Melinda Anggraeni - 11518048 - Laporan

LAPORAN PRAKTIKUM
MIKROBIOLOGI KEHUTANAN
BW-3205
Modul II: Pewarnaan Sel Bakteri
Oleh:
Melinda Anggraeni| 11518048
Kelompok 2
Asisten:
Zefanya Zeske Ruth Firstylona Hutabarat| 11517010
PROGRAM STUDI REKAYASA KEHUTANAN

SEKOLAH ILMU DAN TEKNOLOGI HAYATI
INSTITUT TEKNOLOGI BANDUNG
2021
MODUL1-MELINDA ANGGRAENI-11518048
10 Februari 2021
Melinda Anggraeni-11518048
I. LATAR BELAKANG
Mikrobiologi adalah ilmu yang mempelajari tentang mikroba, jasad renik.
Mikrobiologi adalah salah satu cabang ilmu dari biologi, dan memerlukan ilmu
pendukung kimia, fisika dan biokimia. Mirobiologi sering disebut ilmu praktek dari
biokimia. Dalam mikrobiologi diberikan pengertian dasar tentang sejarah
penemuan mikroba, macam-macam mikroba di alam, struktur sel mikroba dan
fungsinya, metabolisme mikroba secara umum, pertumbuhan mikroba dan faktor
lingkungan, mikrobiologi terapan di bidang lingkungan dan pertanian.
(Dwidjoseputro, 2003).
Di bidang lingkungan lainnya, mikrobiologi juga banyak digunakan dalam
bidang kehutanan, banyak sekali peranan mikroba terkait dengan dinamisasi hutan.
Dari Hidayat dkk. (2018) Mikroba hutan yang didominasi oleh fungi, bakteri, dan
khamir (yeast) hidup berlimpah di semua jaring-jaring makanan di ekosistem hutan
tropis. Disebutkan juga bahwa mikroba hutan merupakan aset nasional yang
penting yang harus terjaga dan termanfaatkan. Peruntukan dan manfaat mikroba
hutan ke depan diarahkan untuk membantu proses restorasi hutan tropis,
meremediasi, memulihkan dan merekonstruksi kembali fungsi-fungsi hutan,
menyediakan alternatif energi, menyediakan obat-obatan untuk kesehatan manusia,
dan alternatif jenisjenis pangan dari hutan.
II. TUJUAN
- Menentukan karakteristik morfologi bakteri dengan melakukan pewarnaan
basa dan asam dari Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Serratia
marcescens, dan Escherichia coli.
- Menentukan perbedaan dari pewarnaan basa dan asam
- Menentukan komposisi dinding sel Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus,
Serratia marcescens, dan Escherichia coli berdasarkan hasil pewarnaan
Gram.
- Menentukan bakteri yang mampu membentuk struktur endospora dengan
melakukan pewarnaan endospora pada Bacillus subtilis dan Escherichia coli
- Menentukan bakteri yang mampu membentuk kapsula dengan melakukan
pewarnaan kapsula pada Serratia marcescens dan Enterobacter aerogenes.
III. HIPOTESIS
- Morfologi bakteri dari Staphylococcus aureus menghasilkan warna ungu
berbentuk bulat yang berkoloni dengan melakukan pewarnaan basa dan
bentuk bulat berwarna merah muda dengan melakukan pewarna asam,
Bacillus subtilis menghasilkan warna biru berbentuk batang dengan
pewarnaan basa dan warna kuning keunguan berbentuk bulat dengan
pewarnaan asam, Serratia marcescens menghasilkan bentuk batang berwarna
jingga dengan melakukan pewarnaan basa dan bentuk batang kecil berwarna
merah muda, dan untuk Escherichia coli akan menghasilkan bentuk bulatan
kecil berwarna ungu dengan pewarnaan basa dan bentuk batang berwarna
ungu dengan pewarnaan asam.
- Pewarnaan basa dapat mewarnai sel bakteri yang akan diamati sedangkan
pewarnaan asam hanya lingkungannya saja yang terwarnai.
- Dinding sel Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Serratia marcescens,
dan Escherichia coli mempunyai satu lapisan berdasarkan hasil pewarnaan
Gram positif dan dua hingga tiga lapisan berdasarkan hasil pewarnaan Gram
negatif.
- Bacillus subtilis dan Escherichia coli mampu membentuk struktur endospore.
- Serratia marcescens dan Enterobacter aerogenes mampu membentuk
struktur kapsula.
IV. CARA KERJA

