kadang ditemukan dalam keadaan inaktif di jaringan dengan fungsi spesifik dalam

tubuh. Sel punca tersebut memiliki kapasitas diferensiasi terbatas bila

dibandingkan dengan sel punca embrional. Sel tersebut hanya dapat

berdiferensiasi menjadi beberapa jenis sel yang umumnya segolongan seperti stem

cell hematopoietik, jantung, jaringan saraf, mesenkimal (osteosit, kondrosit,

adiposit, dan berbagai jenis sel penyusun jaringan ikat), kulit, dan sebagainya.
Walaupun demikian, pada beberapa golongan, dapat terjadi transdiferensiasi, yaitu

diferensiasi di luar golongan tersebut. Sebagai contoh, sel dari derivat jaringan

adiposa dapat mengalami transdiferensiasi menjadi sel dengan karakteristik

menyerupai kardiomiosit. Teknik isolasi stem cell dewasa juga sulit karena

konsentrasinya sangat rendah dibandingkan dengan sel-sel di sekitarnya yang

telah matur sehingga dapat menurunkan kemampuan multiplikasi stem cell.

Meskipun demikian, stem cell jenis ini memiliki risiko yang jauh lebih kecil

dalam mengalami diferensiasi menjadi keganasan bila dibandingkan dengan stem

cell embrionik. Hal tersebut menjadi tantangan tersendiri dalam mengembangkan

stem cell dengan gabungan kelebihan dari masing-masing karakteristik stem cell

embrionik dan dewasa.

Sel punca yang telah diisolasi dan dikultur pada media nantinya akan

berproliferasi yang mengandung berbagai populasi sel yang bersifat heterogen,

sehingga diperlukan karakterisasi untuk menguji bahwa sel yang diisolasi dan

dikultur merupakan stem cell. Karakterisasi stem cell dilakukan dengan metode

imunositokimia menggunakan marker antibodi sekunder.

1.2 Rumusan Masalah

1. Bagaimana prosedur karakterisasi Mesenchymal Stem Cell (MSCs)

dengan metode imunositokimia?

2. Bagaimana prosedur karakterisasi Hematopoietic Stem Cell (HSCs)

dengan metode imunositokimia?

1.3 Tujuan
 1. Untuk mengetahui prosedur karakterisasi Mesenchymal Stem Cell

(MSCs) dengan metode imunositokimia

2. Untuk mengetahui prosedur karakterisasi Hematopoietic Stem Cell

(HSCs) dengan metode imunositokimia

1.4 Manfaat

1. Dapat mengetahui prosedur karakterisasi Mesenchymal Stem Cell

(MSCs) dengan metode imunositokimia

2. Dapat mengetahui prosedur karakterisasi Hematopoietic Stem Cell

(HSCs) dengan metode imunositokimia

 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Profil Pusat Penelitian dan Pengembangan Stem cell Universitas

Airlangga

2.1.1 Sejarah

Universitas Airlangga didirikan pada tanggal 10 November 1954

berdasarkan Peraturan Pemerintah No. 57 Tahun 1954 tentang Pendirian

Universitas Airlangga, yang diubah dengan Peraturan Pemerintah No. 3 Tahun

1955.

Universitas Airlangga diselenggarakan berdasarkan atas azas universal

dan objektif dalam pengembangan ilmu pengetahuan untuk mencapai kebenaran,

kebebasan akademik, kemanfaatan, dan keadaban. Pada saat ini Universitas

Airlangga memiliki 14 fakultas dan 1 program pascasarjana dan memiliki 127

program studi (prodi) dari berbagai jenjang, meliputi program akademik, vokasi,

dan spesialis.

Pusat Penelitian dan Pengembangan Stem Cell merupakan salah satu unsur

penunjang Universitas Airlangga yang mempunyai tugas utama melakukan

penelitian dan pengembangan dibidang stem cell dan produk-produk stem cell

terkait.

Pusat Penelitian dan Pengembangan Stem cell merupakan hasil kolaborasi

antara Universitas Airlangga dengan RSUD Dr. Soetomo yang dimulai dari tahun

1990 diawali dengan pembentukan bank jaringan yang bergerak dalam bidang

biomaterial memproduksi scafold untuk pasien trauma.

 Pada tahun 1998 berdiri laboratorium Culture Cell di bawah Lembaga

Penyakit Tropik Universitas Airlangga, laboratorium ini berfungsi untuk

penelitian penelitian kultur sel bagi mahasiswa, baik S1, S2, maupun S3. Tahun

2000 bank jaringan berubah menjadi biomaterial center – tissue bank di RSUD

Dr. Soetomo dimana pada tahun 2006 berubah menjadi instalasi of biomaterial

center – tissue bank. Kolaborasi untuk stem cell di Universitas Airlangga dan

RSUD Dr. Soetomo sudah berjalan sejak awal, tetapi baru dilegalkan pada tahun

2007 dengan adanya pertemuan antara Dekan Fakultas Kedokteran Universitas

Airlangga dengan Direktur RSUD Dr. Soetomo dan Kepala Departemen.

Tahun 2008 laboratorium culture cell berkembang menjadi laboratorium

stem cell. Tahun 2011 dibentuk suatu wadah untuk riset stem cell baik invitro,

animal model maupun clinical trial (Regenerative Medicine Center & Stem cells)

yang merupakan kolaborasi antara laboratorium Stem cell Universitas Airlangga,

Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga dan RSUD Dr. Soetomo. Tahun 2013

biomaterial center – tissue bank Dr. Soetomo menjadi Installation of Cell and

Tissue Bank. Laboratorium Stem cell pada tahun 2015 berdasarkan SK Rektor

Nomor 2356/UN 3/2015 menjadi suatu instansi tersendiri dibawah rektor menjadi

Pusat Penelitian dan Pengembangan Stem cell Universitas Airlangga

2.1.2 Visi Misi

Pusat Penelitian dan Pengembangan Stem cell memiliki visi, misi, tujuan

dan strategi pencapaian sebagai berikut :

a. Visi
Menjadi Pusat Penelitian dan Pengembangan Stem cell terkemuka dan berstandar

Internasional dalam bidang Penelitian, Pengujian/analisa dan Pelatihan

Laboratorium untuk mendukung Universitas Airlangga.

b. Misi

1) Menyediakan sarana prasarana untuk kegiatan penelitian dan

pengembangan stem cell untuk universitas, instansi/lembaga penelitian, dan

masyarakat.

2) Menjadi pusat penelitian dan pengembangan stem cell yang

memberikan jasa pelayanan yang berkualitas dan berstandar nasional.

3) Menyediakan layanan penelitian dan pengembangan yang berkelanjutan

dalam bidang stem cell untuk universitas, instansi/lembaga penelitian, dan

masyarakat.

4) Menyediakan sumber daya yang kompeten dan berkualitas dalam

keperluan riset.

5) Melakukan kerjasama dalam bidang penelitian, pelatihan, pengujian,

dan analisis dengan instansi dalam maupun luar negeri.

2.1.3 Tujuan

a. Meningkatkan jumlah penelitian sel punca

b. Mensupport penelitian sel punca yang berkelanjutan.

c. Meningkatkan kolaborasi riset dalam bidang stem cell dalam dan luar negeri.

d. Meningkatkan perolehan jumlah hak paten/HKI dalam bidang Stem cell.

e. Meningkatkan pemahaman kepada masyarakat tentang aspek pengobatan dan

manfaat Stem cell.

f. Mengembangkan keilmuan dan produk unggulan dalam bentuk produksi stem

cell dan metabolit aktifnya.

2.1.4 Strategi Pencapaian

Strategi Pencapaian merupakan pedoman kerja untuk mewujudkan

tercapainya visi, misi dan tujuan Pusat Penelitian dan Pengembangan Stem cell,

yaitu :

a. Pembangunan Laboratorium bersertifikasi GLP.

b. Pembangunan Kandang Hewan Coba bersertifikasi SPF

c. Pelatihan untuk meningkatkan kualitas SDM.

d. Penyelenggaraan acara ilmiah (Workshop, Seminar, Symposium) secara

berkala.

e. Menjalin kerjasama dengan Instansi/Lembaga baik Dalam Negeri maupun

Luar Negeri.

