PENGUJIAN MIKROBIOLOGI BAKTERI Salmonella.sp.

PADA IKAN
BANDENG (Chanos chanos)

DIBALAI KARANTINA IKAN PENGENDALIAN MUTU

DAN KEAMANAN HASIL PERIKANAN SURABAYA I

SIDOARJO-JAWA TIMUR

LAPORAN

PRAKTIK KERJA LAPANG

SEMESTER V SUPM TEGAL

TAHUN AJARAN 2019/2020

DISUSUN OLEH :

NAMA : NASYA NURMALIA NADHIFAH

NIS : 400.4.17.031

KOMPETENSI KEAHLIAN AGRIBISNIS PENGOLAHAN HASIL

PERIKANAN (APHP)

KEMENTERIAN KELAUTAN DAN PERIKANAN

BADAN RISET DAN SUMBER DAYA MANUSIA KELAUTAN DAN

PERIKANAN

SEKOLAH USAHA PERIKANAN MENENGAH (SUPM) TEGAL

1
 PENGUJIAN MIKROBIOLOGI BAKTERI SALMONELLA PADA IKAN
BANDENG (Chanos chanos)

DIBALAI KARANTINA IKAN PENGENDALIAN MUTU

DAN KEAMANAN HASIL PERIKANAN KELAS I SURABAYA I

SIDOARJO-JAWA TIMUR

LAPORAN
PRAKTIK KERJA LAPANG
SEMESTER V SUPM TEGAL
TAHUN AJARAN 2019/2020

Laporan ini telah disetujui dan disahkan pada :

Hari :
Tanggal :
Laporan Praktik Kerja Lapang (PKL) ini telah di setujui oleh:

Menyetujui,
Pembimbing I Pembimbing II

WIDIYANTO, S.Pi HERMAWAN GATOT PRIADI, S.Pd.Si

NIP 19830625 200212 1 002 NIP 19870403 201012 1 005

Mengetahui,
Kepala SUPM Tegal Waka I Bidang Pengajaran

MASKURI, S.Pi, M.Si HENRY ISKANDAR M, A.Pi, M.Si

NIP 19651108 199803 1 001 NIP 19741122 200312 1 004

2
 KATA PENGANTAR

Segala puji syukur penyusun panjatkan kepada Allah SWT yang telah
melimpahkan rahmat dan hidayah-Nya, sehingga penyusun dapat menyelesaikan
penulisan laporan tugas akhir dengan judul “Pengujian Mikrobiologi Bakteri
Salmonella.sp Pada Ikan Bandeng” dalam penyusunan laporan penyusun tak lepas
dari bantuan, arahan dan masukan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, penyusun
mengucapkan banyak terima kasih kepada:
1. Bapak Maskuri, S.Pi, M.Si selaku Kepala di SUPM Negeri Tegal.
2. Bapak Henry Iskandar M., A.Pi, M.Si selaku Waka I Bidang Pengajaran.
3. Bapak Widiyanto,S.St.Pi selaku Ketua Program Keahlian Pengolahan dan
Guru Pembimbing I.
4. Bapak Hermawan Gatot Priadi, S.Pd.Si selaku Guru Pembimbing II.
5. Bapak Muhlin, S.Pi,M.Si selaku Manager Puncak Balai KIPM Kelas I
Surabaya I.
6. Ibu Oktarina Sufianti, S.Pi. selaku Pembimbing di BKIPM Kelas I
Surabaya I Sidoarjo, Jawa Timur.
7. Staf dan Karyawan Balai KIPM Kelas I Surabaya I yang telah membantu
dalam pelaksanaan Praktik Kerja Lapang (PKL).
8. Kedua orang tua yang telah memberikan Do’a serta dukungan kepada
penyusun.
9. Semua pihak yang telah membantu dan tidak bisa penulis sebutkan satu
persatu.
Penulis menyadari bahwa laporan ini masih banyak kekurangan, untuk itu penulis
mengharapkan saran dan kritik yang membangun untuk menyempurnakan laporan
ini. Semoga laporan ini dapat bermanfaat dan dapat memberikan informasi bagi
semua pihak yang memerlukan pengetahuan tentang Pengujian Mikrobiologi
Bakteri Salmonella.sp Pada Ikan Bandeng.

Penyusun

3
 DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL...............................................................................................................i
PENGESAHAN......................................................................................................................ii
KATA PENGANTAR...........................................................................................................iii
DAFTAR ISI.........................................................................................................................iv
DAFTAR GAMBAR.............................................................................................................vi
DAFTAR LAMPIRAN.........................................................................................................ix
BAB I......................................................................................................................................1
PENDAHULUAN...................................................................................................................1
1.1 Latar Belakang.....................................................................................................1
1.2 Tujuan dan Manfaat.............................................................................................2
1.3 Waktu dan Tempat...............................................................................................2
BAB II.....................................................................................................................................3
PELAKSANAAN KEGIATAN.............................................................................................3
2.1 Keadaan Umum...................................................................................................3
2.1.1 Sejarah...............................................................................................................3
2.1.2 Dasar Oprasional...............................................................................................3
2.1.3 Lokasi dan Letak Geografis...............................................................................4
2.1.4 Wilayah Kerja...................................................................................................4
2.2 Strukur Organisasi...............................................................................................5
2.2.1 Visi dan Misi.....................................................................................................6
2.3 Sarana dan Prasarana...........................................................................................7
2.4 Teknis Pegujian....................................................................................................9
2.5 Bakteri Salmonella.sp..........................................................................................9
2.5.1 Sumber Penularan............................................................................................10
2.5.2 Patogenitas......................................................................................................10
2.6 Ikan Bandeng.....................................................................................................11
2.6.1 Klarifikasi........................................................................................................11
2.6.2 Habitat dan Kebiasaan Hidup Ikan Bandeng (Chanos chanos).......................13
2.7 Metode Praktik Salmonella.sp...........................................................................13

4
 2.7.1 Alat dan Bahan...............................................................................................13
2.8 Prosedur Pelasanaan...........................................................................................14
2.8.1 Persiapan Contoh.............................................................................................14
2.8.2.1 Pra pengkayaan.............................................................................................14
2.8.2.2 Pengkayaan...................................................................................................14
2.8.3 Isolasi Salmonella (seleksi pada media agar) dan Identifikasi.........................15
2.8.4.1 Pemilihan Koloni untuk Konfirmasi.............................................................15
2.8.4.2 Uji Biokimia.................................................................................................15
2.9 Hasil dan Pembahasan.......................................................................................17
BAB III.................................................................................................................................26
PEMBAHASAN MASALAH..............................................................................................26
3.1 Masalah..............................................................................................................26
3.2 Pembahasan........................................................................................................28
BAB IV..................................................................................................................................31
PENUTUP.............................................................................................................................31
4.1 Simpulan............................................................................................................31
4.2 Saran..................................................................................................................31
DAFTAR PUSTAKA...........................................................................................................32
LAMPIRAN.........................................................................................................................33
5.1 Alat.....................................................................................................................33
5.2 Bahan.................................................................................................................37

5
 DAFTAR GAMBAR

Gedung Balai KIPM

Proses Stomacher
Larutan sampel yang telah diinkubasi
Proses Inokulasi
Inkubasi MKTTn
Inkubasi Waterbath RV
Media RV Setelah Inkubasi
Media MKTTn Setelah Inkubasi
Media XLD yang belum ditumbuhi bakteri
Media XLD Bereaksi Negatif
Media XLD Bereaksi Positif
Media Nutrient agar yang belum ditumbuhi bakteri
Media Nutrient agar yang telah ditumbuhi bakteri
TSI Negatif
TSI Positif
Urea Agar Negatif
Urea Agar Positif
Reaksi Positif dan Negatif Pada Media LDB
Media VP sebelum ditambah reagen VP
Media VP setelah ditambah reagen VP dan beraksi positif
TB yang belum ditambahkan reagen kovac
Hasil TB
Pengujian Pewarnaan Gram
Bakteri Gram