Praktikum diawali dengan disiapkannya alat dan bahan. Alat-alat yang
digunakan diantaranya mikroskop cahaya, kaca objek, kaca penutup, pembakar
bunsen, kawat oose, botol semprot, penjepit kayu, dan bahan yang digunakan
diantaranya kultur Bacillus subtilis, kultur Staphylococcus aureus, kultur Serratia
marcescens, kultur Escherichia coli, kultur Enterobacter aerogenes, akuades,
alkohol 70%, nigrosine, crystal violet, lugol/iodin, alkohol 96%, safranin, kertas
saring/kertas hisap, minyak imersi, larutan tembaga sulfat 20% (CuSO4), dan
malakit hijau.
Setelah alat dan bahan disiapkan, selanjutnya dilakukan teknik aseptik atau
sterilisasi pada meja kerja yang akan digunakan. Alat dan bahan yang digunakan
pada langkah ini ialah tissue/ lap kering dan larutan alkohol 70%. Pertama-tama,
meja dibersihkan dengan tissue/lap kering yang sudah dibasahi oleh larutan alkohol
70%. Selain itu, kedua tangan juga ikut dibersihkan dengan disemprotkannya
larutan alkohol yang sama.
Langkah selanjutnya ialah pembuatan dipersiapkannya kaca objek dan kaca
penutup untuk digunakan saat pengamatan preparat, dengan cara dibersihkan
menggunakan alkohol 70% yang diusapkan menggunakan tisu/lap kering yang
sudah dibasahi alkohol tersebut. Kemudian dimulai pembuatan preparat segar.
Selanjutnya adalah dibuatnya preparat kering. Alat danbahan yang disiapkan
diantaranya akuades, kaca objek, batang oose, tisu kering, kultur Staphylococcus
aureus, Bacillus subtilis, Serratia marcescens, dan Escherichia coli, bunsen, dan
penjepit kayu. Langkah awal yang dilakukan ialah diteteskannya akuades pada kaca
objek (diusahakan kaca objek berada di atas sehelai tisu kering agar kaca tetap
bersih). Kemudian batang oose dipanaskan hingga membara (dibentuk sudut 45
deajat antara api dengan batang oose) pada nyala api bunsen. Lalu, penutup kapas
pada tabung kultur Staphylococcus aureus yang digunakan dibuka perlahan secara
aseptis (dekat dengan api). Selanjutnya batang oose ditunggu hingga dingin. Batang
oose yang sudah dingin digoreskan pada kultur Staphylococcus aureus yang ada di
dalam tabung kultur. Tabung kultur ditutup kembali dengan kapas penutupnya
dengan masih dilakukan secara aseptis (dekat dengan api). Kultur Staphylococcus
aureus yang sudah diambil lalu digoreskan pada kaca objek lalu batang oose
kembali dipanaskan hingga membara. Sampel kultur Staphylococcus aureus yang
diambil dan digoreskan pada kaca objek kemudian dipanaskan di atas bara api
hingga sampel mengering, kaca dijepit menggunakan penjepit kayu. Antara api dan
kaca diberi jarak minimal 5 cm. Langkah ini juga dilakukan pada kultur Bacillus
subtilis, Serratia marcescens, dan Escherichia coli.
Langkah berikutnya adalah pewarnaan sederhana asam. Pertama-tama dua
buah kaca objek, batang oose, pewarna nigrosin (tinta Cina), kultur Staphylococcus
aureus, Bacillus subtilis, Serratia marcescens, dan Escherichia coli disiapkan.
Selanjutnya nigrosine diteteskan pada ujung kaca objek sebanyak 1-2 tetes.
Kemudian batang oose dipanaskan pada bunsen lalu dilakukan pencuplikan kultur
bakteri Staphylococcus aureus secara aseptis yaitu dibukanya tabung kultur bakteri
dekat dengan nyala api bunsen. Cuplikan kultur bakteri kemudian diinokulasi pada
zat warna nigrosin yang ada di ujung kaca objek, lalu batang oose dipanaskan
kembali setelahnya. Kaca objek lainnya disiapkan untuk dibuatnya hapusan pada
inokulasi bakteri dan nigrosin dengan cara diusapkannya kaca objek tersebut pada
bagian inokulasi hingga merata pada kaca objek di bawahnya, kemudian didiamkan
hingga kering. Cara tersebut dilakukan juga pada kultur Bacillus subtilis, Serratia
marcescens, dan Escherichia coli.
Selanjutnya dilakukan pewarnaan sederhana basa. Langkah pertama yang
dilakukan adalah disiapkannya air, tissue/ kertas saring, pewarna sel yaitu kristal
violet atau safranin dan preparat kering Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis,
Serratia marcescens, dan Escherichia coli. Pewarna sel diteteskan pada preparat
kering Staphylococcus aureus sebanyak 1-2 tetes, lalu didiamkan selama 1-2 menit.
Kemudian preparat dibilas menggunakan air mengalir lalu kelebihan air ditiriskan
hingga kering dengan tissue atau kertas saring. Cara tersebut dilakukan juga pada
preparat kering Bacillus subtilis, Serratia marcescens, dan Escherichia coli.
Hal yang selanjutnya dilakukan pada praktikum ini ialah pewarnan Gram.
Alat dan bahan yang digunakan dalam pewarnaan Gram ialah tissue/kertas saring,
air, pewarna primer kristal violet, iodin/lugol, alkohol 96%, pewarna pembanding
yaitu safranin, preparat kering Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Serratia
marcescens, dan Escherichia coli. Pertama-tama disiapkannya preparat kering yang
telah dibuat, kemudian kristal violet diteteskan pada preparat kering
Staphylococcus aureus sebanyak 1-2 tetes. Preparat kering yang sudah diteteskan
kristal violet didiamkan selama 1 menit. Setelah didiamkan, preparat lalu dibilas
dengan air mengalir. Selanjutnya preparat kering tersebut ditetesi lugol sebanyak
1-2 tetes, lalu didiamkan selama 1 menit. Kelebihan lugol dibuang dan preparat
dibilas dengan alkohol 96%. Setelah itu 1-2 tetes safranin diteteskan pada preparat
lalu didiamkan selama 30 detik. Kemudian preparat dibilas dengan air mengalir.
Preparat kering ditiriskan dari kelebihan air dengan digunakannya tissue atau kertas
saring hingga air kering. Cara tersebut dilakukan juga pada preparat kering Bacillus
subtilis, Serratia marcescens, dan Escherichia coli.
Pewarnaan endospora adalah langkah yang dilakukan berikutnya. Air, air