2.2 Stem cell

2.2.1 Pengertian Stem cell

Stem cell adalah sel yang mempunyai sifat self renewel dan plastisitas

yang dapat berdiferensiasi serta memperbanyak diri menjadi berbagai macam sel

untuk membentuk individu. Stem cell dapat dieksplorasi dari embryonal maupun

dari individu yang dewasa (adult stem cell). Stem cell yang berasal dari embrional

dapat berkembang menjadi semua sel dan organ sebagai individu. Sifat stem cell

tersebut disebut dengan totipoten karena sel dieksplorasi berasal dari stadium

blastula 3-5 hari setelah fertilisasi. Sementara itu, stem cell dewasa (adult stem
cell) bersifat pluripotent karena stem cell dapat berkembang untuk membentuk

individu tetapi lebih terbatas dibandingkan dengan stem cell berasal dari

embryonal.

Proses eksplorasi stem cell dapat dilakukan dengan cara mengaktifkan

stem cell dari dalam tubuh sendiri dengan menginisiasi stem cell menjadi aktif,

sehingga disebut dengan aktivasi endogenous stem cell. Pendekatan metode ini

dilakukan agar mendapatkan stem cell yang lebih banyak jumlahnya jika

dibandingkan eksplorasi secara alami yang berarti tanpa pemberian bahan aktivan

stem cell dari dalam tubuh. Purifikasi stem cell menggunakan ficoll isopaque atau

ficoll histopaque jika eksplorasi stem cell dari sel darah perifer danbone marrow.

Namun jika eksplorasi dari organ atau jaringan maka memerlukan enzim untuk

melepaskan sel satu persatu dari membran, jaringan atau organ dengan

menggunakan trypsine atau collagenase.

Proses eksplorasi stem cell dari sel sel darah perifer dan bone marrow yang

perlu diperhatikan adalah penggunaan antikoagulan seperti heparin, EDTA, dan

natrium citrat. Jika persentase berlebihan, maka bersifat toksik yang dapat

merusak membran stem cell, dan jika kurang maka akan terjadi penggumpalan.

Secara empiris yang baik adalah 0,4 mg/ml untuk 5 ml whole blood. Sementara

itu, untuk eksplorasi stem cell dari jaringan atau organ yang perlu diperhatikan

adalah persentase enzim sebagai contoh trypsin yang baik untuk mencerna

jaringan adalah 0,025% jika berlebihan maka membran akan rusak, dan sel tidak

dapat melekat (attachment) pada lapisan fase padat dari petridish/flash,

selanjutnya sel akan melayang-layang dalam medium dan mati kurang lebih
dalam 48 jam.

Stem cell diaktifkan melalui beberapa tahapan yaitu quiscent, nische, dan

aktif. Quiscent atau maintenance adalah pembentukan stem cell yang dipengaruhi

oleh nutrien dan selanjutnya sel tersebut ke tempat yang sesuai dengan lingkungan

mikro (nische). Jika terjadi stimulasi baik secara intrinsik maupun karena faktor

ekstrinsik, maka stem cell menjadi aktif dan akhirnya diikuti proliferasi atau

amplifikasi sel dan berdiferensiasi menjadi sel progenitor yang bersifat oligopoten

yang matur sesuai dengan lingkungan mikro. Tahap ini sangat dipengaruhi oleh

molekul signaling. Karena sifat stem cell ini, maka dapat diinduksi dengan cara

pembuatan lingkungan mikro secara in vitro sehingga sel berkembang menjadi sel

progenitor atau maturasi sel sesuai dengan yang diinginkan (Tuch BE, 2006)

Gambar 1. Stem cell mesenkimal yang tumbuh konfluen 90% setelah dikultur

selama 3 hari, dilihat dengan mikroskop inverted 10x (Rantam, dkk, 2014).
2.2.2 Sumber Stem cell

Pada mamalia, stem cell secara luas dibagi menjadi dua sumber, yaitu

stem cell embryonic, yang diisolasi dari massa sel dalam blastokista, dan sel induk

dewasa, yang dtemuka di berbagai jaringan. Pada organisme dewasa, stem cell

dan sel progenitor berfungsi sebagai sistem perbaikan tubuh dan mengisi kembali

jaringan dewasa. Dalam embrio yang sedang berkembang, stem cell dapat

berdiferensiasi menjadi semua sel terspesialisasi, baik ektoderm, endoderm

maupun mesodrm. Dari semua jenis stem cell, sel yang diambil secara autologous

(dari individu itu sendiri) meilibatkan paling sedikit resiko termasuk diantaranya

reaksi penolakan dari tubuh atau immunorejection. Tiga sumber stem cell dewasa

autologous yang banyak dieksplorasi adalah :

a. Sumsum tulang (bone marrow), yang diambil melalui harvesting

(pemanenan), yaitu pengeboran ke tulang (biasanya tulang paha atau iliaka)

b. Jaringan adiposa (sel lipid), yang membutuhkan ekstraksi dengan sedot

lemak.

c. Darah, yang memerlukan ekstraksi melalui apheresis, dimana darah diambil

dari donor (mirip dengan donor darah), dan melewati sebuah mesin yang

mengekstrak stem cell dan mengembalikan bagian lain dari darah ke donor.

Lebih jauh, stem cell juga dapat dieksplorasi dari darah tali pusat (umbilical

cord) sesaat setelah lahir, dari berbagai macam organ seperti papula gigi, jantung

bagian pericard, otak bagian ventrikel atau bawah, hair folicle, preputium,

pankreas, atrium jantung, testis, peripheral blood mononuclears cell (PBMCs),

membran plasenta, membran amnion, dan epitel uretra.

2.2.3 Karakteristik Stem Cell

Semua bentuk kehidupan berawal dari stem cell yang didefinisikan sebagai

sel yang mempunyai kemampuan membelah asimetri (asymmetric division), yaitu

bisa memperbaruhi dirinya sendiri (Self renewal) dan menghasilkan sel awal atau

progenitor dan berdiferensiasi menjadi berbagai jenis sel. Stem cell dapat diisolasi

dari berbagai jenis organ dan jaringan tubuh dan dapat ditumbuhkan pada cawan

petri. Pada lingkungan ini kemampuan untuk memperbaruhi diri bisa dimanipulasi

dan dipertahankan selama beberapa minggu, bulan, bahkan tahun, menghasulkan

amplifikasi sel yang besar sehingga jumlah stem cell menjadi sangat banyak yang

kemudian dapat berguna untuk terapi sel dan rekayasa jaringan (Mitalipov and

Wolf, 2009).

Di dalam tubuh, pembelahan stem cell sangat jarang terjadi, tetap pada

kondisi tidak aktif dan dormant dalam waktu yang panjang sampai mereka

mendapat sinyal yang sesuai untuk memulai dan akhirnya berhenti membelah.

Kontrol yang ketat pada proses self renewal in vivo dibutuhkan untuk memastikan

stem cell tidak membelah tanpa kontrol, yang akan mengakibatkan pertumbuhan

berlebihan dan menjadi kanker. Karena alasan tersebut, stem cell di dalam

jaringan atau organ jumlahnya sangat sedikit.

Sifat penting lain adalah potensi stem cell, plastisitas atau diferensiasi

untuk menjadi berbagai jenis sel (Scholer, 2007). Terdapat 3 sifat dasar potensi

plastisitas atau diferensiasi stem cell yaitu:

a. Stem cell totipotent, berdiferensiasi menjadi tipe sel embrio dan

ekstraembrionik, yang berumur 1-3 hari. Sel semacam ini bisa membangun
 organisme yang lengkap dan kompleks. Sel-sel ini dihasilkan dari fusi sel

telur dan sel sperma. Sel yang diproduksi oleh divisi pertama telur yang

telah dibuahi juga totipoten.

b. Stem cell pluripoten, adalah keturunan sel totipoten dan dapat

berdiferensiasi menjadi hampir semua sel, termasuk sel germinal tetapi tidak

dapat membentuk jaringan plasenta. Sel pluripoten dapat membentuk lebih

dari 200 tipe sel dari blastocyte berumur 5-14 hari. Sifat ini dimiliki oleh sel

embrio dan sel germinal.

c. Stem cell multipoten, dapat berdiferensiasi menjadi sejumlah jenis sel

(mesoderm, endoderm, dan ectoderm), namun hanya sel yang terkait erat

dengan sel induk. Sifat ini dimiliki oleh stem cell dewasa.

Gambar 2. Kemampuan diferensiasi setiap stem cell (Scholer, 2007).

