LAPORAN PRAKTIKUM BIOLOGI MOLEKULER

ISOLASI DNA BAKTERI

Kamis, 01 Oktober 2020

Disusun oleh:
KELOMPOK 2
Siti Maulidiyyah Saharani (4411418025)
Ika Zalma Nurhidayah (4411418046)
Putri Fannysa Maharani (4411418051)
Roderikus Rayditya Milanio (4411418057)

JURUSAN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSTAS NEGERI SEMARANG
2020
A. Tujuan
Tujuan praktikum mengetahui DNA dari Bakteri dan memahami teknik pengisolasian
DNA dari Bakteri

B. Alat dan Bahan

Alat
 Mikropipet
 Mikrotip
 Mikrotube (2 ml)
 Streroform
 Lemari Asam
 Sentrifugator
 Tisu
 Vortex
Bahan
 Larutan berisi Bakteri
 larutan Proteinase K
 R-Nase
 larutan lisis
 etanol 500%.


C. Cara Kerja
1. Memahami tayangan vidio pada link youtube https://youtu.be/RGMewOXONkw dan
mencatat alat bahan serta prosedur kerja yang diajabarkan sebagai berikut
2. Siapkan Alat dan Bahan yang digunakan
3. Masukan sel bakteri ke tube, Tambahkan larutan destruksi 180 mikro liter.
Tambahkan larutan Proteinase K. 20 mikro liter. Campur dengan vortex
4. Panen sel bakteri dari koloni, inculasikan larutan sebelumnya. Centerfuge selama 1
menit dengan kecepatan 5000 rpm
5. Inkubasi pada 56C selama 30 menit. Campur dengan vortex.
6. Tambahkan 20 mikro liter R-Nase yang diinkubasi pada suhu kamar selama 10
menit. Campur dengan vortex
7. Tambahkan 20 mikro liter larutan lisis / Campur dengan vortex 15 detik
8. Tambahkan 400mikroliter etanol 500%. Campur dengan vortex
9. Transfer larutan ke pemurnian pada kolom, dimasukkan ke dalam tabung pengumpul.
Centerfuge selama 1 menit pada 14000 rpm. Buang tabung pengumpul lalu
tempatkan ke yang baru
10. ambahkan 500mikro liter dari wash buffer I. Centerfuge selama 1 menit pada
8000rpm. Buang aliran dan tempatkan kolom pemurnian kembali ke tabung
pengumpul
11. Tambahkan 500 mikroliter wash buffer II. Centerfuf = ge selama 1 menit dengan
kecepatan maksimum. Pindahkan kolom pemurnian ke eppendrof
12. Tambahkan 200 mikroliter buffer elusi ke tengah kolom pemurnian. Inkubasi selama
1 menit pada suhu kamar. Centerfuge selama 1 menit pada 8000 rpm
13. Buang penyimpanan kolom pemurnian pada -4C untuk waktu yang singkat atau pada
-8C untuk waktu yang lama