mendidih, kawat kasa, kertas saring, tissue, sarung tangan, pewarna malakit hijau,
safranin, preparat Bacillus subtilis dan Escherichia coli adalah alat dan bahan yang
digunakan pada pewarnaan ini. Pertama-tama preparat kering bakteri Bacillus
subtilis disiapkan. Air mendidih dengan kawat kasa di atasnya juga ikut disiapkan.
Kemudian bagian preparat/apusan Bacillus subtilis dilapisi dengan kertas saring
lalu diletakkan kaca preparat tersebut di atas kawat kasa. Selanjutnya malakit hijau
diteteskan di atas kertas saring selama 20-30 menit (kertas kasa jangan dibiarkan
kering). Setelah itu kaca preparat diangkat dan didinginkan dengan catatan sarung
tangan wajib digunakan selama pengerjaan, lalu preparat dibilas dengan air
mengalir. Kemudian safranin diteteskan sebanyak 1-2 tetes pada preparat dan
didiamkan selama 30 detik, lalu dibilas dengan air mengalir. Kelebihan air
ditiriskan menggunakan tissue atau kertas saring hingga kering. Cara tersebut
dilakukan juga pada preparat kering Escherichia coli.
Selain pewarnaan sederhana, pewarnaan Gram, dan pewarnaan endospora
dilakukan juga pewarnaan kapsula dengan alat dan bahan yang digunakan
diantaranya dua buah kaca objek, batang oose, zat pewarna kristal violet, larutan
CuSO4 20%, kultur Serratia marcescens dan Enterobacter aerogenes. Pertama-
tama, kristal violet diteteskan pada kaca objek yang sebelumnya sudah dibersihkan.
Kemudian batang oose dipanaskan pada Bunsen, lalu dilakukan pencuplikan kultur
Serratia marcescens sebanyak 1 loop oose secara aseptis yaitu kondisi tabung
bakteri dekat dengan nyala api bunsen. Cuplikan kemudian diinokulasi pada zat
warna yang ada di kaca objek, kemudian didiamkan selama 5-7 menit. Kelebihan
pewarna dicuci dengan CuSO4. Cara tersebut dilakukan juga pada kultur
Enterobacter aerogenes.
Berikutnya adalah dilakukan pengamatan dengan menggunakan mikroskop
cahaya. Hal pertama yang dilakukan adalah dengan diputarnya lensa okuler ke arah
pengamat, kemudian pengunci lensa dikencangkan dan mikroskop dinyalakan.
Intensitas cahaya dapat diatur sesuai yang diinginkan. Setelah itu, preparat yang
akan diamati diletakkan pada meja objek dan diatur dengan digunakannya
makrometer horizontal hingga terkena cahaya. Hal yang perlu diingat bahwa dalam
pengamatan dengan mikroskop selalu dimulai dari lensa objektif perbesaran yang
paling rendah. Fokus kasar dan fokus halus dapat diatur dengan mikrometer
vertikal. Setelah fokus diatur, perbesaran lensa objektif dinaikkan dengan
digesernya lensa mulai dari 4x hingga 40x perbesaran. Untuk pengamatan dengan
perbesaran 100x dapat digunakannya minyak imersi dengan cara preparat
diposisikan diantara lensa 40x dan 100x, kemudian preparat diteteskan satu tetes
minyak imersi. Setelah itu lensa diputar ke perbesaran 100x. Apabila pengamatan
telah selesai, meja objek dapat diturunkan dan kaca preparat dikeluarkan.
Kemudian lensa dibersihkan dengan alkohol 96% atau xylol dengan cara diteteskan
pada kertas lensa dan diusapkan pada lensa. Setelah selesai, mikroskop dimatikan
dan lensa diputar kembali sehingga berada pada posisi paling dalam juga meja
objek yang dinaikkan. Lalu lensa okuler diputar ke posisi semula, dan dikunci
kembali dengan kuat. Kabel mikroskop dicabut dan digulung pada badan
mikroskop. Terakhir, mikroskop ditutup dengan plastik penutup dan dikembalikan
ke tempat penyimpanan dengan cara dipegang menggunakan kedua tangan dan
didekatkan ke badan.
V. HASIL PENGAMATAN
Tabel 5.1. Pewarnaan Asam
No. Gambar Keterangan
1. Tanggal praktikum: 10 Februari
2021
Tanggal Pengamatan: 10 Februari
2021
Kultur: Bacillus subtilis
Reagen: Nigrosin
Perbesaran: 40x
Gambar 1. Pewarnaan asam bakteri Keterangan: Berwarna kecoklatan,

Bacillus subtilis berbentuk batang
(Dokumentasi kelompok 3, 2020)
2021
2021
Kultur: Escherichia coli
Reagen: Nigrosin
Perbesaran: 1000x
Gambar 2. Pewarnaan asam bakteri Keterangan: Berbentuk batang-

Escherichia coli batang kecil, berwarna putih
2021
2021
Kultur: Serratia marcescens
Reagen: Nigrosin
Perbesaran: 40x
Gambar 3. Pewarnaan asam bakteri Keterangan: Tidak teramati
Serratia marcescens

2021
2021
Kultur: Staphylococcus aureus
Reagen: Nigrosin
Perbesaran: 1000x
Keterangan: Berbentuk bulat
Gambar 4. Pewarnaan asam bakteri
lonjong, berwarna putih
Staphylococcus aureus
Tabel 5.2. Pewarnaan Basa