Potensi stem cell sangat dipengaruhi oleh faktor genetik dari sel, apakah

mengandung gen yang sesuai atau gen yang telah teraktivasi dan diprogram untuk
menjadi sel tertentu. Lingkungan tempat stem cell berada juga sangat

berpengaruh. Sebagai contoh perubahan faktor pertumbuhan lokal, sitokin,

hormon, kontak sel dengan sel, sel dengan mtrik sangat penting pada switching

“on” and “off” gen dan gene pathway bahkan reprogamming gene pathway,

selanjutnya mengubah tipe sel yang terjadi. Klasifikasi potensi stem cell di atas

tidak kaku, saat ini telah dapat dibuktikan perbedaan antara pluripoten dan

multipoten menjadi tidak jelas, beberapa sel mempunyai potensi yang lebih besar

daripada yang diperkirakan sebelumnya. Apoptosis atau programmed cell death

juga merupakan bagian integral pada ploriferasi dan diferensiasi sel (Rantam, dkk,

2014).

2.2.4 Jenis Stem Cell

a. Stem Cell Embrional

Suatu stem cell embryonal diambil dari suatu kelompok sel yang disebut

inner cell mass, yang merupakan bagian dari embrio awal (hari keempat sampai

kelima) yang disebut blastokista. Setelah diambil dari blastokista, sel-sel dari

inner cell mass dapat dikultur menjadi stem cell embryonal. Stem cell embryonal

ini bukanlah embrio. Dalam kenyataan, bukti yang ada menunjukkan bahwa sel-

sel ini di laboratorium tidak bersifat seperti dalam embrio berkembang, berarti

kondisi dimana sel berkembang dalam kultur tampaknya berbeda dengan pada

embrio yang berkembang secara in vivo (Eichmann et al., 1997; Keller, 2005).
Gambar 3. Perkembangan awal embrio. Derivat stem cell embrio diferensiasi

secara in vitro, yang dapat digunakan untuk tipe jaringan yang plural (Gepstein,

2007).

Diferensiasi stem cell yang disebut sebagai plastisitas stem cell adalah

kemampuanya untuk membentuk tipe sel terdiferensiasi, misalnya unipoten yang

terbatas pada pembentukan hanya satu tipe sel terdiferensiasi, multipoten yang

membentuk beberapa tipe sel, dan pluripotent yang membentuk tipe sel yang

berkembang dari tiga lapisan germinal (mesoderm, endoderm, dan ektoderm) dari

mana semua sel tubuh berasal. Satu-satunya sumber stem cell pluripotent yang

diketahui adalah yang diisolasi dan dikultur dari embrio awal manusia dan dari

jaringan janin yang ditakdirkan akan menjadi bagian gonad. Totipoten adalah

kemampuan yang membentuk semua jaringan post-natal serta jaringan ekstra

embrional seperti plasenta, secara esensial mampu untuk meregenerasi suatu

embrio komplit baru dan organisme lengkap (Jiang et. al., 2002;Marsbrom dan

Jeise, 2008).
 Stem cell embryonal diambil dari inner cell mass atau epiblas dari blastosit

dan mampu mengalami suatu pembelahan simetris tak terbatas tanpa diferensiasi

membentuk endoderm, ektoderm, dan mesoderm. Embryonic stem cell (ES)

mampu berkoloni di garis germinal dan membentuk sel telur atau sperma tikus

transgenik dan klonogenik diambil dari sel ES tunggal (Keller, 2005). dapat

diarahkan menjadi semua jenis sel yang dijumpai pada organisme dewasa, seperti

sel darah, sel otot, sel hati, sel ginjal, dan sel-sel lainnya.

b. Stem cell Dewasa (Adult Stem cell)

Suatu stem cell dewasa adalah suatu sel yang belum terdiferensiasi yang

berada dalam suatu jaringan terdiferensiasi, memperbaharui dirinya sendiri (self

renewal), dan menjadi terspesialisasi untuk menghasilkan semua tipe sel matur

dari jaringan tempatnya berasal. Sumber stem cell dewasa meliputi sumsum tulang

belakang , darah, kornea dan retina mata, otak, otot rangka, pulpa de4ntalis, hepar,

kulit, lapisan traktus gastrointestinal, dan pankreas. Stem cell (somatik) dewasa

berfungsi untuk mengganti dan memperbaiki suatu jaringan spesifik,

mempertahankan homeostasis, tetapi potensi diferensiasi dan proliferasi lebih

terbatas dibandingkan sel ES. Stem cell dewasa mungkin memiliki potensi

tersembunyi. Penelitian selama 6 tahun terakhir telah menunjukkan plastisitas

perkembangan luas stem cell spesifik-jaringan, tapi sebagian besar masih

kontroversial (Toma et. al., 2000; Wobus and Boeler, 2005).

Kesamaan antara stem cell dewasa dan embryonal diantaranya adalah

mampu memperbaharui diri dan dapat menyatu dengan jaringan sekitar,

berproliferasi serta berdiferensiasi menjadi sel terspesialisasi setelah transplantasi.

Pebedaannya, stem cell embryonal bisa saja tidak ditemukan dalam embryo,

keberadaan stem cell dewasa telah dikonfirmasi menjadi beberapa garis

keturunan. Stem cell embryonal bersifat pluripoten, sedangkan stem cell dewasa

umumnya bersifat multipoten, oligopoten, atau unipoten. Stem cell embryonal

dapat diekspansi dalam laboratorium sedangkan kebanyakan stem cell dewasa

gagal berproliferasi pada batasan tertentu. Stem cell embryonal cenderung

berdiferensiasi dengan pembelahan sel simetris. Stem cell embryonal dapat

membentuk teratokarsinoma in vivo dan juga meliputi rambut, gigi, tulang, dan

lain-lain. Stem cell dewasa terbagi menjadi stem cell hematopoetik dan stem cell

mesenkimal.

1) Stem cell Hematopoetik

Stem cell hematopoetik adalah sel yang mampu membentuk seluruh

progenitor sel darah untuk hematopoisis dan fungsi imun tubuh. Dengan

demikian, sel ini bisa dikatakan sebagai induk dari segala jenis sel darah yang

beredar dalam tubuh manusia. Stem cell hematopoetic merupakan hasil dari

diferensiasi hemangioblast, yang juga berdiferensiasi menjadi progenitor sel

endotel.

Sekalipun secara logis stem cell hematopoetik hanya mampu

menyelenggarakan fungsi hematopoesis dan imunologis, namun perkembangan

ilmiah yang ada menunjukkan potensi stem cell hematopoetik dalam

berdiferensiasi menjadi sel-sel somatc di luar jalur hematopoesis dan imunologis,

seperti sel saraf, kardiomiosit, sel otot lurik, sel epitel paru, san sebagainya.
Gambar 4. Tahapan hematopoiesis pada stem cell hematopoetik (Birbrair et. al.,

2016)

Mengingat variasi diferensiasinya yang banyak, maka hingga saat ini cara

termudah untuk mengenali dan melakukan isolasi stem cell hematopoetik dari

darah tepi, darah tali pusat, dan sumsum tulang adalah dengan mengenali ekspresi

molekul protein permukaan (cluster of differentiation, CD). Berdasarkan hasil

riset yang telah dipublikasikan, tiga penanda permukaan yang paling sering

digunakan sebagai karakteristik stem cell hematopoetik adalah CD14, CD34,

CD45 (Halim, dkk, 2010).

Selain dengan mengenali molekul protein permukaannya, stem cell

hematopoetik juga dapat dikenali berdasarkan aktivitasnya dalam

mengekskresikan senyawa yang dikenakan padanya. Senyawa seperti Rhodamine

123 dan Hoechst 33342 akan segera diekskresikan kembali jika dikenai pada stem

cell hematopoetik. Hal ini dapat terjadi karena stem cell memiliki aktivitas gen
multi-drug resistance. Ekspresi gen ini adalah transport aktif oleh antigen binding

cassette (ABC) transporter, yang berperan dalam mengekskresikan segala

senyawa asing yang berpotensi merusak sel. Karena fungsi ekskresi ini, maka sel

yang menunjukkan tingkat pewarnaan yang rendah setelah pemberian Rhodamine

123 dan Hoeschst 33342, diduga merupakan stem cell.

2) Stem cell mesenkimal

Secara teoritis, stem cell mesenkimal atau mesenchymal stem cells (MSCs)

terdapat pada seluruh organ tubuh manusia. Dengan pertimbangan jumlah sel,

aksesibilitas, dan hasil penelitian yang telah dilakukan, maka terdapat tiga sumber

yang paling banyak digunakan untuk mendapatkan MSCs yaitu sumsum tulang,

darah tali pusat, dan jaringan adiposa. Jumlah MSCs pada jaringan adiposa lebih

banyak dibandingkan dengan kedua sumber lainnya. Persentase isolasi MSCs dari

jaringan adiposa menyamai sumsum tulang adalah 100%. Isolasi MSCs pada

darah tali pusat sangat sulit dilakukan sehingga persentase keberhasilannya pun

hanya berkisar 29-63% (Lechner and Habener, 2003). Meski demikian, MSCs dari

darah tali pusat memiliki potensi poliferasi yang jauh lebih tinggi, terutama bila

dibandingkan dengan sumsum tulang.