6
 DAFTAR TABEL

Hasil Uji
Hasil Pengamatan Kontaminasi
Hasil Pengembiakkan

7
Hasil Pengamatan Uji Biologi
Morfologi Koloni

DAFTAR LAMPIRAN

26
Bahan

8
9
10
11
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Ikan merupakan salah satu sumber daya bahan pangan yang
tersedia dalam jumlah besar di Indonesia. Di tingkat dunia produksi
perikanan Indonesia berada pada peringkat ke-13. Masyarakat Indonesia
sangat menggemari konsumsi ikan, hal ini karena harga jual ikan yang
mudah terjangkau oleh masyarakat dan bernilai gizi tinggi. Namun
demikian, ikan dan produk perikanan merupakan perishable food, yaitu
bahan pangan yang mudah rusak sehingga perlu perlakuan penanganan yang
baik pada ikan setelah ikan ditangkap. Mutu kesegaran dapat mencakup
rupa atau kenampakan, rasa, bau, dan juga tekstur yang secara sadar ataupun
tidak sadar akan dinilai oleh pembeli atau pengguna dari produk tersebut.
Ikan merupakan sumber protein yang relatif murah dan tak asing lagi bagi
semua masyarakat konsumen, salah satunya ikan bandeng makanan produk
hasil laut memiliki nilai protein yang cukup tinggi. Selain kandungan gizi
yang tinggi ikan bandeng kita juga harus berhati-hati karena ikan bandeng
bisa mengandung bakteri akuatik patogen yang dapat menyebabkan
penyakit bagi manusia. Keberadaan bakteri pada ikan dapat mempengaruhi
aspek kualitas, kemunduran mutu produk perikanan dan keamanan dalam
mengkonsumsi khususnya bakteri Salmonella.sp. Kasus adanya bakteri
Salmonella.sp pada hasil perikanan sangat sering dijumpai di Amerika
Serikat sehingga pemerintah tersebut menerapkan (Blok Detention)
pemeriksaan terlebih dahuluh hasil perikanan yang diimport dari Negara
lain, penyakit yang diakibatkan oleh bakteri Salmonella.sp adalah tipus.
Gejalah yang ditimbulkan seperti demam, sakit perut, diare dan muntah-
muntah.

1
1.2 Tujuan dan Manfaat
1)Tujuan
Tujuan dari pelaksanaan Praktik Kerja Lapang (PKL) antara lain:
 Mempelajari teknik pengujian mikrobiologi yang sesuai
 Untuk mengetahui ada atau tidaknya bakteri Salmonella sp. Pada
ikan bandeng.
 Untuk mengetahui dan memahami pengujian Mikrobiologi yang
dilakukan di Balai KIPM.
2) Manfaat
Manfaat dari pelaksanaan Praktik Kerja Lapang (PKL) antara lain:
 Menambah Pengetahuan dan keterampilan dalam pengujian
mikrobiologi.
 Memperoleh pengetahuan, keterampilan kerja di bidang mutu
perikanan

1.3 Waktu dan Tempat

1) Tempat
Tempat dilaksanakan Praktik Kerja Lapang (PKL) yaitu di Balai KIPM
Surabaya I, yang ada di Jl. Raya Bandar Udara Ir. H. Juanda No. 23
Sidoarjo 61254 – Jawa Timur.
2) Waktu
Waktu Pelaksanaan kegiatan Praktik Kerja Lapang (PKL) dimulai sejak
tanggal 9 September sampai dengan 31 Oktober 2019.

2
 BAB II
PELAKSANAAN KEGIATAN

2.1 Keadaan Umum

2.1.1 Sejarah
Balai KIPM Surabaya I, Juanda berdiri pada tahun 1986 dengan
nama terdahulu Stasiun Karantina Ikan Juanda Surabaya, karena masih
baru maka untuk kegiatan administrasi sementara masih bergabung dengan
baia Karantina Pertanian, Kutisari Surabaya. Pada tahun 1991 Stasiun
Karantina Ikan Juanda menempati kantor baru didaerah Sedati Sidoarjo.
Pada tahun 2002 berdasarkan Surat Keputusan Mentri Kelautan dan
Perikana No.KEP29/MEN/2002 tanggal 8 juli 2002 tentang organisasi dan
Tata Kerja Unit Pelaksana Teknis Karantina Ikan, berdasarkan SK tersebut
statusnya meningkat menjadi Stasiun Karantina Ikan (SKI) kelas I Juanda
Surabaya dan berkantor baru di Jalan Pagesangan II/58a Jambangan,
Surabaya. Pada tanggal 20 April 2006 SKI kelas 1 Juanda Surabaya
secara resmi menempati kantor baru di Jalan Raya Bandar Udara No.23
Semambung Sidoarjo, Jawa Timur. Pada 26 September 2008, Berdasarkan
Peraturan Mentri Kelautan dan Perikanan Nomer:Per.25/men/2011,
berubah status menjadi Balai Karantina Ikan Pengendalian Mutu dan
Keamanan Hasil Perikanan Kelas I Surabaya I. Pada tahun 2017 diganti
nama dengan BKIPM Surabaya 1 berdasarkan PER/MEN/KP no.7 2018
dan PER/MEN/KP no.54 2017 tentang organisasi dan tata kerja UPT
BKIPM.

2.1.2 Dasar Oprasional

Menurut Balai KIPM Surabaya I dasar hukum Persyaratan Jaminan
Mutu dan Kemanan Hasil Perikanan Pada Proses Produksi, Pengolahan
dan Distribusi adalah sebagai berikut:
a. KEP.01/MEN/2007 tentang persyaratan Jaminan Mutu dan Keamanan
Hasil Perikanan pada Proses Produksi, Pengolahan dan Distribusi.

3
 b. UU No. 31 Tahun 2004 tentang Perikanan.
c. UU No. 8 Tahun 1999 tentng Perlindungan Konsumen.
d. UU No. 18 Tahun 2012 tentang Pangan.
e. Peraturan Pemerintah No. 28 Tahun 2004 tentang Keamanan Mutu dan
Gizi Pangan.
f. Peraturan Mentri Kelautan dan Perikanan No. PER.19/MEN/2010
tentang Pengendalian Sistem Pengendalian Mutu dan Keamanan Hasil
Perikanan.
g. Kep Men No. KEP. 21/MEN/2004 tentang Sistem Pengawas dan
Pengendalian Mutu Produk Hasil Perikanan Untuk Pasar Uni Eropa.

2.1.3 Lokasi dan Letak Geografis

Gambar 1. Gedung Balai KIPM

Balai KIPM Surabaya I, Juanda terletak di jalan Raya Bandara
Ir.H.Juanda No. 23-Sidoarjo,61254-Jawa Timur. Letak Kordinat berada
pada 7°16LU 112°43BT/7,267°LS 112,717°BT. Untuk mengetahui letak
Balai KIPM secara jelas dapat dilihat pada batas wilayah di bawah ini:
Sebelah Utara : Kelurahan Semambung.
Sebelah Timur : Hotel Global Inn.
Sebelah Selatan : JL. Raya Bandar Udara Ir.H.Juanda.
Sebelah Barat : Balai Besar Karantina Pertanian Surabaya.