2021
2021
Reagen: Kristal Violet dan Safranin
Perbesaran: 100x
Gambar 5. Pewarnaan basa bakteri
Keterangan: Berbentuk batang
Bacillus subtilis
2021
2021
Perbesaran: 1000x
Escherichia coli
(Dokumentasi kelompok 8, 2020) Keterangan: Bentuk batang,

berkoloni acak.
2021
2021
Perbesaran: 400 x
Keterangan: Berbentuk batang,
berkoloni (tidak teramati dengan
Serratia marcescens
jelas)
2021
2021
Perbesaran: 1000x
Gambar 8. Pewarnaan basa bakteri Keterangan: Berbentuk bulat,
Staphylococcus aureus berkoloni, berwarna ungu
Tabel 5.3. Pewarnaan Gram

1. Tanggal praktikum: 10 Februari 2021
2021
Reagen: Kristal violet, Lugol,
Alkohol 96%, dan Safrain
Perbesaran: 400x
Gambar 9. Pewarnaan Gram bakteri Keterangan: Gram positif
Bacillus subtilis
2021
Perbesaran: 100x
Keterangan: Gram negatif
Gambar 10. Pewarnaan Gram
bakteri Escherichia coli
2021
Perbesaran: 100x
Keterangan: Gram negatif
bakteri Serratia marcescens

2021
Reagen: Kristal Violet, Lugol,
Perbesaran: 100x
Keterangan: Gram positif

bakteri Staphylococcus aureus
Tabel 5.4. Pewarnaan Endospora

2021
Reagen: Malakit hijau dan safranin
Perbesaran: 400x
Keterangan: Endospora tidak terlalu
Gambar 13. Pewarnaan endospora jelas
bakteri Bacillus subtilis
2021
Reagen: Malakit hijau dan safranin
Perbesaran: 1000x
Gambar 14. Pewarnaan endospora Keterangan: Tidak ditemukan

bakteri Escherichia coli
Tabel 5.5. Pewarnaan Kapsula

2021
Kultur: Enterobacter aerogenes
Reagen: Kristal Violet dan CuSO4
Perbesaran: 1000x
Keterangan: Terdapat Kapsula
Gambar 15. Pewarnaan kapsula
bakteri Enterobacter aerogenes
2021
Reagen: Kristal Violet dan CuSO4
Perbesaran: 400x
Keterangan: Terdapat Kapsula
Gambar 16. Pewarnaan kapsula

bakteri Serratia marcescens
VI. PEMBAHASAN
6.1 Pewarnaan Asam
Pewarnaan asam pada praktikum ini dilakukan pada beberapa mikroba seperti
Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Serratia marcescens, dan Escherichia
coli. Tabel 5.1 menunjukan hasil pengamatan keempat mikroba tersebut pada
pewarnaan asam dengan menggunakan reagen nigrosin/tinta cina. Menurut Austin
CC (n.d) nigrosin merupakan pewarna asam yang dapat melepaskan ion hidrogen
sehingga bermuatan negatif. Karena permukaan sebagian besar sel bakteri
bermuatan negatif, maka permukaan sel bakteri akan menolak pewarna nigrosine
ini. Pada pewarnaan ini, kaca objek akan terwarnai, tetapi tidak dengan sel
bakterinya. Bakteri akan muncul sebagai bintik bening dengan latar belakang yang
gelap. Hal ini seiring dengan tujuan dilakukannya pewarnaan asam ini adalah untuk
mengetahui morfologi dari suatu bakteri yang diamati. Dengan pewarnaan ini, kita
dapat mengamati secara lebih jelas mengenai morfologi mikroba tersebut.
Pada Gambar 1 ditunjukan hasil pengamatan pewarnaan asam pada apusan

kering dari Bacillus subtilis. Pada gambar tersebut dapat dilihat bitnik-bintik kecil
berbentuk batang berwarna kecoklatan (coklat muda). Walau nigrosine tidak secara
menyeluruh menutupi permukaan apusan, namun ciri-ciri mkroba Sebagian masih
dapat teramati. Hal ini sesuai dengan yang dinyatakan oleh Soesanto (2008) bahwa
sel Bacillus spp. berbentuk batang, berukuran 0,3-2,2 x 1,2-7,0 μm.
Gambar 2 menunjukan hasil pengamatan dari sel bakteri Escherichia coli

yang menunjukan ciri morfologi membentuk batang-batang kecil berwarna putih.
Sel menyebar walau beberapa sel berdekatan dengan sel lainnya seperti
berpasangan. Seperti yang dinyatakan oleh Jawetz dkk. (1996) bahwa Escherichia
coli yang merupakan bakteri Gram negatif berbentuk batang pendek yang memiliki
panjang sekitar 2 μm, diameter 0,7 μm, lebar 0,4-0,7μm dan bersifat anaerob
fakultatif. Selnya bisa terdapat tunggal, berpasangan, dan dalam rantai pendek,
biasanya tidak berkapsul.
Serratia marcescens adalah bakteri selanjutnya yang diamati pada pewarnaan

asam ini. Namun bakteri ini tidak teramati dengan jelas seperti yang ditunjukan oleh
Gambar 3. Hal ini dapat disebabkan oleh beberapa faktor yaitu kesalahan pada
teknik pewarnaan asam atau perbesaran yang digunakan masih belum maksimal.
Namun secara literatur, bakteri Serratia marcescens memiliki bentuk sel batang atau
bacillus dan beberapa galur membentuk kapsul, memiliki ukuran koloni sangat
kecil hingga 2 mm. Bakteri ini bersifat motil karena memiliki flagel peritrik yang
digunakan sebagai alat gerak dan flagel tersebut ditemukan pada seluruh sel bakteri.
Secara makroskopis bakteri ini membentuk koloni cembung, lembut, dengan tepi
yang berbeda, dan dapat menghasilkan pigmen merah (Rosidah, 2016).
Selanjutnya ialah Staphylococcus aureus pada Gambar 4 yang menunjukan