Stem cell mesenkimal yang diisolasi dari jaringan adiposa menunjukkan

ekspresi CD34 dan CD54 pada permukaannya. Sesuai dengan bentuk sumbernya,

maka langkah awal yang dilakukan dalam rangka isolasi MSCs dari sumsum

tulang darah tali pusat adalah dengan mendapatkan populasi sel mononuklear

terlebih dahulu dengan menggunakan senyawa Ficol-Hypaque dan berlandaskan

prinsip perbedaan gradien antar masing-masing populasi sel yang terkandung

dalam cairan darah. Sementara isolasi MSCs dari jaringan adiposa dilakukan

dengan lebih dulu melakukan degradasi protein terhadap jaringan kolagen yang

menyelimuti MSCs dalam jaringan adiposa dengan pemberian enzim kolagenase.

Karena sifatnya yang menempel pada dasar cawan kultur, maka populasi

sel mononuklear yang dikultur menempel pada dasar cawan dapat diperkirakan

terdiri dari MSCs. Setelah melewati beberapa kali subkultur, kemurnian populasi

MSCs diuji dengan menggunakan fluorescence activated cell sorting (FACS),

yaitu berdasarkan prinsip keberadaan molekul protein permukaan (MSCs) yang

telah disebutkan sebelumnya (Halim, dkk, 2010).

Gambar 5. Tahapan diferensiasi pada stem cell mesenkimal (Birbrair et. al.,

2016)

2.2.5. Pengolahan Stem cell

a. Prinsip Isolasi Stem cell

Dalam jaringan/organ yang telah matang, stem cell dewasa seringkali

tampak tidak aktif. Stem cell baru teraktivasi jika jaringan/oorgan tersebut

mengalami kerusakan. Baik dalam kedaan aktif maupun inaktif, secara kasat mata

stem cell tampak serupa dengan sel lainnya yang juga menyusun jaringan/organ

tersebut. Untuk mendapatkan isolasi murni stem cell organ yang bersangkutan,

maka peneliti dan praktisi medis menggunakan pengetahuan yang ada

menyangkut karakteristik stem cell masing-masing organ. Metode yang paling

sering digunakan adalah pemisahan sel mononuklear yang mengandung stem cell,

pada darah tepi, darah tali pusat, dan sumsum tulang.

Isolasi populasi sel mononuklear adalah berprinsip sentrifugasi perbedaan

densitas (density gradient centrifugation). Medium gradien densitas yang

umumnya digunakan adalah Ficoll-Hypaque. Ficoll-Hypaque adalah polimer

dekstran yang menginduksi agregasi eritrosit, yang dicampur dengan senyawa

aromatic teriodinisasi untuk meningkatkan osmolaritas dandensitas cairan.

Populasi sel mononuklear dapat diisolasi menggunakan satu lapis medium dengan

densitas 1,077 g/mL.

Setelah darah tercampur dengan Ficoll-Hypaque, sentrifugasi pun

dilakukan dengan kecepatan ±400 g pada suhu ruangan. Setelah sentrifugasi,

maka akan didapatkan sediaan cair yang terbagi dalam beberapa lapis. Lapisan

terbawah adalah populasi eritrosit dan neutrophil. Di atasnya terdapat lapisan

Ficoll-Hypaque yang berwarna bening. Di antara Ficoll-Hypaque dan lapisan

plasma-platelet, terdapat lapisan tipis yang merupakan populasi sel mononuklear.

Pengambilan sel mononuklear membutuhkan keterampilan tertentu agar populasi

yang diambil semakin banyak, tanpa mengambil lapisan sel lainnya. Selanjtnya

diperiksa di bawah mikroskop inverted untuk memastikan gambaran jumlah sel

dan diinkubasi dengan suhu 37˚C yang mengandung CO2 5%. Medium penumbuh

diganti setiap 24 jam dan dilakukan pasase untuk mempercepat pertumbuhan sel.

Gambar 6. Pemisahan sel mononuklear dengan gradien densitas (Halim, dkk,

2014)

b. Kultur Stem cell

Kultur stem cell tidak signifikan berbeda dengan kultur stem cell pada

umumnya, tetapi yang membedakan adalah viabilitas dan sifat proliferasi dan

multiplikasi serta diferensiasi dari tipe sel itu sendiri. Oleh karena itu, dlam

pertumbuhan sel tergantung pada lingkungan mikro dalam hal ini yang penting

adalah medium penumbuh. Peralatan minimal yang harus dilengkapi ketika

menyiapkan isolasi sel dan kultur sel sangat pentuing karena tanpa peralatan

tersebut tidak dapat memanipulasi sel atau mempurifikasi sel dari bone marrow,
adiposa atau peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), otak, jantung,

pankreas. Peralatan yang penting diantaranya inkubator CO 2, laminar flow,

sentrifus refrigerator adjustable, autoclave, glassware, dan filter medium, dan

didukung ruangan steril yang dilengkapi dengan UV.

Bahan yang dipersiapkan dalam isolasi dan kultur sel tergantung pada

macam sel yang diinginkan atau dikembangkan, karena itu diperlukan kehati-

hatian sehingga dapat menghasilkan produk yang mempunyai nilai efisien dan

produk yang diharapkan. Adapun bahan-bahan yang penting dalam kultur stem

cell diantaranya medium penumbuh sel (alfa medium), foetal calf serum (FCS),

trypsin 0,25%, phosphat buffer saline (PBS), fungizone, methylin blue, yellow tip

0-20 µl, blue tip 1000 µl, DMSO, EDTA atau heparin atau natrium citrate, dan

ficoll isopaque gradient 0,177.

Koleksi sampel yang baik adalah menyelaraskan antara persiapan di

laboratorium sehingga sampel yang akan dilakukan isolasi sel dapat segera

ditangani. Dengan demikian, jumlah sel yang hidup mempunyai persentase yang

tinggi sekitar 70%. Jika tidak langsung dilakukan isolasi maka biasanya tingkat

pertumbuhan sel hanya 30%. Beberapa hal yang harus diperhatikan adalah tabung

pembawa sampel, medium transpor, dan yang terpenting adalah tingkat sterilitas

sampel yang akan dilakukan isolasi stem cell. Oleh karena itu, tabung yang

digunakan tidak boleh mengandung logam berat sehingga dapat menyebabkan sel

mati. Selain itu, tidak boleh disimpan di bawah 4˚C karena sel menjadi syok, dan

tidak boleh terlalu panas yang dapat menyebabkan lisis eritrosit (Rantam et al.,

2009).
 c. Diferensiasi Stem cell

Sel mononuklear setelah dilakukan isolasi kemudian dikultur, maka sel

tersebut akan mengalami diferensiasi. Namun proses ini dapat dipercepat dengan

menambahkan substansi growth factors dalam medium. Karena itu ketika sel akan

dijadikan sel progenitor, maka harus menggunakan medium spesifik sesuai

dengan keinginan, seperti sel cardiomiocyte, osteosit, chondroblast, myoblast atau

progenitor sel hepatosit, progenitor sel endothelial, sel neuron, dan jenis sel

lainnya. Proses diferensiasi memerlukan waktu yang berbeda, sebagai contoh jika

melakukan diferensiasi sel dari mesenchymal stem cell menjadi chondroblast

maka memerlukan waktu sekitar 21 hari dan setiap 2 hari medium harus diganti

sehingga lingkungan mikro dapat terjaga stabilitasnya dan tentunya kebutuhan

growth factor masih tercukupi. Namun, jika melakukan diferensiasi sel

mesenchymal stem cell menjadi cardyomyocite, maka memerlukan waktu sekityar

1,5 bulan. Hal ini berarti setiap sel mempunyai sifat yang berbedakarena

lingkungan mikro yang diperlukan untuk pertumbuhan dan diferensiasi sel juga

berbeda.

Banyak faktor pertumbuhan yang dipresentasikan berukuran nano dan

subnano per ml dalam serum. Beberapa dari molekul tersebut spesifik untuk

pertumbuhan pada fase diferensiasi yang berbeda, seperti hematopoetik, growth

factors (colony stimulating factors), beberapa ada yang berfungsi sinergis.

