Jurnal Kimia Asia Vol. 21, No.

8 (2009), 6463-6467

Penentuan Asam Askorbat dalam Vitamin C (Tablet) oleh

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

M OHAMED HS A HMIDA
Departemen Gizi, Fakultas Kesehatan Masyarakat, Universitas Kedokteran Al-Arab, Benghazi, Libya
E-mail: hamzasol@yahoo.com

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui teknik yang sesuai untuk penentuan
asam askorbat. Metode HPLC-UV yang sensitif dikembangkan untuk penghitungan cepat dan
sederhana asam askorbat (vitamin C) dalam suplemen vitamin C yang berbeda. Metode tersebut
menggunakan sebuah Haisil
C 18 kolom dan untuk fase diam. Air kelas HPLC dibawa ke pH 2.2 dengan asam
sulfat: metanol (80:20) untuk fase gerak.
Laju alir 1,0 mL / menit dan deteksi UV pada 243 nm. Batas deteksi diperkirakan
0,42 ppm. Metode yang digunakan menunjukkan nilai presisi (deviasi standar relatif,
RSD%) sebesar 1,79% untuk tablet effervecense dan 2,19% untuk tablet
konvensional. Hasil yang diperoleh sesuai dengan yang ditemukan oleh metode
titrimetri resmi AOAC, akurasi (kesalahan relatif, RE%) adalah 1,67% dan 1,41%
untuk tablet effervescence dan konvensional.

Kata Kunci: Asam askorbat, Vitamin C, RP-HPLC, Formulasi Farmasi, Tablet

Effervescence, Tablet Konvensional.

PENGANTAR

Antioksidan memainkan peran penting dalam membersihkan spesies oksigen aktif dan melindungi sel
dari kerusakan oksidatif. Asam askorbat (vitamin C, Gbr. 1) adalah antioksidan utama. Bertindak sebagai
kofaktor dalam hidroksilasi kolagen dan memiliki sifat pengatur pH. Ini dianggap sebagai parameter klinis yang
berguna terkait penyakit kardiovaskular dan kejadian kanker 1-10. Pentingnya asam askorbat dalam ilmu
kedokteran dan makanan, adalah dasar dari minat kami dalam penentuan asam askorbat. Ada beberapa
metode analisis untuk penghitungan asam askorbat yang sebagian besar didasarkan pada karakteristik
antioksidannya 11. Metode yang paling umum untuk penentuan asam askorbat adalah titrasi oksidatif dengan
2,6-dichlorophenol-indophenol. 12. Ini adalah metode yang cepat, tetapi aplikasinya sulit dalam larutan berwarna,
karena gangguan zat pengoksidasi lainnya 13. Teknik kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) layak mendapatkan
perhatian yang meningkat terutama karena kecepatan, selektivitas, dan spesifisitasnya yang tepat dan
memerlukan persiapan sampel yang lebih sedikit. 14,15. Oleh karena itu, penelitian ini menjelaskan metode cepat
yang sangat sensitif untuk menghitung vitamin C dalam suplemen vitamin C yang berbeda menggunakan
kromatografi cair fase terbalik isokratik.
6464 Ahmida Orang Asia J. Chem.

H. H.
HO C

C OH
H. H.
C
HO C HAI

C
C
HAI

HO

Gambar 1. Asam askorbat

EKSPERIMENTAL

Standar asam L-askorbat diperoleh dari E. Merck, Darmstadt, Jerman, asam sulfat dan
metanol, dari Sigma, Saint Louis, MO, USA. Air dimurnikan dengan osmosis balik dan kemudian
melewati filter arang dan deionisasi.
Tablet yang mengandung asam askorbat: Vitamin C ® tablet konvensional dan
vitascorbol.dll ® Tablet effervescent, semua berlabel mengandung 500 mg masing-masing diperoleh dari sumber
komersial.
Lima tablet vitamin C ditimbang dan dihaluskan menjadi bubuk halus, kemudian pindahkan bubuk yang
ditimbang dengan akurat setara dengan 40 mg asam askorbat ke dalam labu ukur 100 mL dan dilarutkan
dalam pelarut yang disiapkan sebelumnya (80% buffer asam sulfat dan 20% metanol ) pada pH 2.2
menghasilkan konsentrasi asam askorbat 400 ppm. Sebuah alikuot dari larutan disaring melalui filter 0.45
µmGelman sebelum pengenceran dengan 1: 20 dan segera dianalisis.