ciri morfologi sel berbentuk bulat lobjong berwarna putih. Serupa seperti
pernyataan Jawetz dkk. (1996), Staphylococcus aureus merupakan bakteri gram
positif berbentuk bulat, bergerombol seperti susunan buah anggur koloni berwarna
abu-abu. Sel yang terlihat tidak sebanyak sel-sel bakteri yang teramati sebelumnya,
terlihat tunggal dan tidak berkoloni. Hal ini dapat disebabkan karena posisi kaca
objek yang diamati terletak di pinggiran apusan kaca objek. Kembali pada ciri
morfologi yang teramati,
6.2 Pewarnaan Basa
Sama seperti pewarnaan asam, pewarnaan basa pada praktikum ini dilakukan
pada preparat kering Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Serratia marcescens,
dan Escherichia coli seperti yang ditunjukan pada tabel 5.2. Reagen yang
digunakan pada pewarnaan basa kristal violet dan safranin yang memiliki sifat basa.
Maka dari pewarnaan ini akan berbanding terbalik dengan pewarnaan asam, dimana
sel akan terwarnai dengan latar yang masih bening (tidak terwarnai).
Gambar 5 menunjukan hasil pengamatan mikoskopis dari bakteri Bacillus

subtilis yang menunjukan ciri berbentuk batang, sedangkan warna tidak teramati
karena warna yang ditampilkan adalah warna dari efek pemberian safranin dan
kristal violet. Hal ini sama seperti pernyataan Soesanto (2008) bahwa sel Bacillus
spp. berbentuk batang, berukuran 0,3-2,2 x 1,2-7,0 μm.
Escherichia coli yang merupakan bakteri Gram negatif berbentuk batang

pendek yang memiliki panjang sekitar 2 μm, diameter 0,7 μm, lebar 0,4-0,7μm dan
bersifat anaerob fakultatif. Selnya bisa terdapat tunggal, berpasangan, dan dalam
rantai pendek, biasanya tidak berkapsul. Escherichia coli membentuk koloni yang
bundar, cembung, dan halus dengan tepi yang nyata (Jawetz et al., 1996). Pada hasil
pengamatan Gambar 6 ditunjukan morfologi dari Escherichia coli yaitu berbentuk
batang dan berkoloni acak. Bedasarkan pernyataan tersebut bisa dikatakan bahwa
hasil pengamatan sesuai bahwa bakteri Escherichia coli memiliki bentuk batang
dengan sifat sel yang tunggal, berpasangan, dan berkoloni.
Bakteri Serratia marcescens memiliki bentuk sel batang atau bacillus dan
beberapa galur membentuk kapsul, memiliki ukuran koloni sangat kecil hingga 2
mm. Bakteri ini bersifat motil karena memiliki flagel peritrik yang digunakan
sebagai alat gerak dan flagel tersebut ditemukan pada seluruh sel bakteri. Secara
makroskopis bakteri ini membentuk koloni cembung, lembut, dengan tepi yang
berbeda, dan dapat menghasilkan pigmen merah (Rosidah, 2016). Pada Gambar 7
ditunjukan ciri morfologi Serratia marcescens yang teramati dengan jelas hanya
membentuk koloni yang sangat padat. Flagel atau alat gerak lainnya tidak dapat
teramati, bahkan bentuk yang terlihat seperti batang tidak terlihat terlalu jelas.
Walaupun begitu, hasil pengamatan ini masih sesuai dengan literatur sebelumnya
yang menyatakan bahwa Serratia marcescens berbentuk batang dan berkoloni.
Pada hasil pengamatan Gambar 8 ditunjukan ciri morfologi dari bakteri

Staphylococcus aureus yaitu berbentuk bulat, berkoloni, dan berwarna ungu.
Pengmatan ini sama hal-nya dengan pernyataan Jawetz dkk. (1996) bahwa
Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif berbentuk bulat,
bergerombol seperti susunan buah anggur koloni berwarna abu-abu hingga kuning
tua, koagulase positif, berdiameter 0,8-1,2 µm, mudah tumbuh pada media
pertumbuhan dalam keadaan aerob, tidak berspora, dan tidak bergerak. Pada hasil
pengamatan pun tidak ditemukan spora atau alat gerak lainnya.
6.3 Pewarnaan Gram
Bakteri dapat diklasifikasikan ke dalam dua jenis berdasarkan pewarnaan

Gram, yaitu bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif. Menurut Pusdik KP
(2018) bakteri Gram positif adalah bakteri yang mampu mempertahankan zat warna
utama dalam pewarnaan Gram, yaitu Gentian Violet (ungu kristal iodium),
sehingga nampak berwarna ungu saat pengamatan dikarenakan dinding sel

kelompok bakteri ini tersusun oleh sebagian besar Peptidoglikan, yang mampu
mengikat zat warna dan tidak rusak saat dicuci dengan alkohol.
Sedangkan bakteri Gram negatif memiliki komposisi dinding sel yang sebagian
besar tersusun dari lapisan lipid, sehingga pada saat pewarnaan kurang dapat
mempertahankan zat warna utama terutama saat dicuci dengan alkohol (lipid rusak
saat dicuci dengan alkohol), akibatnya kelompok bakteri ini memberikan
kenampakan warna merah (warna dari zat warna ke dua: safranin atau air fuchsin)
di akhir kegiatan pewarnaan Gram (Pusdik KP, 2018).
Gambar 17. Perbedaan struktur sel bakteri Gram positif dan Gram negative
Sumber: ardydii.wordpress.com
Pewarnaan Gram termasuk ke dalam jenis pewarnaan diferensial yang berarti