Epidermal Growth Factors (EGF) sebagai contoh yang dapat menstimulasi

proliferasi, epidermal dan sel glial. Selain itu tipe sel distimulasi oleh faktor
pertumbuhan yang berbeda. Jadi fibroblast bertanggung jawab terhadap

Fibroblast Growth Factors (FGF), EGF, Platelet Growth Factor (PDGF).

d. Validasi Stem cell

Tahapan aplikasi sel harus dilakukan validasi terlebih dahulu sehingga

efek negatifnya dapat dihilangkan. Validasi meliputi potensi (plasticity), yang

menunjukkan kemampuan stem cell untuk berdiferensiasi, kemurnian (purity)

untuk membuktikan bahwa sel tersebut adalah benar stem cell dan kontaminasi

baik oleh jamur (paling banyak) atau mikroorganisme lain. Adapun marker yang

digunakan untuk validasi plurypotency yaitu Oct-4, SRY, Sox-2, Nanog, dan Fox-

D3. Sel harus bebas dari penyakit infeksi HIV, herpes, hepatitis, BSE, gonorrhoe,

dan bebas dari sel kanker.

Selain itu, tingkat viabilitas sel dan fenotip sel juga sesuai dengan

keinginan atau target yang diinginkan. Stem cell yang akan digunakan untuk terapi

gagal otot jantung atau hearth infarction, maka marker yang digunakan adalah

CD44, untuk terapi gagal ginjal CD133, untuk bone fracture CD105 dan lack

CD45, sedang untuk saraf menggunakan marker antara lain nestin. Sementara itu

terkait dengan kemungkinan adanya rejeksi, maka analisis HLA-DR sangat

diperlukan, untuk meminimalkan reaksi tersebut, maka sel yang akan

diaplikasikan tidak mengekspresikan HLA-DR. Validasi purity diantaranya:

1) Cardyomiocyte: connexin 43, 45

2) Hematopoetic: CD45, CD34

3) Endothelial/Vascular: CD31, CD34

 4) Mesenchymal: CD90, CD105, CD44

5) NK cell: CD3, CD16, CD8

6) HLA-DR

7) Neuron stem cell 133

8) Cancer gene

2.2.6 Potensi aplikasi klinis stem cell

Pengobatan regeneratif telah mulai diterapkan pada semua bidang

spesialisasi. Penyembuhan pada kerusakan organ dan jarigan bisa berbentuk

regenerasi atau perbaikan (repair). Regenerasi merupakan tujuan utama pada

terapi dengan stem cell. Perbaikan biasanya berlangsung dengan cepat dan

dibutuhkan untuk mempertahankan hidup (survival) individu tetapi fungsi organ

atau jaringan tidak harus optimal. Perbaikan akan menghasilkan jaringan ikat

(scar) yang mengisi atau menggantikan bagian organ yang rusak. Regenerasi

merupakan proses yang berlangsung lebih lambat, dengan hasil integritasi organ

atau jaringan serta fungsinya kembali normal.

Tergantung pada jenis organ atau jaringan yang diinginkan, proses

regenerasi bisa ditujukan untuk tiga tujuan. Pertama, pada organ seperti otak,

kelenjar tiroid, medula spinalis, hati, pankreas, dan beberapa organ lainnya.

Tujuan utama terapi stem cell adalah untuk menggantikan fungsi metabolisme dari

sel-sel yang rusak. Untuk bisa menggantikan fungsi tersebut, maka stem cell harus

dideferensiasikan menjadi sel organ yang diinginkan. Kedua, mengganti fungsi

metabolisme dan struktur. Organ dan jaringan yang mempunyai kedua fungsi ini
adalah otot, jantung, kulit, tulang, paru-paru, dan usus. Untuk mendapatkan

keduanya, selain mendiferensiasikan stem cell menjadi sel yang diinginkan, maka

stem cell harus menghasilkan matriks ekstraseluler sesuai dengan fungsi organ

atau jaringan tersebut. Ketiga, pada laring, trakea, diafragma, ureter, uretra, dan

kandung kemih, yang utama dibutuhkan adalah fungsi organ atau jaringan sebagai

struktur.

Gambar 7. Aplikasi klinis stem cell untuk pengobatan regeneratif dan rekayasa

jaringan (Synder dan Loring, 2005)

Aplikasi klinis stem cell untuk pengobatan infark jantung misalnya,

digunakan stem cell dari sumsum tulang (bone marrow) yang dideferensiasi

menjadi mesenchymal stem cells (MSCs) yang memungkinkan aplikasinya untuk

regenerasi jantung. Sel ini tetap multipoten setelah ekspansi in vitro, menunjukkan

immunogenisitas yang relatif rendah, dan mudah dibekukan. MSCs

berdiferensiasi menjasi sel endotelial ketika dikultur dengan vascular endothelial

growth factor (VEGF) dan sel kardiomiogenik (CMG, cardiomyogenic) ketika

diberi agen demetilator DNA, 5-azasitidin. Beberapa studi model binatang telah

menunjukkan bahwa terapi dengan MSCs meningkatkan fungsi miokard dan

pembentukan kapiler secara signifikan. Satu keuntungan dari penggunaan sel ini

dalam studi manusia adalah imunogenisitasnya yang rendah. MSCs allogenik

yang diinjeksikan pada miokard yang infark dalam suatu model babi meregenerasi

miokard dan mengurangi ukuran infark tanpa bukti rejeksi. Suatu uji klinis acak

menanam MSCs setelah MI (myocardial infarct) telah mendemonstrasikan

peningkatan signifikan dalam fungsi global dan ventrikel kiri regional dan uji

klinis sekarang sedang dilakukan untuk meneliti aplikasi MSCs allogenik dan

autologus untuk MI akut dan inskemia miokard, secara berurutan (Rantam, dkk,

2014
 BAB III

METODE PRAKTIK KERJA LAPANGAN

3.1 Tempat dan Waktu Praktik Kerja Lapangan

Praktik Kerja Lapangan (PKL) ini dilaksanakan di :

Nama Instansi/Perusahaan : Pusat Penelitian dan Pengembangan Sel

Punca Universitas Airlangga

Alamat Instansi/Perusahaan : Gedung Lembaga Penyakit Tropis Lt. 2

Kampus C Universitas Airlangga, Jalan

Mulyorejo, Surabaya, 60115

Waktu Pelaksanaan : 7 Januari- 7 Februari 2019

3.2 Alat dan Bahan

Alat-alat yang digunakan dalam kegiatan ini adalah sebagai berikut :

a. Sterilisator

b. Tabung, cawan atau botol kultur

c. Pipet serologi

d. Syringe

e. Media

f. Gelas piala

g. Botol gelas
h. Gelas ukur

i. Dryer

j. Mikropipet

k. Lemari pendingin

l. Lemari freezer 200°C

m. Laminar air flow

n. Sentrifuge

o. Inkubator CO2

p. Mikroskop inverted

q. Mikroskop fluoresence

r. Obyek glass COOKE

Bahan-bahan yang digunakan dalam kegiatan ini adalah sebagai berikut :

a. Populasi stem cell

b. Medium kultur

c. Formalin 10%

d. PBST 0,1%

e. PBS

f. Blocking buffer

g. Pewarna antibodi sekunder

 3.3 Prosedur Praktik Kerja Lapangan

Praktik kerja lapangan dilakukan dengan melakukan sterilisasi alat terlebih

dahulu, lalu memasuki laboratorium untuk melakukan processing sel yang meliputi

isolasi jaringan/organ, isolasi stem cell, freezing sel, dan thowing sel, splitting

(peremajaan) sel, karakterisasi stem cell.

3.4 Cara Kerja

3.4.1 Prosedur Preparasi Alat

No. Dokumentasi Prosedur

1. Merendam peralatan kotor pada air

sabun selama semalaman.

2. Mencuci peralatan yang sudah

direndam menggunakan sabun.

3. Peralatan berupa botol dibersihkan

bagian dalam nya dengan sikat, dan

melepas label yang terdapat di botol.

4. Membersihkan bagian dalam pipet

dengan sikat

5 Membilas peralatan yang sudah

disabun menggunakan air mengalir.

6 Meniriskan peralatan yang sudah

dibilas.

7 Membilas dengan akuades

8 Membilas dengan alkohol

9 Mengeringkan botol, tabung reaksi

menggunakan tissue

10 Mengeringkan pipet menggunakan

dryer.

11 Menyiapkan medicpack untuk

membungkus peralatan yang sudah

kering.
 12 Memasukkan peralatan ke medicpack

lalu menge-press ujung medicpack

menggunakan alat press.