Sistem HPLC terdiri dari pompa Cecil piston ganda CE 4100, variabel
detektor UVCE 4201 panjang gelombang (diatur pada 243 nm), Haisil C. 18 100 Å kolom (25 cm ×
4,6 mm id) (HigginsAnalytical Lnc). Suntikan 20 µL dan vitamin C.
dielusi secara isokratis pada suhu kamar dalam 3,18 ± 0,20 menit dengan laju alir 1,0 mL / menit
dengan pelarut yang terdiri dari air kelas HPLC dibawa ke pH 2,2 dengan asam sulfat: metanol
(80:20) (pH 2,2). Fase gerak disaring dengan melewati filter membran 0,22 µm (Millipore, Bradford,
MA, USA). Fase gerak dipisahkan dengan memompa gas helium murni ke dalam reservoir pelarut.

Konsentrasi asam askorbat dalam ekstrak ditentukan dengan membandingkan luas yang
sesuai dengan asam askorbat dari ekstrak dengan hubungan konsentrasi luas dari kurva
standar yang dibuat dengan asam askorbat murni ,. Isi tablet dihitung dari kurva kalibrasi atau
menggunakan persamaan regresi yang sesuai.

HASIL DAN DISKUSI

Gambar. 2 menunjukkan kromatogram dari larutan standar asam askorbat di bawah kondisi
kromatografi yang dijelaskan. Kromatogram ini mengungkapkan askorbat itu
asam memberikan puncak yang jelas pada waktu retensi t R 3.18 menit. Fase gerak dipilih setelah beberapa kali
uji coba dengan berbagai proporsi metanol pada pH yang berbeda
nilai menggunakan H. 2 BEGITU 4.
Vol. 21, No. 8 (2009) Penentuan Asam Askorbat dalam Vitamin C dengan HPLC 6465

Gambar. 2. Kromatogram khas asam askorbat (20 ppm) di bawah HPLC-UV dijelaskan
kondisi, Serangkaian larutan standar disiapkan dari larutan stok asam askorbat

Grafik kalibrasi konsentrasi asam askorbat terhadap area di bawah puncak diplot seperti yang
ditunjukkan pada Gambar. 3. Kurva standar linier pada rentang dari
1,00 ppm sampai 80,00 ppm. Analisis regresi khas dari plot ini menghasilkan persamaan kalibrasi a =
2,4C + 0,68, di mana a = area di bawah puncak, C = konsentrasi asam askorbat dalam ppm dengan
koefisien korelasi (R 2) 0,999.
250

200

150
AUC

100

50

0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90

Konsentrasi asam askorbat (ppm)

Gambar 3. Kurva kalibrasi asam askorbat, persamaan regresi linier

a = 2,4C + 0,68 (R 2 = 0,999)

Batas deteksi (LOD) untuk metode ini ditentukan dari analisis berulang larutan asam
askorbat standar pada konsentrasi rendah. Konsentrasi terendah dapat diukur dan
dilaporkan dengan keyakinan 99% (tiga SD) diambil sebagai batas deteksi. LOD ditemukan
0,42 ppm. Batas kuantifikasi (LOQ) dihitung 10 kali standar deviasi ulangan. Batas
penghitungan ditemukan 1,40 ppm 16,17.
6466 Ahmida Orang Asia J. Chem.

Metode yang diusulkan diterapkan untuk penentuan asam askorbat dalam tablet konvensional
dan tablet effervescence. Untuk menilai pengulangan metode, konsentrasi tunggal asam askorbat
dalam tablet (20 ppm) disiapkan dan dianalisis selama 6 hari yang berbeda (lima ulangan setiap hari).
Kemudian presisi ditentukan dengan menghitung deviasi standar relatif (RSD%) untuk pengukuran
ulangan dan akurasi dihitung dengan menilai kesesuaian antara jumlah asam askorbat yang diukur
dengan metode HPLC yang diusulkan dan metode AOAC. 12 ( kesalahan relatif RE%). Nilai-nilai ini
dilaporkan pada Tabel-1.