pewarnaannya menggunakan lebih dari satu zat warna. Tak hanya itu, senyawa
kimia lain juga diperlukan untuk menentukan struktur khusus dari dinding sel yang
diamati. Kurniati dkk (2018) menguraikan 4 tingkatan pewarnaan Gram,
diantaranya:
- Pemberian zat pewarna utama, yaitu kristal violet yang berwarna ungu
- Intensifikasi pewarna bakteri utama dengan larutan mordan, yaitu lugol
- Pencucian atau dekolorisasi dengan larutan alkohol 96%
- Pemberian zat pewarna bakteri lain sebagai pewarna bakteri lawan,
yaitu safranin yang berwarna merah
Selain zat pewarna yang digunakan, waktu inoculum juga mempengaruhi
dalam pewarnaan Gram ini. Kultur yang masa inokulumnya lebih muda atau kurang
dari 24 jam akan menyebabkan belum terbentuknya peptidoglikan secara sempurna
sehingga dapat menghasilkan warna merah yang tidak seharusnya terjadi pada
Gram positif. Begitu juga inokulum pada Gram Negatif yang akan menyebabkan
peptidoglikan menjadi lebih tebal sehingga dapat mempertahankan kristal violet
dan menghasilkan warna ungu pada akhir pewarnaan. Kultur yang lebih tua atau
lebih dari 24 jam juga tidak baik untuk hasil pengamatan karena akan menyebabkan
dinding sel lemah karena terintegrasi sehingga sel tua dan mati. Maka dari itu,
waktu inoculum yang paling tepat ialah selama 24 jam.
Tabel 5.3 menunjukan hasil pengamatan dari pewarnaan Gram pada bakteri
Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Serratia marcescens, dan Escherichia
coli. Gambar 9 menunjukan bahwa Bacillus subtilis adalah bakteri Gram positif,
karena masih dapat mempertahankan warna ungu dari pewarnaan pertama yaitu
kristal violet yang artinya bakteri ini memiliki dinding yang tebal. Hal ini sesuai
dengan pernyataan Awais dkk. (2017) bahwa Bacillus subtilis bersifat Gram positif,
menghasilkan spora, motil, indol negatif, menghasilkan asam sitrat, katalase positif
dan oksidasi positif.
Escherichia coli termasuk bakteri Gram negatif ditunjukan oleh Gambar 10

karena menghasilkan warna jingga yang menunjukan bahwa bakteri ini tidak dapat
mempertahankan warna kristal violet karena lapisan tipis yang tersusun dari lipid
rusak oleh alkohol. Warna jingga ini dihasilkan dari proses pewarnaan keempat
yaitu pewarnaan safranin. Jenis Gram bakteri Escherichia coli sesuai dengan
pernyataan Jawetz dkk. (1996) bahwa bakteri ini merupakan bakteri Gram negative
berbentuk batang pendek yang memiliki panjang sekitar 2 μm, diameter 0,7 μm,
lebar 0,4-0,7μm dan bersifat anaerob fakultatif.
Selanjutnya adalah hasil pengamatan Serratia marcescens yang termasuk

bakteri Gram negative (Gambar 11), sama hal nya yang terjadi pada bakteri
Escherichia coli. Dijelaskan juga oleh Buckle (2015) Serratia marcescens adalah
basil gram negatif yang tumbuh secara alami di tanah dan air, menghasilkan pigmen
merah pada suhu kamar.
Staphylococcus aureus merupakan bakteri gram positif berbentuk bulat,

bergerombol seperti susunan buah anggur koloni berwarna abu-abu hingga kuning
tua, koagulase positif, berdiameter 0,8-1,2 µm, mudah tumbuh pada media
pertumbuhan dalam keadaan aerob, tidak berspora, dan tidak bergerak (Jawetz
dkk.,1996). Pada hasil pengamatan (Gambar 12) ditunjukan bahwa
Staphylococcus aureus termasuk ke dalam kelompok bakteri Gram positif.
6.4 Pewarnaan Endospora
Endospora adalah sel bakteri yang telah mengalami diferensiasi menjadi lebih
tahan terhadap panas, zat kimia berbahaya, radiasi dan keadaan lain yang dapat
membunuh sel bakteri biasa. Fungsi endospora pada sel bakteri adalah
sebagai survival structure (struktur dorman). Struktur berupa dinding tebal ini yang
memungkinkan bakteri bertahan pada keadaan yang tidak menguntungkan.
Misalnya saat kondisi lingkungan berubah menjadi tidak sesuai dan ekstrim
(kekeringan, temperatur sangat rendah atau sangat tinggi) atau kekurangan nutrisi
(Karomah, 2020).
Adapun tiga jenis bakteri endospore berdasarkan letaknya saat diamati

menggunakan mikroskop (Karomah, 2020), yaitu:
- Endospora terminal: Endospora yang terletak disalah satu ujung sel

vegetatif bakteri. Contoh: Clostridium tertium
- Endospora subterminal: Endospora yang letaknya diujung sel. Namun
lebih menjorok ketengah sel. Contoh: Clostridium perfringens
- Endospora sentral: Endospora yang terletak di tengah sel vegetatif.
Contoh: Clostridium bifermentans.
Hasil pengamatan pewarnaan endospora diberikan pada bakteri Bacillus