13 Memasukkan pipet yang sudah kering

ke dalam box dan mengoven pada

suhu 200°C selama 2,5 jam.

14 Alat-alat gelas yang sudah dikemas

dengan medicpack di autoklaf pada

suhu 121°C selama 20 menit. Lalu di

oven pada suhu 140°C selama 3 jam.

Gambar 8. Dokumentasi prosedur preparasi alat

3.4.2 Prosedur Memasuki Ruang Proses

No. Dokumentasi Prosedur

1. Melepaskan alas kaki sebelum

memasuki laboratorium

2. Tidak diperbolehkan untuk membawa

makanan dan minuman. Lalu

meletakkan semua barang bawaan

pada loker yang disediakan

3. Memakai baju khusus yang telah

disediakan

4 Menggunakan glove atau sarung

tangan selama proses di dalam

laboratorium
 5 Menggunakan masker, nurse cap,

serta mengenakan alas kaki khusus

ruangan steril

6 Masuk ke dalam ruang laboratorium

Gambar 9. Dokumentasi prosedur memasuki ruang laboratorium.

3.4.3 Prosedur Isolasi Mesenchymal Stem Cell dari lemak tikus

No Dokumentasi Prosedur

1 Mengeluarkan jaringan lemak dari

medium transport dan meletakkan

dalam plate steril yang berisi PBS 1X

2 Mencuci jaringan lemak dengan PBS

steril sampai bersih dari darah dan

debris jaringan yang melekat

3 Melakukan pemotongan dengan cara

mencincang hingga halus

4 Jaringan yang telah dicincang

dipindahkan kedalam erlenmeyer.

Kemudian menambahkan enzim

kolagenase atau tripsinase 10 mL

untuk mengeluarkan stem cell dari

jaringan lemak
5 Inkubasi selama 30 menit pada suhu

37oC dengan menggunakan shaker

dan stirrer

6 Ditambahkan medium dengan

perbandingan 1:1 dengan enzim

tripsinase

7 Diinkubasi shaker selama 15 menit

8 Menyaring jaringan lemak dan

memindahkan hasil saringan kedalam

tabung falcon untuk kemudian

disentrifus selama 15 menit dengan

kecepatan 3000rpm sebanyak 2 kali.

Pencucian PBS dilakuakn sebanyak 1

kali sbelum dilakukan sentrifus yang

kedua.
9 Menambahkan medium kultur pada

pellet dan tanam pada plate 10 cm

hingga sel melekat pada dasar petri

 Memberikan label indentitas berupa

nama dan tanggal processing

kemudian diamati dengan

menggunakan mikroskop invert lalu

diinkubasi dalam inkubator CO2 .

Gambar 10. Dokumentasi prosedur isolasi Mesenchymal Stem Cell

3.4.4. Prosedur Isolasi Hematopoietic Stem Cell

No. Dokumentasi Prosedur

1. Mengambil darah dari pembuluh

darah intra vena pada lengan

2. Menuangkan darah dari spuit

kedalam tabung konikel 50 cc secara

perlahan
3. Menyiapkan sampel darah

4. Menambahkan PBS 1:1 kemudian

diresuspensi menjadi larutan

homogen

5 Menuangkan hasil resuspensi pada

tabung konikel yang sudah diberi

ficol hypaque 5 cc dengan cara

perlahan melalui dinding tabung

6 Sentrifugasi selama 30 menit dengan

kecepatan 1600 rpm pada suhu 26°C

7 Setelah terpisah jadi 4 lapis aspirasi

bagian lapisan kedua yang merupakan

sel mononuklear (buffycoat) yang

tampak seperti cincin kabut

8 Tuang perlahan larutan buffycoat

kedalam konikel 15 ml kemudian

cuci dengan menggunakan PBS 10 cc

9 Sentrifugasi selama 5 menit dengan

kecepatan 1600 rpm

10 Setelah terbentuk pelet, tambahkan

medium kultur

11 Lakukan resuspensi hingga homogen,

kemudian tanam dalam plate 10 cm

 12 Periksa dibawah mikroskop inverted

untuk memastikan gambaran sel

Gambar 11. Dokumentasi prosedur isolasi Hematopoietic Stem Cell

3.4.5 Prosedur Freezing Sel

No. Dokumentasi Prosedur

1. Sel yang disimpan sebaiknya sel yang

berumur 2-3 hari agar setelah thawing

sel hidup lebih banyak. Memanen sel

yang ditanam pada plate atau flask

dan disentrifugasi selama 5 menit

pada 1600 rpm.

 2. Membuang supernatan dan

meresuspensi pelet menggunakan

medium freezing dan memasukkan ke

dalam cryotube yang di rendam di

dalam es.

3. Cryotube diletakkan pada styrophor

dan disimpan pada freezer -80°C atau

nitrogen cair.

Gambar 12. Dokumentasi prosedur freezing sel

3.4.6 Prosedur Thawing Sel

No. Gambar Keterangan

1. Mencairkan sel yang disimpan pada

nitrogen cair atau -80°C pada water

bath dengan temperature 37°C.

2. Kemudian menuangkan sel 1 ml

kedalam tabung yang mengandung 10

ml medium yang telah dipanaskan

pada temperature 37°C.

3. Kemudian melakukan sentrifuge

selama 5 menit 1600 rpm.

 4. Kemudian membuang supernatan dan

meresuspensi pelet dengan

menggunakan medium kultur dan

memasukkan ke dalam plate dan

meletakkannya di dalam inkubator

CO2 suhu 37°C selama 6 jam.

5 Kemudian mengevaluasi

menggunakan mikroskop inverted.

6 Memberi label identitas pasien berupa

nama dan tanggal processing

kemudian inkubasi dalam inkubator

CO2.

Gambar 13. Dokumentasi prosedur Thawing sel

3.4.7 Prosedur Karakterisasi Mesenchymal Stem Cell (MSCS)

No. Dokumentasi Prosedur

1 Sel monolayer dilakukan splitting

kemudian di inkubasi pada suhu 37°C

selama 2 jam.

2 Mengambil coverslip dari plate

menggunakan pinset. Lalu

meletakkan di obyek glass dan

dikeringkan dengan dryer.

3 Melakukan fiksasi dengan formalin

10% selama 15 menit.

4 Mencuci obyek glass dengan PBS

5 Menambahkan PBST 0,1% dan

diinkubasi selama 15 menit. Lalu

dicuci dengan PBS

6 Menambahkan Blocking Buffer 10%

dan diinkubasi selama 15 menit. Lalu

dicuci dengan PBS.

7 Menambahkan marker CD 105 dan

CD 45.

8 Melakukan inkubasi pada suhu 37°C

selama 2 jam.
 9 Mengamati hasil dengan

menggunakan mikroskop

fluorescence.

Gambar 14. Prosedur Karakterisasi Mesenchymal Stem Cell

3.4.8 Prosedur Splitting Sel

No Dokumentasi Prosedur

1 Membuang medium dengan

menggunakan pipet secara

perlahan-lahan.

2 Mencuci sel dengan PBS untuk

menghilangkan FBS yang berfungsi

untuk penyedia nutrisi sel.

3 Cawan petri digoyang, agar PBS

mengenai seluruh dasar plate,

kemudian membuang PBS.

4 Menambahkan Tryple Express yang

merupakan jenis enzim tripsin,

untuk memisahkan sel dan

melepaskan sel dari dasar plate.

Lalu melakukan inkubasi selama 2-

5 menit.

5 Sel yang sudah menjadi single cell

ditambah dengan α-MEM dan

dihomogenkan dengan pipet. α-

MEM berfungsi untuk

menghentikan kerja enzim tripsin

6 Setelah homogen, sel dimasukkan

ke dalam tabung konikel dan

selanjutnya disentrifuse selama 5

menit pada kecepatan 1600 rpm.

 7 Membuang supernatan hasil

sentrifuse, lalu pelet ditambahkan

dengan α-MEM dan dihomogenkan

dengan pipet.

8 Sel dimasukkan ke dalam

microplate

9 Sel diinkubasi pada inkubator suhu

37°C.

Gambar 15. Dokumentasi prosedur splitting sel

3.4.9 Prosedur Karakterisasi Hematopoietic Stem Cell (HSCs)

No Dokumentasi Prosedur
1 Sel pada tabung konikel ditambah

dengan PBS, lalu disentrifuse.

2 Membuang PBS.

3 Pelet disentil dengan jari agar tidak

melekat pada konikel.

4 Mengambil sel di conical 20µl

untuk hitung sel, dan menambah

PBS lalu mensentrifuse. Setelah

disentrifuse, membuang PBS dan

memindahkan pelet ke microtube.