2.1.4 Wilayah Kerja

Berdasarkan PERMEN KP-Nomor: PER.25/MEN/2011 disebutkan
bahwa Balai KIPM Surabaya I mempunyai lokasi dan wilayah kerja
sebagai berikut:

4
 1. Bandara Juanda, Surabaya
2. Pelabuhan Laut Pasuruan
3. Pel. Laut Tj. Tembaga, Probolinggo
4. Pel. Laut & sungai Ketapang, Banyuwangi
5. Pel. Laut & sungai Tanjung Wangi, Banyuwangi
6. Pel. Laut & sungai Muncar, Banyuwangi
7. Pel. Laut Panarukan, Situbondo
8. Pel. Laut Jangkar, Situbondo
9. Pel. Laut Kalbut, Situbondo
10. Bandara Notohadinegoro , Jember
11. Bandara Abdurahman Saleh, Malang
12. Pel. Laut Sendang Biru, Malang
13. Pel. Laut Pegiri, Tulungagung
14. Pel. Laut Jolo Sutro, Blitar

2.2 Strukur Organisasi

Susunan Organisasi di Balai KIPM Surabaya I dapat dilihat pada
bagan dibawah.

MANAJER PUNCAK

Muhlin, S.Pi., M.Si

MANAJER TEKNIS MANAJER MUTU MANAJER ADMINITRASI

Djoko Darma Tani, S.Pi Wiwit Supriyono, S.Pi., M.P Didik Srinoto, S.Pi., M.P

DEPUTI MANAJER TEKNIS DEPUTI MANAJER MUTU DEPUTI MANAJER ADMINITRASI

Ayuda Dyah Nurekawati, S.Pi., Yulia Arum Anjani, S.Pi., M.Si Eka Anis Rhofita, S.Kom
M.Si

KOORDINATOR KOORDINATOR KOORDINATOR KOORDINATOR

LABORATORIUM PELAYANAN PENGGUNA PENGELOLAAN DATA DAN PENGELOLAAN PENGADUAN
JASA INFORMASI DAN KELUHAN PELANGGAN
UJI
Alfiyah, S.Pi M. Maulana D., A.Md Iin widya A., S.Si

5
 Tugas dan wewenang dari masing-masing staf struktur tersebut
secara garis besar adalah sebagai berikut berikut :
1) Manager Puncak
a. Membimbing dan mengarahkan pelasanaan kegiatan pelayanan
oprasional, pengawasan, data, informasi, dan urusan ketatausahaan dan
rumah tangga.
b. Menyusun program kerja dan rencana pengembangan unit kerja.
c. Menerapkan prinsip kordinasi integrase dan sinkronisasi di lingkungan
kantor ataupun dengan insansi yang terkait.
d. Mengawasi pelaksanaan tugas staf dan mengambil langkah-langkah
yang diperlukan sesuai dengan peraturan apabila terjadi penyimpangan.
e. Mengkuti dan mematuhi petunjuk dan bertanggung jawab kepada atasan
menyampaikan laporan berkala tepat waktu.
2) Manager Mutu
a. Melakukan pengolahan dan pelayanan laboratorium.
b. Melakukan pengolahan dan pelayanan uji coba pengembangan teknik
dan metode tindakan karantina ikan.
c. Melakukan pengolahan dan pelayanan instalasi karantina ikan.
d.Melakukan pengolahan dan pelayanan teknis oprasional perkarantinaan
ikan.
3) Penyelia Laboratorium
a. Mengawasi semua pemeriksaan laboratorium.
b. Mengkoordinir semua pemeriksaan laboratorium.
c. Mengambil alih tugas analisis yang tidak sesuai dengan prosedur.
d. Memeriksa dan mengevaluasi hasil pemerikasan laboratorium.

2.2.1 Visi dan Misi

Balai Karantina Ikan Pengendalian Mutu dan Keamanan Hasil
Perikanan Surabaya 1 dalam melakasanakan tugas dan fungsinya sebagai
Unit Pelaksana Teknis (UPT) Pusat Karantina Ikan mempunyai visi dan
misi sebagai berikut :

6
  Visi
Visi dari Balai Ikan Pengendalian Mutu dan Keamanan Hasil
Perikanan Surabaya I adalah memdapatkan hasil perikanan yang sehat,
bermutu, aman konsumsi dan terpercaya. Hasil perikanan mengandung arti
semua barang yang dihasilkan dari kegiatan yang berhubungan dengan
pengelolahan dan pemanfaatan sumber daya ikan. Hasil perikanan yang
sehat, bermutu, dan aman konsumsi mengandung arti hasil perikanan yang
bebas hama penyakit (Sehat), memiliki kualitas teknis sesuai dengan
persyaratan standar yang ditetapkan (Bermutu) dan tidak dalam ambang
batas yang dapat membahayakan manusia (Aman konsumsi). Terpacaya
mengandung arti bahwa sertifikat yang diterbitkan karantina ikan,
pengendalian mutu dan keamanan hasil perikanan (Health Certificate /
HC) dan Hazard Analysis Critical Control Point (HACCP) merupakan
jaminan dan telah memenuhi syarat untuk diterima pasar nasional dan
internasional.
 Misi
Mewujudkan pencegahan penyebaran hama dan penyakit Ikan
Karantina serta pengendalian mutu dan keamanan hasil perikanan yang
mampu menjamin lalu lintas hasil perikanan yang sehat, bermutu, aman
konsumsi dan terpercaya.

2.3 Sarana dan Prasarana

Sarana dan Prasarana yang tersedia untuk menunjang
penyelenggaraan tugas pokok dan fungsi dari Balai KIPM terdiri dari
gedung kantor, laboratorium, serta fasilitas penunjang lainnya seperti
mobil unit laboratorium, dan kendaraan oprasional lainnya.
Balai KIPM memiliki Ruang Admin Laboratorium, Ruang
Persiapan, Laboratorium Parasit dan Nekropsi, Laboratorium
Organoleptik, Laboratorium Elisa, Laboratorium Jamur, Ruang Timbang,
Ruang Persiapan, Laboratorium Mikrobiologi, Laboratorium Molekuler,
Ruang Steril dan Ruang Pencucian alat.

7
1) Sarana
Prasarana yang ada di Balai KIPM Surabaya I, adalah sebagai berikut:
a. Kendaraan Oprasional
 Kendaraan Roda 4 : 6
 Kendaraan Roda 2 : 19
b. Alat Komunikasi
c. Jaringan Listrik
2) Prasarana
a. Ruang Persiapan atau Ruang Preparasi Isolasi
Rung Persiapan atau Ruang Preparasi Isolasi berfungsi sebagai tempat
untuk mempersiakan dan membuat berbagai larutan-larutan kimia serta
media yang akan digunakan pada laboratorium lainnya. Selain untuk
membuat berbagai larutan ruangan ini juga berfungi untuk menyimpan
bahan-bahan kimia.
b. Ruang Sterilisasi
Ruang Sterilisasi berfungsi sebagai tempat untuk mensuci hamakan
peralatan serta bahan laboratorium yang akan digunakan atau dibuang
dari pathogen penyebab penyakit pada ikan
c. Laboratorium Parasit dan Nekropsi
Laboratorium Parasit dan Nekropsi berfungsi sebagai ruagan
pemeriksaan penyakit golongan parait dan nekropsi. Untuk nekropsi
diruangan ini terdapat wastafel, dissection set, seser, dan nampan.
d. Laboratorium Organoleptik
Laboratorium Organleptik berfungi untuk pengujian dengan cara
memasak sampel dan mengamati dari bau, rasa, dan tekstur. Didalam
ruangan ini terdapat peralatan dasar memasak yaitu kompor, spatula, dan
wajan. Ruangan ini juga terdapat bilik yang disekat yang berfungi untuk
melakukan pengujian.
e. Laboratorium Bakteriologi atau Laboratorium Mikrobiologi
Laboratorium Bakteriologi atau Laboratorium Mikrobiologi digunakan
untuk melakukan pemeriksaan dan pengujian penyakit ikan yang

8
 disebabkan oleh bakteri. Kegiatan uang dilakukan antara lain berupa
pengisolasian dan pengkulturan bakteri dari sampel.
f. Laboratorium Biologi Mokuler
Laboratorium Biologi Mokuler digunakan untuk melakukan
pemeriksaan penyakit ikan dengan menggunakan teknik-teknik biologi
mokuler seperti Polymerase Chain Ieaction (PCR), hidrasi.
g. Laboratoium Histopatologi
Laboratoium Histopatologi digunakan untuk melakukan pemeriksaan
penyakit ikan dengan melihat perubahan-perubahan yang terjadi pada
jaringan atau organ dari sampel. Teknis yang dapat dilakukan meliputi
teknik histolohi/histopatologi serta teknik imunohistokimia mengunakan
antibodi/antigen.
h. Laboratorium Jamur
Laboratorium Jamur berfungsi untuk pemeriksaan penyait ikan yang
disebabkan oleh jamur.
i. Laboratorium Elisa
Laboratorium Elisa digunakan untuk menguji virus, bakteri dan parasit.
j. Ruang Timbang
Ruang Timbang digunakan untuk menimbang media yang akan
digunakan.