TABEL 1
KONSENTRASI ASAM ASCORBIC DALAM FORMULASI FARMASI SEBAGAI
DITENTUKAN OLEH METODE PROPOSEDAND REFERENCE (AOAC)

Sampel Jumlah ditemukan (mg tablet- 1)

Jumlah nominal (mg tablet- 1) Metode yang diusulkan AOAC 12
Tablet Effervecense (500) - -
Rata-rata ± SD 502 Sebuah ± 9 494 b ± 12
RSD% 1.79 2.43
RE% 3 1.67
Pemulihan (%) 100.4 98.8
Tablet konvensional (500) -
Rata-rata ± SD 503 Sebuah ± 11 496 b ± 11
RSD% 2.19 2.22
RE% 1.41
Pemulihan (%) c 100.6 99.2
Sebuah Mean = rata-rata dari 30 nilai (5 ulangan per hari, setiap ulangan dianalisis selama 6 hari yang berbeda); b Mean = rata-rata enam nilai, c

Recovery (%) = [Jumlah yang ditemukan dengan metode yang diusulkan / Jumlah yang ditemukan dengan metode resmi] × 100.

Kesimpulan

Metode HPLC-UV yang cepat, tepat dan selektif menggunakan sistem isokratik tunggal dikembangkan
untuk penentuan asam askorbat dalam tablet konvensional dan tablet effervecense. Metode ini cocok untuk
penghitungan asam askorbat dalam sediaan farmasi. Hasil saat ini menunjukkan bahwa perawatan sampel
sederhana memungkinkan penggunaan metode ini untuk penentuan rutin asam askorbat dalam bentuk
sediaan farmasi lain yang berbeda (seperti sirup dan suntikan) dan produk makanan (pasta tomat) dengan
akurasi yang baik.

REFERENSI

1. AC Carr dan B.Frei, Saya. J. Clin. Nutr., 69, 1086 (1999).

2. P. Knekt, J. Ritz, MA Pereira, EJ O'Reilly, K. Augustsson, GE Fraser, U. Goldbourt, BL Heitmann, G. Hallmans, S.
Liu, P. Pietinen, D. Spiegelman, J. Stevens, J. Virtamo, WC Willett,
EB Rimm dan A. Ascherio, Saya. J. Clin. Nutr., 80, 1508 (2004).
3. SK Osganian, MJ Stampfer, E. Rimm, D. Spiegelman, FB Hu, JE Manson danW.C. Willett
Selai. Coll. Cardiol., 42, 246 (2003).
Vol. 21, No. 8 (2009) Penentuan Asam Askorbat dalam Vitamin C dengan HPLC 6467

4. T. Yokoyama, C. Date, Y. Kokubo, N. Yoshiike, Y. Matsumura dan H. Tanaka, Stroke, 31, 2287
(2000).
5. BG Brown, XQ Zhao, A. Chait, LD Fisher, MC Cheung, JS Morse, AA Dowdy, EK Marino, EL Bolson, P.
Alaupovic, J. Frohlich dan JJ Albers, N. Engl. J. Med., 345, 1583 (2001).

6. KA Steinmetz dan JD Potter, Selai. Diet. Assoc., 96, 1027 (1996).

7. D. Kromhout, Saya. J. Clin. Nutr., 45 detik, 1361 (1987).
8. S. Zhang, DJ Hunter, MR Forman, BA Rosner, FE Speizer, GA Colditz, JE Manson, SE Hankinson dan WC
Willett, J. Natl. Kanker Inst., 91, 547 (1999).
9. KB Michels, L.Holmberg, L. Bergkvist, H. Ljung, A. Bruce dan A. Wolk, Int. J. Cancer, 91,
563 (2001).
10. HR Feiz dan S. Mobarhan, Nutr. Putaran., 60, 34 (2002).
11. MA Farajzadeh dan S. Nagizadeh, Z. Anal. Chem., 58, 1037 (2003).
12. Association of Official Analytical Chemists, Official Methods of Analysis, The Association: Washington, DC, edn.
13 (1980)
13. P. Wimalasiri dan RBH Wills, J. Chromatogr., 256, 368 (1983).
14. SP Sood, LE Sartori, DP Wittmer dan WG Haney, Anal. Chem., 8, 796 (1976).
15. MH Bui-Ngugen, J. Chromatogr., 196, 163 (1980).
16. CM Riley dan TW Rosanske, Pengembangan dan Validasi Metode Analisis, Pergamon, Guildford (1996).

17. LR Snyder, JJ Kirkland dan JL Glajch, Pengembangan Metode HPLCM Praktis, JohnWiley & Sons, INC, Kanada,
edn. 2 (1997).

( Diterima: 15 Janaury 2009; Diterima: 6 Juni 2009) AJC-7635