5 Menambahkan 1 cc formalin 10%.

Lalu melakukan inkubasi selama 15

menit.
6 Melakukan sentrifuse 3000 rpm,

selama 5 menit. Lalu membuang

supernatant

7 Menambahkan PBS pada pelet lalu

disentrifuse (pencucian) sebanyak

2x.
8 Membuat blocking buffer yang

terdiri atas 0,2 ml serum, dan 1,8

ml PBS. Kemudian menambahkan

blocking buffer pada pelet.

9 Melakukan inkubasi selama 15

menit, kemudian dilakukan

sentrifuse. Lalu membuang

supernatan.

10 Melakukan pencucian dengan PBS

sebanyak 2x.
11 Menaruh pelet pada obyek glass

COOKE sebanyak 1 tetes pada 3

bagian.

12 Memberi label kontrol, CD 45, dan

CD 105. Lalu menambahkan

pewarnaan antibodi sekunder CD

45 dan CD 105.

13 Melakukan inkubasi pada suhu

37°C selama 2 jam.

 14 Mengamati hasil dengan

menggunakan mikroskop

fluorescence.

Gambar 16. Prosedur Karakterisasi Hematopoietic Stem Cell

 BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Pengamatan

Karakterisasi Mesenchymal Stem Cell (MSCs)

Hasil Keterangan

a. Positif CD 105 Sampel adipose tikus nampak positif

terhadap marker CD 105 yakni terjadi

fluoresensi atau pendar cahaya

berwarna hijau. Sel yang berpendar

tersebut merupakan sel punca

mesenkimal (MSCs) yang diperoleh

dari isolasi dari jaringan lemak tikus.

 b. Negatif CD 45 Sampel adipose tikus nampak negatif

terhadap marker CD 45 yakni tidak

terjadi fluoresensi atau pendar cahaya

dan sel terlihat gelap. Tidak adanya

pendar cahaya menandakan bahwa

tidak terdapat Hematopoietic Stem Cell

(HSCs) pada sampel adipose tikus.

Gambar 17. Dokumentasi hasil Karakterisasi Mesenchymal Stem Cell

Karakterisasi Hematopoietic Stem Cell (MSCs)

Hasil Keterangan

c. Positif CD 45 Sampel peripheral blood mononuclear

cell (PBMC) nampak positif terhadap

marker CD 45 yakni terjadi fluoresensi

atau pendar cahaya berwarna hijau. Sel

yang berpendar tersebut merupakan sel

punca hematopoetik (HSCs) yang

diperoleh dari isolasi sel darah pada

pembuluh intra vena lengan.

 d. Negatif CD 105 Sampel peripheral blood mononuclear

cell (PBMC) nampak negatif terhadap

marker CD 105 yakni tidak terjadi

fluoresensi atau pendar cahaya yang

kuat. Namun terlihat sedikit warna

hijau yang lemah.

Gambar 18. Dokumentasi Karakterisasi Hematopoietic Stem Cell (MSCs)

4.2 Pembahasan

Topik pada Praktik Kerja Lapangan ini adalah Karakterisasi Sel Punca

Dewasa dengan metode Imunositokimia. Imunositokimia (ICC) merupakan salah satu

dari metode karakterisasi stem cell, dimana terdapat metode lain yaitu MTT Assay,

ELISA, dan Pewarnaan Alizarin Red. Metode imunositokimia bertujuan untuk

mengevaluasi apakah sel dalam sampel tertentu mengekspresikan suatu antigen yang

bersangkutan. Metode MTT Assay dilakukan untuk mengetahui kuantitas sensitif

kolometrik sel. Sedangkan untuk mendeteksi suatu antibodi, antigen, atau hormon

tertentu yang disekresikan oleh sel dilakukan uji ELISA. Pewarnaan Alizarin Red

bertujuan untuk mengetahui kalsifikasi sel yang telah berdiferensiasi menjadi sel

osteogenik.
 Terdapat 2 macam metode imunositokimia dalam karakterisasi stem cell,

yaitu imunositokimia berlabel FITC dan imunositokimia dengan pewarnaan DAB.

Namun pada laporan ini penulis akan membahas mengenai metode imunositokimia

berlabel FITC pada Mesenchymal Stem Cell (MSCs) dan Hematopoietic Stem Cell

(HSCs).

Karakterisasi Mesenchymal Stem Cell (MSCs) dilakukan dengan cara

melakukan splitting sel terlebih dahulu. Tujuan dari proses splitting adalah untuk

meremajakan sel dan memisahkan populasi jaringan heterogen menjadi sel tunggal

(single cell). Proses splitting dilakukan dengan menggunakan enzim tripsin atau

kolagenase, namun pada praktik kali ini menggunakan enzim tripsin untuk

mendapatkan sel tunggal dari sel yang heterogen. Enzim tripsin adalah enzim yang

harganya lebih murah, tersedia dalam jumlah banyak, dan mudah didapat di

laboratorium. Proses splitting pada Mesenchymal Stem Cell (MSCs) dapat dilakukan

ketika sel telah berproliferasi dan mencapai 60-70% konfluen. Setelah melewati

proses splitting, sel di fiksasi dengan formalin 10%. Tujuan dari proses fiksasi adalah

untuk mempertahankan kondisi sel agar tidak rusak dan tetap seperti kondisi aslinya.

Larutan fiksatif bekerja dengan mencegah autolisis dengan menginaktivasi enzim

lisosom sehingga struktur baik luar atau dalam sel tetap terjaga. Formalin merupakan

salah satu jenis larutan fiksatif yang sering digunakan pada preparat histologi. Setelah

difiksasi menggunakan formalin, obyek glass dicuci dengan PBS untuk

menghilangkan larutan fiksasi. Lalu ditambahkan PBST 0,1%. Penambahan PBST

0,1% bertujuan untuk menghilangkan bahan-bahan berlebih yang ada di membran sel

dan plate tanpa mengganggu reaksi ikatan antigen/antibodi. Kemudian ditambahkan

blocking buffer yang berfungsi untuk meningkatkan sensitivitas uji dengan

mengurangi gangguan latar belakang dengan memblokir agen potensial interaksi non-

spesifik sehingga dapat meningkatkan interaksi spesifik agar proses pembacaan di

mikroskop dapat jelas. Setelah itu dilakukan pewarnaan menggunakan marker

antibodi sekunder CD 105 dan CD 45. Proses pewarnaan dilakukan pada ruangan

gelap karena sensitif terhadap cahaya, kemudian di inkubasi pada suhu 37°C selama 2

jam untuk selanjutnya dilakukan pengamatan menggunakan mikroskop fluoresence.

Uji karakterisasi sampel adipose tikus yang diisolasi dan dikultur positif

mengandung populasi Mesenchymal Stem Cell (MSCs). Hal ini dapat diketahui

melalui ekspresi positif marker CD 105 yaitu adanya fluoresensi atau pendar cahaya

berwarna hijau dilihat melalui mikroskop fluoresence dengan perbesaran 200x.

Fluoresensi atau pendar cahaya berwarna hijau ini disebabkan karena adanya reaksi

antara antibodi yang terdapat pada permukaan sel dan marker CD105. Selanjutnya,

sampel adipose kelinci menunjukkan ekspresi negatif terhadap marker CD45 yaitu

ditandai dengan tidak terjadi pembentukan pendar cahaya atau fluoresensi karena

tidak adanya reaksi antara antibodi yang diekspresikan pada permukaan sel dan

marker CD45. Hal ini dikarenakan adipose tikus merupakan jenis mesenchymal stem
cell yang dapat diuji karakterisasinya dengan menggunakan marker CD105 sebagai

kontrol positif. Marker CD45 merupakan kontrol negatif yang berfungsi untuk

menguji bahwa stem cell yang dikultur merupakan benar mesenchymal stem cell.

Karakterisasi Hematopoietic Stem Cell (HSCs) menggunakan metode native

imunositokimia, yaitu dilakukan dengan cara menambahkan PBS pada tabung

konikel yang berisi pelet kemudian dilakukan sentrifugasi dan supernatan dibuang.