2.4 Teknis Pegujian

SNI ISO 6579:2015 Microbiology of Food And Animal Feeding Stuffs- Horizontal
Method For The Detection of Salmonella.Spp

2.5 Bakteri Salmonella.sp

Salmonella.sp merupakan bakteri Gram negatif, tidak membentuk
spora dan bakteri berbentuk batang, keberadaan Salmonella.sp pada
produk perikanan dapat dikarenakan beberapa faktor seperti kebersihan
lingkungan dan proses produksi dari suatu produk. Faktor tumbuhnya
bakteri Salmonella.sp dikarenakan suhu, kelembapan, pH dari produk
tersebut sesuai dengan kondisi lingkungan yang dibutuhkan untuk

9
 Salmonella.sp tumbuh di dalamnya. Semakin tinggi tingkat cemaran
Salmonella.sp pada suatu produk maka akan semakin tinggi juga infeksi
yang dapat timbul pada orang yang mengkonsumsinya. Sama halnya
dengan penentuan bakteri Escherichiacoli dan Koliform, penentuan
bakteri Salmonella.sp juga dapat dilakukan dengan uji mikrobiologi yang
dilakukan sesuai dengan standar yang telah dibuat. Standar pengujian yang
digunakan dalam pengujian mikrobiologi Salmonella.sp adalah Prosedur
Kerja SNI ISO 6579:2015.
Pengujian harus dilakukan dengan steril untuk menghindari
kontaminasi yang mungkin terjadi pada saat pengujian.

2.5.1 Sumber Penularan

Infeksi terjadi dari memakan makanan yang terkontaminasi dengan
feses yang tedapat bakteri Salmonella.sp dari organisme pembawa. Setelah
masuk dalam saluran pencernaan, maka Salmonella.sp menyerang dinding
usus yang menyebabkan kerusakan dan peradangan. Infeksi dapat
menyebar ke seluruh tubuh melalui aliran darah karena dapat menembus
dinding usus tadi ke organ-organ lain, seperti hati, linpa, paru-paru, tulang-
tulang sendi, plasenta dan dapat tembus hingga menyerang fetus pada
wanita atau hewan betina.

2.5.2 Patogenitas
Salmonella.sp adalah penyebab utama dari penyakit yang
disebarkan melalui makanan (foodborne diseases). Pada umumnya,
serotipe Salmonella.sp menyebabkan penyakit pada organ pencernaan.
Penyakit yang disebabkan oleh Salmonella.sp disebut salmonellosis. Ciri-
ciri orang yang mengalami salmonellosis adalah diare, keram perut, dan
demam dalam waktu 8-72 jam setelah mengonsumsi makanan yang
terkontaminasi oleh Salmonella.sp. Gejala lainnya adalah demam, sakit
kepala, mual dan muntah-muntah. Tiga serotipe utama dari jenis
S.enterica adalah S.typhi, S.typhimurium, dan S.enteritidis. S.typhi
menyebabkan penyakit demam tifus (Tyhold fever), karena invasi bakteri

10
 ke dalam pembulu darah dan gastroenteritis, yang disebabkan oleh
keracunan makanan/intoksikasi. Gejala demam tifus meliputi demam,
mual-mual, muntah dan kematian. S.typhi memiliki keunikan hanya
menyerang manusia, dan tidak ada inang lain. Infeksi Salmonella.sp dapat
berakibat fatal pada bayi, balita, ibu hamil dan kandungannya serta orang
lanjut usia. Hal ini disebabkan karena kekebalan tubuh mereka yang
menurun. Kontaminasi Salmonella.sp dapat dicegah dengan mencuci
tangan dan menjaga kebersihan makanan yang dikonsumsi.

2.6 Ikan Bandeng

2.6.1 Klarifikasi
Morfologi dan Klasifikasi Ikan Bandeng (Chanos chanos) Ikan
bandeng yang dalam bahasa latin adalah Chanos chanos, bahasa Inggris
Milk fish, pertama kali ditemukan oleh seseorang yang bernama Dane
Forsskal pada Tahun 1925 di laut merah. Ikan Bandeng (Chanos chanos)
termasuk dalam famili Chanidae (Milk Fish) yaitu jenis ikan yang
mempunyai bentuk memanjang, padat, pipih (compress) dan oval
menyerupai torpedo. Ukuran kepala seimbang dengan ukuran tubuhnya,
berbentuk lonjong dan tidak bersisik. Bagian depan kepala (mendekati
mulut) semakin runcing. Morfologi ikan bandeng lebih jelasnya disajikan pada
gambar 1

Sumber: digilib.umg.ac.id

Gambar 2. Morfologi Ikan Bandeng (Chanos chanos)

Keterangan : a. Mata, f. Sirip caudal,
b. Tutup insang, g. Sirip dorsalis,

11
c. Sirip pectoralis, h. Linea laterals,
d. Sirip abdominalls, i. Mulut
e. Sirip analis
Klasifikasi ikan bandeng (Chanos chanos) adalah sebagai berikut:
Kingdom : Animalia

Filum : Chordata

Subfilum : Vertebrata

Kelas : Osteichthyes

Subkelas : Teleostei

Ordo : Malacopterygii

Famili : Chanidae

Genus : Chanos

Spesies : Chanos chanos

Sirip dada ikan bandeng terbentuk dari lapisan semacam lilin,

berbentuk segitiga, terletak dibelakang insang disamping perut. Sirip
punggung pada ikan bandeng terbentuk dari kulit yang berlapis dan licin,
terletak jauh dibelakang tutup insang dan berbentuk segiempat. Sirip
punggung tersusun dari tulang sebanyak 14 batang. Sirip ini terletak persis
pada puncak punggung dan berfungsi untuk mengendalikan diri ketika
berenang. Sirip perut terletak pada bagian bawah tubuh dan sirip anus
terletak di bagian depan anus. Di bagian paling belakang tubuh ikan
bandeng terdapat sirip ekor berukuran paling besar dibandingkan sirip -
sirip lain. Pada bagian ujungnya berbentuk runcing, semakin ke pangkal
ekor semakin lebar dan membentuk sebuah gunting terbuka. Sirip ekor ini
berfungsi sebagai kemudi laju tubuhnya ketika bergerak (Purnowati et al.,
2007).