subtilis dan Escherichia coli seperti pada tabel 5.4. pada Gambar 13 ditunjukan
hasil pengamatan pewarnaan endospora pada Bacillus subtilis, ditemukan
endospora pada bakteri ini walaupun hasil pengamatan tidak terlalu jelas. Namun
dapat dipastikan bakteri ini akan menghasilkan endospore seperti yang dinyatakan
oleh Pelczar dkk. (1976) bahwa Bacillus spp membentuk endospora, merupakan
gram positif, bergerak dengan adanya flagel peritrikus, dapat bersifat aerobik atau
fakultatif anaerobik serta bersifat katalase positif.
Menurut Jawetz dkk. (1996) Escherichia coli memiliki bentuk seperti coocal
hingga membentuk sepanjang ukuran filamentous dan tidak ditemukan spora.
Sesuai dengan pernyataan tersebut, pada Gambar 14 memang tidak ditemukan

endospore yang terbentuk.
6.5 Pewarnaan Kapsula
Kapsula merupakan suatu lapisan lendir dengan tebal lebih dari 0,2 mU dan
terdapat di luar dinding sel. Fungsi struktur kapsula adalah sebagai pelindung
bakteri dari serangan luar yang dapat merugikan dirinya. Kapsula dapat terbentuk
dengan syarat-syarat lingkungan hidupnya yang khusus seperti adanya konsentrasi
gula yang tinggi, adanya serum darah, atau dipertumbuhkan salam jaringan yang
hidup (Koesnijo, 1974). Bakteri-bakteri pembentuk kapsula diantaranya ada
Pneumococci, Pyogenic streptococci, Bacillus anthrachis.
Tabel 5.5 menunjukan hasil pengamatan pewarnaan kapsula pada Enterobacter

aerogenes dan Serratia marcescens. Gambar 15 menunjukan hasil pengamatan
pewarnaan kapsula pada Enterobacter aerogenes yang menunjukan bakteri ini
dapat membentuk kapsula. Hal ini sesuai dengan pernyataan Tarina dan Kusuma
(2017), Enterobacteri aerogenes atau yang sekarang dikenal sebagai Klebsiella
pneumoniae merupakan bakteri yang memiliki struktur kapsula.
Menurut Rosidah (2016) Serratia marcescens memiliki bentuk sel batang atau
bacillus dan beberapa galur membentuk kapsul, memiliki ukuran koloni sangat
kecil hingga 2 mm. Dari hasil pengamatan pewarnaan kapsula Serratia marcescens
yang ditunjukan oleh Gambar 16, bakteri ini menghasilkan kapsul disekitar sel
bakterinya.
VII. KESIMPULAN DAN SARAN
7.1 Kesimpulan
Berdasarkan hasil pengamatan mikroskopis dapat disimpulkan bahwa:
1. Karakter morfologi bakteri dengan melakukan pewarnaan basa dan asam

dari:
a. Bacillus subtilis: berbentuk batang
b. Escherichia coli: berbentuk batang, warna putih, dan berkoloni (tunggal,
pasangan, acak)
c. Serratia marcescens: berbentuk batang, berkoloni
d. Staphylococcus aureus: berbentuk bulat agak lonjong, berkoloni seperti
anggur berwarna ungu
2. Perbedaan dari pewarnaan basa dan asam adalah reagen asam yaitu
nigrosine hanya dapat mewarnai lingkungan dan tidak mewarnai sel,
sedangkan reagen pada basa yaitu safranin dan kristal violet dapat mewarnai
sel mikroba tanpa mewarnai lingkungannya.
3. Bacillus subtilis dan Staphylococcus aureus merupakan bakteri yang
tergolong ke dalam Gram Positif dengan dinding sel yang terdiri dari
peptidoglikan, sedangkan Serratia marcescens dan Escherichia coli
merupakan bakteri yang tergolong ke dalam Gram negatif dengan dinding
sel yang terdiri dari lipid/lipipolisakarida.
4. Bakteri Bacillus subtilis menghasilkan struktur endosopra dan bakteri
Escherichia coli tidak menghasilkan struktur endospore.
5. Bakteri Enterobacter aerogenes dan Serratia marcescens membentuk
kapsul.
7.2 Saran
Saran ditujukan terkait dengan keterangan data hasil pengamatan yang dapat
lebih diperjelas.
VIII. DAFTAR PUSTAKA
Austin Community College. (n.d). Negative Stain. Austincc Edu.