Pelet disentil dengan jari agar tidak melekat di dinding tabung , kemudian ditambah

dengan 1cc formalin 10% sebagai larutan fiksatif, dan diinkubasi selama 15 menit

untuk selanjutnya disentrifuse dengan kecepatan 3000 rpm selama 5 menit. Hasil dari

sentrifuse diambil pelet nya dan supernatan dibuang. Setelah itu pelet dicuci dengan

PBS sebanyak 2x untuk menghilangkan larutan fiksatif (formalin). Setelah proses

pencucian, supernatan dibuang, kemudian ditambahkan blocking buffer yang terdiri

atas 0,2 ml serum, dan 1,8 ml PBS. Blocking buffer berfungsi untuk meningkatkan

sensitivitas uji dengan mengurangi gangguan latar belakang dengan memblokir agen

potensial interaksi non-spesifik sehingga tidak mengganggu proses pembacaan hasil

pengujian. Setelah ditambah dengan blocking buffer,sampel diinkubasi selama 15

menit, kemudian disentrifuse dan supernatan dibuang. Pelet kemudian dicuci dengan

PBS sebanyak 2x. Selanjutnya pelet dipindahkan dari microtube ke obyek glass

COOKE dengan diteteskan sebanyak 1 tetes di 3 bagian obyek glass. Lalu

ditambahkan pewarna antibodi sekunder CD 45 dan CD 105. Proses pewarnaan

dilakukan pada ruangan gelap karena sensitif terhadap cahaya, kemudian di inkubasi

pada suhu 37°C selama 2 jam untuk selanjutnya dilakukan pengamatan menggunakan

mikroskop fluoresence.

Uji karakterisasi sampel peripheral blood mononuclear cell (PBMC) yang

diisolasi dan dikultur positif mengandung populasi Hematopoietic Stem Cell (HSCs).

Hal ini dapat diketahui melalui ekspresi positif marker CD 45 yaitu adanya

fluoresensi atau pendar cahaya berwarna hijau dilihat melalui mikroskop fluoresence

dengan perbesaran 200x. Fluoresensi atau pendar cahaya berwarna hijau ini

disebabkan karena adanya reaksi antara antibodi yang terdapat pada permukaan sel

dan marker CD45. Selanjutnya, sampel PBMC menunjukkan ekspresi negatif

terhadap marker CD105 yaitu ditandai dengan tidak terjadi pembentukan pendar

cahaya atau fluoresensi yang kuat, namun tampak warna hijau fluoresence yang

lemah dan sedikit. Hal ini menunjukkan bahwa pada sampel yang diuji terdapat

Hematopoietic Stem Cell (HSCs) dalam jumlah banyak dan terdapat pula

Mesenchymal Stem Cell (MSCs) dengan jumlah sedikit.

 BAB V

PENUTUP

5.1 Kesimpulan

1. Karakterisasi Mesenchymal Stem Cell (MSCs) diawali dengan melakukan

disosiasi sel terlebih dahulu, yaitu dengan pemberian enzim tripsin agar menjadi

single cell. Lalu dilakukan fiksasi menggunakan formalin 10%. Setelah itu obyek

glass dicuci dengan PBS. Kemudian ditambah dengan PBST 0,1% dan dicuci dengan

PBS. Selanjutnya diberi blocking buffer dan dicuci dengan PBS. Setelah itu diberi

pewarna antibodi sekunder CD105 dan CD45. Hasil karakterisasi diamati

menggunakan mikroskop fluoresence dan menunjukkan bahwa sampel adipose tikus

yang diisolasi dan dikultur positif mengandung populasi Mesenchymal Stem Cell

(MSCs) ditandai dengan ekspresi positif marker CD 105 yaitu adanya fluoresensi

atau pendar cahaya berwarna hijau.

2. Karakterisasi Hematopoietic Stem Cell (HSCs) menggunakan metode native

imunositokimia, yaitu dilakukan dengan cara menambahkan PBS pada tabung

konikel yang berisi pelet lalu disentrifuse dan supernatan dibuang. Kemudian

ditambah dengan 1 cc formalin 10%, lalu diinkubasi untuk selanjutnya disentrifuse.

Setelah itu pelet dicuci dengan PBS sebanyak 2x. Kemudian ditambahkan blocking,

lalu diinkubasi dan selanjutnya disentrifuse. Pelet kemudian dicuci dengan PBS
sebanyak 2x. Selanjutnya pelet dipindahkan dari microtube ke obyek glass COOKE.

Kemudian ditambahkan pewarna antibodi sekunder CD 45 dan CD 105.. Hasil

karakterisasi diamati menggunakan mikroskop fluoresence dan menunjukkan bahwa

sampel PBMC yang diisolasi dan dikultur positif mengandung populasi

Hematopoietic Stem Cell (MSCs) ditandai dengan ekspresi positif marker CD 45

yaitu adanya fluoresensi atau pendar cahaya berwarna hijau.

5.2 Saran

Selalu menjaga sterilitas alat dan ruangan laboratorium untuk menurunkan

resiko kontaminasi. Serta membatasi jumlah orang yang bekerja di laboratorium

dalam waktu bersamaan sehingga aktivitas yang dilakukan di laboratorium dapat

berjalan dengan baik dan efektif.

 DAFTAR PUSTAKA

Birbrair A, Frenette, Paul S. 2016. Niche Heterogeneity in the Bone Marrow.

Annals of the New York Academy of Sciences. 1370: 82–96.

Gersh BJ, Simari RD, Behfar A, Terzic CM, Terzic A. Cardiac cell repair

therapy: a clinical perspective. Mayo Clin Proc. 2009;84(10):876-92.

Gurudutta G, Satija NK, Singh VK, Verma YK, Gupta P, Tripathi R.Stem cell

therapy: a novel \& futuristic reatment modality for disaster injuries.

The Indian J Med Res. 2012.153(1):15-23

Halim D, Harry M, Ferry S, Arief B, Tono D, Boenjamin S. 2010. Stem Cell:

Dasar Teori & Aplikasi Klinis. Jakarta: Erlangga.

Halim D, Murti H, Sandra F, Boediono A, Djuwantono T, Setiawan B. Stem cell-

dasar teori & aplikasi klinis. Jakarta: Penerbit Erlangga; 2010.

Mitalipov S, Wolf D. 2009. Totipotency, Pluripotency and Nuclear

Reprogramming. Adv. Biochem. Eng. Biotechnol. Advances in

Biochemical Engineering/Biotechnology. 114: 185–99.

Orciani M, Mariggio MA, Morabito C, Di BG, Di Primirio R. Functional

characterization of calcium-signaling pathways of human skinderived

mesenchymal stem cells. Skin Pharmacol Physiol 2010; 23(3): 124-32.

Purwati, Fedik AR, Sony Wibisono, Anas P, Eric H, Helen S, Deya K. 2012.

Transplantasi Autologus Bone Marrow Mesenchymal Stem Cell dan

Allogenic Pancreatic Stem Cell untuk Perbaikan Sel Beta Pankreas

pada Eksperimental Diabetes Melitus. Prosiding InSINas 2012.

Purwati. 2018. Modul 1: Basic Science Stem Cell dan Metabolit. Surabaya. Pusat

Penelitian dan Pengembangan Sel Punca Universitas Airlangga.

Purwati. 2018. Modul 3: Workshop Stem Cell dan Bio-Processing. Surabaya.

Pusat Penelitian dan Pengembangan Sel Punca Universitas Airlangga.

Rantam FA, Ferdiansyah, Nasronudin, Purwati. 2009. Stem Cell Exploration,

Isolation, and Methods. Surabaya Airlangga University Press.

Rantam FA, Ferdiansyah, Purwati. 2014. Stem Cell: Mesenchymal,

Hematopoetik, dan Model Aplikasi. Surabaya Airlangga University

Press.

Schöler, Hans R. 2007. The Potential of Stem Cells: An Inventory. In Nikolaus

Knoepffler; Dagmar Schipanski; Stefan Lorenz Sorgner.

Humanbiotechnology as Social Challenge. Ashgate Publishing. p. 28.

ISBN 978-0-7546-5755-2.
Shah VK, Shalia KK. Stem cell therapy in acute myocardial infarction: a pot of

gold or pandora’s box. Stem Cells International. 2011:1-20.

Shukla VK, Tiwary SK, Barnwal S, Gulati AK, Pandey SS.Effect of autologous

epidermal cell suspension transplantation in chronic nonhealing wounds: a

pilot study. Canadian J Surgery. 2010.53(1):6-13.

Tuch BE. 2006. Stem Cells – A Clinical Update. Australian Family Physician. 35 (9):

719–21.

Yu G, Wu X, Dietrich MA, Polk P, Scott LK, Ptitsyn AA, Gimble JM. Yield and

characterization of subcutaneous human adipose-derived stem cells by

flow cytometric and adipogenic mRNA analyzes. Cytotherapy 2010; 12(4):

538-46.