12
2.6.2 Habitat dan Kebiasaan Hidup Ikan Bandeng (Chanos chanos)
Ikan bandeng termasuk jenis ikan eurihaline, dimana dapat hidup
pada kisaran kadar garam yang cukup tinggi. Oleh karena itu ikan bandeng
dapat hidup di daerah tawar (kolam/sawah), air payau (tambak), dan air
asin (laut). Ketika mencapai usia dewasa, ikan bandeng akan kembali ke
laut untuk berkembang biak. Pertumbuhan ikan bandeng relatif cepat,
yaitu 1,1-1,7 % bobot badan/hari, dan bisa mencapai berat rata-rata 0,60
kg pada usia 5 - 6 bulan jika dipelihara dalam tambak. Ikan bandeng
merupakan jenis ikan laut yang daerah penyebarannya meliputi daerah
tropika dan sub tropika (Pantai Timur Afrika, Laut Merah sampai Taiwan,
Malaysia, Indonesia dan Australia). Di Indonesia penyebaran ikan bandeng
meliputi sepanjang pantai utara Pulau Jawa, Madura, Bali, Nusa Tenggara,
Aceh, Sumatra Selatan, Lampung, Pantai Timur Kalimantan, sepanjang
pantai Sulawesi dan Irian Jaya. (Purnowati, et al., 2007).

2.7 Metode Praktik Salmonella.sp

2.7.1 Alat dan Bahan

 Alat
a) Autoclave
b) Oven
c) Inkubator 37°C ± 1°C
d) Waterbath dengan suhu 41,5°C ± 1°C
e) Jarum inokulasi
f) Pipet steril
g) Tabung reaksi
h) Petridish
i) stomacher beserta plastik steril
j) Timbangan dengan ketelitian 0,1 g
k) Bunsen
l) Spatula
m) Hot plate

13
  Bahan
a) Buffered peptone water (BPW)
b) Rappaport-Vassiliadis medium with soya (RVS broth)
c) Muller-Kauffmann tetrathionate novobiocin broth (MKTTn broth)
d) Xylose Lysine Desoxycholate (XLD) Agar / Bismuth sulfite Agar
(BSA)
e) Nutrient agar
f) Triple sugar/iron agar (TSI agar)
g) Urea Agar (Chistensen)
h) L-Lysine decarboxylation medium
i) Reagen VP
j) Reagen Kovac’s

2.8 Prosedur Pelasanaan

2.8.1 Persiapan Contoh

Timbang contoh ikan sebanyak 25 g, blender secara aseptis,
kemudian dimasukan dalam wadah steril dan ditambahkan 225 mL larutan
Buffered Pepton Water (BPW) kemudian dikocok dalam stomacher selama
2 menit.

2.8.2 Tahap analisa

2.8.2.1 Pra pengkayaan

Inkubasi homogent selama 18 jam ± 2 jam pada suhu 37°C ± 1°C.

2.8.2.2 Pengkayaan
a) Ambil 0,1 mL larutan contoh kemudian masukkan ke dalam 10 mL
media Rappaport-Vassiliadis (RV) dan 1 mL larutan contoh ke dalam
10 mL Muller-Kauffmann tetrathionate novobiocin broth (MKTTn).
b) Inkubasi RV kedalam waterbath pada suhu 41,5°C ± 1°C selama 24
jam ± 3 jam dan inkubasi MKTTn di inkubator pada suhu 37°C ± 1°C
selama 24 jam ± 3 jam.

14
2.8.3 Isolasi Salmonella (seleksi pada media agar) dan Identifikasi
a. Setelah inkubasi 24 jam ± 3 jam, Dengan menggunakan jarum loop
gores RVS broth yang diinkubasi ke dalam media Xylose Lysine
Desoxycholate (XLD).
b. Gores ke dalam media yang sama dari MKTTn.
c. Balik cawan hingga bagian bawah cawan berada diatas, inkubasi
cawan XLD selama 24 jam ± 3 jam pada suhu 37°C ± 1°C.
d. Setelah 24 jam ± 3 jam inkubasi, amati koloni-koloni Salmonella yang
khas (typical) dan kemungkinan Salmonella. Koloni Salmonella pada
media XLD agar adalah Koloni merah jambu (pink) dengan inti
hitam, Salmonella H2S negatif varian (S.Paratyphi A) tumbuh pada
XLD agar adalah pink dengan inti pink gelap. Laktose-positiv
Salmonella tumbuh pada media XLD agar menjadi berwarna kuning
dengan atau tanpa hitam.

2.8.4 Uji Konfirmasi

2.8.4.1 Pemilihan Koloni untuk Konfirmasi

a. Ambil koloni yang khas (typical) dari media diatas dengan
menggunakan jarum ose dan inokulasikan ke Nutrient agar.
b. Inkubasi selama 24 jam ± 3 jam pada suhu 37°C ± 1°C.
c. Gunakan koloni murni untuk uji biokimia dan uji serologi.

2.8.4.2 Uji Biokimia

Dengan menggunakan jarum ose, inokulasi kultur murni nutrient agar pada
media selektif
a. Triple sugar/iron agar (TSI Agar)
Agar biakan murni bakteri pada nutrient agar kemudian gores agar
miring dan tusuk pada agar tegak. Inkubasi selama 24 jam ± 3 jam pada
suhu 37°C ± 1°C. Interpretasi perubahan media seperti dibawah ini:
Agar tegak
 Kuning

15
  Merah atau tidak berubah
 Hitam
 Gelembung atau celah
Agar miring
 Kuning / sukrosa digunakan)
 Merah atau tidak berubah / sukrosa tidak digunakan)
Reaksi spesifik Salmonella.sp untuk TSI agar yaitu alkaline (warna
merah) pada agar miring dan asam (warna kuning) pada agar tegak
dengan terbentuknya gas H2S.
Jika laktosa-positif Samonella.sp terisolasi, agar miring TSI berwarna
kuning. Oleh sebab itu uji konfirmasi koloni salmonella.sp tidak hanya
berdasarkan uji TSI agar saja.
b. Urea Agar
Ambil biakan murni bakteri pada nutrient agar kemudian goreskan ke
Urea agar. Inkubasi selama 24 jam ± 3 jam pada suhu 37°C ± 1°C.
Reaksi positif jika medium urea melepaskan ammonia dan berubah
warna pink.
c. Media L-Lysine decarboksilase
Ambil biakan murni bakteri pada nutrient agar kemudian inokulasi ke
media Lysine Decarboxylase Broth (LDB). Inkubasi selama 24 jam ± 3
jam pada suhu 37°C ± 1°C. Kekeruhan dan warna ungu setelah
inkubasi mengindikasi reaksi positif. Warna kuning mengindikasi
reaksi negatif.
d. Reaksi Media VP
Ambil biakan murni bakteri, inkubasikan ke dalam 3 mL MR/VP broth
inkubasi selama 24 jam ± 3 jam pada suhu 37°C ± 1°C. Setelah
inkubasi tambahkan 3 tetes reagen VP. Kemudian kocok dan amati
hasilnya maksimal 15 menit setelah ditambahkan reagen VP.
Pembentukan warna merah dalam waktu 15 menit mengindikasi reaksi
positif.
e. Reaksi media Indol

16
 S
p
G
T
3
-
2
c
u
C
l
g
e
n
w
b
d
t
a
A
s
o
r
k
i
m
X
0
1
,
h
B
D Inokulasikan tabung berisi 5 mL Trytophane Broth yang berisi biakan
murni Salmonella.sp. Inkubasi selama 24 jam ± 3 jam pada suhu 37°C
± 1°C. Setelah inkubasi tambahkan reagen kovac. Pembentukan cincin
merah mengindikasikan reaksi positif. Cincin kuning berarti reaksi
negatif.

A. Pewarnaan Gram
Morfologi sel bakteri diamati melalui pewarnaan gram. Sebelum
dilakukan pewarnaan gram dilakuakn fiksasi terhadap bakteri. Alur
pewarnaan gram sebagai berikut :

2.9 Hasil Pembahasan

Ikan bandeng yang diuji salmonella.sp dimulai dari contoh uji
dicampurkan dengan BPW.

Sumber.dok pribadi

Gambar 3. Contoh uji ikan bandeng Gambar 4. BPW Gambar 5. Contoh uji dan
BPW yang sudah dicampur.