https://www.austincc.edu/microbugz/negative_stain.php#:~:text=The%20ne
gative%20stain%20is%20particularly,Nigrosin%20is%20an%20acidic%20s
tain. Diakses pada 8 Februari 2021.
Awais, M., A.A. Shah, A. Hammed and F. Hasan. (2007). Isolation, identification
and optimization of Bacitracin produced Bacillus sp. Pak. J. Bot., 39(4):
1303-1312
Buckle, J. (2015). Infection. Clinical Aromatherapy, 130–167.
Dwidjoseputro, D. (2003). Dasar - Dasar Mikrobiologi. Djambatan: Jakarta.
Earl, A.M., R. Losick and R. Kolter. (2008). Ecology and genomics of
Bacillussubtilis. Trends in Microbiology Vol.16 No.6.269-275
Hidayat, Asep, dkk. (2018). Bioprospek Mikroba Hutan Tropis Indonesia. IPB Press.
Jawetz, E., Melnick, J. L., Adelberg, E. A. (1996). Mikrobiologi Kedokteran (Edisi
ke-20). EGC.
Karomah, Laila. (2020). Endospora Bakteri: Struktur, Fungsi & Jenisnya.
Mikrobio.ID. https://mikrobio.id/mikrobiologi/bakteriologi/endospora-
bakteri.html#Fungsi_Endospora. Diakses pada 8 Februari 2021.
Koesnijo, K. (1974). Kapsula Bakteri dan Fungsinya. Journal of the Medical
Sciences (Berkala ilmu Kedokteran), 6(04). UGM.
Kurniati, T. H., Indrayanti, R., Muzajjanah, Rustam, Y., & Sukmawati, D. (2018).
Penuntun Praktikum Mikrobiologi. Universitas Negeri Jakarta.
Pelczar, M.J., and E.C.S. Chan 1986. Microbiology, MC Graw Hill Book Company,
New York: 889 pp.
Pusdik KP. (2018, 19 Desember). Bakteri Gram Positif Dan Bakteri Gram Negatif.
E-learning PUSDIK KP.
http://www.pusdik.kkp.go.id/elearning/index.php/modul/read/181219-
014108bakteri-c-gram-c-positif-c-dan-c-bakteri-c-gram-c-
negatif#:~:text=Bakteri%20Gram%20Positif%20mampu%20mempertahank
an,dan%20tidak%20rusak%20saat%20dicuci. Diakses pada 8 Februari 2021.
Rosidah, U. (2016). Tepung Ampas Tahu Sebagai Media Pertumbuhan Bakteri
Serratia marcescens. [Skripsi, Universitas Muhammadiyah Semarang]. Hal
22-23. http://repository.unimus.ac.id/142/1/SKRIPSI%20FULLTEX.pdf.
Diakses pada 8 Februari 2021
Soesanto, L. (2008). Pengantar Pengendalian Hayati Penyakit Tanaman, Suplemen
ke Gulma dan Nematoda, 573. Rajawali Pers.
Tarina, N. T. I., & Kusuma, S. A. F. (2017). Deteksi bakteri Klebsiella pneumonia:
Farmaka, 15(2), 119-126

Melinda Anggraeni - 11518048 - Laporan

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Melinda Anggraeni - 11518048 - Laporan

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

LAPORAN PRAKTIKUM

Modul II: Pewarnaan Sel Bakteri

PROGRAM STUDI REKAYASA KEHUTANAN

IV. CARA KERJA

Pewarnaan endospora adalah langkah yang dilakukan berikutnya. Air, air

Gambar 1. Pewarnaan asam bakteri Keterangan: Berwarna kecoklatan,

Gambar 2. Pewarnaan asam bakteri Keterangan: Berbentuk batang-

(Dokumentasi kelompok 3, 2020)

Tabel 5.2. Pewarnaan Basa

(Dokumentasi kelompok 8, 2020) Keterangan: Bentuk batang,

Tabel 5.3. Pewarnaan Gram

4. Tanggal praktikum: 10 Februari 2021

Gambar 12. Pewarnaan Gram

Tabel 5.4. Pewarnaan Endospora

Gambar 14. Pewarnaan endospora Keterangan: Tidak ditemukan

(Dokumentasi kelompok 8, 2020)

Tabel 5.5. Pewarnaan Kapsula

Gambar 16. Pewarnaan kapsula

6.1 Pewarnaan Asam

Pada Gambar 1 ditunjukan hasil pengamatan pewarnaan asam pada apusan

Gambar 2 menunjukan hasil pengamatan dari sel bakteri Escherichia coli

Serratia marcescens adalah bakteri selanjutnya yang diamati pada pewarnaan

Selanjutnya ialah Staphylococcus aureus pada Gambar 4 yang menunjukan

6.2 Pewarnaan Basa

Gambar 5 menunjukan hasil pengamatan mikoskopis dari bakteri Bacillus

Escherichia coli yang merupakan bakteri Gram negatif berbentuk batang

Pada hasil pengamatan Gambar 8 ditunjukan ciri morfologi dari bakteri

6.3 Pewarnaan Gram

Bakteri dapat diklasifikasikan ke dalam dua jenis berdasarkan pewarnaan

sehingga nampak berwarna ungu saat pengamatan dikarenakan dinding sel

Pewarnaan Gram termasuk ke dalam jenis pewarnaan diferensial yang berarti

Escherichia coli termasuk bakteri Gram negatif ditunjukan oleh Gambar 10

Selanjutnya adalah hasil pengamatan Serratia marcescens yang termasuk

Staphylococcus aureus merupakan bakteri gram positif berbentuk bulat,

6.4 Pewarnaan Endospora

Adapun tiga jenis bakteri endospore berdasarkan letaknya saat diamati

- Endospora terminal: Endospora yang terletak disalah satu ujung sel

Hasil pengamatan pewarnaan endospora diberikan pada bakteri Bacillus

Sesuai dengan pernyataan tersebut, pada Gambar 14 memang tidak ditemukan

6.5 Pewarnaan Kapsula

Tabel 5.5 menunjukan hasil pengamatan pewarnaan kapsula pada Enterobacter

VII. KESIMPULAN DAN SARAN

Berdasarkan hasil pengamatan mikroskopis dapat disimpulkan bahwa:

1. Karakter morfologi bakteri dengan melakukan pewarnaan basa dan asam

VIII. DAFTAR PUSTAKA

Austin Community College. (n.d). Negative Stain. Austincc Edu.

Anda mungkin juga menyukai