17
 lalu dikocok dalam stomacher dan dilakukan inkubasi selama 18
jam ± 2 jam pada suhu 37°C ± 1°C pada proses ini di namakan tahap pra-
pengkayaan.

Sumber.dok pribadi

Gambar 6. Proses Stomacher Gambar 7. Hasil Stomacher Gambar 8. Proses

Inkubasi.

Setelah di inkubasi selama 24 jam dengan suhu 37°C larutan

sampel menunjukkan kekeruhan yang menandakan adanya pertumbuhan
mikroorganisme. Terdapat beberapa faktor yang dapat mempengaruhi
pertumbuhan suatu mikroorganisme. Faktor lingkungan yang mempengaruhi
pertumbuhan mikroorganisme di antaranya faktor fisika antara lain suhu,
kandungan oksigen, tekanan osmotik, pH, dan lain-lain. Faktor kimia antara
lain senyawa racun atau senyawa kimia lain yang berfungsi sebagai bahan
makanan. Faktor biologi antara lain interaksi dengan mikroorganisme lain
(Gandjar dkk 1992)

Sumber.dok pribadi

Gambar 9. Larutan sampel yang telah diinkubasi.

18
 Lalu lanjut tahap pengkayaan yaitu sampel diambil 0,1 mL untuk
di masukkan ke dalam 10 mL media RV dan 1 mL larutan contoh uji untuk di
masukkan ke dalam 10 mL media MKTTn. Media RV da MKTTn berfungsi
sebagai media penyeleksi terhadap bakteri bukan salmonella.sp serta
sekaligus memperkaya bakteri salmonella.sp itu sendiri. Rappaport
Vassiliadis (RV) merupakan media kultur yang digunakan untuk isolasi
selektif salmonella.sp Soy pepton merupakan bahan dasar Rappaport
Vassiliadis Salmonella sebagai sumber karbon dan nitrogen dalam medium.
Magnesium klorida meningkatkan tekanan osmosis dalam medium, dan
kalsium pospat sebagai penyangga. Malachit green adalah onhibitor organism
lain selain salmonella.sp pH medium yang rendah, dikombinasikan dengan
malachite green dan magnesium klorida menimbulkan resistensi pada
salmonella.sp. Koloni salmonella.sp pada media ini berwarna merah dengan
bagian tengah berwarna hitam (Acumedia, 2011) MKTTn adalah media
pengkayaan selektif untuk isolasi salmonella, fomulasi sesuai dengan ISO
6579:2002. Untuk inkubasi media Rappaport-Vassiliadis (RV) kedalam
waterbath pada suhu 41,5°C ± 1°C selama 24 jam ± 3 jam dan MKTTn di
masukkan dalam inkubator pada suhu 37°C ± 1°C selama 24 jam ± 3 jam.

Gambar 10. Proses Inokulasi Gambar 11. Inkubasi MKTTn Gambar 12. Inkubasi
Waterbath RV

Hasil dari inkubasi pada media RV dan MKTTn selama 24 jam

membuat media menjadi keruh ini menunjukkan adanya aktivitas
mikroorganisme.

19
 Sumber.dok pribadi

Gambar 13. Media RV setelah inkubasi Gambar 14. Media MKTTn setelah
inkubasi
Setelah inkubasi dengan menggunakan jarum loop gores RVS
broth yang diinkubasi ke dalam media agar XLD dan gores ke dalam media
yang sama dari MKTTn, balik cawan hingga bagian bawah cawan berada
diatas. Inkubasi cawan XLD selama 24 jam ± 3 jam pada suhu 37°C ± 1°C.
Setelah 24 jam 3 jam inkubasi, amati koloni-koloni Salmonella.sp yang khas
(typical) dan kemungkinan Salmonella.sp. Koloni Salmonella.sp pada media
XLD adalah koloni merah jambu (pink) dengan inti hitam. Bisa diliat pada
gambar dibawah.

Sumber: microbiologyinfo.com

Gambar 15. Media XLD yang belum ditumbuhi bakteri Gambar 16. Media
XLD bereaksi negatif Gambar 17. Media XLD bereaksi positif.

Hasil yang positif masuk ketahap berikutnya yaitu uji konfirmasi,

ambil koloni yang khas (typical) dari media XLD dengan menggunakan
jarum ose dan inokulasikan ke Nutrient agar lalu inkubasi selama 24 jam ± 3
jam pada suhu 37 °C ± 1°C.

20
 Sumber: Dokumentasi Pribadi

Gambar 18. Media nutrient agar yang belum ditumbuhi bakteri Gambar
19. Media nutrient agar yang telah ditumbuhi bakteri.

Selanjutnya dilakukan pengujian biokimia, dengan menggunakan

jarum ose, inokulasikan kultur murni dari Nutrient agar ke media selektif.
Pada media TSI Agar merupakan metode yang digunakan untuk melihat
kemampuan mikroorganisme dalam memfermentasikan gula. Media TSI
Agar mengandung 3 macam gula yaitu glukosa, laktosa, dan sukrosa terdapat
juga indikator fenol merah, serta FeSO4 untuk memperlihatkan pembentukkan
H2S yang ditunjukkan dengan adanya endapan hitam. Konsentrasi glukosa
adalah 1/10 dari konsentrasi laktosa atau sukrosa agar fermentasi glukosa saja
yang terlihat. Media TSI Agar di inokulasi dengan menusukkan jarum ose
pada biakan murni bakteri pada nutrient agar kemudian gores agar miring
dan tusuk pada agar tegak. Inkubasi selama 24 jam ± 3 jam pada suhu 37°C ±
1°C. Reaksi spesifik Salmonella untuk TSI agar yaitu alkaline (warna merah)
pada agar miring dan asam (warna kuning) pada agar tegak dengan
terbentuknya gas H2S.

Sumber: Dokumentasi Pribadi

21
 Gambar 20.TSI negatif Gambar 21.TSI positif
Uji biokimia pada media Urea agar digunakan untuk difesiasi
mikroorganisme yang dapat menurunkan/berekasi urea. Prinsip kerja, urea
dihidrolisis menjadi karbon dioksidasi dan ammoniak oleh enzim urase.
Ammonia yang dibentuk kemudian membuat media menjadi alkalin, reaksi
ini dideteksi menggunakan indikator phenol red yang mengubah warna
kuning media menjadi ungu/merah. Kandungan dalam urea agar pepton dari
daging, glukosa, NaCl, Pottasium dihydogen phosphate, phenol red, agar-
agar. Reaksi positif jika medium urea melepaskan ammonia, merubah warna
pink dan lama kelamaan lebih gelap. Reaksi ini sering terlihat setelah 2-4
jam.

Sumber: pinterest.it

Gambar 22. Urea agar negatif Gambar 23. Urea agar positif
Uji biokimia pada Media L-Lysine Decarboksilase. Ambil biakan murni
bakteri pada nutrient agar kemudian inokulasi ke media Lysine
Decarboksilase Broth, lalu di inkubasi. Kekeruhan dan warna ungu setelah
inkubasi mengindikasi reaksi positif. Warna kuning mengindikasi negatif.

Sumber. Karch Mi Kiser

22
 Gambar 24. Reaksi negatif dan positif pada media LDB
Uji biokimia pada media VP, Uji VP bertujuan untuk mengidentifikasi jenis
bakteri untuk membedakan bakteri Escherichia coli dengan
Enterobacteraerogenes. Bakteri di inkolasi ke dalam 3 mL MR/VP Broth lalu
inkubasi, setelah inkubasi tambah 3 tetes reagen VP kemudian kocok dan
amati hasilnya maksimal 15 menit setelah itambahkan reagen VP.
Pembentukan warna merah dalam waktu 15 menit mengidentifikasikan reaksi
positif.

Sumber: Dokumen Pribadi

Gambar 25. Media VP sebelum di tambah reagen VP Gambar 26. Media VP

setelah ditambahkan reagen VP dan bereaksi positif.

Uji biokimia pada media Indol . Uji indol bertujuan untuk menetukan kemampuan
bakteri dalam memecah asam amino tritofan. Media ini biasanya digunakan dalam
identifikasi cepat. Inokulasi tabung berisi 5 mL Tryptophane Broth yang berisi
biakan murni Salmonella.sp, inkubasi Setelah inkubasi tambahkan 1 mL
reagen kovac. Pembentukan cincin merah mengindikasi positif. Cincin
kuning berarti reaksi negatif.

23
Sumber: Dokumen Pribadi

Gambar 27. TB yang belum ditambahkan reagen kovac Gambar 28. Setelah
ditambahkan 1 mL reagen kovac, tabung sebelah kiri bereaksi negatif, tabung
sebelah kanan bereaksi positif

Setelah uji biokimia dan contoh uji menunjukan reaksi positif maka di uji
lanjut pada proses pewarnaan gram.

Sumber: Dokumen Pribadi

Gambar 29. Pengujian pewarnaan gram.

Pewarnaan gram dengan cara mengambil biakan murni pada nutrient agar
dengan menggunakan jarum ose lalu dipindahkan pada kaca preparat lalu
ditetesi Gram A 2-3 tetes tunggu 1 menit lalu dicuci dengan aquades dan
keringkan, lanjut tetesi Gram B 2-3 tetes tunggu 1 menit lalu dicuci dengan
aquades dan keringkan, lanjut Gram C 2-3 tetes tunggu 30 detik lalu dicuci
dengan aquades dan keringkan, lanjut Gram D 2-3 tetes tunggu 2 menit lalu
dicuci dengan aquades dan keringkan. Setelah proses pewarnaan gram bakteri
yang ada pada kaca preparat diliat menggunakan mikroskop. Contoh uji yang
di uji menunjukan negatif salmonella.sp, karena setelah diliat pada mikroskop
bakteri Gram positif berbentuk batang dan Gram positif berbentuk cocus.
Jika positif salmonella.sp akan menunjukan bakteri Gram negatif, dan bakteri
berbentuk batang.

24
Sumber: Dokumen Pribadi

Gambar 30. Bakteri Gram positif berbentuk batang Gambar 31. Bakteri
Gram positif berbentuk cocus

Jadi ikan bandeng yang diuji adalah negatif salmonella.sp, maka sampel
layak dikonsumsi maupun ekspor karena tidak ter indikasi bakteri
salmonella.sp.

Tabel 1. Hasil uji salmonella.sp pada produk ikan badeng selama 9 september
sampai 31 oktober 2019.

No. Nama Contoh Uji Kode Contoh Uji Hasil Uji

1. Ikan Badeng 2802 (-) negatif
2. Ikan Badeng 2803 (-) negatif

25
 BAB III
PEMBAHASAN MASALAH

3.1 Masalah
Berdasarkan hasil pemeriksaan terhadap kontaminasi Salmonella.sp
pada ikan bandeng yang diuji dapat dilihat pada Tabel 2.

Tabel 2. Hasil pengamatan kontaminasi bakteri Salmonella.sp pada ikan

bandeng.

No Nama Contoh Uji Kode Contoh Uji Hasil Pengujian

1. Ikan bandeng 2802 Negatif (-)
2. Ikan bandeng 2803 Negatif (-)
Berdasarkan Tabel 2 dapat dilihat bahwa pada dua sampel ikan
bandeng yang diuji menunjukkan seluruh contoh uji negatif terkontaminasi
salmonella.sp. Hal ini sesuai dengan SNI ISO 6579:2015, karena pemerintah
telah membuat peraturan atau pengawasaan untuk perlindungan terhadap
konsumen mengenai produk mutu tentang batas maksimum cemaran mikroba
pada produk untuk salmonella.sp harus negatif atau tidak boleh mengandung
salmonella.sp.

Banyak faktor yang mempengaruhi jumlah serta jenis mikroba yang

terdapat dalam produk, diantaranya adalah sifat makanan itu sendiri (pH,
kelembaban, dan nilai gizi), keadaan lingkungan sumber makanan tersebut
diperoleh, serta kondisi pengolahan ataupun penyimpanan makanan. Jumlah
mikroba yang terlalu tinggi dapat mengubah karakter organoleptik, sehingga
mengakibatkan perubahan nutrisi, nilai gizi atau bahkan merusak produk
tersebut.

Hasil positif adanya kontaminasi Salmonella.sp dapat dilihat dari

kultur pada media XLD, isolasi Salmonella.sp (seleksi pada media agar) dan
identifikasi, hasil positif pada media ini ditandai dengan koloni merah jambu
(pink) dengan inti hitam.

Tabel 3. Hasil pembiakkan dari contoh uji ikan bandeng pada media XLD.

26
 No Kode Sampel Interpretasi Hasil Contoh Uji
.
1. 2802 +(Pink, tidak/ada inti hitam) +pink
2. 2803 +(Pink, tidak/ada inti hitam) +hijau metalik
Berdasarkan Tabel 3 dapat dilihat bahwa seluruh contoh uji ikan bandeng
yang diisolasi dan dibiakan selama 24 jam dalam inkubator menunjukkan
hasil positif. Hasil positif ditandai dengan terjadinya perubahan warna dari
merah berubah menjadi warna pink. Hal ini dapat menjadi indikasi dari
bakteri Salmonella sp.

Selanjutnya dilakukan identifikasi bakteri Salmonella.sp dengan cara

menginokulasi bakteri pada media Glukosa(TSIA), Urea Agar, LD Broth,
Indol(TB), MR/VP.

Tabel 4. Hasil Pengamatan Uji Biokimia.

No. Kode Sampel Glukosa (TSIA) Urea Agar LD Broth Indol (TB) MR/VP
1. 2802 K/A - + - -,+
2. 2803 A/A + + - +,+
Keterangan : (+) = positif, (-) = negatif, (K) = Kuning, (A) = Alkaline

Setelah pengujian biokimia dilakukan pewarnaan gram, pada koloni

terpisah dengan menggunakan berbagai macam reagen seperti aquades,
larutan violet kristal, lodin, Ethanol 95%, dan safranin. Pewarnaan gram
dilakukan pada semua sampel penelitian. Hasil pewarnaan gram yang telah
dilakukan pengamatan dapat dilihat pada Tabel 5.

Tabel 5. Morfologi koloni bakteri pada pewarnaan gram.

No Kode Sampel Bentuk Warna Sifat Gram

.
1. 2802 Cocus Ungu Positif
2. 2803 Batang Ungu Positif
Berdasarkan hasil pengamatan pada Tabel 4 diketahui bahwa bakteri pada
contoh uji termasuk ke dalam golongan bakteri Gram positif. Bakteri gram
positif ditandai dengan bakteri berwarna ungu.

27
3.2 Pembahasan
Salmonella.sp adalah salah satu jenis bakteri yang dapat menyebabkan
penyakit pada manusi atau biasa disebut bakteri pathogen, berbentuk batang
dengan ukuran 1-3,5µm x 0,5-0,8µm. Bakteri ini dapat hidup didalam air, es,
debu, sampah, usus manusia, dan hewan berdarah panas, bahkan didalam
makanan baik yang telah dimasak, beku ataupun tidak langsung dimakan.
Jadi makanan yang layak dimakan harus melewati uji mikrobiologi seperti
identifikasi bakteri salmonella.sp. Pengujian bakteri salmonella.sp yang
dilakukan pada sampel ikan bandeng di Balai KIPM menunjukkan reaksi
negatif terkontaminasi salmonella.sp. Semua prosedur kerja telah dilakukan
dan hasil dari isolasi salmonella.sp pada media XLD beraksi positif dan dapat
menjadi indikasi dari bakteri salmonella.sp, karena pada media XLD yang
diuji mengalami perubahan warna menjadi pink dan dengan inti hitam.

Selanjutnya identifikasi bakteri Salmonella.sp dengan uji biokimia, uji

biokimia ini bertujuan untuk menguatkan dugaan bahwa bakteri yang
diisolasi merupakan bakteri Salmonella.sp. Uji biokimia menggunakan media
TB atau uji indo dari sampel menunjukkan hasil negatif, yang ditandai
terbentuknya cincin kuning sehingga tidak ada isolate bakteri yang dapat
membentuk indol. Pentingnya uji indol dilakukan adalah karena hanya
beberapa jenis bakteri saja yang dapat membentuk indol dan produk ini dapat
diuji sehigga dapat digunakkan sebagai identifikasi(Yulvizar, 2013).
Umumnya Salmonella.sp memberikan hasil negatif (tidak terbentuknya cincin
merah pada permukaan media)(SNI, 2015). Pada media media MR/VP
menunjukkan hasil positif , yang ditandai dengan adanya perubahan warna
setelah diteteskan reagen VP pembentukkan warna merah dalam waktu 15
menit. Umumnya Salmonella.sp memberikan hasil negatif untuk uji VP yaitu
tidak terjadi perubahan warna pada media(SNI, 2015). Pada media TSIA
contoh uji nomor 2803 menghasilkan warna kuning (asam) dan pada contoh
uji nomor 2802 menghasilkan warna merah (alkaline) pada bagian slant dan
warna kuning (asam) pada bagian butt. TSIA mengandung laktosa dan

28
sukrosa dalam kosentrasi 1%, glukosa 0,1% dan phenol red sebagai indikator
yang menyebabkan perubahan warna dari merah orange mejadi kuning dalam
suasana asam. TSIA juga mengandung natrium trisulfat, yaitu suatu substrat
untuk penghasil H2S, berwarna hitam untuk membedakan bakteri H2S dengan
bakteri-bakteri lainnya. Pada media Urea Agar contoh uji nomor 2802
bereaksi negatif, karena tidak terjadi perubahan warna dan contoh uji nomor
2803 beraksi positif karena setelah 24 jam inkubasi medium urea melepaskan
ammonia, merubah warna phenol red ke pink-rose dan lama kelamaan lebih
gelap. Pada media LD Broth menunjukan reaksi positif karena setelah 24 jam
inkubasi media LD Broth mengalami kekeruhan.

Setelah uji biokimia dilakukan pewarnaan gram menggunakkan 4 larutan

yaitu larutan violet kristal hucker berfungsi sebagai cat utama yang akan
diikat oleh peptidoglikan bakteri, larutan Lodin berfugsi sebagai mordan
untuk mengintensifkan cat utama, larutan Ethanol secukupnya sampai cat
utama kuntur, berfungsi sebagai bahan peluntur untuk melunturkan cat utama,
larutan Safranin berfungsi sebagai cat penutup untuk mewarnai kembali sel-
sel yang sudah kehilangan warna cat utama. Dan berdasarkan hasil
pengamatan diketahui bahwa bakteri pada sampel termasuk ke dalam
golongan bakteri gram positif. Bakteri gram positif ditandai dengan bakteri
berwarna ungu. Pada pewarnaan gram, bakteri gram positif mempertahankan
zat warna Kristal violet sewaktu proses pewarnaan gram sehingga akan
berwarna biru atau ungu dibawah mikroskop. Disisi lain, bakteri gram negatif
akan berwarna merah atau merah muda. Perbedaan keduanya didasarkan pada
perbedaan stuktur dinding sel yang berbeda dan dapat dinyatakan oleh
prosedur pewarnaan gram.

Jadi sampel ikan bandeng yang diuji untuk mengetahui ada atau tidaknya
bakteri salmonella.sp menghasilkan reaksi negatif karena pada proses uji
morfologi pewarnaan gram, bakteri yang dilihat pada mikroskop perbesaran
100x10 bakteri berbentuk cocus gram positif dan batang gram positif. Sampel

29
ikan bandeng yang telah diuji dan dinyatakan negatif terkontaminasi bakteri
salmonella dapat di ekspor dan layak dikonsumsi.

30
 BAB IV
PENUTUP

4.1 Simpulan
Pengujian Salmonella yang dilakukan di Balai KIPM mengacu pada
Standar Nasional Indonesia(SNI) masing masing pengujian. Uji Salmonella
digunakan untuk menetapkan ada atau tidaknya bakteri Salmonella pada ikan
bandeng, dari pengujian mikrobiologi bakteri Salmonella dengan
menggunakan SNI ISO 6579:2015 proses uji salmonella pada ikan bandeng
yang kami uji selama 2 bulan hasilnya dinyatakan negatif, sehingga layak
diekspor dan dikomsumsi.

4.2 Saran
Pengujian bakteri salmonella sangat penting karena penyakit yang
disebabkan bakteri salmonella yaitu demam dan tipus, agar kita terhindar dari
makanan yang terkandung bakteri salmonella kita harus selalu menjaga
kebersihan lingkungan hidup kita agar terhindar dari kontaminasi dengan
bakteri salmonella.

31
 DAFTAR PUSTAKA

BKIPM. 2010. Profil Balai Karantina Ikan Pengendaian Mutu dan Keamanan
Hasil Perikanan, sidoarjo.
http://digilib.umg.ac.id/files/disk1/22/jipptumg--ahmadbayha-2112-2-babii.pdf
Dwi Kurniawati, Juniar.2018.Uji Cemaran Bakteri Salmonella.sp Pada Ikan
Makarel. Laporan PKL Univeritas Airlangga, tidak dipublikasikan
https://id.wikipedia.org/wiki/Salmonella

32
 LAMPIRAN

5.1 Alat
No Alat Fungsi
.
1. Inkubator basah (Waterbath)
tempat pengembang biakkan
bakteri dengan direndam air pada
suhu 41,5°C ± 1°C.

2. Autoclafe untuk sterilisasi alat.

3. Stomacher untuk
menghomogenkan sampel.

33
4. Erlenmeyer untuk tempat
pembuatan media.

5. Gelas ukur untuk tempat media

atau pencampuran media dan
tempat aquades.

6. Cawan petri untuk membiakan

bakteri

7 Micropipet untuk memindahkan

larutan.

34
8. Hot Plate berfungsi untuk
menghomogenkan larutan yang
disertai dengan pengadukan.

Bunsen digunakan untuk

pemanasaan, sterilisasi, dan
pembakaran.

9. Neraca analitik untuk

menimbang media.

10. Timbangan digital untuk

menimbang sampel.

11. Laminary air flow untuk

memindahkan biakan bakteri agar

35
 tidak terjadi kontaminasi dan
tetap steril.

12. Oven untuk mensterilkan alat-alat

laboratorium seperti cawan petri.

13. Inkubator untuk menginkubasi

dan menumbuhkan kultur padat
mikroba.

14. Kaca preparat untuk meletakkan

objek gelas yang akan diamati.

5.2 Bahan
No. Media Fungsi

36
1. Buffered Pepton Water (BPW)
Media pra pengkayaan.

2. Rappaport-Vassiliadis (RV)
Media pengkayaan.

3. Muller-Kauffmann tetrathionate
novobiocin broth (MKTTn
broth Media pengkayaan.

37
4. Xylose Lysine Desoxycholate
(XLD) Agar Media isolasi
Salmonella.

5. Nutrient agar Media uji

konfirmasi.

6. Triple sugar/iron agar (TSI agar)

Media uji biokimia.

7. Urea Agar Media uji biokimia.

38
8. Lysine Decarboksilase Broth(LDB)
Media uji biokimia.

9. MR/VP broth Media uji

biokimia.

10. Tryptophane Broth (TB) Media

uji biokimia.

11. Untuk uji morfologi, larutan

pewarnaan gram.

39